第一篇：薄層色譜法實驗報告

實驗報告 專業班級

姓名

評分

學號

同組人

指導老師

實驗課程名稱

實驗項目名稱

開課實驗室

實驗時間

一、實驗目得

掌握薄層色譜得基本原理及其在有機物分離中得應用、二、實驗原理

有機混合物中各組分對吸附劑得吸附能力不同, 當展開劑流經吸附劑時, 有機物各組分會發生 無數次吸附與解吸過程, 吸附力弱得組分隨 流動相迅速向前, 而吸附力弱得組分則滯后, 由于各組分不同得移動速度而使得她們得以分離。物質被分離后在圖譜上得位置 置, 常用比移值 R ｆ 表示、三、實驗儀器與藥品5。

0c ｍ×１5 5。0 0 ｃm m 硅膠層析板兩塊, , 臥式層析槽一個, , 點樣用毛細管。

四、物理常數

名稱

分子量

熔點/ / ℃

沸點/ / ℃

折光率／n n２0 0

比重

顏色與形態

溶解度

甲基橙

７、33０ 未確定。

１。62６ ６6。20３２ ２ 橙紅色 鱗狀晶體或粉末

微 溶 于水 水, 較易溶 于 熱水 水, 不溶于乙醇

熒光黃

332。3１

定 未確定 未確定

未確定

-—— 橙紅色結晶粉末

不 溶 于水 水 , 乙 乙醚 醚, 氯仿苯 與苯,溶 溶于堿液。

五、儀器裝置圖

“浸有層析板得層析槽”圖

１--層析缸 ,2 — 薄層板 ,3 －展開劑飽與蒸汽 ,4 — 層析液

六、實驗步驟

(1))薄層板得制備: :

稱取２ ~5 ｇ層析用硅膠, , 加適量水調成糊狀, , 等石膏開始固化時, , 再加少許水, , 調成勻漿, ,平均攤在兩塊 5 5、０×１ 5c ｍ得層析玻璃板上, ,。

再輕敲使其涂布均勻。((！

老師代做！))

固化后, ,經 經 1 1 ０5 5 ℃烘烤活化 ０、5 5 h, 貯于干燥器內備用、(2)點樣。

在層析板下端２、0cm 處,(用鉛筆輕化一起始線, 并在點樣出用鉛筆作一記號為原點、)取毛細管, 分別蘸取偶氮苯、偶氮苯與蘇丹紅混合液, 點于原點上(注意點樣用得毛細管不能混用, 毛細管不能將薄層板表面弄破,在 樣品斑點直徑在 1 ～２mm 為宜！斑點間為 距為 1cm)

(3)定位及定性分析

用鉛筆將各斑點框出, , 并找出斑點中心, , 用小尺量出各斑點到原點得距離與溶劑前沿到起始線得距離, , 然后計算各樣品得比移值并定性確定混合物中各物質名稱。

純染料

混合染料2

甲基橙

熒光黃

甲基橙

熒光黃

混合液

斑點移動距離a(cm))

溶劑移動距離ｂ((ｃｍ))

R f

實驗注意事項1、鋪板時一定要鋪勻, , 特別就是邊、角部分, , 晾干時要放在平整得地方、2、點樣時點要細, , 直徑不要大于 2m ｍ, , 間隔 0 0。5 5 ｃm m 以上, , 濃度不可過大, , 以免出現拖尾、混雜現象。3、展 開用得燒杯要洗凈烘干, , 放入板之前, , 要先加展開劑, , 蓋上表面皿, ,、讓燒杯內形成一定得蒸氣壓、點樣得一端要浸入展開劑０、m 5cm 以上, ,但展開劑不可沒過樣品原點、當展開劑上升到距上端 0.5--１m cm 時要及時將板取出, , 用鉛筆標示出展開劑前沿得位置。

討論: :

