第一篇：微生物,真菌實(shí)驗(yàn)（范文模版）

青 島 農(nóng) 業(yè) 大 學(xué)

獸醫(yī)微生物學(xué)課程論文

題 目：姓 名：學(xué) 院：專 業(yè)：班 級(jí)：學(xué) 號(hào)：指導(dǎo)教師：

病原真菌的分離鑒定

動(dòng)物科技學(xué)院 動(dòng)物醫(yī)學(xué)

2014年月 13 日

病原真菌的分離鑒定

動(dòng)醫(yī)1205

李春成20121450 摘要：制作固體培養(yǎng)基，將A、B、D三種真菌接種到培養(yǎng)基和蓋玻片上進(jìn)行3-5d的培養(yǎng)（溫度為28℃，觀察真菌在固體培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)表現(xiàn)，在顯微鏡下觀察小培養(yǎng)中的真菌形態(tài)，用美藍(lán)染色液染酵母菌，進(jìn)一步觀察其形態(tài)。關(guān)鍵詞：真菌；分離；形態(tài)；接種 引言：

真菌在自然界分布廣、數(shù)量大、種類多。有些真菌可引起人和畜禽疾病，有些霉菌還產(chǎn)生毒素，直接或間接的危害人類和動(dòng)物健康。了解真菌的培養(yǎng)方法，認(rèn)識(shí)其形態(tài)十分重要。

真菌中的酵母菌是單細(xì)胞微生物，細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)有明顯的分化，個(gè)體直徑比真菌大10倍左右，多為圓形或卵圓形。酵母菌無(wú)性繁殖主要是出芽生殖，在特殊的情況下能形成假菌絲，有性繁殖是通過(guò)結(jié)合產(chǎn)生子囊孢子。用美藍(lán)染色液制成水浸片，不僅可以觀察其外形，還可以區(qū)分死活細(xì)胞。

霉菌的營(yíng)養(yǎng)體是分支的絲狀體，分為基內(nèi)菌絲和氣生菌絲，氣生菌絲又分化出繁殖菌絲，不同霉菌的繁殖菌絲可以形成不同的孢子。

霉菌的菌絲較大，細(xì)胞易收縮變形，且孢子容易飛散，所以指標(biāo)本是常用乳酸石炭酸棉藍(lán)染色液。此染色液制成霉菌標(biāo)本片的特點(diǎn)是：細(xì)胞不變形，具有殺菌防腐作用，且不易干燥，能保持較長(zhǎng)的時(shí)間，溶液本身呈藍(lán)色，有一定的染色效果。

利用培養(yǎng)在玻璃紙上的霉菌作為觀察材料，可以得到清晰、完整、保持自然狀態(tài)的霉菌形態(tài)。

制作霉菌封閉標(biāo)本，一般用石炭酸棉染色液封片，其中含有甘油，不易干燥，石炭酸有防腐作用，棉藍(lán)有一定的染色作用，便于觀察。1材料和方法 1.1材料

待鑒定的三種真菌A、B、D

1.1.1培養(yǎng)基 PDA培養(yǎng)基 1.1.2儀器

懸液、載玻片、蓋玻片、無(wú)菌培養(yǎng)皿、濕盒，1mL無(wú)菌注射器、生理鹽水、酒精燈等 1.2方法

1.2.1劃線分離：將接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌冷卻后，取待測(cè)的真菌，按照細(xì)菌的平板劃線分離法進(jìn)行平板劃線，即用接種環(huán)從待測(cè)培養(yǎng)基上蘸取菌種在平板上劃1/5-1/4，劃畢灼燒滅菌接種環(huán)，待冷卻后，于第二段處再做劃線，且從第一段處引線，劃畢，灼燒滅菌接種環(huán)。冷卻后，于第三段再做劃線，且從第二段處引線，劃畢，灼燒滅菌接種環(huán)。冷卻后，于第四段再做劃線，且從第三段處引線，劃畢，灼燒滅菌接種環(huán)。

1.2.2小培養(yǎng)：用注射器吸取液體培養(yǎng)基于載玻片上，將接種環(huán)在火焰下滅菌，挑取待檢菌放于液體培養(yǎng)基上，待液體培養(yǎng)基將要凝固，但仍有部分呈液體狀時(shí)，蓋上蓋玻片，標(biāo)記好菌種。

1.2.3酵母菌水浸片的制備：先取干凈的載玻片滴上生理鹽水1-2滴，將接種環(huán)在火焰下滅菌，挑取酵母菌少許，均勻涂在液滴中，再將美藍(lán)染色液滴于載玻片上，染色2-3min后加蓋玻片。（注意切勿產(chǎn)生氣泡）然后低倍鏡和高倍鏡觀察其細(xì)胞形態(tài)、芽殖方式。2.結(jié)果與分析 2.1觀察三個(gè)培養(yǎng)基：A菌在固體培養(yǎng)基上菌落呈油脂狀，表面光滑、濕潤(rùn)、粘稠，顏色呈黃色。B菌在固體培養(yǎng)基上菌落為氈狀，顏色是綠色，具有典型的放射狀皺紋。D菌在固體培養(yǎng)基上菌落密集，最初呈白色，孢子呈黑色。

2.2實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象

2.2.1小培養(yǎng)形態(tài)鑒定現(xiàn)象

前三圖均在40X下觀察）

A菌體呈圓形、卵形或橢圓形，內(nèi)有細(xì)胞核、液泡和顆粒體物質(zhì)。光鏡下可見(jiàn)細(xì)胞質(zhì)所在范圍及細(xì)胞壁的影子，高倍鏡中可現(xiàn)細(xì)胞核。B菌菌絲呈無(wú)色，有分隔，其分生孢子梗經(jīng)過(guò)多次分支，產(chǎn)生幾輪對(duì)稱或不對(duì)稱的小梗，形如掃帚，稱為掃帚體。D菌菌絲無(wú)隔，有匍匐菌絲和假根，假根著生處有直立向上孢子囊梗，其頂端彭大成孢子囊，孢子囊底部有半球形囊軸。

2.2.2美蘭染色現(xiàn)象

顯微鏡下看到的是單細(xì)胞, 不形成菌落的真菌，無(wú)色細(xì)胞為活酵母菌細(xì)胞，藍(lán)色細(xì)胞為已死的酵母菌細(xì)胞。

3.討論

本次試驗(yàn)做的還可以，試驗(yàn)結(jié)果都能看到，現(xiàn)象比較明顯，不過(guò)，顯微鏡聚焦不是很好，看的不是很清楚，現(xiàn)象也不太明顯，在做小培養(yǎng)時(shí)充分發(fā)揮了團(tuán)隊(duì)合作精神，使得試驗(yàn)做的很快（因?yàn)樽鲂∨囵B(yǎng)時(shí)，液體培養(yǎng)基溫度不那么高了，凝固時(shí)間很快），做美蘭染色時(shí)，也很注意沒(méi)有弄進(jìn)氣泡，不影響觀察。4.結(jié)果

經(jīng)以上試驗(yàn)可得出，A為酵母菌；B為青霉菌；D為根霉菌。

4.參考文獻(xiàn)

獸醫(yī)微生物實(shí)驗(yàn)教程

胡貴學(xué)

2006

第二篇：真菌微生物的研究進(jìn)展

論文題目：真菌微生物的研究進(jìn)展

作者：華江濤 專業(yè)：生物化工工藝 班級(jí)： 生化1321 學(xué)號(hào)： 2013277102 指導(dǎo)老師：劉磊

2016年4 月12日

真菌微生物的研究進(jìn)展

目錄

第1章 傳統(tǒng)微生物培養(yǎng)法.................................3 第2章 分子生物學(xué)方法...................................3 2．1基于PCＲ的克隆文庫(kù)方法..........................3 2．2變性梯度凝膠電泳（DGGE）.........................3 2．3末端限制性長(zhǎng)度多態(tài)性（T-ＲFLP）...................4 2．4實(shí)時(shí)熒光定量PCＲ..................................4 2．5熒光原位雜交（FISH）...............................4 2．6序列標(biāo)簽標(biāo)記的高通量測(cè)序..........................4 第3章 宏基因組學(xué)技術(shù)（Metagenomics）.....................5 前景與展望........................................5 致謝......................................................6 參考文獻(xiàn)..................................................6

摘要

真菌廣泛存在于自然界，在生態(tài)系統(tǒng)中發(fā)揮著重要的作用。隨著分子生物學(xué)技術(shù)在微生物多樣性研究中的廣泛應(yīng)用以及宏基因組學(xué)技術(shù)的出現(xiàn)，打破了傳統(tǒng)微生物培養(yǎng)法的局限性，人們對(duì)于真菌多樣性的認(rèn)識(shí)日漸提高。該文主要綜述了研究真菌多樣性方法的主要發(fā)展歷程，介紹幾種有關(guān)真菌多樣性研究常用的分子生物學(xué)方法，包括基于PCＲ的克隆文庫(kù)方法、變性梯度凝膠電泳、末端限制性長(zhǎng)度多態(tài)性、實(shí)時(shí)熒光定量PCＲ、熒光原位雜交、序列標(biāo)簽標(biāo)記的高通量測(cè)序以及宏基因組技術(shù)，并且闡述宏基因組學(xué)技術(shù)在此領(lǐng)域蘊(yùn)含的巨大發(fā)展?jié)摿?/p>

關(guān)鍵詞

真菌；多樣性；研究方法 Abstract Fungiwidelyexistsinnatureplayinganimportantroleintheecosystem．Thepervasiveapplicationofmolecularbiol-ogytechnologyinmicrobialdiversityandtheemergenceofmetagenomicbreakedthelimitationsoftraditionalmicrobialculturemeth-odsothatimprovethehumansrecognitionoffungaldiversity．ThispaperreviewedthemaindevelopmentcourseofstudyingfungaldiversityapproachesintroducedseveralcommonlyusedmethodsofmolecularbiologyonfungaldiversityresearchmainlyincludingclonelibraryPCＲbased，DenaturinggradientgelelectrophoresisTerminalrestrictionfragmentlengthpolymorphismeal-timeflu-orescentquantitativePCFluorescenceinsituhybridizationandbarcodedpyrosequencingndexpoundedthehugepotentialofmetagenomicsinthisfield．

