第一篇：生物技術在園藝中的應用

生物技術在園藝設計植物中的應用

摘要：用植物組培來培育無毒育苗木、優良品種苗快速繁殖、園藝樹木新品種的培育等等。生物技術使園藝植物在設計中得到更好，更廣泛的應用，不僅局限在造型、體態上面，從內在基因、細胞、組織上改變植物；使植物資源多樣化，給設計帶來了新鮮感。

Abstract: Plant tissue culture , cell engineering , gene engineering and other modern biotechnology to develop non-toxic sterile seedling, seedling rapid propagation of superior varieties, gardening trees breeding and so on.Biological technology make it better in the design of horticultural plants, more widely used, not only in shape, body, and change the plant from the internal genes, cells, tissue;be diversify.關鍵詞：園藝植物、生物技術、組織培養、應用、景觀環境、設計 生物技術在園藝植物的研究和培育上有著重大的意義。生物技術在園藝科學上的研究主要內容包括園藝植物組織培養，園藝植物細胞工程，園藝植物染色體工程，園藝植物基因工程和園藝植物分子標記。本文主要是對植物組培技術的研究。

園藝植物組織培養是指在無菌和人工控制的環境條件下，利用人工培養基，對園藝植物組織的胚胎、器官、組織、細胞、原生質體等進行立體培養，使其再

[1] 生發育成完整植株的過程。組織培養技術給園藝植物帶來了很大的變革。從以前的單一色彩，單一種類，變化到多種色彩，多種形態。給設計提供了很多的便捷資源。組織培養技術提高了園藝植物的質量，也提高了生產的效率。給設計師們帶來了新的構思?；ɑ堋淠镜姆N類繁多，色彩艷麗，培養方式的多樣化，在園林景觀中起著非常重要的作用。組織培養技術使花卉、樹木的應用形式越來越多樣化。園藝植物不僅給人們帶來優美舒適的生活環境，更重要的是創造了是與人類生存的生態環境。園藝植物在現代社會中的應用越來越多，在綠化景觀環境中體現的愈發明顯。

通過以下幾個方面來講述組織培養在園藝植物中的應用： 一．種質資源的保存

植物的種質資源的多樣性，使得設計有多樣性，對于一些沒法預料的災害等，我們可以通過這種方式來保存物種多樣性，使一些珍貴的植物能夠保存下來?，F在已經有很多的種植物滅絕，通過組織培養的技術就可延續和保存這些植物種類，使這些植物得到較為永久性的保存，增加種質資源的多樣化。植物種質的保

[2]存與監測研究對生物多樣化包補和生物技術都有著十分重要的意義。

園藝樹種種質資源的長期保存主要采用超低溫的方法。一般以液氮（-196℃）為冷源，是溫度維持在-196℃以下。在這溫度下，新陳代謝活動基本停止，也不可能發生遺傳變異，因而對種質進行了長期的保存。

二．快繁技術

自然條件很難達到快速、高效的目的繁殖植物，通過組織培養我們可以有效的快速繁殖植物。植物組織培養快繁技術是利用植物組織培養技術對外植體進行

[2]離體培養，使其在短期內獲得遺傳性一致的大量再生植物的方法。使用這種方法，繁殖效率高，不受季節、氣候條件的影響，而且培養條件可控制便于對各種環境進行調控。占用的面積小，管理方便?？梢宰詣踊刂粕a。

已有數百種植物由愈傷組織分化出小植物，也可由愈傷組織再分化，最后產生不定芽或胚狀體，形成植株。但是從它產生的植物常常會發生多倍體、非整倍體和各種基因水平上的變異，不能全部保存原種特性，因而妨礙了它在快速繁殖上的廣泛的應用。另一個不利的因素是愈傷組織在經過多次繼代培養后，常會喪[3]失再生植株的能力。但是，這的確加快了植物的繁殖速度，我國的園林設計正處于起步階段，所以快繁技術對植物的需求量和豐富度都有著重要的作用，快繁技術可以促進植物的生長滿足園藝設計的需求。三．植物脫毒

植物在生長發育的過程中會感染各種的病毒病害。導致植物的生長受到抑

[4]制，形態變異，產量下降等，會造成極大的經濟損失。由于基因的變異等原因，造成很多的植物感染病毒。園藝植物在景觀設計中的作用非常大。，病毒導致園藝植物的生命短暫，或者形態不美觀，影響設計的美感。所以培養無病毒植株，能夠提高植物的質量，對園藝設計景觀有種重要的作用，培育無病毒植株是解決植物病毒問題的首選，通過植物組培技術培養脫毒的植株來阻止病毒的傳播，來提高植物的質量和產量。四．遺產轉化

園林遺傳轉化是指通過某種途徑將外源基因導入受體園林植物基因組中，并

[5]使之在受體園林植物內實現功能表達。通過基因轉移技術可以把不同來源的基因導入植物細胞，并整合到植物基因組中，獲得轉基因植物。通過遺傳轉化轉化可以改良園林植物品種。提高育種效率，育成不同種類的新品種。

轉基因可以改變植物的顏色、形態、種類等各種特性。這些都給園藝植物增

[6]加了很多的特色，如藍色的月季，黃色的仙客來，紅色的鳶尾等，在設計中，能夠應用這些不同的形態特點來創造出不同的主題，表達不同的思想，給人以不同的需求，滿足人們不同的審美需求。

綜述：現在，隨著人們生活水平的提高，許多地方，以觀光、旅游、采摘等為主體閑園藝、生態景觀等迅速發展。城市景觀的設計越來越受到注重，綠色的園藝植物也被廣泛的應用起來。所以生物技術在園藝植物中起了很大的作用，通過組培技術我們能夠大量的生產園藝植物，并得到優良質量的植物，滿足園藝設計對植物的大量需求，促進我國園林設計快速的發展起來。

參考文獻：

[1]園藝植物生物技術/鞏振輝主編。北京：科學出版社，2009 [2]園林植物組織培養技術/王金剛，張興主編。北京：中國農業科學技術出版社。2008.8 [3] 朱至清.植物生物技術簡介(一)——經濟植物快速繁殖[J].生命世界，1984 [4] 趙爽、陳國菊，蔬菜作物抗病毒基因工程研究進展[J].中國蔬菜,2006 [5]李向輝等，植物遺傳操作技術，科學出版社，1988 [6] 園林花卉應用設計·配置篇/耿欣、程偉、馬娛、主編。武漢：華中科技大學出版社，2009.7

第二篇：園藝植物生物技術

園藝專業推廣碩士《園藝植物生物技術》試題

一．名詞解釋

1．基因組：某一生物包括編碼序列和非編碼序列在內的全部DNA分子。2．RT-PCR：一是反轉錄PCR的縮寫，即通過聚合酶鏈式反應，將RNA鏈逆轉錄成互補DNA，再以此為模板通過PCR進行DNA擴增。二是實時PCR的縮寫，是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號累積實時監測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。3．Northern blot：是一種通過檢測RNA的表達水平來檢測基因表達的方法，通過Northern blot可以檢測到細胞在生長發育特定階段或者脅迫或病理環境下特定基因表達情況。

4．AFLP：擴增片段長度多態性。是基于PCR技術擴增基因組DNA限制性片段，基因組DNA先用限制性內切酶切割，然后將雙鏈接頭連接到DNA片段的末端，接頭序列和相鄰的限制性位點序列，作為引物結合位點。

5．藍白斑篩選：藍白斑篩選是一種基因工程常用的重組菌篩選方法。野生型大腸桿菌產生的β-半乳糖苷酶可以將無色化合物X-gal切割成半乳糖和深藍色的物質5-溴-4-靛藍。有色物質可以使整個培養菌落產生顏色變化，可用于菌落鑒定和篩選。

