第一篇：診斷學知識點匯總_復習資料

診斷學知識點匯總，復習資料

緒論

1、癥狀概念，2、體格檢查，3、診斷學內容 第一篇 常見癥狀

1、體征，2、正常體溫、稽留熱、弛張熱的定義，3、咯血定義，4、咯血與嘔血區別

5、呼吸困難定義，6、三種肺性呼吸困難表現（尤期前二種），7、心原性呼吸困難的特點

8、胸痛的病因，9、中心與周圍性紫紺不同原因，10、心原性與腎原性水腫的鑒別

11、肝原性水腫表現特點

12、急性腹痛的常見原因

13、嘔血的常見原因，出血量的估計，嘔血與便血的相互關系

14、黃疸（和隱性）的定義，三種黃疸的鑒別，15、嗜睡與昏睡的區別，淺與深昏迷的區別 第二篇 問診

1、問診的內容，2、主訴的定義和組成

3、現病史是病史中的主體部分，由哪些組成，與既往史有何不同 第三篇 檢體診斷

1、體檢基本方法有哪些？觸診的方法有哪些？叩診的方法，體型的分類

2，常見面容，三種體位，皮膚發黃二種原因的區別，紅疹與出血點 的區別，蜘蛛痣與肝掌購

3、霍納氏征，瞳孔大小的改變，4、扁桃體腫大的分度，5、頸靜脈怒張的定義

6、甲狀腺腫大的分度，聽到血管雜音的意義，7、桶狀胸

8、胸式（男，小孩）腹式（女）呼吸增減意義，9、深大呼吸，潮式及間停呼吸

10、觸覺語顫、聽覺語音的定義及方法，增減意義、11、正常胸部叩診音（4種），肺下界及移動度，12、三種呼吸音的區別

13、異常支氣管呼吸音聽診意義，14、羅音產生機理，二種羅音的鑒別

15、胸膜磨擦音的聽診特點，16、肺實變、肺氣腫、胸腔積液、氣胸的綜合體征。

17、心尖搏動點的位置，范圍，左、右心室肥大及縱隔移位時的變化 18、震顫定義與雜音的辨證關系

19、心臟叩診的方法，左右心界的組成，心濁音界改變的原因（左室肥大、右室肥大肺脈高壓，心包積液，左氣胸及胸腔積液）20、心臟聽診內容，聽診部位，21、早搏及房顫的體征，室早及房顫的ECG表現。

二、三聯律的概念。

22、第一、二心音的鑒別，23、第一心音增減及第二心音增減的意義，24鐘擺律，胎心律

25、第二心音分裂的聽診特點及臨床意義（正常人，二狹，PDA，RBBB，ASD—“固定”）

26、左心室舒張期奔馬律的聽診特點及臨床意義，27、OS及心包叩擊音的意義

28、心雜音分析內容，29、器質性與功能性雜音的區別 30、Austin Flint 及 Graham Steell的定義，31 連續性雜音的意義

32、異常脈搏，正常血壓，臨界高血壓，高血壓，低血壓

33、左、右心衰時的癥狀和體征，心功能級別（心功能不全度數）的判定原理及標準

34、二狹，二閉，主閉（周圍血管體征），主狹的綜合體征

35、腹部膨隆的意義，36、腹壁靜脈方向（上，下腔梗阻，門脈高壓，正常）

36、腹膜刺激征的檢查方法及意義（板狀腹，揉面感，壓痛點，反跳痛，麥氏點，膽囊點）

37、腹部包塊的檢查內容，38、液波震顫的意義

39、肝、脾觸診的方法，正常大小，40、莫菲氏征及膽總管漸進阻塞征

41、泌尿系有炎癥時的壓痛點，42、肝上界位置、脾界，及濁音寬度

43、移動性濁音及腹水與巨大卵巢囊腫的鑒別

44、振水音的意義，45、肝硬化肝功能失低償期，門脈高壓的全身綜合體征

46、胃腸穿孔致急性彌漫性腹膜炎時的綜合體征

47、區別上、下運動神經元癱瘓，偏癱和交叉癱的概念。肌力的分級

48、肌張力，震顫（靜止性，運動性，粗顫與細顫）

49、共濟運動的檢查方法和意義

50、生理反射，病理反射（巴氏征）的意義（錐體束損傷，上運動神經元癱瘓）82、腦膜刺征 第四篇 器械檢查 心電圖

1、胸導聯及肢導聯連接，心電軸的判斷及意義

2、每一小格橫、豎代表的時間、電壓，心率的計算

3、正常P波的方向，時間，電壓，“肺性P波”，“二尖瓣型P波”

4、QRS波：低電壓，左右心室肥大

5、ST-T改變與心肌缺血，6、心肌梗塞：特征性表現，演變過程，定位

7、正常竇性心律的心電圖特點，8、房性、交界性、室性早搏的心電圖特征

9、房室傳導阻滯：一度（P-R間期延長），二度，三度

10、P-R間期縮短：預激綜合征

11、房顫的心電圖特點（1、2、3點）第五篇 實驗室檢查 血液

1、血液三大系例正常值，2、中性粒細胞增減意義

3、中性粒細胞核左移，核右移，4、E的增減意義

5、Hct,Ret意義，骨髓

6、M/E，POX，NAP，鐵染色的意義

7、缺鐵性貧血的血象及骨髓象表現 出凝血

8、CFT，BT，9、血小板正常值與CRT

10、CT，KPTT，PT，11、PPP 尿液及腎功能

11、正常尿量，多尿，少尿，無尿的數值，12、血尿的概念，尿比重固定

13、蛋白尿的概念，尿糖，酮體陽性的意義，14、白細胞尿，膿尿，管型尿的意義

15、腎小球濾過功能，腎小管排泄功能和濃縮稀釋試驗的意義 糞便檢查

16、OB試驗的意義 腦脊液檢查

17、幾種常見腦膜炎的腦脊液的特點，18、漏出液與滲出液的鑒別要點 肝臟檢查

18、肝功能檢查包括哪些項目，急性病毒性肝炎和慢性肝病時肝功能有何變化？

19、AFP、AKP、γ-GT的臨床意義 第七篇 診斷方法和病歷

1、診斷常用的推理方法有哪些？

2、一元性診斷的意義

3、診斷的內容和格式，4、完整的住院病歷包括哪些內容，由哪些人負責編寫，病人入院后多長時間完成。

第二篇：分子診斷學復習資料 簡答題部分

簡答

基因組的特點：？（大題）人類基因組的特點：

1、人類基因組具有23對染色體，基因組序列大約2.9億個核苷酸，含有蛋白質編碼基因大約20, 000-25, 000個。其中大量基因與中樞神經系統，特別是腦部發育相關；

2、絕大多數基因為斷裂基因，且分布不均（每條染色體具有基因富集區和基因稀疏區）。除蛋白質編碼基因外，其他大量基因為RNA編碼基因；

3、基因內和基因附近中存在大量短序列調控元件，發揮基因的調控表達和協調表達的作用；

4、基因組（基因內）中存在大量功能未知的其他序列（“非編碼DNA”），如串聯重復序列、轉座元件。

5、序列突變是人類基因突變的重要來源，序列/基因多態性是研究人類遺傳突變的重要手段。

6、線粒體DNA（mtDNA）是人類母系遺傳疾病的重要來源基礎。真核基因組特點：

1.真核基因組結構龐大：人：3×109bp。幾、十、百倍于原核。

2.線性雙鏈DNA，多條染色體和二倍體（Diploid）：DNA和組蛋白質形成染色體，存在于核膜內。人：23對，46條；

3.單順反子(Monocistron)：一個結構基因轉錄生成一條mRNA。

4.功能基因不連續性，內含子與外顯子并存（斷裂基因）：轉錄后需剪接(Splicing)5.非編碼區多于編碼序列(9:1)6.含有大量重復序列（Repetitive Sequences): 重復次數可達數百萬次，序列多態性是真核生物基因組的重要特征。原核生物基因組的特點：

1.基因組呈共價閉合環狀雙鏈狀態，散布在細胞中，有時相對集中形成類核/擬核（Nucleoid）

2.基因組DNA小，基因數目少（1500-5900個），種間DNA大小差異大，GC含量差異大(菌種鑒定和分類標準），基因多為單拷貝基因（編碼rRNA、tRNA基因多拷貝，利于核糖體的快速組裝和蛋白質合成）

3.基因組只有一個復制起始點，功能相關的基因大多成簇地串聯排列（操縱子結構）在染色體上，結構基因無內含子，基因連續分布，為多順反子。

4.除主基因組外，原核生物往往還具有質?；蚪M

5.轉座元件/基因是原核生物基因組的重要特征（轉座元件（Tranposable Element）是指可移動的基因成分，即能在一段DNA分子內部或兩段DNA分子之間移動的DNA片段，又稱跳躍基因。）6.致病基因是致病原核生物基因的重要特征 病毒基因組的特點：

1.基因組大小相差很大（HBV：3.2kb，痘病毒：300kb）

2.結構分子具有多樣性（DNA病毒/RNA病毒，單鏈DNA/RNA病毒，雙鏈DNA/RNA病毒，環狀分子/線性分子）3.基因組多數是連續性（單一分子基因組），但RNA病毒往往不連續（呼腸孤病毒：10條節段雙鏈RNA，甲乙流感病毒：8條單鏈節段RNA，丙型流感病毒：7段單鏈節段RNA。包裝在同一個病毒顆粒內，或在不同病毒顆粒內，只有全部基因組序列都存在，才具備感染能力）4.編碼序列占基因組的90%以上，間隔區序列很少；

