第一篇：艾滋病的實驗室診斷方法

科研方法學

班級：2008級研3班 學號：2008128 姓名：段治華 艾滋病的實驗室診斷方法

段治華

（山西醫科大學，太原030001）

摘要:艾滋病是由人類免疫缺陷病毒感染引起的傳染病，實驗室檢測是診斷艾滋病的主要手段，檢測項目包括HIV抗原和抗體檢測，病毒載量檢測，CD4T淋巴細胞檢測，HIV耐藥性檢測，基因芯片技術的運用，病毒分離等。近年來，基于分子生物學和免疫學方法的發展，HIV的實驗室檢測有了較大的進步，為艾滋病的準確診斷提供可靠的方法。

關鍵詞:艾滋病 HIV 實驗室診斷

艾滋病是獲得性免疫缺陷綜合征(Acquired Immunodeficiency Syndrome，AIDS)的英文音譯，由人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)感染引起的以免疫功能缺陷為主要特點的傳染病[1]。目前在我國，艾滋病的流行已進入快速增長期，要有效地預防和控制艾滋病的流行，必須有可靠的診斷方法快速準確地診斷艾滋病。目前，艾滋病的診斷主要依靠實驗室檢測方法，近年來，基于分子生物學和免疫學方法的發展，HIV的實驗室檢測有了較大的進步。現簡單敘述目前采用的實驗室診斷HIV的方法。HIV結構特點

人類免疫缺陷病毒（HIV）外型呈球形或卵形，直徑90～130nm，病毒特有的蛋白質附著于一薄層類脂質構成其包膜。核心含有兩條相同拷貝的RNA 鏈，外周核膜由多種蛋白質形成。HIV屬逆轉錄病毒，基因組中存在三個大的開放讀框，其順序是gag-pol-env。Gag基因編碼55KD的前體蛋白，在病毒成熟過程中，被pol基因編碼的蛋白酶加工，分別產生核心蛋白P17、核殼蛋白P24和核酸結合蛋白P15。P24是核殼組成蛋白，構成病毒的核衣殼，它的結構比較穩定，是HIV-1型的特異性蛋白。在HIV-2與P24對應的是主要核心抗原P32，為HIV-2型病毒感染的特異標志。Env編碼包膜蛋白，由外膜糖蛋白gp120和跨膜糖蛋白 1 gp41組成(在HIV-2型病毒中與之相當的是gp110/ 130和gp36)[1]。HIV抗原檢測

檢測P24抗原可作為早期特異性診斷，因為在HIV感染的早期，血中未出現HIV抗體，血P24抗原常以低水平出現，但是該抗原檢出率遠比HIV 抗體為低，因為HIV 抗原出現不久即可產生抗體，抗原抗體以復合物形式存在，而游離很少。在感染后期，抗原再度升高，可作為HIV活動性感染的標志。P24抗原檢測方法有酶聯免疫吸附試驗(ELISA)、放射免疫(RIA)、免疫熒光技術(IFA)、免疫吸附電鏡(ISEM)等，其中ELISA操作簡單、經濟、省時高效的實驗方法，具有良好的敏感度和特異度 [2]。HIV抗原檢測的靈敏度約50% ～ 80%，所以該結果只能作為HIV 感染的輔助診斷依據[3]。HIV抗體檢測

3.1 酶聯免疫吸附試驗（ELISA）ELISA為HIV抗體初篩最常用的篩檢方法，其試劑已經發展到第4代[3]。

3.2 凝膠顆粒凝集試驗（PA）此法快速、簡便，適合對少量標本的檢測，但是靈敏度和準確性不如ELISA法[1]。

3.3 金標快速反應試驗 將顆粒凝聚法的簡便性和酶免疫測定(EIA)技術相結合，用于快速檢測抗-HIV，特異性較好，試劑穩定，檢測時不需要任何設備，快速簡便，適用于應急檢測以及邊遠地區檢測[1]。

3.4 尿液HIV抗體檢測 尿液檢測已成為艾滋病檢測的一種全新手段，在安全、便捷等方面更具優勢。HIV感染者的尿液、唾液、精液及淚液中均含有HIV抗體，其HIV抗體主要成分為IgG[3]。

3.5 免疫斑點印跡試驗（western blot，WB）此法被稱為抗-HIV檢測的“金標準”。是將HIV病毒蛋白通過十二烷基磺酸鈉—聚丙烯酰胺凝膠電泳把分子量大小不等的蛋白帶分離開來,再把這些已經分離的不同蛋白轉移到醋酸纖維素膜上,再將此膜切割成條狀，每一條醋酸纖維素薄膜上均含有經電泳分離過的HIV病毒抗原。待檢血清樣本用稀釋液稀釋成1∶100，把它直接加到醋酸纖維素膜上，恒溫振蕩，使其充分接觸反應。血清中若含有抗-HIV，就會與膜條上的抗原結合，沖洗除去多余的抗體，再加入抗人-IgG酶結合物并孵育，經洗滌后加入底物，有反應的抗原抗體結合帶呈現紫褐色，根據出現條帶情況判定結果[1]。3.6免疫熒光 將HIV感染的細胞作為抗原固定在玻片上，滴加待檢血清，若含有HIV抗體，則與細胞膜上的病毒抗原結合，清洗后加熒光標記的抗人IgG，細胞膜染色為HIV抗體陽性。此法操作簡便，敏感性及特異性均較ELISA法高，但存在對某些血清非特異性熒光難以去除，結果判斷需較高級的熒光顯微鏡等缺點[3]。

3.7放射免疫沉淀試驗 用同位素標記的HIV蛋白與待檢血清反應，若血清中含有HIV抗體即可與HIV蛋白抗原結合，再加入葡萄球菌蛋白A，經低速離心，然后將沉淀復合物分離后電泳，放射自顯影觀察同位素標記蛋白帶即可判定。本法靈敏度和特異度均好，但因試劑制備復雜，成本高，且同位素操作需要嚴格防護而限制其應用[3]。HIV 病毒載量檢測

HIV病毒載量是指體內病毒復制的數量，一般以血清HIV-RNA表示，隨著生物技術的發展，HIV病毒載量檢測得到人們越來越多的重視，它可以直接檢測HIV-RNA，可在發現血清學變化之前檢測HIV感染，而且比P24抗原檢測方法更靈敏，主要以RNA的拷貝數表示。檢測方法有聚合酶鏈反應檢測法，分枝DNA信號擴增檢測法，核酸序列擴增實驗。

[1]5 CD4T淋巴細胞計數

CD4T淋巴細胞是人體免疫系統最重要的細胞之一，HIV主要侵犯CD4T淋巴細胞，導致其數量減少和功能缺陷，使機體免疫功能低下，導致各種機會感染和腫瘤。CD4T淋巴細胞計數是AIDS診斷、疾病分期、制定抗病毒治療和預防機會性感染方案的實驗室標準指標。目前對CD4T淋巴細胞計數有手工操作法和自動檢測法。流式細胞儀是目前最好的自動檢測方法[1]。HIV耐藥性檢測

耐藥性是指病毒對某種藥物敏感性降低,藥物抑制50%或90%病毒生長的濃度上升幾倍或幾十倍[4]。

6.1 基因型檢測 原理為利用RT-PCR技術對HIV-1 病毒的POL基因區(蛋白酶區和逆轉錄酶區)序列進行反轉錄擴增(手工或自動儀器方法)，通過基因測序技術獲得序列信息，與全球HIV耐藥基因數據對比分析耐藥位點，得出耐藥結果。3 這種檢測方法歷時較短、費用較低，技術也相對容易[5]。