二．選擇題

1.B 2.ABD 3.B 4.BD 5.A 6.BC 7.D 8.ABCD 9.ABC 10.BCD

三．簡答題

1.簡述植物農桿菌介導的植物遺傳轉化過程。

答：農桿菌介導的植物遺傳轉化是以農桿菌為媒介，將目的基因通過載體上的特定區域導入細胞，并整合到染色體中。主要過程為：①分離目的基因片段；②將目的片段鏈接到克隆載體上，形成重組DNA分子；③將重組DNA分子轉移到適當的受體細胞進行增殖；④從細胞中篩選重組子；⑤提取已經擴增的基因，進一步分析研究；⑥將目的基因克隆到表達載體，一般采用雙元載體；⑦利用表達載體轉化農桿菌；⑧利用農桿菌轉化植株，常用的方法有原生質體法、真空滲入法和蘸花法3種。

2.列舉基因工程中常用的工具酶。答：基因工程中常用的工具酶有：

①限制性核酸內切酶：是細菌產生的一類能識別和切割雙鏈DNA分子內特定的堿基順序的核酸水解酶。

②DNA連接酶：將兩段DNA分子拼接起來的酶。③DNA聚合酶：催化單核苷酸鏈延伸。

④逆轉錄酶：依賴于RNA的DNA聚合酶，這是一種有效的轉錄RNA成為DNA的酶，產物DNA又稱互補DNA。

⑤末端脫氧核糖核酸轉移酶：將脫氧核糖核酸加到DNA的3末端。⑥堿性磷酸酶：催化去除DNA、RNA等的5磷酸基團。⑦依賴DNA的RNA聚合酶：識別特異性啟動子，RNA轉錄。3.簡述SSR標記原理和主要過程。

答：SSR即微衛星DNA又叫簡單重復序列，指的是基因組中由1～6個核苷酸組成的基本單位重復多次構成的一段DNA。微衛星的突變率在不同物種、同一物種的不同位點和同一位點的不同等位基因間存在很大差異，但其兩端序列多是保守的單拷貝序列，因而可以根據這兩端的序列設計一對特意引物，通過PCR技術將其間的核心微衛星DNA序列擴增出來，利用電泳分析技術就可獲得其長度多態性。

主要過程：①反應體系，包括模板DNA、SSR引物、10×PCR緩沖液、dNTP、Tap 酶和ddH2O；②反應過程包括預變性、變性、退火、延伸，在PCR儀上進行；③將PCR產物在測序電泳儀上用5%聚丙烯酰胺凝膠分離，DNA染色采用銀染法。④數據分析，可用Quantity One軟件統計，再用NTSYS軟件計算出遺傳相似性系數，用UPGMA法進行聚類分析構建聚類圖。4.簡述改良CTAB法提取園藝植物DNA的原理及主要過程。

答：CTAB是一種陽離子去污劑，具有從低離子強度溶液中沉淀核酸與酸性多聚糖的特性。在高離子強度的溶液中，CTAB與蛋白質和多聚糖形成復合物，但不能沉淀核酸，通過有機溶劑抽提，去除蛋白、多糖、酚類等雜質后加入乙醇沉淀即可使核酸分離出來。主要過程：

① 稱取植物組織約100-200mg，加適量液氮，研磨至組織破碎成粉末狀，迅速轉入2mL離心管。

② 在離心管中加入1mL 65℃預熱的1.5×CTAB提取液(100mmol/L的Tris-HCl，pH8.0，20mmol/L的EDTA，pH8.0，1.4mol/L的NaCl，4%的β-巰基乙醇)，放至65℃水浴30min，其間輕搖3次以混勻反應液。

③ 水浴后取出離心管冷卻至室溫，加入等體積的氯仿：異戊醇(24﹕1)混合液，輕輕上下顛倒混勻，室溫下靜置15min后，于10000 r/min離心3min，取上清液。

④ 將上清液移至新的離心管，加入0.7倍體積的冷凍異丙醇，顛倒混勻后放置15min，10000 r/min離心5min，棄上清液。

⑤ 用75%的乙醇清洗 3次，沉淀為白色透明狀，用濾紙條吸干殘留乙醇，在超凈工作臺上無菌風干后，將DNA溶于 50μL 超純水中。5.簡述PCR反應中引物設計原理。答：PCR反應中引物設計原理為：

①選擇合適的靶序列：設計引物之前，必須分析待測靶序列的性質，選擇高度保守、堿基分布均勻的區域進行引物設計。

②長度：一般來說，寡核苷酸引物長度為15-25bp。

③Tm值：引物的Tm值一般控制在55-65℃，盡可能保證上下游引物的Tm值一致。若G+C含量相對偏低，則可以使引物長度稍長，而保證一定的退貨溫度。④G+C含量：有效引物中的G+C含量一般為40%-60%。

⑤堿基的隨機分布：引物中四種堿基的分布最好是隨機的，不存在聚嘌呤和聚嘧啶，尤其在引物的3’端不應超過3個連續的G或C。

⑥引物末端：只有引物的3’端與模板結合，PCR才能進行，所以3’端最好是G或C。

⑦引物自身：引物自身不存在連續4個堿基以上的互補序列，否則會影響到引物與模板之間的結合，尤其避免3’端的互補。

⑧引物之間：上下游引物之間盡量少的存在互補序列，否則上下游引物退火結合，將影響到PCR的擴增效率。6.簡述同源序列法克隆目的基因的主要過程。

答：利用同源序列法快速克隆基因的基本思路是依據基因序列的高度保守區域，設計特異性的簡并引物，通過PCR擴增基因組DNA或cDNA，獲得所要分離的基因序列，多用于抗病基因的分離、克隆。主要過程為：①提取基因組DNA；②根據已知基因保守區域的核酸序列特征，運用軟件設計引物并合成；③以基因組DNA為模板進行PCR擴增；④回收PCR擴增的目的片段；⑤將目的片段鏈接載體并轉化大腸桿菌；⑥測序并進行序列分析。四． 綜合題

根據你所學，談談你對轉基因植物的看法。

答：自1983年美國在世界上首次獲得轉基因煙草以來，植物轉基因技術得到了迅速發展，在世界范圍內得到了廣泛的應用。目前，轉基因技術已經成熟，轉基因作物已進入產業化階段，而且種植面積逐年擴大，呈直線上升趨勢。植物轉基因技術主要應用于農業、生物和醫學等領域，進行植物品種的改良、新品種的培育以及作為生物反應器生產生物藥物和疫苗等。世界上已通過轉基因技術培育出許多產量高、品質好、抗性強的農作物新品種，生物技術藥品已應用到醫藥、保健食品和日化產品等各個方面，生物制藥產業已成為最活躍、進展最快的產業之一。因此，人們將以轉基因技術為核心的生物技術上的巨大飛躍譽為第二次“綠色革命”。

植物轉基因技術的應用十分廣泛：（1）植物品質改良、新品種的培育，以滿足人類不斷增長的物質生活需要：植物轉基因技術可高效、快速提高糧食作物、蔬菜、林木樹種和花卉草種的產量、品質和抗耐性，為培育高產、高抗、多抗、優質的新品種提供了科學的手段。（2）醫藥研究，為人類健康服務：轉基因技術可以把植物作為“生物反應器”，進行藥物蛋白、工業用酶、糖類、脂類等一些有益次生代謝產物的生產，具有成本低、周期短、效益高和安全性好的特點。（3）能源開發，促進世界經濟的可持續發展：隨著世界經濟的發展，加速了對石油等有限的不可再生礦質能源的消耗，世界各國均面臨著能源枯竭的嚴重問題。（4）減少環境污染，保護人類賴以生存的自然環境：轉基因技術可以生產許多抗性強、適應性廣的植物，最大限度地利用土地資源，增加全球植被的覆蓋率，減少水土流失和土地沙漠化，減少因CO2增加引起的溫室效應?？共?、抗蟲轉基因作物的廣泛種植，可以減少農藥的使用量。轉基因植物可對土壤中的有毒污染物進行高效吸收或生物降解，通過植物修復系統使受污染的環境得到修復。