七、思考題

第二篇：薄層色譜法驗證方案

白術薄層鑒別方法驗證方案

一、試液的配制

1、重現性 取相同的供試品、對照藥材溶液，由兩名檢驗員同時做，做薄層鑒別實驗，由色譜圖實驗結果，驗證其重現性。

2、專屬性 取相同的供試品、對照藥材溶液，利用正己烷試劑作為空白溶液，做薄層鑒別實驗，由薄層色譜圖結果，驗證其專屬性。

3、耐用性 按1、2方法下做薄層色譜實驗，分別點樣于青島海洋化工廠分廠、煙臺大學生物科技與工程研究所制備的硅膠G薄層板，由薄層色譜圖結果，驗證其耐用性。

白附子薄層鑒別方法驗證方案

一、試液的配制

1、重現性 取相同的供試品、對照藥材溶液、對照品溶液，由兩名檢驗員同時做，做薄層鑒別實驗，由色譜圖實驗結果，驗證其重現性。

2、專屬性 取相同的供試品、對照藥材溶液、對照品溶液，利用丙酮試劑作為空白溶液，做薄層鑒別實驗，由薄層色譜圖結果，驗證其專屬性。

3、耐用性 按1、2方法下做薄層色譜實驗，分別點樣于青島海洋化工廠分廠、煙臺大學生物科技與工程研究所制備的硅膠G薄層板，由薄層色譜圖結果，驗證其耐用性。

五味子薄層鑒別方法驗證方案

一、試液的配制

1、重現性 取相同的供試品、對照藥材溶液、對照品溶液，由兩名檢驗員同時做，做薄層鑒別實驗，由色譜圖實驗結果，驗證其重現性。

2、專屬性 取相同的供試品、對照藥材溶液、對照品溶液，利用三氯甲烷試劑作為空白溶液，做薄層鑒別實驗，由薄層色譜圖結果，驗證其專屬性。

3、耐用性 按1、2方法下做薄層色譜實驗，分別點樣于青島海洋化工廠分廠、煙臺大學生物科技與工程研究所制備的硅膠G薄層板，由薄層色譜圖結果，驗證其耐用性。

HPLC法測五味子中五味子醇甲方法驗證方案

一、標準曲線的制定 利用已知純度的對照品溶液，設計5個不同濃度，每個濃度制定一份供試品溶液，進行測定，以峰面積作為Y軸，濃度為X軸，并進行線性回歸，得出回歸方程，得出相關系數r。

二、方法的驗證

1、準確度的測定 用已知濃度的對照品溶液，利用加樣回收率實驗的方法，制備不同濃度的溶液6份，計算回收率的大小，并計算出RSD的大小。

2、精密度的測定 取一批原藥材，分別制成6份溶液，測定峰面積，計算平均值，并計算出RSD大小。

3、專屬性 采用純甲醇試劑作為空白樣品，連續進樣三針，有色譜圖結果，考察是否有干擾。

4、檢驗結果考察 取一批原藥材，分別制成3份溶液，分別進樣一針，并計算出結果，確定方法的可靠性。

第三篇：薄層色譜分析技術綜述

薄層色譜分析技術綜述

摘要薄層色譜法，是指將適宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或鋁基片上，成一均勻薄層。待點樣、展開后，與適宜的對照物按同法所得的色譜圖作對比，用以進行藥物的鑒別、雜質檢查或含量測定的方法[1]。本文介紹了薄層層析法的原理，操作方法，主要應用及其在各個學科中的應用，并指出了此方法的局限性、須待解決的問題。

關鍵詞：薄層色譜法；原理；操作方法；主要應用；局限性

薄層色譜(Thin Layer Chromatography)常用TLC表示，又稱薄層層析，是色譜法中的一種，是快速分離和定性分析少量物質的一種很重要的實驗技術，屬于固－液吸附色譜。是近年來發展起來的一種微量、快速而簡單的色譜法。它兼備了柱色譜和紙色譜的優點，一方面適用于少量樣品（幾到幾微克，甚至0.01微克）的分離；另一方面在制作薄層板時，把吸附層加厚加大，將樣品點成一條線，則可分離多達500mg的樣品。因此，又可用來精制樣品，此法特別適用于揮發性較小或較高溫度易發生變化而不能用氣相色譜分析的物質。此外，在進行化學反應時，薄層色譜法還可用來跟蹤有機反應及進行柱色譜之前的一種“預試”，常利用薄層色譜觀察原料斑點的逐步消失來判斷反應是否完成。