5.多為單拷貝（單倍體），即每個基因只出現一次（除逆轉錄病毒基因組有兩個拷貝）； 6.相關基因叢集（功能上相關的基因排列在一起）、有重疊基因和不規則基因結構序列。

1、試述點突變（基因背景清楚和未知）的主要檢測方法。答：對基因背景清楚或部分清楚的點突變，可以采取直接檢測基因點突變的方法，如等位基因特異性寡核苷酸雜交(allele specific oligonucleotide，ASO)、PCR-ELISA、等位基因特異性擴增(allele specific amplification，ASA)、PCR-RFLP、基因芯片技術等進行診斷，例如β地中海貧血，可以使用ASO、PCR-RFLP 聯合基因芯片技術進行診斷。對于一些基因背景未知的點突變，可以采用單鏈構象多態性(single-strand conformational polymorphism，SSCP)、變性梯度凝膠電泳(denaturing graient gel electrophoresis，DEEG)、異源雙鏈分析(heteroduplex analysis，HA)、DNA序列測定、蛋白截短測試（protein truncation test，PTT）等方法，如Hopkins大學醫學院的研究人員設計了47 對PCR引物，分段擴增血友病A因子Ⅷ 基因片段，進行DGGE分析，發現多態性片段后再進行DNA序列分析，幾乎查清了所有臨床輕中度病人的點突變。

2、試述限制性內切酶MstⅡ切割法診斷鐮狀細胞貧血的原理并圖示。

答：在FⅧ基因區域內，有一種A基因存在三個拷貝，其功能不詳，其中一個A基因位于FⅧ基因的第22 號內含子內(A1)，另外兩個位于X染色體的末端(A2、A3)。A1基因可以與其上游的兩個A基因拷貝中的一個發生同源重組，引起FⅧ基因的1-22 外顯子片段倒位，這種倒位導致FⅧ功能完全喪失而發生嚴重的血友病(圖15-5)。其中與A2發生的重組稱為近端重組，約占倒位的15％；與A3發生的重組稱為遠端重組，約占倒位的85％。

3、試述近端重組、遠端重組概念。

答：在FⅧ基因區域內，有一種A基因存在三個拷貝，其功能不詳，其中一個A基因位于FⅧ基因的第22 號內含子內(A1)，另外兩個位于X染色體的末端(A2、A3)。A1基因可以與其上游的兩個A基因拷貝中的一個發生同源重組，引起FⅧ基因的1-22 外顯子片段倒位，這種倒位導致FⅧ功能完全喪失而發生嚴重的血友病(圖15-5)。其中與A2發生的重組稱為近端重組，約占倒位的15％；與A3發生的重組稱為遠端重組，約占倒位的85％。

4、簡述TGGE/DGGE的基本原理

答：在TGGE中，隨著溫度的逐漸升高時，DNA分子會呈階梯式逐步發生解鏈。部分解鏈的雙鏈DNA分子表現出一種復雜的分枝構像，使得其電泳遷移率大大下降。DNA分子的解鏈決定于該分子的解鏈溫度（Tm），而Tm有強烈的序列依賴性，如在單取代突變中，若是A:T（兩個氫鍵）被G:C（三個氫鍵）取代，將增加該雙鏈DNA分子的Tm值。而整個DNA分子序列對解鏈溫度也有影響，若A:T被T:A替代，或G:C被C:G替代，分子的解鏈溫度也會發生改變。因此不同的DNA分子由于其Tm不同，將于不同凝膠位置（溫度不同）產生分枝（解離）使電泳遷移率降低，從而在凝膠上的不同位置形成條帶。DGGE的變性條件為熱（一般為60℃的恒定溫度）和固定比率的甲酰胺（0－40％）、尿素（0－7M）。這些梯度變性的功能就相當于TGGE中的溫度梯度的功能，使不同DNA分子在不同的凝膠部位發生解鏈，引起遷移率下降，從而將不同的DNA分子分離。

5、簡述變性高效液相色譜法檢測基因變異的優點

答：DHPLC突變檢測技術與其它方法相比，具有更高的準確性和敏感性。

（1）DHPLC與各種電泳法的比較 SSCP 分析片段長度<300 bp，對于人類SNP的檢出率為50～95％，尤其容易漏檢位于發夾結構中的變異。CSGE檢測雜合子的靈敏度與SSCP相當或稍低。而DHPLC對150bp~600bp的DNA片段的突變檢出率都可達到100％，且而不需要特殊的樣本處理。TGGE/DGGE對于異源雙鏈及同源雙鏈分子的檢測靈敏度高出CSGE和SSCP很多。但對于較高溫度的融解區域的突變檢測，DHPLC的靈敏度要高于TGGE/DGGE。（2）DHPLC與DNA測序的比較 對于頻率高于20%的變異，直接測序的檢出率為80％，DHPLC的檢出率可達到100％；基因突變頻率低于20%時就很難用測序方法檢測到，而DHPLC可從待檢樣品中檢測到占總基因量0.5-5%的突變等位基因，且重現性很好。

6、試述PTT檢測基因變異的優缺點

答：PTT檢測突變的優點：①能檢測出只與疾病相關的蛋白截短突變；②可檢測出在RNA形成過程中發生的突變（如剪接突變）；③通過只鑒定引起疾病截短突變，PTT分析不會受到基因沉默變異如多態性的妨礙；④截短蛋白分子的長度指明了突變的位置，因此更方便進行測序分析以確定突變。

PPT檢測突變的缺點：①由于PCR擴增效率的影響，對于包含幾千個核苷酸序列多個外顯子的疾病基因，就需要分成幾個1－2kb的片段分別擴增，分別進行PTT檢測；②由于微小缺失/插入突變對蛋白產物分子大小影響太小，凝膠不能分辯，因而檢測不出編碼序列中小的插入或缺失或是錯義突變；③引起RNA產量改變或使mRNA不穩定的突變可能被漏檢。

7、簡述PFGE的基本原理

答：PFGE采用一種正交的交變脈沖電場，在進行瓊脂糖凝膠電泳時，其方向、脈沖時間和電壓大小可交替改變。在每次電場方向改變時，DNA分子就要有一定的時間改變形狀和遷移方向，只有當DNA分子達到一定構型，沿新的泳動方面伸直后，才能向前遷移。DNA分子的轉向時間與其大小關系極為密切，分子越大，分子構型轉換所需時間就越長，轉變遷移方向的時間也就越長。對于不同大小的DNA大分子，其改變泳動方向所需的時間不等，遷移速度的快慢也就不等，因此就可以按DNA分子量大小使其分離開來。根據欲分離的DNA分子大小適當調節電場方向的相交角度、電壓及脈沖時間等參數，即可將各種分子量大小不同的分子分開。

8、假基因的分類及其發生機理。

與正常功能的基因序列相似，但無轉錄功能或轉錄產物無功能的基因稱假基因(pseudogene)。根據是否保留相應功能基因的間隔序列(如內含子), 假基因分兩大類:一類保留了間隔序列，稱為非加工假基因(non-processed pseudogene)，通常因基因的復制修飾,如點突變、插入、缺失和移碼突變而導致復制后的基因在轉錄和翻譯時出現異常,喪失正常功能，它與功能基因一般在同一染色體上, 也稱復制型假基因(duplicated pseudogene)。假基因中大多數則缺少間隔序列的稱為已加工假基因(processed pseudogene)，主要是轉錄過程中mRNA 以cDNA 的方式重新整合進入基因組(很可能發生在生殖細胞中)，在長期進化選擇過程中因為隨機突變積累而喪失功能，通常這種假基因無內含子，兩邊有小的側翼定向重復序列(flanking direct repeat)，3'端多具多聚腺苷酸尾。

9、簡述CpG島與DNA甲基化調控。

大約有一半的人類基因富含CpG 的順序，稱為CpG島(CpG island)，CpG 島常位于轉錄調控區或其附近，主要存在于看家基因和一些組織特異性表達基因。在正常組織，除印記基因和失活的X染色體外，包括啟動子區在內的基因5′端CpG 島大部分是非甲基化的。DNA甲基化與基因表達呈負相關，DNA甲基化調控基因表達直接的機制可能是因為甲基從DNA分子的大溝中突出，阻止了轉錄因子與基因相互作用，還可能直接抑制RNA聚合酶活性而抑制基因的表達。間接的機制包括兩種類型：①與甲基化DNA結合蛋白結合；②改變染色質結構，這都間接阻礙轉錄因子與DNA結合而抑制轉錄。DNA甲基化對胚胎發育非常重要，與X染色體失活，基因組印記，特別是腫瘤密切相關。

10、作為一種遺傳標記，人類短串聯重復序列（STR）的主要用途有哪幾個方面？

主要用途①人類基因遺傳圖譜的制作。②目的基因篩選和基因診斷。通常目的基因若與STR位點有連鎖關系, 則其位置與STR位點鄰近, 故通過對STR附近區域克隆測序, 就可能發現目的基因。通過家系和對照研究, 運用連鎖和相關分析, 可以找到與疾病高度相關的STR位點。③法醫學個體識別和親權鑒定。法醫案例中, 對于量極少和降解嚴重的生物檢材, 通過PCR進行STR位點擴增并將幾個STR 位點聯合起來分析, 可得到相當高的累積個體識別率和父權排除率。因而STR用于法醫學領域有著廣闊的前景，為司法偵案、破案提供有利的科學依據。