總之，轉基因植物的廣泛種植可以顯著降低農業生產成本，提高農業生產效率；可以有效緩解人類的糧食問題、能源問題；可以大大提高人類的生活質量和健康水平；可以有效增加可利用的土地資源，擴大綠地植被面積，減少土地的沙漠化和鹽堿化，減少環境污染，保護生態環境。目前，轉基因技術及其轉基因植物已廣泛應用于農業、醫藥、食品工業、畜牧業等各個領域，其經濟效益、生態效益和社會效益都是巨大的。植物轉基因技術是一種技術創新，是現代科技革命的一個重要方面，在農業、生物、醫學、食品、環保和能源領域具有廣闊的發展前景。

第三篇：生物技術在制藥行業中的應用

生物技術在制藥行業中的應用

摘 要：改革開放以來，隨著人們生活水平的不斷提高，人們對藥物的療效及質量和安全問題也越發的重視，而很多傳統的藥物，在長期被人們使用的前提下，已經逐漸變得不能滿足現在人們的體質以及在生病后的療效，在這期間生物技術（biotechnology）的問世，有針對性的解決了相關的問題；大量的生物技術應用于藥品的生產上，開發新的藥品，以及對傳統藥物進行改良，生物技術在制藥行業的作用也越發明顯。也使得人們在生病后，能得到有效的藥物治療。

關鍵詞：生物技術；制藥行業；應用 生物技術（biotechnology）（生物工程）的理念

生物技術（biotechnology），也被人們稱作為生物工程，以現代生命科學為核心基礎，結合其他類別的基礎科學，并采用極為先進的科學技術手段，根據計劃，對生物體進行改造或者是加工生物原料，進而生產人們所需要的產品。

生物技術（biotechnology），利用動植物體以及微生物對物質原料進行加工，并生產處相關產品，為社會服務。其主要分成現代生物技術以及發酵技術兩大類別。

生物技術可以說是，現代生物學的發展以及和相關科學融合的產物，以DNA重組技術為根本，并包括了細胞工程、生化工程以及微生物工程和生物制品等。生物技術在制藥中的應用

2.1 細胞工程制藥

就目前我國的生物技術（biotechnology）來講，有關于細胞工程還沒有一個統一的定義以及范圍，通常認為，細胞工程就是根據分子生物學和細胞生物學的原理，并采用細胞的培養技術，對細胞進行水平的遺傳操作。細胞工程大致上可以分為細胞質工程以及染色體工程和細胞融合工程這三種。而歸根結底，細胞工程就是利用動物以及植物的細胞培養進而生產藥物的技術。例如，利用動物細胞培養可身纏人類生理活性因子以及疫苗和單克隆抗體等產品；再如利用植物細胞培養可以大量的生產經濟價值極高的植物有效成分，提取藥材精華，也可以生產人類活性因子以及疫苗等重新組合DNA產品。

值得注意的是植物細胞培養并不會受到客觀的地理以及環境的影響，次級代謝的產物在產量上比較高。例如，人身皂苷在該組織培養中含量占干重的27%，而全株只有可憐的1.5%?，F在不少藥用植物，如三七和人參等的培養已經有了系統化的研究，并且充分優化了培養條件。值得慶賀的是人參細胞培養物的化學成分以及藥理活性，相比于種植人參并沒有明顯的差異。

關于細胞工程制藥技術，在國外一些相關的細胞工程制藥已經達到了商業化的生產水平，例如美國的Phyto公司的紫杉醇的生產商已經達到了75000L的生產規模，而日本植物細胞培養反應器的規模達到了4000L～20000L的驚人地步。

除卻大規模的細胞培養技術，不定根組織與毛狀根的培養也特別成功。例如培養的黃芪毛狀根的藥效與藥用黃芪不分上下，而在丹參毛狀根的培養上，其含有的丹參堿，能在分泌中得到培養。例如，希臘毛地黃細胞，在褐藻酸鹽的固定化培養中，可以將其中有毒物質的毛地黃苷轉化成為地高辛，在利用紫草細胞培養技術生產出紫草寧等。而根據野生新疆雪蓮的輻射以及抗炎等作用，賈景明等相關技術人員進行了天然新疆雪蓮鎮痛以及抗炎和抗輻射與細胞培養的藥理實驗，而實驗表明，新疆雪蓮細胞的培養物完全可以稱為野生新疆雪蓮的替代品，其藥效與野生新疆雪蓮幾乎相同，而該實驗也取得了深入開發應用的極高價值。而細胞培養技術甚至可以進行如犀角等極為昂貴的藥用動物器官的培養，在解決資源的短缺同時，有效的保護了稀有動物的生存。

2.2 發酵工程制藥

生物技術中的發酵工程，又稱為微生物工程，是指利用現代生物工程的技術，利用微生物的相關特定功能，生產出對人類有用的產品，或者直接把微生物應用于工業生產中。

發酵工程制藥是利用微生物的代謝過程，所生產藥物的生物技術。例如人們普遍認知的抗生素、氨基酸以及維生素等。而發酵工程的制藥在研究也主要在微生物菌種的篩選和改良上，還有極為重要的產品后處理也就是分離純化。

在現如今的社會中，DNA的重組技術在微生物菌種改良上起到了舉足輕重的作用。在上世紀七十年代，細胞融合以及基因重組技術的飛速發展的情況下，發酵工程進入了現代化的發酵工程階段。不僅僅是酒精類飲料以及醋酸和面包，并且豬腳生產了生長激素以及胰島素等多種醫療保健藥物。

周曉燕等相關研究人員用精良選育的豬芩PU-99菌做生產菌株，在1t灌中生產，菌絲體重達2.3%，含粗多糖31%；該實驗充分的利用了發酵工程，并在當時得到了廣大的認可。利用微生物成長代謝來炮制中藥，比一般的物理或化學炮制手段更為優越，能較大幅度的改變中藥的藥性，并且提高療效的同時，大大減輕毒副作用，使得中藥活性成分結構提供了新的途徑。

2.3 酶工程制藥

酶工程是利用酶、細胞或者細胞器具有特殊催化功能，并使用生物反應相關裝置以及通過一定的技術手段生產出的人類所需要的產品。這是一種酶學理論與化工技術兩相結合而形成的新型技術，現如今依舊有數十個國家采用了固定化酶以及固定化細胞，進行藥品的生產。

酶工程可以說是現代生物技術組成的重要部分，酶工程制藥也是將酶用于藥品生產的技術。固定化酶可以全程合成藥物的分子，并且還能用于藥物的轉化。而我國就是充分的利用了微生物并使用兩步轉換法生產出了維生素C。

就我國的酶工程制藥來講，其主要研究方向在，各種酶（細胞）的固定化以及產藥酶的來源和酶反應器還有相關的操作條件等?？梢哉f酶工程應用具有極其廣闊的發展前景，該技術將使得整個發酵工業和化學合成工業發生巨大的變革。

2.4 基因工程制藥

基因工程是在基因的水平上，按照人類的需求，有針對性的涉及，并且按照設計的方案，生產出具有某種新的形狀的生物產品，并且使得其可以穩定的遺傳給后代?；蚬こ痰脑O計與與工程設計有些類似，既顯示出理學的特性，也具有工程學的特點。

工程制藥也是通過將DNA重組技術應用到疾病的治療中，例如蛋白質、酶以及肽類激素和其他藥物的基因轉移到宿主體內，使得細胞繁殖，最終獲得相關的藥物。如苯丙氨酸以及絲氨酸和次生代謝的產物所制成的抗生素，通常是一些人體內的活性因子，例如白細胞介素-2和胰島素以及干擾素等。

而目前我國基因工程的研究方向，主要在基因的鑒定以及克隆和基因載體構建的產物的表達以及分離純化等。人類掌握基因工程技術在時間上雖說不是很長，但已經獲得了很多具有實際應用價值極高的成果，而基因工程為現代生物技術組成的重要部分，在未來相當長的一段時間里，都會在制藥中發揮出極大的作用。結束語

