第一篇：PCR個人經驗總結

PCR經驗總結

1.primers design

這是最重要的一步。理想的，只同目的序列兩側的單一序列而非其他序列退火的引物要符合下面的一些條件

a 足夠長,18-24bp,以保證特異性.當然不是說越長越好,太長的引物同樣會降低特異性,并且降低產量。

b GC% 40%-60% c 5'端和中間序列要多GC,以增加穩定性

d 避免3'端GC rich, 最后3個BASE不要有GC,或者最后5個有3個不要是GC e.避免3'端的互補, 否則容易造成DIMER f.避免3'端的錯配

g.避免內部形成二級結構

h.附加序列(RT site, Promoter sequence)加到5'端, 在算Tm值時不需要加上這些序列,但在檢測互補 和二級結構是要加上它們

i.需要使用兼并引物時, 要參考密碼子使用表,注意生物的偏好性,不要在3'端使用兼并引物,并使用較高的引物濃度(1uM-3uM)j.最好學會使用一種design software.PP5,Oligo6,DNAstar, Vector NTI, Online desgin et al.* 引物的另一個重要參數是熔解溫度（Tm）。這是當50％的引物和互補序列表現為雙鏈DNA分子時的溫度.Tm對于設定PCR退火溫度是必需的。在理想狀態下，退火溫度足夠低，以保證引物同目的序列有效退火，同時還要足夠高，以減少非特異性結合。合理的退火溫度從55℃到70℃。退火溫度一般設定比引物的 Tm低5℃。

設定Tm有幾種公式。有的是來源于高鹽溶液中的雜交，適用于小于18堿基的引物。有的是根據GC含量估算Tm。確定引物Tm最可信的方法是近鄰分析法。這種方法從序列一級結構和相鄰堿基的特性預測引物的雜交穩定性。大部分計算機程序使用近鄰分析法。

根據所使用的公式及引物序列的不同，Tm會差異很大。因為大部分公式提供一個估算的Tm值，所有退火溫度只是一個起始點。可以通過分析幾個逐步提高退火溫度的反應以提高特異性。開始低于估算的Tm5℃，以2℃為增量，逐步提高退火溫度。較高的退火溫度會減少引物二聚體和非特異性產物的形成。

為獲得最佳結果，兩個引物應具有近似的Tm值。引物對的Tm差異如果超過5℃，就會引物在循環中使用較低的退火溫度而表現出明顯的錯誤起始。如果兩個引物Tm不同，將退火溫度設定為比最低的Tm低5℃或者為了提高特異性，可以在根據較高Tm設計的退火溫度先進行5個循環，然后在根據較低Tm設計的退火溫度進行剩余的循環。這使得在較為嚴緊的條件下可以獲得目的模板的部分拷貝。2.stability of primers

定制引物的標準純度對于大多數PCR應用是足夠的。引物產量受合成化學的效率及純化方法的影響。定制引物以干粉形式運輸。最好在TE重溶引物，使其最終濃度為100μM。TE比去離子水好，因為水的pH經常偏酸，會引起寡核苷的水解。引物的穩定性依賴于儲存條件。應將干粉和溶解的引物儲存在-20℃。以大于10μM濃度溶于TE的引物在-20℃可以穩定保存6個月，但在室溫（15℃到30℃）僅能保存不到1周。干粉引物可以在-20℃保存至少1年，在室溫（15℃到30℃）最多可以保存 2個月。3.optimize reactants concentration a.magnesiom ions Mg離子的作用主要是 dNTP-Mg 與核酸骨架相互作用，并能影響Polymerase的活性。一般 的情況下 Mg的濃度在0.5-5mM之間調整。同樣要記住的是在調整了dNTPs的濃度后要相應的調整Mg離子的濃度。對實時定量PCR，使用3-5mM帶有熒光探針的鎂離子溶液。

b.其他的離子

NH4+ K+都會影響PCR。增加K+的濃度后, 會因為中和了核酸骨架上磷酸基團的負電荷而影響退火的溫度,從而降低了PCR的 嚴謹性(stringency).NH4+也有相同的作用.MBI公司的TAQ酶就提供了兩種BUFFER, 一種是加Mg的一種是已經混合了(NH4)2SO4的.當然, 過高的陽離子濃度(KCL>0.2M)時, DNA在94度根本不會發生變性, 當然也就無從談起PCR了.c.polymerase 不同公司的酶效有所不同,需要operator自己掌握適合的酶的濃度。一些高保真酶的效率要遠遠低于Taq polymerase,所以可能需要的酶的量也要大一些.另外, 一般的 情況下, 變性的溫度可以使用90~92度, 變性的時間也可以縮短,從而保證polymerase的活性 d.template 50ul PCR SYSTEM human gDNA 0.1ug-1ug E.Coli 10ng-100ng Lamada DNA 0.5ng-5ng Plasmid DNA 0.1ng-10ng 4.temperature a.denaturation 常規是94度5分鐘, GC Rich的摸板是95度5分鐘，除了GC Rich外, 常規的APPLICATIONS可以將這部分時間縮短到1到2分鐘, 或者在CYCLE 1時給予較長的時間,而取消開始的denaturation b.annealing 重點到了。一般情況下, 是從55度開始.根據情況配合以Mg離子濃度進行調整.有條件的可以做gradient pcr.退火的時間在30-60S, 時間短一些可以得到更好的效果.因為, polymerase 在annealing temp.時也會有一些活性.所以在A.T.的時間過長, 會極大的增加非特異性擴增的風險.另外,在對于一些困難戶, 比如從gDNA里擴增大片段, 還可使用two step PCR.5.touchdown PCR

