第一篇：魚類標(biāo)本制作實(shí)習(xí)報(bào)告wangwei

魚類標(biāo)本制作實(shí)習(xí)報(bào)告

一． 魚類的剝制標(biāo)本

在本實(shí)驗(yàn)中，我們用的實(shí)驗(yàn)材料是團(tuán)頭魴，先測(cè)量魚的體長(zhǎng)，體寬，體高，尾柄長(zhǎng)，尾柄高，再將團(tuán)頭魴沿腹腔剖開，然后取出內(nèi)臟器官，并剔除魚肉和骨骼。在剔除過程中，動(dòng)作要小心緩慢，盡量保持魚體的完整性。剔除完成后，將魚浸入濃度為75%—80%的酒精溶液中，其目的是固定。固定完成后，將魚取出，在清水中沖洗，再在清水浸泡一段時(shí)間，直至魚體軟化。然后取出魚體，擦干，在其內(nèi)部均勻的涂抹防腐劑。在該實(shí)驗(yàn)中，我們采用的是硼酸防腐劑，其主要成分是硼酸，樟腦，明礬，配制方法是5克硼酸，3克明礬粉，2克樟腦。一般動(dòng)物剝制標(biāo)本都采用此防腐劑，因?yàn)樗鼪]有劇毒，且防腐效果很好。涂好防腐劑后，按照原先測(cè)量的魚體的數(shù)據(jù)制作一個(gè)P型鐵絲支架，用于支撐魚體。將P型支架插入魚體內(nèi)，再用棉花等填充物填充魚體，填充完成后將魚體縫合，魚類的剝制標(biāo)本就完成了。魚類剝制標(biāo)本實(shí)驗(yàn)中最關(guān)鍵的步驟就是魚肉和骨骼的剔除，如果剔除不好。就會(huì)影響魚體的完整性和美觀性。在剔除中過程中，很容易將魚皮弄破，所以一定要有耐心，慢慢地剔除。

二． 魚類骨骼標(biāo)本的制作

我們用鯉魚做魚類骨骼標(biāo)本，鯉魚是硬骨魚類，其骨骼由中軸骨骼和附肢骨骼兩大部分組成，其頭骨、脊柱、肋骨、肩帶、背鰭、臀鰭、尾鰭各骨骼關(guān)節(jié)之間，有縱肌間隔和韌帶相連接，或相愈合。因此在剔除肌肉時(shí)，應(yīng)保持它們之間的聯(lián)系，避免關(guān)節(jié)間分離。所以在剔除過程中，要盡量小心，保持魚類骨骼的完整性。頭部和肩帶的肌肉不易剔除，可采用NaOH肌肉注射。肌肉剔除干凈后，將骨骼浸入0.5%—0.8%的氫氧化鈉中，在氫氧化鈉中浸泡時(shí)間的長(zhǎng)短對(duì)該實(shí)驗(yàn)的影響很大。浸泡程度的判斷依據(jù)是用鑷子去夾肌肉，感覺很柔軟，將骨骼拎起，肌肉就自動(dòng)掉下來或者很容易從骨骼上分離下來。在氫氧化鈉中浸泡時(shí)間不宜太長(zhǎng)，也不宜太短。若浸制時(shí)間太長(zhǎng)，則骨骼也被腐蝕；若浸制時(shí)間太短，則肌肉不能從骨骼上分離下來。將肌肉剔除干凈后，把骨骼浸入二甲苯中。大約12小時(shí)后，從二甲苯中把骨骼取出，晾干，進(jìn)行整形。然后將骨骼浸入雙氧水中，其目的是漂白。一段時(shí)間后，從雙氧水中取出，晾干，用鐵絲將骨骼固定，這樣魚類骨骼標(biāo)本就制作完成了。在本實(shí)驗(yàn)中，骨骼中氫氧化鈉中浸泡時(shí)間的長(zhǎng)短是最關(guān)鍵的，所以一定要控制好該步驟。

第二篇：魚類實(shí)習(xí)報(bào)告

關(guān)于魚病學(xué)的實(shí)習(xí)一、二、三、四、五、實(shí)習(xí)時(shí)間：二零一六年五月十六日 實(shí)習(xí)地點(diǎn)：湖南省常德市漢壽縣 實(shí)習(xí)對(duì)象：患病魚類和魚池 實(shí)習(xí)方法：由師傅帶隊(duì)實(shí)地考察

實(shí)習(xí)人員：黃老師、黃靖（隊(duì)長(zhǎng)）、李帥、劉建強(qiáng)、許斌實(shí)習(xí)目的：目的是讓學(xué)習(xí)到的理論知識(shí)應(yīng)用到具體實(shí)踐中，材、肖光浩

六、提高同學(xué)們解決實(shí)際問題的能力，特別是對(duì)于患病魚類和魚池的認(rèn)識(shí)和防治方法，通過學(xué)習(xí)，可以增強(qiáng)我們對(duì)魚害的認(rèn)識(shí)和教會(huì)我們調(diào)查了解常見魚池的常見問題和魚類的常見病癥和治療方法，為將來的以后的工作打好基礎(chǔ)。

七、實(shí)習(xí)的意義：

實(shí)地調(diào)查體驗(yàn)學(xué)習(xí)是本科教學(xué)計(jì)劃中非常重要的實(shí)踐教學(xué)環(huán)節(jié)，是理論教學(xué)的完善和補(bǔ)充。同時(shí)將理論知識(shí)與實(shí)際應(yīng)用聯(lián)系起來，增強(qiáng)自己的直觀認(rèn)識(shí)。了解現(xiàn)在魚池常見魚病和魚池環(huán)境的調(diào)制，從而更好地理解和鞏固專業(yè)知識(shí)，并擴(kuò)展專業(yè)技術(shù)在生活實(shí)際的運(yùn)用認(rèn)識(shí)。還有就是牢固樹立我們的群體意識(shí)，培養(yǎng)我們的團(tuán)結(jié)合作精神，使我們?cè)趯I(yè)知識(shí)和個(gè)人素質(zhì)兩方面得到鍛煉和加強(qiáng)，從而為畢業(yè)后，走向工作崗位，短時(shí)間內(nèi)適應(yīng)工作要求打下良好的基礎(chǔ)。

八、實(shí)習(xí)內(nèi)容： 二零一六年五月十六日中午接到黃老師的實(shí)習(xí)電話，我們幾人就乘車趕往漢壽村，首先在黃老師開的店鋪里搬了很多的藥物，大多是送往下面的經(jīng)銷商的，魚藥的類型大多是防治類型，治療輪蟲的居多，小部分的是改善池塘水質(zhì)的。到魚病發(fā)生地的第一眼就發(fā)現(xiàn)天氣正好，晴天，魚塘都在開增氧機(jī)，不過水質(zhì)不太行呈現(xiàn)淡黑色，隨后幾位漁民撈出幾條病魚進(jìn)行檢查，先是進(jìn)行的目檢，打開腮呈現(xiàn)的是一種腐爛的樣子，慘白無血，少數(shù)魚類有鱗片脫落，剖解發(fā)祥腸道有些發(fā)紅，類似腸炎，肌肉并沒有發(fā)現(xiàn)癥狀。

之后進(jìn)行鏡檢，主要檢查部位是鰓部，制好鰓部標(biāo)本之后放入顯微鏡檢查發(fā)現(xiàn)有少數(shù)指環(huán)蟲和少數(shù)鰓隱鞭蟲，沒有發(fā)現(xiàn)其他病蟲。

后面考察水質(zhì)經(jīng)過檢測(cè)發(fā)現(xiàn)大多水質(zhì)為N、P超標(biāo)，少數(shù)池塘為P不夠PH值過高

經(jīng)過一番的檢驗(yàn)初步推斷為：

1、魚類患有赤皮病

2、魚類還患有輪蟲病

3、魚類還有鰓隱鞭蟲

4、魚池環(huán)境不行，N、P超標(biāo)或者P不夠PH值過高

九、實(shí)習(xí)所得

環(huán)境改良方法：

1、定期潑灑生石灰水,既可直接增加池中的鈣,中和酸性淤泥,提高池水的pH值,有利于魚類及餌料生物的生長(zhǎng),又可起到防治魚病的作用。

2、要經(jīng)常給魚加注新水：魚生活在水中,水環(huán)境的好壞直接影響魚類的生存。水中還生長(zhǎng)著大量的餌料生物,它們也需要良好的生活環(huán)境和豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。因此,要經(jīng)常加注新水。

3、要合理的使用增氧機(jī)：高產(chǎn)魚池每3～5畝應(yīng)配1臺(tái)3千瓦的增氧機(jī)。它不但可增氧,還可以通過攪拌使池水上、下層溶氧趨于平衡,及時(shí)改善底層水體的低溶氧狀態(tài),促進(jìn)魚類及餌料生物的生長(zhǎng)。使用增氧機(jī)要在晴天中午、陰天下半夜至次日早晨開機(jī),連續(xù)陰雨天時(shí)待魚浮頭前開機(jī)。

4、每年6月以后,每月潑灑生石灰水1～2次,每次每畝魚池潑灑15公斤。高產(chǎn)成魚池定期補(bǔ)充磷十分必要。每次每畝潑灑磷肥3～6公斤,可在晴天上午10時(shí)左右進(jìn)行。先將磷肥對(duì)水溶解后,再全池潑灑。注意在潑灑磷肥的當(dāng)日不能在魚池中拉網(wǎng),也不能加注新水。凡潑灑過生石灰水的魚池應(yīng)隔10～15日后再潑灑磷肥,否則會(huì)因有效磷轉(zhuǎn)化為磷酸三鈣沉淀而失效。

赤皮病治療方法：

出血性腐敗病又稱赤皮病、赤皮瘟。赤皮病是草、青魚的主要疾病之一。此病多發(fā)生于2-3齡大魚，當(dāng)年魚也可發(fā)生，常與腸炎病、爛鰓病同時(shí)發(fā)生，形成并發(fā)癥。該病主要危害草魚、青魚、鯉魚、團(tuán)頭魴等多種淡水魚類，在我國(guó)各養(yǎng)魚地區(qū)，一年四季都有流行，但是以水溫25-30C時(shí)為流行盛期 [癥狀] 為體表局部或大部分出血發(fā)炎，鱗片脫落，特別是魚體兩側(cè)和腹部最明顯，背鰭或全部鰭的基部充血，鰭條末端腐爛，常爛去一段，鰭條間的組織也被破壞，呈破爛的紙扇狀(又稱蛀鰭)；有時(shí)病魚的上下顎和鰓蓋部分充血，現(xiàn)塊狀紅斑，有時(shí)也充血發(fā)炎。在鱗片脫落處和鰭條腐爛處往往長(zhǎng)有水霉。此病流行區(qū)域比較廣，且終年可見，常與爛鰓、出血癥并發(fā)。當(dāng)魚體受傷時(shí)，致病菌乘機(jī)侵入魚體，容易發(fā)生此病。當(dāng)冬季水溫極低時(shí)，魚體皮膚也會(huì)因凍傷而發(fā)生此病。

防治方法：

1、含氯石灰(漂白粉)，或20%二氯異氰脲酸鈉，或30%三氯異氰脲酸粉，或8%二氧化氯，一次量，每1噸水體，1-1.5g、或0.3-0.6g、或0.2-0.5g，或0.1-0.3g，疾病流行季節(jié)，全池潑灑，15天1次。2、8%溴氯海因，一次量，每1噸水體，0.2-0.3g，疾病流行季節(jié)，全池潑灑，15天1次。3、10%聚維酮碘溶液，一次量，每1噸水體，0.5-1ml，疾病流行季節(jié)，全池潑灑，15天1次。

4.五倍子，一次量，每1噸水體，4g，將五倍子磨碎后用開水浸泡，疾病流行季節(jié)，全池潑灑，15天1次。

5.大黃，一次量，每1噸水體，2.5-3.7g，先將大黃用20倍重量的0.3%氨水浸泡提效后，再連水帶渣，疾病流行季節(jié)，全池潑灑，15天1次。治療方法：1.諾氟沙星，或氧氟沙星，或氟甲喹，一次量，每1kg體重，30mg，或10mg，或30mg，拌飼投喂，1天1次，連用3-5天。

2.氟苯尼考或甲砜霉素，一次量，每1kg體重，均為5-15mg，拌飼投喂，1天1次，連用3-5天。

3.復(fù)方新諾明，一次量，每1kg體重，50mg，拌飼投喂，1天1次，連用5天，首次用量加倍。

4.磺胺間甲氧嘧啶，一次量，每1kg體重，2-4g，拌飼投喂，1天1次，連用3-5天，首次量加倍。

5.硫酸鏈霉素，一次量，每1kg體重用量20mg，肌肉注射，3天之后再注射1次。

鰓隱鞭蟲病

病魚鰓部無明顯的病癥，只是表現(xiàn)粘液較多。當(dāng)鰓隱鞭蟲大量侵襲魚鰓時(shí)，能破壞鰓絲上皮和產(chǎn)生凝血酶，使鰓小片血管堵塞，粘液增多，嚴(yán)重時(shí)可出現(xiàn)呼吸困難，不攝食，離群獨(dú)游或靠近岸邊不面，體色暗黑，魚體消瘦，以致死亡。但要確診，還得借助顯微境來檢查。離開組織的蟲體在玻璃片上不斷地扭動(dòng)前進(jìn)，波動(dòng)膜的起伏擺動(dòng)尤為明顯。固著在鰓組織上的蟲體不斷地?cái)[動(dòng)，寄生多時(shí)，在高倍顯微鏡的視野下能發(fā)現(xiàn)幾十個(gè)甚至上百個(gè)蟲體，即可診斷為此病。

流行情況：

鰓隱鞭蟲對(duì)寄主無嚴(yán)格的選擇性，池塘養(yǎng)殖魚類均能感染。但能引起魚生病和造成大量死亡的主要是草魚苗種，尤其在草魚苗階段飼養(yǎng)密度大、規(guī)格小、體質(zhì)弱，容易發(fā)生此病。每年5~10月份流行。冬春季節(jié)，鰓隱鞭蟲往往從草魚鰓絲轉(zhuǎn)移到鰱、鳙鰓耙上寄生，但不能使鰱、鳙發(fā)病，因鰱、鳙魚有天然免疫力成為“保蟲寄主”。同時(shí)，大魚對(duì)此蟲也有抵抗力 治療方法：

