第一篇：分子生物學實驗室的常規(guī)儀器設(shè)備

(一)溫度控制系統(tǒng)：

1.冰箱: 根據(jù)藥品、試劑及多種生物制劑保存的需要，必須具備不同控溫級別的冰箱，最常使用的有：4℃、-20℃、-80℃冰箱。4℃適合儲存某些溶液、試劑、藥品等。

-20℃適用于某些試劑、藥品、酶、血清、配好的抗生素和DNA、蛋白質(zhì)樣品等。-80℃適合某些長期低溫保存的樣品、純化的樣品、特殊的低溫處理消化液等的保存。0-10℃的冷柜適合低溫條件下的電泳、層析、透析等實驗。

2．液氮罐：有些實驗材料、某些器官組織、細胞株、菌株及純化的樣品等，要求速凍和長期保存在超低溫環(huán)境下，就需要一個液氮罐（-196℃）具有經(jīng)濟、省力和較好地保持細胞生物學特性的優(yōu)點。

3．培養(yǎng)箱：37℃恒溫箱用于細菌的固體培養(yǎng)和細胞培養(yǎng)。

CO2培養(yǎng)箱適用于培養(yǎng)各種細胞，可恒定地提供一定量的CO2（通常5%），用來維持培養(yǎng)液的酸度（pH值）。

37℃恒溫空氣搖床可進行液體細菌的培養(yǎng)。4.水浴鍋：用于保溫。

25-100℃水浴搖床可用于分子雜交試驗，各種生物化學酶反應(yīng)等試驗的保溫。25-100℃水浴箱用于常規(guī)試驗。5.烘箱：主用于烘干實驗器皿，有些需要溫度高些，有些需要溫度低些。用于RNA方面的實驗用具，需要在250℃烤箱中烘干，有些塑料用具只能在42-45℃的烤箱中進行烘干。

（二）水的凈化裝置：隨著分子生物學的飛速發(fā)展，許多實驗對水純度的要求越來越高。1.蒸餾水皿：單蒸水常難以滿足實驗要求。雙蒸水、三蒸水配液，許多實驗要去離子水。多次蒸餾水可除去水中揮發(fā)性雜質(zhì)，不能完全除去水中溶解的氣體雜質(zhì)（Mn2、Cu2、Zn2、Fe3、Mo(Ⅵ)）。

2.離子交換器：去離子水—用離子交換法制取的水，稱去離子水。

去離子效果好，但不能除去水中的非離子型雜質(zhì)，其中常含有微量的有機物（樹脂等）。3．超純水：用蒸餾水、離子交換水、反滲透純水做為供水，磁鐵耦合齒輪泵作用使水循環(huán)。用于PCR、PCR氨基酸分析、DNA測序、酶反應(yīng)、組織和細胞培養(yǎng)等。

（三）菌消毒設(shè)備：分子生物學所用大部分試劑，而且實驗用具都應(yīng)嚴格消毒滅菌。1．蒸汽消毒鍋：用于小批量物品的隨時消毒。大批實驗物品、試劑、培養(yǎng)基可使用大型消毒且定時進行消毒

2.紫外線：75%乙醇、0.1%SDS（消毒劑）

一些耐高壓、高溫消毒且可用紫外線照射或乙醇和SDS浸泡。

紫外線照射使用方便，且很方便，但滅菌效果與距離有關(guān)，且產(chǎn)生臭氧污染安全，用于無菌室，超凈臺和塑料用具的消毒。

3.濾器濾膜：不耐高溫、高壓的試劑用其處菌。4.煮沸消毒：主用于金屬器械和針急需時采用。

（四）計量系統(tǒng)： 1.稱量系統(tǒng)：（各種天平）臺秤、托盤天平、鈕力擺動天平、光電分子天平、精密電子分析天平

2.液體體積的度量：精：量筒、移液管、微量取液器 粗：刻度試管、燒杯、錐形瓶 3.pH值測量：

pH計：測定溶液中H 的直接電位的儀器，主要通過一對電極，在不同的pH溶液中產(chǎn)生不同的電動勢用pH值表示出來。

pH試紙：只適用于培養(yǎng)液、酚飽和液、緩沖液或其它試劑溶液的pH值的粗略估計。而大部分試劑的配制要求嚴格的pH值，需精確度高（小數(shù)點后兩位）的pH計。4.OD值測量：光密度、分光光度計是利用物質(zhì)在可見光和紫外線區(qū)域中的吸收光譜來鑒定該物質(zhì)的性質(zhì)及其含量的一種儀器。它是由光源、單色器、吸收池、接收器、測量儀表或顯示屏幕所組成。OD值是許多溶液中溶質(zhì)定量的方便指標之一，通過所產(chǎn)生的單色光而測定某一溶液對該單色光的吸收值，利用它可進行核酸溶液定量和純度的初步判斷。

（五）離心機：離心技術(shù)是研究生物的結(jié)構(gòu)和功能中不可缺少的一種物理技術(shù)手段。因為各種物質(zhì)在沉淀系數(shù)、浮力、和質(zhì)量等方面有差異，可利用強大的離心力場，使其分離、純化和濃縮。目前有各種各樣的離心機。可供少于0.05ml到幾升的樣品離心之用。離心技術(shù)應(yīng)用廣泛，包括收集和分離細胞、細胞器和生物大分子等。據(jù)其轉(zhuǎn)速的不同，可分為以下幾種類型：

1.普通離心機：最大轉(zhuǎn)速6000 r/m，最大離心力6000g ①醫(yī)用或臺式離心機：是離心機中最簡單而廉價的，最常用于收集快速沉降系數(shù)的物質(zhì)，如紅細胞、粗大的沉淀物、酵母菌和細菌等。

②低速冷凍離心機：主要用于細胞、細胞核、細胞膜和細菌的沉淀和收集等。2 2.高速離心機：最大轉(zhuǎn)速25000 r/m，最大離心力89000g 有冷凍和常溫兩種，多用于制備和手收集微生物、細胞碎片、細胞、大的細胞器、硫酸銨沉淀物以及免疫沉淀物等。

3.超速離心機：最大轉(zhuǎn)速9000 r/m，最大離心力694000g。

4.臺式超速離心機：最大轉(zhuǎn)速12000r/m，最大離心力625000g。

（六）超凈工作臺：內(nèi)有紫外燈、照明燈、還應(yīng)有酒精燈火焰、75%乙醇等滅菌的設(shè)備，是一種提供局部潔凈度的設(shè)備。其原理是鼓風機驅(qū)動空氣，經(jīng)過低、中效的過濾器后，通過工作臺面，使實驗操作區(qū)域成為無菌的環(huán)境。超凈臺按氣流方向的不同大致有幾種類型： ①側(cè)流式：凈化后氣流，從左側(cè)或右側(cè)通過工作臺面，流向?qū)?cè)，或者從上往下或從下往上流向?qū)?cè)，他們都能形成氣流屏障而保障臺面無菌。

缺點：在凈化氣流和外邊氣體交界處，可因氣體的流向而出現(xiàn)負壓，使少量的未凈化氣體混入，而造成污染。

②外流式：氣流是面向操作人員的方向流動，從而保證外面氣體不能混入。

缺點：在進行有害物質(zhì)實驗時，對操作人員不利，但可采用有機玻璃把上半部分遮擋起來，使氣流往下方流出。

（七）電泳系統(tǒng)：電泳技術(shù)是檢測、鑒定各種生物大分子的純度、含量及描述它們的特征，甚至還是分離、純化、回收和濃縮樣品的工具之一。核酸和蛋白質(zhì)等都帶有電荷，當它們被置于電場中時，能夠移動。

電泳裝置由兩部分組成：電源裝置和電泳槽裝置。

① 電泳裝置：電源需經(jīng)穩(wěn)流通過穩(wěn)壓器，既能提供穩(wěn)定的直流電，又能輸出穩(wěn)定的電壓。可用于三種： 常度穩(wěn)壓電泳儀：輸出電壓0-500v 0-15mA 中度穩(wěn)壓電泳儀：輸出電壓400-1000v 高度穩(wěn)壓電泳儀：輸出電壓1000以上的電源裝置。② 電泳槽裝置：分兩種

水平式電泳槽：一般分為微型電泳槽和大號水平式電泳槽 垂直式電泳槽：分垂直平板電泳槽和圓柱形電泳槽裝置。

（八）PCR儀：Polymerase Chain

Reaction儀，也稱DNA熱循環(huán)儀，基因擴增，它是使一對寡核苷酸引物結(jié)合到正負DNA鏈上的靶序列兩側(cè)，從而酶促合成拷貝數(shù)百萬倍的靶序列DNA片段，它的每一循環(huán)包括在三種不同溫度進行的DNA變性，引物復性，DNA聚合酶催化的延伸反應(yīng)三個過程。

