第一篇：酵母抽提物及其在調味品中的應用解析

酵母抽提物及其在調味品中的應用

一直以來，味精作為主要的調味品之一，增加食品的鮮味，引起人們的食欲，但是味精對人體沒有直接的營養價值，并且味精的呈味作用必須依賴于鹽的存在，而我國居民每標準人日食鹽攝入量遠超世界衛生組織每人每日的建議攝鹽量。我公司自主研發的酵母抽提物食品添加劑，可滿足消費者對健康和天然的需求，將為中國乃至世界整個調味品行業提供更天然、更綠色、更安全的高品質食品增鮮劑，減少人們對味精的攝取量，對提升全球消費者的健康指數有著深遠的意義。

酵母是一種單細胞蛋白，蛋白質含量40%～50%，核酸6%～8%，富含20多種氨基酸（包括人體所必需的8種氨基酸，并且其含量接近理想蛋白質水平），多種B族維生素，豐富的酶系和多種經濟價值很高的生理活性物質。細胞壁的主要成分為葡聚糖和甘露聚糖，這些免疫多糖能夠活化巨噬細胞、嗜中性白血球等，因此能提高白細胞素、細胞分裂素和特殊抗體的含量，全面刺激機體的免疫系統。β-葡聚糖能使受傷機體的淋巴細胞產生細胞因子的能力迅速恢復正常，有效調節機體免疫機能，所以可作為保健食品的原料，開發成為功能顯著的保健食品。另外，酵母葡聚糖具有很高的粘性、持水性、乳化穩定性，在食品工業中常作為增稠劑、持水劑和乳化穩定劑。由于酵母葡聚糖在人體消化道內難以降解消耗，因此，還可以作為低熱量食品添加劑，提供脂肪樣口感，作為食品配料應用到乳制品、肉制品、焙烤食品、飲料、糖果等普通食品中，酵母葡聚糖的持水能力使其具有增稠、保濕、改善口感等功能。

自2001年以來，唐山拓普生物科技有限公司一直堅持不斷地針對啤酒鮮酵母進行研究開發。公司以啤酒鮮酵母為主要原料，采用先進的現代生物工程技術，將酵母細胞內的蛋白質，核酸進行降解、提取，生產酵母抽提物、核糖核酸、葡聚糖、甘露寡糖等相關系列產品。

公司先后被認定為“省級高新技術企業”、“唐山市生物工程研究中心”。2011年，通過與韓國的國際科技合作項目，我公司完成了高核酸和高含量細胞壁多糖啤酒酵母菌的定向篩選的關鍵技術研究。2010年參與申請1項專利“一種從啤酒廢酵母泥中回收啤酒工藝”。應用此專利技術，使用德國HITK陶瓷研究所技術開發的專用陶瓷膜元件，大大提高了產品的品質，使得我公司產品質量可以與國外進口產品相媲美。

拓普YE產品

以新鮮的啤酒酵母為原料，經自溶、分離、濃縮、干燥等工藝加工制成的酵母蛋白類產品，富含氨基酸、多肽、B族維生素、核苷酸，以及酵母多糖等生物活性物質，是一種綠色、無污染的食品調味料，提取過程中采用美拉德等生香反應，形成了肉味香氣成分，再通過調配調香制成各種不同特征的風味型抽提物。目前公司生產的產品應用在食品調味品中，主要有基礎型酵母浸粉/浸膏。同時公司可根據客戶要求，生產客戶定制的美拉德反應型YE、高I+G型YE、高核酸型YE、醬油專用型YE等酵母

