第一篇：分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室常用試劑配方-ProbeGene2015(精)

分子生物學(xué)常用試劑配制與保存 一.常用貯液與溶液 1mol/L亞精胺(Spermidine : 溶解 2.55g 亞精胺于足量的水中,使終體積為 10ml。分裝成小份貯存 于-20℃。

1mol/L精胺(Spermine : 溶解 3.48g 精胺于足量的水中,使終體積為 10ml。分裝成小份貯存于-20℃。10mol/L乙酸胺(ammonium acetate: 將 77.1g 乙酸胺溶解于水中,加水定容至 1L 后,用 0.22um 孔徑的濾 膜過(guò)濾除菌。

10mg/ml牛血清蛋白(BSA :加 100mg 的牛血清蛋白(組分 V 或分子 生物學(xué)試劑級(jí),無(wú) DNA 酶于 9.5ml 水中(為減少變性, 須將蛋白加入水中,而不是將水加入蛋白,蓋好蓋后,輕輕搖動(dòng),直 至牛血清蛋白完全溶解為止。不要渦旋混合。加水定容到 10ml ,然后 分裝成小份貯存于-20℃。

8mol/L乙酸鉀(potassium acetate: 溶解 78.5g 乙酸鉀于足量的水中,加水定容到 100ml。3mol/L乙酸鈉(sodium acetate:

溶解 40.8g 的三水乙酸鈉于約 90ml 水中, 用冰乙酸調(diào)溶液的 pH 至 5.2, 再加水定容到 100ml。

0.5mol/L EDTA: 配制等摩爾的 Na2EDTA 和 NaOH 溶液(0.5mol/L , 混合后形成 EDTA 的三鈉鹽。或稱(chēng)取 186.1g 的 Na2EDTA·2H2O和 20g 的 NaOH ,并溶 于水中,定容至 1L。

1mol/L HCl: 加 8.6ml 的濃鹽酸至 91.4ml 的水中。25mg/ml IPTG: 溶解 250mg 的 IPTG(異丙基硫代-β-D-半乳糖苷 于 10ml 水中, 分成 小份貯存于-20℃。

100mmol/L PMSF: 溶解 174mg 的 PMSF(苯甲基磺酰氟 于足量的異丙醇中, 定容到 10ml。分成小份并用鋁箔將裝液管包裹

或貯存于-20℃。

20mg/ml蛋白酶 K(proteinase K: 將 200mg 的蛋白酶 L 加入到 9.5ml 水中,輕輕搖動(dòng),直至蛋白酶 K 完 全溶解。不要渦旋混合。加水定容到 10ml ,然后分裝成小份貯存于-20℃。10mg/ml Rnase A(無(wú) DNase : 溶解 10mg 的胰蛋白 RNA 酶于 1ml 的 10mmol/L的乙酸鈉水溶液中(pH 5.0。溶解后于水浴中煮沸 15min , 使 DNA 酶失活。用 1mol/L的 Tris-HCl 調(diào) pH 至 7.5,于-20℃ 貯存。(配制過(guò)程中要戴手套

10N 氫氧化鈉(NaOH : 溶解 400g 氫氧化鈉顆粒于約 0.9L 水的燒杯中(磁力攪拌器攪拌 , 氫 氧化鈉完全溶解后用水定容至 1L。

100%三氯乙酸(TCA : 在裝有 500gTCA 的試劑瓶中加入 100ml 水, 用磁力攪拌器攪拌直至完 全溶解。(稀釋液應(yīng)在臨用前配制

2.5%X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷: 溶解 25mg 的 X-gal 于 1ml 的二甲基甲酰胺(DMF , 用鋁箔包裹裝液 管,貯存于-20℃。

10%SDS(十二烷基硫酸鈉: 稱(chēng)取 100gSDS 慢慢轉(zhuǎn)移到約含 0.9L 的水的燒杯中,用磁力攪拌器攪 拌直至完全溶解。用水定容至 1L。

2mol/L山梨(糖醇(Sorbitol : 溶解 36.4g 山梨(糖醇于足量水中使終體積為 100ml。DEPC(焦碳酸二乙酯處理水: 加 100ul DEPC 于 100ml 水中, 使 DEPC 的體積分?jǐn)?shù)為 0.1%。在 37℃ 溫浴至少 12h ,然后在 15 psi 條件下高壓滅菌 20min ,以使殘余的 DEPC 失活。DEPC 會(huì)與胺起反應(yīng),不可用 DEPC 處理 Tris 緩沖液。甲酰胺(deionized formamide: 直接購(gòu)買(mǎi)或加 Dowex XG8 混合樹(shù)脂于裝有甲酰胺的玻璃燒杯中, 用磁 力攪拌器輕輕攪拌 1h ,可去除甲酰胺中的離子。經(jīng) Whatman 1號(hào)濾紙 過(guò)濾除去樹(shù)脂后分成小份,充氮?dú)庥?80℃ 貯存(防止氧化。