生物技術在制藥的應用中，其地位是無法替代的，并且其影響力也不斷的擴大。而生物技術也將在中西藥物的研制以及融合還有生產中的大部分環節得到廣泛的應用；并且可以有效的保護相關的瀕危滅絕的草藥以及珍稀動物，在批量生產高品質的藥材的同時，還能提高其活性成分。而有效的利用現代生物技術可以使得制藥行業在藥品的質量以及安全性上得到提高，最終使得制藥行業得到更為廣闊的發展。

參考文獻

[1]張雅閣.高新技術在中藥制藥領域應用的分析和探討[J].山東工業技術，2014（18）.[2]王蘭，朱磊，徐剛領，等.單克隆抗體類生物治療藥物研究進展[J].中國藥學，2014（23）.[3]王一嶺.內蒙古自治區發酵制藥類項目發展現狀及污染防治問題探討[J].內蒙古師范大學學報（自然科學漢文版），2014（3）.作者簡介：張巖（1982，4-），女，山東，漢族，哈爾濱學院畢業，初級職稱，研究方向：生物工程。

第四篇：園藝植物生物技術 試卷（模版）

一、將下面詞組相對應的中文譯成拉丁文或拉丁文譯成中文。

1.Propagation

2.liquid medium

3.antibody

4.vitrification

5.SSH

6.克隆

7.接種

8.非對稱融合 9.RT-PCR

10.轉錄后水平的基因沉默

二、判斷下列各題正確與否，正確的填“Y”錯誤的填“N”。

1.培養基滅菌后其Ph值會略微降低。

2.胚狀體是植物組織培養中的專門術語，是指由體細胞形成的、類似于生殖細胞形成的配子胚發育過程的胚胎發生途徑。

3.組織培養的培養基多采用濕熱滅菌。

4.DNA電泳操作時要戴手套，是因為其中的EB是一種強致癌物和誘變劑。

5.DNA復制時，新合成鏈的延伸方向是從5’到3’方向。

6.可用作病毒鑒定的草本指示植物種類很多，常用的有藜科、茄科、豆科、十字花科、葫蘆科等植物。

7.花藥培養屬于小孢子培養，而花粉培養則屬于器官培養的范疇。

8.胚搶救主要是對由于營養和或生理原因，造成難以播種成苗或要發育中期階段就敗育或退化的胚進行中期離體培養。

9.理論上，從同一植物的根、莖、葉等不同器官中分離的DNA樣品它們之間不存在多態性；但分離Mrna再合成Cdna后可能存在豐富的多態性。

10.引起病毒類病害的病原包括病毒、類病毒、植原體、螺原體和韌皮部及木質部限制性細菌等。

11.常用的報告基因吸cat、GUS、Ant、Luc、AFLP等。

12.植物生物技術的外植體材料以離體操作為主。

13.載體的條件是：能在宿主細胞中能自我自制并能穩定保存，要有多個酶切位點，每種酶切位點最好只有一個，酶切后不損壞其自制能力及選擇標記基因并能嵌于外源DNA具有可作為選擇。

14.在DNA電泳中，分子量大的片段比分子量小的片段距負極更近。

15.DNA雙鏈中AT間形成的氫鍵比CG間少。

三、填空題：將下列各題空缺部分的答案填在后面的方框內，兩者用“，”隔開。

1.常見的啟動子有＿、＿、＿等。

2.進行胚搶時，就最終對胚搶救成活及成苗率影響大小而言，所利用的組織優劣順序是：＿、＿、＿、＿。

3.日前世界上有200多種植物成功地再生出單倍體植株，其中我國首先報道的有40多種。獲得單倍體的方法有三種＿、＿、＿。

4.可用于病毒及類病毒檢測的方法很多，主要有＿、＿、＿。

5.要判斷哪一個克隆中具有我們所需要的基因就需要對所得到的重組克隆進行篩選，篩選的方法主要有：＿、＿、＿等。

6.分子標記研究中應用最廣泛的DNA鑒定技術有＿、＿、＿等四種。

7.常用于植物組織培養的植物激素種類有＿、＿、＿等

8.目前尚無防治病毒病的有效藥劑，在園藝植物病毒病的防治中常用的策略主要有＿、＿、＿、＿。

9.轉基因在沉默的原因是多方面的，根據外源基因失活或沉默的分子機制，可將其分為三類：＿、＿、＿等。

10.園藝植物組織培養一般要經歷五個階級，即＿、＿、＿、＿、＿等。

11.在遺傳轉化的表達載體中通常構建有一些篩選基因或報告基因，如果實驗很成功，且檢測方法正確，則下列基因的作用效果應呈現的顏色分別是：LacZ基因重組子_____色菌斑；GUS呈______色；GFP呈_______色。

12.狹義的植物生物技術是指：在離體的條件下，對植物（細胞）進行遺傳改良或使其增殖的各種技術的總稱，包括＿＿和＿＿兩個大的層面。

13.迄今為止，已在獼猴桃、馬鈴薯、苜蓿、萵苣、甘藍、蕃茄、柑橘等植物的原生質體再生植株中觀察到變異，再生植株產生的變異主要有＿、＿、＿、＿。

14.生命活動的各個進程都伴隨著不同基因的選擇開啟和關閉，基于這一基本的分子生物原理，現在已開發出許多克隆基因的方法，主要有＿、＿、＿、＿等。

15.常用的遺傳標記有______標記;______標記;_______標記和_______標記等四種不同水平的標記。

四、選擇題：從備選答案中選出正確的結果，正確答案是唯一的。

1.如果DNA一條鏈是5’-ATCG TACG GGTT-3’，則能與其互補配對的另一條鏈可能是：（）

A：5’-ATCG TACG GGTT-3’ B：5’-AACC CGTA CGAT-3’ C：3’-TAGC ATGC CCAA-5’ D：3’-UAGC AUGC CCAA-5’

2.植物病毒檢測可以用的方法有:（）

A：血清學檢測 B：PCR檢測 C：同工酶檢測 D：指示植物鑒定

3.可用于外植體消毒的方法有：()

A：酒精消毒 B：HgCl2消毒 C：NaClO消毒 D：NaCl消毒

4.原生質體融合的方式有：（）

A：對稱融合 B：非對稱融合 C：配子—體細胞融合 D：供受體融合5.常用的選擇標記基因有：（）

A：抗生素基因 B：NPTⅡ基因 C：花青素基因 D：熒光素酶基因

6.基本的PCR所需的試劑主要有：（）

A：兩側的引物 B：DNA模板 C：TaqDNA聚合酶 D：Mg+ 7.赤霉素的生理作用主要包括：（）

Ａ：誘導莖細胞的伸長 Ｂ：對形成層的細胞分化有影響 Ｃ：可以解除種子、塊莖、鱗莖等休眠 Ｄ：抑制衰老

8.基于現代生命科學的研究進展，下列可能是遺傳物質的有：()A：DNA B：RNA C：Protein D：多糖

9.園藝植物外植體脫除病毒的方法有：()A：熱處理脫除病毒 B：莖尖培養脫除病毒 C：微芽嫁接脫除病毒 D：高壓滅菌脫除病毒

10.影響原生質體分離的因素主要有：（）

Ａ：植物的類型 Ｂ：基因型 Ｃ：外植體類型 Ｄ：生理狀態

11.The most important contribution of Watson and Crick is:()

A：蛋白質結構模型 B：RNA結構模型 C：DNA是遺傳物質 D：DNA雙螺旋結構

12.體細胞雜種的鑒定方法主要有：（）

A：形態學 B：細胞學 C：電子顯微鏡觀察法 D：遺傳標記

13.可以用于基因分離的方法有：（）

A：同源序列法 B：圖位克隆法 C：功能克隆法 D：差減雜交法

14.下列屬于現代生物技術研究的內容有:()

A：有性雜交 B：體細胞雜交 C：組織培養 D：基因克隆

15.目前分子標記在種質資源研究中的用途有：（）

A：繪制品種的指紋圖譜

B：種質資源的遺傳多樣性及分類研究 C：物種的起源與演化 D：種質資源的評價、鑒定與創新

16.單克隆抗體制備主要步驟有：（）

A：免疫注射 B：細胞融合 C：篩選 D：克隆化

17.如果RAPD分析時所選用的隨機引物的序列為5’-ATCGTACGGGTT-3’，下列虛線部分為500—1000 pb長的DNA區域，請分析其中能進行2的指數倍擴增的有：()