(1)魚種放養(yǎng)前用硫酸銅溶液洗浴20~30分鐘，藥液濃度是每立方米水中含藥8克。

(2)每立方米池水用0.7克硫酸銅和硫酸亞鐵合劑(5:2)，全池遍灑。

車輪蟲病

車輪蟲和小車輪蟲。病原為車輪蟲和小車輪蟲。主要危害多種魚類的魚苗，魚種階段，流行的高峰季節(jié)為5-8月，水溫20-28℃。寄生在體表和鰓上，魚苗可出現(xiàn)“白頭白嘴”或“跑馬”（環(huán)游不止）癥狀。

流行請(qǐng)況：

主要危害多種魚類的魚苗，魚種階段，流行的高峰季節(jié)為5-8月，水溫20-28℃

治療方法： 1硫酸銅和硫酸亞鐵，一次量，每1立方米水體，0.5g和0.2g，配制成合劑后全池潑灑一次。

2、苦參堿溶液，一次量，每1方米水體，0.4g，全池潑灑1-2次。

3、嚴(yán)重時(shí)，苦參堿溶液和阿維菌素溶液配合使用，量不變。

李帥

二零一六年五月十六日

第三篇：標(biāo)本制作方案

環(huán)境生態(tài)學(xué)野外實(shí)習(xí)

一、目的與意義

培養(yǎng)植物鑒別能力，盡可能多地、熟練地掌握并準(zhǔn)確地識(shí)別各種植物。了解植物標(biāo)本的制作過程。

二、主要內(nèi)容

1.野外采集植物 2.標(biāo)本的制作 3.植物的鑒定

三、步驟

（一）準(zhǔn)備

采集前應(yīng)先收集有關(guān)采集地的自然環(huán)境及社會(huì)狀況方面的資料，以便周密安排采集工作。同時(shí)應(yīng)準(zhǔn)備采集必需的用品，主要有：標(biāo)本夾（45×30cm方格板2塊，配以繩帶）、標(biāo)本紙（吸水性強(qiáng)的草紙，折成略小于標(biāo)本夾的3～5張一疊若干）、采集袋（塑料袋）、細(xì)繩、枝剪、標(biāo)簽、野外記錄紙、照相機(jī)等。

（二）采集標(biāo)本的要求

1.從同種眾多單株中，應(yīng)選擇生長(zhǎng)正常，無病蟲害，具該種典型特征的植株作為采集對(duì)象。力求有花有果（裸子植物有球花、球果）及種子。

2.適當(dāng)?shù)販p掉一些過密或過長(zhǎng)的莖枝、過繁的花、葉、果。枝、葉、果、花要展開平放，避免重疊與堆積，注意順其自然，保持其原有特征。

3.草本植物要挖出根，植株高的可以采下后折成“V”或“N”字形，或者是取代表性的上、中、下3段分別壓在標(biāo)本夾內(nèi)。

4.喬木、灌木只能采取植物體的一部分，剪取帶花或是果實(shí)的枝條。

（三）采集步驟

1.初步修整。如去掉部分枝、葉，留下分枝及葉柄一部分。2.掛上標(biāo)簽。采集簽應(yīng)包括采集時(shí)間、采集者、采集地點(diǎn)。

3.填寫野外記錄。野外記錄包括采集時(shí)間、、采集者、采集地點(diǎn)、海拔高度、樹高、胸高直徑、樹皮、樹枝葉、花、果、習(xí)性、生態(tài)環(huán)境、用途、俗名、正名、學(xué)名、科名、備考。當(dāng)然實(shí)際操作也未必要填這么多的，可以根據(jù)情況酌情填寫。4.將植物暫放塑料采集袋中。

（四）標(biāo)本的壓制與裝幀

壓制是標(biāo)本在短時(shí)間內(nèi)脫水干燥，使其形態(tài)與顏色得以固定。標(biāo)本制作是將壓制好的標(biāo)本裝訂在臺(tái)紙上，即為長(zhǎng)期保存的臘葉標(biāo)本。壓制與制作標(biāo)本須注意以下各點(diǎn)：

1．順其自然，稍加擺布，使標(biāo)本各部，尤其是葉的正背面均有展現(xiàn)（葉片既要有正面壓制的也要有反面壓制的）?？梢栽俣热∩嵝拚⒁獗３制涮卣鳌?．葉易脫落的種，先以少量食鹽沸水浸0.5～1分鐘，再以75% 酒精浸泡，待稍風(fēng)干后再壓。

3．及時(shí)更換吸水紙。采集當(dāng)天應(yīng)換干紙2次，以后視情況可以相應(yīng)減少。換紙后放置通風(fēng)、透光、溫暖處。捆綁標(biāo)本夾時(shí)，松緊要適度，過緊易變黑，過松不易干。標(biāo)本間夾紙以平整為準(zhǔn)。如球果、枝刺處可多夾些。換下的潮濕紙及時(shí)晾干或烘干，備用。

標(biāo)本壓制干燥后即可裝訂，裝訂前應(yīng)做最后定形修整，然后縫合在臺(tái)紙上（30～40cm重磅白版紙）。縫合的時(shí)候一般取一些莖或枝，草本植物為全株，用線固定在白版紙上，葉片用白乳膠粘，葉片之間盡量不重合。將野外記錄貼左上方，定名簽填好貼右下角，此簽不得隨意改動(dòng)。對(duì)定名簽鑒定的名稱有異議，可另附臨時(shí)定名簽。標(biāo)本布局應(yīng)注意勻稱均衡、自然。

四、結(jié)果與記錄 1.標(biāo)簽

2.野外記錄簽

對(duì)照?qǐng)D書館中?貴州省植物志?完善野外記錄簽

3.定名簽

五、總結(jié)與思考

作業(yè): 1.所制標(biāo)本

2.?貴州省植物志?中與所制標(biāo)本植物一致的圖片的照片一張 3.總結(jié)與思考一份 標(biāo)本實(shí)例： 草本

喬木：

灌木

第四篇：常規(guī)標(biāo)本制作程序

常規(guī)標(biāo)本制作程序

第一節(jié)

組織標(biāo)本收集取材固定 一，標(biāo)本收集和查驗(yàn)程序。

對(duì)于所有送檢的標(biāo)本，必須認(rèn)真執(zhí)行查驗(yàn)程序，方能進(jìn)入下一程序，其主要程序是：

1，收集標(biāo)本時(shí)：要仔細(xì)查對(duì)申請(qǐng)單上的姓名與標(biāo)本上的姓名，序號(hào)是否一致；標(biāo)本的件數(shù)與申請(qǐng)單是否相符；標(biāo)本是否用固定液固定過。

2，標(biāo)本經(jīng)上述驗(yàn)收后，進(jìn)行編號(hào)登記，以防錯(cuò)亂。編號(hào)按年份和流水號(hào)兩種方法，如果為了今后的查找較為方便，按年份編號(hào)為較好。

二，活檢組織取材：在外科送檢的諸多材料中，對(duì)于每一例病例的材料，大小都不一樣，但對(duì)于較大的標(biāo)本，不可能都對(duì)其進(jìn)行制作切片，因此，選擇適合于病理技術(shù)制作，適合于病理診斷且有利于回顧性研究等各方面的材料，是病理活檢的關(guān)鍵，通常把這過程稱為取材。

（一）取材時(shí)必須注意以下問題：

①

取出所有送檢的標(biāo)本，量其大小，稱其重量，描寫其色澤，質(zhì)地，形狀和肉眼所見表面情況。當(dāng)標(biāo)本切開后，應(yīng)詳細(xì)描寫其切面的顏色，硬度，病變部位等，必要時(shí)繪圖說明。

②

對(duì)于細(xì)小標(biāo)本如肺支氣管穿刺物標(biāo)本胃腸鏡活檢標(biāo)本

[1]等，應(yīng)將其染上伊紅顏色后，用擦鏡紙或特別脫水袋將其包上或裝上，以防漏出脫水盒的小孔。

③

對(duì)于有傳染性的標(biāo)本，讓標(biāo)本徹底固定后再取材。如結(jié)核瘤標(biāo)本等。

④

對(duì)于罕見特殊的標(biāo)本，應(yīng)小心保存好，在不影響診斷的情況下，盡量保存好大體標(biāo)本。以利于教學(xué)標(biāo)本，陳列標(biāo)本的收集。

⑤

邊取材邊固定，組織標(biāo)本較多的單位，取材經(jīng)常要花上幾個(gè)小時(shí)，如果從下午2：30開始取材，至5：30完成，那么先取的材料就可以多固定幾個(gè)小時(shí)，如此可以防止固定時(shí)間不足，同時(shí)也可防止組織發(fā)生自溶。

⑥

對(duì)于骨髓穿刺的組織，可先用10%硝酸浸泡30分鐘左右，然后再與其它組織進(jìn)行處理。

⑦

骨組織和鈣化組織，應(yīng)徹底脫鈣后，方能進(jìn)行制作。具體用大頭針能順利扎入骨組織則可。

⑧

活檢組織取材，不能太厚，以不超過2mm為宜。以防脫水不徹底，不利于制片。

⑨

每取完一例標(biāo)本后，所有的工具如刀，剪，盤鑷，切板等，必須用水沖洗干凈，以免污染，混淆于其它病例。⑩

組織取完即刻放入打印好號(hào)碼的盒內(nèi)，放入固定液中固定。

（二）各種器官及其腫瘤取材的方法

1、乳腺：

纖維腺瘤：肉眼觀察其形狀、體積、包膜是否完整，切面是否均勻，有無壞死，取材：腫瘤連包膜1-3塊（即周邊組織1塊，包膜與周邊組織1塊，如果腫瘤不大，上述幾種即周邊包膜和腫瘤可取1塊）。

乳腺癌：體積，皮膚顏色，有無水腫或變硬，腫大淋巴結(jié)，數(shù)量，組別，硬度，及切面情況。沿乳腺的最長(zhǎng)徑經(jīng)過乳頭切開，觀察腫瘤的面積，顏色，硬度及浸潤(rùn)情況等。取材：乳頭及其下組織，腫瘤及腫瘤交界處，腫瘤下胸肌，全部淋巴結(jié)（注明組別），根據(jù)各種病變的情況，確定取材的塊數(shù)，如切緣、包膜、腫瘤等均應(yīng)取到各組淋巴結(jié)分別全部切材。

2、食管癌：

切除的食管長(zhǎng)度及周徑，管壁有無水腫或粘連，腫大淋巴結(jié)的位置，大小，硬度及數(shù)目。沿腫瘤對(duì)側(cè)縱形切開，腫瘤大小及形狀。取材：腫瘤上下交界處各取一塊?；蜓亻L(zhǎng)軸通過腫瘤全徑取出大切片或分成數(shù)段，全部淋巴結(jié)，分別切塊包埋

3、胃潰瘍及胃癌：

全胃或部分切除，大彎及小彎長(zhǎng)度，腫大淋巴結(jié)的部位、大小，硬度及數(shù)目，病變處相應(yīng)漿膜面有何變化。一般沿大彎剪開，觀察病變大小，深度，邊緣及周圍變化，如為癌瘤，屬何種類型，與大小切端的距離。取材：病變及與其交界處胃壁全層的胃組織（盡量側(cè)重于小彎，并注意沿長(zhǎng)軸切取組織塊），上下切端組織，腫大的淋巴結(jié)（注明組別）

4、闌尾：一般于近、中、遠(yuǎn)三段各取一組織塊，遠(yuǎn)端一塊盡量靠近尖端，以免遺漏尖癌。已被剖開者，沿縱軸取組織塊，如檢查時(shí)不能發(fā)現(xiàn)病變所在，需多做斷面，以尋覓病變部位和取組織塊。

5、腸癌：切除腸管的長(zhǎng)度，腫瘤 生長(zhǎng)部位、大小、局部漿膜等情況。如為十二指腸癌，則應(yīng)注意與特氏壺腹的關(guān)系。取材：腫瘤 及交界處腸壁全層組織，上下切端，腫大的淋巴結(jié)。

6、腸梗阻：梗阻部位、長(zhǎng)度、直徑及表面變化（顏色、水腫、充血、出血）；檢查腸系膜 的變化，沿病變血管解剖，作多數(shù)橫斷面，觀察血管壁是否變厚，尋找栓塞的起止部位；腸粘膜有無潰瘍。取材：病變最顯著處及腸的兩端各切一塊，病變血管（帶些系膜）各切一塊。

7、腸套疊：注意套疊部位及套疊 關(guān)系，尋找闌尾，腸壁是否增厚及變硬，以手指放入小腸為引導(dǎo)，沿腸系膜 剪開，尋找有無原發(fā)病變（在套入部位的最前端尋找有無腫瘤、潰瘍等到變化）。切面觀察各層腸壁的厚度、水腫、充血、出血、壞死及硬變等到情況。取材：原發(fā)病變（如腫塊，潰瘍等）。有變化的腸壁厚度，闌尾，腫大淋巴結(jié)。

8、腸結(jié)核：外部有無粘連，白色斑塊、結(jié)節(jié)、狹窄，病變上下的腸段有何改變，有無淋巴結(jié)腫大。沿病變對(duì)側(cè)切開，觀察病變情況（潰瘍、突起、體積、有無息肉樣改變，腸道是否變?yōu)楠M窄或增厚）。取材：病變部，上下切緣，腫大的淋巴結(jié)。

9、肝活體組織：大小、形狀、顏色、表面及切面有無結(jié)節(jié)狀或纖

維組織增生，有無灰白色結(jié)節(jié)等。取材：包含各病變的組織，如標(biāo)本較小，全部切取。

10、陰莖癌：腫瘤生長(zhǎng)的部位，大小，潰爛及向陰莖浸潤(rùn)情況，切端與腫瘤明顯浸潤(rùn)處的距離?？v切（通過尿管）觀察切面情況。取材：腫瘤切面一塊，陰莖截除端一塊。

11、腎結(jié)核：注入福爾馬林固定一周再切，體積，表面是否光滑，有無粘連、灰白色小結(jié)節(jié)，輸尿管長(zhǎng)度，直徑，及硬度。沿輸尿管及腎盂切開，腎盂是否擴(kuò)張，切面破壞情況，粘膜變化，主質(zhì)變化，乳頭情況，（注明哪一個(gè)）；輸尿管厚度，有否梗塞，粘膜情況。取材：腎主質(zhì)包括病變及交界處，輸尿管及切端。

