第一篇：雞新城疫疫苗研究進展

雞新城疫疫苗研究進展

摘要：新城疫(Newcastle disease,ND)是由新城疫病毒(NDV)引起的一種烈性病毒性傳染病,是當今全球范圍內最嚴重的家禽傳染病之一,也是我國所有雞病中危害最大的一種,被國際獸疫局列為A類傳染病。新城疫常呈敗血癥,主要特征是呼吸困難、下痢、神經機能紊亂、黏膜和粘膜出血。該病發病急、致死率高,對養禽業的發展構成嚴重的威脅。新城疫病毒只有一個血清型,但不同亞群和毒株在毒力、抗原性和致病性等方面存在著明顯的差異。這種差異雖然不足于造成免疫失敗,但有可能使一些致病毒株在免疫雞群持續存在。目前,雞新城疫尚無有效治療藥物，但在長期獸醫臨床實踐中，發現用中獸醫治療有明顯的效果，這對雞新城疫疫苗研究有新的進展。

關鍵詞：雞新城疫傳染病中獸醫進展

新城疫病毒基因組為一條負鏈不分節段的NA單個分子,由15186個核苷酸組成,包含6基因,由3′到5′的順序依次為NP-P-M-F-H-L,分別編碼核衣殼蛋白(NP)、磷酸化的核衣相聯蛋白(P)、基質蛋白(M)、血凝素神經氨酸酶(N)、融合蛋白(F)、RNA依賴的RNA聚合酶等6種病毒特異性結構蛋白。HN蛋白與F蛋白是重要的宿主保護性抗原,其中F蛋白是決定病毒毒力的主要因素,其次是HN蛋白,HN蛋白和F蛋白在決定病毒毒力方面關系密切。有強毒株和弱毒株兩類。病毒分為低毒力型（即緩發型）、中等毒力型（即中發型）、強毒力型（即速發型）3型。多數高強度毒力株常屬嗜內臟型新城疫病毒。

1、新城疫病原

雞新城疫病毒（NDV）屬于副粘病毒科腮腺炎病毒屬。但近年來對基因組長序列的測定表明，NDV以及其他禽副黏病毒（APMV）與腮腺炎病毒屬中的其他病毒之間的差別，足以把它們列為一個單獨的屬。BDV完整病毒料子近圓形，有囊膜，在囊膜的外層有呈放射狀排列的纖突，能刺激宿主產生抑制病毒凝集紅細胞的抗體和病毒中和抗體。

根據不同毒力毒株感染雞表現的不同，可將NDV分為幾種致病型：（1）速發型或強毒型毒株，在各種年齡易感染雞引起急性致死性感染（2）中發型或中毒弄毒株，公在易感染的幼齡雞造成致死性感染（3）緩發型即低毒型或無毒型毒株，表現為輕微的呼吸道感染或無臨診癥狀腸道感染。NDV的毒力分型必須進行生物學試驗，即依據雞胚平均死亡的時間（MDT）、1日齡雛雞腦內接種致病指數（ICPI）和6周齡雞靜脈接種致病指數（IVPI）來區別。

NDV的一個很重要的生物學特性就是能吸附于雞及某些哺乳動物或人的紅細胞表面，并引起紅細胞凝集（HA），這種特性與病毒囊膜上纖突所含血凝素和神經氨酸酶有關。其血凝現象能被抗NDV的抗體所抑制（HI），因此可用HA和HI試驗來鑒定病毒，進行免疫監測和滸病學的調查。

2、新城疫疫苗的研究及中藥防治

目前已知主要的新城疫疫苗有基因工程苗、弱毒活疫苗、滅活疫苗、聯苗等。

2、1 基因工程苗

基因工程苗是目前疫苗研究的熱點，國內外一些實驗室從20 世紀80年代末開始利用重組DNA 技術研制ND 基因工程疫苗。目前，ND 基因工程苗主要有DNA 疫苗、亞單位苗、活載

體疫苗、多肽苗和轉基因植物疫苗等幾種。DNA 疫苗具有能夠激發機體體液免疫和細胞免疫反應、不散毒、便于儲存和運輸等優點。亞單位苗是將NDV 保護性抗原基因在原核或真核系統中表達所獲得的產品制成的疫苗，具有安全性高，穩定性好，便于保存運輸，易于批量生產的優點。活載體疫苗的載體病毒或細菌表達目標抗原可以最大限度地不受接種動物體內新城疫抗體的干擾。轉基因植物疫苗的效果好，成本低、疫苗的植載體易于保存，使用方便，市場潛力巨大，發展前景十分廣闊。目前，ND的基因工程苗主要有以下幾種：

2．1．1 DNA疫苗

DNA疫苗是二十世紀九十年代從基因治療領域發展起來的一種全新的疫苗，具有能夠激發機體體液免疫和細胞免疫反應、不散毒、便于儲存和運輸等優點。新城疫病毒的F和HN蛋白基因均是新城疫病毒的保護性抗原基因。新城疫DNA疫苗將病毒HN或F基因通過表達質粒DNA導入機體細胞，借助宿主細胞表達系統表達病毒NA或F蛋白，誘發機體產生針對這些抗原的特異性免疫發應。