苯酚 /氯仿 /異戊醇: 將 Tris-HCl平衡苯酚與等體積的氯仿 /異戊醇(24:1均勻混合后,移 入棕色玻璃瓶中 4℃ 保存。

PBS Buffer: 組份 :137 mM NaCl, 2.7mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4配置方法(1L: 1.稱(chēng)量下列試劑,置于 1L 燒杯中。NaCl 8 g KCl 0.2g Na2HPO4 1.42 g KH2PO4 0.27g 2.向燒杯中加入約 800 mL的去離子水,充分?jǐn)嚢枞芙狻?/p>

3.滴加 HCl 將 pH 值調(diào)節(jié)至 7.4,然后加入去離子水將溶液定容至 1L。4.高溫高壓滅菌后,室溫保存。

注意:上述 PBS Buffer中無(wú)二價(jià)陽(yáng)離子, 如需要, 可在配方中補(bǔ)充 1mM CaCl2和 0.5 mM MgCl2。

磷酸緩沖液(phosphate buffer:

按照下表所給定的體積, 混合 1 mol/L 的磷酸二氫鈉(單堿 和 1mol/L 磷酸氫二鈉(雙堿 貯液, 獲得所需 pH 的磷酸緩沖液。配制 1 mol/L 的 磷酸二氫鈉(NaH2PO4·H2O貯液:溶解 138g 于足量水中,使終體 積為 1L;1mol/L 磷酸氫二鈉(Na2HPO4貯液 :溶解 142g 于足量水中 使終體積為 1L。

1mol/L 磷酸二氫鈉(ml 1mol/L 磷酸氫二鈉(ml 最終 pH 值 77 850 815 775 735 685 625 565 510 450 390 330 280 123 150 185 225 265 315 375 435 490 550 610 670 720 6.0 6.1 6.2 6.3 6.4 6.5 6.6 6.7 6.8 6.9

7.0 7.1 7.2 Tris 緩沖液(Tris-HCl buffer: 將 121g 的 Tris 堿溶解于約 0.9L 水中,再根據(jù)所要求的 pH(25℃下 加一定量的濃鹽酸(11.6N ,用水調(diào)整終體積至 1L。

濃鹽酸的體積(ml pH 8.6 14 21 28.5 38 46 56 66 71.3 76 9.0 8.8 8.6 8.4 8.2 8.0 7.8 7.6 7.4 7.2 TE(用于溶解和貯存 DNA 成分及終濃度 配制 100ml 溶液各成分的用量 10mmol/L Tris-HCl 1mmol/L EDTA

水

1ml 1mol/L Tris-HCl(pH7.4-8.0, 25℃ 200ul 0.5 mol/L EDTA(pH 8.0 98.8ml 二.電泳緩沖液、染料和凝膠加樣液 10mg/ml的溴化乙錠(ethidium bromide: 小心稱(chēng)取 1g 溴化乙錠,轉(zhuǎn)移到廣口瓶中,加 100ml 水,用磁力攪拌器 攪拌直到溶解,分裝成小份 4℃避光保存。

電泳緩沖液

50×Tris-乙酸(TAE 緩沖液

成分及終濃度 配制 1L 溶液各成分的用量 2mol/L Tris堿 1mol/L 乙酸 100 mmol/L EDTA 水 242g 57.1 ml的冰乙酸(17.4 mol/L 200ml 的 0.5 mol/L EDTA(pH 8.0 補(bǔ)足 1L 5×Tris-硼酸(TBE 緩沖液

成分及終濃度 配制 1L 溶液各成分的用量 445 mmol/L Tris堿

445 mmol/L 硼酸鹽 10 mmol/L EDTA 水 54g 27.5g 硼酸 ml的 0.5 mol/L EDTA(pH 8.0 補(bǔ)足 1L 6×DNA Loading buffer蔗糖凝膠上樣液(室溫貯存 成分及終濃度 配制 10ml 溶液各成分用量 0.15%溴酚藍(lán) 0.15%二甲苯青 FF 5 mmol/L EDTA 40%聚蔗糖 水

1.5ml 1%溴酚藍(lán) 1.5ml 1%二甲苯青 FF 100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0 4g 補(bǔ)足到 10ml