原理很簡單,但的確是一個很有用的方法。舉個例子就OK, ANNEALING TEMP.55度 94 5min—（94 30s—60 30s—72 1min）×2—（94 30s—59 30s—72 1min）×2—（94 30s—58 30s—72 1min）×2—........—（94 30s—51 30s—72 1min）×2—（94 30s—50 30s—72 1min）×20—72 5min

6.hot start PCR

熱啟動PCR是除了好的引物設計之外，提高PCR特異性最重要的方法之一。盡管Taq DNA聚合酶的最佳延伸溫度在72℃，聚合酶在室溫仍然有活性。因此，在進行PCR反應配制過程中，以及在熱循環剛開始，保溫溫度低于退火溫度時會產生非特異性的產物。這些非特異性產物一旦形成，就會被有效擴增。在用于引物設計的位點因為遺傳元件的定位而受限時，如site-directed突變、表達克隆或用于DNA工程的遺傳元件的構建和操作，熱啟動PCR尤為有效。限制Taq DNA聚合酶活性的常用方法是在冰上配制PCR反應液，并將其置于預熱的PCR儀。這種方法簡單便宜，但并不能完成抑制酶的活性，因此并不能完全消除非特異性產物的擴增。

熱啟動通過抑制一種基本成分延遲DNA合成，直到PCR儀達到變性溫度。包括延緩加入Taq DNA聚合酶，在反應體系達到90度時，PAUSE，將溫度保持在70度以上，手工加入polymerase，但這個方法 過于煩瑣，尤其是對高通量應用，并容易造成污染。其他的熱啟動方法使用蠟防護層將一種基本成分，加入鎂離子或酶，包裹起來，或者將反應成分，如模板和緩沖液，物理地隔離開。在熱循環時，因蠟熔化而把各種成分釋放出來并混合在一起。有很多公司提供這樣的酶。

ampliwax PCR Gems(Perkin Elmer)Taq Bead Hot Start Polymerase(Promega)Magnesium wax beads(Stratagene).象手動熱啟動方法一樣，蠟防護層法比較煩瑣，易于污染，不適用于于高通量應用。還有一種方法是使用inactive DNA Polymerase.polymerase被抗體抑制失活，當變性溫度超過70度時，抗體也變性了，這樣polymerase又被激活了。

7.Booster PCR

我們知道1ug human genomic DNA 大約在3X105個模板分子,這樣的模板分子數目可以是引物與模板很好的結合.當模板的濃度過低,比如低于100個分子時, 引物和模板之間就很難發生反應.引物容易自身進行反應形成二聚體.這樣就有來了個 booster PCR 我一直找不到合適的詞來翻譯這個booster.具體是這樣的.開始幾個cycles保持primer的低濃度,保證primer:template的 molar ratio在107~ 108.以確保開始擴增的準確性.然后booste Primer的濃度到正常的水平8.循環數和長度

確定循環數的基本原理是: 產物能夠保證你進一步分析操作的最小循環數.因為過多的循環數容易造 成ERRORS和非特異性產物的積累、產物的量不夠, 優化的方法有: 1.增加TEMPLATE 2.增加循環數

如何確定循環數,有一個方法.做一個PCR體系,40循環,50ul, 分別在20,25,30,35循環時從體系中取5ul,一起跑電泳分析.從而確定最佳的循環數另一個會影響PCR特異性的是PCR cycling時在兩個溫度間變化的速率(ramping rate).當然是越高越好.不過咱們大部分條件有限,就那么幾臺PCR儀,也沒有多少挑選的余地

9.thermal cycler

PCR儀的因素我們經常容易忽視.長時間的使用后需要調整PCR儀,以保證其能夠到達正確的溫度.現在的PCR儀基本上都有自檢功能(self-diagnosis).10.PCR additives

附加物或者說enhancer實在是多種多樣.基本上包括幾類, 能夠增加反應退火效率的化學因子, DNA結合蛋白和一些商業試劑.基本的原理不外是增加引物退火特異性,減少錯配, 增加產物的長度和產量.在GC Rich情況中, additive可以造成配對堿基間的的不穩定,從而提高擴增的效率.而在另一種情況下,additive由于造成錯配的primer-template 復合物的極大的不穩定, 而提高了擴增的忠實性.要注意的是,沒有萬能的enhancer全部通用,需要你根據自己的情況,最好結合gradient pcr選擇最優條件.====== dimethyl sulfoxide(DMSO)up to 10% formamide at 5% trimethylammonium chloride 10-100uM detergents such as Tween 20 0.1-2.5% polyethylene glycol(PEG)6000 5-15% glycerol 10-15% single stranded DNA binding proteins Gene 32 protein 1nM E.coli single-stranded DNA binding protein 5uM 7 deaza-dGTP(for GC rich)150uM with 50uM dGTP Taq Extehder(stratagene)Perfect Match PCR Enhancer(stratagene)Q-solution(Qiagen)====== 要注意的是,DMSO,GLYCEROL等會抑制polymerase的活性,所以需要scouting出最適的濃度