12、腎盂積水：先抽去積液，再注入固定液后再檢查。腎體積、表面性狀（色澤、平滑否、結(jié)節(jié)、粘連）。沿腎、腎盂及輸尿管切開，注意阻塞部位及原因。觀察腎盞、腎盂及輸尿管擴(kuò)張情況，腎實(shí)質(zhì)厚度。取材：腎實(shí)質(zhì)厚處及薄處各取一塊，輸尿管各取一塊。

13、腎癌：腎及腫瘤之體積及重量，腫瘤部位及與腎的關(guān)系，表面有無水腫或粘連，有無腫大淋巴結(jié)。切面：腫瘤位置、形狀、大小、顏色、包膜、壞死、出血、囊性變，腎盂與輸尿管中有無蔓延。取材：腫瘤包括其旁的正常組織，腫瘤 以外的腎組織、輸尿管。

14、膀胱癌：全部或部代分膀胱切除，除非癌瘤位于前側(cè)，一般沿前側(cè)切開，腫瘤位置，與輸尿管中及膀胱的關(guān)系、體積、生長(zhǎng)

情況及浸潤(rùn)情況，有無淋巴結(jié)（大小，硬度，切面變化）。取材：沿縱軸方向取材。腫瘤及膀胱壁全層組織；乳頭狀瘤應(yīng)包括蒂部組織，三角區(qū)組織。

15、前列腺：形態(tài)，體積，顏色，硬度，包膜情況。切面：顏色，質(zhì)均勻否，有無壞死，出血，囊性變。作多個(gè)與尿道垂直的平行切面觀察。取材：顏色均勻處取一塊，不均勻時(shí)在發(fā)黃處盡量多切，包含尿道。

16、肺葉或肺段：先自支氣管注入福爾馬林固定。檢察前應(yīng)觀察X線片。病變與支氣管有關(guān)者，沿支氣管切開；病變不沿支氣管者，可作書頁狀切開：

① 肺癌：位置在支氣管哪一支，距切端多遠(yuǎn)，大小，形狀，質(zhì)地是否均勻，有無壞死、空洞、邊緣有無纖維組織圍繞或不規(guī)則浸潤(rùn)，是否壓迫支氣管干，肺門淋巴結(jié)情況。取材：癌組織，癌與正常組織的交界處，支氣管斷端，肺門或局部淋巴結(jié)。

② 支氣管擴(kuò)張：新鮮時(shí)剪開，系囊形或圓柱形（管形）擴(kuò)張，屬哪級(jí)支氣管，擴(kuò)張的支氣管之直徑，或?qū)挾?，管壁厚度，顏色周圍組織有何變化，粘膜光滑或呈皺紋，管腔有無膿液，是否穿破形成肺膿腫。取材：擴(kuò)張的支氣管，支氣管周圍發(fā)炎組織，膿腫壁。

③ 肺膿腫：部位、直徑、單腔或多腔，其中膿液性質(zhì)及氣味，有無懸梁狀血管，腔壁光滑度，厚度，是否與支氣管相通，有無散布的小膿腫，有無支氣管擴(kuò)張，支氣管中有無異物，膿腫內(nèi)有無硫磺樣顆粒。取材：膿腫壁，與膿腫有關(guān)的支氣管，肺組織。

④ 肺結(jié)核空洞：部位，直徑，單腔或多腔，腔中有無膿液、干革命酷樣壞死、懸梁狀血管，空洞壁厚度，及硬度，腔內(nèi)為肉芽或纖維組織，尋找與支氣管連通的瘺管及所散播的病變，肺門淋巴結(jié)情況。取材：空洞壁，散播的病變，肺門淋巴結(jié)。

⑤ 肺囊腫：數(shù)目，部位，直徑，囊腫壁光滑度及厚度，與支氣管的關(guān)系，收集囊內(nèi)液體檢查其性狀。取材：囊腫壁及其旁肺組織，如為包蟲病，則應(yīng)在包蟲囊的液體中尋找子囊及幼蟲頭節(jié)（離心后）。

17、脾臟：重量，大小、顏色，表面有否粘連，然后沿脾長(zhǎng)軸作多個(gè)平行切開，在切面上看包膜及脾髓情況。

① 淤血性脾腫大或脾功能亢進(jìn)，注意靜脈內(nèi)有無血栓，靜脈壁有無變化，有無梗死，切面上有無含鐵小結(jié)節(jié)。② 脾破裂：注意踴裂部位，長(zhǎng)度，有無血凝塊充填破裂口。取材：帶有包膜的脾組織，脾中心組織，脾門附近包括較大的血管，如有副脾，淋巴結(jié)各一塊，脾破裂應(yīng)包括裂呂充物。

18、淋巴結(jié)：大小，形狀，包膜情況，成群者注意相互間粘連情況，切面的顏色，均勻度，質(zhì)地，包膜，等情況。取材：整個(gè)短軸切面，互相粘連者包括粘連部位。

19、骨腫瘤：檢查前先看其X片。有皮膚軟組織者將與腫瘤無關(guān)部剔除，然后鋸開，有條件者，可與鋸開前攝X線片以作比較。

檢查腫瘤體積及形狀，切面顏色，硬度，出血，壞死，囊變，何處為原發(fā)，與骨膜，骨皮質(zhì)及骨髓之間關(guān)系，有無破壞情況，有無包膜，其厚度及硬度，無包膜者注意其對(duì)軟組織浸潤(rùn)情況。取材：腫瘤及與組織交界處，骨破壞處，軟組織浸潤(rùn)處。20、甲狀腺：重量，大小，形狀，有無結(jié)節(jié)，尋找背面有無甲狀旁腺，切面質(zhì)地是否均勻，含膠質(zhì)狀況，有無結(jié)節(jié)，出血，壞死，鈣化，囊變等，有無細(xì)小灰白色疤痕樣病變。甲狀腺腺瘤與腺癌：腫瘤部位，大小，包膜完整否，切面質(zhì)地，有無出血，壞死，鈣化，囊性變及其內(nèi)容物，有無乳頭或絨毛狀改變，腫瘤以外組織有無灰白色小節(jié)。

取材：最大面積，切成數(shù)塊全作切片，如為根治術(shù)，要取全部淋巴結(jié)。

21、刮宮或陰道排出物標(biāo)志：疑有妊娠者，須仔細(xì)尋找有無胎盤絨毛，眼觀不能判斷時(shí)，須取組織塊，尤應(yīng)注意檢查血凝塊。

22、子宮標(biāo)本：除按要求檢查病變外，如須研究宮頸癌，可與子宮頸12點(diǎn)，3點(diǎn)，6點(diǎn)，9點(diǎn)處取宮頸及宮頸內(nèi)膜交界處組織，必要時(shí)取其他各點(diǎn)組織。

23、卵巢腫瘤：形狀大小，較大者應(yīng)稱其重量，表面色澤，光滑度，與輸卵管的關(guān)系，有無粘連，囊性者自膨大部遠(yuǎn)端剪開，查囊與輸卵管腔是否相通，單房或多房，內(nèi)壁光滑度，有無質(zhì)或乳頭狀生長(zhǎng)區(qū)，乳頭脆性，囊內(nèi)容物性質(zhì)。實(shí)性腫瘤切面色澤、硬度，有無出血，壞死，變性等。

取材：囊性瘤取囊壁較厚處，實(shí)質(zhì)，突起處，囊與輸卵管相連處及輸卵管。實(shí)性瘤取邊緣及中央不同結(jié)構(gòu)組織及輸卵管。

24、胎盤：形狀，大小，重量，母體面絨毛有無缺損、出血、鈣化、變性壞死，及其范圍大小，羊膜和血管情況，臍帶長(zhǎng)度，直徑，有無扭轉(zhuǎn)打結(jié)、血管栓塞等。取材：母體面、子體面臍帶各一塊。

25、瘺管或竇道組織：應(yīng)作多數(shù)橫斷面檢查，適當(dāng)取材。

26、眼球標(biāo)本：標(biāo)本固定后，先經(jīng)緩慢脫水至今95%酒精，然后切開，除病變部位特殊取材外，一般取水平切面，通過視神經(jīng)和瞳孔。要求保存眼球隊(duì)的完整性，如結(jié)膜、視神經(jīng)、黃斑及晶狀體等，都應(yīng)完整無缺，切時(shí)刀刃銳利，以免人為地?fù)p壞眼球結(jié)構(gòu)。若須行火棉膠切片，而本單位無條件時(shí)，可送到有關(guān)單位檢查。

27、軟組織腫瘤標(biāo)本：部位、大小、形狀、色澤、表面有無包膜，完整否，硬度，切面有無出血、壞死、囊性變等，與周圍組織的關(guān)系，切面暴露最大面，必要時(shí)多作幾個(gè)平行切面。取材：腫瘤，周圍組織，切端組織。

28、其它標(biāo)本：依上述原則檢查及取材，如標(biāo)本有特殊情況，則依其特點(diǎn)處理。[2] 第三節(jié)

常規(guī)病理標(biāo)本的制作程序

常規(guī)組織固定

在組織病理學(xué)中，不管是組織切片乃至電鏡還是大體標(biāo)本的保存，都必須進(jìn)行及時(shí)的適當(dāng)?shù)暮陀行У墓潭?。組織只有經(jīng)過固定，才能完成隨后的一系列的制作，直至切片的最后完成。每個(gè)醫(yī)務(wù)工作人員都能容易地把組織固定起來，但是，要清楚了解固定的過程及其定義是一件十分不易的事，下面我們將逐一解答如下。

（一）、固定的作用

組織經(jīng)一系列的處理后，就必須進(jìn)行固定，當(dāng)然有的組織是先固定，再進(jìn)行處理，然后再固定。固定的作用，從組織學(xué)的角度其簡(jiǎn)單的定義是，保持細(xì)胞、組織的固有形態(tài)和結(jié)構(gòu)，使之盡量保持細(xì)胞、組織的固有形態(tài)和結(jié)構(gòu)，而從免疫組化技術(shù)的角度，固定的作用不僅是使細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)凝固，盡量減少或終止外源性酶和內(nèi)源性酶的反應(yīng)；防止細(xì)胞的自溶，以免使抗原擴(kuò)散至組織間質(zhì)；以保持組織的固有形態(tài)和結(jié)構(gòu)；更重要的是保持組織或細(xì)胞的抗原性，不但要使抗原不導(dǎo)致失活，而且不使抗原發(fā)生彌散的現(xiàn)象，才能在免疫組化染色時(shí)，不產(chǎn)生過深的背景，影響對(duì)陽性物的判斷。

（二）固定的目的

1、能防止細(xì)菌的腐蝕和組織的自溶。細(xì)菌無處不存在，它們隨時(shí)都可污染腐蝕未經(jīng)處理的組織。固定液可以固定任何蛋白質(zhì)，凡有生命的東西，都 由蛋白質(zhì)組成，蛋白質(zhì)被固定，生命就停止，細(xì)菌也就失去了活力。另者，在日常生活中，人們?？膳龅竭@樣的問題，一塊肉不經(jīng)處理放了幾天后就會(huì)變質(zhì)，這是為什么呢？除了細(xì)菌參與外，其本身也是很重要的。因?yàn)榻M織離體后，供應(yīng)這此組織的血液隨之消失，細(xì)胞缺氧，細(xì)胞內(nèi)溶酶體膜的結(jié)構(gòu)受到破壞，破壞后釋放出溶酶體酶，日常生活中常碰到的肉變質(zhì)，就是細(xì)菌污染加組織自溶的結(jié)果。

2、保存細(xì)胞固有的物質(zhì)，能凝固或沉淀細(xì)胞內(nèi)或組織液，糖元等，使細(xì)胞或組織基本上保持與生活時(shí)的物質(zhì)一樣。細(xì)胞的固有物質(zhì)，即細(xì)胞核、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體、高爾基器、溶酶體、過氧體，細(xì)胞骨架，組織液，抗原、糖元等。這些物質(zhì)，如果不將其及時(shí)固定，是很容易喪失的，尤其是溶酶體，很容易受到破壞，因此應(yīng)特別小心。

3、使組織硬化，便于切塊。剛離體的組織，除了胃組織以外，都是柔軟的組織，尤其是胃腸道的組織，如果在沒有固定時(shí)就取材，效果就很差，不是取材不規(guī)整，就是厚薄不均，粘膜和肌層很容易分開，因此，要取得規(guī)整標(biāo)致的材料，就必須將組織徹底固定，再行取材。

4、對(duì)某些具有傳染性的標(biāo)本，能防止疾病的擴(kuò)散。病理標(biāo)本、種類繁多，成份復(fù)雜，各種病例都有，具有傳染性的病種也不少，如結(jié)核、肝炎、麻風(fēng)、性病等等。對(duì)于此類標(biāo)本，應(yīng)進(jìn)行徹底的固定后，再行取材，如結(jié)核球，固定時(shí)間應(yīng)在3-5天。

5、保存好大體標(biāo)本。對(duì)于有教學(xué)任務(wù)的醫(yī)院病理科，除搞好疾病的診斷外，還有收集有價(jià)值的大體標(biāo)本，有些大體標(biāo)本，是很難得到的。因此要求在平時(shí)就要留心觀察，小心處理。遇到有教學(xué)價(jià)值的罕見的典型的標(biāo)本，就必須及時(shí)固定，認(rèn)真給予對(duì)待。

6、可增強(qiáng)染色的作用。組織經(jīng)過及時(shí)的固定，最終可見到切片有鮮艷的染色，而些時(shí)如果有一批未經(jīng)及時(shí)固定的組織，將看到最終的結(jié)果是，核染色不清楚，灰淡色，由此可得結(jié)論，固定可以增強(qiáng)染色的作用。

（三）固定的注意事項(xiàng)

1、組織固定越新鮮越好。組織一經(jīng)離體，就能及時(shí)地固定，這是最好的。根據(jù)實(shí)驗(yàn)，如果要獲得某些酶的染色，固定最好在組織離體后30秒至1分鐘。對(duì)于其它達(dá)不到些要求是越快越好。

2、組織固定，組織塊不宜過大。凡是需要固定的組織，都不應(yīng)該太大太厚，這是因?yàn)樗械墓潭ㄒ捍┩噶Σ粔驈?qiáng)，浸透度不夠快的緣故。如果較大厚的組織，不經(jīng)處理就進(jìn)行固定，那么待固定液進(jìn)入至中間對(duì)可能這些組織早就發(fā)生自溶了。因此，對(duì)于較大的組織，必須先進(jìn)行處理，切成制片材料再行固定，這是最佳的處理方法，如遇到胃腸的器官，則應(yīng)將其剪開，放平后，再行固定，若非特急病例，最好在固定后才取材，因這類組織、粘膜和肌層容易分開，沒固定時(shí)，難以取得最佳制片材料，對(duì)于產(chǎn)酶類的器官如肝、腎、脾等，更要處理好，否則更容易出現(xiàn)自溶現(xiàn)象。