第二篇：酵母抽提物生產流程

酵母提取物

前處理和自溶：

廢酵母→清水洗滌→過濾→酵母泥→加水調至含干酵母10％～15％→調pH至4．5→夾層熱保溫45℃～55℃→自溶24小時。

自溶期間每隔1小時開動攪拌2～5分鐘，攪拌有利于酶類和酵母內大分子物質充分接觸，提高單位接觸面底物的濃度，從而加快細胞內酶的反應速度。

為了加速細胞的自溶，還可添加2％～3％的氯化鈉，其對提高抽提物得率和上清液氨基氮含量有一定促進作用。

酶解：

自溶結束后，在自溶酵母液中加入0.2％復合酶，調整物料pH為7．0，在50℃條件下酶解24小時。酶解結束后，經納米對撞機在150MP～200MP下進行破碎。其作用原理是：物料形成150MP以上的高壓射流，經分流裝置被分成兩股，然后，兩股高壓射流體在一個腔體內發生對撞，產生瞬時高壓使振蕩片振蕩，形成頻率高達20000赫茲以上的超聲波，酵母細胞在對撞和超聲波的強大壓力的共同作用下發生納米級破碎。經納米對撞機處理后，用顯微鏡檢測，混合物料中大多數為空腔細胞和大量碎片，酵母細胞壁的破碎率可達97．9％，抽提物得率為91．8％。破碎液經進一步純化、濃縮后可制得淡黃色的膠木抽提物制品。

采用上述方法制得的酵母抽提物，肌苷酸（I）含量為1．27g／100g，鳥苷酸（G）含量為1．498g／100g牞（I＋G）為2．76g／100g。與日本日研公司同類產品相比，指標分別提高294．4％、626．82％、413．96％。具體工藝：廢酵母預處理【120目過篩→脫苦→調整母液濃度(10%~15%)→加促進劑（2%Nacl）→自溶（溫度50℃，pH5.2～6.0，24h）】→酶解（0.2%,pH7.0，50℃，24h）→納米對撞機破碎（150MP～200MP，循環2～4次）→加麥芽根酶解酶（70℃，3～4h）→加熱滅酶（95℃，10分鐘）→離心分離→酵母上清液濃縮→酵母抽提物產品。

以上所述啤酒酵母抽提物的提取技術，其關鍵點是將傳統的自溶、酶解方法與先進的納米破碎技術相結合，利用高壓撞擊作用破碎酵母細胞壁，從而使其內容物最大限度溶出，提高制品中氨基酸含量。

第三篇：酵母抽提物應用研究新進展

酵母抽提物應用研究新進展

酵母抽提物是以蛋白質含量豐富的食用酵母為原料，采用生物技術，將酵母細胞內的蛋白質、核酸等進行降解后精制而成的天然調味料，主要成分為多肽、氨基酸、呈味核苷酸、B族維生素及微量元素。酵母抽提物具有純天然、營養豐富、味道鮮美醇厚等優點，在食品工業中應用廣泛。

近年來，隨著人們對酵母抽提物認識的加深，酵母抽提物市場越來越大，應用范圍也越來越廣，而食品生產廠家對酵母抽提物的要求也越來越高，這大大促進了酵母抽提物在研制和應用方面的發展，出現了一些新的進展和趨勢。

首先，由于拓展國際市場和滿足國內高端市場的需要，部分酵母抽提物生產廠家已經通過調整改進生產工藝和設備，生產出淺色、溶解性好的高純度酵母抽提物。與以往的抽提物產品相比，新的高純度酵母抽提物產品在理化指標、溶解性能、加工性能等方面更加接近國際同類產品，這就為產品進入國際市場提供了保證。

其次，高I+G含量的強鮮型酵母抽提物隨著調味行業對天然、營養、健康的強烈鮮味劑的大量需求而出現并受到普遍關注。由于中國人對鮮味的偏愛，市場上銷售的各種調味品往往都會突出一個鮮字，因而各種鮮味增強劑如味精、I+G等產品都具有較大的市場。一般的酵母抽提物雖然在整體呈味上比味精強，但往往給人鮮度不夠的感覺。高I+G含量的強鮮型酵母抽提物通過在自溶過程中控制核酸的降解，使產品中呈味核苷酸（I+G）的含量增加，從而提高產品的鮮度，再加上酵母抽提物具有天然、營養的特性和良好的加工性能，大大提高了酵母抽提物在與其他鮮味劑競爭中的優勢。

再次，酵母抽提物開始向風味化方向發展。與普通酵母抽提物和香精不同，風味化酵母抽提物由于在酵母抽提物基礎上糅合了熱反應技術，且其主要原料就是酵母抽提物，因此其可以看作是酵母抽提物和香精的結合體。