11.Template DNA preparation

提取DNA時的試劑會抑制PCR反應的順利進行.因此需要對TEMPLATE DNA進行純化.特別是SDS(<0.01%)的情況下就能強烈抑制PCR的進行.可以加入一些nonionic試劑,如Tween, Nonid, Trition之類的反過來抑制SDS.還有proteinase K也要除干凈, 不然會降解polymerase.12.Nested PCR

簡單點說 設計兩對引物, 一對是長的, 一對是包含在長引物內的, 用長引物擴增的產物作為第二次擴增的模板,這樣可以增加產物的量.而且可以減少非特異性帶和錯配的情況.增加PCR的保真性 高保真酶

高溫DNA POLYMERASE是以單鏈DNA或RNA為模板，在dNTP和一些陽離子的存在情況下，在特定的引物指導下按3'-5'方向合成DNA.包括3種類型：

a.5'-3'方向的DNA合成能力,沒有3'-5'方向的外切酶特性.如Taq及其突變體.這類酶的合成能力強,因為他不糾正合成中出現的突變

b.與a類似,有合成活性,沒有3-5的外切活性.但他們能以RNA為模板,合成DNA.如Tth DNA Polymerase c.有DNA聚合活性,沒有逆轉錄活性,但有3-5方向的外切酶活性.如pfu DNA Polymerase.可以提高忠實性。但是這些聚合酶的產量比Taq DNA聚合酶低。酶的混合物

將Taq DNA聚合酶同帶有3'到5'外切核酸酶活性第二種聚合酶混合在一起可以獲得比單獨Taq DNA聚合酶高的忠實性，并可以得到高產量及擴增長模板。其他因素

除了酶，高濃度的dNTP或鎂離子會降低忠實性。將dNTP的濃度從200μM降低到25-50μM可以增加精確度如果四種核苷的濃度不同，忠實性會受影響。進行較少的PCR循環也會有助于增加忠實性，因為增加循環數目和產物長度就會增加突變可能性。

第二篇：PCR經驗總結

PCR經驗總結

實驗注意事項：

（1）DNA處理最好用硅烷化塑料管以防粘附在管壁上，所有緩沖液吸頭、離心管等用前必須高溫高壓處理，常規消耗用品用后作一次性處理，避免反復使用造成污染。

（2）PCR操作應戴手套并勤于更換，必要時應戴好帽子和口罩，就像做手術一樣，要有“無菌觀念”。

（3）成套試劑，小量分裝，專一保存，防止它用。配制試劑用新器具，用后作一次性處理。（4）試劑管用前先瞬時離心（10s），使液體沉于管底，減少污染手套與加樣器機會。（5）最后加模板DNA，馬上蓋好，混勻，瞬時離心（10s），使水相與有機相分開。加入模板且忌噴霧污染，所有非即用管都應蓋嚴。加模板DNA后應更換手套。（6）實驗設陽性、陰性對照。

還有諸如：移液槍用完要放到最大計量位置，防止久了彈簧失靈；防止RNA酶污染標本；低溫下操作，防降解；試劑有致癌致畸作用，做好個人防護；頭腦中各操作步驟要清楚，不要加錯試劑。

問題及解決方案匯總：

一、假陰性，擴增無條帶

PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量及活性 ④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。

模板：①模板中含有雜蛋白質，②模板中含有酶抑制劑，③模板中蛋白質沒有消化除凈，特別是染色體中的組蛋白，④在提取制備模板時丟失過多，或吸入酚。⑤模板核酸變性不徹底。在酶和引物質量好時，不出現擴增帶，極有可能是標本的消化處理，模板核酸提取過程出了毛病，因而要配制有效而穩定的消化處理液，其程序亦應固定不宜隨意更改。

酶失活：需更換新酶，或新舊兩種酶同時使用，以分析是否因酶的活性喪失或不夠而導致假陰性。需注意的是有時忘加Taq酶或溴乙錠。

引物：引物質量、引物的濃度、兩條引物的濃度是否對稱，是PCR失敗或擴增條帶不理想、容易彌散的常見原因。有些批號的引物合成質量有問題，兩條引物一條濃度高，一條濃度低，造成低效率的不對稱擴增，對策為：①選定一個好的引物合成單位。②引物的濃度不僅要看OD值，更要注重引物原液做瓊脂糖凝膠電泳，一定要有引物條帶出現，而且兩引物帶的亮度應大體一致，如一條引物有條帶，一條引物無條帶，此時做PCR有可能失敗，應和引物合成單位協商解決。如一條引物亮度高，一條亮度低，在稀釋引物時要平衡其濃度。③引物應高濃度小量分裝保存，防止多次凍融或長期放冰箱冷藏部分，導致引物變質降解失效。④引物設計不合理，如引物長度不 夠，引物之間形成二聚體等。

Mg2+濃度：Mg2+離子濃度對PCR擴增效率影響很大，濃度過高可降低PCR擴增的特異性，濃度過低則影響PCR擴增產量甚至使PCR擴增失敗而不出擴增條帶。

反應體積的改變：通常進行PCR擴增采用的體積為20ul、30ul、50ul。或100ul，應用多大體積進行PCR擴增，是根據科研和臨床檢測不同目的而設定，在做小體積如20ul后，再做大體積時，一定要模索條件，否則容易失敗。