11、人類單核苷酸的多態性（SNP）的特點及主要用途有哪幾個方面？

疾病的連鎖分析與基因的定位：包括復雜疾?。ㄈ绻琴|疏松癥、糖尿病、心血管疾病、精神性紊亂、各種腫瘤等）的基因定位、關聯分析，并可用于遺傳病的單倍型診斷。

指導用藥和藥物設計：SNP多態性能充分反映個體間的遺傳差異。通過研究遺傳多態性與個體對藥物敏感性或耐受性的相關性, 可以闡明遺傳因素對藥物效用的影響, 從而對醫生針對性的用藥和藥物的開發提供指導和依據。

用于進化和種群多樣性的研究：生物界的進化及進化過程中物種多樣性的形成與基因組的突變和突變的選擇密切相關, 構建整個基因組的SNP 圖譜對于直接研究人類的起源、進化具極大意義。對比人群之間SNP 圖譜的異同情況可以對人類的起源、遷移等作出估計, 從而理清人類進化過程中源與流的問題。

12、人類基因組研究的主要內容是什么？

人類基因組研究主要包括兩方面的內容：以全基因組測序為目標的結構基因組學和以基因功能鑒定為目標的功能基因組學，又稱后基因組研究。

結構基因組學代表基因組分析的早期階段，通過基因作圖、核苷酸序列分析確定基因組成、基因定位的科學，包括規?；販y定蛋白質、RNA及其它生物大分子的三維結構等內容,以獲得一幅完整的、能夠在細胞中定位以及在各種生物學代謝途徑、生理途徑、信號傳導途徑中全部蛋白質在原子水平的三維結構全息圖。功能基因組學代表基因分析的新階段，是利用結構基因組學提供的信息研究基因功能，使人們有可能在基因組學、蛋白質組學、分子細胞生物學以致生物體整體水平上理解生命的原理。對疾病的防治和機理的闡明有重要應用意義。

基因分類：A.按功能:1.結構基因---編碼蛋白和酶分子結構（蛋白基因）；2.調控基因(Regulatory Gene)---調節結構基因表達，包含調節基因、操縱基因和啟動基因；3.轉錄而不翻譯的基因（RNA基因）：rRNA基因→rRNA→核仁形成區，核糖體組成。tRNA基因→tRNA→轉運氨基酸。

B.按重要程度: 1.看家基因(House-keeping Gene): 維持細胞最低限度功能所不可少的基因, 如編碼組蛋白基因、編碼核糖體蛋白基因、線粒體蛋白基因、糖酵解酶的基因等。這類基因在所有類型的細胞中都進行表達。2.必需基因(Essential Gene): 突變時會引起致死表型的基因.基因表達的特點：A時間特異性，單細胞生物：特定基因表達嚴格按特定時間順序發生。多細胞生物：基因表達在不同的發育階段嚴格按特定時間順序開啟或關閉。又稱為階段特異性（Stage specificity）。B, 空間特異性, 在某發育階段，同一基因在不同組織器官其表達有差異。又稱為細胞特異性（Cell specificity）

基因表達的方式: A組成性表達, 某些基因的表達不受內外環境的影響，在個體生長過程中，幾乎在所有的組織中持續表達或變化很小。這些基因一般為看家基因（Housekeeping gene）B, 誘導和阻遏表達, 誘導（Induction）：基因受環境刺激而開啟表達增強。阻遏（Repression）：基因受環境刺激而表達受到抑制和減弱C, 協調表達, 在一定控制機制下，功能相關的一組基因進行協調共同表達

14、敘述原核生物基因組的結構特征。

在原核生物基因組中只有一個DNA復制起點?；蚪MDNA通常是由一條環狀雙鏈DNA（double stranded DNA，dsDNA）分子組成。基因組DNA與支架蛋白和RNA結合在一起，以復合體的形式存在。廣泛存在操縱子結構。操縱子結構是原核生物基因組的功能單位，在原核基因調控中具有普遍的意義。原核生物的結構基因多數是單拷貝的并且結構基因中沒有內含子成分。編碼順序一般不重疊。具有編碼同工酶的不同基因?；蚪M中編碼區所占比例為50﹪，不編碼區中常常含有基因表達調控的序列?；蚪MDNA分子中存在多種功能的識別區域，這些區域經常有反向重復序列存在，并能形成特殊的結構。原核生物基因組存在著可移動的DNA序列，這些可移動的DNA序列，通過不同的轉移方式發生基因重組，使生物體更適應環境的變化。

15、簡述原核生物的類核組成。

原核生物與真核生物的主要區別在細胞核上。原核生物沒有典型的細胞核結構，基因組DNA位于細胞中央的核區，沒有核膜將其與細胞質隔開，但能在蛋白質的協助下，以一定的組織形式盤曲、折疊包裝起來，形成類核（nucleoid）也稱擬核。類核的中央部分由RNA和支架蛋白（scaffolding protein）組成，外圍是雙鏈閉環的超螺旋DNA。在超螺旋結構的基礎上，DNA 分子再扭結成許多活結樣或花瓣樣的放射狀結構的DNA環。每個環形的活結狀結構代表一個結構域，在各結構域中DNA呈負超螺旋狀態。每個DNA環是一個相對獨立的功能區，可以獨立完成不同區域的基因表達與調控。在類核中80﹪為DNA，其余為RNA 和蛋白質。如果用DNA酶處理后可使基因組DNA鏈斷裂；如果用RNA酶或蛋白酶處理類核，則類核變得松散，不能維持DNA鏈的折疊結構，這表明RNA和蛋白質對維持類核分子的折疊以及形成環狀結構是必不可少的。

16、簡述原核生物轉座子的類型及特點。

⑴插入序列（insertion sequence,IS）長度約700bp～2 000bp，由一個轉位酶基因及兩側的反向重復序列（16bp～41bp）組成。反向重復序列的對稱結構使IS可以雙向插入（正向插入或反向插入）靶位點。并在插入后于兩側形成一定長度（3bp～11bp）的順向重復序列稱靶序列（target sequence）IS的轉位頻率為10-7／拷貝，即在一個世代的107細菌中有1次插入。⑵轉座子（transposon,Tn）是一類復雜的轉位因子。Tn比IS大，約4500～20000bp，除了攜帶有關轉座的必需基因外，還含有能決定宿主菌遺傳性狀的基因，主要是抗生素和某些藥物的抗性基因，轉座子中的轉位酶稱為轉座酶（transposase），其功能是介導轉座子從一個位點轉座到另一個位點，或從一個復制子轉座到另一個復制子，其轉座過程與IS相似。

⑶Mu噬菌體 是一類具有轉座功能的溫和性噬菌體。溫和性噬菌體有多種，如大腸桿菌λ噬菌體、大腸桿菌Mu-

1、P1和P2噬菌體等。這類噬菌體具有整合能力，可以整合到細菌染色體中去，也稱可轉座的噬菌體（transposable phage）。當它們感染細菌后，其溶源性整合和裂解周期的復制均以轉座方式進行，但轉座位點是隨機的。

17、通過轉座可引起哪些遺傳效應？

⑴引起突變 轉位可能引起多種基因突變。當轉位因子插入一個基因內部，會引起這個基因的插入失活；當插入多順反子前端的基因中時，可引起下游的所有基因停止轉錄，因為轉位因子中含ρ依賴的轉錄終止信號；當插入染色體或質粒中時，常引起缺失和倒位突變。⑵引入新的基因 在插入位點上引入新的基因，如含有抗藥基因R質粒的轉位因子，轉位到染色體中時，可在該部位出現抗藥性基因。若將帶有Amp+R質粒的細菌與不含R質粒的帶有Kan+轉座子的細菌進行接合，結果產生了Amp+ Kan+的細菌，并且能夠在含有氨芐青霉素及卡那霉素的培養板上生長。經過轉位作用，在這種細菌內產生Amp+及Kan+的質粒，經過再次接合作用，即可產生含Amp+ Kan+R質粒細菌。

⑶引起生物進化 基因重排經常發生，轉座作用是基因重排的重要機理之一，如通過轉座，可將兩個本來相隔遙遠的基因靠攏，從而進行協調的控制作用，這兩段基因順序經過轉座作用連接在一起有可能在進化過程中產生新的蛋白質。

18、真核生物染色體基因組的一般特點？

①真核生物基因組遠大于原核生物基因組，結構復雜，基因數龐大，具有多個復制起點；②真核細胞的基因組DNA都是線狀雙鏈DNA，而不是環狀雙鏈分子；③基因組中非編碼區多于編碼區；④真核基因多為不連續的斷裂基因，由外顯子和內含子鑲嵌而成；⑤存在大量重復序列。

19、真核生物基因組含有的重復序列有哪些？

（一）高度重復序列

重復頻度>105。根據衛星DNA的長度，又可分成3種：衛星DNA、小衛星DNA、微衛星DNA。

（二）中度重復序列

這類重復序列主要由比較大的片段（由100bp到幾千bp）串聯重復組成，分散在整個基因組中，重復頻度不等，如Alu家族、rRNA、tRNA和組蛋白等。

20、簡述質粒的概念和特性，常用的質粒載體有哪幾種？

質粒為細菌染色體外一些雙鏈、共價閉合環狀DNA分子，是能夠進行獨立復制并保持穩定遺傳的復制子。質粒具有復制和控制機構，能夠在細胞質中獨立自主的進行自身復制，并使子代細胞保持它們恒定的拷貝數。

