第一篇：微生物的實驗室培養(yǎng)

微生物的實驗室培養(yǎng)

課題目標：了解有關培養(yǎng)基的基礎知識，進行無菌技術的操作，進行微生物培養(yǎng)。課題重點與難點：

1、無菌技術的操作

教學過程：

一、對培養(yǎng)基的認識：

1、培養(yǎng)基可分為和，2、盡管培養(yǎng)基的具體配方不同，但一般都般都含有，還需滿足不同微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質以及氧氣的 要求。

二、無菌技術：

（1）含義：指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法

（2）關鍵：

（3）方法：消毒和滅菌的區(qū)別，概念（學生自己學習、敘述）

消毒：煮沸消毒法，化學藥劑消毒法，紫外線消毒法

了解各種方法的操作過程。如干熱滅菌用干熱滅菌箱，溫度，時間1—2h；高壓蒸汽滅菌，溫度，壓力，15—30min.。

各種滅菌方法各自適用那些物品或器具？

三、純化大腸桿菌以及菌種的保藏

（1）制作牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基

方法步驟：計算→稱量→溶化→滅菌→倒平板。（了解大體的操作過程）

問題：平板冷卻后，為什么要將平板倒置？

（2）純化大腸桿菌

①原理：在培養(yǎng)基上將細菌稀釋或分散成單個細胞，使其長成單個的菌落，這個菌落就是一個細胞繁殖而來的子細胞群體。

②方法：、。

第二篇：微生物實驗室培養(yǎng)

平陸中學高二生物

課題一：微生物的實驗室培養(yǎng)第二課時

車柳順2.24學習目標：

1、明確配制培養(yǎng)基的步驟

2、說出純化微生物的方法和步驟

目標一：制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基

1、步驟：計算→稱量→溶化→→滅菌→倒平板。

2、演示倒平板操作

導思：（完成倒平板操作的討論題1——4）

目標二：純化大腸桿菌

1、微生物接種最常用的方法是劃線法和涂布平板法。

2、平板劃線法通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)分散到培養(yǎng)基的表面。稀釋涂布平板法則是將菌液進行一系列的梯度，然后將不同稀釋度的菌液分別到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進行培養(yǎng)。

3、總結平板劃線法和稀釋涂布平板法的操作步驟并演示

（1）平板劃線操作：

導思：（完成平板劃線法的討論題）

（2）稀釋涂布平板法：

導思：（完成稀釋涂布平板法操作的討論題）

4、平板劃線法和稀釋涂布平板法的異同點是

目標三：菌種的保存

（1）對于頻繁使用的菌種，可以采用的方法

（2）對于需要長期保存的菌種，可以采用的方法。

自我反思

1、以下關于制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的敘述錯誤的是（）

A.操作順序為計算、稱量、溶化、倒平板、滅菌

B.將稱量好的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯

C.將培養(yǎng)皿冷卻至50C左右時進行倒平板

D.待平板冷卻凝固約5—10min后將平板倒過來放置

2、有關倒平板的操作錯誤的是（）

A.將滅過菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上

B.將打開的錐形瓶瓶口迅速通過火焰

C.將培養(yǎng)皿打開，培養(yǎng)皿蓋倒放在桌面上

D.等待平板冷卻凝固后需要倒過來放置

3、有關稀釋涂布平板法，敘述錯誤的是（）

A.先將菌液進行一系列的稀釋

B.然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到固體培養(yǎng)基的表面

C.適宜條件下培養(yǎng)

D.結果都可在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落

4、產(chǎn)生標準形態(tài)菌落的細菌的最初數(shù)目和培養(yǎng)基分別是（）

A.一個細菌、液體培養(yǎng)基B.許多細菌、液體培養(yǎng)基

C.一個細菌、固體培養(yǎng)基D.許多細菌、固體培養(yǎng)基

第三篇：微生物實驗室守則

微生物實驗室守則

1.須著長及膝蓋之實驗衣，並穿著長褲，若有長髮應予以適當束結，嚴禁穿著拖鞋或涼鞋。實驗室內(nèi)嚴禁喧嘩嬉鬧、追逐、抽煙及吃食等行為。

2.非必要物品勿置於實驗室之桌面，實驗結束後，需加以清理，物品並應歸於原位。

3.實驗前後消毒桌面及手部，實驗時操作桌面應隨時保持乾淨。

4.應熟悉實驗室內(nèi)所有設備，配置及正確操作方法。

5.顯微鏡使用後應清理乾淨，並清點附件是否齊備，關閉電源後再拔掉插頭，並歸定位，發(fā)現(xiàn)有任何異狀，即報告指導老師處理，任何配件或裝置避免任意交換或拆卸。