物理原因：變性對PCR擴增來說相當重要，如變性溫度低，變性時間短，極有可能出現假陰性;退火溫度過低，可致非特異性擴增而降低特異性擴增效率退火溫度過高影響引物與模板的結合而降低PCR擴增效率。有時還有必要用標準的溫度計，檢測一下擴增儀或水溶鍋內的變性、退火和延伸溫度，這也是PCR失敗的原因之一。

靶序列變異：如靶序列發生突變或缺失，影響引物與模板特異性結合，或因靶序列某段缺失使引物與模板失去互補序列，其PCR擴增是不會成功的。

二、假陽性

出現的PCR擴增條帶與目的靶序列條帶一致，有時其條帶更整齊，亮度更高。

引物設計不合適：選擇的擴增序列與非目的擴增序列有同源性，因而在進行PCR擴增時，擴增出的PCR產物為非目的性的序列。靶序列太短或引物太短，容易出現假陽性。需重新設計引物。

靶序列或擴增產物的交叉污染：這種污染有兩種原因：一是整個基因組或大片段的交叉污染，導致假陽性。這種假陽性可用以下方法解決：①操作時應小心輕柔，防止將靶序列吸入加樣槍內或濺出離心管外。②除酶及不能耐高溫的物質外，所有試劑或 器材均應高壓消毒。所用離心管及樣進槍頭等均應一次性使用。③必要時，在加標本前，反應管和試劑用紫外線照射，以破壞存在的核酸。二是空氣中的小片段核酸污染，這些小片段比靶序列短，但有一定的同源性。可互相拼接，與引物互補后，可擴增出PCR產物，而導致假陽性的產生，可用巢式PCR來減輕或消除。

三、出現非特異擴增帶

PCR擴增后出現的條帶與預計的大小不一致，或大或小，或者同時出現特異性擴增帶與非特異性擴增帶。非特異性條帶的出現，其原因：一是引物與靶序列不完全互補、或引物聚合形成二聚體。二是Mg2+離子濃度過高、退火溫度過低，及PCR循環次數過多有關。其次是酶的質和量，往往一些來源的酶易出現非特異條帶而另一來源的酶則不出現，酶量過多有時也會出現非特異性擴增。其對策有：①必要時重新設計引物。②減低酶量或調換另一來源的酶。③降低引物量，適當增加模板量，減少循環次數。④適當提高退火溫度或采用兩步法。

四、出現片狀拖帶或涂抹帶

PCR擴增有時出現涂抹帶或片狀帶或地毯樣帶。其原因往往由于酶量過多或酶的質量差，dNTP濃度過高，Mg2+濃度過高，退火溫度過低，循環次數過多引起。其對策有：①減少酶量，或調換另一來源的酶。②減少dNTP的濃度。③適當降低Mg2+濃度。④增加模板量，減少循環次數。

五、出現大量引物二聚體

1.從引物自身著手，重新設計引物，這是最根本解決這一問題的辦法； 2.可能模板有問題；

3.模板濃度過小，適當加大模板量；

4.Taq酶，引物，Mg2+濃度可能過高，可降低它們的濃度；

5.取你所要加的上下游引物混合后，在100攝氏度下的沸水中煮5分鐘，然后迅速拿出置于冰上瞬時冷卻，這時再加入反應體系當中，引物二聚體就會消失的；

6.所配Mix中加5%的甘油或者5%的DMSO，可以增強特異性；

7.PCR反應體系的配制在冰上進行，最后加Taq酶，PCR結束后，產物勿放置在室溫下過長時間，有人認為室溫下有些Taq酶會將多余的引物合成為二聚體。

8.增加循環數；

9.降低退火溫度后有條帶，則應逐漸提高溫度，若提高溫度的同時產物量減少，則考慮增加鎂離子濃度（根據擴增片斷長度而定，片段長則相應鎂離子濃度應該高一些）；

10.若降低退火溫度，發現還是只有引物二聚體，而且鎂離子的濃度在20-25mM沒有區別，則考慮Buffer等試劑沒有完全融解、混勻，導致吸取的試劑濃度不對。11.以上次的PCR產物作模板二次PCR，可以提高引物與模板的特異性，減少引物二聚體，如果兩次時間間隔短的話，可以把原產物稀釋100－1000倍，如果間隔較長可以稀釋50－100倍；

六、高GC與復雜結構的模板處理

將模板置于95℃水浴鍋中處理10分鐘以上，然后置于冰上瞬時冷卻，可大大降低二級結構對PCR的影響。

七、長片段與短片段拼接失敗（定點突變）

在做定點突變時，倘若突變位點距離基因的某一側較近（短片段<200bp）時，通常拼接困難或者難以通過電泳結果直觀判斷是否拼接成功。此時，可在短片段的上方（突變近5’端）或下方（突變近3’端）選取一條載體通用引物與基因另一條引物PCR（控制產物大小>300bp），然后再做基因拼接。確認大小無誤后，再以此產物為模板，用基因首尾引物PCR即可。

八、Long PCR無條帶

對于>5Kb片段擴增，常規PCR很難得到較好的條帶，建議①更換更適合于Long PCR的聚合酶；②添加PCR Enhancer調整體系；③設計多對引物分段擴增。

PCR增強劑（PCR Enhancer）：

常見的添加劑有：DMSO，甘油，甲酰胺，硫酸銨，甜菜堿，BSA等，它們對PCR反應的影響雖然有所不同，但都可提高PCR的擴增效率。

1.DMSO：解除模板DNA局部二級結構，增加引物與模板的特異性結合，使聚合酶更容易在二級結構處延伸，但是對酶活有抑制作用，且當其濃度大于10％時還會降低保真性。