質粒一般具有以下特性：①自主復制性，它能獨立于宿主細胞的染色體DNA而自主復制；②質粒不相容性；③可擴增性；④可轉移性。

理想質粒載體應具備①具有松弛型復制子；②在復制子外存在幾個單一的酶切位點；③具有插入失活的篩選標記；④分子量相對較小，有較高的拷貝數。

常見的質粒載體有：pBR322質粒、pUC質粒載體、pGEM系列載體等。

21、試述舉2種質粒DNA提取的方法及應用。

[答案] 質粒DNA提取的方法包括堿裂解法、煮沸裂解法和SDS裂解法。

1）堿裂解法：在NaOH存在的強堿性（pH12.0～14.0）的條件下，用強陽離子去垢劑SDS破壞細胞壁和裂解細胞，并使宿主細胞的蛋白質與染色體DNA發生變性，釋放出質粒DNA。它是一種適用范圍很廣的方法，能從所有的大腸桿菌（E.coli）菌株中分離出質粒DNA，制備量可大可小。

2）煮沸裂解法：是將細菌懸浮于含Triton X-100和溶菌酶的緩沖液中，Triton X-100和溶菌酶能破壞細胞壁，再用沸水浴裂解細胞，使宿主細胞的蛋白質與染色體DNA發生變性。對CCC質粒DNA因結構緊密不會解鏈，當溫度下降后，CCC質粒DNA可重新回復其超螺旋結構，通過離心去除變性的蛋白質和染色體DNA，然后回收上清液中的質粒DNA。本法只能用于小質粒DNA（小于15kb）的小量或大量制備，適用于大多數從大腸桿菌（E.coli）菌株中分離出質粒DNA。

3）SDS裂解法：它是將細菌懸浮于等滲的蔗糖溶液中，用溶菌酶和EDTA處理以破壞細胞壁，再用SDS裂解去壁細菌，從而溫和地釋放出質粒DNA到等滲溶液中，然后用酚/氯仿抽提。適用于大質粒DNA的提取。

22、簡述哺乳動物細胞基因組DNA抽提的主要方法有哪幾種？ [本題答案]哺乳動物細胞基因組DNA抽提的主要方法有： 酚提取法、甲酰胺解聚法、玻棒纏繞法和異丙醇沉淀法、磁珠吸附法等。

23、簡述從瓊脂糖凝膠中回收DNA片段的主要方法有哪幾種？

[本題答案] 從瓊脂糖凝膠中回收DNA片段的方法主要包括 DEAE-纖維素膜插片電泳法、電泳洗脫法、低熔點瓊脂糖凝膠挖塊回收法、冷凍擠壓法及現在有試劑盒供應的以硅為基礎的純化系統等。

24、簡述磁性球珠分離法分離mRNA的原理。

[本題答案]磁性球珠分離法是基于寡聚(dT)與poly(A)的互補配對特性、用生物素標記寡聚(dT)，通過寡聚(dT)與mRNA 3’端poly(A)形成雜交體，這種雜交非常迅速，在1－2分鐘內就可完成，可有效地除去rRNA, tRNA以及其他RNA,而后通過生物素與鏈親和素順磁性磁珠之間的相互作用來捕獲這些雜交物而達到分離純化。

25、描述質粒DNA的結構特點。

多數細菌來源的質粒核酸是環狀雙鏈DNA分子，沒有游離的末端，每條鏈上的核苷酸通過共價鍵頭尾相連。質粒DNA分子通常具有三種不同的構型。當其兩條核苷酸鏈均保持完整環形結構時，為共價閉合環狀DNA分子，這樣的DNA常以超螺旋狀態存在；如果兩條鏈中只有一條鏈保持完整環形結構，另一條鏈出現一至數個缺口時，為半開環DNA；若兩條鏈均有缺口并發生斷裂則成為線性DNA分子。

26、試述質粒的類型有哪些？

根據細菌染色體對質粒復制的控制程度是否嚴格可將質粒分為：嚴緊型質粒和松弛型質粒。按轉移方式分為：接合型質粒、可移動型質粒、自傳遞型質粒。按質粒大小分為：小型質粒、大型質粒。按質粒的宿主范圍分為：窄宿主譜型質粒、廣宿主譜型質粒。按質粒的功能分為：F質粒、R質粒、Col質粒。

27、線粒體DNA與核DNA有哪些不同之處？

（一）非孟德爾的母系遺傳。mtDNA 因位于細胞質中,表現為嚴格的母性遺傳, 不服從孟德爾遺傳，絕大部分mtDNA 是通過卵細胞遺傳。

（二）高突變率。mt DNA突變率約為nDNA的10～100倍，此外mtDNA 與有毒物質的結合頻率比核DNA 高數倍至數十倍。

（三）異質性和復制分離。異質性即突變mtDNA與野生型mtDNA 以不同的比例共存于一個細胞內的現象。復制分離即在細胞分裂的復制過程中,突變的和野生型的mtDNA 隨機進入子細胞的過程，復制分離的結果使突變mtDNA 雜合體向突變純合或野生純合方向轉變,但因突變復制具有優勢,故易產生突變積累，突變積累的程度不同,突變mtDNA 在群體中的多態性程度也不同。

（四）閾值效應。每個細胞的mt DNA有多種拷貝，而一個細胞mt DNA編碼基因的表現型依賴于一個細胞內突變型mt DNA和野生型mt DNA的相對比例，mtDNA 突變導致氧化磷酸化水平降低,當能量降低到維持組織正常功能所需能量的最低值時即達到了mtDNA表達的能量閾值，可引起某組織或器官的功能異常而出現臨床癥狀，這就是閾值效應。

（五）半自主復制與協同作用。mt DNA雖有自我復制、轉錄和編碼功能，但該過程還需要數十種nDNA編碼的酶參加，因此mt DNA基因的表達同時也受nDNA的制約，兩者具有協同作用。

28、何謂線粒體??？簡述線粒體病的遺傳學分類。

線粒體?。╩itochondriopathy）是指由于線粒體呼吸鏈功能不良所導致的臨床表現多樣化的一組疾病。臨床表現常見為眼瞼下垂、外眼肌麻痹、視神經萎縮、神經性耳聾、痙攣或驚厥、癡呆、偏頭痛、類卒中樣發作等。

從核基因缺陷和線粒體基因缺陷的角度對線粒體病進行遺傳學分類可分為三種類型：點突變，mtDNA的大規模缺失或插入和源于核DNA缺陷引起mtDNA缺失。

29、病毒的基本結構成份主要有哪些？

毒沒有完整的細胞結構，由四種基本結構成份組成：①由一種核酸(DNA或RNA)組成的病毒基因組。②由病毒基因組編碼的衣殼蛋白組成的衣殼。③來源于宿主細胞質膜系統（細胞膜、內質網膜或高爾基體膜）的包膜。④病毒顆粒中的其它內容物，包括酶、核酸結合蛋白及金屬離子等。30、國際病毒分類委員會（ICTV）將病毒分成哪幾類？ 國際病毒分類委員會（ICTV）制定了《國際病毒分類與命名原則》。根據病毒的基因組組成及復制方式，可將病毒分為如下幾類：

DNA病毒（DNA Viruses）

第一組：雙鏈DNA病毒（Group I: dsDNA Viruses）第二組：單鏈DNA病毒（Group II: ssDNA Viruses）RNA病毒（RNA viruses）

第三組：雙鏈RNA病毒（Group III: dsRNA Viruses）第四組：正鏈RNA病毒（Group IV:(+)ssRNA Viruses）第五組：負鏈RNA病毒（Group V:(-)ssRNA Viruses）

DNA與RNA逆轉錄病毒（DNA and RNA Reverse Transcribing Viruses）

第六組：RNA逆轉錄病毒（Group VI: RNA Reverse Transcribing Viruses）第七組：DNA逆轉錄病毒（Group VII: DNA Reverse Transcribing Viruses）亞病毒因子（Subviral Agents）

衛星（Satellites）類病毒（Viroids）朊病毒（Prions）

31、簡述長病毒末端重復序列的特點和作用。

逆轉錄病毒基因組RNA在逆轉錄后生成的雙鏈DNA中，兩端有長末端重復序列（long terminal repeat，LTR）結構。LTR在結構與功能上與上述重復序列不同。LTR中的重復序列只占一部分，另外還包括單一序列。5＇端的LTR包含許多特定的基因表達調控區域，是一組真核生物增強子和啟動子單位，而3＇端的LTR具有轉錄終止的作用。另外，逆轉錄病毒基因組利用LTR中的重復序列形成環狀結構，在整合酶作用下整合入宿主細胞基因組內。53蛋白質組學的研究特點有哪些？

① 整體性 ② 揭示生命的動態性過程 ③ 體現生命現象的復雜性

32、等電聚焦凝膠電泳的原理是什么？

依據蛋白質分子的凈電荷或等電點進行分離的技術。在等電聚焦過程中，電場所采用的載體兩性電解質含有脂肪族多氨基多羧酸，可在電場中形成正極為酸性，負極為堿性的連續pH梯度，蛋白質分子在一個載體兩性電解質(ampholyte)形成的連續而穩定的線性pH梯度中電泳，當蛋白質遷移到其等電點位置時，凈電荷為零，在電場中不再移動，因此可將各種不同等電點性質的蛋白質分離開來

33、簡述酵母雙雜交系統的優缺點。

酵母雙雜交系統所具有的優點：①蛋白質作為被研究的對象不用被純化；②檢測在活細胞內進行，可以在一定程度上反映體內（細胞內）的真實情況；③由于這一系統可以反映基因表達產物的累積效應，因而可檢測存在于蛋白質之間微弱或短暫的相互作用；④采用不同組織、器官、細胞類型和分化時期材料構建cDNA文庫，可用于分析多種不同功能的蛋白。