6.不可於點燃酒精燈時噴酒精，並隨時注意自己及他人之安全，酒精燈不用時應即熄滅。

7.實驗所用之菌體有些為致病菌，故須以無菌操作且避免用手及口的動作，如咬手指或用舌頭舔濕標籤。

8.實驗用之所有菌體或器具未經(jīng)許可嚴禁攜出室外。9.接種針（環(huán)）於接菌前後務必以酒精燈滅菌。

10.含菌體之容器，應妥予加蓋，非必要時切勿任意打開。

11.實驗後待丟棄物品應妥善包裹或予殺菌處理再丟棄；固體培養(yǎng)基則不得倒入水槽中。

12.實驗結束後，應確實關閉所有不用之電源。

13.任何意外事件，應即報告助教及指導老師，亦應熟知其應變措施。

14.實驗操作過程中必須隨時注意自身及他人之安全，若有危及自身及他人安全之事件或違反實驗守則者，本實驗課成績一律以零分計。

微生物實驗室守則

1.須著長及膝蓋之實驗衣，並穿著長褲，若有長髮應予以適當束結，嚴禁穿著拖鞋或涼鞋。實驗室內(nèi)嚴禁喧嘩嬉鬧、追逐、抽煙及吃食等行為。

2.非必要物品勿置於實驗室之桌面，實驗結束後，需加以清理，物品並應歸於原位。3.實驗前後消毒桌面及手部，實驗時操作桌面應隨時保持乾淨。

4.應熟悉實驗室內(nèi)所有設備，配置及正確操作方法。

5.顯微鏡使用後應清理乾淨，並清點附件是否齊備，關閉電源後再拔掉插頭，並歸定位，發(fā)現(xiàn)有任何異狀，即報告指導老師處理，任何配件或裝置避免任意交換或拆卸。

6.於點燃酒精燈時噴酒精，並隨時注意自己及他人之安全，酒精燈不用時應即熄滅。

7.實驗所用之菌體有些為致病菌，故須以無菌操作且避免用手及口的動作，如咬手指或用舌頭舔濕標籤。

8.實驗用之所有菌體或器具未經(jīng)許可嚴禁攜出室外。

9.接種針（環(huán)）於接菌前後務必以酒精燈滅菌。

10.含菌體之容器，應妥予加蓋，非必要時切勿任意打開。

11.實驗後待丟棄物品應妥善包裹或予殺菌處理再丟棄；固體培養(yǎng)基則不得倒入水槽中。

12.實驗結束後，應確實關閉所有不用之電源。13.任何意外事件，應即報告助教及指導老師，亦應熟知其應變措施。

14.實驗操作過程中必須隨時注意自身及他人之安全，若有危及自身及他人安全之事件或違反實驗守則者，本實驗課成績一律以零分計。

第四篇：微生物實驗室規(guī)則

微生物實驗室規(guī)則

1、進實驗室應穿工作服，離室時脫去放在指定處所，工作服應定期消毒洗滌。

2、非必要物品勿帶入實驗室。

3、實驗室內(nèi)應保持肅靜；不得高聲談笑；不準吸煙和進食；無菌室在工作前、工作后均須全面清掃、消毒。

4、如帶有細菌的增菌液污染桌面或地面，應立即用消毒溶液傾覆其上，半小時后方可抹去；如有污染物污染工作服，應立即將工作服脫去以高壓蒸汽法滅菌。

5、如有污染物污染手部，應立即將手浸泡消毒液內(nèi)，經(jīng)5分鐘后，再用肥皂和水刷洗干凈。如有污染物吸入口內(nèi)，應立即吐出，并以大量清水漱口，根據(jù)需要亦可服用有關藥物以防發(fā)生感染染。