6.2 表型耐藥檢測 就是利用體外藥敏分析方法，在逐漸增加的藥物濃度下對HIV-1復制能力進行直接的評價。其結果以50%抑制濃度來表達(IC50)，并與野生株的IC50或臨界值(cut-off值)相比，通過其倍數改變(fold change)來評估其耐藥程度[4]。該試驗耗時且價格昂貴、技術要求高[5]。基因芯片技術

HIV基因芯片技術是把PCR技術和核酸分子雜交技術完美結合。是在厘米見方的固相載體上，將基因以微點陣的形式排列，應用核酸雜交的原理來檢測未知基因，具有操作簡單、自動化程度高、檢測靶分子種類多、成本低、結果客觀性強等特點[1]。病毒分離培養

人體感染病毒后，便會終生攜帶。HIV廣泛存在于人體的淋巴細胞、單核細胞、巨噬細胞、組織、血液和其他體液中，從這些材料中分離培養HIV，可用于HIV感染的輔助診斷，以及研究HIV在人群中的分布、變異和耐藥情況。HIV病毒分離需要在P3級生物安全實驗室進行，實驗條件要求高[1]。

總之，對HIV檢測方法分析將有助于HIV的早期診斷，避免漏檢，也有助于對治療艾滋病藥物的療效評價、預測和監測疾病進程，提高檢測的靈敏性，從而縮短檢測的窗口期。隨著對人類HIV/AIDS 研究的深入以及其他生物技術的發展，為HIV的檢測提供更快更可靠的方法，為診斷和治療艾滋病提供技術支持。

[參考文獻] [1] 潘云.AIDS的實驗診斷[J],右江民族醫學院學報,2007,1:110-111.[2] 熊祝嘉.ELISA檢測p24抗原用于診斷HIV感染的研究現狀[J],實用醫技雜志,2007,14(2):116-117.[3] 白浪,雷秉鈞.HIV/AIDS實驗室檢測及其研究進展[J],中國循證醫學雜志,2008,8(3):206-209.[4] 魯俊鋒,李玨,李敬云,吳昊.HIV的表型耐藥及檢測方法的研究進展[J],中國病原生物學雜志,2008,3(1):65-66.[5] 康來儀.HIV/AIDS目前實驗診斷方法及其價值[J], 診斷學理論與實踐,2007,6(3):187.

第二篇：《梅毒實驗室診斷方法》

梅毒實驗室診斷

梅毒的實驗室診斷方法主要有顯微鏡檢查法和血清學檢測法。

一、顯微鏡檢查法

（一）暗視野顯微鏡檢查

【基本原理】

梅毒硬下疳、扁平濕疣、黏膜斑等皮損的滲出液涂片，以及淋巴結穿刺液涂片等，在暗視野顯微鏡下，光線從聚光器的邊緣斜射到涂片上的梅毒螺旋體而發出亮光，從而可根據其特殊形態和運動方式進行檢測。

【儀器材料】

1．暗視野顯微鏡。

2．鈍刀（刮勺）、載玻片、蓋玻片、注射器具、無菌生理鹽水。

【標本采集】

1．皮膚黏膜組織液：無菌生理鹽水浸濕的棉拭子擦去皮損表面的污物，鈍刀輕刮、擠壓皮損表層，取滲出液與預先滴加在載玻片上的生理鹽水混合后加蓋玻片鏡檢。

2．淋巴液：無菌操作下穿刺淋巴結，注入生理鹽水并反復抽吸2～3次，取少量的淋巴液直接滴于載玻片上，加蓋玻片鏡檢。

【操作步驟】

1．加鏡油：在暗視野顯微鏡的聚光器上滴加鏡油。

2．聚光：將標本玻片置載物臺上，上升聚光器使鏡油接觸載玻片底面。

3．鏡檢：在鏡下觀察，尋找有特征形態和運動方式的梅毒螺旋體。

【結果判讀】

XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX、告XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX梅毒螺旋體在暗視野顯微鏡鏡下表現為纖細、白色、有折光的螺旋狀微生物，長5～20mm，直徑小于0.2mm，有6～12個螺旋，具有旋轉、蛇行及伸縮等三種特征性的運動方式。暗視野顯微鏡下發現有上述特征的螺旋體為陽性結果。

【結果報告】

1．陽性：見到上述特征的梅毒螺旋體。

2．陰性：未見到上述特征的梅毒螺旋體。

【臨床意義】

1．暗視野顯微鏡檢查陽性,可確診梅毒。

2．螺旋體檢查是診斷早期現癥梅毒的最好方法，世界衛生組織指定為性病實驗室必備項目之一。

3．如未見到梅毒螺旋體，并不能排除患梅毒的可能性，應復查和血清學檢查。

【注意事項】

1.取材時盡量避免出血，以免影響鏡下觀察。

2.取材后應立即置暗視野顯微鏡下觀察。

3.鏡下觀察時應注意與其他螺旋體相鑒別。

（二）鍍銀染色檢查

【基本原理】

梅毒螺旋體具有親銀性，可被銀溶液染色，從而可以在鏡下觀察到梅毒螺旋體。

【儀器材料】

1．顯微鏡。

2．羅吉氏固定液、鞣酸媒染劑、Fontana氏銀溶液。

【標本采集】

1.皮膚黏膜組織液：無菌生理鹽水浸濕的棉拭子擦去皮損表面的污物，鈍刀輕刮、擠壓皮損表層，取滲出液涂片。

2．淋巴液：無菌操作下穿刺淋巴結，注入生理鹽水并反復抽吸2～3次，取少量的淋巴液直接滴于載玻片上。

【操作步驟】

1．涂片干燥：將標本涂于干凈載玻片作一薄片，于空氣中自然干燥。

2．固定：用固定液將涂片固定2～3分鐘。

3．洗滌：用無水乙醇洗滌玻片上的油污。

4．媒染：加媒染劑于涂片上，微加熱產生蒸汽，染30秒。

5．銀染：水洗，加銀染液于涂片上，微加熱產生蒸汽，染30秒。

6．鏡檢：水洗、待干，用油鏡檢查。

【結果判讀】

顯微鏡下見到染成棕褐色的梅毒螺旋體為陽性結果。

【結果報告】

1．陽性：見到染成棕褐色梅毒螺旋體。

2．陰性：未見到染成棕褐色的梅毒螺旋體。

【臨床意義】

同暗視野顯微鏡檢查法。

【注意事項】

應注意與其他螺旋體加以鑒別。

二、血清學檢測法

（一）非梅毒螺旋體抗原血清試驗

非梅毒螺旋體抗原血清試驗，包括性病研究實驗室（VDRL）試驗、快速血漿反應素（RPR）環狀卡片試驗、甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST）等。