A: 5’ATCGTACGGGTT— — —3’ B: 5’ — — —ATCGTACGGGTT 3’ C: 5’ ATCGTACGGGTT— — —TACCATGCCCAA 3’ D: 5’ ATCGTACGGGTT— — —TTGGGCATGCAT 3’

18.右下圖中剪刀所在位置是DNA分子上的某一酶的酶切位點，長方形是探針結合部位，試問1、2、3三種DNA樣品用該酶/探針組合進行RFLP分析能得到的雜交信號條帶數分別是：

A： 1、2、1 B：1、2、2 C：1、1、1 D：1、1、2 19.影響原生質體培養及植珠再生的因素主要有：（）

Ａ：原生質體來源 Ｂ：基因型 Ｃ：培養基 Ｄ：滲透壓調節劑

20.原生質體的應用主要有哪些：（）

Ａ：種質資源保存 Ｂ：原生質體融合 Ｃ：篩選突變體 Ｄ：遺傳轉化

五、簡答題：將下列各題的答案填在下面的方框內。

1.簡述PCR反應原理。

2.如果你是某單位的技術人員，現欲建一園藝植物組織培養實驗室，請簡述實驗室的布局及主要的儀器設備

3.闡述一下培養基的滅菌方法，滅菌時間。

4.體細胞雜種篩選與鑒定方法。

5.簡述常見啟動子有哪些？

6.簡述轉基因植物的鑒定方法。

六、綜述題：將下列各題的答案寫在下面的方框內。

1.1、通過對生物技術的學習，談談生物技術在園藝科學中的應用與展望。

2.3、如果現已證明園藝植物的某一重要農藝性狀是單基因控制的質量性狀，且發現了一個與控制該性狀的基因緊密連鎖的分子標記?，F有一傳統品種，此品種的其它性狀均十分優良，唯獨該性狀表現不佳，試論述如何應用現代生物技術的方法對該性狀進行改良？

3.2、談談體細胞雜種在育種中的應用。

一、將下面詞組相對應的中文譯成拉丁文或拉丁文譯成中文。

1.RT-PCR

2.轉基因植物

3.共培養

4.subtractive hybridization

5.基因組文庫

6.生物技術

7.抗原

8.SSH

9.培養基

10.RAPD

二、判斷下列各題正確與否，正確的填“Y”錯誤的填“N”。

1.限制性片斷長度多態性技術（RFLP）是用已知的限制性內切酶消化目標RNA，電泳印跡，再用RNA探針雜交并放射自顯影，從而得到與探針同源的RNA序列酶切后在長度上的差異。

2.植物生物技術的外植體材料以離體操作為主。

3.理論上，從同一植物的根、莖、葉等不同器官中分離的DNA樣品它們之間不存在多態性；但分離Mrna再合成Cdna后可能存在豐富的多態性。

4.植物原生質體分離時，常采用酶解的方法脫除細胞壁。

5.PCR擴增的引物為單鏈DNA片段。

6.常用的報告基因吸cat、GUS、Ant、Luc、AFLP等。

7.愈傷組織原上指植物在受傷之后于傷口表面形成的一團薄壁細胞，在組織培養中，則指在人工培養基上由外植體長出來的一團有序生長的薄壁細胞。

8.DNA復制時，新合成鏈的延伸方向是從5’到3’方向。

9.Western雜交是以DNA或RNA為探針，檢測DNA鏈，用是于外源基因整合的鑒定及分析。

10.原生質體指采用機械或酶解法去掉了細胞壁的裸露的且具有活力的細胞。

11.載體的條件是：能在宿主細胞中能自我自制并能穩定保存，要有多個酶切位點，每種酶切位點最好只有一個，酶切后不損壞其自制能力及選擇標記基因并能嵌于外源DNA具有可作為選擇。

12.植物轉基因的方法主要有：大腸桿菌介導的轉化，PEG介導基因轉化、電擊法介導的轉化、基因槍法介導基因轉化及花粉管通道法介導基因轉化等。

13.易高溫分解培養基，往往不能進行高壓滅菌，通常采用過濾滅菌，即先將除去了這些不耐熱物質的培養基的其他成份經高壓滅菌后放置于無菌場所，若制備半固態培養基，須待培養基冷卻至60℃左右，再加入經過濾滅菌的各種不耐熱成分溶液，再混勻放置，分裝備用。

14.培養基滅菌后其Ph值會略微降低。

15.胚搶救主要是對由于營養和或生理原因，造成難以播種成苗或要發育中期階段就敗育或退化的胚進行中期離體培養。

三、填空題：將下列各題空缺部分的答案填在后面的方框內，兩者用“，”隔開。

1.園藝植物組織培養一般要經歷五個階級，即＿、＿、＿、＿、＿等。

2.原生質體的培養方法較多，大多數與細胞培養相似。主要的培養方法有三種，即＿、＿、＿。

3.分子標記研究中應用最廣泛的DNA鑒定技術有＿、＿、＿等四種。

4.可用于病毒及類病毒檢測的方法很多，主要有＿、＿、＿。

5.原生質體培養的前提之一是獲得大量有活力的原生質體，影響原生質體的主要因素有＿、＿、＿、＿。

6.農桿菌介導的遺傳轉化、基因槍介導遺傳轉化、原生質體介導的遺傳轉化、花粉管通道法、無選擇標記基因的轉化系統。

7.目前尚無防治病毒病的有效藥劑，在園藝植物病毒病的防治中常用的策略主要有＿、＿、＿、＿。

8.常用于植物組織培養的植物激素種類有＿、＿、＿等

9.植物轉基因研究的報告基因，在導入植物的24~48h內就可以檢測結果，從而可以對轉基因程序的有關因素進行快速評價和優化，檢測該基因的方法有＿、＿、＿。

10.德國植物生理學家HABERLANDT對植物組織培養的杰出貢獻在于提出了___理論；組織培養中外植體再生的兩種主要途徑是_______和_______。

11.＿是從Thermus aquaticus 菌提取的熱穩定性酶，分子量大約94kDa.12.在遺傳轉化的表達載體中通常構建有一些篩選基因或報告基因，如果實驗很成功，且檢測方法正確，則下列基因的作用效果應呈現的顏色分別是：LacZ基因重組子_____色菌斑；GUS呈______色；GFP呈_______色。

13.基因克隆是一系列技術的總稱，又稱為＿、＿、＿、＿等。

14.日前世界上有200多種植物成功地再生出單倍體植株，其中我國首先報道的有40多種。獲得單倍體的方法有三種＿、＿、＿。

15.園藝植物常用的脫病毒的途徑有＿、＿、＿、＿等方法。

四、選擇題：從備選答案中選出正確的結果，正確答案是唯一的。

1.可用于外植體消毒的方法有：()A：酒精消毒 B：HgCl2消毒 C：NaClO消毒 D：NaCl消毒

2.The most important contribution of Watson and Crick is:()

A：蛋白質結構模型 B：RNA結構模型 C：DNA是遺傳物質 D：DNA雙螺旋結構

3.如果RAPD分析時所選用的隨機引物的序列為5’-ATCGTACGGGTT-3’，下列虛線部分為500—1000 pb長的DNA區域，請分析其中能進行2的指數倍擴增的有：()

A: 5’ATCGTACGGGTT— — —3’ B: 5’ — — —ATCGTACGGGTT 3’ C: 5’ ATCGTACGGGTT— — —TACCATGCCCAA 3’ D: 5’ ATCGTACGGGTT— — —TTGGGCATGCAT 3’ 4.基于現代生命科學的研究進展，下列可能是遺傳物質的有：()A：DNA B：RNA C：Protein D：多糖