3、對(duì)不同類型的組織應(yīng)適當(dāng)合理地選擇固定液。有的固定液對(duì)于組織有膨脹作用。固定劑是一種化學(xué)試劑，有液體和固體之分，一

般使用較多的是液體，而固體固定劑如多聚甲醛，則多用于實(shí)驗(yàn)研究的組織固定。固定劑的種類繁多，成份復(fù)雜，對(duì)組織的作用不盡相同，英國(guó)著名的組織化學(xué)專家Pearse指出：對(duì)于每個(gè)既定的組織化學(xué)方法來說，選擇最合適的方法是極為重要：在組織化學(xué)研究準(zhǔn)備階段不論采用什么固定劑，都必須盡可能確切地知道它們對(duì)于各種組織成分的反應(yīng)基團(tuán)的效用。Jones（1973），指出理想的固定劑必須具備的條件是，防止?jié)B透損傷和妝縮，以達(dá)到在各級(jí)可見度的水平皆無形態(tài)變化；要求組織所有的成分能保留于原位。他認(rèn)為有三種試劑即甲醛、戊二醛和丙稀醛接近于達(dá)到上述要求。[4] 為了更好地把組織中各種成分盡量保存好，盡量好給予顯示出來，就決不能千篇一律地使用一種固定液，而必須認(rèn)真地深入研究各種固定液的性能和使用方法。例如：丙酮，它對(duì)組織有明顯的皺縮，硬化作用，平常它是決不會(huì)被用來作固定液的，用它不但太浪費(fèi)，造價(jià)太高，而且也使切片較為困難，但是，對(duì)于某些酶的研究，狂犬病腦組織的固定，某些細(xì)胞的培養(yǎng)等。最好的固定液還是丙酮。因?yàn)槿绻褂酶栺R林固定液、石蠟切片顯示酸堿磷酸酶就顯示不好，狂犬病病毒的包函體就會(huì)消失掉，又如醋酸，它對(duì)膠原纖維等有膨脹的作用。由于各種固定液對(duì)不同的組織有不同的作用，因此許多專家將根據(jù)各種固定液的優(yōu)缺點(diǎn)，配制出許多混合液的方法來，給組織的良好固定起到了非常積極的作用。但是，值得指出的是并非所有的固定液都不是十全十美的，例如，酒精、甲醛、醋酸固定液，對(duì)組織固定很好，組織中各物質(zhì)的染色也十分清晰，但對(duì)固定脫水盒為銅質(zhì)的組織時(shí)，效果就不好，原因是醋酸跟酮可發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生醋酸銅，沉淀于組織中，可造成對(duì)抗原的損害，對(duì)于免疫組織化學(xué)的顯示，經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明：可呈弱陽性乃至陰性。由此可見，固定液的選擇正確與否決定著對(duì)某些病例的免疫組化標(biāo)記的成敗關(guān)鍵。在我們的日常工作科研中，對(duì)于組織的固定，應(yīng)有針對(duì)性的選擇，方能獲得滿意的效果。

4、組織固定，時(shí)間不宜太短，也不宜太長(zhǎng)。時(shí)間太短，就不能很多的固定組織，因?yàn)椴还芙M織大小，固定液浸入組織之中，都需要有一定的時(shí)間，時(shí)間太短，就會(huì)影響組織固定的效果，對(duì)以后一系列關(guān)系的處理都有影響，切片質(zhì)量難以保證，固定時(shí)間太長(zhǎng)，也不好。組織長(zhǎng)時(shí)間的固定，福爾馬林會(huì)產(chǎn)生一種酸，影響核的染色。對(duì)于固定很長(zhǎng)時(shí)間的陳列性標(biāo)本制片后切片染色不鮮艷，顯得非常陳舊。另外，長(zhǎng)時(shí)間的固定往往會(huì)出現(xiàn)福爾馬林色素，尤其是造血器官的標(biāo)本，更應(yīng)注意。固定時(shí)間過長(zhǎng)，可降低抗原的活性。

5、固定液的量要充分。固定液量的足夠與否決定著組織固定的成敗，有的人認(rèn)為，固定液的量與組織的比應(yīng)是20：1，這個(gè)要求對(duì)于小組織來說是完全可以達(dá)到的，但對(duì)于大標(biāo)本來說，則是一件非常困難的事情。因?yàn)閷?duì)于大醫(yī)院來說，每天都有幾十上百例的標(biāo)本，小如大頭針大小，大的達(dá)幾十斤的腫瘤，對(duì)于這樣大的標(biāo)本，按20：1的比例來做，顯然是不可能的事，既要做到組織

能固定好，又不使組織吹干就必須具體情況具體處理。對(duì)于大的標(biāo)本，原則上是不讓其暴露部分被吹干，這是因?yàn)樵诂F(xiàn)實(shí)111當(dāng)中，大的標(biāo)本往往露出容器一大半，因此對(duì)于這種情況，應(yīng)取些脫脂棉或紗布，浸濕固定液后，蓋于組織表面，以免使組織被風(fēng)干，影響制片效果。

6、特殊病例或特殊物質(zhì)應(yīng)選擇特殊的固定液。一般的病例標(biāo)本，如沒特殊的要求，都可以應(yīng)用甲醛配成的各種固定液來固定。但是，如果要顯示狂犬病毒的包含體時(shí)，應(yīng)用上述的的固定液就不行了，必須采用丙酮來固定，顯示糖元，可選擇無水酒精或丙酮來固定組織。固定劑是一種化學(xué)語試劑，有液體和固體及之分，平常使用的多為液體，Pearse指出，對(duì)每個(gè)既定的組織化學(xué)方法來說，選用最合適的固定方法是極為重要的；在組織化學(xué)研究中的準(zhǔn)備階段，不論采用什么固定劑，都必須盡可能確切地知道它們對(duì)于各種組織成分反應(yīng)基團(tuán)的效用。

7、組織的第二次固定或后固定。在一般的常規(guī)病理活檢組織中，往往用一種固定液，就能夠達(dá)到目的，獲得滿意的結(jié)果。但是，對(duì)于某些特殊病例光用一種固定液是不夠的，必須根據(jù)不同的情況，使用特殊的固定液再次將組織固定，或者在切片后染色前再行固定。這種方法稱為二次固定或后固定。例如：胚胎性橫紋肌肉瘤，由于腫瘤細(xì)胞發(fā)育較幼稚，完全不象成熟的橫紋肌組織所固有的橫紋，在進(jìn)行特殊染色前，就必須用Zenker氏固定液進(jìn)行第二次固定，方能較好地顯示出橫紋肌纖維來。否則，效果不佳。

另外，電鏡固定的標(biāo)本，通常都需要后固定。其使用方法是先用戊二醛固定，再用奧酸固定。

（四）固定液的使用

當(dāng)前，應(yīng)用于固定試劑的種類較多，它們對(duì)于固定不同的組織成分起著不同的作用，因此我們?cè)谑褂脮r(shí)應(yīng)該了解不同固定劑的效能，才能合理的固定組織。根據(jù)Bencroft的分類法，將不同的固定劑分為四種類型：

Ⅰ類：醛類，甲醛，戊二醛，多聚甲醛，丙烯醛，已二醛，丙二醛等。

Ⅱ類：氧化劑類，四氧化鋨（奧酸），高錳酸鉀，重鉻酸鉀等。Ⅲ類：蛋白變性類，甲醇，乙醇，醋酸等。Ⅳ類：其他，氯化汞，苦味酸等。[5]

上述四種類型的固定劑，最常使用的是甲醛，其余的也在其它病理技術(shù)方面中用到。下面根據(jù)使用的需要，將著重介紹幾種常用的固定劑。

（十）甲醛

甲醛商品名為福爾馬林，一般市售的含甲醛37—40%，由甲醛氣體飽和于水而成，比重為1.12。它也可以穩(wěn)定的固體形式存在，它的成分為高分子量的聚合體，稱為多聚甲醛。

甲醛溶液較難純化，在每批市售商品中，都含有不少的雜質(zhì)如甲醇，這種在組織化學(xué)方法當(dāng)中，能使酶鈍化，影響其反應(yīng)。甲酸，它可使固定液變酸，在陳列標(biāo)本或長(zhǎng)時(shí)間固定的組織，由于酸的作用，往往細(xì)胞核染色欠佳。

甲醛有效固定作用的要點(diǎn)是，在蛋白質(zhì)末端基團(tuán)之間形成交聯(lián)鏈。參與甲醛固定蛋白質(zhì)的基團(tuán)，主要為氨基，亞氨基及酰氨基，肽，胍基，羥基，SH和芳香環(huán)。甲醛與組織蛋白類的反應(yīng)是多樣和復(fù)雜的，因?yàn)樗芎投喾N不同的功能基團(tuán)結(jié)合，在多數(shù)情況下在其間形成橋鍵。甲醛有這種交聯(lián)的功能，也是它的缺點(diǎn)，在用甲醛固定過的組織中，需要做免疫組化的，往往提倡用酶消化或熱抗原修復(fù)法來使蛋白與甲醛交聯(lián)的醛鍵斷裂開，以利于后來的染色。

甲醛可配成簡(jiǎn)單的或混合的固定液，最簡(jiǎn)單和最容易掌握的方法，就是取10ml甲醛液，加水90ml，這就是10%的福爾馬林.當(dāng)然,現(xiàn)在使用的固定液要求較為嚴(yán)格些,最好是使用緩沖福爾馬林固定液,這將有利于后來的免疫組化染色的需要.從組織學(xué)的觀點(diǎn)來說,甲醛是一種良好的固定劑,它有很多的優(yōu)點(diǎn): 1.組織收縮較少,損傷少,保存固有物質(zhì)好.2.固定均勻,穿透力強(qiáng).3.能使組織硬化,增進(jìn)組織彈性,有利于切片.4.能保存脂肪及脂類物質(zhì).5.成本較低.雖然甲醛有上述的優(yōu)點(diǎn),但這都是相對(duì)而言,任何物質(zhì)都不可能十全十美的,它也有許多缺點(diǎn): 1.雜質(zhì)含量較多,如甲醇,可鈍化酶類,影響反應(yīng).2.含有微量甲酸,導(dǎo)致固定液酸變,影響染色.3.可產(chǎn)生福爾馬林色素,影響觀察.4.不能固定尿酸和糖類物質(zhì).5.容易揮發(fā),污染環(huán)境,可導(dǎo)致標(biāo)本干涸.6.可長(zhǎng)期存在于固定過的組織上.有人做過實(shí)驗(yàn),組織用甲醛固定后在流水中沖洗5小時(shí)后,仍留有相當(dāng)多的甲醛與蛋白質(zhì)相結(jié)合,但需要經(jīng)過長(zhǎng)時(shí)間的流水沖洗(24天的沖洗)方能除去.可見存在于組織上的甲醛是不可能除去的.因?yàn)榕R床活檢不可能有這么長(zhǎng)的時(shí)間來沖洗組織.因此要特別指出的是,在其后的各種技術(shù)操作中,要特別注意到甲醛的存在,必須要想辦法除去它,否則將會(huì)給各種染色造成影響,甚至導(dǎo)致失敗.應(yīng)用甲醛,可以配成許多種固定液: 1.10%緩沖福爾馬林固定液 甲醛

100ml 蒸餾水

900ml NaH2PO4·H2O

4g Na2HPO4(無水)

6.5g 該固定液是當(dāng)今流行的固定液,因它對(duì)組織固定較好,損傷較少,因?qū)ζ浜蟮母鞣矫娴难芯慷驾^好,尤其是對(duì)免疫組化的染色.2、10%福爾馬林固定液 甲醛100 ml

自來水900ml 這是一種最簡(jiǎn)單的固定液，適合于邊遠(yuǎn)地區(qū)攜帶的固定液，但由于它的單一性，因此，只要有條件的單位都不要求使用這種固定液。3、10%福爾馬林鹽固定液 甲醛100 ml 自來水900ml Nacl9克

先將Nacl溶于水，再加入甲醛。這也是一種較為簡(jiǎn)單的固定液，但由于加入Nacl，它是一種重金屬鹽物質(zhì)，加入了它可促進(jìn)和改善染色，增加染色的強(qiáng)度。

4、Bouin氏固定液 苦味酸飽和水溶液75 ml 甲醛2 ml 冰醋酸5 ml 該固定液中的冰醋酸，對(duì)膠原纖維等組織有膨脹作用。而甲醛對(duì)組織有收縮作用。兩種試劑的混合使用，用以抵消彼此間的副作用。使組織固定達(dá)到優(yōu)良的固定水平。5．醛糖鈣固定液 甲醛100ml 蔗糖300ml 乙酸鈣20g

蒸鎦水90ml 先將蔗糖和乙酸鈣溶于蒸鎦水，后加入甲醛。該固定液對(duì)于做酶的組織化學(xué)的研究效果較好，組織固定后，做冰凍切片，再給予顯示。

當(dāng)前國(guó)內(nèi)外基本上都還是要用甲醛來固定組織。從免疫組織化學(xué)的角度來說，甲醛固定的組織大部分都可以用免疫組化的手段來檢測(cè)，據(jù)多人認(rèn)為，它對(duì)lgA，lgM，J鏈，K鏈和λ鏈的標(biāo)記效果較好，且背景清晰。但美中不足的是：經(jīng)它固定的組織，可與蛋白形成醛交聯(lián)蛋白，這種醛鍵可封閉抗原。固此，在免疫組化實(shí)際檢測(cè)中，應(yīng)根據(jù)不同的要求和需要，采用酶消化或者其它抗原修復(fù)如微波、高壓等的方法，以便破壞醛鍵重新暴露抗原。

（2）酒精：又稱乙醇，為無色透明的液體，沸點(diǎn)是78度，工業(yè)酒精是95%。酒精它有許多優(yōu)點(diǎn)：

1、可保存尿酸結(jié)晶和糖原等物質(zhì)。高濃度的酒精如95%，無水酒精可保存上述兩種物質(zhì)，因它們易溶于水，因此，要證明上述兩種物質(zhì)的存在，就不能用含水的固定液來固定組織。