Keyword fungi；diversity；method 正文

自然界中的微生物分布廣、種類多、資源極其豐富，主要包括細(xì)菌、病毒、真菌等。迄今人們已發(fā)現(xiàn)的微生物物種僅為自然界中微生物總數(shù)的1%～10%［1］。微生物群落多樣性是環(huán)境微生物多樣性研究的核心內(nèi)容。目前微生物多樣性研究多局限于細(xì)菌，而對(duì)真菌的研究相對(duì)較少。研究真菌群落多樣性可以了解真菌群落結(jié)構(gòu)、真菌的種類和數(shù)量分布特點(diǎn)，并且可以進(jìn)一步為控制和優(yōu)化真菌群落結(jié)構(gòu)提供參考，同時(shí)也是研究微生物群落多樣性的重要內(nèi)容。真菌遍布于自然界，據(jù)估計(jì)約有數(shù)百萬(wàn)種，已發(fā)現(xiàn)的僅9萬(wàn)余種，已發(fā)現(xiàn)的導(dǎo)致人類疾病的僅約400種。人類也生活在真菌包圍的環(huán)境中，日常工作、生活中所接觸到的真菌種類目 前的認(rèn)知。因此，不論是自然環(huán)境還是人體都具有較高的真菌多樣性。真菌多樣性的研究方法很多，從國(guó)內(nèi)外目前采用的方法來(lái)看，大致上可分為：傳統(tǒng)的微生物培養(yǎng)法、分子生物學(xué)方法以及宏基因組學(xué)技術(shù)。隨著現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，越來(lái)越多的新技術(shù)、新方法用于真菌多樣性領(lǐng)域的研究，使人們對(duì)真菌多樣性的認(rèn)識(shí)更加全面深入。

1傳統(tǒng)微生物培養(yǎng)法

從傳統(tǒng)上講，真菌多樣性的研究主要利用分離培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)檢測(cè)的方法，該技術(shù)在實(shí)驗(yàn)室被廣泛使用。盡管各種新的培養(yǎng)技術(shù)不斷出現(xiàn)，但此方法費(fèi)時(shí)費(fèi)力，敏感度和特異性也較低，也不能反應(yīng)全部的真菌群落信息。Amann等曾根據(jù)微生物原位的、不依賴于培養(yǎng)的微生物系統(tǒng)發(fā)育學(xué)研究結(jié)果認(rèn)為：在自然界中，通過(guò)實(shí)驗(yàn)室人工培養(yǎng)方法已經(jīng)被分離和描述的微生物物種數(shù)量?jī)H占估計(jì)數(shù)量的1%～5%，而其余大多數(shù)微生物種群還仍然未被分離和認(rèn)識(shí)，因此，人們不能利用傳統(tǒng)的微生物培養(yǎng)技術(shù)獲得真菌多樣性的全部信息，極大的限制了研究的廣泛性。在臨床致病菌的鑒定方面，培養(yǎng)的方法更為常用。Ｒasi等利用培養(yǎng)法對(duì)從伊朗花斑糠疹患者皮膚上分離得到的馬拉色酵母菌進(jìn)行鑒定過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)球形馬拉色菌是最常分離到的菌種，大約占31．3%，其次是糠秕馬拉色菌（20．5%）等。Findley等［7］通過(guò)微生物培養(yǎng)法從10個(gè)健康成人的14個(gè)部位的皮膚分離真菌，經(jīng)鑒定11個(gè)剛體部位和胳膊表面的優(yōu)勢(shì)真菌是馬拉色菌屬，通過(guò)比較，腳底、腳趾甲和趾間具有較高的真菌多樣性。

2分子生物學(xué)方法

鑒于分離培養(yǎng)技術(shù)的局限性，近年來(lái)，利用不依賴培養(yǎng)的方法分析和鑒定微生物群落多樣性的實(shí)驗(yàn)越來(lái)越普遍。自從Pace提出將分子生物學(xué)方法用于微生物多樣性研究，微生物分子生態(tài)學(xué)得到了長(zhǎng)足的發(fā)展。分子生物學(xué)技術(shù)應(yīng)用于微生物群落結(jié)構(gòu)分析使得對(duì)環(huán)境樣品中占大部分的不可培養(yǎng)微生物的研究成為了可能。目前，大多數(shù)用于分析微生物群落結(jié)構(gòu)的方法是基于PCＲ擴(kuò)增的。在分析微生物群落結(jié)構(gòu)多樣性時(shí)，rＲNA是目前應(yīng)用最廣泛的分子標(biāo)記，它具有在功能上高度保守，其序列上的不同位置具有不同的變異速率，存在于所有的有機(jī)體（病毒除外）內(nèi)等優(yōu)點(diǎn)。對(duì)于細(xì)菌而言，16SrＲNA分析在實(shí)際應(yīng)用中最為廣泛，與細(xì)菌相比，使用真菌18SrDNA只能鑒定到屬或科的水平。真菌的非編碼rＲNA區(qū)域，如ITS區(qū)域（Inter-naltranscribedspacer），進(jìn)化快速，序列上的變化更加廣泛，因此提供了更多的分類信息，彌補(bǔ)了18SrＲNA的局限性。雖然如此，在實(shí)際研究?jī)?nèi)容中仍然要根據(jù)對(duì)分類等級(jí)的不同要求來(lái)選擇合適的分子標(biāo)記。分子生物學(xué)方法的應(yīng)用使在遺傳水平上研究微生物多樣性成為了可能，該方法可歸納為三方面：①基于PCＲ技術(shù)的研究方法，這些方法是對(duì)樣品直接提取DNA或者ＲNA，然后對(duì)特定基因設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCＲ擴(kuò)增，再利用不同的方法進(jìn)行分析，（Fluorescenceinsituhybridization，F(xiàn)I可以對(duì)微生物在特定環(huán)境中的存在與否、分布模式及豐度等情況進(jìn)行研究，具有較高的靈敏性和特異性。③基于DNA序列測(cè)定的研究方法，分析具體堿基序列的分布情況，通過(guò)與生物信息學(xué)結(jié)合，進(jìn)行數(shù)據(jù)比較分析，如元基因組（Metagenome）測(cè)序技術(shù)，成為研究難培養(yǎng)微生物或不可培養(yǎng)微生物多樣性的重要方法。

2．1基于PCＲ的克隆文庫(kù)方法

基于PCＲ的克隆文庫(kù)方法使對(duì)不可培養(yǎng)微生物的分析成為可能，Pace提出將PCＲ產(chǎn)物進(jìn)行克隆后測(cè)序，大大提高了對(duì)微生物群落結(jié)構(gòu)的認(rèn)識(shí)，是使用較為廣泛的一種方法。目前已有研究采用針對(duì)18SrDNA及ITS的克隆文庫(kù)構(gòu)建技術(shù)對(duì)腸道內(nèi)真菌群落的多樣性進(jìn)行分析，研究結(jié)果表明人腸道真菌多樣性比較低，主要以不同亞型的芽囊原蟲屬為主

2．2變性梯度凝膠電泳（DGGE）

DGGE最初是lerman等［12-13］發(fā)明的，起初主要用來(lái)檢測(cè)DNA片段中的點(diǎn)突變。1993年，Muyzer等［14］首次將其用于微生物群落多樣性的研究。DGGE普遍用于分析環(huán)境中細(xì)菌、真菌、病毒群落的生物多樣性。Kim等利用PCＲ-DGGE技術(shù)分析了日本和中國(guó)發(fā)酵豆瓣醬中的細(xì)菌和真菌群落多樣性，確定了米曲霉和魯氏酵母的存在。We-erasekera等［16］通過(guò)PCＲ-DGGE方法研究人唾液中的酵母菌，在其中六個(gè)樣品中鑒定出兩種酵母菌，分別是白色念珠菌和杜氏假絲酵母，有力的證明利用DGGE技術(shù)研究口腔中的酵母菌是一種相對(duì)快速便捷的方法。

2．3末端限制性長(zhǎng)度多態(tài)性（T-ＲFLP）

T-ＲFLP技術(shù)是在末端限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的，依據(jù)rDNA序列的保守性和特異性，選擇具有系統(tǒng)進(jìn)化標(biāo)記特征的序列作為目 的序列。T-ＲFLP技術(shù)靈敏度高，對(duì)于評(píng)估復(fù)雜環(huán)境樣品的多樣性和快速的比較不同生態(tài)系統(tǒng)的微生物群落結(jié)構(gòu)和多樣性是一種有力的工具。Curlevski等［17］使用T-ＲFLP方法研究了澳大利亞商業(yè)化混交林和單一種植南洋杉林場(chǎng)土壤真菌群落的不同，通過(guò)對(duì)真菌的ITS區(qū)域進(jìn)行分析表明子囊菌門的豐度最高，其次是擔(dān)子菌門和接合菌門，但在不同類型的林場(chǎng)中它們的相對(duì)豐度存在差異。

2．4實(shí)時(shí)熒光定量PCＲ

（qPCＲ技術(shù)于1996年由美國(guó)AppliedBiosys-tems公司推出，是將熒光能量傳遞技術(shù)（Fluores-cenceresonanceenergytransfer，F(xiàn)ＲET）應(yīng)用于PCＲ，實(shí)現(xiàn)了PCＲ從定性到定量的飛躍。qPCＲ技術(shù)目前已得到廣泛應(yīng)用。李曉然等在對(duì)汾酒發(fā)酵過(guò)程和汾酒酒曲制作過(guò)程中細(xì)菌和真菌多樣性的研究中，利用qPCＲ技術(shù)對(duì)整個(gè)過(guò)程中的細(xì)菌和真菌進(jìn)行了定量，發(fā)現(xiàn)在汾酒發(fā)酵過(guò)程中真菌的數(shù)量保持相對(duì)穩(wěn)定，在酒曲制作過(guò)程中真菌的數(shù)量整體上呈下降趨勢(shì)。Li等通過(guò)qPCＲ方法研究了老年人舌背的真菌多樣性，表明老年人口腔中的真菌多樣性極高，并不僅限于念珠菌屬，其多樣性與老年人的健康狀態(tài)也具有密切的關(guān)系。

