第一篇：實驗五 植物細胞骨架的光學顯微鏡觀察

實驗五 植物細胞骨架的光學顯微鏡觀察

一、實驗目的：

掌握植物細胞骨架處理及染色方法。

二、實驗原理：

用適當濃度的TritonX-100處理時，可將細胞內蛋白質破壞，但細胞骨架系統的蛋白質卻被保存，后者用考馬斯亮藍R250染色，可在光學顯微鏡下觀察到細胞骨架的網狀結構。

三、實驗試劑：

1、M-緩沖液；

2、pH6.8磷酸緩沖液； 3、1% TritonX-100，用M-緩沖液配制； 4、0.2%考馬斯亮蘭R250； 5、3%戊二醛，用pH6.8磷酸緩沖液配制；

四、實驗步驟：

1、撕取洋蔥鱗莖內表皮細胞約1cm2大小若干片，置于裝有pH6.8磷酸緩沖液的培養皿中使其下沉(約1-2min)；

2、吸去pH6.8磷酸緩沖液，用1% TritonX-100處理30min；

3、吸去1% TritonX-100，用M-緩沖液洗三次，每次5min； 4、3%戊二醛固定30min；

5、pH6.8磷酸緩沖液洗三次，每次5min； 6、0.2%考馬斯亮藍R250染色10min；

7、用蒸餾水洗1-2次，將內表皮細胞平鋪于載玻片上，加蓋玻片，于顯微鏡下觀察。

五、實驗結果：

在光學顯微鏡下，可以清晰的看到細胞骨架呈淡藍色。

六、分析與討論：

1、洋蔥表皮細胞中，質膜下，核周，胞質中的細胞骨架的分布有無不同？ 答: 核周細胞骨架分布緊密，向外基質出延伸時明顯變得稀疏，質膜下維持細胞的外部形態。因此顯微鏡下看到的細胞骨架形態基本與細胞形態相似。胞質中細胞骨架呈現纖維狀向質膜發射，質膜處的細胞骨架圍成細胞固有形態。

2、為什么試驗中所看到的洋蔥表皮細胞中細胞骨架有的成纖維狀，有的成串球狀？

答: 細胞骨架有運輸細胞內物質的作用，細胞內物質沿著細胞骨架的通路進行運輸，因此細胞骨架成串珠狀可能是由于被運輸物質停留在纖維的某一位置上使纖維狀的細胞骨架成串珠狀。

第二篇：實驗三 植物細胞骨架的光學顯微鏡觀察

實驗三 植物細胞骨架的光學顯微鏡觀察

一、實驗目的

了解細胞骨架的結構特征及其制備技術。

二、實驗器具及試劑 1．器具

普通光學顯微鏡、50ml燒杯、玻璃滴管、容量瓶、試劑瓶、載玻片、蓋玻片、鑷子、小剪刀、吸水紙、擦鏡紙。2．試劑

M-緩沖液：咪唑、KCL、MGCL2、EGTA【乙二醇雙醚四乙酸】、EDTA、疏基乙醇或DTT(二硫蘇糖醇)；（PH6.8）磷酸緩沖液（用NaHCO3調PH值）；Triton X-100，用M-緩沖液配制；考馬斯亮藍R250,其溶劑為：甲醇46.5ml、冰醋酸7ml、蒸餾水46.5ml；戍二醛、乙醇、叔丁醇、正丁醇、二甲苯、中性樹膠等。3.實驗材料 洋蔥鱗莖

三、實驗內容

細胞骨架事由蛋白質絲組成的復雜網狀結構，根據其組成成分和形態結構可分為微管、微絲和中間纖維。它們對細胞形態的維持，細胞的生長、運動、分裂、分化，物質運輸，能量轉換，信息傳遞，基因表達等起到重要作用。當用適當濃度的Triton X-100處理細胞時，可經細胞質膜中和細胞質中的蛋白質和全部脂質被溶解抽提，但細胞骨架系統的蛋白質不受破壞而被保存，經用戊二醛固定，考馬斯亮藍R250染色后，可在光學顯微鏡下觀察到由微絲組成的微絲束為網狀結構，就是細胞骨架。

（一）溶液配制（1）M-緩沖液配制：

M-緩沖液(10×原液)：咪唑34.04g，氯化鎂(MgCl2?6H2O)1.02g，EGTA（乙二醇雙醚四乙酸）3.8g，EDTA(乙二胺四乙酸)0.29g，巰基乙醇0.78g(0.7ml)蒸餾水加至1 000 ml。使用時，取100 ml(10×原液)加900 ml蒸餾水。（2）6mmol/L（PH6.5）磷酸緩沖液配制： 甲液：NaH2PO4?2H2O，0.938g 溶于蒸餾水中，最后稀釋至1 000ml。乙液：Na2HPO4 ?12H2O，2.15g加蒸餾水溶解，最后加水至1 000ml。取甲液685ml，乙液315ml加蒸餾水1000ml即成6mmol/LPH6.5的磷酸緩沖液。