2．1．2 亞單位苗

亞單位苗是將NDV保護性抗原基因在原核或真核系統中表達所獲得的產品制成的疫苗，即利用重組DNA 技術在高效表達系統表達NDV 免疫原性基因, 并輔以佐劑而制成的疫苗，這種疫苗具有安全性高，穩定性好，便于保存運輸，易于批量生產的優點。

2．1．3 活載體疫苗

雖然DNA疫苗和亞單位苗均顯示了良好的免疫性能，但因受到價格的限制往往難以實際推廣應用。因此，大多數學者利用痘病毒、火雞皰疹病毒和某些細菌作為載體，插入新城疫病毒HN或F基因，通過動物接種，使接種雞得到免疫保護。載體病毒或細菌表達目標抗原可以最大限度地不受接種動物體內新城疫抗體的干擾，隨后發展了包括痘病毒、皰疹病毒、反轉錄病毒和沙門氏菌減毒株等活載體重組體，其中以重組痘病毒和皰疹病毒研究最為深入。2、2 弱毒活疫苗

用新城疫弱毒苗是目前許多國家用來預防雞新城疫的常規而廣泛的方法。弱毒疫苗系用雞新城疫低毒毒株接種敏感雞胚培養，收獲感染雞胚尿囊液，加適當穩定劑，經冷凍真空干燥制成的凍干苗。在我國使用的弱毒疫苗有兩種類型：中等毒力的I系疫苗以及弱毒的Ⅱ系、Ⅲ系、Ⅳ系和V4弱毒疫苗。其中Ⅰ系苗屬于中等毒力苗,免疫后雞體產生抗體快,抗體維持時間長(3～5周),但Ⅰ系苗對雛雞和產蛋雞均有一定的致病力,使用時應注意。多用于60～120日齡的青年雞的加強免疫。Ⅱ系、Ⅲ系、Ⅳ系苗等均為弱毒疫苗,通常用于青年雞群的早期接種,而Ⅳ系苗的毒力相對Ⅱ系、Ⅲ系稍強,對雞群具有較好的免疫保護性,是目前使用較多的弱毒苗。

2、3 滅活疫苗

滅活疫苗會使受種者產生以體液免疫為主的免疫反應，它產生的抗體有中和、清除病原微生物及其產生的毒素作用，對細胞外感染的病原微生物有較好的保護效果。滅活疫苗對病毒、細胞內寄生的細菌和寄生蟲的保護效果較差或無效。滅活疫苗是經處理而致死的病原體，安全性好，免疫應激反應小。其優缺點見表1。Takada等通過鼻內接種ND滅活疫苗，能夠引起局部和全身的抗體反應，對致死量的NDV強毒鼻內攻毒產生保護力，其免疫效應通過配合使用霍亂毒素B亞單位(CTB)的佐劑可得到增強。沈志強等用NDV Clone-30株病毒接種非免疫雞胚，制備抗原液，經甲醛滅活后與純化的天然免疫增強劑蜂膠乳化，研制成雞ND蜂膠滅活疫苗，其安全性和免疫原性良好。目前預防雞新城疫滅活苗使用較多的為油乳劑滅活疫苗。

2、4 聯苗

目前國內外生產的雞用聯苗日漸增多，采用聯苗可以減少對雞的免疫次數和應激，可以用來防治雞的各種疾病。2005年12月24日，我國農業部在北京宣布，我國成功研制了禽流感一新城疫重組二聯活疫苗，并正式批準生產。美國在27個苗中就有18個是聯合苗，日本生產的雞所用聯合苗占雞用苗的40％，如雞新城疫一傳染性支氣管炎疫苗，新城疫一雞痘疫苗，新城疫一鼻炎疫苗等。趙恒章等通過斌驗證明，新城疫一傳染性支氣管炎二聯油乳劑滅活苗接種21日齡雛雞后，14天后便能產生有效的保護抗體。王宏俊等經過試驗，發現當NDV+AIV(H9)二聯苗免疫劑量為O．5毫升／只時，免疫后2l天雞血清中 AIV及NDV的HI抗體均大于28，并具有很好的免疫保護性，能夠耐受AIV(H9亞型)及NDV F48的攻擊。新城疫傳染性支氣管炎聯合疫苗已早研制成功，并可將2 種病毒接種于同一雞胚中生產疫苗，試驗結果證明這種疫苗具有良好的免疫效果和實用價值。王麗男等對雞新城疫、傳染性支氣管炎、傳染性法氏囊病三聯活疫苗的安全性和免疫效力進行了試驗，結果證明該疫苗的安全性和免疫效果良好。用常規量的1 0 倍劑量接種雛雞未見不良反應。