薄層色譜是在被洗滌干凈的玻板（10×3cm左右）上均勻的涂一層吸附劑或支持劑，待干燥、活化后將樣品溶液用管口平整的毛細管滴加于離薄層板一端約1cm處的起點線上，涼干或吹干后置薄層板于盛有展開劑的展開槽內，浸入深度為0.5cm。待展開劑前沿離頂端約1cm附近時，將色譜板取出，干燥后噴以顯色劑，或在紫外燈下顯色。

一、原理

色譜法的基本原理是利用混合物中各組分在某一物質中的吸附或溶解性能的不同，或和其它親和作用性能的差異，使混合物的溶液流經該種物質，進行反復的吸附或分配等作用，從而將各組份分開。薄層色譜是一種微量、快速和簡便的色譜方法。由于各種化合物的極性不同，吸附能力不相同，在展開劑上移動，進行不同程度的解析，根據原點至主斑點中心及展開劑前沿的距離，計算比移值（Rf）：

化合物的吸附能力與它們的極性成正比，具有較大極性的化合物吸附較強，因此Rf值較小。在給定的條件下（吸附劑、展開劑、板層厚度等），化合物移

動的距離和展開劑移動的距離之比是一定的，即Rf值是化合物的物理常數，其大小只與化合物本身的結構有關，因此可以根據Rf值鑒別化合物[2]。

薄層色譜可適用小量樣品（幾到幾十微克甚至0.01μg）的分離：也可用于多達500mg樣品的分離，是近代有機化學中用于定性，定量的一種重要手段。特別適用于那些揮發性小的化合物，以及在高溫下易發生化學變化而不能用氣相色譜分析的物質。

二、實驗基本流程

鋪板點樣展開顯色 計算Rf值

鋪板：取7.5x2.5cm左右的載玻片5片，洗凈晾干。在50mL燒杯中，放置3g硅膠G，逐漸加入0.5﹪羧甲基纖維素鈉水溶液(CMC)8mL，調成均勻的糊狀，涂于上述潔凈的載玻片上，用手將帶漿的玻片在水平的桌面上做上下輕微的顛動，制成薄厚均勻、表面光潔平整的薄層板，涂好的硅膠G的薄層板置于水平的玻璃板上，在室溫放置0.5h后，放入烘箱中，緩慢升溫至110℃，恒溫0.5h后取出，稍冷后置于干燥器中備用。

點樣：點樣用的毛細管為內徑lmm的管口平整的毛細管，將樣品溶于低沸點的溶劑（乙醚、丙酮、乙醇、四氫呋喃等）配成溶液。點樣前，可先用鉛筆在小板上距一端5mm處輕輕劃一橫線，作為起始線，然后用毛細管吸取樣品在起始線上小心點樣，如需重復點樣，則應待前次點樣的溶劑揮發后方可重點。若在同一塊板上點幾個樣，樣品點間距離為5mm以上。

展開：展開劑的選擇主要根據樣品的極性、溶解度和吸附劑的活性等因素來考慮。薄層的展開在密閉的容器中進行。先將選擇的展開劑放入廣口瓶中，使廣口瓶內空氣飽和5－10min，再將點好試樣的薄層板放入廣口瓶中進行展開，點樣的位置必須在展開劑液面之上，當展開劑上升到薄層的前沿（離前端5~10mm）或多組分已明顯分開時，取出薄層板放平晾干，用鉛筆劃溶劑前沿的位置后，即可顯色。

顯色：如果化合物本身有顏色，就可直接觀察它的斑點。如果本身無色，可先在紫外燈光下觀察有無熒光斑點（有苯環的物質都有），用鉛筆在薄層板上劃出斑點的位置；對于在紫外燈光下不顯色的，可放在含少量碘蒸氣的容器中顯色來檢查色點（因為許多化合物都能和碘成黃棕色斑點），顯色后，立即用鉛筆標出斑點的位置。