（九）凝膠成像分析系統(tǒng): 對電泳后含溴乙錠（EB）核酸樣品的觀察分析。

（十）干燥設(shè)備： 3 1.真空加熱干燥箱：核酸在硝酸纖維素膜和尼龍膜上固定，用于雜交實驗。

2.電泳凝膠干燥箱：電泳后的凝膠進行脫水干燥的儀器，一般可將凝膠干燥到一些玻璃紙上，干燥后的凝膠易于保存。

3.液氮冷凍干燥：適用于活性蛋白質(zhì)樣品的干燥與結(jié)晶。

4.真空泵：許多實驗都需要抽真空。如：乙醇沉淀后核酸樣品的干燥，電泳凝膠的干燥等。

（十一）其他

1.微波爐：便于一些溶液的快速加熱和定溫加熱，電泳瓊脂糖凝膠配制、溶化等。

2.制冰機：用于制造大多數(shù)核酸、蛋白質(zhì)的實驗操作所需的低溫環(huán)境，以減少核酸酶或蛋白質(zhì)酶的水解。3.層析裝置：（色譜分離）是一種分離多組分混合物的有效物理方法。

真空印記系統(tǒng)，DNA合成/測序儀：這些都是對核酸進行深入研究的必備儀器。4.磁力攪拌器：多角度旋轉(zhuǎn)混勻器、快速振蕩混合器：用于混合儀器。5.組織勻漿器：超聲組織及細胞破碎器，用其進行樣品的分離提純實驗。

6.通風櫥：很多溶劑能逸出毒氣，必備柜，放射性試驗還要有有機玻璃屏蔽。7.玻璃蒸餾器、電熱加帽、變壓器：用于酚等有機溶劑的蒸餾。8.Tip頭、Eppendorf管： 微管移液器tip頭（吸液尖）、Eppendorf管（微量離心管）可洗滌，硅化消毒后反復使用。對一些要求嚴格的實驗，如RNA的提取、保存等操作，應(yīng)使用新的消毒tip頭與Eppendorf管。另外還應(yīng)備有常用規(guī)格的離心管（1000ml、500 ml、250 ml、50 ml、7 ml等）及96孔、24孔、12孔、6孔的細胞培養(yǎng)塑料平板等。9.小型設(shè)備、用具：

定時器、濾膜、保鮮膜、防護眼鏡鴨嘴鑷、常規(guī)的玻璃或塑料器皿（包括平皿、試管、燒杯、量瓶、試劑分液漏斗、避光保存的試劑應(yīng)使用棕色試劑瓶，如飽和酚、巰基乙醇等）、記號筆、各種手套PE、乳膠、家用、防酸的等）

第二篇：分子生物學實驗室的常規(guī)儀器設(shè)備及有關(guān)操作

分子生物學實驗室的常規(guī)儀器設(shè)備及有關(guān)操作

一、驗室的常規(guī)儀器、設(shè)備(一)溫度控制系統(tǒng)：

1.冰箱: 根據(jù)藥品、試劑及多種生物制劑保存的需要，必須具備不同控溫級別的冰箱，最常使用的有：4℃、-20℃、-80℃冰箱。

4℃適合儲存某些溶液、試劑、藥品等。

-20℃適用于某些試劑、藥品、酶、血清、配好的抗生素和DNA、蛋白質(zhì)樣品等。

-80℃適合某些長期低溫保存的樣品、純化的樣品、特殊的低溫處理消化液等的保存。

0-10℃的冷柜適合低溫條件下的電泳、層析、透析等實驗。2．液氮罐：有些實驗材料、某些器官組織、細胞株、菌株及純化的樣品等，要求速凍和長期保存在超低溫環(huán)境下，就需要一個液氮罐（-196℃）具有經(jīng)濟、省力和較好地保持細胞生物學特性的優(yōu)點。

3．培養(yǎng)箱：37℃恒溫箱用于細菌的固體培養(yǎng)和細胞培養(yǎng)。CO2培養(yǎng)箱適用于培養(yǎng)各種細胞，可恒定地提供一定量的CO2（通常5%），用來維持培養(yǎng)液的酸度（pH值）。

37℃恒溫空氣搖床可進行液體細菌的培養(yǎng)。4.水浴鍋：用于保溫。

25-100℃水浴搖床可用于分子雜交試驗，各種生物化學酶反應(yīng)等試驗的保溫。

25-100℃水浴箱用于常規(guī)試驗。

5.烘箱：主用于烘干實驗器皿，有些需要溫度高些，有些需要溫度低些。用于RNA方面的實驗用具，需要在250℃烤箱中烘干，有些塑料用具只能在42-45℃的烤箱中進行烘干。

（二）水的凈化裝置：隨著分子生物學的飛速發(fā)展，許多實驗對水純度的要求越來越高。1.蒸餾水皿：單蒸水常難以滿足實驗要求。雙蒸水、三蒸水配液，許多實驗要去離子水。

多次蒸餾水可除去水中揮發(fā)性雜質(zhì)，不能完全除去水中溶解的氣體雜質(zhì)（Mn2+、Cu2+、Zn2+、Fe3+、Mo(Ⅵ)）。

2.離子交換器：去離子水—用離子交換法制取的水，稱去離子水。

去離子效果好，但不能除去水中的非離子型雜質(zhì)，其中常含有微量的有機物（樹脂等）。

3．超純水：用蒸餾水、離子交換水、反滲透純水做為供水，磁鐵耦合齒輪泵作用使水循環(huán)。用于PCR、PCR氨基酸分析、DNA測序、酶反應(yīng)、組織和細胞培養(yǎng)等。

（三）菌消毒設(shè)備：分子生物學所用大部分試劑，而且實驗用具都應(yīng)嚴格消毒滅菌。

1．蒸汽消毒鍋：用于小批量物品的隨時消毒。大批實驗物品、試劑、培養(yǎng)基可使用大型消毒且定時進行消毒

2.紫外線：75%乙醇、0.1%SDS（消毒劑）

一些耐高壓、高溫消毒且可用紫外線照射或乙醇和SDS浸泡。紫外線照射使用方便，且很方便，但滅菌效果與距離有關(guān)，且產(chǎn)生臭氧污染安全，用于無菌室，超凈臺和塑料用具的消毒。

3.濾器濾膜：不耐高溫、高壓的試劑用其處菌。4.煮沸消毒：主用于金屬器械和針急需時采用。

（四）計量系統(tǒng)：

1.稱量系統(tǒng)：（各種天平）臺秤、托盤天平、鈕力擺動天平、光電分子天平、精密電子分析天平

2.液體體積的度量：精：量筒、移液管、微量取液器，粗：刻度試管、燒杯、錐形瓶

3.pH值測量：

pH計：測定溶液中H+的直接電位的儀器，主要通過一對電極，在不同的pH溶液中產(chǎn)生不同的電動勢用pH值表示出來。pH試紙：只適用于培養(yǎng)液、酚飽和液、緩沖液或其它試劑溶液的pH值的粗略估計。而大部分試劑的配制要求嚴格的pH值，需精確度高（小數(shù)點后兩位）的pH計。

4.OD值測量：光密度、分光光度計是利用物質(zhì)在可見光和紫外線區(qū)域中的吸收光譜來鑒定該物質(zhì)的性質(zhì)及其含量的一種儀器。它是由光源、單色器、吸收池、接收器、測量儀表或顯示屏幕所組成。OD值是許多溶液中溶質(zhì)定量的方便指標之一，通過所產(chǎn)生的單色光而測定某一溶液對該單色光的吸收值，利用它可進行核酸溶液定量和純度的初步判斷。

（五）離心機：離心技術(shù)是研究生物的結(jié)構(gòu)和功能中不可缺少的一種物理技術(shù)手段。因為各種物質(zhì)在沉淀系數(shù)、浮力、和質(zhì)量等方面有差異，可利用強大的離心力場，使其分離、純化和濃縮。目前有各種各樣的離心機。可供少于0.05ml到幾升的樣品離心之用。離心技術(shù)應(yīng)用廣泛，包括收集和分離細胞、細胞器和生物大分子等。據(jù)其轉(zhuǎn)速的不同，可分為以下幾種類型：

1.普通離心機：最大轉(zhuǎn)速6000 r/m，最大離心力6000g ①醫(yī)用或臺式離心機：是離心機中最簡單而廉價的，最常用于收集快速沉降系數(shù)的物質(zhì)，如紅細胞、粗大的沉淀物、酵母菌和細菌等。

②低速冷凍離心機：主要用于細胞、細胞核、細胞膜和細菌的沉淀和收集等。

2.高速離心機：最大轉(zhuǎn)速25000 r/m，最大離心力89000g 有冷凍和常溫兩種，多用于制備和手收集微生物、細胞碎片、細胞、大的細胞器、硫酸銨沉淀物以及免疫沉淀物等。