2、5 中藥防治

長期以來,中藥飼料添加劑在獸醫臨床上防治雞新城疫病取得了較好療效,適合于臨床推廣。獸醫工作者通過提取中藥有效成分后作為疫苗免疫佐劑應用,可大大降低疫苗與中藥的使用次數和劑量,提高雞新城疫免疫效果,從而更有效地防治雞新城疫病。中藥佐劑能顯著促進淋巴細胞轉化,提高血清抗體效價,多數時間點與油佐劑的效果相當,部分時間點顯著強于油佐劑。目前有中藥散劑防治雞新城疫和中藥煎劑防治雞新城疫兩種方法，由于我國養禽業總體水平不高,特別是在某些重大禽類傳染性疾病的防治上存在較多問題。另外,當前養禽業中抗生素、化學合成藥物、激素等使用不規范,禽類產品藥物殘留超標而影響出口,禽類排放糞便造成環境污染和破壞生態平衡等。使用了數千年的傳統中藥具有諸多抗生素等化藥無法比擬的優點,可用于雞新城疫、禽流感等重大禽類傳染性疾病的防治。因此,為了生產更多的“健康綠色食品”,有必要進一步加強中藥防治禽類疾病的科研投入,使我國養禽業走上健康、良性、持續發展的道路。

3、疫苗的使用方法及注意事項

目前我國對雞新城疫疫苗的使用方法有：飲水免疫、注射免疫、氣霧免疫、滴鼻點眼免疫等。3、1飲水免疫

首先要保證足夠的飲水器，并把飲水器清洗干凈，無抗菌、消毒藥物殘留；飲水免疫前停水2~4小時；疫苗水中不含金屬離子和氯離子，可使用涼開水或蒸餾水，最好使用去離子水，并在其中加入2~3%鮮牛奶或0.2~0.3%脫脂奶粉，以穩定病毒活性。然后按要求加入疫苗，混勻后給雞飲服。

特別注意疫苗的用水量，一般為雞日飲水量的30%，疫苗用量高于平均用量的2~3倍，保證所有的雞同時喝到疫苗水，并在0.5~1小時內飲完。如飲水量少，只能讓一部分雞飲上疫苗，造成免疫不均勻；飲水量太多，很長時間飲不完，造成疫苗效價降低。

3、2 注射免疫

注射前要將注射器具徹底消毒，疫苗現配現用，疫苗用滅菌生理鹽水或涼開水稀釋，不能用熱水或含氯的自來水作稀釋液，滅活疫苗要搖勻后才能使用；注射劑量要準確，不能任意加大或減少疫苗用量；注射時操作要規范，頸部皮下注射應提起皮膚掌握好角度，針頭刺入皮膚與肌肉之間，避免刺傷頸骨或穿針；肌肉注射應根據雞齡大少確定實施部位，一般胸部龍骨肌肉最厚處注射，避免破血管或內臟器官，造成骨骼損傷及死亡，腿部注射應在腿外側無血管處，進針時順腿骨方向刺入，避免刺傷血管神經。

3、3 氣霧免疫

主要在大群免疫時應用，但不適宜于30日齡內的雛雞和存在慢性呼吸道病的雞群，以免誘發呼吸道系統疾患。氣霧免疫時，將疫苗按規定稀釋好，用噴霧器或空壓機將疫苗液噴成氣霧粒子。一般對6周齡以內的雛雞氣霧免疫，氣霧粒子為 50μm，而對12周齡雛雞氣霧免疫時，氣霧粒子取10~30μm為宜。在雞頭上為約1.5米左右噴霧，噴完后要最大限度地降低通風換氣量，以保證氣霧免疫效果，同時也要防止通風不良而造成 窒息死亡，一般噴霧后密閉雞舍10~20分即可。但應注意有雞支原體感染的雞群，禁用噴霧接種；疫苗稀釋后，應放冷暗處，必須在4小時內用完。

3、4點眼滴鼻

點眼滴鼻適用于雞新城疫II系、III系、IV系疫苗的接種。對幼雛應用這種方法，可以避免疫苗病毒被母源抗體中和，從而取得比較良好的免疫效果，而且能保證每只雞普遍得到免疫，且劑量一致。因此，一般認為點眼滴鼻法是雞疫苗接種的最佳方法，尤其是雞新城疫苗接種更是如此。用點眼滴鼻法接種時，可把1000只份的疫苗稀釋于50或t00毫升生理鹽水中，充分搖勻，然后在每只雞的眼結膜或鼻孔上滴1滴(約0．05m1)。用La Sota弱毒苗0．05毫升滴鼻免疫，同時皮下注射0．3毫升油乳劑滅活苗或蜂膠苗0．5毫升，可獲得90％以上的保護率，單獨用其中一種苗免疫則效果低得多。

展望

隨著我國養禽業的迅猛發展, 對ND 的防治越來越重要。因此研制出高效、安全、生產工藝簡單、價格低廉、適用的ND 疫苗有重要意義。此外中獸藥是在獨特中獸醫理論指導之下用于動物疾病防治,兼有營養和藥用雙重功效,與西藥相比具有天然性、多能性、低毒副、不易產生有害殘留和耐藥性等優點,為動物臨床廣泛應用。于此同時，建立統一的獸醫行政管理監督執法體系，改變現行的分散管理格局，實行從中央到地方的官方獸醫制度，盡快與國際接軌，強化畜禽生產管理，加大執法力度，建立綠色畜禽產品專營市場，嚴格實行準入制，使合格產品進入，不合格的淘汰；扶持綠色品牌龍頭企業，讓綠色品牌和龍頭企業結合，使 綠色品牌優勢轉化為經濟發展優勢，真正提高其質量安全水平。目前對雞新城疫疫苗研究和中藥防治，已經成為國際疫苗研究領域最熱門的課題之一。