2．5熒光原位雜交（FISH）

比起費(fèi)時(shí)費(fèi)力且難以展現(xiàn)全部微生物群落信息的依賴于培養(yǎng)的方法和難以實(shí)現(xiàn)定量分析的多種依賴于PCＲ擴(kuò)增的分子生物學(xué)方法，使用探針雜交來(lái)研究微生物群落多樣性是一種更為快速的方法。熒光原位雜交是以熒光標(biāo)記的寡核苷酸探針來(lái)探測(cè)生態(tài)系統(tǒng)中微生物細(xì)胞的一種技術(shù)，不僅能研究自然或人工環(huán)境中的微生物個(gè)體，并且可以對(duì)微生物群落進(jìn)行評(píng)估。Lepère等使用酪胺信號(hào)放大技術(shù)與FISH結(jié)合的方法，用18SrDNA特異性的引物分析了湖水中的真核超微浮游生物的主要類群，獲得了真核浮游微生物的定量結(jié)果。雖然分子生物學(xué)方法目前是闡述微生物多樣性的強(qiáng)有力技術(shù)手段，并且在真菌多樣性研究中具有傳統(tǒng)培養(yǎng)法無(wú)法比擬的優(yōu)勢(shì)，但是基于PCＲ擴(kuò)增的各種方法及FISH等方法仍然存在著多種弊端，例如引物的偏向性、PCＲ存在的其他系統(tǒng)偏差以及FISH方法中由于引物的不匹配造成對(duì)分析結(jié)果的錯(cuò)誤估計(jì)等。在實(shí)際的研究中，通常將多種技術(shù)綜合使用，以避免由于方法原理本身所帶來(lái)的不可避免的偏差，可提供更加全面準(zhǔn)確的微生物多樣性變化的信息

2．6序列標(biāo)簽標(biāo)記的高通量測(cè)序

隨著測(cè)序技術(shù)的發(fā)展，被稱為“第二代測(cè)序（next-generationsequencing［NGS］）”技術(shù)在過(guò)去幾年中不斷涌現(xiàn)。其特點(diǎn)是：高通量，低成本，可以同時(shí)對(duì)多個(gè)單獨(dú)的DNA分子進(jìn)行測(cè)序，這一改進(jìn)比

起每條序列需要單獨(dú)分析的Sanger法具有巨大的優(yōu)勢(shì)。第二代測(cè)序技術(shù)主要包括羅氏454公司的GS-FLX測(cè)序平臺(tái)、Illumina公司的SolexaGenomeAnalyzer測(cè)序平臺(tái)和ABI公司的Solid測(cè)序平臺(tái)［25］。自從Hamady等建立了在不同的樣品PCＲ引物上分別添加序列標(biāo)簽（barcode）來(lái)作為高通量測(cè)序后根據(jù)序列區(qū)分不同樣品的標(biāo)記，高通量測(cè)序技術(shù)越來(lái)越廣泛地應(yīng)用到微生物群落多樣性的分析中。綜合比較二代測(cè)序平臺(tái)，在研究微生物多樣性方面應(yīng)用較廣泛的是焦磷酸測(cè)序（Pyro-sequencing）。李曉然等［18］利用真菌ITS1的焦磷酸測(cè)序，研究了中國(guó)傳統(tǒng)汾酒發(fā)酵過(guò)程中的真菌群落多樣性，分析了在汾酒發(fā)酵過(guò)程中真菌的變化以及主要存在的真菌菌種，其中有60%的ITS序列屬于酵母菌科，豐度最高的是東方伊薩酵母，其次為啤酒酵母。Delhaes等利用焦磷酸測(cè)序的方法對(duì)囊泡纖維癥患者的真菌多樣性進(jìn)行了研究，結(jié)果表明肺功能下降及臨床狀態(tài)不好的患者真菌多樣性明顯降低。Hoffmann等對(duì)人體腸道的真菌多樣性進(jìn)行研究，通過(guò)焦磷酸測(cè)序表明人腸道中的真菌共66個(gè)屬，豐度較高的是子囊菌綱和擔(dān)子菌類。

3宏基因組學(xué)技術(shù)（Metagenomics）

利用基于rDNA的分子生物學(xué)方法研究微生物多樣性，對(duì)于龐大的微生物世界仍然是不足夠的，遠(yuǎn)不能闡明微生物的生理生化代謝特征。1998年，Handelman等［29］首次提出宏基因組的概念，并第1次使用了Metagenomics這個(gè)詞。宏基因組學(xué)技術(shù)是通過(guò)提取某一環(huán)境樣品所有微生物的基因組DNA，或通過(guò)鳥槍法直接測(cè)序探究環(huán)境中微生物的群落結(jié)構(gòu)和功能，或構(gòu)建宏基因組文庫(kù)及對(duì)文庫(kù)進(jìn)行篩選尋找和發(fā)現(xiàn)新的功能基因及活性代謝產(chǎn)物。通過(guò)這兩方面的研究，極大地豐富了我們對(duì)環(huán)境樣品微生物多樣性和其功能的認(rèn)知。宏基因組學(xué)技術(shù)避開(kāi)傳統(tǒng)的微生物分離培養(yǎng)方法，直接從樣品中提取總DNA來(lái)展開(kāi)研究，理論上覆蓋了環(huán)境樣品中的全部微生物，在分析環(huán)境微生物復(fù)雜群落結(jié)構(gòu)領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。該技術(shù)在微生物多樣性領(lǐng)域的研究，有關(guān)細(xì)菌方面的居多，而關(guān)于真菌群落多樣性的研究為數(shù)并不多。Il-leghems等利用宏基因組學(xué)技術(shù)研究了可可豆自然發(fā)酵過(guò)程中的真菌和細(xì)菌群落多樣性，研究結(jié)果表明，葡萄汁有孢漢遜酵母、仙人掌有孢漢遜酵母、啤酒酵母、發(fā)酵乳桿菌和巴氏醋桿菌是主要存在的菌種，并且確定了主要以乳桿菌為宿主的肌病毒科和長(zhǎng)尾噬菌體的存在。這是第1篇利用宏基因組學(xué)技術(shù)并結(jié)合454焦磷酸測(cè)序研究自然發(fā)酵可可豆中群落多樣性種系發(fā)生分析的報(bào)道，顯示了宏基因組學(xué)技術(shù)相比于之前研究方法的優(yōu)越性，能夠獲得更加全面的微生物群落信息。宏基因組學(xué)技術(shù)不僅在研究微生物群落結(jié)構(gòu)方面蘊(yùn)含巨大潛力，在發(fā)現(xiàn)新功能基因及活性物質(zhì)方面也具有極大的優(yōu)勢(shì)。Cardoso等 在對(duì)被蝸牛侵襲的農(nóng)作物進(jìn)行宏基因組學(xué)分析中，第1次對(duì)其微生物群落和參與生物化學(xué)通路的主要基因進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)變形菌門是主要的細(xì)菌門，其次是擬桿菌門和硬壁菌門，而病毒、真菌及古細(xì)菌的多樣性稍低。另外，通過(guò)功能分析發(fā)現(xiàn)其中存在的大量微生物基因有助于宿主降解木質(zhì)纖維素、對(duì)異生物質(zhì)脫毒以及合成必需氨基酸和維生素，同時(shí)有利于蝸牛的適應(yīng)性和廣泛攝食，并且檢測(cè)到2700多種編碼糖苷水解酶區(qū)域和碳水化合物結(jié)合結(jié)構(gòu)域的基因。通過(guò)宏基因組學(xué)技術(shù)不僅能夠避免PCＲ擴(kuò)增帶來(lái)的偏差，全面而準(zhǔn)確的研究微生物群落多樣性，同時(shí)也為研究樣品中微生物生化代謝、發(fā)現(xiàn)新功能基因和活性物質(zhì)提供了極大的便利。宏基因組學(xué)技術(shù)在分析群落多樣性中不可避免地也會(huì)存在一些弊端，例如測(cè)序產(chǎn)生的大量數(shù)據(jù)為后續(xù)的序列分析和處理帶來(lái)了挑戰(zhàn)，同時(shí)對(duì)計(jì)算機(jī)以及數(shù)據(jù)庫(kù)的要求也在不斷提高。盡管如此，宏基因組學(xué)技術(shù)本身所具有的巨大優(yōu)勢(shì)是目前其他研究方法不可比擬的。近年來(lái)，宏基因組學(xué)技術(shù)已經(jīng)開(kāi)始影響真菌生物學(xué)，逐漸成為研究真菌多樣性的一個(gè)新的發(fā)展方向和研究熱點(diǎn)，也增加了獲得新生物活性物質(zhì)的機(jī)會(huì)，顯示宏基因組學(xué)技術(shù)在此方面蘊(yùn)含的巨大發(fā)展?jié)摿Α?/p>

前景與展望

近年來(lái)，隨著各種新技術(shù)的不斷完善與發(fā)展，對(duì)真菌多樣性的研究逐漸深入，利用這些新技術(shù)可以從不同的角度來(lái)研究真菌多樣性，為環(huán)境微生物多樣性和人體真菌病的診斷治療奠定堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。值得一提的是，為了獲得更為全面的真菌多樣性信息，在條件許可的情況下可將幾種方法結(jié)合起來(lái)使用。目前對(duì)于真菌多樣性的研究是多方面的，不論是環(huán)境中、食品中還是定植于人體各部位的真菌，通過(guò)對(duì)其多樣性的研究必能為指導(dǎo)實(shí)踐提供理論基礎(chǔ)。因此，真菌多樣性研究方法的不斷完善必將推動(dòng)真菌多樣性研究的快速發(fā)展。做生物的多樣性和微生物代謝產(chǎn)物的多樣性，永遠(yuǎn)是發(fā)現(xiàn)新藥的無(wú)窮寶藏。隨著生命科學(xué)的發(fā)展，一些新的抗真菌藥物作用靶點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)，必將有更多更有效的抗真菌抗生素被發(fā)現(xiàn)和應(yīng)用。在過(guò)去的 20年間，刺白菌素類抗生素的發(fā)現(xiàn)和應(yīng)用，更增強(qiáng)了從微生物代謝產(chǎn)物中尋找抗真菌抗生素的信心。在今后的若干年間，將會(huì)有更多的作用靶位用于抗真菌抗生素的篩選，并一定能夠由此獲得更多更有效的抗生素。