局限性：①雙雜交系統分析蛋白間的相互作用定位于細胞核內，而許多蛋白間的相互作用依賴于翻譯后加工如糖基化、二硫鍵形成等，這些反應在核內無法進行。②由于某些蛋白本身具有激活轉錄功能或在酵母中表達時發揮轉錄激活作用，從而引起報告基因的表達，產生“假陽性”結果。③雙雜交只是反映蛋白質間能發生作用的可能性，這種可能還必須經過其他實驗驗證，尤其要與生理功能研究相結合，否則可能會誤入歧途。

34、蛋白質間互作鑒定：

（1）蛋白質亞基的聚合：線性、環狀、螺旋、球狀、交叉聚合（2）分子識別：抗原與抗體、配體與受體、酶與底物（3）分子的自我裝配：核糖體、細菌鞭毛、病毒的自動裝配

（4）多酶復合體：丙酮酸脫氫酶復合體包括丙酮酸脫氫酶、二氫硫辛酸轉乙酰基酶和二氫硫辛酸脫氫酶。

蛋白質間作用力：（1）氫鍵：肽鍵之間，主－側、側－側鏈之間（2）范德華力：取向力、誘導力、色散力

（3）疏水鍵：非極性基團為了避開水相二群集在一起的作用力。（4）離子鍵（鹽鍵）：正負離子之間的靜電引力所形成的化學鍵。

蛋白質相互作用的研究方法: 體外：（1）肽蛋白質親和層析；（2）親和印跡；（3）免疫沉淀；（4）交聯等。

體內：（1）酵母雙雜交系統；（2）噬菌體展示技術；（3）生物傳感芯片質譜；（4）蛋白質定點誘變。

蛋白組學研究內容：1.蛋白質分離；2.蛋白質的鑒定；3.蛋白質-核酸間相互作用；4.蛋白質與蛋白質的相互作用。蛋白組學研究的特點：1）整體性和規?；?；2）動態性和網絡化；3）復雜性和綜合技術化；

蛋白質組研究常用技術：

1）蛋白質分離技術（電泳和層析技術）；2）蛋白質檢測與圖像分析以及鑒定技術； 3）蛋白質互作研究技術；4）生物信息學分析技術。

35、蛋白質組學的研究內容有哪些？

蛋白質組學的研究包括兩個方面：一是針對蛋白質表達模式的研究，一是在蛋白質功能模式方面的深入分析。

36、PCR，聚合酶鏈反應（Polymerase chain reaction)：是一種模擬體內天然DNA復制過程的體外核酸擴增技術，是基因擴增技術的一次重大革新。

PCR原理：利用DNA聚合酶催化一對引物間的特定DNA片段在體外實現快速、大量擴增的方法，也稱：無細胞克隆技術或特異性DNA序列體外引物定向酶促擴增法。PCR標準反應體系（五要素,）

（1）DNA模板(template)：靶基因

（2）原料：dNTPs（dATP，dGTP，dCTP，dTTP）

（3）催化酶：耐高溫的DNA聚合酶（如：Taq酶）

（4）一對引物（primer）：擴增序列的決定者其與靶基因兩側序列互補

（5）Mg2+ 和 Buffer PCR反應過程----三步曲

1.高溫變性：在高溫（95℃）下，待擴增的靶DNA雙鏈受熱變性成為兩條單鏈DNA模板

2.低溫退火：在低溫（37～55℃）下，兩條人工合成的寡核苷酸引物分別與互補的單鏈DNA模板結合，形成部分雙鏈

3.適溫延伸：在耐熱DNA聚合酶的最適溫度（72℃）下，以引物的3’端為合成的起點，以單核苷酸為原料，沿模板以5’→3’方向延伸，合成DNA新鏈。

37、PCR衍生技術(pcr技術有哪些)：逆轉錄PCR、反向PCR、巢式PCR、標記PCR、多重PCR、原位PCR、不對稱PCR、定量PCR、錨定PCR

38、如何提高PCR擴增的特異性？

① 升高退火溫度可增加引物與模板結合的特異性

② 縮短退火和延伸時間，可減少錯誤引發及多余的DNA聚合酶分子參與酶促延伸的機會 ③降低引物和酶的濃度也可以減少錯誤引發，尤其是能減少引物二聚體的引發 ④ 改變Mg2+的濃度可進一步提高擴增的特異性 ⑤ 引物設計的特異性 ⑥ 減少循環次數

⑦ 熱啟動（Hot Start）：即首先將模板變性，然后在較高溫度時加入Taq DNA聚合酶、引物及MgCl2等一些重要成分，這樣使得引物在較高溫度下與模板退火，提高了反應的嚴格性，使擴增更特異 ⑧ 采用兩對引物即外引物和內引物進行擴增來提高擴增的特異性。

39、PCR檢測技術有何臨床應用：(1)PCR在病原微生物的檢測中的應用；（2）PCR在遺傳病中的應用；（3）PCR在腫瘤中的應用；（4）其它方面的應用：PCR技術除用于臨床診斷和治療外，還可用于DNA指紋、個體識別、親子關系識別、法醫物證等。40、影響PCR反應的因素有哪些？

PCR反應體系包含DNA模板、寡核苷酸引物、DNA聚合酶、dNTP及含有必需離子的反應緩沖液，這些因素都對PCR反應產生影響。

41、影響PCR反應的因素有哪些？

PCR反應體系包含DNA模板、寡核苷酸引物、DNA聚合酶、dNTP及含有必需離子的反應緩沖液，這些因素都對PCR反應產生影響。

42、簡述bDNA信號放大系統的原理。

分枝DNA是人工合成的帶有側鏈的DNA片段，在每個側鏈上都可以標記可被激發的標記物。以bDNA為基礎建立的連續放大DNA信號以檢測DNA的技術稱為分枝DNA信號放大系統。

bDNA信號放大系統包括四種雜交探針，即目標探針、前放大體、放大體和標記探針。首先用親和素包被微孔，加入目標探針，該組探針能與等檢核酸靶序列上不同區域互補，其5′端用生物素標記，能與微孔中的親和素高度親和結合；再向微孔中加入待測標本，目標核酸與固定于微孔中的目標探針結合；再加入前放大體，該組探針的一段能與目標核酸的不同區域互補結合，另一段與放大體（即分枝DNA）的主鏈部分的序列互補結合，分枝DNA由主鏈和數十根寡核苷酸組成，每個分枝上都有標記探針的雜交位點，由酶標寡核苷酸組成的標記探針與bDNA上的互補序列結合，加入底物后最后經化學發光檢測儀檢測。利用bDNA信號放大系統可在每個靶序列上結合60～300個酶分子，而且所有雜交反應同時進行，觀察到的信號與靶DNA的量成正比，可通過標準曲線將靶DNA定量。

43、簡述鏈末端終止法測定 DNA 序列的原理

答：利用DNA聚合酶，以待測單鏈DNA為模板，以dNTP為底物，設立四種相互獨立的測序反應體系，在每個反應體系中加入不同的雙脫氧核苷三磷酸（dideoxyribonucleoside triphosphate，ddNTP）作為鏈延伸終止劑，在測序引物引導下，按照堿基配對原則，每個反應體系中合成一系列長短不一的引物延伸鏈，通過高分辨率的變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，放射自顯影檢測后，從凝膠底部到頂部按5′→3′方向讀出新合成鏈序列，由此推知待測模板鏈的序列。

44、簡述化學法測定 DNA序列的基本原理

答：化學法是對待測DNA進行化學降解。在化學法的測序系統中，先對待測DNA末端進行放射性標記，然后分成4組或5組互為獨立的化學反應體系，每一組用不同的化學試劑特異地針對某一種或某一類堿基進行化學切割，通過化學降解后產生長短不一的DNA片段，其長度取決于改組反應所針對的堿基在待測DNA片斷中的位置，將各組反應產物通過高分辨率的變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，放射自顯影檢測后直接識讀待測DNA的序列。

45、Sanger雙脫氧鏈終止法,全稱：雙脫氧鏈末端合成終止法

原理：利用DNA聚合酶，以待測單鏈DNA為模板，以dNTP為底物，設立4種互相獨立的測序反應體系，在每個反應體系中加入不同的雙脫氧核苷酸三磷酸（ddNTP）作為鏈延終止劑，在測序引物引導下，按照堿基配對原則，每個反應體系中合成一系列長短不一的引物延伸鏈，通過高分辨率的變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，放射自顯影檢測后，從凝膠底部到頂部按5’到3’方向讀出新合成鏈序列，由此推知待測模板鏈的序列。每個測序反應體系的組成：1.DNA聚合酶；2.單鏈DNA模板（待測片段）；3.帶有3-OH末端的單鏈寡核苷酸引物；4.Mg2+；5.原料-dNTPs(dATP,dGTP,dCTP和dTTP)；6.終止劑-ddNTPs(ddATP,ddGTP,ddCTP和ddTTP)測序體系的關鍵成分：（1）鏈終止劑，2’，3’-二脫氧核糖核苷酸（ddNTPs)（2）用于測序的變性聚丙烯酰胺凝膠（PAGE)膠長40cm，厚度均勻；4-8%丙烯酰胺；7mol/L尿素（3）模板，即待測序的DNA片段（4）引物。酶促測序反應中，利用一個與模板特定序列互補的合成寡核苷酸作為DNA合成的引物（5）DNA聚合酶（6）放射性同位素標記的dNTP：α-35S-dNTP 焦磷酸測序技術（PSQ)：在以靶DNA鏈為模板指導核酸合成的過程中，將釋放的可見光作為檢測信號，從而對靶DNA鏈進行實時測序的方法，是一種合成測序技術。原理：同一反應體系中由四種酶催化的級聯化學發光反應，首先讓測序引物與待測模板結合成雜交體，在每一輪測序反應中，只加入一種dNTP，若該dNTP與模板配對，聚合酶就可以將其摻入到引物鏈中，并釋放出等摩爾的焦磷酸基團（PPi），PPi最終轉化為可檢測的光信號，并由Pyrogram TM 轉化為一個峰值，每個峰值的高度與反應中摻入的核苷酸數目成正比，隨后，加入下一種dNTP，繼續DNA鏈的合成。產生的熒光信號自動傳入分析系統，直接測讀靶DNA序列。特點：1.無需電泳，也無需熒光標記，操作極為簡便，具快速、準確、經濟和實時；2.閱讀能力已從100bp至400bp ；3.該技術具有多種不同的用途。