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VDRL試驗

【基本原理】

梅毒螺旋體感染人體后，宿主會產生抗類脂抗原的抗體（反應素），與一定比例的心磷脂、卵磷脂及膽固醇混合物抗原反應，可檢測梅毒患者血中的抗類脂抗原的抗體。

【儀器材料】

1.水平旋轉儀、顯微鏡。

2.試劑盒：VDRL抗原原液、VDRL緩沖液、抗原滴管及針頭、帶直徑14mm漆圈的玻璃反應板、VDRL試驗結果參照圖片。

3.30mL平底玻璃小瓶、生理鹽水。

【標本采集】

1.血清：抽取靜脈血，室溫靜止凝固后，分離新鮮血清。也可采用凍存的血清。

2.腦脊液：采用腰椎穿刺術獲得，應由相關專業人員操作。

【操作步驟】

1.VDRL抗原配制。

2.VDRL玻片定性試驗

（1）滅活：血清標本56℃滅活30分鐘。

（2）吸樣：吸取0.05mL血清放入反應板圈中，將血清涂布到整個圈內。

（3）加抗原：用標準針頭加入1滴抗原。

（4）反應：將反應板置水平旋轉儀上旋轉4分鐘，〔(180±5)次/分鐘〕，立即置低倍顯微鏡下觀察。

3.VDRL定量試驗

（1）加稀釋液：在圈內加入0.05mL生理鹽水（根據需要確定稀釋度）。

（2）樣本稀釋：吸取0.05mL樣本與各圈中鹽水作系列稀釋并涂布整個圈內。

（3）以下步驟同定性試驗（2）～（4）。

【結果判讀】

凝集反應強度分級：

3＋

～

4＋：大的或中等大小的絮狀物，液體清亮

2＋：絮狀物較小，液體較清亮

1＋：絮狀物較小，均勻分布，液體混濁

±：抗原復合物顆粒稍粗

－：抗原顆粒均勻、細小

【結果報告】

1．定性試驗：

（1）陽性：鏡下可見1＋～4＋的絮狀凝集物。

（2）陰性：不產生凝集反應。

2．定量試驗：

滴度：鏡下可見絮狀凝集物的血清最高稀釋倍數。

【臨床意義】

對一期、二期、潛伏期和晚期梅毒患者的敏感性分別為78%、100%、96%和71%。腦脊液VDRL陽性對神經梅毒有診斷意義。

【注意事項】

1．VDRL用抗原需當天配制。

2．試驗反應完畢，應立即觀察結果。

n

RPR試驗

【基本原理】

RPR試驗是VDRL試驗的一種改良方法。該法在心磷脂、卵磷脂和膽固醇等組成的抗原中加入活性炭顆粒，與待檢血清（漿）中的反應素結合，形成肉眼可見的黑色絮狀物。

【儀器材料】

1．水平旋轉儀。

2．RPR試劑盒：RPR抗原、直徑為18mm圓圈的反應卡片、抗原滴管、針頭。

【標本采集】

1．血清：抽取靜脈血，室溫靜止凝固后，分離新鮮血清。也可采用凍存的血清。

2．血漿：各種抗凝劑制備的血漿。

【操作步驟】

1．定性試驗

（1）

加樣：吸取0.05mL血清(漿)放在卡片圈中，并均勻地涂布在整個圈內。

（2）加抗原：將抗原輕輕搖勻，用9號針頭[每毫升（60±1）滴]加1滴抗原。

（3）反應：將卡片置水平旋轉儀旋轉8分鐘[（100±5）轉/分鐘]。立即在亮光下觀察結果。

2．定量試驗

（1）稀釋液準備：在圈內加入0.05mL生理鹽水（根據需要確定稀釋度），勿將鹽水涂開。

（2）加樣：吸取0.05mL血清（漿）與各圈中鹽水作系列稀釋，并涂布整個圈內。

（3）同定性試驗（2）～（4）。

【結果判讀】

凝集反應強度分級：

3＋

～

4＋：圓圈內出現中到大的黑色絮狀物，液體清亮

2＋：圓圈內出現小到中的黑色絮狀物，液體較清亮

1＋：圓圈內出現小的黑色絮狀物，液體混濁

－：圓圈內僅見碳顆粒集于中央一點或均勻分散

【結果報告】

1．定性試驗：

（1）陽性：出現1＋～4＋強度的凝集反應。

（2）陰性：不產生凝集反應。

2．定量試驗：

滴度：出現凝集反應的血清最高稀釋倍數。

【臨床意義】

1．RPR試驗適用于梅毒篩查、療效觀察、復發或再感染的檢查。

2．對未經治療的一期、二期和潛伏梅毒患者的敏感性分別為86%、100%和98%。

【注意事項】

試驗應在23～29℃環境中進行。

n

TRUST試驗

TRUST試驗是用甲苯胺紅顆粒代替RPR試驗中的碳顆粒作為指示物，所以陽性結果為紅色絮狀物。其基本原理、儀器材料、標本采集、操作步驟、結果判讀、結果報告、臨床意義及注意事項等與RPR試驗基本相同。

（二）梅毒螺旋體抗原血清試驗

梅毒螺旋體抗原血清試驗是以梅毒螺旋體為抗原的特異性的抗原抗體反應，用以檢測梅毒抗體，常用的方法有梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗（TPPA）、梅毒螺旋體血球凝集試驗（TPHA）、熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗（FTA-ABS）、梅毒螺旋體酶聯免疫吸附試驗（TP-ELISA）和梅毒螺旋體蛋白印跡試驗（TP-WB）等方法。

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TPPA試驗

【基本原理】

TPPA試驗是用超聲裂解梅毒螺旋體制備的抗原，致敏明膠粒子，其致敏粒子與待檢血清中的抗梅毒螺旋體抗體結合，產生肉眼可見的凝集。

【儀器材料】

1.微量震蕩器。

2.試劑盒：“A”溶解用液、“B”標本稀釋液、“C”致敏粒子、“D”未致敏粒子、“E”質控血清。

3．U型反應板。

【標本采集】

同RPR試驗。

【操作步驟】

1．試劑準備：試驗前將待檢樣本和試劑應恢復到室溫。

2．加稀釋液：每份樣本做4孔，加B液至反應孔內，第1孔100μL，第2～4孔各25μL。

3．樣本稀釋：取血清25μL加至第1孔，混勻后取25μL至第2孔，連續倍比稀釋至第4孔，最后1孔混勻后棄去25μL。

4．加對照液：第3孔加D液25μL，第4孔加C液25μL。

5．混合：將反應板置震蕩器震蕩30秒。

6．反應：置濕盒內，孵育2小時后，或放4℃冰箱過夜觀察結果。

【結果判讀】

觀察凝集反應強度，分級如下：

4＋：

粒子光滑覆蓋整個孔底，有時邊緣有折疊

3＋：

粒子光滑覆蓋大部分孔底

2＋：

粒子光滑聚集覆蓋孔底，周圍有一細胞環

1＋：

粒子光滑集聚覆蓋孔底，周圍有一明顯細胞環

±：

粒子沉集孔底，中央形成一小點

－：

粒子緊密沉積孔底中央

【結果報告】

1．陽性：未致敏粒子不出現凝集（第3孔），血清1︰80以上稀釋與致敏粒子產生1＋～4＋凝集反應。

2.陰性：未致敏粒子和致敏粒子均不產生凝集反應。

【臨床意義】

1.TPPA可作為非梅毒螺旋體抗原血清試驗(如RPR等)初篩陽性標本的確證試驗。

2．梅毒患者經過抗梅治療后，TPPA試驗仍可陽性，故TPPA試驗陽性不能作為療效觀察的指標。

3．TPPA陽性不能區分既往感染和現癥感染，應結合非梅毒螺旋體抗原血清試驗結果進行診斷。

【注意事項】

1.試驗結果為“可疑”時，應選用其他的試驗方法進行復驗。

2.如未致敏粒子出現凝集反應，樣本進行吸收后再進行試驗，或改用其他試驗方法。

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TPHA試驗

【基本原理】

TPHA試驗用超聲裂解的梅毒螺旋體菌體為抗原，致敏經醛化、鞣化的羊或禽類紅細胞，與抗梅毒螺旋體抗體反應，產生肉眼可見的抗原抗體凝集。

【儀器材料】

1.微量震蕩器。

2．TPHA試劑盒：“A”溶解用液、“B”標本稀釋液、“C”致敏粒子、“D”