2、能在任何比例的情況下與水混合，在病理技術(shù)中，酒精是一種十分重要的試劑，它起著關(guān)鍵的作用。如果沒有酒精，將會(huì)無法完成必要的工作。如組織的脫水，切片染色前后都離不開酒精，在常規(guī)的工作中，通常都用95%的工業(yè)酒精來配成60%、70%、80%、90%等不同的濃度來使用。

3、可溶解苯類物質(zhì)為染色步驟中的橋梁試劑。常規(guī)活檢等切片上的石蠟必須除去，才能進(jìn)行染色，能除去石蠟的物質(zhì)有苯及汽油等，常用的有苯類試劑，苯不溶于水，但能溶于酒精，酒精在這里充擔(dān)著除去苯和連接水的作用，為切片入水架起了橋梁，因此稱它為橋梁試劑。

4、能除去切片上的水份，使切片無水化。切片經(jīng)染色后，由于所用的試劑都為水溶液，因此在切片上含有大量的水份，這些水份經(jīng)系列梯度酒精的置換吸附后，到無水酒精中已完全無水，這樣處理對(duì)于切片的保存是有好處的，否則，切片將會(huì)褪色。

5、可用來保存標(biāo)本。大體標(biāo)本經(jīng)福爾馬林固定后，如為了陳列保存，必須取出沖冼。然后移入75%的酒精中。如果用福爾馬林作陳列標(biāo)本的固定液，則因?yàn)楦栺R林含有雜質(zhì)較多，液體容易酸化，時(shí)間一長(zhǎng)，會(huì)逐漸變?yōu)槲ⅫS色或淡黃色，影響美觀，影響陳列的效果。

6、可與其它試劑配成多種的混合固定液，有時(shí)為了加快固定，常采用酒精和其它試劑來配成混合固定液，這種固定液在固定的同時(shí)，兼有對(duì)組織脫水的作用。應(yīng)

用酒精配成的混合固定液有： ①

Carnoy氏固定液

氯仿

300ml 冰醋酸

ml 95%酒精

600 ml 該固定液固定組織快速，在固定的同時(shí)兼有脫水的作用。溶液中的氯仿和酒精，對(duì)組織的收縮較厲害，但應(yīng)用了冰醋酸，這種現(xiàn)象便被中和去。②

AF固定液

甲醛

ml

冰醋酸

ml 95%酒精

850 ml 這種固定液的作用與上液有相似之處，但要注意的是，凡使用含有醋酸的固定液，其脫水用具不能使用銅制的脫水盒，因冰醋酸跟銅離子起反應(yīng)，生成醋酸銅，這種物質(zhì)可沉淀于組織間，可破壞組織中的抗原，造成免疫組化檢測(cè)的失敗。應(yīng)用時(shí)應(yīng)多加注意。酒精也有許多不足之處，它的缺點(diǎn)是：

1、可溶解脂類物質(zhì)，凡要證明組織是否含有脂類和類脂物時(shí)，切不能用含有酒精的固定液去固定組織，也不能用石蠟切片，因?yàn)榫凭蓪⑺鼈內(nèi)芙馊ィ炃衅M織中含有的脂類物質(zhì)，則在組織脫水時(shí)被溶解去，只留下脂類或類脂物所占有的空間。

2、對(duì)組織收縮較大，不宜作單純固定液。高濃度的酒精，對(duì)組織有顯著的收縮作用，造成組織發(fā)硬易脆，難以切片等現(xiàn)象。因此，它不作為單純的固定液。

3、滲透力不強(qiáng)。當(dāng)用酒精固定組織時(shí)，組織表面很快就被固定，并形成了一層蛋白膜，這層膜可阻擋固定液向里滲透，造成了中間組織固定不佳的現(xiàn)象。

4、可沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白，凡經(jīng)酒精固定的組織，核的染色都不好。

5、可脫去切片上已著染的各種顏色，切片經(jīng)染色后，一是必須洗去多余的染液，二是必須脫去切片上的水。在用酒精洗切片時(shí)，必須仔細(xì)地掌握顯微鏡下觀察，還要掌握酒精的濃度，低濃底的酒精脫色力強(qiáng)，稍不注意，便可脫去切片上大部分的顏色。切片脫水時(shí)，要較快地通過低濃度的酒精，以免使已著染的顏色被脫去。

6、價(jià)格較貴。從經(jīng)濟(jì)學(xué)的角度，應(yīng)用酒精固定組織劃不來，例如：一瓶500ml的甲醛，可配成500ml的固定液，按每例標(biāo)本需要100ml計(jì)，可固定50例標(biāo)本，而一瓶 500ml的酒精，即使配成80% 酒精，也只能固定6例標(biāo)本，因此，若用酒精固定組織，其價(jià)格比用甲醛固定組織的要高8倍。

（1）冰醋酸。冰醋酸為無色透明的液體，易揮發(fā)，氣味大，一打開瓶蓋，整個(gè)文章都可聞其味道，純醋酸在17℃時(shí)常為結(jié)晶狀，因稱為冰醋酸，在冬天使用時(shí)，可用微波爐進(jìn)行解凍，再行使用，它的優(yōu)點(diǎn)有：

1、能迅速固定染色質(zhì)，助于染色，用醋酸配成的固定液，其作用快，固定效果均勻，對(duì)于染色質(zhì)的固定快，因此，用其作固定的切片染色好，在配其它染色液如明礬蘇木素和伊紅時(shí)，常常需加入一定量的醋酸，以促進(jìn)染色。

2、能使組織尤其是富含纖維的組織膨脹。

各種固定液對(duì)組織都有收縮的作用，尤其是對(duì)富含纖維的組織。而它不但不會(huì)使組織收縮，而且還會(huì)令許多組織發(fā)生膨脹的作用。根據(jù)這個(gè)特點(diǎn)，用它配成許多種不同的混合固定液，以達(dá)到固定好，收縮少，易切片，效果好等目的。用它配成的混合固定液有：（1）Zenker氏固定液：[6] 重鉻酸鉀

25G 升汞

50G 蒸餾水

1000ml 冰醋酸

50ml 先將重鉻酸鉀和升汞溶于水中，尢其是重鉻酸鉀，應(yīng)用熱水或加溫的方法將其溶解，然后過濾貯存于帶蓋的玻璃瓶中，如暴露于空氣中，該溶液將會(huì)被慢慢氧化而便顏色加深，導(dǎo)致失效。臨用時(shí)，取貯存液950ml，加入50ml的冰醋酸，即可使用。

應(yīng)用該固定液固定的組織，一般不要超過24h，取出組織，流水沖冼12小時(shí)以上，然后保存于75%-80%的酒精中，在切片染色前，必須用碘除去汞鹽的沉著。應(yīng)用該固定液的組織，細(xì)胞核及細(xì)胞漿染色十分清晰，特別是要顯示骨骼肌的橫紋時(shí)，應(yīng)用本液可獲得滿意的結(jié)果，但由于其含有醋酸，故不能用于保存細(xì)胞顆粒，紅細(xì)胞及含鐵血黃素。

（2）Flemming氏液 2%酸水溶液

200ml 1%鉻酸水溶液

700ml 冰醋酸

100ml 該液中的奧酸對(duì)脂肪組織既有固定作用，又有染色作用，對(duì)有髓神經(jīng)纖維也有固定兼染髓鞘的作用。如果做HE的染色，該液不適合。應(yīng)用該液固定的組織，切片不能太大過厚，一般1-2毫米厚固定時(shí)間1-3天，后經(jīng)水洗，保存于80%酒精中，除上述兩液體外，還有Bouin氏液和Carnoy氏液等。冰醋酸也有許多不足之處：

1、不能作為單一的固定劑。冰醋酸在實(shí)際應(yīng)用中，常被作為添加劑來使用，如許多種固定液，都加入了冰醋酸。另外，在蘇木素和伊紅染液中，也常加入了冰醋酸。

2、不能凝固蛋白質(zhì)，不能保存白細(xì)胞顆粒，紅細(xì)胞及含血鐵黃素等。

3、價(jià)格較貴。

(4)

重鉻酸鉀是一種固體，粉末狀，桔紅色，具有毒 性，較難溶解于涼水，因此在配制時(shí)用較高溫度的水來溶解，也較易發(fā)生沉淀。它的優(yōu)點(diǎn)是：

1、能固定脂肪及類脂物。

2、為髓鞘及嗜鉻細(xì)胞優(yōu)良的媒染劑。

3、可配成多種的混合固定液（1）Helly氏液[7] 重鉻酸鉀

25g 升汞

50g 蒸餾水

1000ml 甲醛

50ml 臨用時(shí)加入甲醛，因其加入后于24小時(shí)后可發(fā)生沉淀而失效，因用時(shí)應(yīng)特別注意。

該液是白細(xì)胞顆粒的優(yōu)良固定劑，因此凡為白細(xì)胞或造血器官如骨髓，脾臟及患先天性梅毒之肝臟等，可用此液固定。此液原配方要求加入硫酸鈉，但據(jù)我們經(jīng)驗(yàn)認(rèn)為，硫酸鈉在液中對(duì)組織無任何作用，故省去。（2）Orth氏液 重鉻酸鉀

20g 蒸餾水

1000ml 甲醛

100ml

該液固定組織較緩慢，不適合于作臨床的活檢固定液，4毫米厚的組織固定時(shí)間需36-72小時(shí)，該液對(duì)于染色質(zhì)的固定好，顯示清晰，但可溶解部分紅細(xì)胞和含鐵血黃素。重鉻酸鉀的不足之處有：

1、不能沉淀蛋白質(zhì)，它必須和醋酸配成混合固定液，方能發(fā)揮作用，產(chǎn)生鉻酸，沉淀蛋白質(zhì)。

2、具有毒性及產(chǎn)生高溫。在配制液體時(shí)，如清洗劑，當(dāng)加入硫酸時(shí)，可產(chǎn)生很高的溫度，并揮發(fā)出刺鼻的氣體，應(yīng)特別注意。

3、它不能長(zhǎng)期固定組織，經(jīng)它固定的組織應(yīng)充分水洗后保存于80%酒精中。

（六）氯化汞又稱升汞，具有毒性。單獨(dú)用于固定組織，對(duì)組織有較大的收縮力，故很少單獨(dú)使用。它可使組織蛋白凝固，迅速硬化而形成白色硬膜，這是由于它穿透力極弱所致，因此它不適合固定較厚的組織。它常與其它的試劑配成混合固定液，彼此抵消各自存在的不足，使固定組織的效果非常好。應(yīng)用升汞配成的固定液的優(yōu)點(diǎn)有：

1、細(xì)胞核及細(xì)胞漿染色清晰。

2、對(duì)白細(xì)胞顆粒，造血器官如骨髓和脾臟等是優(yōu)良的固定劑。

3、可配成許多混合固定液如：Zenker氏、Helly氏和Stieve氏等。

它的不足之處是：

1、容易產(chǎn)生汞鹽沉淀。經(jīng)升汞配成的混合固定液固定的組織，一是不能固定太長(zhǎng)時(shí)間，經(jīng)24h后沖水，然后保存于70%或80%的酒精中，二是在洗色前，都必須用碘除去汞鹽的沉淀，以免由于汞鹽沉淀在切片上而影響對(duì)切片的觀察。

2、對(duì)組織有較大的收縮力且穿透力弱，用它不能固定過厚的組織，因穿透力弱，組織中間部分固定不好。

3、具有毒性。

（五）、微波輻射固定組織。[8]－[9]

組織固定的結(jié)果是組織中的蛋白質(zhì)凝固，以保存組織中原有的微細(xì)結(jié)構(gòu)。常規(guī)固定用的是甲醛或酒精等。但是這些固定劑從某些方面來說其穿透力不很強(qiáng)，因而需要較長(zhǎng)時(shí)間的固定，另者，臨床上的冰凍切片，有的應(yīng)用快速加熱法預(yù)先固定組織，造成福爾馬林的極度揮發(fā)，污染環(huán)境，影響人們的身體健康，因此尋找其它固定組織的方法就成為研究的重點(diǎn)。微波輻射固定組織，就是在這種情況下產(chǎn)生的。

微波是一種具有能量的電磁波，在其運(yùn)動(dòng)期間可產(chǎn)生瞬間熱。由于微波的快速運(yùn)動(dòng)，也導(dǎo)致了物體內(nèi)部極性分子的快速運(yùn)動(dòng)，產(chǎn)生了熱量，致使組織蛋白凝固，因此，舊的叫法稱微輻射固定組織。按實(shí)際的應(yīng)稱為微波輻射凝固蛋白。

1、組織固定溫度和時(shí)間的選擇。

究竟微波產(chǎn)生的熱量需要多高，才級(jí)使蛋白凝固的呢：Masson氏等人的研究表明，700-90℃，對(duì)沒有固定的蛋白可發(fā)生變性。

Bernard經(jīng)過一系列的研究后認(rèn)為，肝、腎、肺的最佳固定溫度是70℃，和77℃，因?yàn)楦鞣N組織的結(jié)構(gòu)不同，成分不一，電子密度不一樣，因而固定所需要的溫度也不樣。我們的實(shí)驗(yàn)認(rèn)為，65℃左右的溫度可適合于各種組織，條件是固定取小塊材料，時(shí)間在截取3-4min。

2、微波爐檔次的選擇

目前市售微波爐品種繁多，要選用合適的微波爐，必須根據(jù)各人的使用習(xí)慣和愛好。微波爐一般分為高火、中火及低火。使用時(shí)要進(jìn)行系列實(shí)驗(yàn)。例如多少ml的固定液需要多少時(shí)間達(dá)到多少溫度，用的是哪一檔次的火等。

3、微波輻射需固定液的選擇

張素娟等應(yīng)用臨床活檢新鮮組織如：甲狀腺、乳腺和淋巴結(jié)，實(shí)驗(yàn)小鼠的腫瘤、肝臟、腎臟、心和肺等組織，分別用10%的福爾馬林和生理鹽水經(jīng)微波輻射后，通過HE、網(wǎng)染、AB-PAS以及幾種抗體如CEA、EMA和L26等的檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)，生理鹽水的結(jié)果最好。

一提固定，以往總與福爾馬林分不開，而經(jīng)微波輻射后的固定效果，竟然比前者好，這就解決了一大難題，即快速石蠟切片及冰凍切片的組織固定，以往用加熱固定的方法，其結(jié)果導(dǎo)致福爾馬林蒸發(fā)，使整個(gè)房間都充滿福爾馬林氣味，既污染了環(huán)境，也影響了身體的健康。雖然生理鹽水用微波輻射后對(duì)組織有良好的固定效果，但是它只能適合于少量的快速制片和某些