46、簡述哺乳動物細胞基因組DNA抽提的主要方法有哪幾種？

哺乳動物細胞基因組DNA抽提的主要方法有： 酚提取法、甲酰胺解聚法、玻棒纏繞法和異丙醇沉淀法、磁珠吸附法等。

47、簡述重組DNA技術的原理及技術。

重組DNA是在體外利用限制性內切酶，將不同來源的DNA分子進行特異的切割，獲得的目的基因或DNA片段與載體連接，從而組成一個新的DNA分子。重組的DNA分子能夠通過一定的方式進入相應的宿主細胞，并在宿主細胞中進行無性繁殖，獲得大量的目的基因或DNA片段。經重組的DNA分子能在宿主細胞中進行表達，獲得相應的蛋白質。

大致步驟包括：①目的基因的獲??；②載體的選擇；③目的基因與運載體連接成重組 DNA；④重組DNA導入受種細胞；⑤重組體的篩選

49、簡述黏性末端DNA重組體的構建過程。

目的基因和載體可由同一種限制酶切割后產生，或由不同的限制酶切割形成互補黏性末端，經退火，彼此間很容易按堿基配對原則形成氫鍵。然后由DNA連接酶催化連接接頭處的缺口，形成重組質粒。載體DNA在限制酶切割后，用堿性磷酸酶處理，除去5’端磷酸基，以避免載體DNA自身環化。50、舉例說出重組DNA技術在醫藥領域的應用。

可以利用重組DNA技術探明致病基因的結構和功能，了解其致病機制；開發基因工程藥物和疫苗用于臨床；建立基因診斷、治療技術，為疾病的預防、治療提供新方法、新技術。具體可用于基因診斷：基因診斷是從基因水平上檢測人類遺傳性疾病的基因缺陷；基因治療：是指將人的正?；蚧蛴兄委熥饔玫幕蛲ㄟ^載體導入人體靶細胞取代靶細胞中的缺陷基因，從而達到治療疾病目的的方法；基因工程藥物、疫苗和抗體的研究和制備；利用基因敲除或轉基因技術可改造生物、培育新的生物品種或用于藥物篩選和新藥評價等。

51、基因芯片的主要類型及其特點（1）從支持物來分 ①薄膜型：聚丙烯膜、硝酸纖維素膜和尼龍膜②玻片型：生產此類產品的公司 如 Affimetrix（2）從點陣的制備方法來分 ①原位合成型（In Situ Synthesis）②合成點樣型（off-chip synthesis）（3）根據探針片段長度分 ①Oligo-Chip：約8~25nt，常用于基因類型的分析，如突變、正常變異（多態性）和測序②cDNA-Chip：<2000nt，常用于基因表達和差異表達分析（兩種或以上相關樣本）③Genomic Chip：>5000nt，基因組結構分析（4）根據用途分：基因變異檢測芯片表達譜芯片功能基因芯片.52、生物芯片：采用平面微細加工技術（光導原位合成或微量點樣等）將大量生物樣品（核酸、多肽、細胞、組織切片等）有序地固化于支持物表面（玻片、硅片、尼龍膜等）由此組成的密集二維生物樣品的微陣列。原理：分子間特異的相互作用

生物芯片技術的特點：1）高度交叉的綜合性新技術；2）高度集成性、微型化和連續化；3）高通量；4）通過設計不同的探針陣列、使用特定的分析方法，可使該技術具有多種不同的應用價值。

基因芯片：

1）基因芯片：有序地、高密度地排列著大量的基因片段（probe)的載體(玻璃片或纖維膜等)。2）基因芯片技術：將大量核酸探針分子固定于支持物上，標記的樣品分子按堿基互補原則與探針進行雜交，通過檢測雜交信號分布和強度、進而獲取關于樣品分子的序列和數量的信息，是高通量研究基因表達、突變等的革命性技術。基因芯片檢測的原理和步驟：

原理：將大量探針分子固定于支持物上，然后與標記的待測樣品進行雜交，通過檢測雜交信號的分布和強度，實現對樣品中基因信息的定性和定量分析。

基本步驟：

1.芯片制備。2.靶核酸制備（樣品提取純化、擴增和標記）3.靶核酸與探針（芯片）雜交 4.雜交結果的掃描5.圖像分析和數據處理

基因芯片的特點：

1.微型化和自動化；現有芯片面積：最大525cm２,最小1cm２樣品DNA的用量：5nl/陣點 雜交和洗片等過程自動化,工作效率極高。2.高度平行性；實驗組和對照組的樣品等都在同一張芯片上同時進行雜交分析,結果的可比性好。

3.巨大的信息產出率；芯片上各點所對應的基因或其表達的定性（量）分析、差異表達分析等。4.高度敏感性和專一性；能可靠并準確檢測出10pgDNA/μL樣品。5.可反復使用；一張由尼龍膜制作的微陣列，可以重復雜交使用多達20次。

53、簡述蛋白芯片的原理及應用。

蛋白質芯片的基本原理是采用原位合成、機械點樣或共價結合的等方法將多肽、蛋白、酶、抗原、抗體固定于固相介質上形成的生物分子點陣，在待分析樣品中的生物分子與蛋白質芯片的探針分子發生雜交或相互作用或其他分離方式分離后，利用激光共聚焦顯微掃描儀對雜交信號進行高通量檢測和分析。蛋白質芯片是將整個蛋白質水平的相關生化分析過程集成于芯片表面，從而實現對多肽、蛋白質及其他生物成份進行高通量檢測。

蛋白質芯片技術是一種快捷、高效、高通量、并行、微型化和自動化的蛋白質分析技術，適用于分析包括組織、細胞系、體液在內的多種生物樣品能分析包含針對信號傳導、癌癥、細胞周期調控、細胞結構、凋亡和神經生物學等廣泛的生物功能的相關蛋白，靈敏度高達pg/ml。

54、舉例說明基因芯片在臨床診斷中的應用。

基因芯片作為一項現代化的診斷新技術在感染性疾病、遺傳性疾病的診斷和耐藥性檢測等方面已顯示出良好的應用前景。下面舉例說明基因芯片在疾病診斷的應用。

（1）感染性疾病的診斷。性傳播疾病、肝炎等。

（2）遺傳性疾病的診斷。地中海貧血、血友病、婚前檢查等。（3）耐藥性檢測。結核分支桿菌耐藥性檢測芯片等。

55、試述基因芯片的工作原理及制備。

基因芯片技術是建立在基因探針和雜交測序技術上的一種高效、快速的核酸序列分析手段。它將大量探針分子固定于支持物上，然后與標記的樣品進行雜交，通過檢測雜交信號的強度及分布來進行分析。在一塊1cm2大小的基因芯片上，根據需要可固定數以千計甚至萬計的基因，以此形成一個密集的基因方陣，實現對千萬個基因的同步檢測。基因芯片技術主要包括四個主要步驟：芯片制備、樣品制備、雜交反應和信號檢測以及結果分析。

56、試述生物芯片的種類及主要功能。

生物芯片根據其結構特點，可以將生物芯片分為微陣列芯片和微流體芯片兩個主要類別。微陣列芯片是由生物材料微陣列構成的芯片，包括基因芯片、蛋白質芯片、細胞芯片和組織芯片等，由于它們的工作原理都是基于生物分子之間的親和結合作用，如核酸分子的堿基配對作用，抗原和抗體的結合等，所以通常也稱為親和生物芯片。微流芯片是以各種微結構為基礎的芯片，利用它可實現對各種生化組分的微流控操作和分析，這類芯片的代表有毛細管電泳芯片、PCR反應芯片、介電電泳芯片等。(生物芯片發展的最終目標是將各種生物化學分析操作的整個過程，從樣品制備、生化反應到結果檢測，都集成化并縮微到芯片上自動完成，以獲得所謂的微型全分析系統（micro total analysis systen,μ-TAS）,或稱“微縮芯片實驗室”（lab-on-a-chip）。微縮芯片實驗室代表了生物芯片技術發展的未來。)