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第二篇：新城疫疫苗

新城疫疫苗 癥狀：產蛋量急劇下降，蛋質變差，蛋殼顏色變淺，軟殼蛋明顯增加，產蛋量下降維持 10-24天后，又逐漸回升。部分成雞有拉稀而無神經癥狀，病雞氣喘甩頭，有呼吸羅音，嚴重者導致呼吸困難，但死亡率較少。

鑒別診斷：1.精神萎靡，采食減少，呼吸困難，飲水增多。常有“咕嚕”聲，排黃綠色稀便；

2.發病后部分雞出現轉脖、望星、站立不穩或臥地不起等神經癥狀，多見于發病的雛雞和育成雞；

3.產蛋雞產蛋減少或停產，軟皮蛋、褪色蛋、沙殼蛋、畸形蛋增多，卵泡變形、卵泡血管充血、出血。

4.腺胃乳頭出血，腸道表現有棗核狀紫紅色出血、壞死灶。喉頭和氣管黏膜充血、出血，有粘液；

實驗室診斷：血凝和血凝抑制試驗，ELISA、PCR。

防治：

1、使用新城疫疫苗，2、肌肉注射香港奧邦禽優樂，治療量：0.5ml/公斤，如果能配合倍力健注射或飲水效果更佳。一天一次，即可控制大群。個別嚴重的病例單獨挑出來一天注射一次，兩用兩天即可治愈。

第三篇：禽流感疫苗研究進展

禽流感疫苗研究進展

摘要 對禽流感的預防，必須在采取嚴格的生物安全措施的同時，加強必要的免疫措施。對不同類型禽流感疫苗的研究現狀、優越性與局限性進行了綜述。

關鍵詞 禽流感；疫苗；研究進展

最近，亞洲一些國家不斷暴發的禽流感（Avian influenza，AI）事件引起了人們對全球一系列動物和公眾健康問題的極大關注，最近的聯合國糧農組織（FAO）羅馬提交會議指出[1]，當面臨AI大流行威脅時，采取大規模撲殺感染動物的措施會喪失很大一部分食物來源，使地方養禽業遭受嚴重打擊，顯得不太合理。對禽流感的預防，必須努力集中在采取嚴格的生物安全措施的同時，加強必要的免疫措施。免疫能減輕臨床癥狀，降低死亡率，減少病毒的擴散和提高群體對感染的抵抗力，從而控制禽流感病毒（Avian influenza vinus，AIV）的廣泛傳播[2]。然而，如果疫苗的使用和管理不當，不僅達不到預期的效果，還會污染環境，威脅公眾健康。因此，研制安全、高效的AIV疫苗是專家們為之不懈努力的目標。

理想的疫苗應具有高的生物保護容量，同時消除環境污染和易感動物感染的可能性。總的來說，對于AIV疫苗的發展，以下幾種設計思路均已被采用或嘗試。

1全病毒滅活疫苗

由于AIV基因組的抗原漂移，AIV疫苗僅能提供70%的保護力。針對這種特點，AIV滅活疫苗通常制備成針對幾種不同亞型AIV的多價疫苗，己證明1種滅活疫苗可以至少包括4種不同的AIV亞型。同只含單一亞型的疫苗比，多價疫苗并沒有減弱對同一種HA亞型AIV攻擊的有效保護[3]，而且各亞型抗原之間不產生免疫干擾。AIV滅活疫苗能使免疫雞群在感染AIV野毒時有效地減輕損失，并顯著減少可能存在于雞群和環境中的病毒數量，縮短其存活時間，是AI防治的主動措施、關鍵環節和最后防線。而且滅活疫苗具有制備工藝簡單、免疫效果確實、免疫持續期長等特點，許多國家已將其作為商品化的AIV疫苗應用于家禽中。我國己研制成功不同亞型的AIV疫苗，且證明具有良好的免疫保護作用。但滅活苗本身存在一些缺陷[4]，主要是：影響疫情監測；存在散播病毒的風險；免疫劑量較大，制備成本高。其最突出的缺點是不能誘導產生有效的粘膜免疫抗體和細胞免疫應答，因而無法有效地抑制呼吸道中AIV的復制。近年來，人們試圖從技術上突破此缺點，篩選并利用同亞型弱毒疫苗株代替高致病性毒株制備滅活苗，是滅活苗研制中的努力方向之一。例如用2種不同的病毒同時感染雞胚可導致片段間的重排而有可能產生所期望的疫苗株，這些疫苗種子株獲得了抗原相關毒株相應的HA和NA基因，和A/Puerto Rico/8/34（H1N1）中的6個基因片段[5]。這些PR/8/34的片段賦予病毒弱毒所以能在雞胚中迅速生長，適合作為滅活疫苗的生產。