致謝

大學(xué)三年學(xué)習(xí)時(shí)光已經(jīng)接近尾聲，在此我想對(duì)我的母校，我的父母、親人們，我的老師和同學(xué)們表達(dá)我由衷的謝意。感謝我的家人對(duì)我大學(xué)三年學(xué)習(xí)的默默支持;感謝我的母校安徽職業(yè)技術(shù)學(xué)院給了我我在大學(xué)三年深造的機(jī)會(huì)，讓我能繼續(xù)學(xué)習(xí)和提高;感謝生化班的老師和同學(xué)們?nèi)陙?lái)的關(guān)心和鼓勵(lì)。老師們課堂上的激情洋溢，課堂下的諄諄教誨;同學(xué)們?cè)趯W(xué)習(xí)中的認(rèn)真熱情，生活上的熱心主動(dòng)，所有這些都讓我的三年充滿了感動(dòng)。這次畢業(yè)論文設(shè)計(jì)我得到了很多老師和同學(xué)的幫助，其中我的論文指導(dǎo)老師劉磊老師對(duì)我的關(guān)心和支持尤為重要。每次遇到難題，我最先做得就是向劉磊老師尋求幫助，而劉磊老師每次不管忙或閑，總會(huì)抽空來(lái)找我面談，然后一起商量解決的辦法。

我做畢業(yè)設(shè)計(jì)的每個(gè)階段，從選題到查閱資料，論文提綱的確定，中期論文的修改，后期論文格式調(diào)整等各個(gè)環(huán)節(jié)中都給予了我悉心的指導(dǎo)。這幾個(gè)月以來(lái)，劉磊老師不僅在學(xué)業(yè)上給我以精心指導(dǎo)，同時(shí)還在思想給我以無(wú)微不至的關(guān)懷，在此謹(jǐn)向劉磊老師致以誠(chéng)摯的謝意和崇高的敬意。

同時(shí)，本片畢業(yè)論文的寫作也得到了白楊，江雙雙等同學(xué)的熱情幫助。感謝在整個(gè)畢業(yè)設(shè)計(jì)期間和我密切合作的同學(xué)，和曾經(jīng)在各個(gè)方面給予過(guò)我?guī)椭幕锇閭儯诖耍以僖淮握嬲\(chéng)地向幫助過(guò)我的老師和同學(xué)便是感謝!

參考文獻(xiàn)

［1］Amann，ＲI，Ludwig，W，Schleifer，KH．Phylogeneticidentifi-cationandinsitudetectionofindividualmicrobialcellswithoutcultivation［J］．Microbiologicalreviews，1995，59（1）：143-169． ［2］廖萬(wàn)清，吳紹熙．病原真菌生物學(xué)研究與應(yīng)用［M］．北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2006．

［3］Frank，DN，Spiegelman，GB，Davis，W，etal．Culture-inde-pendentmolecularanalysisofmicrobialconstituentsofthehealthyhumanouterear［J］．JClinMicrobiol，2003，41（1）：295-303． ［4］Zhang，E，Tanaka，T，Tajima，M，etal．Characterizationoftheskinfungalmicrobiotainpatientswithatopicdermatitisandinhealthysubjects［J］．MicrobiolImmunol，2011，55（9）：625-632． ［5］Amann，ＲI，Ludwig，W，Schleifer，KH．Phylogeneticidentifi-cationandinsitudetectionofindividualmicrobialcellswithoutcultivation［J］．MicrobiolＲev，1995，59（1）：143-169． ［6］Ｒasi，A，Naderi，Ｒ，Behzadi，AH，etal．Malasseziayeastspe-ciesisolatedfromIranianpatientswithpityriasisversicolorinaprospectivestudy［J］．Mycoses，2010，53（4）：350-355． ［7］Findley，K，Oh，J，Yang，J，etal．Topographicdiversityoffungalandbacterialcommunitiesinhumanskin［J］．Nature，2013，498（7454）：367-372．

［8］Pace，NＲ．Amolecularviewofmicrobialdiversityandthebio-sphere［J］．Science，1997，276（5313）：734-740．

［9］周桔，雷霆．土壤微生物多樣性影響因素及研究方法的現(xiàn)狀與展望［J］．生物多樣性，2007，15（3）：306-311．

［10］Pace，NＲ．Amolecularviewofmicrobialdiversityandthebio-sphere［J］．Science（NewYork，N．Y．），1997，276（5313）：734-740． ［11］PD，S，JＲ，M．Micro-eukaryoticdiversityofthehumandistal gutmicrobiotaqualitativeassessmentusingculture-dependentand-independentanalysisoffaeces［J］．ISMEJ，2008，2（12）：1183-1193． ［12］Fischer，SG，Lerman，LS．Length-independentseparationofDNArestrictionfragmentsintwo-dimensionalgelelectrophoresis［J］．Cell，1979，16（1）：191-200． ［13］Fischer，SG，Lerman，LS．DNAfragmentsdifferingbysingle base-pairsubstitutionsareseparatedindenaturinggradientgels：correspondencewithmeltingtheory［J］．PProcNatlAcadSciUSA，1983，80（6）：1579-1583．

［14］Muyzer，G，deWaal，EC，Uitterlinden，AG．Profilingofcom-plexmicrobialpopulationsbydenaturinggradientgelelectropho-resisanalysisofpolymerasechainreaction-amplifiedgenescod-ingfor16SrＲNA［J］．ApplEnvironMicrobiol，1993，59（3）：695-700．

［15］Kim，TW，Lee，J-H，Park，M-H，etal．AnalysisofBacteriaandFungalCommunitiesinJapanese-andChinese-FermentedSoybeanPastesUsingNestedPCＲ-DGGE［J］．CurrMicrobiol，2010，60（5）：315-320．

［16］Weerasekera，MM，Sissons，CH，Wong，L，etal．Useofde-naturinggradientgelelectrophoresis（DGGE）fortheidentifica-tionofmixedoralyeastsinhumansaliva［J］．JMedMicrobiol，2013，62（Pt2）：319-330．

［17］Curlevski，NJA，Xu，Z，Anderson，IC，etal．Soilfungalcom-munitiesdifferinnativemixedforestandadjacentAraucariacunninghamiiplantationsinsubtropicalAustralia［J］．J．SoilsSediments，2010，10（7）：1278-1288．

［18］Li，X-Ｒ，Ma，E-B，Yan，L-Z，etal．Bacterialandfungaldi-versityinthetraditionalChineseliquorfermentationprocess［J］．IntJFoodMicrobiol，2011，146（1）：31-37．

［19］Li，X-Ｒ，Ma，E-B，Yan，L-Z，etal．Bacterialandfungaldi-versityinthestarterproductionprocessofFenliquor，atradi-tionalChineseliquor［J］．JMicrobiol，2013，51（4）：430-438． ［20］Li，H，Takeshita，T，F(xiàn)uruta，M，etal．Molecularcharacter-izationoffungalpopulationsonthetonguedorsumofinstitution-alizedelderlyadults［J］．OralDiseases，2012，18（8）：771-777． ［21］Lepere，C，Masquelier，S，Mangot，J-F，etal．Verticalstruc-tureofsmalleukaryotesinthreelakesthatdifferbytheirtrophicstatus：aquantitativeapproach［J］．ISMEJ，2010，4（12）：1509-1519． ［22］Nicholson，MJ，McSweeney，CS，Mackie，ＲI，etal．Diversity ofanaerobicgutfungalpopulationsanalysedusingribosomalITS1sequencesinfaecesofwildanddomesticatedherbivores［J］．Anaerobe，2010，16（2）：66-73． ［23］Gao，G，Yin，D，Chen，S，etal．Effectofbiocontrolagent Pseudomonasfluorescens2P24onsoilfungalcommunityincu-cumberrhizosphereusingT-ＲFLPandDGGE［J］．PloSONE，2012，7（2）：e31806．

［24］曹鈺，陸健，方華，等．紹興黃酒麥曲中真菌多樣性的研究J］．食品科學(xué)，2008，29（3）：277-282．

［25］賀紀(jì)正，袁超磊，沈菊培，等．土壤宏基因組學(xué)研究方法與進(jìn)展［J］．土壤學(xué)報(bào)，2012，49（1）：155-164 26］Hamady，M，Walker，JJ，Harris，JK，etal．Error-correcting barcodedprimersforpyrosequencinghundredsofsamplesinmultiplex［J］．NatMethods，2008，5（3）：235-237． ［27］Delhaes，L，Monchy，S，F(xiàn)realle，E，etal．Theairwaymicro-biotaincysticfibrosis：acomplexfungalandbacterialcommu-nity-implicationsfortherapeuticmanagement［J］．PloSONE，2012，7（4）：e36313．

［28］Hoffmann，C，Dollive，S，Grunberg，S，etal．Archaeaand fungiofthehumangutmicrobiome：correlationswithdietandbacterialresidents［J］．PloSONE，2013，8（6）：e66019．

［29］Handelsman，J，Ｒondon，MＲ，Brady，SF，etal．Molecularbi-ologicalaccesstothechemistryofunknownsoilmicrobes：Anewfrontierfornaturalproducts［J］．ChemBiol，1998，5（10）：Ｒ245-Ｒ249． ［30］Karlsson，F(xiàn)H，Tremaroli，V，Nookaew，I，etal．Gutmetage-nomeinEuropeanwomenwithnormal，impairedanddiabeticglucosecontrol［J］．Nature，2013，498（7452）：99-103． ［31］Hilty，M，Qi，W，Brugger，SD，etal．Nasopharyngealmicro-biotaininfantswithacuteotitismedia［J］．JInfectDis，2012，205（7）：1048-1055．

［32］Illeghems，K，DeVuyst，L，Papalexandratou，Z，etal．Phylo-geneticAnalysisofaSpontaneousCocoaBeanFermentationMetagenomeＲevealsNewInsightsintoItsBacterialandFungalCommunityDiversity［J］．PloSONE，2012，7（5）：e38040．［33］