研究，絕不可能適合于大批量的活檢。因?yàn)榛顧z取材，現(xiàn)目前組織的制作，都基本上用機(jī)器來進(jìn)行，而所用的脫水盒，有銅和不銹剛的金屬物所制成，組織取材后，一個(gè)一個(gè)的盒子裝著組織，如果除去金屬來用微波固定，這是不現(xiàn)實(shí)的事情。另外，微波輻射，它的穿透力較弱，大量的組織塊，其中間是達(dá)不到要求的。

第四節(jié)

病理制片程序

一常規(guī)石蠟切片制片法

組織經(jīng)系列酒精的脫水，經(jīng)透明劑的作用，經(jīng)熔化的石蠟的浸漬，包埋后所切成的切片稱為石蠟切片。它適合于尸體解剖，臨床活檢和某些科研的切片。

（一）組織脫水

把含于組織內(nèi)或細(xì)胞內(nèi)的水份用脫水劑把其置換出來的過程稱組織脫水。不管是正常的組織，還是有病變的組織，都含有不同程度量的水分。據(jù)測(cè)定，人體的物質(zhì)組成約含水55~67%，蛋白質(zhì)15~18%，脂類10~15%，無機(jī)鹽3~4%及糖類1~2%[14]。如果不把這些水分脫去，石蠟切片將無法進(jìn)行，因?yàn)槭灪退荒芑旌显谝黄?，所以除去組織中的水分成為制片中的關(guān)鍵，用什么物質(zhì)才能擔(dān)當(dāng)起這個(gè)重任呢，至今為止，國(guó)內(nèi)所用的都是酒精。因它不管在什么樣比例的情況下都能和水混合，所以它可以慢慢地將水從組織中置換出來。酒精脫水力強(qiáng)，對(duì)組織又有硬化和易脆的不良影響。在使用時(shí)，通常是從低濃度至高濃

度，濃度系列通常是70%、80%、90%、95%和100%，組織經(jīng)過這一系列處理后，基本可達(dá)到脫水的目的。臨床上如使用含酒精的固定液固定組織時(shí)，(Carnoy氏、AAF液)組織不需要經(jīng)過低濃度的酒精，可直接進(jìn)入95%酒精脫水。組織脫水，目前常用的有兩種方法

1、人工組織脫水法

該法經(jīng)濟(jì)實(shí)惠，靈活度高，可根據(jù)不同的組織及其大小來確定脫水時(shí)間，也可根據(jù)不同組織及大小分批進(jìn)行脫水，其優(yōu)點(diǎn)是：

1、可根據(jù)不同的組織及大小，任意增減脫水時(shí)間，達(dá)到脫水目的。

2、可隨時(shí)觀察組織的變化，隨時(shí)中斷組織的脫水，不使組織過度硬脆。

3、可以多層次地進(jìn)行脫水。缺點(diǎn)

1、需耗費(fèi)人力，每個(gè)步驟的遞增都需要人工完成。

2、不能大批量的進(jìn)行脫水。

3、必須在班上完成脫水或者定點(diǎn)于某一濃度的酒精中過夜，晚上無法進(jìn)行梯度遞增。（2）、自動(dòng)組織脫水機(jī)脫水法

自動(dòng)組織脫水機(jī)的機(jī)型品種繁多，大小不一，國(guó)內(nèi)生產(chǎn)的軌道式和圓盤式兩種，國(guó)外生產(chǎn)的有圓盤式和柜式兩種，上述國(guó)內(nèi)外四種型號(hào)的機(jī)子，我們都使用過，根據(jù)使用的效果做一簡(jiǎn)單

介紹。

1、軌道式自動(dòng)組織脫水機(jī)。這種機(jī)子容量小，脫水用的試劑不足一升毫升，組織塊脫水用的提籃小，每次只能容納40塊組織左右，它適合于較小的單位，但不適合于大單位。另外，該機(jī)在運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí)，裝試劑的蓋子打開，試劑容易揮發(fā)，污染環(huán)境，對(duì)人身體健康不利。

2、圓盤式自動(dòng)組織脫水機(jī)。國(guó)內(nèi)生產(chǎn)的這種機(jī)器容量也不夠大，每天處理組織塊，40塊左右，如果大的病理科每天需要處理150塊左右組織塊時(shí)，需要這種機(jī)器4臺(tái)左右。這種機(jī)器脫水時(shí)也屬于揭蓋式的，因此，試劑容易揮發(fā)，特別在夏天，必須經(jīng)常添加試劑，以補(bǔ)充被揮發(fā)去的試劑。這種機(jī)器，對(duì)環(huán)境同上述機(jī)器一樣。國(guó)外生產(chǎn)的也有同類產(chǎn)品。

3、全密閉柜式電腦控制自動(dòng)組織脫水機(jī)。

這種脫水機(jī)由電腦、反應(yīng)缸和試劑貯存缸三個(gè)部分組成，這三部分可以分開使用，也可以結(jié)合在一起，形成一個(gè)柜式，一臺(tái)電腦可控制5臺(tái)脫水機(jī)。電腦功能包括時(shí)間、溫度和真空負(fù)壓等，可在小熒屏上顯示出來，同時(shí)可顯示正在進(jìn)行的脫水程序。根據(jù)需要，該機(jī)可編九套程序輸入電腦，我們的編程如下：第一套為正常室溫下脫水程序，該程序在換新試劑的幾天內(nèi)使用。第二套程序組織塊脫水不充分時(shí)啟動(dòng)使用，當(dāng)?shù)谌壮绦虻慕M織塊脫水不好時(shí)，則應(yīng)更換新液；第四套為周末程序，該套程序根據(jù)兩天的休假時(shí)間，安排好組織塊的脫水時(shí)間。第五套為

“八一”程序，第六套為“十一”程序，第七套為元旦程序，第八套為春節(jié)程序，這后面幾套為節(jié)假日程序，根據(jù)節(jié)假日的放假時(shí)間不同，編排不同的程序。反應(yīng)缸內(nèi)在15秒左右的時(shí)間里抽入反應(yīng)所需的試劑，當(dāng)按程序表的時(shí)間反應(yīng)完畢后，在15秒左右的時(shí)間，將其送回貯存缸，然后則另換其它試劑，如此反復(fù)，直至整個(gè)程序完畢。試劑貯存箱內(nèi)由12個(gè)缸組成，每個(gè)缸的容量為2.25升。其中用于裝固定液的缸1個(gè)，裝酒精脫水劑的缸7個(gè)，裝透明劑的缸為2個(gè)，另有2個(gè)缸，一個(gè)裝二甲苯，當(dāng)石蠟在反應(yīng)缸中完成或浸蠟后，被送回蠟缸（在反應(yīng)缸的右邊）后，用以清除遺存的石蠟，還有一個(gè)缸裝無水酒精，用以清除遺存的石蠟，還有一個(gè)缸裝有無水酒精，用以清除二甲苯的殘存液。

根據(jù)我們對(duì)各種不同的脫水機(jī)的應(yīng)用比較，認(rèn)為這種脫水機(jī)有以下特點(diǎn)：

1、該機(jī)容量大，每次可處理組織塊250-300塊，這對(duì)于大、中等醫(yī)院的病理科較合適。

2、全部密閉，所有的試劑都由管道輸送。這樣一是保證了試劑不揮發(fā)，尤其是夏天，室溫較高，試劑揮發(fā)快，如為揭蓋式的脫水機(jī)，試劑揮發(fā)的程度無法形容，幾乎每天都必須添加，這樣試劑用量大，二是對(duì)環(huán)境污染不明顯，保證了舒適的工作環(huán)境。

3、帶有定期的攪動(dòng)裝置，如此可使組織固定均勻，脫水徹底。

4、整個(gè)過程過置于真空負(fù)壓的條件下來進(jìn)行，尤其是浸蠟，可節(jié)省1/3以上的時(shí)間，浸蠟充分徹底，尤其是對(duì)多孔的組織如肺組織，效果更明顯。脫水機(jī)脫水的優(yōu)點(diǎn)有：

1、組織脫水均勻；

2、能在無人在的情況下完成組織的梯度遞增，完成脫水，透明和浸蠟程序，如此可節(jié)省人力物力。

3、能大批量地處理標(biāo)本。脫水機(jī)脫水存在的不足：

1、由于機(jī)子的的原因，在脫水時(shí)，大小組織一窩煮，造成小組織過度處理而產(chǎn)生硬脆的現(xiàn)象，使之難以切成佳片。

2、如為揭蓋式的脫水機(jī)，液體容易揮發(fā)，污染環(huán)境，影響工作條件。

（二）組織的透明

組織經(jīng)過一系列酒精的處理后，雖然組織里所含有的水分已基本上被脫去，但是組織脫水時(shí)機(jī)里可殘留著許多酒精，如果不將其去除掉，必然影響組織的進(jìn)一步處理，酒精不能溶解石蠟，必須尋找一種既能與酒精混合，又能溶解石蠟的試劑，方能使石蠟浸入到組織中去，這類物質(zhì)被稱為透明劑。它們是二甲苯、苯、三氯甲烷（氯仿）、香柏油、苯酚、松節(jié)油和汽油等。雖然透明劑種類多，但根據(jù)性能及效果看，還是二甲苯為最好。二甲苯是一種透明無色的液體，揮發(fā)性強(qiáng)，打開后即可聞其味

道，能溶解石蠟，能溶于酒精及丙酮等，但不能溶于水，它是一種良好的透明劑，組織經(jīng)充分脫水后放入該試劑，視組織的大小、種類的不同，確定不同的時(shí)間，便能達(dá)到透明目的。在一般的情況下，胃、腸粘膜透明時(shí)間5-10分鐘，鼻咽部及排出物為15-20分鐘左右，子宮肌瘤、平滑肌組織為60-120 分鐘?？傊M織的透明，應(yīng)視組織的大小而定，不能千篇一律，要經(jīng)常觀察組織的透明情況，組織一經(jīng)透明，就必須從二甲苯中取出。因?yàn)槎妆綄?duì)組織的硬化程度特強(qiáng)，如果在其放置過長(zhǎng)，就會(huì)引起組織的硬脆，難切片。如果組織在二甲苯放置到一定時(shí)間后，仍沒有達(dá)到透明，組織塊中間可出現(xiàn)粉白色的現(xiàn)象，這說明組織沒有完全脫水，處理這種情況有兩種方法，一是將其重新放入酒精脫水，然后再透明，這種方法處理的組織很硬，切片較難。另一種方法就是重取材。如果將沒脫水好的組織繼續(xù)做下去，切片將不完整?；蛘邿o法切片。

二甲苯及苯類物質(zhì)被認(rèn)為是一種致癌性的物質(zhì)，許多單位和個(gè)人都不敢用或盡量少用，或者在切片染色至酒精后，將切吹干就進(jìn)行封片，這種做法是非常糟糕的，以往切片的整個(gè)制作程序都強(qiáng)調(diào)不要使切片干涸，上述做法將會(huì)影響切片顏色的保存。其它的透明，由于作用較為緩慢，不適應(yīng)于臨床活檢，但為了某些研究，也可以使用一些緩慢性的透明劑，如此可使切片較為舒適，效果較好。

（三）、組織浸蠟

組織經(jīng)過透明劑的完全透明后，被移放于65?c左右熔化的石蠟中，于65?c的電熱恒溫箱中浸漬的過程稱為浸蠟。

組織在脫水時(shí)，組織中的脂類和類脂等物質(zhì)在脫水劑的作用下被溶解掉，留下了許多腔隙，許多管腔組織和血管，也有許多腔隙，這些都嚴(yán)重地影響了切片。組織浸蠟時(shí)，由于誘導(dǎo)劑（二甲苯）的作用，石蠟進(jìn)入到組織的各個(gè)角落，并在各個(gè)角落中保存下來。當(dāng)石蠟包埋后冷卻時(shí)，這浸入到里面的石蠟便可起到支撐的作用，而且使組織不致于變形，塌陷等現(xiàn)象，使切片能完整的切出，便于鏡下觀察。

組織浸蠟據(jù)多次文獻(xiàn)報(bào)到必須換幾次不同熔點(diǎn)的石蠟。石蠟有軟蠟和硬蠟之分，軟蠟的熔點(diǎn)有45?C、52~54?C。硬蠟的熔有56~58?C，58~60?C、60~62?C。浸蠟的順序 是先軟蠟，后硬蠟，浸蠟的時(shí)間根據(jù)組織不同而確定不同的時(shí)間。有的人指出組織浸蠟先放入二甲苯與石蠟等份混合的液體中浸漬然后再放入軟蠟、硬蠟。根據(jù)使用經(jīng)驗(yàn)我認(rèn)為不必要這樣做。因?yàn)榻M織經(jīng)二甲苯或其它透明劑透明后，在組織進(jìn)入石蠟時(shí)，自己還帶著殘存的透明液，如為手工操作，可將組織塊控干，盡量減少殘存液的存在，而自動(dòng)脫水機(jī)則不然，組織可存留一定量的透明劑，經(jīng)使用次數(shù)多次后，殘存的透明劑可把石蠟稀釋。因此機(jī)器程序處理的次數(shù)較多時(shí)，應(yīng)注意換石蠟，以防組織浸蠟效果不好。

（1）石蠟的性質(zhì)

石蠟是一種碳?xì)浠衔铮傻V物油的分裂產(chǎn)生，它的性質(zhì)是相當(dāng)?shù)牟煌?，其熔點(diǎn)在45~62?C之間。熔點(diǎn)高的為硬蠟，硬度較

高，適合于夏天切片的用蠟，熔點(diǎn)低的為軟蠟，54?C以下的稱為軟蠟，這種適合于組織化學(xué)的切片用蠟。根據(jù)石蠟的特點(diǎn)，根據(jù)季節(jié)的不同，合理地使用不同熔點(diǎn) 的石蠟，這是能否切好片，使切片產(chǎn)生帶狀的關(guān)鍵。（2）石蠟性質(zhì)的改善

