第一篇：ABO血型操作

長春博迅ABO、RhD血型定型檢測卡操作流程 【檢驗原理】

本試驗采用排阻層析原理，即在微柱凝膠介質中，紅細胞抗原與相應抗體結合，形成紅細胞免疫復合物，在一定離心力下，該復合物不能通過凝膠間隙而浮于膠表面或懸于膠中；如無相應抗體結合，則不能形成紅細胞免疫復合物，在一定的離心力下，分散的紅細胞可以通過凝膠間隙沉于微柱腔底部。【樣本要求】

標本采集：采集被檢對象靜脈血，將該同一人血液分別制備成紅細胞標本和血清標本。

紅細胞標本的制備：配制成0.5％-0.8％紅細胞懸液。

血清標本的制備：將被檢者靜脈血采入含兔腦粉或其它促凝劑的試管中，10分鐘后離心，2000rpm,10分鐘，取上清；或者將被檢者靜脈血采入無抗凝試管中，4℃放置12小時，或37℃放置2小時后離心，2000rpm,10分鐘，取上清。該上清不得有絮狀物或沉淀。標本必須充分去纖維蛋白，否則血清標本中析出的或紅細胞懸液中殘余的纖維蛋白可阻礙紅細胞沉降，使非凝集細胞離心后在膠表面形成一條紅線，呈假陽性反應?！静僮鞑襟E】

1.將微柱凝膠試劑卡的六支凝膠微管標號。

2.將待檢者0.5％-0.8％紅細胞懸液分別加入第一至第四支微管中，每管50微升。3.將待檢者血清分別加入第五支和第六支

第二篇：abo血型鑒定

生理鹽水凝集法

①玻片法：操作簡單，適于大量標本檢查，但反應時間長；被檢查者如血清抗體效價低，則不易引起紅細胞凝集，因此，不適于反向定型。

②試管法：由于離心作用可加速凝集反應，故反應時間短，而且，借助于離心力可以使紅細胞接觸緊密，促進凝集作用，適于急診檢查。

紅細胞亞型抗原性弱，如抗A抗B標準血清效價低時，易造成漏檢或誤定。如加用O型（抗A、B）血清和反向定型，可避免此類錯誤。

玻片法凝集結果判斷：紅細胞呈均勻分布，無凝集顆粒，鏡下紅細胞分散。

在低倍鏡下凝集程度強弱判斷標準：

①呈一片或幾片凝塊，僅有少數單個游離紅細胞為（++++）。

②呈數個大顆粒狀凝塊，有少數單個游離紅細胞為（+++）。

③數個小凝集顆粒和一部分微細凝集顆粒，游離紅細胞約占1／2為（++）。

④肉眼可見無數細沙狀小凝集顆粒。于鏡下觀察，每凝集團中有5～8個以上紅細胞凝集為（+）。

⑤可見數個紅細胞凝集在一起，周圍有很多的游離紅細胞（±）。

⑥可見極少數紅細胞凝集，而大多數紅細胞仍呈分散分布為混合凝集外觀。

⑦鏡下未見細胞凝集，紅細胞均勻分布為（-）。凝膠微柱法

是紅細胞抗原與相應抗體在凝膠微柱介質中發生凝集反應的免疫學方法。血型抗體為單克隆抗體，加入試劑、標本，用專用離心機離心后可直接用肉眼觀察結果或用血型儀分析。此法操作標準化，定量加樣，確保結果準確性。

抗A、抗B和抗AB標準血清標準

準血清均采自健康人，并應符合下述條件：①特異性：只能與相應的紅細胞抗原發生凝集，無非特異性凝集。②效價：我國標準抗A和抗B血清效價均在1：128以上。③親和力：我國標準要求抗A對A1、A2及A2B發生反應開始出現凝集的時間分別是15s、30s和45s；抗B對B型紅細胞開始出現凝集的時間為15s。凝集強度為3min時，凝塊不小于1mm2。④冷凝集素效價：在1：4以下。⑤無菌。⑥滅活補體。[3] 編輯本段注意事項

1、所用器材必須干燥清潔、防止溶血，凝集和溶血的意義一樣。為避免交叉污染，建議使用一次性器材。標準血清從冰箱取出后，應待其平衡至室溫后再用，用畢后應盡快放回冰箱保存。