Cardoso，AM，Cavalcante，JJV，Cantao，ME，etal．Met-agenomicAnalysisoftheMicrobiotafromtheCropofanInvasiveSnailＲevealsaＲichＲeservoirofNovelGenes［J］．PloSONE，2012，7（11）：e48505．

第三篇：微生物實(shí)驗(yàn)教案

《微生物學(xué)》實(shí)驗(yàn)教學(xué)教案[實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目] 實(shí)驗(yàn)一 微生物學(xué)試驗(yàn)常用玻璃儀器洗滌及干熱滅菌 [教學(xué)時(shí)數(shù)]

3學(xué)時(shí) [實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求]

1．認(rèn)識(shí)微生物實(shí)驗(yàn)所需要的各種器皿，了解常用工具和儀器的名稱、用途。2．掌握對(duì)玻璃器皿的清洗、包扎方法與干熱滅菌的操作過(guò)程。[實(shí)驗(yàn)原理]

微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)要求較高的無(wú)菌狀態(tài)，因此，實(shí)驗(yàn)所用的器皿，大多數(shù)要進(jìn)行消毒、滅菌從而用以培養(yǎng)微生物，所以對(duì)其質(zhì)量、規(guī)格、洗滌和包扎方法均有一定要求。

清潔的玻璃器皿是實(shí)驗(yàn)得到正確結(jié)果的先決條件，包扎方法要能保證防止污染雜菌。

干熱滅菌的原理，空的玻璃器皿一般用干熱滅菌。干熱滅菌是利用高溫使微生物細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固性與其本身的含水量有關(guān)，在菌體受熱時(shí)，當(dāng)環(huán)境和細(xì)胞內(nèi)含水量越大，則蛋白質(zhì)凝固就越快，反之含水量越少，凝固緩慢。與濕熱滅菌相比，干熱滅菌所需溫度要高（160～170℃），時(shí)間要長(zhǎng)（1～2h），但干熱滅菌溫度不能超過(guò)180℃，否則，包器皿的紙或棉塞就會(huì)燒焦，甚至引起燃燒。[實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備]

1．培養(yǎng)皿、大試管、三角瓶6只、燒杯（500ml）2只、燒杯（1000ml）1只、小試管6只、吸管（0.2ml 2支，0.5ml 2支，1ml 2支，5ml 2支）共8支。2．去污粉、肥皂、清洗劑、毛刷。3．棉花、扎繩、包扎紙。[實(shí)驗(yàn)步驟]

（一）學(xué)習(xí)下列常用儀器的種類、規(guī)格和應(yīng)用范圍 1.培養(yǎng)皿

由一底一蓋組成一套，常用的培養(yǎng)皿皿底直徑90 mm，高15mm,皿底皿蓋均為玻璃制成。制成平板，可用于分離、純化、鑒定菌種、活菌計(jì)數(shù)以及測(cè)定抗生素、噬菌體的效價(jià)等。2.試管

(1)大試管(約18mm×180mm): 可裝倒平板用的培養(yǎng)基，可作制備斜面用（需要大量菌體時(shí)用），裝液體培養(yǎng)基用于微生物的振蕩培養(yǎng)。

(2)中試管[(13～15)mm×(100～150)mm]: 裝液體培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)菌或做斜面用，用于細(xì)菌、霉菌、病毒等的稀釋和血清學(xué)試驗(yàn)。

(3)小試管[(10～12)mm×100mm]:一般用于糖發(fā)酵或血清學(xué)試驗(yàn)，和其它需要節(jié)省材料的試驗(yàn)。3.三角瓶 規(guī)格有100mL、250mL、500mL和1000 mL用來(lái)裝無(wú)菌水、培養(yǎng)基和振蕩培養(yǎng)微生物等。4.燒杯

規(guī)格有50mL、100mL、250mL、500mL和1000mL 用來(lái)配制培養(yǎng)基與各種溶液等。5.吸管 規(guī)格有0.1mL、1mL、2mL、5mL、10mL用來(lái)量取轉(zhuǎn)移各種溶液等。6.量筒 規(guī)格有50mL、100mL、250mL、500mL。

（二）學(xué)習(xí)玻璃器皿的洗滌方法 1.新玻璃器皿的洗滌

在2%的鹽酸溶液中浸泡數(shù)小時(shí)，用自來(lái)水沖洗干凈。2.舊玻璃器皿的洗滌

（1）試管、培養(yǎng)皿、三角瓶：洗衣粉和去污粉洗刷，自來(lái)水沖洗 A 裝有固體培養(yǎng)基：刮掉，洗滌

B 帶菌的器皿：2%來(lái)蘇爾或0.25%新潔爾滅消毒液中浸泡24小時(shí)或煮沸0.5小時(shí)，然后洗滌 C 帶病原菌培養(yǎng)物的器皿：先高壓蒸汽滅菌，倒去培養(yǎng)物（2）玻璃吸管：吸管尖端與裝在水龍頭上的橡皮管連接，反復(fù)沖洗

A 吸過(guò)血液、血清、糖溶液或染料溶液等的玻璃吸管：立即投入盛有自來(lái)水的容器中浸泡，實(shí)驗(yàn)后集中沖洗。B 塞有棉花的吸管：用水將棉花沖出，然后沖洗

C 吸過(guò)含有微生物培養(yǎng)物的吸管：2%來(lái)蘇爾或0.25%新潔爾滅消毒液中浸泡24小時(shí)然后洗 D 吸管內(nèi)壁有油垢：洗滌液中浸泡數(shù)小時(shí)，再?zèng)_洗

(三)學(xué)習(xí)各種器皿的包扎

1.培養(yǎng)皿的包扎：牛皮紙或舊報(bào)紙包緊，一般以5～8套培養(yǎng)皿包成1包 2.吸管的包扎：

在上端約0.5cm處，塞入一小段1.5 cm長(zhǎng)的棉花（勿用脫脂棉），目的是避免將外界或嘴中雜菌吹入管內(nèi)，或不慎將菌液吸出管外。用4～5 cm寬的長(zhǎng)紙條卷起來(lái)3.試管和三角瓶等的包扎：用橡皮塞和牛皮紙。(四)干熱滅菌 1．裝入待滅菌物品

將包好的待滅菌物品（培養(yǎng)皿、吸管等）放入電烘箱內(nèi)，關(guān)好箱門。物品不要擺太擠，以免妨礙空氣流通；不要接觸電烘箱內(nèi)壁的鐵板，以防包裝紙烤焦起火。

2．升溫 接通電源，撥動(dòng)開(kāi)關(guān)，打開(kāi)電烘箱排氣孔，讓溫度逐漸上升。當(dāng)溫度升至100℃時(shí)，關(guān)閉排氣孔。3．恒溫 當(dāng)溫度升達(dá)到160～170℃時(shí)，恒溫調(diào)節(jié)器會(huì)自動(dòng)控制調(diào)節(jié)溫度，保持此溫度2h。干熱火菌過(guò)程。嚴(yán)防恒溫調(diào)節(jié)的自動(dòng)控制失靈而造成安全事故。

4．降溫 切斷電源、自然降溫。

5．開(kāi)箱取物 待電烘箱內(nèi)溫度降到70℃以下后，打開(kāi)箱門，取出滅菌物品。[指導(dǎo)與訓(xùn)練方案]

1.通過(guò)本次實(shí)驗(yàn)?zāi)阏J(rèn)識(shí)了微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)常用的哪些器皿？ 2.簡(jiǎn)述玻璃器皿洗滌的基本要求。3.簡(jiǎn)述干熱滅菌的操作步驟。[實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目]

實(shí)驗(yàn)二 培養(yǎng)基的制備與滅菌 [教學(xué)時(shí)數(shù)]

4學(xué)時(shí)[實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求]1．了解培養(yǎng)基的配制原理；掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟。2．了解常見(jiàn)滅菌、清毒基本原理及方法；掌握干熱天菌、高壓蒸汽滅菌及過(guò)濾除菌的操作方法。[實(shí)驗(yàn)原理]

培養(yǎng)基是人工按一定比例配制的供微生物生長(zhǎng)繁殖和合成代謝產(chǎn)物所需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的混合物。培養(yǎng)基的原材料可分為碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因素和水。根據(jù)微生物的種類和實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌囵B(yǎng)基也有不同的種類和配制 方法。

從培養(yǎng)基的組成成分可分為: 1.合成培養(yǎng)基：由各種純化學(xué)物質(zhì)按一定比例配制而成。

2.半合成培養(yǎng)基：一部分純化學(xué)物質(zhì)和一部分天然物質(zhì)配制而成。3.天然培養(yǎng)基：利用天然來(lái)源的有機(jī)物配制而成。

從培養(yǎng)基的物理狀態(tài)可分為: 1.液體培養(yǎng)基：不加凝固劑的液體狀態(tài)培養(yǎng)基。2.固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入2%左右的凝固劑的固體狀

態(tài)的培養(yǎng)基或農(nóng)副產(chǎn)品培養(yǎng)基。3.半固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入0.2—0.5%凝固劑而成的半固體狀培養(yǎng)基。

牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基。察氏一號(hào)培養(yǎng)基是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的霉菌培養(yǎng)基。

高壓蒸汽滅菌方法主要是通過(guò)升溫使蛋白質(zhì)變性從而達(dá)到殺死微生物的效果。當(dāng)蒸汽壓達(dá)到1.055kg/cm2時(shí)，鍋內(nèi)溫度可達(dá)到121℃，一般維持20min,即可殺死一切微生物的營(yíng)養(yǎng)體或芽孢，而達(dá)到滅菌目的。[實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備]

1.器材 試管、三角瓶、燒杯、量筒、玻璃棒、培養(yǎng)基、分裝器、天平、牛角匙、高壓蒸汽滅菌鍋、pH度紙、棉花、牛皮紙、記號(hào)筆、麻繩、紗布、吸管、培養(yǎng)皿、電烘箱、注射器、微孔濾膜過(guò)濾器、鑷子等。2.試劑 牛肉膏、蛋白胨、NaCl、瓊脂 [實(shí)驗(yàn)步驟] 1.稱量→溶化→調(diào)pH→過(guò)濾→分裝→加塞→包扎→滅菌→無(wú)菌檢查 2.干熱滅菌：裝入待滅菌物品→升溫→恒溫→降溫→開(kāi)箱取物