3.超速離心機：最大轉(zhuǎn)速9000 r/m，最大離心力694000g。4.臺式超速離心機：最大轉(zhuǎn)速12000r/m，最大離心力625000g。

（六）超凈工作臺：內(nèi)有紫外燈、照明燈、還應(yīng)有酒精燈火焰、75%乙醇等滅菌的設(shè)備，是一種提供局部潔凈度的設(shè)備。其原理是鼓風機驅(qū)動空氣，經(jīng)過低、中效的過濾器后，通過工作臺面，使實驗操作區(qū)域成為無菌的環(huán)境。超凈臺按氣流方向的不同大致有幾種類型： ①側(cè)流式：凈化后氣流，從左側(cè)或右側(cè)通過工作臺面，流向?qū)?cè)，或者從上往下或從下往上流向?qū)?cè)，他們都能形成氣流屏障而保障臺面無菌。

缺點：在凈化氣流和外邊氣體交界處，可因氣體的流向而出現(xiàn)負壓，使少量的未凈化氣體混入，而造成污染。

②外流式：氣流是面向操作人員的方向流動，從而保證外面氣體不能混入。

缺點：在進行有害物質(zhì)實驗時，對操作人員不利，但可采用有機玻璃把上半部分遮擋起來，使氣流往下方流出。

（七）電泳系統(tǒng)：電泳技術(shù)是檢測、鑒定各種生物大分子的純度、含量及描述它們的特征，甚至還是分離、純化、回收和濃縮樣品的工具之一。核酸和蛋白質(zhì)等都帶有電荷，當它們被置于電場中時，能夠移動。

電泳裝置由兩部分組成：電源裝置和電泳槽裝置。

① 電泳裝置：電源需經(jīng)穩(wěn)流通過穩(wěn)壓器，既能提供穩(wěn)定的直流電，又能輸出穩(wěn)定的電壓。可用于三種：

常度穩(wěn)壓電泳儀：輸出電壓0-500v 0-15mA 中度穩(wěn)壓電泳儀：輸出電壓400-1000v 高度穩(wěn)壓電泳儀：輸出電壓1000以上的電源裝置。② 電泳槽裝置：分兩種

水平式電泳槽：一般分為微型電泳槽和大號水平式電泳槽 垂直式電泳槽：分垂直平板電泳槽和圓柱形電泳槽裝置。

（八）PCR儀：Polymerase Chain Reaction儀，也稱DNA熱循環(huán)儀，基因擴增，它是使一對寡核苷酸引物結(jié)合到正負DNA鏈上的靶序列兩側(cè)，從而酶促合成拷貝數(shù)百萬倍的靶序列DNA片段，它的每一循環(huán)包括在三種不同溫度進行的DNA變性，引物復性，DNA聚合酶催化的延伸反應(yīng)三個過程。

（九）凝膠成像分析系統(tǒng): 對電泳后含溴乙錠（EB）核酸樣品的觀察分析。

（十）干燥設(shè)備：

1.真空加熱干燥箱：核酸在硝酸纖維素膜和尼龍膜上固定，用于雜交實驗。

2.電泳凝膠干燥箱：電泳后的凝膠進行脫水干燥的儀器，一般可將凝膠干燥到一些玻璃紙上，干燥后的凝膠易于保存。

3.液氮冷凍干燥：適用于活性蛋白質(zhì)樣品的干燥與結(jié)晶。4.真空泵：許多實驗都需要抽真空。如：乙醇沉淀后核酸樣品的干燥，電泳凝膠的干燥等。

（十一）其他

1.微波爐：便于一些溶液的快速加熱和定溫加熱，電泳瓊脂糖凝膠配制、溶化等。

2.制冰機：用于制造大多數(shù)核酸、蛋白質(zhì)的實驗操作所需的低溫環(huán)境，以減少核酸酶或蛋白質(zhì)酶的水解。

3.層析裝置：（色譜分離）是一種分離多組分混合物的有效物理方法。

真空印記系統(tǒng)，DNA合成/測序儀：這些都是對核酸進行深入研究的必備儀器。

4.磁力攪拌器：多角度旋轉(zhuǎn)混勻器、快速振蕩混合器：用于混合儀器。

5.組織勻漿器：超聲組織及細胞破碎器，用其進行樣品的分離提純實驗。

6.通風櫥：很多溶劑能逸出毒氣，必備柜，放射性試驗還要有有機玻璃屏蔽。

7.玻璃蒸餾器、電熱加帽、變壓器：用于酚等有機溶劑的蒸餾。8.Tip頭、Eppendorf管：

微管移液器tip頭（吸液尖）、Eppendorf管（微量離心管）可洗滌，硅化消毒后反復使用。對一些要求嚴格的實驗，如RNA的提取、保存等操作，應(yīng)使用新的消毒tip頭與Eppendorf管。另外還應(yīng)備有常用規(guī)格的離心管（1000ml、500 ml、250 ml、50 ml、7 ml等）及96孔、24孔、12孔、6孔的細胞培養(yǎng)塑料平板等。9.小型設(shè)備、用具：

定時器、濾膜、保鮮膜、防護眼鏡鴨嘴鑷、常規(guī)的玻璃或塑料器皿（包括平皿、試管、燒杯、量瓶、試劑分液漏斗、避光保存的試劑應(yīng)使用棕色試劑瓶，如飽和酚、巰基乙醇等）、記號筆、各種手套PE、乳膠、家用、防酸的等）

二、本期實驗所用主要儀器、設(shè)備的功能及操作 1.酚的重蒸餾裝置：空氣冷凝式玻璃蒸餾器。

一般酚是無色透明的結(jié)晶，如呈粉色或黃色，表明其中含有酚的氧化產(chǎn)物，如醌、二酸等，變色的酚不能用于實驗，因其中的酚氧化物可破壞核酸的磷酸二酯鍵，并引起DNA鏈的交聯(lián)。使用前必須在160℃-180℃重蒸餾以去除能引起RNA和DNA斷裂和交聯(lián)的污染雜質(zhì)，從而得到純凈的酚。

2.磁力攪拌器：81-2型恒溫磁力攪拌器

將導電溫度表用導線與二芯插頭連接，插入后面的溫度表孔內(nèi)，當溫度上升到預(yù)先調(diào)整好的度數(shù)時即自動停止加熱（控溫攪拌）。主要用于物質(zhì)的快速攪拌、溶解和混勻。如配制試劑，制備酚的水飽和液等。4 3.蒸餾水器：1810B自動雙重純水蒸餾器，石英管加熱式，本器的一次及二次蒸餾均有保護裝置，使用安全可靠，熱繼電器當冷卻水突然中斷或缺水的情況下，即自動切斷電源。干簧繼電器控制二次蒸餾瓶內(nèi)的水位，其高度應(yīng)以在水位降低時能自動切斷電源為準，從而達到自動控制水位的目的。

該儀器主要用于制備雙蒸水和三蒸水。

4.離心機：TGL-16G臺式高速離心機，最大轉(zhuǎn)速20000rpm，主要用于核酸提取時蛋白質(zhì)的沉淀和有機相與水相的分層，PCR檢測的瞬時離心。

5.微量取液器：主要用于精確量取微量液體體積和核酸水相的轉(zhuǎn)移。

6.勻漿器：5ml、10ml玻璃勻漿器。主用于組織細胞的破碎。7.凝膠成像分析系統(tǒng) 主用于核酸樣品瓊脂糖凝膠和PCR電泳結(jié)果的紫外觀察和照像。8.PCR儀：PTC-200基因擴增儀 體外擴增核酸的儀器

9.蒸汽消毒鍋：用于實驗用試劑、器皿、用具等的滅菌清毒 有電加熱式、電爐加熱式兩種。

10.超凈臺：JJT-1300型潔凈工作臺，側(cè)流式。

原理：吸進氣經(jīng)過初、中級過濾皿（無紡布濾過）后，再通過風機經(jīng)高級過濾器（超細玻璃纖維濾紙制成）而形成潔凈空氣。主要是在局部空氣造成潔凈空氣環(huán)境，以使工作區(qū)域中的懸浮粒子及微生物控制在最低限度內(nèi)。

本臺操作壓為垂直層流壓，因此出風面與操作位置不應(yīng)放置多余的物品，以免妨礙氣流的正常流動，影響潔凈度，臺面板上的孔作為通風孔，使用時避免有液體或其他物品漏入空中，以免影響內(nèi)部構(gòu)件。風速可調(diào)。

使用：75%乙醇消毒2-3次，擺放好實驗用品。插上電源，紫外消毒30分鐘，啟動風機5m后關(guān)燈，關(guān)燈后10分鐘打開照明燈，即可使用。

11.電泳系統(tǒng)：

①電泳儀：HV-3000型高度三恒多用電泳儀（恒壓、恒流、恒功率）

②電泳槽：水平式兩種。

12．微波爐：主要用于瓊脂糖的快速溶解。

第三篇：分子生物學實驗室常用儀器設(shè)備簡介(精)