為了獲得較好的連續(xù)切片，人們想出了許多種方法，對(duì)石蠟進(jìn)行改造，使石蠟的硬度和柔軟性更適合于佳片的切出，提出了許多種方法：

1.石蠟加熱冷卻法

剛購(gòu)入的石蠟,不管是動(dòng)植物切片石蠟也好,還是工業(yè)用蠟也好,都必須進(jìn)行處理,方法是:將石蠟放于容器里,于電爐上加熱,此時(shí)石蠟遇熱熔解并發(fā)出嗶嗶吧吧的聲音,這是石蠟中含有的雜質(zhì),遇熱后分解所發(fā)出的聲音,隨著時(shí)間的延長(zhǎng),溫度的升高,這種聲音將逐漸減少,直至消失。此時(shí)可將盛裝石蠟的容器浸入冷水中，石蠟?zāi)Y(jié)后，再繼續(xù)加熱，如此反復(fù)幾次即熔化—冷卻—熔化—冷卻。這種處理方法，可增加石蠟的密度和可塑性，除去雜質(zhì)。為達(dá)高質(zhì)量的切片，這是必經(jīng)之法。

2、增加和改善石蠟的韌性和粘度

這種方法則需要加入一些東西才能獲得，如蜂蠟和硬脂肪，蜂蠟最高熔點(diǎn)可達(dá)70余度，增加它可增加石蠟的硬度。石蠟切片切4—5um，60?C左右的石蠟可支撐得起，如要切1~3um，其硬度則不夠，因此，要制出較薄的切片，石蠟硬度一定要過關(guān)。

另外，增加石蠟的硬度還可以加入脂蠟酸、柏油、楊梅蠟等，雖然如此，石蠟經(jīng)處理后，用時(shí)的顏色如肥皂一樣為最好。

在了解了石蠟的性質(zhì)及如何改造它后，下面再了解組織浸蠟。

（3）傳統(tǒng)浸蠟法

這是手工操作和不帶真空負(fù)壓的浸蠟方法。根據(jù)石蠟的熔點(diǎn)，確定浸蠟箱的溫度。如硬蠟的熔點(diǎn)為62?C,浸蠟箱的溫度應(yīng)比石蠟熔點(diǎn)高出2~3?C，即浸蠟箱調(diào)在65?C，當(dāng)確定好后，將組織放入軟蠟，后轉(zhuǎn)入硬蠟，根據(jù)不同的組織，組織的大小來確定浸蠟時(shí)間，小組織20~30分鐘，大組織幾個(gè)小時(shí)不等。（4）真空負(fù)壓浸蠟法

真空負(fù)壓浸蠟法應(yīng)用一真空泵，將箱內(nèi)的空氣抽出來，形成真空負(fù)壓，在這種條件下，由于失重，各種分子活動(dòng)加快，促使浸蠟過程迅速完成。為了浸蠟完全徹底，全密閉自動(dòng)脫水機(jī)配有這一功能。

鼻咽部、宮內(nèi)膜

甲狀腺、肝、脾

子宮肌、平滑肌

所需

穿剌物、排出物

腎、淋巴結(jié)

胃、腸、橫紋肌等

溫度

傳統(tǒng)浸蠟法

40—90 min

90—150 min

180 min以上

65度

真空負(fù)壓浸蠟法：15 min

25—30 min

60—120min

70度

真空負(fù)壓所需壓力表：40KP

40—53KP 66、7KP 真空負(fù)壓浸蠟法使用時(shí)的注意事項(xiàng)：

1、真空恒溫干燥箱的溫度應(yīng)略高于傳統(tǒng)浸蠟法，因?yàn)樵诔闅庑纬烧婵諘r(shí)，箱中的熱氣會(huì)被抽出，致使箱中溫度下降，使熔化的石蠟?zāi)Y(jié)成塊，所以溫度調(diào)至70度左右為宜。

2、計(jì)時(shí)應(yīng)從浸蠟完全熔化時(shí)計(jì)起。抽氣時(shí)，箱中的溫度下降，此時(shí)浸組織塊的蠟如果處于凝固時(shí)，應(yīng)待其熔化后，方可計(jì)時(shí)。附：幾種組織處理程序。（1）常規(guī)組織處理程序1、2、3、4、5、6、7、8、9、組織塊沖水24小時(shí)。70%酒精24小時(shí)。80%酒精12小時(shí)。90%酒精12小時(shí)。95%酒精（1）2小時(shí)。95%酒精（2）2小時(shí)。100%酒精（1）1小時(shí)。100%酒精（2）1小時(shí)。二甲苯（1）30—60分鐘。

10、二甲苯（2）30—60分鐘。

11、軟蠟1小時(shí)。

12、硬蠟2—3小時(shí)。

（2）胃腸粘膜處理程序1、2、3、4、5、6、7、70%酒精10min。80%酒精10min。90%酒精10 min。95%酒精10min。100 %酒精10min。二甲苯5—10 min。浸蠟15 min。

（3）臨床手工脫水法。1、2、3、4、5、6、7、80%酒精過度。95%酒精過夜。100%酒精（1）1小時(shí)。100%酒精（2）1小時(shí)。二甲苯（1）30—60 min。二甲（2）30—60 min。浸蠟（真空負(fù)壓）90—120 min。

（4）全密閉柜式自動(dòng)脫水機(jī)脫水法（室溫）。1、2、3、4、5、10%緩沖福爾馬林2小時(shí)。90%酒精2小時(shí)。95%酒精2小時(shí)。95%酒精1、5小時(shí)。95%酒精1小時(shí)。6、7、8、9、100%（1）酒精1小時(shí)。100%（2）酒精1小時(shí)。100%（3）酒精1小時(shí)。二甲苯40 min。

10、二甲苯40 min。

11、石蠟（1）1小時(shí)。

12、石蠟（2）1小時(shí)。（共14小時(shí)50 min。）（5）全密閉柜式自動(dòng)脫水機(jī)脫水法（加溫至40度）。（6）全密閉柜式自動(dòng)脫水機(jī)脫水法（真空負(fù)壓）。注：（5）、（6）法詳細(xì)步驟同（4）法。（7）全密閉柜式自動(dòng)脫水機(jī)周末脫水法。1、2、3、4、5、6、7、8、9、10%緩沖福爾馬林20小時(shí) 90%酒精20小時(shí)。95%酒精5小時(shí)。95%酒精5小時(shí)。95%酒精3小時(shí)。100%酒精3小時(shí)。100%酒精1小時(shí)。100%酒精1小時(shí)。二甲苯40min。

10、二甲苯40 min。

11、石蠟（1）1小時(shí)。

12、石蠟（2）1小時(shí)。（共61小時(shí)20分鐘）

注：上述的臨床程序都是以當(dāng)天17：00鐘取材完畢后所設(shè)定的時(shí)間，17：00—第二天的8：00，剛好是15個(gè)小時(shí)，要想在8：00上班時(shí)包埋組織塊，就必需設(shè)定準(zhǔn)確的時(shí)間，否則將會(huì)延誤其它的時(shí)間，還有其它的如“五一”程序、“十一”程序和“春節(jié)”程序等，這些要根據(jù)休假的具體日期來確定每個(gè)步驟的時(shí)間。

（四）組織塊包埋

隨著科技的發(fā)展，組織塊的包埋由簡(jiǎn)單的人工包埋轉(zhuǎn)向用機(jī)器的半自動(dòng)包埋。

（1）石蠟包埋機(jī)包埋法：1、2、3、4、打開電源總開關(guān)，讓包埋機(jī)處于工作狀態(tài)。調(diào)高溫度，讓包埋蠟溫至65度左右。打開冷凍臺(tái)。

取出包埋模型，由腳踩踏或手控出蠟制，注入少量的石蠟后，挾入組織塊，小的多塊組織應(yīng)放在一起，大塊組織應(yīng)壓平，管狀和皮膚組織應(yīng)豎起來包埋，然后再壓上包埋盒，包埋盒上再注入少量石蠟，包埋完后，將其置于冷凍臺(tái)上，旁邊備有一盒冷水，當(dāng)冷凍臺(tái)上的包埋塊表面出現(xiàn)凝結(jié)時(shí)，迅速將它放入水中，然后取出蠟塊，修削去周邊的余蠟，按順序排列好于4?C冰箱或冰格中凍起來備用。

（2）傳統(tǒng)包埋法

1、將包埋框合成模型槽，注入石蠟。

2、打開組織塊脫水盒，取出組織塊，把平整的一面朝下，用鑷子輕壓，保持在一平面上。

3、每包埋完一塊組織塊，即將標(biāo)簽附上，以防出錯(cuò)或張冠李戴。（3）組織包埋時(shí)的注意事項(xiàng)

1、傳統(tǒng)包埋使用的鑷子、包埋框，都必須放于40?C的恒溫箱內(nèi)，否則在沒有暖氣設(shè)備的冬天，熔化的石蠟遇到冰冷的器械回馬上凝固，影響包埋。

2、傳統(tǒng)包埋法使用的包埋框有多種，如銅和鋁制品，但以銅的為優(yōu)，因銅的散熱較快。

3、包埋的石蠟溫度不宜過高，否則注入模型時(shí)，會(huì)四處溢流。

4、組織塊本身的蠟不能凝固，如果凝固了，應(yīng)放回重新加溫，使其熔化，否則會(huì)影響切片，或整塊崩出，破壞組織塊。

5、包埋完后，應(yīng)待蠟塊完全凝固，方可放入水中，否則未凝固石蠟會(huì)被水?dāng)D走，漂浮于水面，造成包埋塊蠟塊的缺損。

6、小的多塊的組織應(yīng)包埋在一起在一水平面上，否則切片美觀度不好，深淺不一的包埋會(huì)使有的切上，有的切不上或被修削去。

（五）蠟塊的修切

不管是組織包埋機(jī)包埋的蠟塊也好，還是傳統(tǒng)法包埋的蠟塊，切片前都需要很好的修切，才能更適合于切片。前者包埋的蠟塊，包埋盒周邊的石蠟，一定要去除掉，否則切片時(shí)，切片機(jī)上的持蠟器，將無法將其夾上，影響切片中間的部分，視組織的大小而確定是否需要修切，比如組織小米粒大小，這時(shí)應(yīng)將周邊多余的石蠟削去，按要求組織塊周邊的余蠟留有0.5CM即可，削去余蠟后，對(duì)于細(xì)小的組織，一張玻片可以多裱上幾個(gè)組織塊，對(duì)于疾病的觀察大有好處。削去余蠟的另一個(gè)好處是延長(zhǎng)切片刀的使用壽命，保證一把刀（一次性刀片）多切一些蠟塊，因?yàn)橛嘞灥拇嬖冢谇衅瑫r(shí)，增加了刀口的磨擦，使刀口容易鈍化。傳統(tǒng)包埋法的蠟塊，如為原始的包埋框所包埋的蠟塊，在分切蠟塊時(shí)，應(yīng)特別小心，以防損壞分切的蠟塊，造成切片的困難或難以形成連續(xù)切片（組織周邊余蠟存留太小或沒有）。目前大多數(shù)使用的是包埋盒，但包埋盒邊上多余的石蠟也要修切去，否則妨礙蠟塊上機(jī)切片。

（六）石蠟切片。

組織塊經(jīng)過一系列的處理后，便準(zhǔn)備切片，切片是檢查驗(yàn)證前面系列處理程序是否合適，如果不合適，便可在切片時(shí)顯示出來，比如組織脫水不好，組織表面將出現(xiàn)白色狀，切片肯定不好；如果浸蠟不徹底，切片也不能切出來；如果組織脫水或浸蠟過度，切片時(shí)呈粉沫狀或者呈波浪狀?？傊衅莻€(gè)關(guān)卡，任何虛假或馬虎都行不通。切片時(shí)必須具備的工具有：

（1）石蠟切片機(jī)，目前，國(guó)內(nèi)外常規(guī)使用的切片機(jī)有兩種型號(hào)，它們是：

1、輪轉(zhuǎn)式石蠟切片機(jī)，根據(jù)不同的情況，根據(jù)使用的習(xí)慣性來確定使用的機(jī)型，但據(jù)我所知，目前國(guó)內(nèi)使用的機(jī)型，絕大部分是這種型號(hào)，這種機(jī)型，購(gòu)買時(shí)只要選購(gòu)好機(jī)子，使用起來就能得心應(yīng)手，操作便利，換切蠟塊快速，可制作連續(xù)切片。尤其是教學(xué)片，有更大的好處。

2、平推式切片機(jī)（軌道式）這種機(jī)子雖然也有它的優(yōu)點(diǎn)，但從目前國(guó)內(nèi)使用的單位統(tǒng)計(jì)，是占很少一部分，這種機(jī)型，單一切片，比較費(fèi)力。

（2）切片烘烤箱，這種箱子可以自做，也有市售。

1、市售切片烘烤箱，該箱配有裱片用的溫水控制部分，另一半為切片的烘烤部分，溫度可進(jìn)行調(diào)節(jié)，范圍在0—100度間，邊切片邊烤片，這是最為理想的手段，其好處是，如果裱片時(shí)，有個(gè)別小部沒裱好，發(fā)生皺折，及時(shí)的烘烤可將其烤平。另者，當(dāng)切完最后一張時(shí)，前面的已烘烤差不多了，不用再費(fèi)多少時(shí)間就能烤好切片。

2、自做烘烤箱，這根據(jù)各單位的情況進(jìn)行制作，可以制作一個(gè)木箱，上面用鋁板制成，在前部挖一個(gè)口子，剛好放進(jìn)一個(gè)鋁制飯盒，這個(gè)可作為裱片用，內(nèi)將四個(gè)40—60W燈泡，外裝開關(guān)控制，這便是一個(gè)烘烤箱。

（3）小鑷子，小駝毛筆，切片刀或一次性刀片，玻片等。小鑷子最好選用眼科用的彎小鑷子，這對(duì)于挾取微薄的切片較有用，如果用大鑷子很容易弄破切片，選用的毛筆以駝毛筆為好，因?yàn)檫@種筆柔軟，不易弄破切片。切片刀最好選用一次性刀片，這種刀片好處有不用磨，節(jié)省人力和物力；如果刀片出現(xiàn)缺口，可另更換刀口，直至丟棄，而大的切片刀就不可能這樣使用，如果刀有切口，就要將刀口磨去，磨去刀口是很費(fèi)時(shí)的。