5.影響原生質體培養及植珠再生的因素主要有：（）

Ａ：原生質體來源 Ｂ：基因型 Ｃ：培養基 Ｄ：滲透壓調節劑

6.植物轉化實驗中常用的報告基因主要有：（）

A：cat B:GUS C;Ant D:GFP

7.單克隆抗體制備主要步驟有：（）

A：免疫注射 B：細胞融合 C：篩選 D：克隆化

8.組織培養室的設計及其基本設備有：（）

Ａ：準備室 Ｂ：制備室 Ｃ：無菌操作室 Ｄ：培養室

9.下列屬于現代生物技術研究的內容有:()

A：有性雜交 B：體細胞雜交 C：組織培養 D：基因克隆

10.原生質體的應用主要有哪些：（）

Ａ：種質資源保存 Ｂ：原生質體融合 Ｃ：篩選突變體 Ｄ：遺傳轉化

11.原生質體融合的方式有：（）

A：對稱融合 B：非對稱融合 C：配子—體細胞融合 D：供受體融合12.基本的PCR所需的試劑主要有：（）

A：兩側的引物 B：DNA模板 C：TaqDNA聚合酶 D：Mg+ 13.植物病毒檢測可以用的方法有:（）

A：血清學檢測 B：PCR檢測 C：同工酶檢測 D：指示植物鑒定

14.園藝植物常見的病毒病有：（）

A：黃龍病 B：裂皮病 C：線蟲病 D：速衰病

15.如果DNA一條鏈是5’-ATCG TACG GGTT-3’，則能與其互補配對的另一條鏈可能是：（）

A：5’-ATCG TACG GGTT-3’ B：5’-AACC CGTA CGAT-3’ C：3’-TAGC ATGC CCAA-5’ D：3’-UAGC AUGC CCAA-5’

16.外源基因表達蛋白的檢測方法有：（）

A：ELISA B：Southern雜交 C：Western雜交 D：Northern雜交

17.園藝植物常用轉化方法有哪些：（）

A：農桿菌介導轉化 B：基因槍法 C：PEG轉化法 D：電泳法

18.胚搶救在園藝植物上的應用是多方面的，主要表現在：（）

Ａ：搶救發育不良或早期退化胚 Ｂ：克服遠緣雜交不親和 Ｃ：用于柑橘合子胚搶救 Ｄ：三倍體育種

19.生物技術對園藝科學發展的貢獻有：（）

A：脫毒與快速繁殖 B：花藥培養以及小孢子培養 C：胚搶救技術 C：細胞融合技術

20.影響原生質體分離的因素主要有：（）

Ａ：植物的類型 Ｂ：基因型 Ｃ：外植體類型 Ｄ：生理狀態

五、簡答題：將下列各題的答案填在下面的方框內。

1.原生質體再生植株的遺傳變異及其利用。

2.簡述轉基因植物的鑒定方法。

3.簡述目前園藝植物生物技術的主要研究內容。

4.高溫易分解培養基如何滅菌？

5.簡述PCR反應原理。

6.闡述一下培養基的滅菌方法，滅菌時間。

六、綜述題：將下列各題的答案寫在下面的方框內。

1.1、通過對生物技術的學習，談談生物技術在園藝科學中的應用與展望。

2.3、如果現已證明園藝植物的某一重要農藝性狀是單基因控制的質量性狀，且發現了一個與控制該性狀的基因緊密連鎖的分子標記。現有一傳統品種，此品種的其它性狀均十分優良，唯獨該性狀表現不佳，試論述如何應用現代生物技術的方法對該性狀進行改良？

3.2、談談體細胞雜種在育種中的應用。

一、將下面詞組相對應的中文譯成拉丁文或拉丁文譯成中文。

1.基因組文庫

2.RFLP

3.培養基

4.transcriptional gene silencing

5.Anther culture

6.subtractive hybridization

7.簡單序列重復

8.antibody

9.接種

10.CAPS

二、判斷下列各題正確與否，正確的填“Y”錯誤的填“N”。

1.植物原生質體分離時，常采用酶解的方法脫除細胞壁。

2.可用作病毒鑒定的草本指示植物種類很多，常用的有藜科、茄科、豆科、十字花科、葫蘆科等植物。

3.載體的條件是：能在宿主細胞中能自我自制并能穩定保存，要有多個酶切位點，每種酶切位點最好只有一個，酶切后不損壞其自制能力及選擇標記基因并能嵌于外源DNA具有可作為選擇。

4.DNA復制時，新合成鏈的延伸方向是從5’到3’方向。

5.易高溫分解培養基，往往不能進行高壓滅菌，通常采用過濾滅菌，即先將除去了這些不耐熱物質的培養基的其他成份經高壓滅菌后放置于無菌場所，若制備半固態培養基，須待培養基冷卻至60℃左右，再加入經過濾滅菌的各種不耐熱成分溶液，再混勻放置，分裝備用。

6.在DNA電泳中，分子量大的片段比分子量小的片段距負極更近。

7.原生質體指采用機械或酶解法去掉了細胞壁的裸露的且具有活力的細胞。

8.PCR擴增的引物為單鏈DNA片段。

9.花藥培養屬于小孢子培養，而花粉培養則屬于器官培養的范疇。

10.胚狀體是植物組織培養中的專門術語，是指由體細胞形成的、類似于生殖細胞形成的配子胚發育過程的胚胎發生途徑。

11.植物轉基因的方法主要有：大腸桿菌介導的轉化，PEG介導基因轉化、電擊法介導的轉化、基因槍法介導基因轉化及花粉管通道法介導基因轉化等。

12.DNA雙鏈中AT間形成的氫鍵比CG間少。

13.核酸分析包括直接對病毒基因組核酸電泳分析和根據已知的基因組核酸序列設計引物對病毒及類病毒基因組的特異性片斷進行PCR擴增，通過觀察特異性條帶而對這些病原進行鑒定。

14.柑橘珠心胚培可以有效脫除病毒，珠心胚是由珠心胚細胞形成的有性胚。

15.組織培養的培養基多采用濕熱滅菌。

三、填空題：將下列各題空缺部分的答案填在后面的方框內，兩者用“，”隔開。

1.農桿菌介導的遺傳轉化、基因槍介導遺傳轉化、原生質體介導的遺傳轉化、花粉管通道法、無選擇標記基因的轉化系統。

2.常用于植物組織培養的植物激素種類有＿、＿、＿等

3.原生質體培養的前提之一是獲得大量有活力的原生質體，影響原生質體的主要因素有＿、＿、＿、＿。

4.園藝植物常用的脫病毒的途徑有＿、＿、＿、＿等方法。

5.目前尚無防治病毒病的有效藥劑，在園藝植物病毒病的防治中常用的策略主要有＿、＿、＿、＿。

6.在遺傳轉化的表達載體中通常構建有一些篩選基因或報告基因，如果實驗很成功，且檢測方法正確，則下列基因的作用效果應呈現的顏色分別是：LacZ基因重組子_____色菌斑；GUS呈______色；GFP呈_______色。

7.日前世界上有200多種植物成功地再生出單倍體植株，其中我國首先報道的有40多種。獲得單倍體的方法有三種＿、＿、＿。

8.要判斷哪一個克隆中具有我們所需要的基因就需要對所得到的重組克隆進行篩選，篩選的方法主要有：＿、＿、＿等。

9.迄今為止，已在獼猴桃、馬鈴薯、苜蓿、萵苣、甘藍、蕃茄、柑橘等植物的原生質體再生植株中觀察到變異，再生植株產生的變異主要有＿、＿、＿、＿。

10.狹義的植物生物技術是指：在離體的條件下，對植物（細胞）進行遺傳改良或使其增殖的各種技術的總稱，包括＿＿和＿＿兩個大的層面。

11.＿是從Thermus aquaticus 菌提取的熱穩定性酶，分子量大約94kDa.12.常見的啟動子有＿、＿、＿等。

13.常用的遺傳標記有______標記;______標記;_______標記和_______標記等四種不同水平的標記。

14.分子標記研究中應用最廣泛的DNA鑒定技術有＿、＿、＿等四種。

15.進行胚搶時，就最終對胚搶救成活及成苗率影響大小而言，所利用的組織優劣順序是：＿、＿、＿、＿。

四、選擇題：從備選答案中選出正確的結果，正確答案是唯一的。

1.目前分子標記在種質資源研究中的用途有：（）

A：繪制品種的指紋圖譜

B：種質資源的遺傳多樣性及分類研究 C：物種的起源與演化 D：種質資源的評價、鑒定與創新

2.基于現代生命科學的研究進展，下列可能是遺傳物質的有：()A：DNA B：RNA C：Protein D：多糖

3.園藝植物外植體脫除病毒的方法有：()