實驗一 分子生物學實驗室常用儀器設(shè)備簡介

實驗室主要儀器，設(shè)備的簡介及使用方法 微量移液器

微量移液器是連續(xù)可調(diào)的、計量和轉(zhuǎn)移液體的專用儀器，其裝有直接讀數(shù)容量計。

微量移液器有多種規(guī)格，在移液器量程范圍內(nèi)能連續(xù)調(diào)節(jié)讀數(shù)。移液器常見的四種規(guī)格分別是：

0.5～10μl(讀數(shù)窗顯示0.5～10.0,每轉(zhuǎn)1檔為0.1μl);10～100μl(讀數(shù)窗顯示10.0～100, 每轉(zhuǎn)1檔為1μl);20～200μl(讀數(shù)窗顯示20～200, 每轉(zhuǎn)1檔1μl);100～1000μl(讀數(shù)窗顯示100～1000, 每轉(zhuǎn)1檔為5μl).量液的操作步驟：

1． 將微量移液器裝上吸頭（不同規(guī)格的移液器用不同的吸頭）2． 將微量移液器按鈕輕輕壓至第一停點； 3． 垂直握持微量移液器，使吸嘴浸入液樣面下幾毫米，千萬不要將吸嘴直接插到液體底部； 4． 緩慢、平穩(wěn)地松開控制按鈕，吸上樣液。否則液體進入吸嘴太快，導致液體倒吸入移液器內(nèi)部，或吸入體積減少； 5． 等一秒鐘后將吸嘴提離液面

6．平穩(wěn)地把按鈕壓到第一停點，再把按鈕壓至第二停點以排出剩余液體； 7． 提起微量移液器，然后按吸嘴彈射器除去吸嘴。

量液操作注意問題：

1． 未裝吸嘴的微量移液器絕對不可用來吸取任何液體。

2． 一定要在允許量程范圍內(nèi)設(shè)定容量，千萬不要將讀數(shù)的調(diào)節(jié)超出其適用的刻度范圍，否則會造成損壞。

3． 不要橫放帶有殘余液體吸嘴的移液器。4． 不要用大量程的移液器移取小體積樣品。

5.移液器使用完后，將刻度調(diào)到最大刻度，收藏。低溫臺式高速離心機 離心機的分類

低速：每分鐘幾千轉(zhuǎn)

高速：每分鐘1 ~ 3萬轉(zhuǎn)

超速：每分鐘3萬轉(zhuǎn)以上

離心機的功能：

分離，純化 低速：細胞等大分子

高速：DNA，蛋白等

超速: 病毒，蛋白等，根據(jù)用途又可分為分析超速離心 機和制備超速離心機。

低溫分離技術(shù)是分子生物學研究中必不可少的手段 基因片段的分離、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物樣品的分離制備實驗中都離不開低溫離心技術(shù)

本實驗室所用離心機為臺式高速離心機（IBM），配有角式轉(zhuǎn)頭：24×1.5ml；極限轉(zhuǎn)速20000rpm

臺式高速離心機使用步驟

1、把離心機放置于平面桌或平面臺上，目測使之平衡，用手輕搖一下離心機，檢查離心機是否放置平衡。

2、打開門蓋，將離心管放入轉(zhuǎn)子內(nèi)，離心管必須成偶數(shù)對稱放入，且要事先平衡，完畢用手輕輕旋轉(zhuǎn)一下轉(zhuǎn)子體，使離心管架運轉(zhuǎn)靈活。

3、關(guān)上門蓋，注意一定要使門蓋鎖緊，完畢用手檢查門蓋是否關(guān)緊。

4、插上電源插座，按下電源開關(guān)（電源開關(guān)在離心機背面，電源座上方）。

5、設(shè)置轉(zhuǎn)子號、轉(zhuǎn)速、時間：

在停止狀態(tài)下時，用戶可以設(shè)置轉(zhuǎn)子號、轉(zhuǎn)速、時間，此時離心機處于設(shè)置狀態(tài)，停止燈亮、運行燈閃爍；按下啟動離心開始（常用，最高轉(zhuǎn)速為13000r/min，時間最長為20分鐘）；

注意：對應(yīng)的轉(zhuǎn)子一定要設(shè)置在相應(yīng)的轉(zhuǎn)速范圍內(nèi)，不可超速使用，否則對試管或轉(zhuǎn)子有損壞。

6、離心機時間倒計時到“0”時，離心機將自動停止，當轉(zhuǎn)子停轉(zhuǎn)后，打開門蓋取出離心管，關(guān)斷電源開關(guān)。注意事項：

1、離心機在運轉(zhuǎn)時，不得移動離心機，不要打開門蓋。

2、安放離心機的臺面應(yīng)堅實平整，四只橡膠機腳都應(yīng)與臺面接觸和均勻受力，以免產(chǎn)生振動。

3、離心前，離心管加液要平衡，若加液差異過大運轉(zhuǎn)時會產(chǎn)生大的振動，此時應(yīng)停機檢查，使加液符合要求，離心試管必須成偶數(shù)對稱放入。

4、若運轉(zhuǎn)時有離心試管破裂，會引起較大振動應(yīng)立即停機處理。

5、離心機徹底停止后，才可開蓋，取樣 恒溫氣浴搖床 使用及性能：

搖床（振蕩器）為實驗室的常規(guī)設(shè)備。廣泛用于對溫度和振蕩頻率有較高要求的細菌培養(yǎng)、發(fā)酵、雜交、生物化學反應(yīng)以及酶和組織研究等。實驗室常用的液體搖勻，微生物、細菌和細胞培養(yǎng)。

SHK-99-Ⅱ型臺式空氣恒溫搖床，采用微電腦控制系統(tǒng)，溫度范圍：室溫＋5℃～60℃，精度±0.5℃；時間范圍：1分鐘～99小時59分鐘；轉(zhuǎn)速范圍：60RPM～250RPM 操作程序：

1）樣品瓶牢固放入彈簧夾中

2）接通電源開關(guān)，儀器進入準備狀態(tài)

3）參數(shù)設(shè)定，（設(shè)定溫度、時間、轉(zhuǎn)速等參數(shù)）

4）按啟動鍵儀器開始工作，按暫停鍵可暫停托盤的旋轉(zhuǎn)；

5）按下控制面板的電源鍵兩秒，顯示屏顯示消失，關(guān)閉電源總開關(guān) 超凈工作臺 使用及性能：

超凈工作臺為分子生物學無菌操作提供可能，分為垂直送風和水平送風兩種。

超凈臺由三相電機作鼓風動力，功率145～260W左右，將空氣通過由特制的微孔泡沫塑料片層疊合組成的“超級濾清器”后吹送出來，形成連續(xù)不斷的無塵無菌的超凈空氣層流，即所謂“高效的特殊空氣”，它除去了大于0.3μm的塵埃、真菌和細菌孢子等等。超凈空氣的流速為24～30m/min，這已足夠防止附近空氣可能襲擾而引起的污染，這樣的流速也不會妨礙采用酒精燈或本生燈對器械等的灼燒消毒。工作人員就在這樣的無菌條件下操作，保持無菌材料在轉(zhuǎn)移接種過程中不受污染。

操作程序：

1）使用工作臺時，先經(jīng)過清潔液浸泡的紗布擦拭臺面，然后用消毒劑擦拭消毒。

2）接通電源，提前30分鐘打開紫外燈照射消毒，處理凈化工作區(qū)內(nèi)工作臺表面積累的微生物，15分鐘后，關(guān)閉紫外燈，開啟送風機。

3）工作臺面上，不要存放不必要的物品，以保持工作區(qū)內(nèi)的潔凈氣流不受干擾。

4）操作結(jié)束后，清理工作臺面，收集各廢棄物，關(guān)閉風機及照明開關(guān)，用清潔劑及消毒劑擦拭消毒。

5）最后開啟工作臺紫外燈，照射消毒30分鐘后，關(guān)閉紫外燈，切斷電源。

注意事項：

操作時一定注意關(guān)掉紫外，防止對實驗人員造成傷害 滅菌鍋

使用及性能：

細菌和細胞培養(yǎng)以及核酸等有關(guān)實驗所用的試劑、器皿及實驗用具，應(yīng)嚴格滅菌；應(yīng)將實驗器械，試劑等進行高壓消毒。對于經(jīng)過導入DNA重組分子的菌株，操作后必須進行嚴格的高壓消毒滅活處理 ；大批實驗物品、試劑、培養(yǎng)基等可以使用大型消毒器進行消毒。一些不能經(jīng)受高壓、高溫消毒的試劑可用濾器濾膜除菌，器皿可用紫外線照射、75%乙醇或0.1%的十二烷基硫酸鈉（SDS）浸泡消毒。所有的細胞培養(yǎng)、細菌培養(yǎng)的操作，都應(yīng)在紫外線消毒后的超凈工作臺中進行