未致敏粒子、“E”質控血清。

3.U型反應板。

【標本采集】

同RPR試驗。

【操作步驟】

1．試劑準備：試驗前試劑恢復到15～25℃。

2．加稀釋液：加B液至反應板，第1孔25mL，第2孔100mL，第3～5孔各加25mL。

3．樣本稀釋：取血清25mL加至第1孔，混勻后取25mL至第2孔，混勻后取25mL至第3孔，混勻后棄去25mL，再從第2孔取25mL至第4孔，混勻后取25mL至第5孔，混勻后棄去25mL。

4．加對照液：第3孔加D液（未致敏細胞）75μL，第4、5孔加C液（致敏細胞）各75mL。

5．混合：將反應板置震蕩器震蕩30秒。

6．反應：置濕盒內，15～25℃孵育4小時，或放4℃冰箱過夜觀察結果。

【結果判讀】

同TPPA試驗。

【結果報告】

同TPPA試驗。

【臨床意義】

同TPPA試驗。

【注意事項】

有些采用禽類紅細胞為載體的TPHA試驗，血清不用吸收，可直接進行試驗。

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FTA-ABS試驗

【基本原理】

以完整的梅毒螺旋體作為抗原，與經吸收劑吸收的梅毒血清抗體反應形成抗原抗體復合物，再加入熒光素（FITC）標記的抗人免疫球蛋白，形成帶有熒光的抗原抗體復合物，在熒光顯微鏡下螺旋體顯出蘋果綠色熒光。

【儀器材料】

1．熒光顯微鏡。

2．試劑盒：梅毒螺旋體抗原片、吸收劑、熒光素標記抗體、陽性對照血清、PBS緩沖液、固定劑。

3.血清稀釋板。

【標本采集】

同VDRL試驗。

【操作步驟】

1.血清滅活：將血清標本于56℃滅活30分鐘，備用。

2.血清稀釋：待檢血清用吸收劑1：5稀釋，陽性血清及陰性血清分別用PBS緩沖液和吸收劑1:5稀釋。置37℃濕盒內，30分鐘。

3.加樣：每次試驗必須設PBS緩沖液、吸收劑、PBS液1︰5稀釋陽性和陰性血清及吸收劑1：5稀釋陽性和陰性血清共6個對照涂片。每個涂片分別加入10μL稀釋后的血清或緩沖液，置37℃濕盒內，30分鐘。

4.洗滌：用PBS-

Tween-80液洗玻片2次，每次5分鐘，最后用蒸餾水洗一次，冷風干燥。

5.加熒光抗體：每個涂片加10μL按要求稀釋的熒光抗體,置37℃濕盒內30分鐘。

6.洗滌：同步驟4。

7.封片鏡檢：用固定劑封片，讀片。

【結果判讀】

1.陽性對照：無論PBS緩沖液還是吸附劑稀釋，熒光強度應相同。

2.陰性對照和空白對照：不產生熒光。

【結果報告】

1.陽性：熒光鏡下見到不同程度發綠色熒光的螺旋體。

2.陰性：無熒光或密螺旋體微顯淡綠色。

【臨床意義】

1.FTA-ABS是梅毒螺旋體抗原血清學試驗的“金標準”。

2．對未經治療的一期、二期、潛伏梅毒和晚期梅毒患者的敏感性分別為84%、100%、100%和96%，特異性均可達97%。

3.其他同TPPA試驗。

【注意事項】

1.抗原片每次洗滌要干凈，避免其他雜質影響判讀結果。

2.試驗需有高質量熒光顯微鏡和技術熟練的操作人員。

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TP-ELISA試驗

【基本原理】

TP-ELISA試驗是用包被在固相板條上經超聲裂解、純化處理或重組的梅毒螺旋體抗原，與待檢血清中的梅毒特異性抗體結合，再與酶標記的抗人免疫球蛋白單克隆抗體反應，形成抗原抗體復合物而使底物顯色。

【儀器材料】

1.酶標儀、洗板機。

2．試劑盒組成：96孔反應板、標本稀釋液、洗滌液、酶結合物、底物液、終止液、陽性對照、陰性對照。

【標本采集】

同RPR試驗

【操作步驟】

1.加稀釋液：取標本稀釋液加到反應板孔內。

2.孵育：分別加入陽性、陰性對照和待檢血清，置37℃孵育一定時間,洗板。

3.加酶結合物：加酶結合物，置37℃孵育一定時間,洗板。

4.加顯色劑：加底物，37℃避光孵育。

5.終止反應：加終止液，酶標儀測OD（光密度）值。

【結果判讀】

1．每次試驗的陽性、陰性對照應在規定的數值范圍內

2．根據陽性、陰性OD值設定閾值（cut-off值）。

【結果報告】

1．陽性：標本OD值大于或等于cut-off值。

2．陰性：標本OD值小于cut-off值。

【臨床意義】

（1）適用于流行病學調查或大樣本量標本的檢測。

（2）ELISA陽性不能區分既往感染和現癥感染，應結合非梅毒螺旋體抗原血清試驗(如RPR等)結果進行診斷。

【注意事項】

1.不同批號試劑不能混用。

2.溫度和時間必須嚴格控制。

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TP-WB試驗

【基本原理】

用超聲粉碎的梅毒螺旋體或梅毒螺旋體重組的不同抗原，印跡至硝酸纖維膜條上。通過酶聯反應，可檢測梅毒血清中多種特異抗原成分的抗體。

【儀器材料】

1.水平搖床。

2.試劑盒:硝酸纖維膜條、酶標抗體、陽性質控血清、陰性質控血清、底物液、終止液、標準陽性反應帶結果參比圖譜。

【標本采集】

同RPR試驗

【操作步驟】

1．反應：每反應槽加2.0mL工作緩沖液，浸濕膜條5分鐘，加入0.02mL待檢樣本，置水平搖床上(50轉/分)，18～25℃反應45分鐘。

2．洗滌：棄去反應槽中液體，加入

2.0mL工作緩沖液，置水平搖床洗滌3次，每次5分鐘。

3．加酶結合物：

加入酶標抗體，置水平搖床反應30分鐘。

4．洗滌：同步驟2。

5．顯色：每槽加2.0mL底物，置水平搖床上反應8～10分鐘。

6．終止:

待陽性對照帶顯色清晰，加入1.0

mL終止劑2分鐘后棄去槽中液體，用蒸餾水洗2次，用鑷子取出反應條，置濾紙上。

【結果判讀】

1．根據陽性結果參比圖譜判定結果。

2.將試驗的硝酸纖維膜條上端標記線與參比標記線對齊。

3．觀察45KD、17KD及15.5KD帶區顯色帶。

【結果報告】

1．陽性：

45KD、17KD及15.5KD帶區均出現顯色帶。

2．陰性：

45KD、17KD及15.5KD三個條帶均未顯色。

【臨床意義】

1．同TPPA試驗

2．可以用于檢測IgM或IgG抗體。

【注意事項】

1．洗滌要充分，否則易造成試驗膜條帶背景的顏色偏深。

2．硝酸纖維膜條有對照反應條帶，在試驗中應顯示，如未顯示，則試驗無效。

3．當45KD、17KD及15.5KD中只有一個或兩個條帶出現明顯色帶為可疑結果，需重新試驗。

n

快速免疫層析法

【基本原理】

利用免疫層析原理，采用吸附有顯色標記的梅毒螺旋體重組抗原的濾紙條，快速檢測標本中的梅毒螺旋體抗體。

【儀器材料】

試劑盒：測試板、一次性滴管。

【標本采集】

同RPR試驗，可用全血。

【操作步驟】

1．加樣：用一次性滴管滴加一定量標本于加樣孔中。

2．加緩沖液：立即加入一定量的緩沖液。

3．觀察結果：規定時間內判讀結果。

【結果判讀】

1.觀察質控條帶,判斷試驗有效性，如沒有出現質控條帶，說明試驗無效，需重復試驗。

2．觀察標本條帶。

【結果報告】

1．陽性:

出現標本條帶和質控條帶。

2．陰性：無標本條帶，出現質控條帶。

【臨床意義】

1．可以用于標本的快速篩查。

2．快速檢測陽性不能區分既往感染和現癥感染，應結合非梅毒螺旋體抗原血清試驗(如RPR等)結果進行診斷。

【注意事項】

1．試劑盒從冷藏環境中取出時，應平衡至室溫后方可使用。

2．本試驗方法存在一定的假陽性和假陰性。

三、其它方法

（一）梅毒IgM抗體的檢測

與其它細菌及病毒感染一樣，在梅毒中特異性IgM抗體的合成是第一次感染后的體液免疫應答。在梅毒中螺旋體IgM抗體出現在早期梅毒患者中，在潛伏期及晚期患者也能發現。在自發痊愈的患者中IgM水平下降的速度比治療痊愈的患者慢。IgM分子大使其不能通過胎盤屏障及完整無損的血腦屏障。因此若在新生兒血中檢測到IgM抗體是兒童產前感染的診斷標志；如在患者的完整無損的血腦屏障的腦脊液（CSF）中出現，則表示患有活動性神經梅毒。在最近未接受治療的患者血液中或CSF中出現抗梅毒IgM抗體均表示需要治療。

測定IgM抗體方法的基本原理是采用分離柱，使血清中的IgM和IgG按其分子量大小在分離過程中的沉降速度不同，將IgM和IgG分別收集，再進行FTA-ABS等試驗。亦可采用抗IgM單克隆抗體的酶標法、蛋白質印跡法等進行檢測。目前測定IgM抗體的方法的敏感性還很不理想，但是檢查到IgM抗體則有助于對以下病例中的試驗結果更可靠的解釋：先天性梅毒、早期一期梅毒、晚期梅毒、非梅毒螺旋體試驗的血清陽轉前的早期感染患者的判愈試驗及有梅毒史或其它螺旋體感染史患者的再感染。

（二）胎傳梅毒(或先天梅毒)的實驗室診斷

具有下列實驗室四個指標之一，可診斷為胎傳梅毒(或先天梅毒)：①暗視野檢查梅毒螺旋體陽性；②患兒非梅毒螺旋體血清抗體滴度持續上升；③患兒非梅毒螺旋體血清學定量試驗結果比母親高4倍（低于或等于該值并不排除胎傳梅毒）；④患兒檢出19S-IgM抗體。

（三）神經梅毒的實驗室診斷

1．神經梅毒的實驗室診斷標準包括：①梅毒血清學檢查陽性；②腦脊液細胞計數或蛋白測定結果異常；③腦脊液VDRL試驗陽性。

2．腦脊液VDRL試驗是神經梅毒的標準試驗，陽性結果可診斷為神經梅毒，但該試驗存在假陰性。

3．腦脊液的FTA－ABS試驗陰性可排除神經梅毒，但特異性不高，可能產生假陽性。

4．腦脊液檢查內容

（1）細胞計數：正常時白細胞數應小于3×106/L，若白細胞數大于10×106/L，提示中樞神經系統有炎癥現象。

（2）蛋白質量測定：總蛋白質量正常為0.1～0.4g/L，神經梅毒可稍升高，或高達1.0～2.0g/L。

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END

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第三篇：艾滋病實驗室規章制度

艾滋病實驗室規章制度

1、實驗室工作人員要熟悉生物安全操作知識和消毒技術；

2、不得在實驗室內喝飲料、吸煙、吃食物、和化妝打扮等；不得在實驗室內會客；

3、實驗室用品（包括工作服）不得用于其他用途；不可將私人和無關的物品帶入實驗室；

4、工作時，要帶手套、穿工作衣和隔離衣，操作時手套破損應立即丟棄、洗手并帶上新手套；

5、不要用戴著手套的手觸摸暴露的皮膚、口唇、眼睛、耳朵和頭發等；

6、盡量避免使用尖銳物品和器具；宜用不易破碎材料制品；禁止用口吸任何物質；

7、工作結束后，要對工作臺面消毒，如用消毒液清洗后要干燥20分鐘以上；操作時有標本、檢測試劑外濺時應及時消毒；平時要保持環境整潔；

8、工作完畢，脫去手套后洗手，再脫去工作衣，用肥皂和流動水洗手；

9、遇有意外事故，應立即處理并以口頭和書面報告上級部門。如工作人員皮膚被刺傷，可以用流動水局部清洗或用刺激性較輕的含氯創傷消毒劑鋟泡皮膚創口；樣品或檢測試劑濺入眼內立即用生理鹽水沖洗，濺入嘴內，先吐出殘留的液體后，用水反復漱口；

10、遇有高危的意外事故發生，除進行局部處理外，同時應立即采取預防措施，包括對其隨訪、HIV檢測、休息并暫時離開原崗位3個月，按醫囑服用抗HIV藥物進行預防；

第四篇：艾滋病實驗室工作制度

艾滋病實驗室工作制度

1、工作人員必須經省級以上職能部門培訓，取得合格資格后方能從事本工作，并定期接受復訓；進入實驗室必須著裝，做好個人防護；遵守二級生物安全防護實驗室要求。

2、實驗室工作人員要熟悉生物安全操作知識和消毒技術。樹立嚴肅科學態度，嚴格遵守《全國艾滋病檢測技術規范》，操作正規，結果準確。

3、實驗室內一切物品要妥善保管，整齊、清潔。不可將私人和無關的物品帶入實驗室。嚴禁吸煙、進食、會客、洗晾衣物。

4、進入實驗時必須穿戴手套、工作衣和隔離服，加強自我防護。

5、實驗過程中嚴禁用戴著手套的手觸摸暴露的皮膚、口唇、眼睛、耳朵和頭發等。

6、工作結束后，要對工作臺面消毒，操作時有標本、檢測試劑外濺時應及時消毒，實驗過程中的污物、垃圾必須經有效消毒處理后方可帶出實驗室棄去。

7、遇有意外事故，應立即處理并分別以口頭和書面報告上級部門。

8、發生高危意外事故時，除進行局部處理外，要及時報告上級部門，立即采取綜合預防措施。

9、離開實驗室時，要細心檢查水、電及門窗，防止事故。

10、篩查陰性結果要及時出具報告，篩查陽性結果要及時送上級實驗室確認，在報告發出前后要做好保密和咨詢工作。

11、實驗記錄要完整、真實，不得任意修改，并保存15年以上。對外發出的報告要履行嚴格的審核、簽發手續。

艾滋病實驗室保密制度

1、HIV抗體檢測實驗室要妥善保存各種實驗記錄、感染者檔案，不得擅自修改和銷毀。

2、全科室工作人員均有保守國家機密的職責，必須遵守保密制度，未經省級衛生行政部門許可，不得向無關人員或單位提供任何情況，做到不該說的機密接不說，不該知道的機密接不打聽。