A：熱處理脫除病毒 B：莖尖培養脫除病毒 C：微芽嫁接脫除病毒 D：高壓滅菌脫除病毒

4.如果DNA一條鏈是5’-ATCG TACG GGTT-3’，則能與其互補配對的另一條鏈可能是：（）

A：5’-ATCG TACG GGTT-3’ B：5’-AACC CGTA CGAT-3’ C：3’-TAGC ATGC CCAA-5’ D：3’-UAGC AUGC CCAA-5’

5.影響原生質體分離的因素主要有：（）

Ａ：植物的類型 Ｂ：基因型 Ｃ：外植體類型 Ｄ：生理狀態

6.基因分離克隆的基本步驟有：（）

A：實驗材料的選擇 B：目標DNA片段的制備與克隆 C：目的基因的純化

D：載體的構建

7.園藝植物常見的病毒病有：（）

A：黃龍病 B：裂皮病 C：線蟲病 D：速衰病

8.組織培養技術在園藝植物上的應用主要有：（）

Ａ：快速繁殖 Ｂ：提高育種效率，改良品種 Ｃ：脫毒 Ｄ：種質保存

9.下列屬于現代生物技術研究的內容有:()

A：有性雜交 B：體細胞雜交 C：組織培養 D：基因克隆

10.胚搶救在園藝植物上的應用是多方面的，主要表現在：（）

Ａ：搶救發育不良或早期退化胚 Ｂ：克服遠緣雜交不親和 Ｃ：用于柑橘合子胚搶救 Ｄ：三倍體育種

11.影響原生質體培養及植珠再生的因素主要有：（）

Ａ：原生質體來源 Ｂ：基因型 Ｃ：培養基 Ｄ：滲透壓調節劑

12.右下圖中剪刀所在位置是DNA分子上的某一酶的酶切位點，長方形是探針結合部位，試問1、2、3三種DNA樣品用該酶/探針組合進行RFLP分析能得到的雜交信號條帶數分別是：

A： 1、2、1 B：1、2、2 C：1、1、1 D：1、1、2 13.單克隆抗體制備主要步驟有：（）A：免疫注射 B：細胞融合 C：篩選 D：克隆化

14.如果RAPD分析時所選用的隨機引物的序列為5’-ATCGTACGGGTT-3’，下列虛線部分為500—1000 pb長的DNA區域，請分析其中能進行2的指數倍擴增的有：()

A: 5’ATCGTACGGGTT— — —3’ B: 5’ — — —ATCGTACGGGTT 3’ C: 5’ ATCGTACGGGTT— — —TACCATGCCCAA 3’ D: 5’ ATCGTACGGGTT— — —TTGGGCATGCAT 3’

15.原生質體融合在植物遺傳改良上的應用主要表現在：（）

A：克服生殖障礙，創造新種質 B：轉移有利性狀，改善作物品質 C：作為育種中間材料，進一步用作物改良 D：轉移部分染色體，獲得非對稱雜種

16.The most important contribution of Watson and Crick is:()

A：蛋白質結構模型 B：RNA結構模型 C：DNA是遺傳物質 D：DNA雙螺旋結構

17.植物轉化實驗中常用的報告基因主要有：（）

A：cat B:GUS C;Ant D:GFP 18.常用的選擇標記基因有：（）

A：抗生素基因 B：NPTⅡ基因 C：花青素基因 D：熒光素酶基因

19.赤霉素的生理作用主要包括：（）

Ａ：誘導莖細胞的伸長 Ｂ：對形成層的細胞分化有影響 Ｃ：可以解除種子、塊莖、鱗莖等休眠 Ｄ：抑制衰老

20.可以用于基因分離的方法有：（）

A：同源序列法 B：圖位克隆法 C：功能克隆法 D：差減雜交法

五、簡答題：將下列各題的答案填在下面的方框內。

1.高溫易分解培養基如何滅菌？

2.試比較固體培養基和液體培養基的優、缺點。

3.闡述一下培養基的滅菌方法，滅菌時間。

4.體細胞雜種篩選與鑒定方法。

5.簡述常見啟動子有哪些？

6.如果你是某單位的技術人員，現欲建一園藝植物組織培養實驗室，請簡述實驗室的布局及主要的儀器設備

六、綜述題：將下列各題的答案寫在下面的方框內。

1.2、談談體細胞雜種在育種中的應用。

2.3、如果現已證明園藝植物的某一重要農藝性狀是單基因控制的質量性狀，且發現了一個與控制該性狀的基因緊密連鎖的分子標記?，F有一傳統品種，此品種的其它性狀均十分優良，唯獨該性狀表現不佳，試論述如何應用現代生物技術的方法對該性狀進行改良？

3.1、通過對生物技術的學習，談談生物技術在園藝科學中的應用與展望。

第五篇：《園藝植物生物技術》實驗教案

實驗一 現代生物技術實驗室與實驗儀器

一、實驗目的

實驗室和實驗儀器是開展現代生物技術研究的基礎平臺，對實驗室布局和儀器配置的掌握程度是學生知識結構完整性的重要體現。通過現場參觀和老師講解加深同學們對現代分子生物學實驗室的規劃與布局及常用儀器設備的主要功能的認識，掌握高速冷凍離心機、PCR儀、電泳儀、凝膠成像系統等關鍵儀器的使用方法。

二、實驗場所選擇及實驗內容

園藝學院植物分子生物技術實驗室與開展現代生物技術研究直接相關的實驗室分工與布局和主要相關儀器：如與組織培養有關的超凈工作臺、高壓滅菌鍋、接種至、培養室等；與分子生物學有關的高速冷凍離心機、PCR儀、電泳儀、凝膠成像系統等。

三、實驗方法與步驟

1、相關背景知識回顧：對課堂講述的各種生物技術如分子標記、細胞和組織培養等操作過程進行回顧，重要指出每個環節要用到的必備儀器的作用、性能指標、操作注意事項及儀器選購中應注意的問題等。

2、每班分為兩小組簡要介紹現代生物技術實驗室的布局及功能分區情況；針對每個分區的重要儀器進行講述，結束時對所有參觀內容進行簡要總結，并回答同學們的提問。

四、實驗注意事項

實驗有很多易損儀器或有毒試劑，參觀時要求同學們認真記錄，不要隨意動手，以保證儀器和人身安全。

五、思考題

1、根據參觀內容，描述本次參觀有了解到的主要儀器的名稱、用途及使用中的注意事項。

2、一個現代化生物技術實驗室應具備的基本功能的必備儀器有哪些？實驗二 質粒DNA的提取、純化及檢測

一、實驗目的

質粒是攜帶外源基因進入細菌中擴增或表達的主要載體，它在基因操作中具有重要作用。質粒的分離與提取時最常用、最基本的實驗技術。質粒的提取方法很多，大多包括3個主要步驟：細菌的培養、細菌的收集和裂解、質粒DNA的分離和純化。本實驗以堿裂解法為例介紹質粒的抽提過程，應掌握堿裂解法抽提質粒的原理、步驟及各試劑的作用。

二、實驗原理 在pH 12.0-12.6堿性環境中，細菌的線性大分子量染色體DNA變性分開，而共價閉環的質粒DNA雖然變性但仍處于拓撲纏繞狀態。將pH調至中性并有高鹽存在及低溫的條件下，大部分染色體DNA、大分子量RNA和蛋白質在去污劑SDS的作用下形成沉淀，而質粒DNA仍然為可溶狀態。通過離心，可除去大部分細胞碎片、染色體DNA、RNA及蛋白質，質粒DNA尚在上清液中，然后用酚、氯仿抽提進一步純化質粒DNA。