6、接種環(huán)用后應立即在酒精燈火焰上燒灼滅菌；沾菌的吸管、玻片等用后應分別浸泡在盛有消毒液的玻璃缸內(nèi)，其他已污染的試管、平皿等亦必須置于專用容器內(nèi)，經(jīng)滅菌后再進行洗滌。

7、用于消毒的酒精應放在加蓋搪瓷缸內(nèi)，如不慎著火，應立即用搪瓷蓋蓋上與空氣隔絕即可滅掉火焰。

8、工作完畢時工作臺用沾有消毒液的抹布擦拭干凈，地面應用墩布擦拭干凈。

9、檢驗人員應具備高度責任感，以嚴謹?shù)目茖W態(tài)度從事檢驗工作。

第五篇：微生物實驗室管理制度

目 的：規(guī)范微生物室管理規(guī)范，以保證微生物實驗的順利進行。范 圍：適用于微生物實驗室

依 據(jù)：GB/T 19489-2008《實驗室 生物安全通用要求》； 執(zhí)行部門：化驗室微生物檢驗室

職 責：1.微生物檢驗員負責微生物實驗室的管理。2.實驗室主管負責對微生物實驗室管理情況進行檢查。內(nèi) 容：

本中心微生物實驗室管理制度包括微生物實驗室人員管理制度、微生物室出入管理 制度、微生物室環(huán)境管理制度、微生物室的使用管理制度。微生物實驗室藥品管理制度。

1.微生物實驗室的人員管理

1.1 微生物實驗室由微生物檢驗員管理及使用,其他人員須經(jīng)主管人員批準后方可進入和使 用。

1.2 微生物實驗室的人員需經(jīng)過相關的培訓。2.微生物實驗室出入管理 2.1 人員出入管理：

2.1.1 人員進入微生物實驗室潔凈區(qū)前，需要洗手消毒；在一級緩沖室換實驗服、戴帽子、換鞋后，進入風淋室，風淋后，進入二級緩沖室準備實驗。2.1.2 實驗操作前須帶上無菌手套和口罩。2.2 物料出入管理：

2.2.1 物料進入微生物實驗室以前，脫去外包裝或者用酒精棉球擦拭后，放置于傳遞窗中。2.2.2 物料放置于傳遞窗后，開啟紫外0.5小時，同時將微生物實驗室內(nèi)的凈化系統(tǒng)、紫外 燈打開。

2.2.3 紫外開啟0.5小時以后，關閉紫外，并將物品轉移于實驗操作臺上。

2.2.4 實驗完畢后，微生物實驗室物品經(jīng)傳遞窗傳出后，經(jīng)高溫滅菌后廢液、廢物倒入廢液桶處理。

3.微生物實驗室的環(huán)境管理 3.1 微生物實驗室的清潔管理

微生物實驗室的清潔分為一般清潔及徹底清潔，其具體的清潔部位、方式方法、頻率見下表所示：

3.2 微生物實驗室常用消毒劑及其配制

4.微生物實驗室的使用管理

4.1 微生物實驗室使用之前，應先開啟微生物實驗室自凈系統(tǒng)30分鐘。每次使用前應用消毒 液擦拭超凈工作臺及其他一切可能引起污染的死角，然后開紫外燈滅菌30分鐘，同時開啟超凈工作臺。操作完畢后，用消毒液擦拭臺面，做好衛(wèi)生，開紫外燈30分鐘，并記錄紫外燈照射時間。注：當紫外燈使用1000小時應更換。

4.2 微生物實驗室使用時，應同時進行沉降菌監(jiān)測，將含有營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)皿在各監(jiān)測點正向放置，打開蓋子，暴露30分鐘，然后蓋上，將營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基放入30～35℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時，觀察結果，每皿菌落數(shù)應≤1個，否則應加強清潔消毒工作，必要時驗證生物安全柜的性能。5.微生物實驗室藥品及培養(yǎng)基管理制度