2.甘油：可降低模板溶解溫度（Tm），提高產量，但是對酶活有抑制作用。3.甲酰胺：促進某些“引物－模板”退火，降低帶有二級結構的DNA的變性溫度。4.硫酸銨：增加反應體系的離子強度，改變DNA的變性及退火溫度，調節酶活。5.甜菜堿：有利于DNA雙鏈的解開，Polymerase的結合，提高PCR的效率。

第三篇：個人經驗總結

一學期很快地過去了，在各級領導和家長的支持下，幼兒各方面都取得了一定的成績。為了將我的工作做得更好，特總結如下：

一、現狀分析：

我班幼兒二十五人，其中男孩十二人，女孩有十三人，年齡在兩歲半到三歲。其中十人是本期新插入的。本班大部分幼兒身體發育正常，他們喜歡問，求知欲強，對唱歌、跳舞有一定的興趣，能用簡單的語言表達愿望。經過一學期的學習，幼兒各方面進步很大。在本期以新《幼兒園教育指導綱要》和“三個代表”重要思想為指導，堅持“孩子第一”的原則，積極地將教育觀念轉變為教育行為，在一日保教各環節中認真落實《幼兒園教育指導綱要》；從而保證幼兒一日生活的愉快進行，促進孩子們全面發展。

二、政治思想方面：

本期在園領導組織下，觀看學習了師德啟示錄和教師職業道德規范。在實際工作中把這種精神踏實奉獻精神一直牢牢地記在心里，從而把孩子放在第一位，在工作中不分上下班，不計報酬，真正體現主人翁精神。

積極參加政治業務學習，做到認真做好筆記，會后寫出自己的心得體會，不斷提高自己的思想政治覺悟，不信、不傳“法輪功”的歪理邪說，使自己的思想與黨中央保持一致。

加強自身的文化修養，多讀多看報刊雜志，努力提高自己的業務能力，用新的知識不斷充實自己的頭腦，盡快適應新形式的要求。

做到了團結同志，熱愛集體，遵守幼兒園一切規章制度，保質保量的完成了本職工作。

工作中做到了服從領導安排，協調好本班教師的關系，共同配合，促進了幼兒全面發展。

三、業務工作內容

（1）教研工作

積極參加小班組的課題研究，仔細為新教師周碧上匯報課和教研課出力出策。認真聽新教師的匯報課，并記錄下來討論，幫助了別人，也豐富了自己的已有經驗。

認真完成教研組長交給的任務，主講小班教師如何開展游戲。

（2）教學工作

細致耐心的做好個別幼兒工作。按照一日活動常規的要求，進行教養活動，著重教育幼兒愛護玩具，會收拾整理玩具，學會自己洗手，學會自己愉快進餐，愉快睡眠，自己上廁所等，培養幼兒養成良好的生活衛生習慣。促進了幼兒健康發展。根據季節變化，幼兒體質差異以及戶外活動時活動量大小等及時給幼兒增減衣物，避免幼兒受熱或著涼。開展符合本班實際的體育游戲，訓練幼兒基本動作，鍛煉幼兒身體動作的協調性，充分利用日光、空氣、水等自然因素，對幼兒進行體格鍛煉。培養幼兒活潑開朗的性格，增強了幼兒的自信心，敢于在陌生人面前展示自己，從而使自己的交往能力得到了提高。

環境創設：根據本班幼兒的實際特點和我班開展的親子活動進行了環境的創設。比如：帶孩子到公園進行戶外親子活動的照片以及六一慶祝活動的照片資料等。我們還布置了一些孩子喜歡的動物掛飾，以及節日彩帶，氣球等。

常規教育：托班幼兒自控力差，一日生活的自理能力還很差，因此，在常規教育中我們與幼兒家長保持了一定的聯系，讓自控能力差的孩子在家中也進行一定的常規教育，如：這學期新插入的幼兒，常有打人的情況，我們通過與家長共同教育，使孩子改掉了這一壞習慣。劉諾言、婁潤秋和簡靖逸開學時，愛搶別人的玩具，現在也有了很大的進步。

認真開展主題活動“家園共育”。結合《綱要》精神和我班幼兒的年齡特點，我班開展了主題活動“家園共育”，并制作了網絡圖，采取了家長助教，幼兒生日會，戶外親子活動，家園欄，每月一次家長開放日等多種形式，并隨時記錄幼兒的表現和張貼幼兒活動照片。讓家長真正了解幼兒園，了解教師的工作，了解孩子的在園生活，更好地促進孩子的發展。

（三）保育工作。保育工作是幼兒園的永久之重，特別是我班幼兒年齡小，體制差，天氣變化很容易生病，對此，我們幾位老師非常重視保育工作。

記住家長的叮囑，對每個幼兒的情況牢記在心，并落實。

對特殊幼兒細心照顧。如劉諾言,孫若馨等體質差的幼兒在游戲之后要及時隔背，馮唯恒小朋友有疝氣，不能運動量太，如果肚痛就必須平著抱一會，婷婷小朋友上廁所時常常容易打濕褲腳，要時時注意，發現濕了立即換好??.協助保健醫生做好了衛生保健工作和預防工作，保證幼兒身體健康。為幼兒創設了豐富的物質環境，清潔衛生和生活環境。還為幼兒創設輕松愉快的精神環境，保證幼兒身心健康成長。