計算Rf值：準確地找出原點，溶劑前沿以及樣品展開后斑點的中心，分別測量溶劑前沿和樣點在薄層板上移動的距離，求出其Rf值。

三、主要應用

（1）定性鑒別 化學上經典的定性鑒別，例如經典的有機定性分析或經典的毒物分析，是利用各種化合物的溶解度不同和所含功能基的不同，用溶劑提取或用試劑處理，把它們分組或分為單一組分，然后作試管反應或點滴反應(顏色反應)，或根據它們衍生物的理化性質進行定性鑒別。這種方法的缺點是樣品用量叫大，分離手續麻煩,分析時間較長(幾小時或幾時個小時)，并可能有雜質干擾。現采用合適的展開劑和現色劑在薄層上作為分離和鑒別，根據樣品中組分的值和現色情況，同時用標準作對照，一般即能卻證為某一化合物。用薄層色譜法定性，樣品用量小，分離方便，分離時間短(幾分鐘或幾時分鐘)，檢出靈敏度高。例如，再毒物分析中檢驗是否巴比妥安眠藥中毒時，取胃內容物或尿樣品，先用鹽酸酸

化后，用乙醚提取，乙醚提取液脫水，過濾蒸干，溶于無水乙醇中，點在硅膠版上用氯仿、無水乙醇（36：1）展開，用硫酸汞二苯偶碳酰肼試劑顯色，并用標準品對照，意見出巴比妥，苯巴比妥，戊巴比妥和異巴比妥。鑒別速度快（1小時），這對于搶救中毒患者和及時為醫生提供治療方案極為重要。

（2）藥品的質量控制和雜質檢查 藥品的純度，通常用熔點，吸光值等物理常數作為鑒定的指標。但是薄層檢查也是藥品質量控制和雜質檢查的一種有效方法，有時甚至比一般方法更有效。一些國家的藥典和藥品規范已經采用。方法是把一定量得樣品溶液(例如，相當于樣品)電在薄層上，用展開劑展開并顯色，同時用純品作對照,如果樣品只顯示出純品值一致的一個斑點，則表示含有雜質。進一步可用薄層作雜質的限量檢查。例如鎦體藥物的合成和精致工作中，常含結構類似的雜質,即按上述方法控制其質量和雜質的限量。

（3）化學反應進程的控制 反應副產物的檢出以及中間體的分析，在化學反應進行到一定時間或反應終了時，把反應液取出作薄層分析，可以知道還剩下多少原料藥未起作用。方法是把反應液或其有機溶劑提取液點在薄層上，同時點原料作參比對照，看薄層上是否出現原料藥斑點。還可以用薄層檢查反應副產物。如果化學反應分步進行，則每一步反應的中間體的質量和產率也都可用薄層進行定性和定量。例如在合成強力霉素的過程中，需要中間地甲烯土霉素氫化物為脫氧土霉素。氫化反應是否完全，可用薄層檢查，如果反應完全，則反應釜中幾乎沒有或只有極少量的甲烯土霉素存在，薄層板上只顯示出一個脫氧土霉素，如果薄層板上有上下二個明顯的斑點，表示反應還沒有完全，尚需繼續還原,直到只顯示出脫氧土霉素的一個斑點為止才能出料。

（4）柱色普法分離條件的探索 柱色普法的實驗條件，例如選用什么吸附劑和洗脫劑較好各個組分按什么順序從柱中洗脫出來，每一分洗脫液中是含單一組分或就含幾種沒有分開的組分等，都可以在薄層上進行探索和檢驗。薄層上所有的展開劑雖不完全照搬柱色普法上，但仍有參考價值。