2基因工程亞單位疫苗

亞單位疫苗是提取AIV具有免疫原性的抗原蛋白，加入佐劑而制成。這種疫苗安全性好，能刺激機體產生足夠的免疫力，只是抗體持續時間短，且成本高。謝快樂等曾用臺灣AIV分離株（H8N4）的HA和NP制備了復合亞單位疫苗，同時制備了滅活的油佐劑疫苗。當以疫苗誘生的HI抗體作為評價標準時，發現2種疫苗的差別不明顯，只是在加強免疫后，亞單位疫苗的HI抗體水平的升高比油佐劑疫苗明顯[6]。隨著基因工程技術的不斷發展，將免疫原性基因導入表達載體，經誘導可獲得大量表達的免疫原性蛋白，提取所表達的特定多肽，加入佐劑即制成基因工程亞單位疫苗，這樣可大大降低疫苗的成本。Kodihalli等研制了火雞H5N2病毒NP/HA和ISCOM的復合亞單位疫苗，用其免疫火雞，21d可產生較高的抗體滴度，并且T、B淋巴細胞被激活，可以對同源和異源（H6N1）亞型病毒的攻擊產生保護作用，在攻毒后3d，可清除火雞肺部和泄殖腔的病毒[7]。另外，將AIV的基因插入桿狀病毒表達載體，利用重組病毒在昆蟲細胞中表達的AIV蛋白來制備AIV的亞單位疫苗也已研究成功。Crawford等利用桿狀病毒表達系統生產H5、H7亞型AIV的重組HA佐劑疫苗，免疫3周齡白色Rock雞，用同亞型HPAIV攻擊，結果重組HA佐劑疫苗組所有的雞只均不發病，而未免疫組雞只全部死亡，且經H5亞型病毒的重組亞單位疫苗免疫過的雞攻毒后都不排毒[8]。

基因工程亞單位疫苗產生的抗體不針對病毒的內部蛋白，因此不會干擾AIV的血清學調查，而且其不存在毒力返強、散毒和環境污染的問題，是安全性很好的疫苗。重組桿狀病毒表達的HA亞單位疫苗在禽類表現出良好的免疫原性，免疫后只誘導HA特異性抗體應答，不影響疫情監測，顯示出了一定的應用前景。

3重組活載體疫苗

雞痘病毒作為禽用疫苗病毒載體，具有外源基因容量大、可對表達的外源蛋白進行正確加工修飾、嚴格的宿主特異性和生物安全性等優點[9-11]，利用對禽類致病性很弱的痘苗病毒或禽痘病毒作載體，構建含有免疫原性基因的重組病毒，用此重組病毒作疫苗，可在動物體內復制，并不斷地表達出免疫原性蛋白，從而誘導禽類產生針對目標病原的免疫保護力。Webster（1995）和Swaynes（1997）先后構建了含A/Ty/Ire/1378/83（H5N8）HA基因的禽痘病毒重組疫苗，用其免疫仔雞，用在墨西哥分離的致死性強毒H5N2攻擊，試驗結果證明該苗可對H5N2提供0%～100%的保護[12]；冀德君、劉紅旗等應用表達H9亞型 AIV HA的重組雞痘病毒疫苗及其傳代后第20、30代疫苗免疫5日齡無特定病原（SPF）雞群，攻毒后第5天各免疫組排毒的雞數與對照組相比顯著減少[13]；程堅等用表達H9亞型AIV HA基因的重組雞痘病毒在7日齡SPF雞及含抗FPV母源抗體的商品雞上進行的免疫效力試驗亦表明，重組雞痘疫苗能顯著抑制靜脈攻毒后免疫雞從泄殖腔的排毒，效果與AIV全病毒滅活苗相當[14]。賈立軍用構建的表達H5N1 HA的重組雞痘疫苗免疫SPF雞和無母源抗體的商品雞，免疫雞可抵抗H5N1亞型HPAIV的致死性攻擊，誘導95%～100%的免疫保護[15]。陳平用構建的高效表達H9亞型AIV HA基因的重組雞痘病毒頸部皮下免疫1日齡SPF雞，攻毒后試驗結果表明，rFPV-Ps-HA明顯抑制了病毒的排出[16]。以上試驗均表明，攜帶AIV HA基因的重組雞痘疫苗具有良好的效果。

同滅活苗相比，攜帶HA基因的重組活載體疫苗不僅可提供相當的保護效果，而且具有一些獨特的優點：安全性高；可通過刺種和皮下注射接種途徑進行免疫，使用方便；免疫應激小；用量少，不需添加佐劑，成本大大降低；而且抗體持續時間長，效果好，用其免疫家禽，既可刺激宿主產生體液免疫，又能刺激宿主產生細胞免疫[17]。基因重組的雞痘疫苗的最大優點是不干擾血清學調查，因此該重組疫苗適用于監測野毒感染[4]。