（四）家長工作

孩子年齡小，本期新生又多。家長工作是非常重要的。因此，從一開學，我們就向家長宣傳先進的育兒經驗，如：孩子入園的適應期，幼兒習慣養成，幼兒用藥的正確性等。通過家園聯系欄，家長借閱，電話聯系，便條聯系等多種形式，讓家長了解幼兒在園的情況，也讓我們了解了家長的想法，使教師我家長增進了理解和友誼。

通過開展家長會，家長開放日，“親子”活動等，促進了家園之間的相互理解、支持。在教學活動、慶祝活動等都少不了家長的支持和理解，有的家長可以為孩子提供參觀的場所；有的家長可以提供幼兒操作的材料??不論是以哪種形式的幫助都是對幼兒教育的支持和理解

（五）安全工作 在一日保教活動中，我班教師始終以“安全第一”為原則。因為孩子有了安全才有健康發展。從晨間入園到離園，老師都要隨時注意幼兒的安全，并檢查幼兒活動場所的安全隱患。托班幼兒有流尿現象，我們也同樣做到勤檢查，勤換洗，像對待自己的孩子一樣。

三、反思和今后改進方向

這一學期來，我的工作中還存在著很多不足，我班幼兒的常規還不夠好，玩玩具時，不夠愛惜，在收拾玩具和學具時，不能主動將其放回原處，并有隨地亂扔的現象。同時，今后我要認真學習新的幼兒園指導《綱要》將綱要的精神落實到教育教學工作中。刻苦鉆研新教材.加強理論學習，不斷提高自己的理論水平。

第四篇：個人經驗總結

個人經驗總結

時間的腳步匆匆，在課改的春風下作為新課程實施的具體操作者，面對新課程賦予我們的更寬泛更具有彈性的選擇空間。開展課程改革的目的在于讓幼兒更快樂，健康的成長，以下是我在一個學期實踐中的幾點總結：

一、政治思想方面：

本人熱愛祖國、熱愛中國共產黨。做為幼兒教師能時刻關注國際形式的變化，以三個代表的思想引領自我，愛崗敬業，遵守幼兒園的各種規章制度。能認真的參加政治學習，做好筆記，本學期主要學習了：十六屆三中全會的精神；兩會精神和《中國人民政治協商會議章程修正案》等內容。平時能嚴格的要求自己，以師德建設年的要求時刻提醒自己，認真的學習《中小學教師師德規范》，結合臺江區優秀青年教師：鄭婕老師的先進事跡鞭策自己的工作。時刻以“愛生敬業、誠實守信、服務家長、奉獻社會”的口號嚴格要求自己。樹立高度的責任心對待幼兒園中的新的教育形式，關注每一個幼兒和幼兒的每一個細節，以積極的情感態度和幼兒應對。積極參加團組織的活動，在活動中能積極發表自己的意見和建議，時時以一個優秀團員的標準要求自己。

二、業務工作方面

1、加強班級的管理工作，創設與幼兒互動的環境：

結合大班幼兒的特點構建一個安全、愉快、寬松的外部環境，讓幼兒在教師，集體面前想表現、敢表現、喜歡表現并能得到教師與同伴的積極應對。在環境的創設上不再只是老師單方面的努力或者簡單意義上幼兒的參與，而是讓幼兒出主意、參與設計、參與材料收集、布置、參與環境的管理，體現幼兒的思維、幼兒的發現、幼兒的操作、幼兒的記錄。物質環境上，讓幼兒有豐富的操作材料進行動手探索，在實踐的過程中對已有的經驗進行整合并獲得新經驗。本學年主要創設了：數學區、特色角、科學區、語言區等。在數學區中投放更多的操作材料，并提供記錄本，鼓勵幼兒將自己發現的記錄下來，培養記錄的好習慣；科學區中投放：磁性、浮沉、輕重等方面的操作材料，讓幼兒通過活動發現身邊的秘密；在語言區重點提供拼音方面的內容，制作了有趣的拼音樹，拼音小列車等，以游戲的形式鞏固幼兒對拼音的認識；特色區的創設能時刻進行改動，根據幼兒最近繪畫的狀況，請幼兒自己發表怎樣布置的意見，教師再和幼兒一起動手布置。結合安全教育創設安全墻飾，將幼兒的談話、繪畫內容和教師的壁畫結合，設計更生動的墻飾，讓環境更好的與幼兒互動。

最為班主任能做好班級財產的管理工作，按時領借材料，及時的歸還保管室。隨時根據主題和幼兒園要求調整班級環境和墻飾。本學期還能結合大班幼兒自尊心強的特點設計了名為“奪寶奇兵”的競賽墻飾，改變以往單純點紅點點進行表揚的形式，采用幼兒自評，一月一總評的形式。新的形式不僅調動大班幼兒競爭的積極性，也使幼兒在每月的總評后有新的開始，讓他們不會有一開始落后他人就泄氣的想法，更加努力的表現自己爭取進步。并將每月總評的結果和幼兒成長檔案上及家園聯系單上的星級寶寶評選掛鉤，使幼兒更積極的參與到其中，取得更好的效果，使家長也投入到幼兒的進中。