第四，一些針對某些行業的專用型酵母抽提物開始出現。專用型酵母抽提物往往重點針對某一行業的特定需求和特殊加工要求，有目的地在產品中加以強化，由于對下游產品的生產過程和質量要求了解透徹，針對性很強，很容易抓住客戶的需求，得到客戶的認可。比如安琪酵母股份有限公司的雞精專用型酵母抽提物和醬油專用型酵母抽提物在推向市場后都獲得了很好的效果。

第五，咸味香精行業對酵母抽提物越來越認可，使用量也越來越多。隨著食品加工行業的迅猛發展和對香精認識的逐步加深，其對食用香精提出了更高的要求，這也對食用香精行

業的發展起到了巨大的推動作用。

第六，方便面行業開始嘗試在干脆面的面身中使用酵母抽提物。方便面行業在調料中使用酵母抽提物已經形成了一種共識，而一些廠家在其即食干脆面面身中使用酵母抽提物也獲得了滿意的效果。隨著應用技術的逐步提高，面身中使用酵母抽提物將會得到越來越多廠家的認可。

第七，焙烤食品（餅干、面包等）加工中對酵母抽提物有了新的認識。研究表明，酵母抽提物在面團中通過與面筋基質相互作用，可以改善面團的延展性、烘焙特性以及口感和結構。而酵母抽提物中所含有的海藻糖具有優異的防止淀粉老化的作用，尤其在低溫或冷凍的條件下表現更為突出。海藻糖可以抑制油脂成分中脂肪的分解，對保持食品品質起到了非常好的作用。

第八，豆瓣醬等傳統調味品行業開始接受酵母抽提物。豆瓣醬行業一般采用傳統工藝進行制作，生產周期較長，產品質量也容易出現波動。應用實驗表明，在豆瓣醬的制作過程中添加酵母抽提物后對縮短產品成熟期、提升產品風味具有較好的效果。

酵母抽提物作為一種快速發展的食品配料，其研制與應用已經越來越受到人們的關注，并在行業內廣大人員的努力下取得了很大的進步。隨著行業的發展和技術水平的提高，國內對酵母抽提物產品的研制表現出了既與國際接軌，又結合中國實際的良好趨勢。而國內食品加工業對酵母抽提物的接受程度也越來越高，并不斷在加工和應用中尋求新的結合點。在酵母抽提物廠家與廣大食品調味品企業的共同努力下，國內酵母抽提物行業和食品調味品行業必將擁有更美好的明天。

第四篇：酵母抽提物替代血漿蛋白粉在仔豬中的應用

酵母抽提物替代血漿蛋白粉在仔豬中的應用

摘要：酵母抽提物是將酵母細胞經過破壁加工獲得，其作為優質的蛋白源，在部分或全部替代血漿蛋白粉的過程中具有提高仔豬日增重，改善飼料利用效率，提高仔豬生產性能和飼料成分，并對仔豬長期健康生長有良好的作用。同時酵母抽提物作為核苷酸主要來源物質，其對仔豬腸道健康和微生物群體具有至關重要的作用，有利于促進仔豬腸道發育，并提高機體細胞免疫和體液免疫的功能。