3.高壓蒸汽滅菌：加水→裝物品→加蓋→加熱→排冷空氣→加壓→恒壓→降壓回零→排汽→取物→無(wú)菌檢查 4.過(guò)濾除菌：組裝滅菌→連接→壓濾→無(wú)菌檢查→清洗滅菌 關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)1.要嚴(yán)格按配方配制。2.調(diào)pH不要過(guò)頭。

3.干熱滅菌要注意物品不要堆放過(guò)緊，注意溫度的時(shí)間控制，70oC以下放物、取物。4.高壓滅菌要注意物品不要過(guò)多，加熱后排除冷空氣，到時(shí)降壓回零取物。

5.過(guò)濾除菌要注意各部件滅菌，壓濾時(shí)，壓力要適當(dāng)，不可太猛太快，濾膜要注意清洗保存。[指導(dǎo)與訓(xùn)練方案]

1.培養(yǎng)基配好后，為什么必須立即滅菌?如何檢查滅菌后的培養(yǎng)基是無(wú)菌的? 2.在配制培養(yǎng)基的操作過(guò)程中應(yīng)注意些什么問(wèn)題?為什么? 3.培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基應(yīng)具備哪些條件?為什么? 4.培養(yǎng)基的配制原則是什么? [實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目]

實(shí)驗(yàn)三 環(huán)境和人體微生物的檢測(cè)及無(wú)菌操作技術(shù)[教學(xué)時(shí)數(shù)]3學(xué)時(shí) [實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求]

1.通過(guò)檢測(cè)環(huán)境和人體中微生物的存在，體會(huì)微生物分布的廣泛性。

2.學(xué)習(xí)無(wú)菌操作的技術(shù)，掌握利用稀釋涂布平板法從土壤中分離微生物的方法。[實(shí)驗(yàn)原理] 自然環(huán)境中和人及動(dòng)物的體表、體內(nèi)都存在大量的微生物，它們一遇到適合的條件就會(huì)大量繁殖。當(dāng)把取自不同來(lái)源的含菌樣品接種于含有生長(zhǎng)發(fā)育需要的各種營(yíng)養(yǎng)成分的固體培養(yǎng)基時(shí)，就會(huì)形成肉眼可見(jiàn)的微生物集體群落-菌落。每種微生物菌落都有其獨(dú)有的特點(diǎn)，如大小、顏色、表面干燥或濕潤(rùn)、隆起或扁平、粗糙或光滑、邊緣整齊或不整齊等。因此，可以通過(guò)平板培養(yǎng)來(lái)檢測(cè)不同環(huán)境下微生物的數(shù)量、種類和特點(diǎn)。[實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備] 1.恒溫培養(yǎng)箱、磁力攪拌器、移液槍

2.培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、察氏一號(hào)培養(yǎng)基；地面以下5-10cm的土壤； 3.酒精燈、無(wú)菌棉棒、無(wú)菌生理鹽水、涂布棒、記號(hào)筆、培養(yǎng)皿、吸管、試管、三角瓶 [實(shí)驗(yàn)步驟] 1.無(wú)菌操作技術(shù) 在酒精燈火焰旁操作，將融化并冷卻至不燙手的滅菌固體培養(yǎng)基倒入無(wú)菌的培養(yǎng)皿，倒量為容積的1/3~1/2或者覆蓋皿底5毫米左右，然后平放到桌面待其凝固即為無(wú)菌平板。

2.土樣的稀釋分離

制備土樣懸濁液：稱取土樣1g，迅速倒入盛有99ml無(wú)菌水和玻璃球的三角瓶中，置入磁力棒，攪拌10-15min，使土樣充分打散，即成10-2的土壤懸濁液。稀釋：用無(wú)菌移液管吸10-2的土壤懸液0.5mL，放入4.5mL無(wú)菌水中即為10-3稀釋液，如此重復(fù)，可依次制成10-3～10-6的稀釋液。(注意：操作時(shí)每一個(gè)稀釋度換用一支移液管，每次吸入土液后，要將移液管插入液面，吹吸3次，每次吸上的液面要高于前一次，以減少稀釋中的誤差。)3.環(huán)境及人體各部位取菌樣 4.標(biāo)記、培養(yǎng)

標(biāo)記： A-Ⅰ-1-10-5姓名

按培養(yǎng)基類別：細(xì)菌培養(yǎng)基--A，霉菌培養(yǎng)基--B 按3個(gè)大組：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、按4個(gè)中組：1-4 按樣品類別：10-

5、10-

6、口腔--a、鼻腔--b、頭發(fā)--c、空氣--d按個(gè)人標(biāo)記：姓名

培養(yǎng)：將接種的平板分別放入細(xì)菌和霉菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。霉菌保持25-27℃，3-5天；細(xì)菌35-37℃，1-2天。

[指導(dǎo)與訓(xùn)練方案]

1、無(wú)菌倒平板時(shí)注意的事項(xiàng)有哪些？

2、平板接種后為什么要倒置培養(yǎng)？

3、通過(guò)本次試驗(yàn)?zāi)銓W(xué)到了什么？有什么體會(huì)？ [實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目]

實(shí)驗(yàn)六 細(xì)菌的單染色與革蘭氏染色 [教學(xué)時(shí)數(shù)] 3學(xué)時(shí)

[實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求]

1.學(xué)習(xí)對(duì)細(xì)菌的涂片、染色和無(wú)菌操作技術(shù)。

2.了解染色原理、學(xué)習(xí)并掌握單染色和革蘭氏染色技術(shù)。[實(shí)驗(yàn)原理] 細(xì)菌的細(xì)胞小而透明，在普通的光學(xué)顯微鏡下不易識(shí)別，染色后，菌體與背景形成明顯的色差，從而能更清楚地觀察到其形態(tài)和結(jié)構(gòu)。

微生物學(xué)中常用的是單染色法和革蘭氏染色法。染色部位分芽孢、鞭毛、莢膜染色

其機(jī)理主要是由于兩類細(xì)菌的細(xì)胞壁成分和結(jié)構(gòu)不同。G+菌，肽聚糖多，脂質(zhì)少，酒精不易進(jìn)入； G-菌，肽聚糖少，脂質(zhì)多，酒精易進(jìn)入 [實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備] 1.菌種：E.coli（大腸桿菌）、B.subtilis（枯草芽孢桿菌）、玉米細(xì)菌等

2.試劑：石炭酸復(fù)紅染色液、革蘭氏染色液(草酸銨結(jié)晶紫、碘液、95%乙醇、沙黃染色液）3.其他：顯微鏡、載玻片、生理鹽水、酒精燈、接種環(huán)、吸水紙、擦鏡紙等 [實(shí)驗(yàn)步驟]

一、單染色法： 滴無(wú)菌水→ 涂片→自然干燥→ 固定→染色→水洗→干燥→鏡檢（高倍鏡、油鏡）

二、革蘭氏（Gram）染色法

1.涂片

2.初染：在做好的涂面上滴加草酸銨結(jié)晶紫染液，染1-1.5分鐘，傾去染液，流水沖洗至無(wú)紫色。3.媒染：先用新配的路哥氏碘液沖去殘水，而后用其覆蓋涂面14.脫色：除去殘水后，滴加

95%酒精進(jìn)行脫色約

分鐘，后水洗。

秒，后立即用流水沖洗。

5.復(fù)染：滴加番紅染色液，染1-1.5分鐘，水洗后用吸水紙吸干。6.鏡檢：觀察染色結(jié)果并繪圖。[指導(dǎo)與訓(xùn)練方案]

1.革蘭氏染色過(guò)程中大腸桿菌、枯草桿菌、玉米細(xì)菌、金黃葡萄球菌等分別被染成什么色，分別為革蘭氏反應(yīng)的什么菌 ？

2.涂片用的玻璃片為什么不得有油污？為什么涂片要求菌膜要均勻、薄？ 3.革蘭氏染色的原理 4.染色注意事項(xiàng)有哪些？ [實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目]

實(shí)驗(yàn)七 微生物的顯微鏡計(jì)數(shù)、大小測(cè)量和酵母菌的死活鑒別 [教學(xué)時(shí)數(shù)] 5學(xué)時(shí)

[實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求]

1.學(xué)習(xí)并掌握利用顯微鏡直接計(jì)數(shù)的基本方法。2.了解并掌握酵母菌的死活鑒別染色的原理和技術(shù) [實(shí)驗(yàn)原理] 1.兩種常用計(jì)數(shù)方法，即直接計(jì)數(shù)法（血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法）和間接計(jì)數(shù)法（平板菌落計(jì)數(shù)法）。本實(shí)驗(yàn)是利用血球計(jì)數(shù)板進(jìn)行直接計(jì)數(shù)。

2.利用血球計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下進(jìn)行計(jì)數(shù)，由于計(jì)數(shù)室的容積是一定的，所以可以根據(jù)在顯微鏡下觀察到的微生物數(shù)目來(lái)?yè)Q算成單位體積內(nèi)的微生物總數(shù)目。由于此法計(jì)得的是活菌體和死菌體的總和，故又稱為總菌計(jì)數(shù)法。3.美蘭（氧化型呈藍(lán)色，還原型呈無(wú)色），活的酵母菌具有將氧化型美蘭還原成還原型的能力，故染色后是透明的，而死的酵母菌則被染成了藍(lán)色。