四、薄層色譜法在各個學科中的應用

（1）食品和營養 食品中的營養成分是蛋白質、氨基酸、糖類、油和脂肪、維生素、食用色素等。與食品和營養有害的物質則有殘留農藥、致癌的曲黃霉素等。這些成分都可用薄層色譜法定性和定量。蛋白質和多肽水解為氨基酸，對不同來源的動物性和植物性蛋白水解后產生不同的氨基酸進行定性和定量，有助于解決蛋白質的結構和食品營養問題。二十多種氨基酸用硅膠G薄層板雙向展開，一次即能分開，然后定性和定量，方法快速而簡便。多糖和寡糖可水解為單糖，可用薄層色譜法進行單糖和雙糖的定性和定量。文獻上有每一個糖的Rf值和相應的展開劑。油和脂肪解為脂肪酸，脂肪酸的種類和結構中的不飽和鍵數，與營養和衛生有關，關于油和脂肪的薄層（硅膠、硅藻土、纖維素)分析，文獻和綜述很多。脂溶性和水溶性維生素在薄層上可方便地定性和定量，例如脂溶性維生素A,D,E,K及B2,B6,B12,酶酸，泛酸，葉酸，C,促生素在硅膠G薄層上可用苯：甲醇：丙酮：冰醋酸（7:2:0.5:0.5）分開。用硅膠G薄層和丙酮：氯仿（1:1)以及激發波長365nm和波長450nm,可用熒光法測定ng量的曲黃素B1,B2,G1,G2,方法靈敏快速。

（2）藥物和藥物代謝 薄層色譜法在合成藥物和天然藥物中的應用很廣。有些文獻和內容偏重于合成藥物、化合物及其代謝產物，有文獻為在中草藥分析中的應用。每一類藥物，例如磺胺、巴比妥、苯駢噻嗪、甾體激素、抗菌素、生

物堿、強心甙、黃酮、揮發油和萜等，都包括幾種或十幾種化學結構和性質非常相似的化合物，可以在上述文獻中找出一、二種全盤的展開劑，一次即能把每一類的多種化合物很好地分開。藥物代謝產物的樣品一般先經預處理后用薄層分析，應用也很廣，但有時因含量甚微，不用采用氣相和高效液相色譜法靈敏。

（3）化學和化工 化工和化學方面的有機原料和產品都可用薄層色譜法分析。例如含各種功能基的有機物，石油產品，塑料單體，橡膠裂解產物，油漆原料，合成洗滌劑等，內容非常廣泛。

（4）醫學和臨床 薄層色譜法的應用還滲透到醫學和臨床中去，例如它是一種快速的診斷方法可用于妊娠的早期診斷。方法是基于在孕婦的尿中能檢出比未媳婦婦女的尿中含更多的孕二醇，把兩者的尿提取后點在薄層上比較，即可作出判斷。這一方法可不用動物而在2~3小時內化驗出結果。

（5）毒物分析和法醫化學 如前所述，經典的毒物分析有許多缺點，目前毒物分析和法醫化學采用薄層色譜法等新的手段，對麻醉藥、巴比妥、印度大麻、鴉片生物堿等均可分析。

（6）農藥 十多種有機磷農藥和六種有機氯農藥都可在硅膠G薄層上分開并測定含量，可用于農藥分析及其殘留量分析。

綜上所述，薄層層析有許多優點：它保持了操作方便、設備簡單、顯色容易等特點，同時展開速率快，一般僅需15～20分鐘；混合物易分離，分辨力一般比以往的紙層析高10～100倍，它既適用于只有0．01μg的樣品分離，又能分離大于500mg的樣品作制備用，而且還可以使用如濃硫酸、濃鹽酸之類的腐蝕性顯色劑。薄層層析的缺點是對生物高分子的分離效果不甚理想。

參考文獻:

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典.化學工業出版社, 2000二部: 附錄31.[2] 何麗一.平面色譜方法及應用[M].北京:化學工業出版社, 2000.108-112.