4DNA疫苗

Ulmer等[18]報道了小鼠肌肉注射含有編碼甲型流感病毒核蛋白（NP）的重組質粒后，不僅產生抗NP的特異性IgG抗體，而且誘導CTL反應，可有效地保護小鼠抗不同亞型分離時間相隔34a的流感病毒的攻擊。Pertmer發現，流感病毒NP基因的核酸疫苗激活機體的免疫反應不受母源抗體的干擾[19]。同樣，在有母源抗體存在的情況下，HA和NP基因均能有效激活細胞免疫應答反應。我國研制的H7亞型HA基因DNA疫苗，在極小的使用劑量下即可成功誘導免疫保護反應，并有效阻斷同源MPAIV在機體內的感染和排毒 [20]。大量的動物試驗都說明在合適的條件下，DNA接種后既能產生細胞免疫又能產生體液免疫[21-24]，于是，DNA疫苗技術應運而生，并逐漸顯示出它作為第3代疫苗的優越性。與傳統疫苗相比DNA疫苗有許多優點：能長時間表達抗原；具有與天然抗原相同的構象和免疫原性，可同時激發機體產生細胞免疫、體液免疫和粘膜免疫應答，而且不受母源抗體的干擾；結構簡單，制備方便；穩定性好，易于保存和運輸；能夠克服由于免疫系統發育不完善而導致的免疫力低下的缺陷；可用于制備多價疫苗或聯苗。

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目前，對于DNA疫苗存在著安全方面的考慮：質粒DNA低水平整合到宿主基因組的潛在危險性；DNA疫苗載體攜帶的抗生素基因可能導致的生物學后果；產生針對雙鏈DNA的抗體；引起免疫耐受。針對上述四種潛在的危害性，美國FDA、WHO及EU都對DNA疫苗的研制制定了一些指導性規定，為DNA疫苗的研究、生產及應用指明了方向。由于DNA疫苗代價相對較高，且不適于集約化養殖的群體免疫，因此可考慮改進DNA疫苗生產工藝和優化疫苗接種方式來開發出價格低廉、實用化的DNA疫苗。其中應用減毒胞內菌運送DNA疫苗的途徑取得了一些令人振奮的結果。已經有了一些比較好的減毒沙門氏菌菌株作為禽類DNA疫苗的運送載體的研究報道，張小榮等以減毒沙門氏菌運送H5亞型AIV DNA疫苗的生物學特性研究表明，該疫苗具有良好的安全性和免疫原性，能同時激發細胞免疫、體液免疫和粘膜免疫應答[25]，這類疫苗仍在探討中，需對這類疫苗進行進一步優化，才能最終篩選出真正適合臨床應用的疫苗。

5RNA復制子疫苗

隨著DNA疫苗的深入研究，人們擔心DNA會整合到宿主細胞基因組上，造成致癌隱患。此外，DNA通過核膜較為困難，限制了其作用的發揮，在一定程度上阻礙了DNA疫苗的推廣應用。于是，人們又設想用RNA替代DNA作基因疫苗，近年來開發的RNA復制子載體應運而生。該RNA復制子可以不依賴于宿主細胞而自主復制，包含病毒基因組5’和3’末端的順式作用元件、全部非結構蛋白基因編碼區（包括復制酶編碼基因），而結構蛋白基因被缺失，由外源基因取代，這種重組病毒粒子可以很容易地攜帶達3kb的外源RNA，并且感染的細胞譜較廣，包括非分裂細胞[26]。Vignuzzi等[27]將A型流感病毒A/PR/8/34（ma）株的NP基因插入塞姆利基森林病毒（SFV）載體上構建RNA疫苗，7～8周齡的C57BL/6老鼠肌肉注射10μg SFV RNA，3～4周后再加強1次，共免疫3次。第3次免疫后1～3周，由鼻腔攻入100pfu的A/PR/8/34（ma）病毒。試驗結果不僅有較高的中和抗體出現，而且誘導了有效的CTL反應，試驗小鼠能有效清除肺部的病毒。大量的研究證實DNA/RNA復制子比常規DNA疫苗的免疫原性好[28]，可以產生更強的抗體應答和更多的CTL前體，而且使用比常規DNA疫苗免疫劑量低100倍的復制子疫苗就可以產生與常規DNA疫苗相當的免疫效力。可見，RNA復制子載體的特點包括：復制效率高，用量遠遠低于常規DNA疫苗；可同時誘導抗體應答和CTL應答；安全性好，RNA復制子在胞漿內復制，避免了核的參與，不存在整合進宿主基因組的可能性；RNA復制子導致轉染細胞的溶解，避免了有自主復制能力的病毒的產生；復制子系統能自主復制，可針對多種病原進行連續免疫，而不受己有載體病毒抗體的干擾。

6冷適應流感弱毒疫苗

用野毒株感染雞胚在較低溫度下（25～30℃）培養，連續傳代后可較快的使病毒的致病力減弱，從而獲得冷適應流感弱毒病毒供體。通過在表達靶HA和NA的野生型病毒和病毒供體如A/Ann Arbor/6/60（H2N2）之間的基因重排可以獲得減毒的冷適應性病毒株，病毒的這些特征與多基因的突變有關。滴鼻免疫減毒的冷適應性的流感活疫苗，能引起全身和局部粘膜的免疫反應，顯示出保護效力[29]。這些活的減毒病毒顯示出高水平的表型和基因穩定性，不會轉變成接近的相關血清學陰性毒株。已經獲得H5N1 和H9N2/Ann供體的重組冷適應性病毒。這些病毒不會對哺乳動物和雞致病[30]。雖然現在流行的肌注禽流感疫苗能夠有效地誘導相關病毒特異的血清血凝抑制IgG抗體，他們卻不能刺激鼻腔產生分泌型IgA抗體[31]。因為分泌型IgA能與異源型的流感毒株交叉反應，活的減毒的禽流感疫苗能夠廣泛地提供針對抗原變異株的交叉保護，一旦新的流感毒株流行時它將非常有用[32，33]。美國對冷適應流感弱毒疫苗的研制己有30多年的歷史，但由于擔心其安全性，至今仍未被批準使用。俄羅斯是目前全球唯一人流感冷適應流感弱毒疫苗獲準使用的國家，該疫苗己在數億兒童中使用，證實能提供良好的保護，并無不良反應。到目前為止，無論俄羅斯還是全球，沒有流感病毒擴散的跡象[34，35]，但活的AIV疫苗病毒仍有與人類共感染毒株發生基因重組，或毒力返強，造成新的流感毒株出現的可能，對其大面積的推廣使用，還需在生物安全性方面加以時間上的驗證。