（3）1%Triton X-100，用M-緩沖液配制： 取22ml Triton X-100液加M-緩沖液至200ml。（4）0.2%考馬斯亮藍R250：

考馬斯亮藍R250為0.2g，甲醇46.5ml、冰醋酸7ml、蒸餾水46.5ml（5）3%戍二醛，用磷酸緩沖液配制。

（二）實驗方法與步驟

（1）撕取洋蔥鱗莖內表皮（約1cm2大小若干片）置于裝有PH6.8磷酸緩沖液的50ml燒杯中，使其下沉。

（2）吸去磷酸緩沖液，用1% Triton X-100處理20~30min。（3）吸去Triton X-100，用M-緩沖液洗3次，每次10min。（4）3%戊二醛固定0.5~1h。

（5）PH6.5磷酸緩沖液洗三次，每次10min。（6）0.2%考馬斯亮藍R250染色20~30min。

（7）用蒸餾水洗1~2次，細胞置于載破片上，加蓋玻片，于普通光學顯微鏡下觀察。

（8）如觀察效果好，可制作成永久切片。

在有樣品的50ml燒杯中，順序通過如下藥物：50%乙醇、70%乙醇、95%乙醇、1/2V95%乙醇+1/2V叔丁醇、叔丁醇（每級5-10min）；或正丁醇、正丁醇、二甲苯、二甲苯（每級5-10min），然后撈取樣品，平展于載玻片上，經鏡檢，效果好的，可加一滴中性樹膠，蓋上蓋玻片，即成永久片。

四、實驗報告

1．繪出植物細胞骨架微絲結構圖。

2．分析在光學顯微鏡下觀察到的細胞骨架的形態特征。

第三篇：實驗三 細胞骨架的光學顯微鏡觀察

實驗三

細胞骨架的光學顯微鏡觀察

一、實驗目的

掌握植物細胞骨架的光鏡標本制作方法。

細胞骨架是指細胞質中縱橫交錯的纖維網絡結構，按組成成分和形態結構的不同可分為微管、微絲和中間纖維。它們對細胞形態的維持、細胞的生長、運動、分裂、分化和物質運輸等起重要作用。光學顯微鏡下細胞骨架的形態學觀察多用1% Triton X-100處理細胞，可使細胞膜溶解，而細胞骨架系統的蛋白質被保存，再用考馬斯亮蘭R250染色，使得胞質中細胞骨架得以清晰顯現。

二、材料、試劑和儀器

1． 材料

新鮮洋蔥鱗莖、人口腔上皮細胞

2． 試劑

1）M緩沖液（pH 7.2）各成分終濃度為：

50mmol/L咪唑(MW:68.08)，50mmol/L KCl(MW:74.55)，0.5mmol/L MgCl2?6H2O(MW:203.30)，1mmol/L EGTA(MW:380.36)，0.1mmol/L EDTA-Na2(MW:372.24)，1mmol/L DTT(MW:154.3)

2）6mmol/L PBS磷酸緩沖液（pH 6.5）:

KH2PO4 : Na2HPO4?2H2O = 7:3(見附錄3 查磷酸緩沖液的配置)

3）0.7% NaCl生理鹽水

4）1% Triton X-100(聚乙二醇辛基苯基醚)溶于 M-緩沖液

5）3% 戊二醛100mL: 25% 戊二醛取12mL ,PBS 88mL

6）0.2% 考馬斯亮藍R250染液 200mL:

考馬斯亮藍R250 0.2g，甲醇 46.5mL，冰乙酸 7mL，蒸餾水46.5 mL

3．儀器

光學顯微鏡，鑷子，剪刀，試管，表面皿，滴管，載玻片，蓋玻片,滅菌牙簽，1.5mL離心管，1mL吸頭，1mL取液器，酒精燈，染色缸 細胞骨架動畫

三、實驗程序

四、結果與分析

洋蔥鱗莖外層與內層的表皮細胞比較（放大倍數10×20）

五、思考題

1．光鏡下觀察到的細胞骨架有何形態特征？

2．對實驗成功或失敗的原因進行討論。

實驗中的注意事項和關鍵步驟

第四篇：實驗二、植物細胞骨架的觀察

實驗

二、植物細胞骨架的觀察

一、實驗目的

觀察植物細胞內網狀的骨架結構。

二、實驗原理

在真核細胞的細胞質中，存在著由蛋白質纖維構成的網狀骨架系統。Triton X-100是非離子去垢劑，用適當濃度的Triton X-100處理細胞，可將細胞的膜成分抽提掉，由于失去膜的保護和維系作用，細胞內其他可溶性成分也隨之流失，這樣一來水不溶性的細胞骨架系統蛋白質卻被保留下來，而這被保留下來的蛋白質用考馬斯亮藍R250染色，便可在光學顯微鏡下觀察它們——細胞骨架的網狀結構。為了更好地觀察微絲束的結構，采用了戊二醛對細胞進行固定。戊二醛是一種雙交聯劑，滲透快，交聯能力強，對蛋白質的固定效果好，且不破壞細胞骨架的結構。M-緩沖液洗滌細胞,可以提高細胞骨架的穩定性。M－緩沖液和磷酸緩沖液作用都是維持細胞的滲透壓