第四篇：制作薄層色譜硅膠板經驗總結（模版）

制作薄層色譜硅膠板經驗總結

（1）CMC配制：CMC的濃度為3-4‰。在500ml燒杯中加入150ml水，在磁力攪拌器攪拌下慢慢加入1.75gCMC，促使其溶解，攪拌20min后，再加入350ml水，一直攪拌1h。抽濾得CMC溶液待用。

（2）硅膠液配制：在研缽中加入約100ml上述CMC溶液，用研棒不斷攪拌下，慢慢加入硅膠GF254粉末（CMC水溶液的用量大約是硅膠質量的2-3倍之間），直至感到液體變得較粘稠狀，且用研棒蘸取硅膠液可見粘絲狀即可。切記不能馬上就開始鋪板，需要將其再放置約十幾分鐘，以使硅膠粉末能夠充分吸收水分溶脹，過早鋪板，將會造成硅膠板起泡、起鼓或起楞等。

（3）鋪板：用藥勺取適量硅膠液置于玻璃板上，并用藥勺大致均勻地攤開，尤其四個角及邊緣鋪滿，然后將該玻璃板在桌面上做上下地且幅度要大些顛動幾次即可。

（4）干燥：自然晾干十幾小時。

（5）活化：放在恒溫干燥箱里于105-110℃干燥30min，然后冷卻室溫，取出存放在干燥器保存，待用。

第五篇：第十七章 氣相色譜法 - 章節小結

1.基本概念

固定液相對極性，麥氏常數，程序升溫，噪聲，漂移，分流比，檢測器靈敏度，檢測限等。2．基本理論

（1）差速遷移：在色譜分析中，分配系數不同是組分分離的前提條件。氣相色譜法中，載氣種類少，可選余地小，要改變組分之間分配系數的或大小或比例，主要通過選擇合適的固定液。

（2）GC中的速率理論：速率理論是從色譜動力學的角度闡述影響柱效的因素，以Van Deemter方程式表示，在填充柱中，速率方程為：

H=A+B/u+Cu =2λdp+ 2gDg/u+ 在開管柱中，A＝0，此時速率方程為：

H=B/u+Cgu+Clu =u +

最小板高對應的載氣線速度稱為最佳線速度，為了減少分析時間，常用的最佳實用線速度大于最佳線速度。在學習速率理論時，應熟悉速率方程式中各項和各符號的含義，即這些因素是如何影響柱效的，從而理解分離條件的選擇。

（3）色譜柱分填充柱及毛細管柱兩類，填充柱又分氣-固色譜柱及氣-液色譜柱。固定液按極性分類可分成非極性、中等極性、極性以及氫鍵型固定液。固定液的選擇按相似性原則。常用硅藻土載體分為紅色載體和白色載體，紅色載體常用于涂漬非極性固定液，白色載體常用于涂漬極性固定液。硅藻土載體常需進行鈍化，其目的是為了減小載體表面的活性。載體鈍化的方法有酸洗（AW）、堿洗（BW）和硅烷化，這些鈍化方法分別除去堿性氧化物（主要是氧化鐵）、酸性氧化物（氧化鋁）和覆蓋硅羥基。

毛細管柱可分為涂壁毛細管柱（WCOT）、載體涂層毛細管柱（SCOT）、多孔層毛細管柱（PLOT）和填充毛細管柱。

檢測器分濃度型及質量型兩類。氫焰檢測器是質量型檢測器，具有靈敏度高，檢測限小，死體積小等優點。熱導檢測器是濃度型檢測器，組分與載氣的熱導率有差別即能檢測。電子捕獲檢測器也是一種濃度型檢測器，檢測含有強電負性基團的物質，具有高選擇性和高靈敏度。

為保護檢測器和色譜柱，開氣相色譜儀時，必須先開載氣，后開電源，加熱。關機時，先關電源，最后關載氣。

（4）柱溫的選擇原則為：在使最難分離的組分有盡可能好的分離度的前提下，要盡可能采用較低的柱溫，但以保留時間適宜及不拖尾為度。對寬沸程樣品，采用程序升溫方式。

（5）定性與定量：定性方法有已知物對照法，相對保留值，保留指數，利用化學方法配合，兩譜聯用定性。定量方法常用歸一化法和內標法，在沒有校正因子情況下，使用內標對比法較好。3．基本計算

固定液的相對極性

分離方程式 R=

相對重量校正因子= 歸一化法 Ci%=

外標法 mi =

內標法 mi=fiAi ms=fsAs mi= Ci%=

內標對比法