操作程序：

1）開蓋：轉(zhuǎn)動手輪，使鍋蓋離開密封圈，添加蒸餾水剛沒至板上

2）通電：將控制面板上電源開關(guān)按至ON處，若水位低（LOW）紅燈亮

3）堆放物品：需包扎的滅菌物品，體積不超過200mm×100mm×100mm為宜，各包裝之間留有間隙，堆放在金屬框內(nèi)，這樣有利于蒸汽的穿透，提高滅菌效果，滅菌時間： 121℃，20min，；如為液體，液體必須裝在可耐高溫的玻璃器皿中，且不可裝滿，2/3即可，121℃，18-20min 3）密封高壓鍋：推橫梁入立柱內(nèi)，旋轉(zhuǎn)手輪，使鍋蓋下壓，充分壓緊

4）設(shè)定時間和溫度，開始滅菌

5）滅菌結(jié)束，所有東西放入干燥箱干燥，排盡水氣 注意事項：

如是手動的滅菌鍋，在滅菌過程中，應(yīng)注意排凈鍋內(nèi)冷空氣，鍋內(nèi)冷空氣如排放不凈，會影響滅菌效果，達不到徹底滅菌的目的。要等溫度降為“0”，才可打開滅菌鍋鍋蓋；

由于高壓蒸汽滅菌時，要使用溫度高達120℃、兩個大氣壓的過熱蒸汽，操作時，必須嚴格按照操作規(guī)程操作，否則容易發(fā)生意外事故。

PCR儀

PCR儀，也稱DNA熱循環(huán)儀、基因擴增儀，是使一對寡核苷酸引物結(jié)合到正負DNA鏈上的靶序列兩側(cè)，從而酶促合成拷貝數(shù)為百萬倍的靶序列DNA片段，它的每一循環(huán)包括在三種不同溫度進行DNA變性、引物復性、DNA聚合酶催化的延伸反應(yīng)的三個過程

PCR儀主要應(yīng)用于基礎(chǔ)研究和應(yīng)用研究等許多領(lǐng)域，如基因分析、序列分析、進化分析、臨床診斷、法醫(yī)學等等 操作步驟

1、開機：打開開關(guān)，視窗上顯示“SELF TEST”,顯示10秒中后，顯示RUN-ENTER菜單

準備執(zhí)行程序。

2、放入樣品管，關(guān)緊蓋子。

3、如果要運行已經(jīng)編好的程序，則直接按《Proceed》，用箭頭鍵選擇已儲存的程序，按《Proceed》，則屏幕顯示

按《Proceed》選擇ENABLE，則開始執(zhí)行程序。

4、如果要輸入新的程序，則在RUN-ENTER菜單上用箭頭鍵選擇ENTER PROGRAM,按《Proceed》，1）命名新的程序，最多8個字母，輸入后按《Proceed》確認(如何輸入字母、數(shù)字)。

2）輸入程序步驟：名字輸入后，確認，然后輸入相關(guān)程序

5、輸入完成的程序后，到RUN-ENTER菜單，選擇新程序，開始運行。

6、其它：用《pause》可以暫停一個運行的程序，再按一次繼續(xù)程序。

用《stop》或《Cancel》可停止運行的程序。

如何設(shè)置一個PCR程序：

一般分為8步：

1、預(yù)變性：可用94～95℃，2～10min,一般用 5min。

2、變性：一般用95℃，30s~2min,一般 45s~1min。

3、退火：溫度自定，30s~2min。

4、延伸：72℃，對于〈1kb=1min,每增加 1kb加1min。

5、循環(huán)數(shù)：一般25～35個循環(huán)(2,3,4步循環(huán)）。

6、最終延伸：72℃，5～15min。

7、保存：4℃，時間設(shè)為0。

8、END。

電泳儀

電泳技術(shù)是分子生物學研究不可缺少的重要分析手段。電泳一般分為自由界面電泳和區(qū)帶電泳兩大類，自由界面電泳不需支持物，如等電聚焦電泳、等速電泳、密度梯度電泳及顯微電泳等，這類電泳目前已很少使用。而區(qū)帶電泳則需用各種類型的物質(zhì)作為支持物，常用的支持物有濾紙、醋酸纖維薄膜、非凝膠性支持物、凝膠性支持物及硅膠-G薄層等，分子生物學領(lǐng)域中最常用的是瓊脂糖凝膠電泳

應(yīng)用電泳法可以對不同物質(zhì)進行定性或定量分析，或?qū)⒁欢ɑ旌衔镞M行組份分析或單個組份提取制備。

實驗室所用DYY-12型電腦三恒多用電泳儀（北京六一儀器廠）操作程序：

1． 首先用導線將電泳槽的兩個電極與電泳儀的直流輸出端聯(lián)接，注意極性不要接反。2．按電源開關(guān)，顯示屏出現(xiàn)“歡迎使用DYY-12型電腦三恒多用電泳儀…”等字樣后，同時系統(tǒng)初始化，蜂鳴4聲，設(shè)置常設(shè)置。屏幕轉(zhuǎn)成參數(shù)設(shè)置狀態(tài)，根據(jù)工作需要選擇穩(wěn)壓穩(wěn)流方式及電壓電流范圍。

3．確認各參數(shù)無誤后，按“啟動”鍵，啟動電泳儀輸出程序。在顯示屏狀態(tài)欄中顯示Start!并蜂鳴4聲，提醒操作者電泳儀將輸出高電壓，注意安全。之后逐漸將輸出電壓加至設(shè)置值。同時在狀態(tài)欄中顯示“Run”，并有兩個不斷閃爍的高壓符號，表示端口已有電壓輸出。在狀態(tài)欄最下方，顯示實際的工作時間（精確到秒）

4．電泳結(jié)束，儀器顯示：“END”，并連續(xù)蜂鳴提醒。此時按任一鍵可止鳴 注意事項

1． 電泳儀通電進入工作狀態(tài)后，禁止人體接觸電極、電泳物及其它可能帶電部分，也不能到電泳槽內(nèi)取放東西，如需要應(yīng)先斷電，以免觸電。同時要求儀器必須有良好接地端，以防漏電。

2． 儀器通電后，不要臨時增加或撥除輸出導線插頭，以防短路現(xiàn)象發(fā)生，雖然儀器內(nèi)部附設(shè)有保險絲，但短路現(xiàn)象仍有可能導致儀器損壞。

3． 由于不同介質(zhì)支持物的電阻值不同，電泳時所通過的電流量也不同，其泳動速度及泳至終點所需時間也不同，故不同介質(zhì)支持物的電泳不要同時在同一電泳儀上進行。4.使用過程中發(fā)現(xiàn)異常現(xiàn)象，如較大噪音、放電或異常氣味，須立即切斷電源，進行檢修，以免發(fā)生意外事故。

作業(yè)

列出分子生物學常用儀器的名稱，用途及操作時的注意事項。一，微量移液器

微量移液器是連續(xù)可調(diào)的、計量和轉(zhuǎn)移液體的專用儀器，其裝有直接讀數(shù)容量計。量液操作注意問題

1． 未裝吸嘴的微量移液器絕對不可用來吸取任何液體。

2． 一定要在允許量程范圍內(nèi)設(shè)定容量，千萬不要將讀數(shù)的調(diào)節(jié)超出其適用的刻度范圍，否則會造成損壞。

3． 不要橫放帶有殘余液體吸嘴的移液器。4． 不要用大量程的移液器移取小體積樣品。

5.移液器使用完后，將刻度調(diào)到最大刻度，收藏。二，離心機的功能：

分離，純化 注意事項：

1、離心機在運轉(zhuǎn)時，不得移動離心機，不要打開門蓋。

2、安放離心機的臺面應(yīng)堅實平整，四只橡膠機腳都應(yīng)與臺面接觸和均勻受力，以免產(chǎn)生振動。

3、離心前，離心管加液要平衡，若加液差異過大運轉(zhuǎn)時會產(chǎn)生大的振動，此時應(yīng)停機檢查，使加液符合要求，離心試管必須成偶數(shù)對稱放入。

4、若運轉(zhuǎn)時有離心試管破裂，會引起較大振動應(yīng)立即停機處理。

5、離心機徹底停止后，才可開蓋，取樣 三，恒溫氣浴搖床 使用及性能：

搖床（振蕩器）為實驗室的常規(guī)設(shè)備。廣泛用于對溫度和振蕩頻率有較高要求的細菌培養(yǎng)、發(fā)酵、雜交、生物化學反應(yīng)以及酶和組織研究等。實驗室常用的液體搖勻，微生物、細菌和細胞培養(yǎng)。四超凈工作臺 使用及性能：