2、加試劑順序：一般先加血清，然后再加紅細胞懸液，以便核實是否漏加血清。

3、雖然IgM抗A和抗B與相應紅細胞的反應溫度以4℃最強，醫學教育網收集整理但為了防止冷凝集現象干擾，一般在室溫20℃～24℃內進行試驗，而37℃條件，可使反應減弱。

4、幼兒紅細胞抗原未發育完全、老年體弱者抗原性較弱，最好采用試管法鑒定血型。

5、玻片法反應時間不能少于10min，否則較弱凝集不能出現，造成假陰性。

6、正、反定型結果一致才可發報告。

7、反定型法：先天性免疫球蛋白缺陷，長期大量應用免疫抑制，血型抗體可減弱或消失；血清中存在自身免疫性抗體、冷凝集素效價增高、多發性骨髓瘤、免疫球蛋白異常均可造成反定型困難；新生兒體內可存在母親輸送的血型抗體，且自身血型抗體效價又低，因而出生6個月以內的嬰兒不宜做反定型。老年人血清中抗體水平大幅度下降或被檢者血清中缺乏抗A及（或）抗B抗體，可引起假陰性或血型鑒定錯誤。[4]

ABO血型系統

英文：ABO blood group system 根據紅細胞表面有無特異性抗原（凝集原）A和B來劃分的血液類型系統。ABO血型系統是1900年奧地利蘭茨泰納發現和確定的人類第一個血型系統。根據凝集原A、B的分布把血液分為A、B、AB、0四型。紅細胞上只有凝集原A的為A型血，其血清中有抗B凝集素；紅細胞上只有凝集原B的為B型血，其血清中有抗A的凝集素；紅細胞上A、B兩種凝集原都有的為AB型血，其血清中無抗A、抗B凝集素；紅細胞上A、B兩種凝集原皆無者為O型，其血清中抗A、抗B凝集素皆有。具有凝集原A的紅細胞可被抗A凝集素凝集；抗B凝集素可使含凝集原B的紅細胞發生凝集。輸血時若血型不合會使輸入的紅細胞發生凝集，引起血管阻塞和血管內大量溶血，造成嚴重后果。所以在輸血前必須作血型鑒定。正常情況下只有ABO血型相同者可以相互輸血。在缺乏同型血源的緊急情況下，因O型紅細胞無凝集原，不會被凝集，可輸給任何其他血型的人。AB型的人，血清中無凝集素，可接受任何型的紅細胞。但是異型輸血輸入量大時，輸入血中的凝集素未能被高度稀釋，有可能使受血者的紅細胞凝集。所以大量輸血時仍應采用同型血。臨床上在輸血前除鑒定ABO血型外，還根據凝集反應原理，將供血者和受血者的血液作交叉配血實驗，在體外確證兩者血液相混不發生凝集，方可進行輸血以確保安全。近年來發現存在于紅細胞上的凝集原（即血型抗原）也存在于其他血細胞和一般組織細胞。所有細胞表面血型抗原的特異性可作為機體免疫系統鑒別自身和異物的標志。因此，在臨床實踐中血型鑒定也是組織器官移植成敗的關鍵。人類血型有遺傳特性，決定血型的血型抗原即凝集原ABOA和B及其前身物H，分別受ABO三個等位基因控制。A、B基因為顯性基因，O（H）基因為隱性基因。它們的遺傳規律所顯示的父、母血型與子代血型間的關系，在法醫學上可作為否定親子關系的依據，若再配合其他血型系統的測定，則可判斷親子關系。

血型不僅在輸血上有重要意義，而且在人種學、遺傳學、法醫學、移植免疫、疾病抵抗力（或易感性）等方面都有應用價值，在輸血前，一定要檢查病人(受血者)和輸血人（供血者）的血型，并且要進行交叉配血試驗。在臨床醫學中，除輸血、移植免疫外，對新生兒溶血病、自身免疫性溶血性貧血特異性抗體的檢查，也都需要血型知識和有關技術。ABO血型抗原具有種族差異。例如，中歐地區的人群中，約40％以上的人為A型，近40％的人為O型，10％的人為B型，6％的人為AB型；而90％的美洲土著人為O型。[5] 編輯本段舉例分析