關鍵詞： 酵母抽提物；仔豬；核苷酸；腸道發育；免疫

Application of the Yeast Extract Replacing the Sprayed Dried Plasma Protein in Piglets Abstract：Yeast extract（YE）is the yeast cells to get through the wall treatment, as a high quality protein source, in part or all of the alternative in the process of the sprayed dried plasma protein(SDPP)is raising piglets weight, improve the feed efficiency, improve the production performance of piglets and feed ingredients, and has a good effect for the growth of piglets long-term health.And yeast extract as nucleotide main source material, the piglets intestinal health and microbial community has a crucial role, promote piglets intestinal development, and improve the function of the cellular immunity and humoral immunity.Keywords: Yeast extract（YE）；Piglets；Nucleotides ；Gut development；Immunization 斷奶仔豬由于消化道和免疫系統還未健全，再加上環境和日糧的改變及斷奶應激的作用下，仔豬常出現采食量降低，疾病易感及腹瀉拉稀等斷奶綜合征,進而言之影響其健康水平和生長性能[1]。而且此階段斷奶仔豬消化器官未發育成熟，消化酶分泌水平低下，因而對營養物質消化能力弱。血漿蛋白粉作為一種傳統的優質動物源蛋白，其適口性好，含有豐富的免疫球蛋白，能有效增強仔豬被動免疫能力，改善仔豬的抗病力，降低腹瀉發生率，因而在乳仔豬日糧中應用廣泛[2]；豐艷平[3]認為，飼料中添加血漿蛋白粉能夠提高仔豬抗應激能力。但是血漿蛋白粉原料來源于豬血，其由于加工工藝和動物本身健康狀況等原因可能會導致同源性疾病的傳播，從而為養豬業帶來生物安全隱患。同時，在近來國際市場上血漿蛋白粉的價格日益增長，和國內血漿蛋白粉質檢不能保證的情況下，進一步促進了對新的優質蛋白源的尋找利用。

酵母抽提物是將酵母細胞經過破壁加工獲得的，是酵母細胞內物質的濃縮物，產品本身已不具備發酵活性。在生產過程中，酵母經過其自身所含的酶類以及外加商品酶制劑和一些助溶劑等聯合作用，將細胞內的蛋白質分解成以氨基酸、肽類為主要成分的物質，溶出酵母細胞外后經分離、濃縮和干燥等步驟精制而成[4]。它含有豐富的氨基酸、肽類、核酸及微量元素等，因而具有豐富的營養價值。研究表明，酵母抽提物作為一種優質的天然完全蛋白質，能夠促進幼齡動物的腸道發育，促進其主動免疫的建立，改善日糧適口性，提高營養物質利用率，是幼齡動物優良的蛋白質來源。

同時酵母中的核酸含量8％～10％，酵母水解后，其核酸先降解為核苷酸，然后被進一步降解為堿基、磷酸和戊糖，從而可以迅速進人“補救途徑”，減少直接補充核酸大分子的消化耗能。酵母核酸富含天然核苷酸、活性肽GSH、多種游離氨基酸和B族維生素等，能補充動物快速生長時期內源核苷酸合成的不足，加快機體腸上皮細胞、肝臟細胞和淋巴細胞等的復制、分裂增殖，提高免疫力。改善肝功能及脂質代謝，激發動物生產潛能，同時改善消化吸收、調理腸道等多種問題，減少動物消化道疾?。龠M生長發育[5]。1 酵母抽提物替代血漿蛋白對仔豬生產性能的影響

酵母抽提物作為血漿蛋白的替代物，其蛋白含量和組成與血漿蛋白相似，同時酵母抽提物含有較高的核苷酸，也為其作為優質的動物飼料原料提供基礎。在以往的研究中表明，酵母抽提物部分或全部替代血漿蛋白粉并不會降低斷奶仔豬的生產性能[5]。王學東等 [6]研究結果表明，與正常日糧相比，保育階段在日糧中添加0.3%的酵母抽提物能顯著提高仔豬的平均日增重，降低飼料系數，表現出降低仔豬腹瀉的趨勢，并且試驗中酵母抽提物還顯示出緩解仔豬免疫應激的作用。吳迪等[7]在斷奶仔豬日糧中添加酵母提取物或以不同水平替代日糧中的血漿蛋白粉，對仔豬的試驗末重、平均日增重、飼料轉化率和仔豬平均日采食量均有不同程度的改善作用。同時，車煉強等[8]研究表明飼喂含酵母抽提物的日糧可以促進仔豬生長，顯著改善仔豬飼料轉化率；酵母抽提物全部替代SDPP后，能明顯改善斷奶仔豬飼料增重比，改善斷奶仔豬生產性能。并且，大量研究結果表明，血漿蛋白粉對仔豬的作用在斷奶后1~2周最為明顯，而在之后，其對采食量的增加和促生長效應減弱[9]，而酵母抽提物則具有長期的促進仔豬的生產性能，提高飼料轉化率的作用。