7復制缺陷型流感病毒疫苗

用反向遺傳系統可獲得減毒的AIV，在流感流行時對疫苗的供給可能會起很關鍵的作用。病毒的HA和NA基因被克隆并插入到質粒中，通過去除HA的多個堿性氨基酸裂解位點序列使其減毒，插入了HA和NA的質粒與攜帶A/PR8/34病毒內部基因的質粒共轉染細胞系產生相應的非致病性疫苗株。采用該方法產生的疫苗不僅能產生保護性抗體，而且能誘導很強的細胞免疫，是另一個很有發展前途的活疫苗。此疫苗能夠在幾個星期內獲得，從而能應付緊急流感大流行事件來臨時疫苗的需求。Watanable等[36]利用反向遺傳學從cDNA獲得NS2蛋白缺失的病毒粒子，用其感染細胞時，能在細胞內表達病毒蛋白但不能形成有感染力的病毒粒子，用此方法制成的疫苗能保護離最后1次免疫3個月后的老鼠接受10或100 LD50的攻擊（9只老鼠存活8只）。其它獲得復制缺陷型流感病毒疫苗的途徑是使M2基因缺失[37]。此缺失疫苗在組織培養物中生長良好，但在老鼠體內有限生長，因此是一潛在的活疫苗候選。雖然重組減毒的H5病毒在小鼠中只具有限的神經毒力，但其符合理想模式的疫苗設計特點――不會致死雞胚、減弱的毒力、對模型動物具有易感性，已經開始運用于生產，不過在疫苗生產技術被采用之前仍有一些規章，安全性以及合法性問題需要考慮和克服。在生產人用疫苗時用于轉染的哺乳動物細胞系（如vero細胞）的質量必須符合標準。用反向遺傳系統產生的病毒可能被認為是“基因改良的有機體”，因此各個國家強加了一些地方和民眾的安全性法則限制其研究和發展，而且高科技的反向遺傳技術的使用權被保留，需要經過許可才能采用此方法生產商業化疫苗。

8表位疫苗

根據病毒的抗原表位來研制表位疫苗，尤其是為易變異的病毒疫苗的研制提供了方向。Levi等[38]將流感病毒的3個表位：Ｂ細胞表位HA91-108、CTL表位NP147-158、Th細胞表位NP55-69分別插入沙門氏菌的鞭毛蛋白基因中構建了3個真核表達質粒，鼻腔免疫小鼠。3種質粒混合免疫組可以誘導長期的免疫應答，并且可以完全抵抗病毒的致死性攻擊。Thomson等[39]以1個真核表達質粒投遞了10個CTL抗原表位，其中包括NP基因的3個表位：NP50-

58、NP147-155、NP366-374和NS1基因的1個表位NS1152-160，免疫鼠后通過Cr51釋放試驗，檢測這些表位顯示該質粒誘導了強的CTL應答，并且可以清除感染的病毒。

表位疫苗不僅提供了一種更有效地利用病原體中各個抗原成分的方法，而且對于流感病毒這種高度變異的病毒來說，一方面可以通過選擇具有交叉保護性的表位來達到預防多個毒株的目的，另一方面可以通過對流行毒株的監測來及時合成表位，實現對變異毒株的控制。

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9轉基因植物疫苗

宋長征等利用轉基因馬鈴薯表達AIV HA蛋白[40]。利用電擊穿孔轉化法，將含有AIV HA基因的表達質粒pHAO（其中含35S啟動子和來源于大豆植物存儲蛋白基因的vspB終止末端，另有抗性標記）導入農桿菌EHA105，轉化細菌再感染馬鈴薯的幼莖外植體，轉化植株再生和溫室栽培。Westernblot分析表明，83%的轉化植株在其馬鈴薯塊莖組織中表達了重組HA，表達量占總蛋白量的0.03%～0.04%。結果顯示，用轉基因馬鈴薯生產口服AIV疫苗是有前景的。

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第四篇：一起典型雞新城疫成功治療的心得體會

成功治愈一例典型雞新城疫病的心得體會

劉朝華

隨著眾多惠農支農政策的實施和深入人心，激起了我市廣大農民養殖的新高潮，各鄉鎮養殖業蓬勃發展。與此同時，動物疾病的發生發展與過去相比變得更復雜和頻繁，市畜牧局積極開展技術推廣服務，多次深入各養殖場所，進行技術指導和疫病診斷治療，有效地保障了廣大養殖戶的經濟效益，現將最近成功治療一例雞典型新城疫病整理出來以供廣大同仁交流和探討。