3、凡檢驗結果、科研資料等，未經簽發，不得私自外傳。仲裁樣品、只寫編號，對送檢單位和樣品來源必須保密，檢驗人員不的打聽。

4、檢驗人員不得私自復制抄錄檢驗報告。

5、在媒體、雜志、報刊上等外事活動過程中，不得泄露單位機密。初篩實驗室檢測的陽性結果不是最終結果，應及時作進一步確認，故本實驗室不能出具HIV抗體陽性的結果報告，更不能告知受檢者本人。

6、HIV抗體確認實驗室確認的陽性結果，以機密級向送檢單位出具陽性報告；送檢單位接到陽性報告后，應報告當地衛生行政部門，在對陽性者告知檢測結果前要先做好法律、醫學、生活等方面的咨詢。

7、所有經確認的陽性標本，包括實驗室留存的標本，應送上級HIV抗體確認中心或省級衛生行政部門指定的單位保存，不得自行保存或擅自處理。

8、使用計算機保存各種文件和記錄，并給文檔加密，嚴防無關人員進入實驗室致使文檔泄密。

實驗室工作制度

1、進入實驗室必須著裝，做好個人防護。離開時將著裝放在固 定位置，著裝如有污染應及時按規定先消毒處理并保持清潔。

2、實驗室內一切物品要妥善保管，整齊、清潔。試劑分類存放，標簽明晰。請領有登記，消耗有記錄，損壞有報告。標準試劑要定期標定。

3、樹立嚴禁科學態度，采用先進的實驗技術，操作正規，結果 準確。

4、樣品要及時登記、編號，明確檢驗目的，不合要求的樣品必 要時重新采樣。凡有時間性要求的檢品隨到隨檢，一般樣品登記后妥善保存盡快檢驗。剩余樣品保存一月，責任檢品保存三月以上。不得擅自處理。

5、各實驗室，應有設計方案和完整的實驗記錄，檢驗士以下人 員的實驗記錄要有上級醫師（檢驗師）復核。實驗報告書寫必須工整。對外發出的報告要有主管檢驗師以上人員簽名，科長或主任檢驗師核發。

6實驗室內不得會客、吸煙、進食、洗晾衣物。

7、離開實驗室時，要細心檢查水、電及門窗，防止事故。

8、本制度自2006年1月1日起執行。

實驗室樣品接收、登記、送檢保存制度

1、送檢樣品、憑介紹信由主辦科室登記，與有關科室或送檢人 員聯系同意后，對樣品進行編號，確定檢驗項目，開列送檢單，將樣品送交各有關實驗室具體承辦人員。

2、送檢樣品由科室監督人登記、編號、確定檢驗項目，開列送 檢單，并將樣品交各有關實驗室。

3、科室樣品的編號，要有統一的格式，并由中心辦公室登記備案。

4、辦妥手續的樣品，由具體承辦人員及時交給檢驗人員，需其它科室配合協同樣品、項目，由科室負責人負責與有關科室協商解決。

5、接收協同檢驗的科室，檢驗完畢，應按規定將檢驗結果交回主管科室匯總。

6、樣品的保管應在檢驗前留取樣品的1/3作為保留樣品，保留樣品須包裝完整，密封并貼上標簽，以備復查。保留樣品根據樣品的性質分別存放于室溫或冰箱保存。保存時間從發出報告之日起計算。

7、定期檢查保管樣品的保存質量，核對存放數量。廢棄樣品按不同樣品的規定保存期限，需報請主管領導批準后再進行處理。

8、本職責自2006年1月1日起執行。

實驗室安全事故處理制度

病毒學實驗室標本含有強致病性病原微生物，工作中經常使用電源和易燃物品，為防止發生實驗室內傳染與火災、燒傷、觸電等意外事故，特制訂《安全事故處理制度》：

1、嚴格按操作規范操作，對感染性及非感染性實驗要在特定區域及工作臺面操作，以防交叉感染。標本及毒株應嚴格按有關規定妥善保藏。

2、如有傳染性物品污染桌面或地面，應立即選用敏感消毒液傾覆其上半小時后方可抹去。

3、如有傳染物污染工作服，應立即將工作服脫去，進行消毒處理。如傳染物污染手臂，應立即將手臂侵入敏感消毒液浸泡5----10分鐘，再以肥皂及流水刷洗干凈。

4、如有酸或堿濺在皮膚上或濺入眼內，應立即用水反復徹底沖洗，再進行醫護治療。

5、易燃物品如酒精、氯仿、乙醚、丙酮等有機溶劑應遠離火源保管及操作，烤箱、電爐、等電器用后立即切斷電源。如遇有著火情形，應立即進行撲滅或報告，必要時按規定使用消防栓及報警裝置。

6、工作結束后，要注意檢查電器工作狀態是否良好，電器是否關閉，以確保水、電及儀器的安全。工作人員應將雙手用肥皂與水刷洗干凈，如有特別注意事宜應先細告知同室人員，確保安全。

病原生物實驗室安全制度

1、實驗室內保持整潔、干燥，在進行病毒接種無菌操作前后，均應用紫外線照射滅菌，必要時用消毒液擦拭或用甲醛、高錳酸鉀進行熏蒸消毒。

2、進入操作室，須先洗凈雙手并用消毒液浸泡雙手，更換拖鞋、戴口罩和帽子，穿潔凈隔離服，戴手套操作。

3、實驗操作中，如果有液體濺出應及時進行消毒處理。實驗完畢后，所穿拖鞋、口罩、帽子，實驗服不得穿出室外，須經消毒清洗兩手后方能離開實驗室。

4、一個接種操作室，嚴禁同時進行兩株病毒株的傳種，吸取病毒材料時，勿于懸空吹出或打出，以防止局部形成氣溶膠。

5、凡粘病毒材料的吸管、試管等器具，須用適合的消毒液浸泡，或煮沸消毒后方能進行洗滌。

6、凡帶有感染性的實驗材料或動物尸體，須盛入容器內高壓消毒后，方能攜出室外進行深埋處理或丟棄。

7、實驗室人員在收到送檢樣品時，應立即進行登記并妥為保存，嚴格按照操作規程進行并做好實驗記錄。根據送檢要求盡快進行檢驗并出具檢驗報告單。

8、實驗人員要注意個人安全防護和操作，建立醫學健康檔案。定期進行醫學健康體檢和從事的相關疾病的抗體水平檢測，上崗前作好疫苗的免疫接種工作。患有相關疾病是應暫時離開實驗工作。

第五篇：山東艾滋病實驗室

山東省艾滋病檢測實驗室建設管理規范

為加強全省艾滋病檢測工作的規范化管理，提高檢測工作質量，根據原衛生部《全國艾滋病檢測工作管理辦法》（以下簡稱《辦法》）和中國疾病預防控制中心《全國艾滋病檢測技術規范》（2009年版）（以下簡稱《規范》），制訂本規范。

一、艾滋病檢測實驗室的設置

艾滋病檢測實驗室實行分類管理。按照實驗室的職能、檢測工作的性質及范圍，全省的艾 滋病檢測實驗室分為艾滋病確證中心實驗室、艾滋病確證實驗室、艾滋病篩查中心實驗室、艾滋病篩查實驗室、艾滋病檢測點五類。