同時，在以往的研究中亦表明，日糧中隨著酵母抽提物添加量的增加，特別是酵母抽提物添加量大于0.4%時，會降低仔豬的采食量的趨勢，而在生產上，通常酵母抽提物采取一半替代血漿蛋白粉的做法效果最佳。其原因可能與酵母抽提物的加工工藝和酵母種類的不同有關。酵母抽提物中余留的酵母細胞壁雖然有刺激腸道免疫、抑制有害菌的作用，但高劑量添加時也可能會影響仔豬采食量，從而影響仔豬日增重。Dritz 等（1995）研究發現，斷奶仔豬日糧中添加0.1%啤酒酵母β-葡聚糖時會降低斷奶仔豬采食量和日增重，但料肉比并不會受到影響。李軍等（2006）[10]研究還發現，仔豬日增重也與啤酒酵母β葡聚糖的添加水平呈二次性影響趨勢。因此，酵母抽提物中酵母細胞壁含量不同對仔豬生產性能的影響可能會有所不同。

盡管如此，酵母抽提物作為優質的蛋白源，其替代血漿蛋白粉有提高仔豬生產性能和飼料成分，并對仔豬長期健康生長有良好的作用。2.酵母抽提物對仔豬腸道健康的影響

酵母抽提物是重要的核酸來源物質，核苷酸參與了生命的許多代謝過程, 在細胞代謝中起很重要的作用,主要歸結為:核苷酸是細胞組成主要成分,是組成DNA和RNA單體；核苷酸衍生物是許多生物合成的活性中間物；ATP 是生物能量代謝的核心；腺苷酸是三種重要輔酶(NAD,FAD,COA)的組分；cAMP 和從cGMP 是重要的代謝調節物質；甲基供體；AMP 可調節平滑肌的收縮特性,調節血流量[11]。其在日糧添加中發揮著至關重要的作用。2.1 對微生物群落的影響

研究表明，在核苷酸降解過程中，核苷酶作用于核苷，使其釋放出糖并暴露出游離氮，而這一混合物影響了腸道內微生物的形態和生長。Tanaka 和Mutai(1980)的體外試驗表明，添加了核苷酸的培養基可以促進雙歧桿菌的生長。日糧中核苷酸有助于在腸道微生物群落增殖中，使糞便中雙歧桿菌數量占優勢，他們能將糖水解為乳酸，降低腸道PH，從而抑制腸道微生物的增殖，減少腹瀉。同時研究發現，核苷酸對腸道具有保護作用，能夠改善腸的屏障作用，維持腸壁的完整性，減少細胞的死亡率以及細菌、脂多糖引起的細菌易位，減少腹瀉的發生，加速饑餓應激和感染后損傷的腸道恢復。Mary [12]給切除80%空腸和回腸的大鼠飼喂含1%尿嘧啶的日糧，7d 后屠宰，結果發現，飼喂尿嘧啶的大鼠與對照組相比，其剩余空腸粘膜絨毛高度提高14%,隱窩深度提高18%。2.2 對腸道發育的影響

大量研究結果表明，外源核苷酸能夠加速腸細胞的分化、生長與成熟，提高動物腸粘膜DNA、蛋白含量以及麥芽糖酶、乳糖酶及蔗糖酶的活性。He 等(1993)[13]用體外培養小鼠小腸上皮細胞(IEC-6)的方式來觀察外源核苷酸對腸細胞分裂及分化的影響。在體外正常培養條件下添加核苷酸，能促進正常小鼠小腸上皮細胞(IEC-6)的增殖、分化，且當谷氨酰胺或谷氨酰胺和必需氨基酸缺乏時，添加核苷酸能促進小腸上皮細胞的增殖，提高細胞內ATP 水平。Holen 等（2004）[14]考察核苷酸對小腸上皮細胞株的增殖發育的影響，結果表明，RNA 和脫氧核苷酸dAMP、dGMP、dCMP 有促進腸細胞增殖的功能，并且可以彌補因谷氨酰氨不足和腸局部缺血帶來的影響。