通常只用兩種抗血清即抗A及抗B血清，就可將群體分為四種血型。

根據血型的遺傳規律，和臨床工作方例起見，配偶間所生子女的血型如下：

各種ABO配偶所生子女的血型:

婚配式 子女可能有的血型 子女不可能有的血型

A×A A、O B、AB

A×B A、B、O、AB 無

A×AB A、B、AB O

A×O A、O B、AB

B×B B、O A、AB

B×AB A、B、AB O

B×O B、O A、AB

AB×AB A、B、AB O

AB×O A、B AB、O

O×O O A、B、AB

婚配式 A型血的可能 B型血的可能

A*A 75% 0% 25% 0%

A*B 25% 25% 25% 25%

A*O 50% 0% 50% 0%

A*AB 50% 25% 0% 25%

B*B 0% 75% 25% 0%

B*O 0% 75% 25% 0%

O型血的可能AB型血的可能

B*AB 25% 50% 0% 25%

O*O 0% 0% 100% 0%

O*AB 50% 50% 0% 0%

AB*AB 25% 25% 0% 50% ABO血型鑒定總結

AB0血型鑒定原理

常用鹽水凝集法檢測紅細胞上存在的血型抗原，以及血清中存在的血型抗體，依據抗原抗體存在的情況判定血型。常規的方法有：①正向定型：用已知抗體的標準血清檢查紅細胞上未知的抗原。②反向定型：用已知血型的標準紅細胞檢查血清中未知的抗體。結果判定：凡紅細胞出現凝集者為陽性，呈散在游離狀態為陰性。ABO血型定型原則見表1-5-2。

鑒定方法

（1）生理鹽水凝集法：①玻片法：操作簡單，適于大量標本檢查，但反應時間長；被檢查者如血清抗體效價低，則不易引起紅細胞凝集，因此，不適于反向定型。②試管法：由于離心作用可加速凝集反應，故反應時間短，而且，借助于離心力可以使紅細胞接觸緊密，促進凝集作用，適于急診檢查。

紅細胞亞型抗原性弱，如抗A抗B標準血清效價低時，易造成漏檢或誤定。如加用O型（抗A、B）血清和反向定型，可避免此類錯誤。

玻片法凝集結果判斷：紅細胞呈均勻分布，無凝集顆粒，鏡下紅細胞分散。在低倍鏡下凝集程度強弱判斷標準：①呈一片或幾片凝塊，僅有少數單個游離紅細胞為（++++）。②呈數個大顆粒狀凝塊，有少數單個游離紅細胞為（+++）。③數個小凝集顆粒和一部分微細凝集顆粒，游離紅細胞約占1／2為（++）。④肉眼可見無數細沙狀小凝集顆粒。于鏡下觀察，每凝集團中有5～8個以上紅細胞凝集為（+）。⑤可見數個紅細胞凝集在一起，周圍有很多的游離紅細胞（±）。⑥可見極少數紅細胞凝集，而大多數紅細胞仍呈分散分布為混合凝集外觀。⑦鏡下未見細胞凝集，紅細胞均勻分布為（-）。

（2）凝膠微柱法：是紅細胞抗原與相應抗體在凝膠微柱介質中發生凝集反應的免疫學方法。血型抗體為單克隆抗體，加入試劑、標本，用專用離心機離心后可直接用肉眼觀察結果或用血型儀分析。此法操作標準化，定量加樣，確保結果準確性。

抗A、抗B和抗AB標準血清標準

準血清均采自健康人，并應符合下述條件：①特異性：只能與相應的紅細胞抗原發生凝集，無非特異性凝集。②效價：我國標準抗A和抗B血清效價均在1：128以上。③親和力：我國標準要求抗A對A1、A2及A2B發生反應開始出現凝集的時間分別是15s、30s和45s；抗B對B型紅細胞開始出現凝集的時間為15s。凝集強度為3min時，凝塊不小于1mm2。④冷凝集素效價：在1：4以下。⑤無菌。⑥滅活補體。血型鑒定操作時注意事項