2、教育教學方面

根據開放教育理念，及幼兒全面平衡發展的理論基礎，以挖掘幼兒潛能為教育模式的基本框架，以幼兒的經驗、能力、興趣、需要為出發點，在課程統整化、教材生活化、教學活動化的理念指導下，用主題的形式，將各領域的學習關聯起來，園內園外活動并重，使幼兒在生活中學習，在與環境中人、事、物產生交互作用中獲取各種經驗而成長。本學期主要開展了：一切都在變、有趣的橋、綠色家園、各式各樣的服裝、運動和我等活動。我能根據主題目標、幼兒的發展需求選擇適合的活動，在開學初制訂周計劃并每周及時調整教學內容，嚴格按照周計劃開展活動，完成教育教學任務。在活動中讓孩子自主地學習，并對孩子的自主學習進行了研究和實踐，努力探索孩子自主學習的所需要的條件和因素，總結教師在實踐中，促進孩子自主學習所應具備的教育理念和教育策略，從而切切實實地促進孩子的自主學習能力的發展。小組教學和個別教育相結合，讓教師和幼兒、幼兒與同伴之間有更多的交流和對話。和社區對話，利用社區的環境開展活動，在本學期中利用白馬河公園開展了“我和小樹交朋友”“學習雷鋒好叔叔”的主題活動；在“綠色家園”的活動中，我能和孩子一起動手制作環保小標志，并一起張貼到社區的宣傳欄中，獲得較好的反響。

結合幼小銜接的特點開展數學和拼音的教育教學活動。采用一周一競賽了解幼兒的學習情況；一周兩教學是幼兒得到進步。對個別能力較弱的幼兒在平時的區角活動中進行個別輔導，并與個別家長進行交流，使每個孩子都得到進步。本學期我主要負責數學方面的教育教學，本班的孩子能熟練的掌握10以內數的加減法、區分左右、認識時鐘、根據算式編應用題、以及10 以內數的連加連減。在學期末我們還開展了“我要上小學”的系列主題活動，在活動中讓幼兒了解小學、了解小學生、了解小學生的學習情況；在平時的教育教學中模仿小學上課的形式，激發幼兒做一個優秀小學生的自豪感，樣成良好的學習習慣。

注重幼兒品德教育，無論在教育活動或生活活動中，我都從細節做起，從一點一滴培養孩子的好習慣。在本學年中開展了“我是大班小朋友”“向雷峰叔叔學習”“從小愛勞動”等主題活動。同時還結合各種不同類型的活動對幼兒盡心愛父母，愛家鄉的教育。結合安全教育活動和季節的變化對幼兒進行健康教育，還更加重視“關心他人”情感的培養，培養幼兒從小愛他人、關心他人、關心社會的良好情感。

3、愛的承諾方面

（1）平時能作到熱愛學生，衣著整潔得體，語言規范健康，舉止文明禮貌，注重自身的語言和談吐，以優美大方的形象帶給幼兒美好的體驗。輕聲細語的和孩子交流。結合主題活動，采取討論的方式，和孩子共同制定班級常規。督促、提醒幼兒按討論過的常規活動，提高幼兒的自省能力，建立以幼兒為中心的自律班級常規。培養良好的傾聽和舉手回答問題的好習慣。

（2）及時的撰寫每月愛的承諾，根據家長的意見提出新的希望和要求。

（3）認真制定幼兒成長檔案、社區成長檔案和個人成長檔案，能每月按時的增添新開展的內容，及時拍照記錄，給幼兒的成長、自身的成長留下痕跡。豐富幼兒成長檔案的內容，改變以往單純以幼兒繪畫作品為主的形式，收集幼兒繪畫、手工、數學、拼音、談話、記錄等多種活動痕跡，并結合幼兒每月一評分發“小紅花”豐富幼兒成長檔案內容。還能利用問卷調查、小表格等形式讓家長也參與到幼兒檔案的制作中。在社區成長檔案中制作班級主頁，除了能介紹最近開展的活動外，還能根據家長的疑難給予解答，根據季節和實際情況的需要增添家教文章，如《幼兒心理健康的調查》《幼兒入小學注意》等；還能請個別家長撰寫家教文章，向其余家長介紹自己的家教經驗。認真的對待教師個人成長檔案，每月及時反思，增添自己的學習心得和體會，制作個人主頁，使成長檔案更豐富。

（4）注意培養幼兒良好的生活習慣，如正確的睡姿、坐姿、站姿等，引導幼兒學會解決同伴間的小糾紛。教幼兒了解自我保護的常識和行為，如用眼衛生和換牙的注意事項等。根據天氣的變化，提醒幼兒及時的穿脫衣物，多飲水。對個別體弱的孩子格外關心。

4、特色教學方面

認真的開展特色教育，在開學初制定好教學進度，畫好所有范圖，每周五按時開展活動。在活動中更加重視用筆和用墨的講解和示范，使每個孩子都能較好的發展。注意個別幼兒的指導，糾正其不正確的用筆姿勢。注意對幼兒作品的講評，請幼兒自己觀察發現優秀的作品，對有進步的孩子及時的表揚。將每次的幼兒作品進行展示，并請家長提出自己的意見和建議，及時的修改我們的教學。在期末布置幼兒特色展示區，將幼兒一學期以來的作品分別展示，讓家長縱向比較了解孩子的進步。在期末撰寫特色教育心得《教水墨畫有感》。制作特色教育袋，整理特色教育的教材、范圖、文章等內容，為今后開展活動做好準備。