藥品及培養(yǎng)基是微生物試驗的基礎，直接影響微生物試驗結果。適宜的培養(yǎng)基制備方法、貯藏條件和質量控制試驗是提供優(yōu)質培養(yǎng)基的保證。5.1 藥品及培養(yǎng)基的采購及接收

微生物實驗室所用的藥品及培養(yǎng)基必須是符合國家相關資質的公司所出產(chǎn)的。實驗室根據(jù)檢驗需要申購所需的培養(yǎng)基并做好相應的接收記錄。5.1培養(yǎng)基的接收

微生物檢驗室應指定專人負責培養(yǎng)基的管理，在接收培養(yǎng)基時，應核對培養(yǎng)基的品名、來源、批號、生產(chǎn)日期、有效期、數(shù)量，脫水培養(yǎng)基應附有處方和使用說明，并做好接收記錄。5.2培養(yǎng)基的制備

培養(yǎng)基可按處方配制，也可使用按處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基。在制備培養(yǎng)基時，應選擇質量符合要求的脫水培養(yǎng)基或單獨配方組分進行配制。脫水 培養(yǎng)基應附有處方和使用說明，配制時應按使用說明上的要求操作以確保培養(yǎng)基的質量符合要求，不得使用結塊或顏色發(fā)生改變的脫水培養(yǎng)基。脫水培養(yǎng)基或單獨配方組分應在適當?shù)臈l件下貯藏，如低溫、干燥和避光，所有的容器應密封，尤其是盛放脫水培養(yǎng)基的容器。商品化的成品培養(yǎng)基除了應附有處方和使用說明外，還應注明有效期、貯藏條件、適用性檢查試驗的質控菌和用途。

為保證培養(yǎng)基質量的穩(wěn)定可靠，各脫水培養(yǎng)基或各配方組分應準確稱量，并要求有一定的精確度。配制培養(yǎng)基最常用的溶劑是純化水，特殊情況下，可能需要用去離子水和蒸餾水。應記錄各稱量物的重量和水的使用量。配制培養(yǎng)基所用容器和配套器具應潔凈，可用純化水沖洗玻璃器皿以消除清潔劑和外來物質的殘留，對熱敏感的培養(yǎng)基如糖發(fā)酵培養(yǎng)基其分裝容器一般應預先進行滅菌，以保證培養(yǎng)基的無菌性。

脫水培養(yǎng)基應完全溶解于水中，再行分裝與滅菌。配制時若需要加熱助溶，應注意不要過度加熱，以避免培養(yǎng)基顏色變深。如需要添加其他組分時，加入后應充分混勻。應按照生產(chǎn)商提供或使用者驗證的參數(shù)進行培養(yǎng)基的滅菌。商品化的成品培養(yǎng)基必須附有所用滅菌方法的資料。培養(yǎng)基滅菌一般采用濕熱滅菌技術，特殊培養(yǎng)基可采用薄膜過濾除菌。

培養(yǎng)基若采用不適當?shù)募訜岷蜏缇鷹l件，有可能引起顏色變化、透明度降低、瓊脂凝固力或pH 的改變。因此，培養(yǎng)基應采用驗證的滅菌程序滅菌，培養(yǎng)基滅菌方法和條件，應通過無菌性試驗和促生長試驗進行驗證。此外，對高壓滅菌器的蒸汽循環(huán)系統(tǒng)也要加以驗證，以保證在一定裝載方式下的正常熱分布。溫度緩慢上升的高壓滅菌器可能導致培養(yǎng)基的過熱，過度滅菌可能會破壞絕大多數(shù)的細菌和真菌培養(yǎng)基促生長的質量。滅菌器中培養(yǎng)基的容積和裝載方式也將影響加熱的速度。因此，應根據(jù)滅菌培養(yǎng)基的特性，進行全面的滅菌程序驗證。應確定每批培養(yǎng)基滅菌后的pH值（冷卻至室溫25 ℃ 測定）。若培養(yǎng)基處方中未列出pH 值的范圍，除非經(jīng)驗證表明培養(yǎng)基的pH 值允許的變化范圍很寬，否則，pH值的范圍不能超過規(guī)定值士0.2。