一般注意事項：①所用器材必須干燥清潔、防止溶血，凝集和溶血的意義一樣。為避免交叉污染，建議使用一次性器材。標準血清從冰箱取出后，應待其平衡至室溫后再用，用畢后應盡快放回冰箱保存。②加試劑順序：一般先加血清，然后再加紅細胞懸液，以便核實是否漏加血清。③雖然IgM抗A和抗B與相應紅細胞的反應溫度以4℃最強，醫學教育網收集整理但為了防止冷凝集現象干擾，一般在室溫20℃～24℃內進行試驗，而37℃條件，可使反應減弱。④幼兒紅細胞抗原未發育完全、老年體弱者抗原性較弱，最好采用試管法鑒定血型。⑤玻片法反應時間不能少于10min，否則較弱凝集不能出現，造成假陰性。⑥正、反定型結果一致才可發報告。⑦反定型法：先天性免疫球蛋白缺陷，長期大量應用免疫抑制，血型抗體可減弱或消失；血清中存在自身免疫性抗體、冷凝集素效價增高、多發性骨髓瘤、免疫球蛋白異常均可造成反定型困難；新生兒體內可存在母親輸送的血型抗體，且自身血型抗體效價又低，因而出生6個月以內的嬰兒不宜做反定型。老年人血清中抗體水平大幅度下降或被檢者血清中缺乏抗A及（或）抗B抗體，可引起假陰性或血型鑒定錯誤。[6]

第三篇：ABO血型定型檢測作業指導書

ABO血型定型檢測作業指導書

1.目的：ABO血型定型檢測 2.適用范圍：

新鮮、無污染、無溶血的人全血，避免反復凍融，不可用NaN3 防腐。3.職責：

站（院）長批準，專業負責人考核合格的優生篩查實驗室檢驗人員履行此項工作。4.試劑：

4.1本法所用試劑為長春博德生物技術有限責任公司生產的抗A抗B血型定型試劑盒。

4.2本法所用試劑應在有效期內使用。5.設備儀器： 5.1醫用冰箱 5.2雙目顯微鏡

5.3微量可調移液器 6.原理：

本品系由經配制的抗A血型或B血型單克隆抗體的雜交瘤細胞培養上清液（或在上清液中加少量同型腹水）組成，專供鑒定人ABO血型用。7.程序：

7.1平衡：將在有效期內試劑盒、待測適用樣品從冷藏環境中取出，平衡至室溫（18-25℃）。

7.2平板法（玻片法）：本品與受檢者全血或紅細胞生理氯化鈉懸液按1：1使用，不必再稀釋，按照有無凝集判定結果。

7.3試管法：本品與受檢者5%紅細胞生理氯化鈉懸液按1：1使用，不必再稀釋，搖勻，1000r/min離心1分鐘或室溫靜置1小時，按照有無凝集判定結果。7.4結果判定

血型 A B AB O 7.5檢驗結果登記 8.相關程序

8.1設備管理程序

8.2設備校準工作程序 8.3方法管理程序

8.4實驗標本管理程序 8.5記錄控制程序

8.6優生篩查服務管理程序 8.7實驗室管理制度

抗A試劑

++ 8.8員工守則

8.9保密和保護專有權管理程序 8.10檔案管理規定 9.相關記錄

9.1《環境條件記錄》 9.2《冰箱溫度記錄》 9.3《實驗標本流轉單》

9.4《儀器設備使用維護記錄》

9.5《優生篩查檢測結果登記表二》 9.6《實驗標本處理表》 9.7《醫用垃圾處理記錄》

第四篇：試管法ABO血型鑒定

試管法ABO血型鑒定

1.檢驗目的

鑒定供受血者ABO血型，保證臨床輸血安全。2．檢驗方法 試管法 2.1.試管法 2.1.1.實驗原理

ABO血型鑒定，是根據IgM類特異性血型抗體與紅細胞膜上特異性抗原結合能出現凝集反應的原理，用已知IgM類特異性標準抗A和抗B血清來測定紅細胞上有無相應的A抗原或（和）B抗原，同時用已知標準A型紅細胞和B型紅細胞來測定血清中有無相應的天然IgM類抗A或（和）抗B。2.1.2.標本要求