山東省艾滋病確證中心實驗室設在山東省疾病預防控制中心；確證實驗室可設在市級疾病預防控制中心、三級甲等醫療機構等具有艾滋病病毒抗體(以下簡稱HIV抗體)確證條件的醫療衛生、保健和計生機構；篩查中心實驗室設在市級疾病預防控制中心；篩查實驗室可設在具備條件的各級疾病預防控制中心、醫療保健機構、采供血機構、計劃生育技術服務機構等；檢測點可設在有檢測需求但不具備建立實驗室條件的醫療衛生和計劃生育技術服務機構，如鄉鎮衛生院、社區衛生服務中心和一級醫療機構等。

二、艾滋病檢測實驗室的職能

（一）艾滋病確證中心實驗室職能

1、負責全省艾滋病檢測實驗室建設與管理的技術指導與評價，開展艾滋病檢測實驗室人員技術培訓。

2、建立艾滋病檢測實驗室質量控制體系，組織省級實驗室能力驗證和艾滋病診斷試劑的臨床質量評估。

3、承擔省衛計委指定的HIV抗體篩查、確證和其他艾滋病檢測任務。

4、開展應用性研究，承擔與艾滋病防治相關的病原學鑒定、現場綜合防治、調研、監測、臨床治療等工作中相關的檢測任務。

5、建立全省的艾滋病檢測樣品庫和質控品庫。

6、收集、整理和分析艾滋病檢測數據及相關資料，建立艾滋病檢測實驗室基本資料庫和艾滋病檢測數據庫。定期向省衛計委和中國疾病預防控制中心報告艾滋病檢測數據及相關資料，并配合有關部門做好個案調查、登記等隨訪工作。

7、對轄區內艾滋病檢測實驗室進行質量考評和督導。

8、將HIV抗體檢測情況及時通過實驗室信息管理系統和網絡直報上報。

9、出具艾滋病相關檢測報告。

（二）艾滋病確證實驗室職能

1、承擔當地衛生計生行政部門指定的HIV抗體確證、抗體篩查和其他艾滋病檢測工作。

2、向艾滋病確證中心實驗室報告經確證的陽性結果，每

半年將確證可疑、陽性樣本移交艾滋病確證中心實驗室統一保存，并配合做好個案調查、登記等工作。

3、承擔當地衛生計生行政部門指定的艾滋病篩查實驗室的技術指導、培訓和評價任務。

4、定期匯總艾滋病檢測資料，并上報艾滋病確證中心實驗室和同級衛生計生行政部門。

5、對開展自愿咨詢檢測工作的艾滋病檢測實驗室給予技術支持和指導。

6、將HIV抗體檢測情況及時通過實驗室信息管理系統和網絡直報上報。

7、出具艾滋病相關檢測報告。

（三）艾滋病篩查中心實驗室職能

1、負責職責范圍內HIV抗體篩查試驗，根據需要開展其他艾滋病檢測工作。

2、負責將HIV抗體篩查和復檢呈陽性反應的樣品送艾滋病確證實驗室。

3、定期匯總艾滋病檢測資料，并上報艾滋病確證實驗室。配合有關部門做好個案調查、登記等工作。

4、負責轄區內艾滋病篩查實驗室的技術指導；協助艾滋病篩查實驗室和艾滋病檢測點開展自愿咨詢檢測工作。

5、負責轄區內艾滋病篩查實驗室、艾滋病檢測點的質量考評和督導。

6、將HIV抗體檢測情況及時通過實驗室信息管理系統和網絡直報上報。

7、出具HIV抗體陰性報告。

（四）艾滋病篩查實驗室職能

1、開展HIV抗體的篩查工作，根據需要可開展乙型肝炎、丙型肝炎、梅毒等相關檢測工作。

2、負責將HIV抗體篩查試驗呈陽性反應的樣品送當地艾滋病篩查中心實驗室進行復檢。

3、定期匯總艾滋病檢測資料，并上報當地艾滋病篩查中心實驗室。

4、對自愿咨詢檢測工作提供技術支持。

5、縣級疾病預防控制中心艾滋病篩查實驗室負責對轄區內HIV檢測點提供技術指導。

6、將HIV抗體檢測情況及時通過實驗室信息管理系統和網絡直報上報。

7、出具HIV抗體陰性報告。

（五）艾滋病檢測點職能

1、開展HIV抗體篩查工作。

2、負責將HIV抗體篩查試驗呈陽性反應的樣品送當地縣級疾病預防控制中心艾滋病篩查實驗室進行復檢。

3、定期匯總艾滋病檢測資料，并上報當地縣級疾病預防控制中心艾滋病篩查實驗室。

4、開展艾滋病自愿咨詢檢測工作。

5、將HIV抗體檢測情況及時通過實驗室信息管理系統和網絡直報上報。

6、出具HIV抗體陰性報告。

三、艾滋病檢測實驗室建設標準

（一）艾滋病確證（中心）實驗室

1、人員條件：至少由5名醫療技術人員組成，其中專職人員至少2名，具有副高級衛生技術職稱人員至少1名。負責確證試驗的技術人員需具有3年以上從事HIV抗體檢測工作經驗，接受過省級以上艾滋病檢測技術培訓，并獲得培訓證書。

2、建筑條件：需有獨立的血清學檢測實驗室，符合二級生物安全實驗室（BSL-2）要求。根據需要設置核酸檢測、免疫學檢測等區域。

3、儀器設備：配備血清學檢測和BSL-2所需儀器設備，包括酶標讀數儀、洗板機、普通冰箱、低溫冰箱、水浴箱（或溫箱）、離心機、旋轉震蕩器、全自動免疫印跡儀、加樣器、專用計算機、洗眼器、條碼機、傳真機、攝像器材、消毒和污物處理設備、實驗室恒溫設備、安全防護用品和生物安全柜。具有建立血清庫和數據庫的設備條件。

4、質量保證文件

（1）規章制度：實驗室管理制度，檔案管理制度，保密制度，疫情上報制度等。

（2）標準操作程序（SOP）：樣本的接收、管理、登記和處理，質量控制樣品的應用方法，儀器的使用與維護，結果解釋與報告，檢測數據的記錄，實驗室的清理和消毒等操作步驟與方法。

（3）實驗室安全：實驗室生物安全制度或安全守則，人員健康監護檔案，廢棄物品處理方式，職業暴露登記，實驗室意外與事故發生情況處理等。

（二）艾滋病篩查（中心）實驗室

1、人員條件：至少由3名醫療技術人員組成，其中具有中級及以上衛生技術職稱人員至少1名。負責篩查試驗的技術人員需具有2年以上從事病毒性疾病血清學檢測工作經驗，接受過省級以上艾滋病檢測技術培訓，并獲得培訓證書。

2、建筑條件

（1）疾病預防控制中心：需有獨立的血清學檢測實驗室，布局合理，符合生物安全二級標準。在實驗室入口處必須貼有生物安全標識，并標明級別。所有盛裝傳染性物質的容器表面明顯位置處必須貼有生物安全標識，并按所在生物安全防護實驗室的級別予以標明。

（2）醫療保健機構、采供血機構、計劃生育技術服務機構等：有條件的可設立獨立的血清學檢測實驗室，也可根據工作需要與其他血清學檢測共用一個實驗室，但要設立艾滋病檢測專用工作臺或工作區域。實驗室要達到生物安全二級標準。在