三、主要儀器及試材

含有質粒pUC18載體的大腸桿菌菌液及離心機、移液槍、離心管及質粒DNA提取有關試劑。

液氮、及DNA提取有關試劑。

四、實驗方法與步驟

（一）試劑配制:

1、LB培養基:NaCl 10g，酵母提取物（Yeast extract）5g，蛋白胨（Peptone）10g，瓊脂粉15g，加ddH2O至1000ml。分裝至500ml三角瓶（250ml/瓶）。高壓滅菌15min，室溫貯存。

2、X-gal（20mg/ml）:20mg X-gal溶于1ml二甲基甲酰胺中，-20℃避光保存。

3、IPTG（200mg/ml）:1g IPTG溶于4ml去離子雙蒸水中，定容至5ml，過濾滅菌后-20℃保存。

4、Amp（100mg/ml）:1g Amp溶于4ml去離子滅菌雙蒸水中，定容至5ml，-20℃保存。

5、溶液I: 50mM葡萄糖，25mM Tris-HCl（pH 8.0），10mM EDTA（pH 8.0）。配制方法：1M Tris-HCl（pH 8.0）12.5ml，0.5M EDTA（pH 8.0）10ml，葡萄糖4.730g，加ddH2O至500ml。高壓滅菌15min，貯存于4℃。

6、溶液II:0.2N NaOH，1% SDS。配制方法：2N NaOH 1ml，10% SDS 1ml，加ddH2O至10ml，使用前臨時配制。

7、溶液III:醋酸鉀（KAc）緩沖液，pH 4.8。配制方法：5M KAc300ml，冰醋酸57.5ml，加ddH2O至500ml（視冰醋酸情況，也可按6:3:1配制），貯存于4℃。

8、TE:10mM Tris-HCl（pH 8.0），1mM EDTA（pH 8.0）。配制方法：1M Tris-HCl（pH 8.0）1ml，0.5M EDTA（pH 8.0）0.2ml，加ddH2O至100ml。高壓滅菌15min，貯存于4℃。

9、苯酚:氯仿:異戊醇（25:24:1）。

10、乙醇（無水乙醇、70%乙醇）。11、5×TBE:Tris-base 54g，硼酸27.5g，EDTA-Na·2H2O 4.65g，加ddH2O至1000ml。高壓滅菌15min，貯存于4℃。

12、溴化乙錠（EB）：10mg/ml

13、Rnase A（RNA酶A）:不含DNA酶（DNase-free）RNase A的10mg/ml，TE配制，沸水加熱15min，分裝貯存于-20℃。14、6×loading buffer（上樣緩沖液）:0.25%溴酚藍，0.25%二甲苯青FF，40%（W/V）蔗糖水溶液。15、1%瓊脂糖凝膠:稱取1g瓊脂糖與三角燒瓶中，加100ml 1×TBE，微波爐加熱至完全熔化，冷卻至60℃左右，加EB母液（10mg/ml）至終濃度0.5ug/ml（注意：EB為強誘變劑，操作時帶手套），輕輕搖勻，緩緩倒入架有梳子的電泳膠板中，勿使有氣泡，靜置冷卻30min以上，輕輕拔出梳子，放入電泳槽中（電泳緩沖液1×TBE），即可上樣。

（二）實驗步驟

1、取含有pUC18質粒的大腸桿菌菌液于LB固體培養基上劃線37℃過夜培養。

2、用無菌牙簽或槍頭挑取LB固體培養基上生長的單菌落，接種于20ml含有Amp抗生素的LB液體培養基中，37℃搖床-250r/min過夜培養。

3、吸取1.5ml菌液，12000g離心1min，收集菌體，倒掉菌液；吸取1.5ml菌液，再次收集菌體，盡量將菌液倒干凈。

4、加入200ul預冷的溶液I，重新懸浮細胞，震蕩混勻（注意：應徹底混勻沉淀或碎塊）。

5、加入400ul新配置的溶液II，輕柔顛倒混勻（不可劇烈震蕩），并將離心管置于冰上2-3min，使細胞膜裂解（溶液II為裂解液，故離心管中菌液逐漸變清）。

6、加入300ul預冷的溶液III，溫和顛倒混勻，見白色絮狀沉淀，置于冰上3-5min，使雜質充分沉淀（溶液III為中和液，此時質粒DNA復性，染色體和蛋白質不可逆變性，形成不可溶復合物，同時K+使SDS-蛋白復合物沉淀）。

7、吸取800ul上清液（注意：不要吸到漂浮的雜質）至另一Eppendorf管中，加入2/3體積的異丙醇或2.5倍體積的預冷無水乙醇，混勻，室溫放置5min，4℃離心12000g ×15min。

8、倒盡上清，加75%乙醇浸洗沉淀除鹽1-2次，4℃離心 10000g×10min，棄上清，將沉淀在室溫或超凈工作臺上風干。

9、將沉淀溶于40ul 滅菌超純水或TE（含RNase A 20ug/ml），37℃水浴30min，以降解RAN，-20℃保存備用。

10、取制備的質粒DNA 1-2ul，加適當loading buffer混勻上樣，1%瓊脂糖凝膠2.5V/cm電泳1h進行檢測。

五、實驗注意事項

1、實驗中的液氮、氯仿、EB等都是有毒物質，操作時應注意防護，盡量減少臺面污染。

2、DAN電泳時只能由負極到正極，電泳時要注意電極是否正確。

3、質粒電泳檢測一般有三條帶，分別為質粒的超螺旋、開環、線型三種構型。

六、思考題

簡述質粒DAN提取的步驟。

實驗三 PCR技術

一、實驗目的

聚合酶鏈式反應（polymerase chain reaction，PCR）是一種體外核酸擴增系統，是分子克隆技術中常用技術之一。PCR具有反應快速、靈敏、操作簡便等優點，已廣泛應用于分子生物學的各個領域。通過本實驗應掌握PCR原理，學習PCR操作過程。

二、實驗原理

PCR是在模板DNA、引物和dNTPs的存在環境下依賴于DNA聚合酶的酶促反應。PCR技術的特異性取決于引物和模板結合的特異性。反應分為變性、退火、延伸三步，經過一定的循環，介于兩個引物之間的特異DNA片段得到大量擴增。

三、主要儀器及試材

含有外源cDNA片段的質粒或轉基因蘋果、番茄葉片總DNA；外源基因的特異引物及PCR儀與相關試劑。

四、實驗方法與步驟

1、調整模板濃度至5ng/ul。

2、按下列體系配制反應混合液，混勻，離心5秒（注意加1滴礦物油覆蓋PCR管）。

Template DNA

2ul（20ng）10×buffer

2.0ul MgCl2（25mM）

1.5ul Primer F（10uM）

0.2ul Primer R（10uM）

0.2ul dNTPs（2mM）

2.0ul Taq（5U/ul）

0.2ul Add ddH2O to

20ul

3、PCR反應循環條件設置：

95℃

3min

1cycle 94℃

1min

55℃

1min 72℃

90s

35cycles 72℃

10min

1cycle 4℃

forever

4、檢測：加2ul溴酚藍，混勻，短暫離心，取15ul反應產物點樣電泳

5、在1%瓊脂糖凝膠上點樣電泳；EB染色，紫外觀察。

五、實驗注意事項

1、引物設計應具有特異性，依靠引物設計軟件進行引物設計；引物分裝成多管，不宜反復凍融多次；

2、PCR反應的各種成分不能遺漏，操作應戴手套，冰上操作；

3、根據引物的Tm值和擴增片段長度以及PCR儀的特性來設定PCR循環條件；

4、注意分析電泳檢測PCR產物時出現拖帶或非特異性擴增帶、無DNA帶或DNA帶很弱的可能原因。

六、思考題

簡述PCR技術的原理和步驟。