靜脈EDTA抗凝血2.0～3.0ml，以3000r/min離心3分鐘，分離上清液。2.1.3.試劑

單克隆或多克隆抗A、抗B試劑，3-5% A、B及O型試劑標準紅細胞懸液。2.1.4.器材

離心機，4℃冰箱、顯微鏡，12×70mm試管(以下稱“小試管”),滴管，10mm×60mm透明的玻璃試管或塑料試管。2.1.5.操作步驟

2.1.5．1．正定型（查抗原）：取試管2支，分別標明抗A、抗B，加入抗A和抗B分型血清各2滴于試管底部，再以滴管分別加入受檢者5%紅細胞鹽水懸液1滴，混勻。

2.1.5．2.反定型（查抗體）：取試管3支，分別標明A型、B型和O型細胞。用滴管分別加入受檢者血清2滴于試管底部，再分別以滴管加入A、B、O型5%試劑紅細胞懸液1滴，混勻。

2.1.5．3.立即以3000r/min離心10秒。（離心時間為離心機校準時間）。2.1.5．4.輕輕搖動試管，使沉于管底的紅細胞浮起，先以肉眼觀察有無凝集（或溶血）現象,如肉眼觀察不見凝集，應將反應物倒于玻片上，再以低倍鏡下觀察有無凝集。2.1.5．5.凝集強度判斷標準

＋＋＋＋：紅細胞凝集成一大片或幾片，僅有少數單個游離紅細胞，血清清晰透明。

＋＋＋：紅細胞凝集成數個大顆粒凝塊，有少數單個游離紅細胞，血清透明。

＋＋：紅細胞凝成數個小顆粒凝塊，游離紅細胞＜1/2。＋：紅細胞凝成數個小顆粒凝塊，游離紅細胞＞1/2。±：紅細胞凝成數個微小顆粒凝塊，周圍有很多游離紅細胞。MF：混合凝集外觀（mixed field，MF），鏡下可見少數紅細胞凝集，而絕大多數紅細胞呈分散分布。

－：陰性，鏡下未見紅細胞凝集，紅細胞均勻分布。HP：部分溶血（part hemolysis，HP），有些殘留紅細胞。H：完全溶血（hemolysis，H），無殘留紅細胞。2.1.5.6.報告受檢者紅細胞ABO血型（表1001-1）。

表1001-1 ABO血型鑒定結果判斷

分型血清＋受檢者紅細胞

抗A ＋ － － ＋ 抗B － ＋ － ＋

A B O AB 受檢者血型

A細胞 － ＋ ＋ －

B細胞 ＋ － ＋ －

O細胞 － － － －

受檢者血清＋試劑紅細胞

注：＋為凝集；－為不凝集

第五篇： ABO、RhD血型定型檢測卡原理

ABO、RhD血型定型檢測卡原理

【產品名稱】

通用名稱：ABO、RhD血型定型檢測卡

英文名稱：Microcolumn Gel Cards for Forward and Reverse ABO/RhD Blood Group Typing 【包裝規格】

6孔/卡，抗A、抗B和抗D各1孔，空白凝膠管3孔。12卡/盒?！绢A期用途】

人紅細胞 ABO血型正、反定型及RhD血型定型，僅供臨床使用，不用于血源篩查?！緳z驗原理】

采用凝膠作為微柱凝膠卡的填充物，利用凝膠間縫隙只允許游離紅細胞通過的特性，將生物化學的凝膠過濾技術、離心技術和血型血清學的抗原抗體特異性反應結合在一起，專供血型血清學試驗使用。ABO、RhD血型定型檢測卡的前3支塑料微管中分別灌注有與抗A、抗B和抗D抗體按照一定的比例混合的葡聚糖凝膠，用于紅細胞 ABO血型正定型及RhD血型定型。后三支塑料微管中只灌裝凝膠，不含任何抗體。第四支微管作為陰性對照管，第五支和第六支微 管用于紅細胞 ABO血型反定型。使用時將樣本紅細胞懸液或血清加在凝膠上部反應，離心后觀察。凝集的紅細胞，被阻擋在凝膠的上部或中央，判斷凝集反應陽性；游離的紅細胞，可通過凝膠間隙而沉積在凝膠的底部，判斷凝集反應陰性。