制成平板或分裝于試管的培養(yǎng)基應進行下列檢查：容器和蓋子不得破裂，裝量應相同，盡量避免形成氣泡，固體培養(yǎng)基表面不得產(chǎn)生裂縫或漣漪，在冷藏溫度下不得形成結晶，不得污染微生物等。應檢查和記錄批數(shù)量、有效期及培養(yǎng)基的無菌檢查。5.3 培養(yǎng)基的貯藏

自配的培養(yǎng)基應標記名稱、批號、配制日期等信息，并在已驗證的條件下貯藏。商品化的成品培養(yǎng)基標簽上應標有名稱、批號、生產(chǎn)日期、失效期及培養(yǎng)基的有關特性，生產(chǎn)商和使用者應根據(jù)培養(yǎng)基使用說明書上的要求進行貯藏，所采用的貯藏和運輸條件應使成品培養(yǎng)基最低限度的失去水分并提供機械保護。

培養(yǎng)基滅菌后若貯藏在高壓滅菌器中，質量可能會受影響，一般不提倡這種存放法。瓊脂培養(yǎng)基不得在O ℃ 或O ℃ 以下存放，因為冷凍可能破壞凝膠特性。

培養(yǎng)基應避光保存，若要長期保存，應置于密閉容器中以防止水分流失。瓊脂平板最好現(xiàn)配現(xiàn)用，如置冰箱保存，一般不超過1周，且應密閉包裝，若延長保存期限，保存期需經(jīng)驗證確定。固體培養(yǎng)基滅菌后的再融化只允許1 次，以避免因過度受熱造成培養(yǎng)基質量下降或微生物污染。培養(yǎng)基的再融化一般采用水浴或流通蒸汽加熱。若使用微波爐，應避免培養(yǎng)基過度受熱及水分的蒸發(fā)，更要注意安全。融化的培養(yǎng)基應置于45 ～50 ℃ 的水浴中，不得超過8 小時。傾注培養(yǎng)基時，應擦干培養(yǎng)基容器外表面的水分，避免容器外壁的水滴進人培養(yǎng)基中造成污染。使用過的培養(yǎng)基（包括失效的培養(yǎng)基）應按照國家污染廢物處理相關規(guī)定進行。5.4 質量控制試驗

實驗室應對試驗用培養(yǎng)基建立質量控制程序，以確保所用培養(yǎng)基質量符合相關檢測的需要。實驗室配制或商品化的成品培養(yǎng)基的質量依賴于其制備過程，采用不適宜方法制備的培養(yǎng)基將影響微生物的生長或復蘇，從而影響試驗結果的可靠性。所有配制好的培養(yǎng)基均應進行質量控制試驗。實驗室配制的培養(yǎng)基的常規(guī)監(jiān)控項目是pH、適用性檢查試驗，定期的穩(wěn)定性檢查以確定有效期。

培養(yǎng)基在有效期內(nèi)應依據(jù)適用性檢查試驗確定培養(yǎng)基質量是否符合要求。有效期的長短將取決于在一定存放條件下（包括容器特性及密封性）的培養(yǎng)基其組成成分的穩(wěn)定性。

除藥典附錄另有規(guī)定外，在實驗室中，若采用已驗證的配制和滅菌程序制備培養(yǎng)基且過程受控，那么同一批脫水培養(yǎng)基的適用性檢查試驗可只進行1 次。

如果培養(yǎng)基的制備過程未經(jīng)驗證，那么每一批培養(yǎng)基均要進行適用性檢查試驗，試驗的菌種可根據(jù)培養(yǎng)基的用途從相關附錄中進行選擇，也可增加從生產(chǎn)環(huán)境及產(chǎn)品中常見的污染菌株。培養(yǎng)基的質屋控制試驗若不符合規(guī)定，應尋找不合格的原因，以防止問題重復出現(xiàn)。任何不符合要求的培養(yǎng)基均不能使用。

用于環(huán)境監(jiān)控的培養(yǎng)基須特別防護，最好要雙層包裝和終端滅菌，如果不能采用終端滅菌的培養(yǎng)基，那么在使用前應進行100 ％的預培養(yǎng)以防止外來的污染物帶到環(huán)境中及避免出現(xiàn)假陽性結果。