超凈工作臺為分子生物學無菌操作提供可能，分為垂直送風和水平送風兩種。注意事項：

操作時一定注意關(guān)掉紫外，防止對實驗人員造成傷害 五．滅菌鍋 使用及性能：

細菌和細胞培養(yǎng)以及核酸等有關(guān)實驗所用的試劑、器皿及實驗用具，應(yīng)嚴格滅菌；應(yīng)將實驗器械，試劑等進行高壓消毒 注意事項：

如是手動的滅菌鍋，在滅菌過程中，應(yīng)注意排凈鍋內(nèi)冷空氣，鍋內(nèi)冷空氣如排放不凈，會影響滅菌效果，達不到徹底滅菌的目的。要等溫度降為“0”，才可打開滅菌鍋鍋蓋；

由于高壓蒸汽滅菌時，要使用溫度高達120℃、兩個大氣壓的過熱蒸汽，操作時，必須嚴格按照操作規(guī)程操作，否則容易發(fā)生意外事故。六．PCR儀

PCR儀，也稱DNA熱循環(huán)儀、基因擴增儀，是使一對寡核苷酸引物結(jié)合到正負DNA鏈上的靶序列兩側(cè)，從而酶促合成拷貝數(shù)為百萬倍的靶序列DNA片段，它的每一循環(huán)包括在三種不同溫度進行DNA變性、引物復性、DNA聚合酶催化的延伸反應(yīng)的三個過程

PCR儀主要應(yīng)用于基礎(chǔ)研究和應(yīng)用研究等許多領(lǐng)域，如基因分析、序列分析、進化分析、臨床診斷、法醫(yī)學等等 七．電泳儀

電泳技術(shù)是分子生物學研究不可缺少的重要分析手段。電泳一般分為自由界面電泳和區(qū)帶電泳兩大類，自由界面電泳不需支持物，如等電聚焦電泳、等速電泳、密度梯度電泳及顯微電泳等，這類電泳目前已很少使用。而區(qū)帶電泳則需用各種類型的物質(zhì)作為支持物，常用的支持物有濾紙、醋酸纖維薄膜、非凝膠性支持物、凝膠性支持物及硅膠-G薄層等，分子生物學領(lǐng)域中最常用的是瓊脂糖凝膠電泳

注意事項

1． 電泳儀通電進入工作狀態(tài)后，禁止人體接觸電極、電泳物及其它可能帶電部分，也不能到電泳槽內(nèi)取放東西，如需要應(yīng)先斷電，以免觸電。同時要求儀器必須有良好接地端，以防漏電。

2． 儀器通電后，不要臨時增加或撥除輸出導線插頭，以防短路現(xiàn)象發(fā)生，雖然儀器內(nèi)部附設(shè)有保險絲，但短路現(xiàn)象仍有可能導致儀器損壞。

3． 由于不同介質(zhì)支持物的電阻值不同，電泳時所通過的電流量也不同，其泳動速度及泳至終點所需時間也不同，故不同介質(zhì)支持物的電泳不要同時在同一電泳儀上進行。

4.使用過程中發(fā)現(xiàn)異常現(xiàn)象，如較大噪音、放電或異常氣味，須立即切斷電源，進行檢修，以免發(fā)生意外事故。

實驗二

瓊脂糖凝膠電泳的制備及核酸檢測

帶電荷的物質(zhì)在電場中的趨向運動稱為電泳。電泳的種類多，應(yīng)用非常廣泛，它已成為分子生物學技術(shù)中分離生物大分子的重要手段。瓊脂糖凝膠電泳由于其操作簡單、快速、靈敏等優(yōu)點，已成為分離和鑒定核酸的常用方法。實驗?zāi)康?/p>

掌握瓊脂糖凝膠電泳的原理;學習瓊脂糖凝膠電泳的操作。實驗原理

瓊脂糖是一種天然聚合長鏈狀分子，沸水中溶解，45℃開始形成多孔性剛性濾孔，凝膠孔徑的大小決定于瓊脂糖的濃度。

DNA分子在堿性環(huán)境中帶負電荷，在外加電場作用下向正極泳動。DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動時，有電荷效應(yīng)與分子篩效應(yīng)。不同DNA，其分子量大小及構(gòu)型不同，電泳時的泳動率就不同，從而分出不同的區(qū)帶。瓊脂糖凝膠電泳法分離DNA，主要是利用分子篩效應(yīng)，遷移速度與分子量的對數(shù)值成反比關(guān)系。

溴化乙錠（EB）為扁平狀分子，在紫外照射下發(fā)射熒光。EB可與DNA分子形成EB-DNA復合物，其發(fā)射的熒光強度較游離狀態(tài)EB發(fā)射的熒光強度大10倍以上，且熒光強度與DNA的含量成正比。用肉眼觀察，可檢測到5 ng以上的DNA。1．影響DNA在瓊脂糖凝膠中遷移速率的因素：

1)DNA分子大小

遷移速率U與logN成反比（N為堿基對數(shù)目）。分子大小相等，電荷基本相等（DNA結(jié)構(gòu)重復性）。分子越大，遷移越慢。等量的空間結(jié)構(gòu)緊密的電泳快（超螺旋>線性DNA）2)瓊脂糖濃度：不同的凝膠濃度，分辨不同范圍的DNA Agarose： 0.5%： 1-30 kb；

0.7%： 0.8-12 kb

1.2%： 0.4-7 kb；

1.5%： 0.2-3 kb.3)DNA構(gòu)象：一般遷移速率超螺旋環(huán)狀>線狀DNA>單鏈開環(huán)。

4)所加電壓：低電壓時，線狀DNA片段的遷移速率與所加電壓成正比。使分辨效果好，凝膠上所加電壓不應(yīng)超過5V/cm

5)堿基組成與溫度：一般影響不大4-30 ℃

6)嵌入染料的存在：降低線性DNA遷移率，(不提倡加在電泳液中)7)電泳緩沖液的組成及其離子強度影響DNA的遷移率，無離子存在時，核酸基本不泳動，離子強度過大產(chǎn)熱厲害，熔化凝膠并導致DNA變性，一般采用1×TAE，1×TBE，1×TPE（均含EDTA pH8.0）。

2．溴化乙錠（EB）為致癌劑，操作時應(yīng)戴手套，盡量減少臺面污染。

3．電泳指示劑：核酸電泳常用的指示劑有兩種，溴酚藍（bromophenol blue, Bb）呈藍紫色；二甲苯晴（xylene cyanol, Xc）呈藍色，它攜帶的電荷量比溴酚藍少，在凝膠中的遷移率比溴酚藍慢。儀器和試劑 儀器

微量移液器，電泳儀，電泳槽，微波爐

試劑

瓊脂糖：1.0%；

電泳緩沖液（50 × TAE 電泳緩沖液取Tris24.2g，冰醋酸5.7ml，0.25mol/L EDTA(pH8.0)20ml，加蒸餾水至100ml）

EB：5 μl / 100 ml TBE 電泳材料：標準分子量核酸（DL2000）操作步驟

（1）制膠（以20 mL為例）

a.稱取0.2 g 瓊脂糖，加入20 ml 的1XTAE緩沖液（pH 8.0），搖勻；

b.微波爐加熱，至瓊脂糖完全溶解（要防止過熱溢出三角瓶）；

c.將制膠板放入制膠槽中，插入適當?shù)氖嶙樱瑢⑷芙獾沫傊牵s50℃）加入2ul EB后，混均勻，倒入其中，直至厚度為4～6 mm（如有氣泡要把氣泡趕出），在室溫下冷卻凝固(約30~ 45 min)；

d.小心垂直向上拔出梳子,以保證點樣孔完好,將膠板置于電泳槽中。（2）點樣

用微量移液器將5 μl含藍色染液的 DL2000 加入點樣孔下部。（3）電泳

打開電源開關(guān)，調(diào)節(jié)電壓至3~5 V/cm(約100 V)，可見到溴酚藍條帶由負極向正極移動，約30-40分鐘后即可觀察結(jié)果。（4）觀察

將電泳好的膠置于紫外透射檢測儀上，打開紫外燈，可見到橙紅色核酸條帶，根據(jù)條帶粗細，可粗略估計該樣品DNA的濃度。如同時有已知分子量的標準DNA進行電泳，則可通過線性DNA條帶的相對位置初步估計樣品的分子量。實驗結(jié)果及分析

實驗結(jié)果不是很理想，可能的原因是小組間的點樣間隔時間太長以至于樣品擴散造成結(jié)果的不理想另一個人原因是點樣沒有到位造成的，第二種原因的可能性大一點。作業(yè)

做瓊脂糖凝膠電泳應(yīng)注意哪些問題。

答：1，溴化乙錠（EB）為致癌劑，操作時應(yīng)戴手套，盡量減少臺面污染 制瓊脂糖凝膠時在特定的操作區(qū)操作。

2，微波爐加熱使瓊脂完全溶解要防止過熱溢出三角瓶，要在瓶上加一張紙。

3，制膠時插入適當?shù)氖嶙樱敪傊抢鋮s凝固后，要小心垂直向上拔出梳子，小心樣孔被弄破

4，點樣時，要把樣品點入點樣孔下部，電泳時條帶平整明亮。5，要正確使用微量移液器，等器材視點用后的結(jié)果不致出現(xiàn)錯誤。

第四篇：實驗一 分子生物學實驗室常用儀器設(shè)備簡介.