計(jì)數(shù)方法：計(jì)數(shù)時(shí)，通常數(shù)五個(gè)（或四個(gè)）中方格的總菌數(shù)，然后求得每個(gè)中方格的平均值，再乘上25或16，就得出一個(gè)大方格中的總菌數(shù)，然后再換算成lml菌液中的總菌數(shù)。設(shè)被選作計(jì)數(shù)的中方格中的總菌數(shù)為A，菌液稀釋倍數(shù)為B，如果是25個(gè)中方格的計(jì)數(shù)板，則1mL菌液中的總菌數(shù)=A/5×25×104×B=50000A·B（個(gè)）如果是16個(gè)中方格的計(jì)數(shù)板，則1mL菌液中的總菌數(shù)=A/4×16×104×B=40000A·B（個(gè)）[實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備] 酵母菌懸液（市售的干酵母粉）血球計(jì)數(shù)板、蓋玻片、吸水紙顯微鏡、接種環(huán)、分類計(jì)數(shù)器 0.1%的美藍(lán)染色液 [實(shí)驗(yàn)步驟] 1 制備菌懸液、染色 用吸管吸取菌懸液（1滴）加入試管，用生理鹽水（8滴）進(jìn)行稀釋，滴加（1滴）美蘭染色液。加菌懸液樣品 將清潔干燥的血球計(jì)數(shù)板蓋上蓋玻片，再用毛細(xì)滴管將搖勻的菌懸液由蓋玻片邊緣滴一小滴，讓菌液沿縫隙靠毛細(xì)滲透作用自動(dòng)進(jìn)入計(jì)數(shù)室，用吸水紙吸去多余水液（注意一定不要有溢出和產(chǎn)生氣泡）。3 顯微鏡計(jì)數(shù) 加樣后靜止1 min，先用低倍鏡然后換成高倍鏡，計(jì)數(shù)時(shí)，對(duì)位于線上酵母菌，一般只數(shù)上方和左邊線上的，當(dāng)酵母菌芽體達(dá)到母細(xì)胞大小的二分之一時(shí)，可記作兩個(gè)細(xì)胞。計(jì)數(shù)一個(gè)樣品要從兩個(gè)計(jì)數(shù)室中計(jì)得的值來(lái)計(jì)算樣品的含菌量。清洗血球計(jì)數(shù)板 計(jì)數(shù)完畢，將計(jì)數(shù)板在水龍頭下沖洗干凈，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用電吹風(fēng)吹干。5.計(jì)算 ：利用相應(yīng)公式進(jìn)行計(jì)算（見(jiàn)前面公式或者課本公式），并將實(shí)驗(yàn)結(jié)果填入作業(yè)中的表格內(nèi)。實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

1.要正確使用顯微鏡，光線亮度要調(diào)的合適。

2.菌液制備要精準(zhǔn)，稀釋倍數(shù)要合適。如果濃度過(guò)大就再稀釋，如果過(guò)小再重做。3.計(jì)上不計(jì)下，計(jì)左不計(jì)右。出芽計(jì)一半

4.濃度稀釋標(biāo)準(zhǔn)：以每小方格內(nèi)含有5-10個(gè)酵母細(xì)胞為宜，一般稀釋10倍即可。5.計(jì)數(shù)室內(nèi)一定不要有溢出和產(chǎn)生氣泡。

6.其他微生物孢子技術(shù)與酵母菌類似，基本操作一樣。7.確保血球計(jì)數(shù)板清洗干凈。[指導(dǎo)與訓(xùn)練方案] 1.使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)時(shí)，應(yīng)注意什么？ 2.將計(jì)數(shù)結(jié)果填入表格中。

3.簡(jiǎn)單說(shuō)明酵母菌死活染色的原理。[實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目]

實(shí)驗(yàn)八 微生物細(xì)胞大小的測(cè)定 [教學(xué)時(shí)數(shù)] 3學(xué)時(shí)

[實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求]

1.了解測(cè)微尺的構(gòu)造和使用，學(xué)習(xí)并掌握測(cè)定微生物細(xì)胞大小的方法。[實(shí)驗(yàn)原理] 微生物細(xì)胞的大小的測(cè)量是在顯微鏡下用目鏡測(cè)微尺來(lái)進(jìn)行的，但由于測(cè)量的是放大后的圖像，故目鏡測(cè)微尺在不同放大倍率下每格實(shí)際代表的長(zhǎng)度也隨之變化，因此，需用物鏡測(cè)微尺來(lái)校正在不同放大倍率下目鏡測(cè)微尺每格所代表的實(shí)際長(zhǎng)度。

物鏡測(cè)微尺是中央刻有精確刻度的載玻片，一般是將1 mm等分為100格，每格長(zhǎng)0．01mm，即10 um，它不直接用于測(cè)量細(xì)胞大小，而是用于校正目鏡測(cè)微尺的每格的相對(duì)長(zhǎng)度。

[實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備] 酵母菌懸液（市售的干酵母粉）或者制作的霉菌裝片

目鏡測(cè)微尺，物鏡測(cè)微尺、顯微鏡、載玻片、蓋玻片、吸水紙、0.1%的美藍(lán)染色液 [實(shí)驗(yàn)步驟]（—）裝目鏡測(cè)微尺

（二）校正目鏡測(cè)微尺

1.將物鏡測(cè)微尺刻度面朝上放在顯微鏡載物臺(tái)上

2.先用低倍鏡觀察，將目鏡測(cè)微尺刻度與物鏡測(cè)微尺的刻度平行。使兩尺的第一條刻度線相重合，再尋找兩尺的另 10 一條重合的刻度線，分別記錄兩重合線之間物鏡測(cè)微尺和目鏡測(cè)微尺所占的格數(shù)，由公式計(jì)算出目鏡測(cè)微尺每格所代表的長(zhǎng)度。

3.用同樣的方法換成高倍鏡進(jìn)行校正，記錄并計(jì)算在每種倍率下目鏡測(cè)微尺每一格所代表的長(zhǎng)度。

（三）酵母細(xì)胞大小的測(cè)定

制備菌懸液、染色： 用吸管吸取菌懸液（1滴）加入試管，用生理鹽水（8滴）進(jìn)行稀釋，滴加（1滴）美蘭染色液。

制片： 用吸管吸取1滴上述菌懸液滴加到干凈的載玻片上，蓋上蓋玻片（注意一定不要有溢出和產(chǎn)生氣泡），將多余菌液用吸水紙吸干。

顯微鏡下觀察、測(cè)量：在不同倍率下測(cè)量菌體的長(zhǎng)度和寬度，記錄測(cè)定值，并計(jì)算出酵母的長(zhǎng)、寬值。[指導(dǎo)與訓(xùn)練方案] 1.為什么更換不同放大倍數(shù)的目鏡或物鏡時(shí)，必須用鏡臺(tái)測(cè)微尺重新對(duì)目鏡測(cè)微尺進(jìn)行校正? 2.如何校正目鏡測(cè)微尺？ ３．如何測(cè)定細(xì)菌的大小？

[實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目1]實(shí)驗(yàn)1 常用玻璃儀器包扎及干熱滅菌；培養(yǎng)基的制備（口述）與高壓蒸汽滅菌（操作-必做）1.1 培養(yǎng)皿、試管、吸管的洗滌包扎及干熱滅菌（操作-必做）1.2 培養(yǎng)基分裝到三角瓶和試管與高壓蒸汽滅菌（操作）[實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目2 實(shí)驗(yàn)2 無(wú)菌操作技術(shù)，倒平板和接種（操作-必做）1.倒平板，以清水代替；試管接試管；試管接培養(yǎng)皿 [實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目3] 實(shí)驗(yàn)3 細(xì)菌的革蘭氏染色（操作-必做）1.枯草桿菌 [實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目4] 實(shí)驗(yàn)4 微生物的顯微鏡計(jì)數(shù)（操作-必做）

酵母菌[實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目5]實(shí)驗(yàn)5 微生物細(xì)胞大小的測(cè)定（操作）會(huì)校正和測(cè)量酵母菌或真菌菌絲

第四篇：微生物實(shí)驗(yàn)總結(jié)

微生物實(shí)驗(yàn)總結(jié)

姓名:趙葉鋒班級(jí)：食品科學(xué)113學(xué)號(hào)：2011013522

大三的第二學(xué)期塊結(jié)束了，這個(gè)學(xué)期操作了四個(gè)微生物實(shí)驗(yàn)，以及一個(gè)自主設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)。通過(guò)前階段對(duì)四個(gè)實(shí)驗(yàn)的操作和認(rèn)知的基礎(chǔ)上，展開(kāi)第五個(gè)實(shí)驗(yàn)的自主設(shè)計(jì)。實(shí)驗(yàn)分別是菌落總數(shù)測(cè)定，霉菌和酵母的檢查和計(jì)數(shù)，乳酸菌的檢驗(yàn)，微生物藥敏試驗(yàn)以及探討環(huán)境因素對(duì)微生物生長(zhǎng)的影響。

這學(xué)期的微生物實(shí)驗(yàn)是在上學(xué)期微生物實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上的累積和擴(kuò)展延伸：以培養(yǎng)基的制備與滅菌，玻璃器皿的洗滌、包扎和滅菌，微生物接種技術(shù)和細(xì)菌的革蘭氏染色為技術(shù)基礎(chǔ)進(jìn)行的，以加強(qiáng)學(xué)生基礎(chǔ)理論知識(shí)和基本技能的培養(yǎng)為目的。

下面我來(lái)談?wù)勎以趯?shí)驗(yàn)中的心得體會(huì)。

第一個(gè)實(shí)驗(yàn)是菌落總數(shù)測(cè)定。讓我重新認(rèn)識(shí)了一下這個(gè)名詞：菌落形成單位，我現(xiàn)在的理解就是：1ml或者1g待測(cè)樣品中菌落的個(gè)數(shù)，一定要注意的是單位是CFU/ml或CFU/g。還有就是要掌握好對(duì)高壓蒸汽滅菌鍋的操作。實(shí)驗(yàn)之前要充分做好預(yù)習(xí)工作，以便實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行。由于是測(cè)定微生物實(shí)驗(yàn)，就要尤其小心其他雜菌的混入影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。因此要做好實(shí)驗(yàn)儀器和各種試劑的滅菌，有培養(yǎng)皿，試管，移液槍頭（裝在盒子中），按要求配置好的瓊脂培養(yǎng)基和生理鹽水，按各自要求用紗布和報(bào)紙包扎好，送入高壓蒸汽滅菌鍋進(jìn)行滅菌。玻璃儀器在包扎前要進(jìn)行清洗，并烘干，以免水分沾濕報(bào)紙。滅完菌后取出物品進(jìn)入超凈工作臺(tái)，超近工作臺(tái)的紫外燈在進(jìn)入20分鐘前開(kāi)啟，并在進(jìn)入時(shí)關(guān)閉，以免影響人體。要對(duì)臺(tái)面進(jìn)行消毒處理，用酒精擦拭。可以在等待瓊脂培養(yǎng)基冷卻到50攝氏度左右前對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行10倍系列稀釋至需要的濃度。要注意的是一定要標(biāo)記好濃度或者按順序排列在試管架上以免弄混，同一個(gè)試管里吸取樣品才能用同一個(gè)槍頭進(jìn)行移液。再進(jìn)行平板接種。待瓊脂培養(yǎng)基冷卻好后，用右手打開(kāi)紗布并將錐形瓶拿住，將瓶口靠近酒精燈再進(jìn)行滅菌，左手拿培養(yǎng)皿用大拇指和食指稍微打開(kāi)培養(yǎng)皿蓋，將瓊脂培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中心內(nèi)，不用倒很多，使瓊脂培養(yǎng)基沒(méi)過(guò)培養(yǎng)皿表面即可。培養(yǎng)皿一定是平拿在手上的，倒好后輕輕蓋上培養(yǎng)皿蓋，緩慢地平方在超凈工作臺(tái)臺(tái)面邊緣處，再推至中間。再用移液槍取1ml樣品快速打入培養(yǎng)皿中央，蓋上培養(yǎng)皿蓋，然后用手輕輕搖晃，千外不要太大力。然后貼上標(biāo)簽記號(hào)，靜置。如此依次操作下去。靜置一段時(shí)間待培養(yǎng)基凝固后倒置放入恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)一段時(shí)間再取出進(jìn)行觀察計(jì)數(shù)。