三、實驗用品

顯微鏡、50ml燒杯、蓋玻片、載玻片、濾紙、M-緩沖液、磷酸緩沖液（PBS）、1% Triton X-100、0.2%考馬斯亮藍R250、3%戊二醛、洋蔥鱗莖。

四、實驗方法與步驟

1、撕取洋蔥鱗莖內表皮若干片，大小約1平方厘米，置于裝有PH6.8的磷酸緩沖液（PBS）的50ml燒杯中，使其下沉。

2、用濾紙吸去磷酸緩沖液（PBS），用1% Triton X-100處理20-30分鐘。

3、吸去Triton X-100，用M-緩沖液洗3次，每次10分鐘。

4、用3%戊二醛固定10-15分鐘。

5、用磷酸緩沖液（PBS）洗3次，用濾紙吸干。

6、用0.2%考馬斯亮藍R250染色20-30分鐘。

7、用蒸餾水洗1-2次，將洋蔥細胞置于載玻片上，加上蓋片。

8、在光學顯微鏡下鏡檢。

五、作業

寫出你的實驗結果并繪成圖。

附：藥品配置

1、M—緩沖液（10×原液）

咪唑（50m mol）34.04g MgCl.6H2O 1.02g EGTA（1m mol）3.80g EDTA（0.1m mol）0.29g 巰基乙醇 0.78（0.7ml）蒸餾水 加至1000ml 用時稀釋，取50ml（10×原液）加450ml蒸餾水。

2、磷酸緩沖液（PBS）

配方①：

NaCl 8.0g Na2HPO4.2H2O 1.42g KCl 0.20g KH2PO4 0.20g MgCl2.6H2O 0.10g CaCl2（無水）0.10g 0.5%酚紅 4ml 雙蒸水 加至100ml 用 5%NaHCO3調PH值至6.8。也可先配成10被濃縮液，使用時再稀釋。配方②：

6m mol/L PH6.5磷酸鹽緩沖液

A液：NaH2PO4.2H2O 938mg/1000ml B液：Na2HPO4.12H2O 2150mg/1000ml 取A液68.5ml，B液31.5ml，加蒸餾水100ml即為工作液。加入0.5%酚紅4ml。3、1% Triton X-100 用M-緩沖液配制。

取1mlTriton X-100液加M-緩沖液至100ml。4、0.2%考馬斯亮藍R250配制

考馬斯亮藍R250 0.2g 甲醇 46.5ml 冰醋酸 7ml 蒸餾水 46.5ml 5、3%戊二醛的配制

用磷酸緩沖液（PBS）配制。取3ml戊二醛加PH7.0、（1/15）磷酸鹽緩沖液至100ml。

第五篇：植物細胞骨架的觀察

實驗六 植物細胞骨架的光學顯微鏡觀察

一、實驗目的：掌握植物細胞骨架處理及染色方法。

二、實驗原理：用適當濃度的TritonX-100處理時，可將細胞內蛋白質破壞，但細胞骨架系統的蛋白質卻被保存，后者用考馬斯亮蘭R250染色，可在光學顯微鏡下觀察到細胞骨架的網狀結構。

三、實驗試劑：

1、M-緩沖液；

2、pH6.8磷酸緩沖液； 3、1% TritonX-100，用M-緩沖液配制； 4、0.2%考馬斯亮蘭R250； 5、3%戊二醛，用pH6.8磷酸緩沖液；

四、實驗步驟：

1、撕取洋蔥鱗莖內表皮細胞（約1cm2大小若干片）置于裝有pH6.8磷酸緩沖液的50ml燒杯中，使其下沉；

2、吸去pH6.8磷酸緩沖液，用1% TritonX-100處理20min；

3、吸去1% TritonX-100，用M-緩沖液洗三次，每次8min；

4、3%戊二醛固定30min；

5、pH6.8磷酸緩沖液洗三次，每次8min；

6、0.2%考馬斯亮蘭R250染色20min；

7、用蒸餾水洗1-2次，將內表皮細胞平鋪子載玻片上，加蓋玻片，于顯微鏡下觀察。

五、實驗作業：

1、繪制你所觀察到的植物細胞骨架圖象；

2、戊二醛、考馬斯亮蘭R250、TritonX-100是什么？在本實驗中各起什么作用？