（4）切片。裝上切片刀，裝上蠟塊，修平切面，如果沒有特定標(biāo)志，原則上是暴露組織的最大切面，定好切片的厚度，一般切片在4-5um。腎穿切片一般厚度在3um以下，切片時(shí)，注意力要集中，認(rèn)真挑選佳片，切片完畢，應(yīng)注意保養(yǎng)切片機(jī)，使之處于良好狀態(tài)。保養(yǎng)時(shí)，滑動(dòng)面要滴上油，以利滑動(dòng)及旋轉(zhuǎn)自如，還有防銹作用。切片完后，除去殘留蠟，除去切片刀，先用濕布擦去余蠟，繼用干布擦干，再用油布擦一遍，最后用罩蓋好切片機(jī)，以防灰塵臟物落于切片機(jī)上，影響機(jī)器的滑動(dòng)靈活性。除了切片機(jī)要保養(yǎng)外，如為切片刀，必須保養(yǎng)，切片刀要經(jīng)常磨，保持鋒利的刀口，如果發(fā)現(xiàn)切片刀有刀口，要想辦法除去，每次用完刀后，用布擦干凈，再用油布擦，以防刀口生銹，影響切片。

（七）裱片

將漂浮于水面上的已展開沒有皺折的切片撈于載玻片上的過程稱為裱片或撈片?，F(xiàn)在市售的烘烤箱都與裱片器連在一起，裱片器上的水溫在界定溫度后，它可自動(dòng)調(diào)節(jié)。裱片時(shí)水溫很為關(guān)鍵，一般在45-55℃，如果水溫過高，超過石蠟的熔點(diǎn)，切片將會(huì)被熔化掉，如果水溫過低，在30度以下，切片則裱不好，皺皺巴巴，不能完成展片任務(wù)。

切片放入水后，在合適的水溫中它會(huì)自然展開，有個(gè)別沒有展開的，用小鑷子慢慢將其展開，鑷子的用力要恰到好處，如果用力過大，切片會(huì)被攪破，如果用力不對(duì)，切片無法展開。應(yīng)特別注意。當(dāng)切片展開后，用載玻片（有人喜歡用蛋白甘油涂于載片上，但據(jù)我們二十幾年對(duì)二十幾萬張活檢切片的經(jīng)驗(yàn)，沒有蛋白甘油涂片也能行）插入

水中，靠近展開的切片撈于載玻片上，撈片時(shí)應(yīng)盡量保持裱片器中的水不晃動(dòng)。一張載玻片可以撈一張切片，也可以撈數(shù)張乃至十幾張，這要看組織的大小和病理的需要，一般說大的組織撈一張切片就已足夠，小的組織最好就要求多撈一些。

（八）烘烤切片

切片的烘烤看似簡(jiǎn)單，只在烘烤箱或干燥箱一放，讓其烘烤就行了，但從某種意義上講，它也是一個(gè)關(guān)鍵，如果切片烘烤不好，到染色的時(shí)候，便會(huì)使切片脫離載玻片（掉片），使整個(gè)過程毀于一旦，因此，認(rèn)真烤好切片是制好切片的前提。怎樣才能使切片烘烤得好呢？我們的做法如下：當(dāng)切片裱于載玻片后，于烘烤箱邊豎立起來，控干水份，然后平放于烘烤箱的烤板上烘烤，溫度可調(diào)至70℃。當(dāng)最后一個(gè)蠟塊切完后，前面的切片也烤得差不多了。

關(guān)于切片的烘烤，尤其是需做免疫組化切片的烘烤，要特別的注意對(duì)抗原的保存，使它們能在合適的烘烤切片時(shí)間內(nèi)既不受到破壞，又能盡量地顯示出現(xiàn)，經(jīng)多組多次的實(shí)驗(yàn)認(rèn)為，溫度和時(shí)間是極為重要的。溫度過高能使蛋白變性，抗原失活至喪失，時(shí)間過長(zhǎng)，也會(huì)致使其失活和喪失。最初有人主張切片在60℃以下烘烤30-60min，然后進(jìn)行染色，依此法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果切片脫片率高，切片松動(dòng)的占100%，由于切片附貼不牢，染色時(shí)不敢用PBS充分沖洗，造成背影染色加深，鑒別特別困難。又由于脫片嚴(yán)重，重染次數(shù)增多，延誤了診斷，也造成人力物力的浪費(fèi)。究竟什么樣的溫度及時(shí)間才能做到既使切片附貼牢固，又不會(huì)對(duì)抗原造成影響的呢？經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明：切片在60℃恒溫箱中連續(xù)烘烤3-5小時(shí)最為合適。這種時(shí)間和溫度烘烤出來的切片，可以用于抗原修復(fù)，PBS的沖洗，可滿足做免疫組化的一切需要。切片在上述的烘烤時(shí)間和溫度是否對(duì)抗原有影響呢？筆者認(rèn)為，不必為此而擔(dān)心。因?yàn)榛顧z組織塊浸蠟時(shí)，浸蠟箱的溫度都調(diào)在65℃左右，組織塊在這樣的溫度中起碼要浸泡2小時(shí)以上，才能達(dá)到浸蠟較為徹底的要求。組織中的抗原，經(jīng)過65℃的考驗(yàn)，保留下來的，基本上都已具有耐熱性，因此，幾小時(shí)的烘烤，不會(huì)對(duì)抗原有影響，實(shí)驗(yàn)證明，上述的理論完全正確。

（九）切片的普通染色

普通染色又稱常規(guī)染色或HE（Haematoxylin and eosin）染色。它是病理技術(shù)中最常用的一種方法，通過它可以做出病理診斷和發(fā)現(xiàn)尋求別的輔助方法，以達(dá)到準(zhǔn)確，完整的病理診斷。（1）染色目的

病理學(xué)的所有切片，都必須通過一種以上的染料，通過各種不同的方法，將切片中各種不同的物質(zhì)，在不同染液的作用下，將其顯示出來，使之在光學(xué)顯微鏡下，能夠完全的觀看各種結(jié)構(gòu)。例如，HE染色，好質(zhì)量的切片可以清晰地顯示出許多不同的結(jié)構(gòu)，細(xì)胞核著藍(lán)黑色，細(xì)胞漿著粉紅色，軟骨著藍(lán)色等。清晰的結(jié)構(gòu)為診斷提供可靠的依據(jù)，因此，染色技術(shù)也是病理技術(shù)中的重要組成部分，必須不斷地總結(jié)，方能提高。如果染色不好，切片染色一團(tuán)糟，紅藍(lán)不分，結(jié)構(gòu)不清，層次不明，影響了鏡下的觀察，直接影響了臨床診斷，染色結(jié)果的好壞直接關(guān)系到診斷的準(zhǔn)確性。

（2）染色的作用

1．化學(xué)作用：所有的染色液中，可把它們分為兩種類型，一種為酸性，另一種為堿性。酸性染料中有染色作用的為陰離子；堿性染料中有染色作用的為陽離子，每個(gè)細(xì)胞也存在著兩種物質(zhì)，細(xì)胞核含的是酸性物質(zhì)，細(xì)胞漿含的是堿性物質(zhì)。在染色時(shí)，細(xì)胞核中的酸性物質(zhì)與蘇木素染液中的陽離子發(fā)生作用，細(xì)胞漿中的堿性物質(zhì)與伊紅染液中的陰離子發(fā)生作用，由于反應(yīng)的部位不同，結(jié)果著色有異。2．物理作用：在染色過程中，染液中的色素微粒子浸入到被染組織的粒子間隙內(nèi)，此時(shí)，因受分子的引力作用，色素微粒子被吸附而著色。由于各種組織有不同的吸附能力和不同的吸附程度，因此就可顯出來不同的顏色來。

一般來說，染色的學(xué)說還有許多，但說服力強(qiáng)的僅有上述兩種。但不管怎么樣解釋，實(shí)際上完成的每一種染色，都與上述兩種學(xué)說分不開，它們的作用是相輔相成，同時(shí)存在的。（3）染色方法及步驟

1．人工蘇木素，伊紅染色法（HE法）?切片浸入二甲苯中5-10min； ?切片浸入二甲苯中5-10min； ?100%酒精1min。?100%酒精1min。?95%酒精1min。?95%酒精1min。

?90%酒精1min。?80%酒精1min。?自來水洗1min。

?浸入蘇木素染液浸染10-15min。⑴自來水洗30second-1min。⑵1%鹽酸酒精分化30second。⑶流水沖洗15min以上。⑷1%伊紅酒精染3-5min。⑸90%或95%酒精分化30sec。⑹95%酒精30sec-1min。⑺95%酒精30sec-1min。⑻95%酒精30sec-1min。⑼100%酒精1min。⑽100%酒精1-2min。(21)碳酸二甲苯1min。(22)二甲苯1-2min。(23)二甲苯1-2min(24)二甲苯1-2min。中性樹膠封固。

結(jié)果：細(xì)胞核被染成深藍(lán)黑色；細(xì)胞漿被染成粉紅色；軟骨及鈣鹽被染成藍(lán)色；膠原纖維染成淡粉紅色，嗜酸性細(xì)胞及嗜酸性顆粒呈鮮紅色；彈力纖維呈淡粉紅色；某些蛋白性物呈粉紅色等。

第五篇：樹葉標(biāo)本制作教案

教師：盧佳佳

譚彥

授課對(duì)象：派潭二中學(xué)生

時(shí)間：7月18日10:00-10:40

地點(diǎn)：教室 《透明之美——樹葉標(biāo)本制作》教案

一、教學(xué)內(nèi)容：制作樹葉書簽，學(xué)習(xí)并復(fù)習(xí)初中有關(guān)葉片的知識(shí)。

二、教學(xué)目標(biāo)：通過樹葉書簽的制做，熟悉初中課本關(guān)于葉片的知識(shí)，提高學(xué)生動(dòng)手能力和協(xié)作能力，教會(huì)學(xué)生如何將知識(shí)運(yùn)用到實(shí)際。

三、重點(diǎn)和難點(diǎn)：樹葉書簽的制作和葉片知識(shí)的理解。

四、課的類型：實(shí)驗(yàn)操作課。

五、教學(xué)方法：教師在旁指導(dǎo)，學(xué)生親手做實(shí)驗(yàn)

六、教材教具準(zhǔn)備：

教材：新課標(biāo)人教版初中生物七年級(jí)上冊(cè)第三單元《生物圈中的綠色植物》 教具：化學(xué)試劑（碳酸鈉、氫氧化鈉混合溶液）、鑷子、一次性碗數(shù)個(gè)、一次性碟子數(shù)個(gè)、電飯煲一個(gè)、樹葉數(shù)片、刷子、一次性手套（注：教學(xué)過程需要板書）

七、教學(xué)時(shí)間：一個(gè)課時(shí)（40分鐘）

八、教學(xué)過程設(shè)計(jì)：

（1）導(dǎo)入：標(biāo)本知識(shí)的簡(jiǎn)單介紹（把植物某一器官制成半透明或透明的狀態(tài)，不必經(jīng)過解剖，就可以由外部直接觀察內(nèi)部構(gòu)造，這樣的標(biāo)本叫做透明標(biāo)本。例如莖、葉輸導(dǎo)組織的分布情況，花蕾內(nèi)部雌雄蕊的形態(tài)和位置等等，如果把它們制成透明標(biāo)本，即可直接進(jìn)行觀察。制作透明標(biāo)本的程序，可分為透明、漂白、脫水、保存等步驟。）（5分鐘）在導(dǎo)入過程中將實(shí)驗(yàn)器材分給學(xué)生。（2）教學(xué)新課：

對(duì)各種器材的簡(jiǎn)單介紹以及注意事項(xiàng)（碳酸鈉及氫氧化鈉溶液用于腐蝕葉肉，使用過程注意安全，所以要用一次性手套，刷子用于清除被腐蝕的葉肉）準(zhǔn)備就緒后，將葉片置于電飯煲的化學(xué)試劑中煮（10分鐘），此過程中介紹葉片的知識(shí)（葉片外表包圍一層表皮細(xì)胞，它具有保護(hù)葉片的作用。表皮里面是一些含有葉綠粒能進(jìn)行光合作用的葉肉組織。貫穿在葉肉組織間的是由輸導(dǎo)組織和機(jī)械組織所組成的葉脈。葉脈書簽就是除去表皮和葉肉組織，而只由葉脈做成。書簽上可以看到中間一條較粗壯的葉脈稱主脈，在主脈上分出許多較小的分支稱側(cè)脈；側(cè)脈上又分出更細(xì)小的分支稱細(xì)脈。這樣一分再分，最后把整個(gè)葉脈系統(tǒng)聯(lián)成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。把這種網(wǎng)狀葉脈染成各種顏色，系上絲帶，即成漂亮的葉脈書簽了。

葉肉：為表皮內(nèi)的同化薄壁組織，通常有下列兩種。（1）柵欄組織：緊靠上表皮下方，細(xì)胞通常1至數(shù)層，長(zhǎng)圓柱狀，垂直于表皮細(xì)胞，并緊密排列呈柵狀，內(nèi)含較多的葉綠體。在兩面葉或針形葉，柵欄組織亦分布于下表皮上方或整個(gè)表皮內(nèi)側(cè)四周，但亦有一些水生及陰生植物的葉是完全沒有柵欄組織的。

（2）海綿組織：細(xì)胞形狀多不規(guī)則，內(nèi)含較少的葉綠體，位于柵欄組織下方，層次不清，排列疏松，狀如海綿。

（3）葉脈：為貫穿于葉肉間的維管束。主脈部分維管束較粗大，側(cè)脈及小脈部分維管束較細(xì)小，通常為木質(zhì)部在上方的有限外韌型，較少為木質(zhì)部在中間的雙韌型。維管束四周主要為薄壁組織，漸靠近表皮則常有厚角組織或厚壁組織）將煮過的樹葉發(fā)給學(xué)生，學(xué)生用刷子刷去葉肉，制成葉脈標(biāo)本（20分鐘）

（3）小結(jié)：透明的葉脈標(biāo)本給我們以美的享受，自然界的一切都有美好的地方，正如夢(mèng)想一樣。（5分鐘）

（4）布置作業(yè)：將樹葉書簽曬干，寫下自己的夢(mèng)想或計(jì)劃

九、板書設(shè)計(jì)：

標(biāo)本：用植物某一器官，通過一定辦法而非經(jīng)過解剖，便能觀察其內(nèi)部結(jié)構(gòu) 器材使用：戴手套，防腐蝕 刷子一定要輕刷

葉肉：柵欄組織；海綿組織 葉脈：主脈；側(cè)脈

課后題：

1、葉的表皮細(xì)胞的主要作用

2、葉肉細(xì)胞分成那兩種組織

3、腐蝕葉片運(yùn)用了氫氧化鈉溶液的什么性質(zhì)

4、葉肉組織中哪個(gè)結(jié)構(gòu)進(jìn)行光合作用

5、樹葉標(biāo)本的用處是什么