核苷酸具有清除體內自由基的作用，其除了自身的堿基氮氧原子能夠捕捉機體氧化過程中形成的自由基外，與其相關物質，如嘌呤的代謝產物尿酸也是體內一些有害活性物質的有效清除劑，其清除內源自由基和抗氧化的能力最強，在生理濃度和各種pH 值條件下，具有保護紅細胞膜脂質過氧化及由過氧化損傷造成的紅細胞破裂作用。并且核苷酸具有促進小腸上皮細胞遷移，加強細胞周期素D1的表達，促進DNA合成從而達到促進仔豬腸道發育的作用[15，16]。酵母抽提物對仔豬機體免疫的影響

以往的研究表明，酵母抽提物能給予動物外源的核酸、核苷酸對于維持正常細胞免疫和體液免疫等有積極的作用[18]。在核酸營養當中，免疫系統是機體各項變化中最敏感也是最直接受影響的系統。盡管機體能夠利用小分子物質從頭合成核酸,但免疫系統必須有外源性核酸才能維持其正常機能。由于免疫系統作為機體與外界聯系的門戶, 具有“衛士”作用, 它與其他系統組織相互作用,在維持機體內穩定中起積極作用[18]。Molist F等在斷奶仔豬日糧中添加酵母衍生物試驗結果顯示，酵母衍生物提高仔豬IgG和IgM的血清結合KLH抗體，提高綿羊紅細胞凝集效價。顯示其能促進斷奶仔豬免疫系統反應更加迅速且不影響動物體生長性能,有利于仔豬克服疾病[31]。3.1 對細胞免疫的影響

核酸營養是維持正常細胞免疫的必需營養物質[19]。淋巴細胞受抗原刺激活化后會對核酸的需求增加, 然而淋巴細胞由于沒有從頭合成核酸的能力, 必須依賴攝入的核酸為其活化提供能量及前體物質, 其增殖與細胞內核苷酸庫含量增加以及細胞膜上大量核苷跨膜轉運蛋白表達相平行[20]。然而在有無核酸飲食的對比研究結果顯示, 核酸對細胞免疫具有:增加化學抗原、細菌抗原等引起的遲發型超敏反應強度；增強同種抗原誘導的淋巴細胞增生；營養不良及饑餓誘導的免疫抑制時, 補充核酸可以恢復正常的免疫功能, 而補充蛋白質則不能起到相似的效果；核酸飲食可以增強巨噬細胞的吞噬能力。無核酸飲食實驗動物的巨噬細胞超氧化物產量少于核酸飲食組的相應產量；增強金黃色葡萄球菌及白色念珠菌的抵抗力；增加自然殺傷細胞活性；增加增殖的脾淋巴細胞IL-2 產量、IL-2 受體及lyt-1 表面標志的表達；Van Buren 等認為核苷酸對免疫的影響是作用在輔助/誘導T細胞亞群上, 主要作用在抗原遞呈的最初階段和淋巴細胞增殖階段[21-26]。3.2 對體液免疫的影響

無核苷酸飲食時小鼠和人對T 細胞依賴性抗原的特異性抗體反應明顯下降,脾分泌IgM和IgG 的細胞數減少,對非T 細胞依賴性抗原的反應以及非特異性多克隆B 細胞活化無影響[27],補充RNA可專一性逆轉這種抗體細胞數的減少[28],如用核糖核酸酶處置,則無此作用[29]。多核苷酸通過與T 細胞或其他譜系細胞表面分子的相互作用調節體液免疫, 在有抗原刺激時能夠抑制非特異性T 細胞的活化, 增加Th1 克隆細胞IFN-r產量、抑制Th1 克隆細胞介導的抗體產生和減少Th2 克隆細胞IL-5 產量, 但并不改變Th2 克隆細胞介導的抗體產生, 這些作用呈現劑量依賴性[30]。腸道相關淋巴組織能夠引發和調節T 細胞發育, 起胸腺類似物作用, 核酸對外周免疫的作用可能部分通過腸相關淋巴組織介導, 但機制不清[29]。目前對老齡鼠作用的研究涉及很少, 僅見Ameho 等通過低蛋白飲食造成的早老小鼠模型實驗, 發現核酸營養可恢復其正常免疫功能。日糧核苷酸能夠提高抗體水平,增加輔助性T 細胞的數目,有助于由于核苷酸缺乏引起的IgM、IgG分泌細胞數目的恢復。4.小結