5、其他方面

（1）能認真的開展年段長工作，帶領年段教師開展教研和教育教學工作。在每次的教研活動中帶頭發表意見，總結年段教師的意見并進行交流。本學期與年段教師配合開展了年段班級家長會、家長開放日、六一海報的設計、六一游園活動、安全教育活動、畢業典禮等活動。

（2）本學期繼續擔任林張艷老師的指導教師，本學期主要對藝術教育教學方面的進行指導幫助。本學期在業務園長的帶領下，開示范課：《歌曲——勤快人和懶惰人》、《繪畫——我喜歡的橋》《繪畫——海底的故事》，效果良好。年輕教師林張艷的匯報課也有很大的進步。

（3）本學期能認真對待幼兒園里的各項任務，在教師技能技巧比賽中獲演講二等獎、繪畫三等獎、歌唱歡樂獎的好成績。指導幼兒鄭婧儀獲市科協科幻畫比賽一等獎，薛鑫儀獲二等獎。薛鑫怡、張鈺、詹妍、吳心悅、周仲卿分獲幼兒園“愛媽媽”繪畫比賽一二三等獎；薛鑫怡、林君藝、謝軒武獲幼兒園“元宵花燈制作比賽”一二三等獎。

（4）本學期還能根據幼兒的發展選擇科研的課題，從幼兒和教師的互動關系入手進行調查研究，撰寫了論文《教師在教育過程中與幼兒互動關系的研究》。

三、做好家長工作——家園合作、同向同步

1、利用家園聯系單向家長介紹幼兒每月的情況，及時的了解幼兒在家在園的情況，家園同步的開展教育教學工作。

2、本學期我們能認真的制作幼兒成長檔案和社區成長檔案，家長一起參與到制作的過程中，讓他們更深刻的體驗幼兒園教育的特殊性和趣味性，更家了解自己的孩子的發展狀況。

3、通過及時更換家教之窗的家教知識，向家長宣傳科學的育兒知識。本學期還承擔了園社區宣傳欄5月份設計工作，能根據幼兒園的動向和家長的需要制作有效的宣傳欄，為家長提供幫助，得到家長的好評。

4、按時召開班級家長會和家委會，做好記錄，能根據家長的意見和建議調整具體工作。在家委會的支持下開展好各種家長開放活動，如：家長開放日、六一游園活動等。

總之在這一年里我的工作取得了一定的成績，但仍然存在許多的不足，如性格比較急，個別的家長也對我提出了意見和建議，在今后的工作中我會在反思中不斷的改進自己提高自己。

胡天慧

2013年7月6日

第五篇：PCR學習心得

參加《臨床基因擴增實驗室技術人員上崗培訓

班》心得

本人于2015年3月10至15日參加了廣東省臨檢中心舉辦的臨床基因擴增實驗室技術人員上崗培訓班。通過學習，除了取得廣東省臨檢中心頒發的培訓證書外，還極大的提高了理論和實驗操作水平，現總結如下。

此次培訓包括理論培訓和實驗操作。在理論培訓課程當中，衛生部臨床檢驗中心的李金明教授為我們詳細講解了《臨床基因擴增實驗室設計及質量管理體系的建立》、《臨床基因擴增檢驗的質量保證》等內容。通過學習，了解到臨床PCR實驗室設計必須遵循各區獨立、注意風向、因地制宜，方便工作的原則。質量管理的內涵：寫你所做的，做你所寫的，記錄你已做的，分析你已做的。認識到臨床標本的正確采集、運送、保存的重要性，是臨床檢驗的質量保證的關鍵性環節，是解決涉及實驗室檢驗的醫患糾紛的方法之一。同時通過病例分析，對于臨床基因擴增檢驗的檢驗前，檢驗中，檢驗后的質量控制，還有實驗的結果處理和分析有了重新認識。對于實驗室是否出現污染的鑒別，以及出現污染的處理措施有了深刻了解。

臨床實驗醫學的發展現在經歷了三個時代，分別是生化診斷時代，免疫診斷時代，和和現在的分子（基因）診斷時代，而現今時代的標志性技術正是PCR技術，是反映疾病本質的實驗。正是有臨床基因擴增檢驗技術在癌癥等疾病的診斷方面有了多方應用，通過驅動基因的選擇，為靶向治療患者延長了生存期。為個體化診療中對疾病的鑒別診斷，診治方案的設定提供重要的參考依據，同時也為治療過程中臨床對于治療方案的調整提供依據。臨床基因擴增檢驗技術在個體化診療中是不可或缺的一部分，是其重要的組成部分，具有強大的發展潛力和前景。

實驗操作內容為EGFR突變基因檢測。實驗操作過程中，通過認真學習和細致聽講帶教老師的規范實驗操作，了解到了實驗的關鍵操作，糾正了平常在臨床實際工作操作上的一些不良習慣，為日后規范檢驗操作提供了基礎。通過分組親自操做實驗，分析和判斷自己的實驗結果，做實驗記錄筆記，基本掌握EGFR突變基因檢測。

通過為期六天的理論和實驗培訓，從中學習到了很多知識，掌握了嚴格的防污染以及污染的處理措施，了解到實驗室設置的人流、物流、氣流的走向設計原則，解決了日常工作中的實際問題，為日后臨床基因擴增檢驗工作的開展打下了堅實的基礎。了解到臨床基因擴增檢驗技術的發展方向，受益匪淺。