實驗室入口處必須貼有生物危險標識，并標明級別。所有盛裝傳染性物質的容器表面明顯位置處必須貼有生物安全標識。根據需要，可設置核酸檢測和免疫學檢測等區域。

3、儀器設備：配備HIV抗體篩查試驗所需設備，至少包括酶標讀數儀（或化學發光儀）、洗板機、普通冰箱、水浴箱（或溫箱）、離心機、加樣器、條碼機、消毒與污物處理設備（單位集中消毒可不配備高壓滅菌器）、實驗室恒溫設備、安全防護用品和生物安全柜、洗眼器、計算機等。

4、質量保證文件

（1）規章制度：實驗室管理制度，檔案管理制度，保密制度，疫情上報制度等。

（2）SOP：樣本的接收、管理、登記和處理，質量控制樣品的應用方法，儀器的使用與維護，結果解釋與報告，檢測數據的記錄，實驗室的清理和消毒等操作步驟與方法。

（3）實驗室安全：實驗室生物安全制度或安全守則，人員健康監護檔案，廢棄物品處理方式；職業暴露登記，實驗室意外與事故發生情況處理。

（三）艾滋病檢測點

1、人員條件：至少由2名經過艾滋病檢測技術培訓并獲得培訓合格證書的專業人員組成。

2、建筑條件：需有艾滋病檢測區域或專用工作臺，能開展簡便、快速檢測。

3、儀器設備：需配備快速試驗所必須的物品，至少包括普通冰箱、消毒與污物處理設備、一次性消耗品、安全防護用品。根據需要，有條件的可配備洗眼器、加樣器、普通離心機、條碼機和免疫層析結果判讀儀等。

4、質量保證文件

（1）規章制度：實驗室管理制度，檔案管理制，保密制度，疫情上報制度等。

（2）SOP：樣本的接收、管理、登記和處理；質量控制樣品的應用方法，儀器的使用與維護，結果解釋與報告，檢測數據的記錄，實驗室的清理和消毒等操作步驟和方法。

（3）實驗室安全：實驗室生物安全制度或安全守則，人員健康監護檔案，廢棄物品處理方式，職業暴露登記，實驗室意外與事故發生情況處理。

四、艾滋病檢測實驗室的驗收

（一）開展艾滋病檢測工作的實驗室應經過衛生計生行政部門組織的驗收，未經驗收或驗收不合格的實驗室不得開展艾滋病檢測工作。

（二）艾滋病確證（中心）實驗室、篩查(中心)實驗室的驗收工作由省級衛生計生行政部門負責；艾滋病檢測點的驗收工作由市級衛生計生行政部門負責。衛生計生行政部門可委托同級疾病預防控制中心負責艾滋病檢測實驗室的驗收工作。

（三）各級衛生計生行政部門應按照職責分工，對各類艾滋病檢測實驗室分別進行驗收：

1、艾滋病確證（中心）實驗室

（1）申報。符合條件的艾滋病篩查(中心)實驗室，可申報艾滋病確證（中心）實驗室。申報單位應填寫《艾滋病確證實驗室申請表》（附件1-1），經市級衛生計生行政部門審查合格后，報請省級衛生計生行政部門驗收。

（2）驗收。省衛計委組織專家對申請材料進行審查，材料齊全，符合條件的，組織專家進行現場驗收；材料不齊全或不符合申報條件的，書面通知申請單位補充材料或進行整改。現場驗收應按照以下程序進行：

①專家組現場聽取艾滋病確證（中心）實驗室建設情況匯報； ②專家組現場進行考核和驗收； ③進行盲樣檢測及報告考核； ④現場驗收情況反饋。

（3）驗收結果公布。通過驗收的實驗室，由省級衛生計生行政部門進行公布，同時報國家衛生計生委備案；未通過驗收的，由省級衛生計生行政部門書面通知申請單位。未通過驗收的實驗室經整改合格后可重新提出申請。

2、艾滋病篩查(中心)實驗室

（1）申報。符合條件的實驗室可申報艾滋病篩查(中心)實驗室。申請單位應填寫《艾滋病篩查實驗室申請表》（附件1-2），經市級衛生計生行政部門組織專家進行材料審查、現場初審合格后，報請省級衛生計生行政部門驗收。

（2）驗收。省衛計委組織專家對申報單位的申請材料進行審查，材料齊全，符合條件的，組織專家進行現場驗收；材料不齊全或不符合申報條件的，書面通知申請單位補充材料或進行整改。現場驗收應按照以下程序進行：

①專家組現場聽取艾滋病篩查（中心）實驗室建設情況匯報；

②對實驗室工作人員進行理論考試； ③專家組現場考核和驗收； ④進行盲樣檢測及報告考核； ⑤現場驗收情況反饋；

（3）驗收結果公布。通過驗收的實驗室，由省級衛生計生行政部門進行公布；未通過驗收的，由省級衛生計生行政部門書面通知申請單位。未通過驗收的實驗室經整改合格后可重新提出申請。

3、艾滋病檢測點

（1）申報。艾滋病檢測點申報單位填寫《艾滋病檢測點申請表》（附件1-3），報請市級衛生計生行政部門驗收。

（2）驗收。市級衛生計生行政部門組織專家對申請材料進行審查，對符合規定、材料齊全的，由市級實驗室驗收專家組進行現場驗收；材料不齊全或不符合申報條件的，書面通知申請單位補充

材料或進行整改。現場驗收應按照以下程序進行：

①專家組現場聽取艾滋病檢測點建設及準備情況匯報； ②艾滋病檢測點工作人員進行理論考試； ③專家組現場考核和驗收； ④盲樣檢測及報告； ⑤現場驗收情況反饋。

（3）驗收結果公布。通過驗收的實驗室，由市級衛生計生行政部門進行公布，并報省級衛生計生行政部門備案；未通過驗收的，由市級衛生計生行政部門書面通知申請單位。未通過驗收的檢測點經整改合格后可重新提出申請。

（四）艾滋病檢測實驗室遷移地點或變更艾滋病檢測實驗室的類別，按上述規定重新申請驗收。

五、艾滋病檢測實驗室的監管

（一）各級衛生計生行政部門應加強對轄區內艾滋病檢測實驗室的監督管理，規范艾滋病檢測實驗室的設置和驗收，確保艾滋病檢測工作質量。

（二）各級衛生計生行政部門應定期組織對轄區內艾滋病檢測工作進行督導檢查。對于未經衛生計生行政部門驗收或驗收不合格擅自開展艾滋病檢測工作的，應責令其限期改正，并給予通報批評。對于雖然經過驗收并取得艾滋病檢測資格，但有下列情形之一者，責令其限期整改，整改后仍不合格的取消其艾滋病檢測資格。

1、艾滋病篩查實驗室出具艾滋病病毒抗體陽性報告，以及篩查呈陽性反應的樣品不按規定送檢的；

2、使用未經國家食品藥品監督管理局注冊、且不符合相關要求試劑的；

3、未開展實驗室內質量控制或未參加實驗室能力驗證的；

4、使用非衛生專業技術人員或未經培訓合格的專業技術人員從事艾滋病檢測工作的；

5、未按規定對實驗室廢棄物、污物進行消毒處理的；

6、在艾滋病檢測工作中弄虛作假，出具虛假報告的；

7、擅自修改檢測記錄或未按規定保存記錄，造成嚴重后果的。

（三）各級疾病預防控制中心負責轄區內艾滋病檢測實驗室的技術指導，定期組織開展實驗室能力驗證和業務培訓工作。

附件：

1、山東省艾滋病檢測實驗室申請表

2、山東省艾滋病檢測實驗室驗收標準