我們組的實(shí)驗(yàn)結(jié)果不甚理想，培養(yǎng)皿中的微生物都是連成一片的，或者是培養(yǎng)皿壁上也都長(zhǎng)著，主要是由于待測(cè)樣品打入培養(yǎng)皿后，搖晃不均勻或者太大力了，以至于菌液沒(méi)分散開(kāi)來(lái)或是跑到培養(yǎng)皿壁上去了。

第五個(gè)實(shí)驗(yàn)是自主設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)環(huán)境因素對(duì)微生物生長(zhǎng)的影響。選取3個(gè)環(huán)境因素物理、化學(xué)和生物因素均可進(jìn)行設(shè)計(jì)。根據(jù)前四個(gè)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)，通過(guò)小組探討和交流設(shè)計(jì)出實(shí)驗(yàn)方案。并加以驗(yàn)證。通過(guò)自主設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)可以結(jié)合小組的智慧，加強(qiáng)團(tuán)隊(duì)協(xié)作精神和創(chuàng)新思維，通過(guò)實(shí)驗(yàn)可以驗(yàn)證理論，增加感性認(rèn)識(shí)，培養(yǎng)獨(dú)立工作能力和思考能力，并使具有過(guò)硬的專業(yè)技術(shù)水平。

通過(guò)這次的實(shí)驗(yàn)，我明白了任何事情丟不是一蹴而就的，而是一個(gè)慢慢積累的過(guò)程。雖然實(shí)驗(yàn)結(jié)果不是很理想，但是我參與了過(guò)程，通過(guò)小組討論我們也分析了失敗的原因，找到了解決的方法，避免了下一次失誤。并且從中理解了團(tuán)隊(duì)討論和合作的重要性。以上即是我的全部感想。

第五篇：微生物實(shí)驗(yàn)心得體會(huì)

微生物實(shí)驗(yàn)心得

姓名：關(guān)琦琦

學(xué)號(hào)：09070401048 班級(jí)：生物科學(xué)09-2班

指導(dǎo)老師：吾爾恩 微生物實(shí)驗(yàn)心得

本學(xué)期已臨近尾聲，我們即將告別微生物實(shí)驗(yàn)這門課程，在這一學(xué)期，八個(gè)微生物實(shí)驗(yàn)中，我們學(xué)到了許多知識(shí)，這些知識(shí)將會(huì)陪伴我們一生，下面我們就來(lái)通過(guò)一些實(shí)驗(yàn)來(lái)回顧一下本學(xué)期的微生物實(shí)驗(yàn)。

我選取的實(shí)驗(yàn)是《環(huán)境因素對(duì)微生物的影響》，之所以選擇這則實(shí)驗(yàn)是因?yàn)檫@則實(shí)驗(yàn)比較簡(jiǎn)單，而且涉及面非常多。首先我們來(lái)分析一下這則實(shí)驗(yàn)所涉及到的知識(shí)面。環(huán)境對(duì)微生物生長(zhǎng)影響主要分以下幾種

溫度：通過(guò)影響蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子的結(jié)構(gòu)與功能以及細(xì)胞結(jié)構(gòu)入細(xì)胞膜的流動(dòng)性及完整性來(lái)影響微生物的生長(zhǎng)、繁殖和新陳代謝。微生物群體生長(zhǎng)、繁殖最快的溫度為其最適生長(zhǎng)溫度。

PH: H+影響菌體細(xì)胞質(zhì)膜上電荷性質(zhì)，微生物吸收物質(zhì)變化，影響代謝，高濃度H+或引起菌體表而蛋白質(zhì)和核酸水解以及影響酶和活性.滲透壓：微生物在等滲溶液中可正常生長(zhǎng)繁殖；在高滲溶液中細(xì)胞失水，生長(zhǎng)受到抑制；在低滲溶液中，細(xì)胞吸水膨脹，因?yàn)榇蠖鄶?shù)微生物具有較為堅(jiān)韌的細(xì)胞壁，細(xì)胞一般不會(huì)裂解，可以正常生長(zhǎng)，但低滲溶液中溶質(zhì)含量低，在某些情況下也會(huì)影響微生物的生長(zhǎng)。

抗生素：在自然界中普遍存在微生物間的拮抗作用，許多微生物可以產(chǎn)生抗生素，能選擇性的抑制或殺死其他微生物。

微生物的實(shí)驗(yàn)其實(shí)簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)步驟幾乎相同：制作培養(yǎng)基、倒平板、接種微生物、培養(yǎng)、觀察菌種生長(zhǎng)情況從而得出結(jié)論。本次實(shí)驗(yàn)也是這樣首先制作培養(yǎng)基，在進(jìn)行倒平板步驟時(shí)，對(duì)平板環(huán)境進(jìn)行區(qū)分，然后進(jìn)行接種。

在進(jìn)行倒平板的時(shí)候，要注意在無(wú)菌條件下進(jìn)行倒置，同時(shí)也要保持平板的厚度均勻。

在進(jìn)行菌種接種的時(shí)候，選擇合適的劃線方式，一般是選擇Z字形劃線法，注意不要把平板弄破，等到平板凝固后才可以進(jìn)行接種。接種時(shí)也要注意在無(wú)菌條件下接種。經(jīng)過(guò)培養(yǎng)后，再觀察最后得出結(jié)論。

通過(guò)一學(xué)期的實(shí)驗(yàn)，我越發(fā)的明白實(shí)驗(yàn)操作對(duì)于結(jié)果的重要性。實(shí)的基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)操作可以說(shuō)是實(shí)驗(yàn)成 功與否的關(guān)鍵部分，可是馬虎不得。對(duì)于需要團(tuán)隊(duì)合作的實(shí)驗(yàn)，個(gè)人 認(rèn)為要有強(qiáng)勢(shì)的人員搭檔，不說(shuō)是精通實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程，最少也得知道實(shí)驗(yàn)的基本操作，掌握要做實(shí)驗(yàn)的操作方法，這對(duì)于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)無(wú)疑 是與決定性作用的。對(duì)于個(gè)人的實(shí)驗(yàn)?zāi)芰ΓP(guān)鍵還是要看平時(shí)的積累，有些實(shí)驗(yàn)操作繁瑣復(fù)雜，需要極大的耐心，這些都應(yīng)該是逐漸培養(yǎng)起 來(lái)的。最后，簡(jiǎn)單談一下自己在微生物實(shí)驗(yàn)室做實(shí)驗(yàn)的心得體會(huì)。剛開(kāi)始的時(shí)候，最令我頭痛的就是培養(yǎng)基的配制、消毒滅菌，培養(yǎng)基的配制和消毒與滅菌兩個(gè)實(shí)驗(yàn)可以說(shuō)是微生物實(shí)驗(yàn)的最近本課程，內(nèi)容有配制培養(yǎng)基、分裝培養(yǎng)基、為下次試驗(yàn)準(zhǔn)備菌種及無(wú)菌器材等，內(nèi)容顯得非常繁多緊湊，需要準(zhǔn)備的器材、藥品及用具較多、較雜、較細(xì)。最后只能是提前參照微生物實(shí)驗(yàn)教材，將實(shí)驗(yàn)過(guò)程中所涉及到的藥品、器材及儀器等統(tǒng)統(tǒng)羅列出來(lái)，計(jì)算出實(shí)驗(yàn)時(shí)大小材料需用的數(shù)量，這樣，一方面可以有效避免在實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備時(shí)遺忘相關(guān)物品，另一方面也可為以后同一實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)備工作提供依據(jù)，使實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備工作逐步趨于程序化，從而在有效低實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備工作量的同時(shí)，最大限度地提高準(zhǔn)備效率。還有一點(diǎn)很重要，在科研型實(shí)驗(yàn)室里就不能不說(shuō)導(dǎo)師和師兄師姐，其實(shí)他們才是最具價(jià)值的“活文獻(xiàn)”，他們就是實(shí)驗(yàn)室里的參考文獻(xiàn)，活參考書。生物就是一門實(shí)驗(yàn)的科學(xué)，其中科研經(jīng)驗(yàn)的積累就是一個(gè)非常重要的組成部分，導(dǎo)師和師兄師姐的一句話往往可以事半功倍，大幅提高實(shí)驗(yàn)的成功率和效率。總之，為了保證實(shí)驗(yàn)過(guò)程高質(zhì)高量完成，除了實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備及實(shí)驗(yàn)過(guò) 程外，還要求實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員必須具備相應(yīng)的素質(zhì)，實(shí)驗(yàn)操作人員必須 具備較扎實(shí)的專業(yè)基礎(chǔ)、熟練的實(shí)驗(yàn)技能及高度的責(zé)任心，在工作中要善于總結(jié)，同時(shí)還要和理論課老師積極溝通，這樣才能夠真正的學(xué)好微生物實(shí)驗(yàn)這門課程。