2009年6月23日，天氣炎熱，正當午時，公司正準備下班，***鎮***村農莊老板***心急火燎地來市局求助技術人員救治其發病雞群，劉朝華、金先鵬同志立即頂著午時炎熱，趕往家升農莊。該農莊建有兩棟雞場，分建在兩個不同高度，到高處的雞舍必須途經低處的雞舍，發病雞在高處雞舍，為1年期日齡土雞，約520余只，發病6天，死亡約200余只，按照目前他們對外銷售的土雞價格每只50元計算，初步估計已損失10000余元；低處的雞舍存籠約1000只，為30日齡的土雞，尚未發病，從疫病流行防控角度講，該雞群屬于高危發病雞群。所有的雞都已免疫新支120疫苗和法氏囊疫苗，我們進入高處的發病雞舍，大部分雞已放入山林，地面有30多只死雞，采食量不及平時正常量的1/3，地面上雞只排出的黃綠色水樣糞便清晰可見，病雞精神萎靡，有甩鼻癥狀，近前接近，可聽見“咯咯”聲音，體溫44度，羽毛松亂，閉目縮頸呆立，有個別病雞有扭頭神經癥狀，我們現

場解剖了一只死雞和一只嚴重病雞，見十二指腸卵黃蒂處淋巴濾泡及盲腸扁桃體腫大出血，形成棗核樣黃色潰瘍，腸道粘連嚴重；死雞腺胃乳頭頂端有明顯腫脹出血，全身黏膜、漿膜出血，口腔鼻腔喉氣管有大量混濁液，肌胃角質膜有明顯小米粒大出血點，我們用手機對死雞的腺胃乳頭進行拍照，留取圖譜。（見手機照片）卵泡破裂膜腔內有蛋黃液。

結合以上臨床癥狀與解剖情況，我們初步認為是免疫失敗，診斷為這是一起非常典型的新城疫疫病例，針對雞場前一段使用常規治療不明顯，我們提出采取強化免疫方法進行治療，同時輔以中成藥，綜合施治的方法。

具體為：

1、對發病雞群，按每羽5倍量緊急注射新城疫1系疫苗強化免疫，在注射前、中、后，用“參芪多”葡萄糖粉進行飲水口服。

2、對高危未發病仔雞群，按3倍量用新城疫2系疫苗點眼強化免疫，同樣在免疫前、中、后，用“參芪多”葡萄糖粉進行飲水口服。

3、對場地及周邊地區進行清掃消毒，掩埋病死雞。五天后了解家升農莊老板獲知，注射疫苗和使用參芪多后第一天死了41只、第二天死亡8只、第三天死亡6只第四天開始停止死亡，該場1200只土雞﹙大小兩批﹚五天后都已治愈，精神正常，采食正常，為該場挽回經濟損失三萬余元。

經過這次典型雞新城疫的成功臨床診斷治療，筆者深深體會

到：

1、新城疫乃然是當前養雞的重要殺手，盡管經過了政府部門幾十年的重點計劃免疫防控，但它的破壞性仍不可小覷，應當重點預防和控制。

2、用新城疫的多聯苗進行免疫時，為保證新城疫免疫效果，最好再用新城疫單聯苗加強鞏固一次。

3、新城疫的發病治療，用西藥治療極其有限，用超劑量新城疫單聯苗強化免疫效果顯著。

4、用中成藥“參芪多”進行新城疫輔助治療效果很好，這不光在家升農莊，在金湖下方村徐新強雞場，在金湖黃坪村黃炳學雞場等多個養殖場的使用效果都非常顯著。該藥主要由黃芩、參芪多糖、太子參提取物、牛磺酸、干擾素誘導劑等成份構成，可以激活機體免疫中樞，誘導體細胞產生干擾素、T淋巴細胞、B淋巴細胞等多種抗原的應答反應，促進抗體的迅速生成，可有效干擾病毒合成和繁殖，并大大提高機體細胞免疫水平及體液免疫水平，提高巨噬細胞的數量和吞噬功能，迅速吞噬病毒、細菌和炎性細胞。

面對蓬勃發展的畜牧生產形勢，我們畜牧工作者必須更新理念，提高技術服務水平，積極營造多方共贏的有償服務機制，讓畜牧服務機構在畜牧業的發展中不斷受益。

2009年7月14日

第五篇：新城疫病毒

新城疫病毒 新城疫病毒（NDV）屬于副黏病毒科，腮腺炎病毒屬。DNV對外界環境的抵抗力較強，對乙醚、氯仿敏感，其所有毒株都能凝集多種禽類和哺乳類動物的紅細胞。本病的傳播途徑主要是呼吸道和消化道。一年四季發生，各種日齡雞都能感染發病，大多3～5天死亡；在免疫雞群中可散在發生非典型新城疫。新城疫病毒治療，肌肉注射香港奧邦禽優樂，治療量：0.5ml/公斤，即可治愈。