57、核酸探針：序列已知的、能與待測的靶核酸序列互補結合、并帶有可檢測標記的核酸片段。（它可以是整個基因，或基因的一部分；它可以是DNA或RNA）。

58、基因組DNA探針：為某一基因的全部或部分序列。缺點：真核基因組含有內含子序列；因此，當其用于檢測基因表達時，雜交效率低

cDNA探針：從已構建的cDNA文庫中篩選和分離出來的靶基因序列。cDNA探針無內含子序列，尤其適用于基因表達的檢測，目前應用最廣。

59、基因組探針和cDNA探針的共同優點：①制備方便：克隆于質粒載體中②穩定：DNA探針較RNA探針穩定；RNA易被RNA酶降解③標記方法成熟和多樣。共同缺點：雙鏈探針存在自身復性，影響雜交效率。

60、RNA探針的優點：單鏈：雜交時不存在第二條鏈的競爭（自身復性），雜交效率高；含RNA的雜交體更穩定（Tm更高），雜交反應可以在更為嚴格的條件下進行，因而RNA探針雜交的特異性高 主要缺點：探針不穩定，易被RNase降解。RNA探針適合于：Northern雜交、原位雜交等。61原位雜交的基本原理

樣本經適當處理后，使細胞通透性增加，讓探針進入細胞內與組織、細胞中待檢測的核酸進行特異性結合形成雜交體，然后通過組織化學或免疫組織化學方法在被檢測的核酸原位形成的雜交信號，在顯微鏡或電子顯微鏡下對待測核酸進行細胞內定位的方法。

62、核酸雜交技術是一種分子生物學的標準技術，用于檢測DNA或RNA分子的特定序列（靶序列）。DNA或RNA先轉移并固定到硝酸纖維素或尼農膜上，與其互補的單鏈DNA或RNA探針用放射性或非放射性標記。在膜上雜交時，探針通過氫鍵與其互補的靶序列結合，洗去未結合的游離探針后，經放射自顯影或顯色反應檢測特異結合的探針。

63、核酸分離與純化的原則：

1.保證核酸序列結構完整性，防止降解和結構破壞;2.剔除其他物質，保證純度

64、在核酸的分離和純化過程中，如何保持核酸的完整性？

[本題答案] 為了保證核酸的完整性，首先在操作過程中，應盡量簡化操作步驟，減少各種破壞核酸的有害因素，包括物理、化學與生物學的因素。提取應在0～4℃的條件下進行；另外避免強力的機械剪切力對核酸的破壞。細胞內或外來的核酸酶對核酸的生物降解，而破壞核酸的一級結構，使用EDTA、檸檬酸鹽并在低溫條件下操作，基本上就可以抑制DNA酶的活性；并盡可能地抑制RNA酶的活性。65、RNA的分離與提取：

難點：RNA在體外十分不穩定，易降解，不易得到全長；RNA酶在體外存在于手漢、唾液、呼吸、灰塵中。原則：防止污染、防止降解。

防止方法： 高壓滅菌；器皿：200 ℃烘烤2h；試劑：采用焦碳酸二乙脂（DEPC）處理；戴手套、口罩。

提取方法：（1）異硫酸胍-酚氯仿法： 異硫酸胍（4M）+巰基乙醇（0.14M）為蛋白質變性劑，酚/氯仿抽提，異丙醇沉淀RNA，75%乙醇洗滌（2）TRIzol法： TRIzol（苯酚+硫氰酸化合物）+氯仿+異丙醇+75%乙醇（3）酚-氯法。純化方法：飽和酚（pH4.5-5.5）66、簡述原位雜交在臨床中的應用

原位雜交技術可以通過標記的探針與分裂中期染色體DNA雜交來精確定位特定核苷酸序列在染色體上的位置；與細胞RNA雜交可觀察組織細胞中特定基因的表達水平；還可用特異性的細菌或病毒的核酸序列作為探針與組織、細胞雜交，以確定有無病原體的感染等。原位雜交能在成分復雜的組織中對單一細胞進行研究，不受同一組織中其它成分的影響，因此對于那些細胞數量少且散在于其它組織中的細胞內DNA或RNA的研究更為方便。此外，原位雜交不需要從組織中提取核酸，有利于檢測組織中含量極低的靶序列，并可完整地保持組織和細胞的形態，更能準確地反應出組織細胞的相互關系及功能狀態。舉例：原位雜交檢測上皮細胞中人乳頭狀瘤病毒（HPV）DNA 67、簡述臨床診斷常用的FISH探針的類型及用途。

根據核酸探針的序列特點，可將FISH探針分為三大類：重復序列探針、單一序列探針和全染色體涂抹探針。重復序列探針（repetitive sequences probes）是指與某條特定的染色體結構結合、特異識別重復DNA序列的探針如著絲粒探針、端粒探針等。一般來說，不同的染色體，著絲粒重復序列中的核苷酸序列也不同，但端粒重復序列不具有染色體特異性。單一序列探針(Unique sequence probes)與某條染色體上特定的區域或基因的單拷貝DNA序列雜交。包括帶特異性探針（band special probes）和基因座特異性探針（Locus Specific probes）等。全染色體涂抹探針（whole chromosome painting probes, WCP）是識別一條特定染色體全長上的單一序列探針的混合物。68、臨床基因擴增檢驗實驗室應如何設置。

由于基因擴增檢驗是對靶核酸的指數倍擴增過程，因而有大量的擴增產物的出現，這種擴增產物極易對以后的新擴增反應產生“污染”，為防止這種污染的發生，就需要對基因擴增檢驗實驗室進行嚴格的分區。臨床基因擴增檢驗實驗室原則上分為四個分隔開的工作區域，即試劑貯存和準備區、標本制備區、擴增反應混合物配制和擴增區以及擴增產物分析區。如果采用全自動擴增儀，后兩個區域可以合并。應注意的是，各工作區域必須有明確的標記，避免不同工作區域內的設備、物品混用。進入各工作區域必須嚴格按單一方向進行，即試劑貯存和準備區→標本制備區→擴增反應混合物配制和擴增區→擴增產物分析區。各區的儀器設備包括工作服、鞋子、實驗記錄本和筆等都必須專用，不得混淆。此外，上述四個工作區域內還應有固定于房頂的紫外燈，以便于工作后區域內的空氣照射。69、如何保證臨床基因擴增檢驗實驗室的質量。

臨床基因擴增檢驗實驗室的常規測定由一系列步驟組成，包括樣本收集、樣本處理（核酸提?。?、核酸擴增、產物檢測結果報告及解釋等。室內質量控制僅涉及樣本處理、核酸擴增和產物分析等測定分析步驟，而室間質量評價則除了監測測定分析步驟外，還包括較大范圍的實驗室活動，諸如樣本接收中的可靠性、結果報告及解釋等。QA則是覆蓋更廣范圍的活動，包括樣本收集、結果報告和解釋等。

第三篇：西醫診斷學心電圖部分知識點總結

1.靜息電位：細胞未受刺激時存在于細胞內外的電位差，膜內底，膜外高，心橫紋肌，骨骼肌相近，莫內-80—-90（mv）.2.動作電位：在靜息電位的基礎上，細胞受到閾電位刺激產生一個快速的去極化過程和復極化過程形成的電位變化，稱為動作電位。

3.除極過程電極位置與波形的關系：已除極部分的胞外電荷為負，未除極部分為正，將電極放在未除極的高電位處，將描述出一個正向的波，放于已除極處將描述一個負向的波。

4.復極過程電極位置與波形的關系：已復極部分的胞外電荷為正，未復極部分為負，電極放于未復極的低點位處，將描述一個負向的波，放于已復極處將描述一個正向的波。

5.正常心電興奮特點：①正常心肌除極由心內膜向外膜推進。

②中層心肌先除極后完成復極，外層心肌后除極先完成復極（好像復極過程從外層開始的一樣）

由此決定了復極波（T）與除極波（R）方向的一致性。

6.心電波段的構成：①P波：代表左右心房點（激動）除極過程。②P—R間期：始于心房開始除極，終于心室除極的開始。③QRS波群：反映左右心室先后除極的過程。

④S—T段：是心室復極過程，基本上都處于平臺期，內外心肌點位接近，是特殊的復極波。

⑤T波：主要是心室快速復極期先后不一致形成的點位變化。

7.心電向量的概念：①瞬時心電向量：心肌細胞在除極和復極過程中，由于前后的不同，每一瞬時相互間存在著電動勢（電壓），具有方向和大小，稱為V，規定方向朝向正點位。（這種既具有強度又具有方向性的點位幅度稱為心電向量）

②瞬時心電綜合向量：心肌是立體結構，除極和復極的每一瞬時存在著許多大小、方向不同的向量相互綜合成的一個總向量，稱為V，其大小和方向按平行四邊形法則合成。

8． 心電綜合向量的大小與哪些因素有關：①與心肌細胞的數量（心肌厚度）呈正比關系；②與探查電極位置和心肌細胞之間的距離呈反比關系；③與探查電極的方位和心肌除極方向之間的角度有關，夾角越大，心電向量在導聯方向上的投影越小，點位愈弱。

9.空間心電向量環：一個心動周期中循序出現的瞬時綜合心電向量的頂端C點位水平連接線所構成的環形軌跡稱為…

10.平面（或臨床）心電向量圖：將空間心電向量環投影在相互垂直的平面上即橫面（H），側面（S），額面（F）得到的三個投影圖，稱為…

11．六軸系統：將導聯標Ⅰ、Ⅱ，Ⅲ的導聯軸平行移動，與aVR、aVL、aVF的導聯軸一同通過坐標軸的軸心（“O”點）構成了六軸系統（相互間角度均為30°）12.保準導聯：標Ⅰ 左上肢（＋）右上肢（－）； 標Ⅱ 左下肢（＋）右上肢（－）； 標Ⅲ 左下肢（＋）左上肢（－）；