實驗一 分子生物學實驗室常用儀器設(shè)備簡介

一、實驗?zāi)康?/p>

熟悉分子生物學實驗室常用儀器并熟練使用

二、實驗原理

1、恒溫氣浴搖床：用于對溫度和振蕩頻率有較高要求的細菌培養(yǎng)，發(fā)酵，雜交，生化反應(yīng)及酶和組織研究等。

2、超凈工作臺：用于分子生物學無菌操作。

3、低溫臺式高速離心機：用于分離純化DNA和蛋白質(zhì)等，如基因片段的分離，蛋白酶的沉淀和回收等。

4、微量移液管：是連續(xù)可調(diào)的，計量和轉(zhuǎn)移液體的專用儀器，其裝有直接讀數(shù)容量計。有多種規(guī)格：①0.5-10μL②10-100μL③20-200μL④100-1000μL。

5、電泳儀：用于確定大分子物質(zhì)的分子量以及鑒定物種親緣關(guān)系的儀器。

6、PCR儀：用于目的基因的擴增，是一對寡糖核苷酸引物結(jié)合到正負DNA鏈上的靶序列兩側(cè)，從而酶促合成拷貝數(shù)為百萬倍的靶序列DNA片段。主要用于基礎(chǔ)研究和應(yīng)用研究等領(lǐng)域。

7、滅菌鍋：用于細菌和細胞培養(yǎng)及核酸等有關(guān)實驗使用的試劑，器皿及實驗用具的嚴格滅菌。

三、實驗儀器

恒溫氣浴搖床、超凈工作臺、低溫臺式高速離心機、微量移液管、滅菌鍋、PCR儀、電泳儀。

四、實驗步驟

（一）、恒溫氣浴要穿的使用：

1、樣品瓶牢固放入彈簧夾中

2、接通電源開關(guān)，儀器進入準備狀態(tài)

3、參數(shù)設(shè)定，（設(shè)定溫度、時間、轉(zhuǎn)速等參數(shù)）

4、按啟動鍵儀器開始工作，按暫停鍵可暫停托盤的旋轉(zhuǎn)；

5、按電源鍵，顯示屏顯示消失，關(guān)閉電源總開關(guān)

（二）、超凈工作臺的使用

1、使用工作臺時，先經(jīng)過清潔液浸泡的紗布擦拭臺面，然后用消毒劑擦拭消毒。

2、接通電源，提前30分鐘打開紫外燈照射消毒，處理凈化工作區(qū)內(nèi)工作臺表面積累的微生物，15分鐘后，關(guān)閉紫外燈，開啟送風機。

3、工作臺面上，不要存放不必要的物品，以保持工作區(qū)內(nèi)的潔凈氣流不受干擾。

4、操作結(jié)束后，清理工作臺面，收集各廢棄物，關(guān)閉風機及照明開關(guān)，用清潔劑及消毒劑擦拭消毒。

5、最后開啟工作臺紫外燈，照射消毒30分鐘后，關(guān)閉紫外燈，切斷電源。

（三）、低溫臺式高速離心機的使用

1、把離心機放置于平面桌或平面臺上，目測使之平衡，用手輕搖一下離心機，檢查離心機是否放置平衡。

2、打開門蓋，將離心管放入轉(zhuǎn)子內(nèi)，離心管必須成偶數(shù)對稱放入，且要事先平衡，完畢用手輕輕旋轉(zhuǎn)一下轉(zhuǎn)子體，使離心管架運轉(zhuǎn)靈活。

3、關(guān)上門蓋，注意一定要使門蓋鎖緊，完畢用手檢查門蓋是否關(guān)緊。

4、插上電源插座，按下電源開關(guān)（電源開關(guān)在離心機背面，電源座上方）。

5、設(shè)置轉(zhuǎn)子號、轉(zhuǎn)速、時間：

在停止狀態(tài)下時，用戶可以設(shè)置轉(zhuǎn)子號、轉(zhuǎn)速、時間，此時離心機處于設(shè)置狀態(tài)，停止燈亮、運行燈閃爍；按下啟動離心開始

（常用，最高轉(zhuǎn)速為13000r/min，時間最長為20分鐘）；

注意：對應(yīng)的轉(zhuǎn)子一定要設(shè)置在相應(yīng)的轉(zhuǎn)速范圍內(nèi)，不可超速使用，否則對試管或轉(zhuǎn)子有損壞。

6、離心機時間倒計時到“0”時，離心機將自動停止，當轉(zhuǎn)子停轉(zhuǎn)后，打開門蓋取出離心管，關(guān)斷電源開關(guān)。

（四）、微量移液管的使用

1． 將微量移液器裝上吸頭（不同規(guī)格的移液器用不同的吸頭）2． 將微量移液器按鈕輕輕壓至第一停點；

3． 垂直握持微量移液器，使吸嘴浸入液樣面下幾毫米，千萬不要將吸嘴直接插到液體底部；

4． 緩慢、平穩(wěn)地松開控制按鈕，吸上樣液。否則液體進入吸嘴太快，導致液體倒吸入移液器內(nèi)部，或吸入體積減少； 5． 等一秒鐘后將吸嘴提離液面

6．平穩(wěn)地把按鈕壓到第一停點，再把按鈕壓至第二停點以排出剩余液體； 7． 提起微量移液器，然后按吸嘴彈射器除去吸嘴。

（五）、PCR的使用

1、開機：打開開關(guān)，視窗上顯示“SELF TEST”。

2、放入樣品管，關(guān)緊蓋子。

3、如果要運行已經(jīng)編好的程序，則直接按《Proceed》，用箭頭鍵選擇已儲存的程序，按《Proceed》，則開始執(zhí)行程序。

4、如果要輸入新的程序，則在RUN-ENTER菜單上用箭頭鍵選擇ENTER PROGRAM,按《Proceed》，1）命名新的程序，最多8個字母，輸入后按《Proceed》確認(如何輸入字母、數(shù)字)。2）輸入程序步驟：名字輸入后，確認，然后輸入相關(guān)程序

5、輸入完成的程序后，到RUN-ENTER菜單，選擇新程序，開始運行。

6、其它：用《pause》可以暫停一個運行的程序，再按一次繼續(xù)程序。用《stop》或《Cancel》可停止運行的程序。

（六）、電泳儀的使用

1． 首先用導線將電泳槽的兩個電極與電泳儀的直流輸出端聯(lián)接，注意極性不要接反。2．按電源開關(guān)，顯示屏出現(xiàn)“歡迎使用DYY-12型電腦三恒多用電泳儀…”等字樣后，同時系統(tǒng)初始化，蜂鳴4聲，設(shè)置常設(shè)置。屏幕轉(zhuǎn)成參數(shù)設(shè)置狀態(tài)，根據(jù)工作需要選擇穩(wěn)壓穩(wěn)流方式及電壓電流范圍。3．確認各參數(shù)無誤后，按“啟動”鍵，啟動電泳儀輸出程序。在顯示屏狀態(tài)欄中顯示Start!并蜂鳴4聲，提醒操作者電泳儀將輸出高電壓，注意安全。之后逐漸將輸出電壓加至設(shè)置值。同時在狀態(tài)欄中顯示“Run”，并有兩個不斷閃爍的高壓符號，表示端口已有電壓輸出。在狀態(tài)欄最下方，顯示實際的工作時間（精確到秒）

4．電泳結(jié)束，儀器顯示：“END”，并連續(xù)蜂鳴提醒。此時按任一鍵可止鳴

（七）、高壓滅菌鍋

1、開蓋：轉(zhuǎn)動手輪，使鍋蓋離開密封圈，添加蒸餾水剛沒至板上

2、通電：將控制面板上電源開關(guān)按至ON處，若水位低（LOW）紅燈亮

3、堆放物品：需包扎的滅菌物品，體積不超過200mm×100mm×100mm為宜，各包裝之間留有間隙，堆放在金屬框內(nèi)，這樣有利 于蒸汽的穿透，提高滅菌效果，滅菌時間： 121℃，20min，；如為液體，液體必須裝在可耐高溫的玻璃器皿中，且不可裝滿，2/3即可，121℃，18-20min