酵母抽提物作為一種優質的天然完全蛋白質，在部分或全部替代血漿蛋白粉情況下能夠促進幼齡動物的腸道發育，促進其主動免疫的建立，改善日糧適口性，提高營養物質利用率，是仔豬優良的蛋白質來源。同時酵母抽提物作為核苷酸主要來源物質，其對仔豬腸道健康和發育以及微生物群體具有至關重要的作用，同時具有提高細胞免疫和體液免疫功能。參考文獻

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第五篇：轉化方法和酵母質粒抽提

酵母轉化（快速）

侯昕

1、挑單菌落于3ml 2XYPAD培養基中，30°C 200rpm培養至菌濃度為2X108 cell/ml。（約18h）。

2、用1.5ml離心管收集菌液兩次，每次1ml，13500rpm，常溫離心30秒。3、4、2mg/ml carrier DNA變性，100°C 5分鐘，置冰上備用。在菌中依次加入

50％PEG3350

240ul

1M LiAc

34ul 2mg/ml S.S.carrier DNA

50ul plasmid DNA(各1ug)

36ul 每加入一種后，要吸打混勻。5、6、42°C水浴1－3小時。

13500rpm離心1分鐘，吸棄上清。沉淀中加500ul水，吸打均勻，100ul涂皿。

7、30°C培養兩天

此方法可用于已知蛋白互做檢測，將兩個質粒共轉化。

2×YPAD：Yeast Extract

16g

2mg/ml carrier DNA：

Peptone

32g

鮭魚精DNA（Sima D1626）

Glucose

32g

溶于水，低溫放置過夜，滅

Adenine hemisulfate

80mg

菌后－20°C保存。

d2 H2O

800ml 酵母轉化（高效）

侯昕

1、挑酵母單菌落于100ml SC液體培養基中，30°C，200rpm搖至菌濃度為2X107 cell/ml（稀釋20倍，OD545或OD600為0.1）?！蛱艚湍竼尉溆?0ml 2XYPAD液體培養基中，30°C，200rpm搖至菌濃度為2X108cell/ml（稀釋200倍，OD545或OD600為0.1）。

2、用兩個50ml離心管分別收集40ml菌液，3000g，常溫離心5分鐘。

3、將菌分別轉入兩瓶150ml 2XYPAD培養基中，擴大培養至菌濃度為2X107cell/ml。

4、用500ml離心管收集300ml菌液，3000g，5分鐘。用 200mlddH2O洗兩次，將菌轉入一個50ml離心管。

5、2mg/ml carrier DNA變性，100°C 5分鐘，置冰上備用。

6、配Mixture：

50％PEG3350

14.4Mml

1M LiAc

2.16ml 2mg/ml S.S.carrier DNA

3ml plasmid DNA＋ddH2O

2.04ml

7、把Mixture加入菌沉淀中，吸打均勻。

8、42°C水域熱激45分鐘；每5分鐘搖一下，使其受熱均勻。

9、3000g，離心5分鐘，棄上清，菌沉淀中加40ml水，吸打均勻，涂皿，100－200u/皿。

此方法可用于酵母雙雜交文庫篩選，建議分步轉化。

酵母質粒抽提

侯昕

1、收集菌液，10000g，離心10秒。

2、菌沉淀中加200ul YLS，牙簽打散。

3、加200ul 苯酚氯仿異戊醇（25：24：1），搖5分鐘，13000rpm，離心5分鐘。

4、將上層轉入一新離心管中，重復3。

5、將上層轉入一新離心管中，加20ul 3M NaOAc（pH5.2）、500ul乙醇，搖勻，10000g，4°C離心10－30分鐘。

6、750ul 75％乙醇洗，10000g，離心5－10分鐘。

7、重復6。

8、吹干，加10－20ul 水或TE。

此方法得到的質?？捎糜陔娹D大腸桿菌

Yeast lysis solution（YLS）：

2％（v/v）

Triton X－100

1％（w/v）

SDS 100mM

NaCl 1mM

EDTA