13.單極肢體導聯：aVR 右上肢（＋）左上、下肢（－）；aVL 左上肢（＋）右上肢、左下肢（－）；aVF 左下肢（＋）左、右上肢（－）；

14.單極胸前導聯：左右上肢與左下肢連接在一起作為負極（－），正極（＋）分別位于： V1 胸骨右緣四肋間；V2 胸骨左緣四肋間；V3 在V2與V4的連線中點；V4 左鎖骨中線平第5肋間；V5 腋前線平V4水平；V6 腋中線平V4水平；

15.平面心電向量圖與心電圖的關系：⑴ 心電圖是有關的心電向量圖在相應導聯上的投影。通過心電向量零電位點（即坐標軸原點“O”）作一條與心電軸垂直的線，此線將心電軸分為分為正負兩側，向量投影在正側形成一個正向的波，投影在負側形成一個負向的波，其波幅大小取決于投影量的大小。

⑵ 胸前導聯心電圖相當于橫面心電向量圖按時間順序在相應導聯上的投影。⑶ 肢體導聯心電圖相當于額面心電向量圖按時間順序在相應導聯上的投影。16.正常心電圖波段的形成特點、正常值及變化的臨床意義：P波：起始向量指向左前下，終末向量指向左后下，最大向量指向左下后；（構成了P環，其主要向量指向左下稍偏后）

⑴ P波的方向：在標Ⅰ、標Ⅱ、aVF、V4—V6 直立；在aVL、標Ⅲ、V1—V3 可以直立、倒置或低平；在aVR中倒置。

⑵ P波的寬度（時間）：小于0.12s，雙峰小于0.04。⑶ P波的振幅：肢導小于0.25mv，胸導小于0.2mv

P波異常：①當時間超過0.12s時可能左房肥大或房室傳導阻滯

②P波在aVR導聯直立，在標Ⅰ、標Ⅱ、aVF 倒置，稱為逆行性P波，表示激動來自房室交界 ③P波高尖：肢導大于0.25mv，胸導大于0.2mv 見于右房肥大。

第四篇：中醫診斷學知識點--口味的臨床表現及其意義

中醫診斷學知識點-口味：口淡、口甜、口黏膩、口酸、口澀、口苦、口咸的臨床表現及其意義

口味異常是指病人口中的異常味覺。詢問病人口味的異常變化，可診察內在臟腑的疾病。

（一）口淡

口淡是指病人味覺減退，口中乏味，甚至無味的癥狀。多見于脾胃虛弱證。

（二）口甜

口甜是指病人自覺口中有甜味的癥狀。多見于脾胃濕熱或脾虛之證。

（三）口黏膩

口黏膩是指病人自覺口中黏膩不爽的癥狀。常見于痰熱內盛、濕熱蘊脾及寒濕困脾之證。

（四）口酸

口酸是指病人自覺口中有酸味，或泛酸。多因肝胃郁熱或飲食停滯所致。

（五）口澀

口澀是指病人自覺口有澀味，如食生柿子的癥狀。為燥熱傷津，或臟腑熱盛所致。

（六）口苦

口苦是指病人自覺口中有苦味的癥狀。多見于心火上炎或肝膽火熱之證。

（七）口咸

口咸是指病人自覺口中有戒味的癥狀。多見于腎病或寒水上泛的病證。

例題： A.口淡 B.口苦 C.口澀 D.口甜 E.口咸

1）燥熱津傷常見口味為 2）心火上炎常見口味為

1.【正確答案】 C 【答案解析】 口澀是指患者自覺口有澀味，如食生柿子的癥狀。為燥熱傷津，或臟腑熱盛所致。2.【正確答案】 B 【答案解析】 口苦是指患者自覺口中有苦味的癥狀。多見于肝膽火旺、濕熱內蘊致膽氣上逆、心火上炎。

第五篇：醫學影像診斷學的復習知識點(骨關節)

1.X線的發現時間在1895年倫琴，德國物理學家2.X線的特性：.穿透性（是X 成像的基礎）：X線波長短具有較高能量，物質對它吸收弱，因此具有很強的穿透本領；熒光效應（是進行透視檢查的基礎）：某些物質被X線照射后，能激發出可見熒光；.感光效應（是X線膠片攝影的基礎）：X線和可見光一樣，同樣具有光化學作用，可使膠片乳劑感光能使很多物質發生光化學作用；電離效應（是進行X線檢查時需要注意豐厚的的原因）：具有足夠能量的X線光子能夠撞擊原子中的軌道電子，使之脫離原子產生一次電離。被擊脫的電子仍有足夠能量去電離更多的原子。

3.X線的應用：X線透視，X線攝影，特殊檢查（體層攝影，軟X線攝影，高電壓攝影），造影檢查

4.X線機的構造：X線管裝置，高壓發生裝置，控制裝置，透視用影像裝置，機械輔助裝置。

5.X線透視與攝片的優缺點 ：透視的主要優點是可轉動患者體位，改變方向進行觀察。檢查費用較低。透視的主要缺點有：熒屏亮度較低，影像對比度及清晰度較差，難于觀察密度與厚度差別較少的器官以及密度與厚度較大的部位。

X線攝影： 與透視的優缺點正好相反，其優點是：能使人體較厚、較薄的部位清晰地顯示在X線照片上 ；病人所受的X線輻射劑量要小于透視、低于CT檢查。X線攝影的缺點是：不能動態觀察，檢查費用高于透視。

6.CR與DR優缺點（CR是數字X線攝影DR是計算機X線攝影）

：CR優點是可與床邊機配合進行診室床邊攝影；缺點是工作效率低，增加攝影成本，對影像的分辨力及清晰度提高不多。

DR優點是成像速度快，有高的空間分辨力及密度分辨力；缺點是部分產品相對較貴。7.攝片基本要求：骨盆正位片，一側橈、尺骨正位片及同側脛、腓骨正、側位片；必要時加攝胸部和腰椎正位片。攝片質量要求：攝片位置準確，對比度良好，直接曝光區呈黑色，軟組織是灰色，層次分明，皮質和骨小梁顯示清晰。

8.兒童的骨骼特點：骨骼最初以軟骨的形式出現，軟骨必須經過鈣化才能成為堅硬的骨骼 ：長骨骨端有骨垢，為了生長發育，一個是紅骨髓含量高，處于造血活躍期

9.兒童骨折包括：靑枝骨折，肱骨髁上骨折。

10.骨折：指骨的完整性和連續性中斷。骨質疏松 ：骨組織的有機成分和鈣鹽均減少，而比例仍正常。

11.骨折愈合的標志：以骨痂多少及骨折線是否清晰為標準，如果骨折線模糊，有骨痂生長了就開始愈合了。

12.脊椎骨折的特點： 脊椎骨折不需要較大外力作用即可發生，60～70歲患者發病率最高，可發生在一個或多個椎體，主要發生在胸腰椎。脊椎骨折X線表現為椎體水平骨小梁減少，椎體前緣皮質厚度減低，終板厚度改變，呈雙凹形或楔形改變。主要臨床表現為腰背疼，包括腰背及四肢關節酸痛、乏力等

13.關節脫位包括：肩關節脫位，肘關節脫位，髖關節脫位。

15.良惡性骨腫瘤的鑒別：

（1）生長情況 ： 良性是生長緩慢，不侵及鄰近組織，但可引起壓迫移位；無轉移 ；惡性是生長迅速，易侵及鄰近組織、器官可有轉移。

（2）局部骨質變化 :良性是呈膨脹性骨質破壞，與正常骨界限清晰，邊緣銳利，骨皮質變薄，膨脹，保持其連續性 ；惡性是呈侵潤性骨破壞，病變區與正常骨界限模糊，邊緣不整。

（3）骨膜增生 :良性是一般無骨膜增生，病理骨折后可有少量骨膜增生，骨膜新生骨不被破壞；惡性是可出現不同形式的骨膜增生且多不成熟，并可被腫瘤侵犯破壞。

（4）周圍軟組織變化 ：良性是多無腫脹或腫塊影，如有腫塊，其邊緣清楚；惡性是長入軟組織形成腫快，與周圍組織分界不清。

16.轉移性骨腫瘤：主要通過血液途徑轉移。

(1)成骨型 X線表現：病變為高密度影，居骨松質內，呈斑片狀或結節狀，密度均勻一致，骨皮質多完整，多發生在腰椎與骨盆。常多發，境界不清。椎體不壓縮、變扁。

(2)溶骨型X線表現：

骨松質中多發或單發小的蟲蝕狀骨質破壞。病變發展，破壞融合擴大，形成大片溶骨性骨質破壞區，骨皮質也被破壞，但一般無骨膜增生。

17.類風濕性關節炎發病特點：類風濕性關節炎可累及全身任何能活動的關節以四肢關節尤以雙手和雙足小關節為主最常受累的是近端指間或趾間關節和掌指或庶趾關節其次腕、肘、膝、肩、踝、胸鎖、髖、寰樞椎關節也可被累及。此外額頜關節、環構關節及其他頸椎偶可受累。18.強直性脊柱炎的典型表現：骶髖關節的改變，脊柱的改變，周圍關節的改變

19.退行性變與骨質增生的區別：骨質增生是退行性改變的表現之一。骨質增生：指一定單位體積內，骨質數量增多，變致密的現象而言。是骨的基本影像學表現。

退行性改變：是軟骨退變，損傷。刺激軟骨及其下骨內血管增殖，而導致骨皮質面和軟骨下骨硬化及骨刺形成。