4、密封高壓鍋：推橫梁入立柱內(nèi)，旋轉(zhuǎn)手輪，使鍋蓋下壓，充分壓緊

5、設(shè)定時間和溫度，開始滅菌

6、滅菌結(jié)束，所有東西放入干燥箱干燥，排盡水氣

五、思考題

1、列出分子生物學常用儀器的名稱，用途及操作時的注意事項。

答：①恒溫氣浴搖床：常用于液體搖勻以培養(yǎng)微生物、細菌和細胞等。注意要依據(jù)不同的用途設(shè)置不同的參數(shù)。②超凈工作臺：常用于為微生物學實驗提供無菌操作環(huán)境。注意操作時關(guān)掉紫外燈，避免給人類帶來傷害。③低溫臺式高速離心機：常用于分離純化蛋白、病毒、細胞等。使用時不能隨便移動離心機或打開蓋子；離心機運行時要處于鎖定狀態(tài)；離心管的放置要處于平衡狀態(tài)。④微量移液管：用于計量和轉(zhuǎn)移微量液體的專用儀器。操作時注意避免槍頭的污染；調(diào)節(jié)刻度時不宜超過最大量程；使用完后將刻度調(diào)到最大收藏。⑤電泳儀：可對不同物質(zhì)進行定性或定量分析，或?qū)⒁欢ɑ旌衔镞M行組分分析或單個組分的提取制備。操作時不可把導線極性接反；當電泳儀進入工作狀態(tài)后，避免人體與其各部分的接觸，不同介質(zhì)支持物的電泳不要同時在同一電泳儀上進行；若使用時出現(xiàn)異常，要立刻切斷電源。⑥PCR儀：用于擴增DNA片斷。操作時應(yīng)注意蓋子要蓋緊，按正確步驟進行。⑦高壓高溫滅菌鍋：用于殺菌消毒。使用時應(yīng)嚴格按照規(guī)程操作，避免發(fā)生安全事故。

實驗二 瓊脂糖凝膠電泳的制備及核酸檢測

一.實驗?zāi)康?/p>

1、掌握瓊脂糖凝膠電泳的原理;

2、學習瓊脂糖凝膠電泳的操作。二.實驗原理

瓊脂糖是一種天然聚合長鏈狀分子，沸水中溶解，45℃開始形成多孔性剛性濾孔，凝膠孔徑的大小決定于瓊脂糖的濃度。

DNA分子在堿性環(huán)境中帶負電荷，在外加電場作用下向正極泳動。DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動時，有電荷效應(yīng)與分子篩效應(yīng)。不同DNA，其分子量大小及構(gòu)型不同，電泳時的泳動率就不同，從而分出不同的區(qū)帶。瓊脂糖凝膠電泳法分離DNA，主要是利用分子篩效應(yīng)，遷移速度與分子量的對數(shù)值成反比關(guān)系。溴化乙錠（EB）未扁平狀分子，在紫外照射下發(fā)射熒光。EB可與DNA分子形成EB-DNA復合物，其發(fā)射的熒光強度較游離狀態(tài)EB發(fā)射的熒光強度大10倍以上，且熒光強度與DNA含量成正比。

三、儀器和試劑

儀器： 微量移液器，電泳儀，電泳槽，微波爐

試劑： 瓊脂糖：1.0%；電泳緩沖液（50 × TAE 電泳緩沖液取Tris24.2g，冰醋酸5.7ml，0.25mol/L EDTA(pH8.0)20ml，加蒸餾水至100ml）EB：5 μl / 100 ml TBE 電泳材料：標準分子量核酸（DL2000）四.操作步驟

（1）制膠（以20 mL為例）

a.稱取0.2 g 瓊脂糖，加入20 ml 的1XTAE緩沖液（pH 8.0），搖勻； b.微波爐加熱，至瓊脂糖完全溶解（要防止過熱溢出三角瓶）；

c.將制膠板放入制膠槽中，插入適當?shù)氖嶙樱瑢⑷芙獾沫傊牵s50℃）加入2ul EB后，混均勻，倒入其中，直至厚度為4～6 mm（如有氣泡要把氣泡趕出），在室溫下冷卻凝固(約30~ 45 min)；

d.小心垂直向上拔出梳子,以保證點樣孔完好,將膠板置于電泳槽中。（2）點樣

用微量移液器將5 μl含藍色染液的 DL2000 加入點樣孔下部。（3）電泳

打開電源開關(guān)，調(diào)節(jié)電壓至3~5 V/cm(約100 V)，可見到溴酚藍條帶由負極向正極移動，約30-40分鐘后即可觀察結(jié)果。（4）觀察

將電泳好的膠置于紫外透射檢測儀上，打開紫外燈，可見到橙紅色核酸條帶，根據(jù)條帶粗細，可粗略估計該樣品DNA的濃度。如同時有已知分子量的標準DNA進行電泳，則可通過線性DNA條帶的相對位置初步估計樣品的分子量。

五、實驗結(jié)果

點樣時效果較好的照片點出的白色熒光線比較亮，條帶粗細均勻；條帶沒有出現(xiàn)兩端粗中間細的情況

六、思考題

1、做瓊脂糖凝膠電泳應(yīng)注意哪些問題。

答：①EB為強致癌劑，使用時一定要戴手套，避免造成傷害。EB廢液要進行正確的處理。②制膠過程中要注意細節(jié)，用微波爐加熱時要分三步，每步只加熱十秒，且要用不戴手套的那只手開微波爐，以免污染。③拔梳子時要垂直向上拔出，以防破壞點樣孔。④點樣時要小心，既要將樣品點到樣孔里，又不至于將點樣孔戳破。⑤接電源時不可把正負極接反。

第五篇：分子生物學實驗室

分子生物學實驗室（P2設(shè)計）

1.功能：進行分

組織培養(yǎng)前實驗室設(shè)計

標簽：產(chǎn)經(jīng)/公司實驗室 微生物 潔凈室 設(shè)計說明 通風柜 實驗臺 家俱

組織培養(yǎng)前實驗室設(shè)計

在進行植物組織培養(yǎng)工作之前，首先應(yīng)對工作中需要哪些最基本的設(shè)備條件有個全面的了解，以便因地制宜地利用現(xiàn)有房屋，或新建、改建實驗室。實驗室的大小取決于工作的目的和規(guī)模。以工廠化生產(chǎn)為目的，實驗室規(guī)模太小，則會限制生產(chǎn)，影響效率。

在設(shè)計組織培養(yǎng)實驗室時，應(yīng)按組織培養(yǎng)程序來沒計，避免某些環(huán)節(jié)倒排，引起日后工作混亂。植物組織培養(yǎng)是在嚴格無菌的條件下進行的。要做到無菌的條件，需要一定的設(shè)備、器材和用具，同時還需要人工控制溫度、光照、濕度等培養(yǎng)條件。

實驗室設(shè)計原則：保證無菌操作，達到工作方便，防止污染。

實驗室組成：化學實驗室、洗滌菌室、無菌操作室（接種室）、培養(yǎng)室、細胞學實驗室、其他小型儀器設(shè)備。

1)化學實驗室（準備室）：完成所使用的各種藥品的貯備、稱量、溶解、配制、培養(yǎng)基分裝等。主要設(shè)備：藥品柜、防塵櫥（放置培養(yǎng)容器）、冰箱、天平、蒸餾水器、酸度計及常用的培養(yǎng)基配制用玻璃儀器.2)洗滌、滅菌室：完成各種器具的洗滌、干燥、保存、培養(yǎng)基的滅菌等。

主要設(shè)備：水池、操作臺、高壓滅菌鍋、干燥滅菌器（如烘箱）等。

3)無菌操作室（接種室）：主要用于植物材料的消毒、接種、培養(yǎng)物的轉(zhuǎn)移、試管苗的繼代、原生質(zhì)體的制備以及一切需要進行無菌操作的技術(shù)程序。

主要設(shè)備：紫外光源、超凈工作臺、消毒器、酒精燈、接種器械（接種鑷子、剪刀、解剖刀、接種針）等。

接種室宜小不宜大，一般7～8平米，要求地面、天花板及四壁盡可能密閉光滑，易于清潔和消毒。配置拉動門，以減少開關(guān)門時的空氣擾動。接種室要求干爽安靜，清潔明亮。在適當位置吊裝1～2盞紫外線滅菌燈，用以照射滅菌。最好安裝一小型空調(diào)，使室溫可控，這樣可使門窗緊閉，減少與外界空氣對流。接種室應(yīng)設(shè)有緩沖問，面積1m2為宜。進入無菌操作室前在此更衣?lián)Q鞋，以減少進出時帶入接種室雜菌。緩沖間最好也安一盞紫外線滅菌燈，用以照射滅菌。

4)培養(yǎng)室：培養(yǎng)室是將接種的材料進行培養(yǎng)生長的場所。培養(yǎng)室的大小可根據(jù)需要培養(yǎng)架的大小、數(shù)目、及其他附屬設(shè)備而定。其設(shè)計以充分利用空間和節(jié)省能源為原則。