10×DNA Loading buffer(終止反應(yīng) 十二烷基硫酸鈉 /甘油凝膠上樣液(室溫貯存 成分及終濃度 配制 10ml 溶液各成分用量

0.2%溴酚藍(lán) 0.2%二甲苯青 FF 200 mmol/L EDTA 0.1%SDS 50%甘油 水 20mg 20mg 4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0 100ul 10% SDS 5ml 補(bǔ)足到 10ml 30%(W/V Acrylamide 組份濃度 30%(W/V Acrylamide 0.05% 配制量 1L 配置方法 : 1.稱(chēng)量下列試劑,置于 1L 燒杯中 Acrylamide 290g BIS 10g 2.向燒杯中加入約 600mL 的去離子水,充分?jǐn)嚢枞芙?3.加入去離子水將溶液定容至 1L ,用 0.45μm 濾膜濾去雜質(zhì)。4.于棕色瓶中 4℃ 保存。

注意:丙稀銑胺具有很強(qiáng)的神經(jīng)毒性,并可通過(guò)皮膚吸收,其作用有積 累性,配制時(shí)應(yīng)戴手套等。聚丙烯酰胺無(wú)毒,但也應(yīng)謹(jǐn)慎操作,因?yàn)橛?可能含有少量的未聚合成份。

40%(W/V Acrylamide 組份濃度 40%(W/V Acrylamide 0.05% 配制量 1L 配置方法

1.稱(chēng)量下列試劑,置于 1L 燒杯中 Acrylamide 380g BIS 20g 2.向燒杯中加入約 600mL 的去離子水,充分?jǐn)嚢枞芙?3.加入去離子水將溶液定容至 1L ,用 0.45μm 濾膜濾去雜質(zhì)。4.于棕色瓶中 4℃ 保存。

注意:丙稀銑胺具有很強(qiáng)的神經(jīng)毒性,并可通過(guò)皮膚吸收, 其作用有 積累性,配制時(shí)應(yīng)戴手套等。聚丙烯酰胺無(wú) 毒,但也應(yīng)謹(jǐn)慎操作,因 為有可能含有少量的未聚合成份。

10%(W/V過(guò)硫酸銨

組份濃度 10%(W/V過(guò)硫酸銨 配制量 10mL 配置方法 1.稱(chēng)取 1g 過(guò)硫酸銨。

2.加入 10mL 的去離子水后攪拌溶解。3.貯存于 4℃。

注意:10%過(guò)硫酸胺溶液在 4℃ 保存時(shí)間可使用 2周左右, 超過(guò)期限 會(huì)失去催化作用。

考馬斯亮藍(lán) R-250染色液

組份濃度 0.1%(W/V考馬斯亮藍(lán) R-250, 25%(V/V異丙醇, 10 %(V/V冰醋酸 配制量 1L 配置方法

1.稱(chēng)取 1g 考馬斯亮藍(lán) R-250, 置于 1L 燒杯中。2.量取 250mL 的異丙醇加入上述燒杯中,攪拌溶解。3.加入 100mL 的冰乙醋酸,均勻攪拌。4.加入 650mL 的去離子水,均勻攪拌。5.用濾紙出去顆粒物質(zhì)后,室溫保存。考馬斯亮藍(lán)染色脫色液

組份濃度 10%(V/V醋酸, 5%(V/V乙醇 配制量 1L 配置方法

1.量取下列溶液,置于 1L 燒杯中。醋酸 100mL

乙醇 50mL dH2O 850mL 2.充分混合后使用。顯影液

組份濃度 0.005%(V/V檸檬酸, 0.02%(V/V甲醛(SDS-PAGE銀 氨染色用 配制量 1L 配置方法

1.稱(chēng)取下列試劑,置于 1L 試劑瓶中。檸檬酸 50mg 甲醛 0.2mL 2.加入 1L 去離子水后,搖動(dòng)混合后溶解。3.室溫保存。5×Tris-GlycineBuffer 組份濃度 0.125M Tris , 1.25M Glycine, 0.5%(w/v SDS(SDS-PAGE 電泳緩沖液 配制量 1L 配置方法

1.稱(chēng)取下列試劑,置于 1L 燒杯中。Tris 15.1g

Glycine 94g SDS 5.0g 2.加入約 800mL 的去離子水,攪拌溶解。3.加去離子水將溶液定容至 1L 后,室溫保存。三.常用培養(yǎng)基 LB 培養(yǎng)基

將下列組分溶解在 0.9L 水中: 蛋白胨 10g 酵母提取物 5g 氯化鈉 10g 如果需要用 1N NaOH(~1ml 調(diào)整 pH 至 7.0,再補(bǔ)足水至 1L。注:瓊脂平板需添加瓊脂粉 12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉 7g/L。

SOB 培養(yǎng)基

將下列組分溶解在 0.9L 水中: 蛋白胨 20g 酵母提取物 5g 氯化鈉 0.5g 1 mol/L 氯化鉀 2.5ml 用水補(bǔ)足體積到 1L。分成 100ml 的小份,高壓滅菌。培養(yǎng)基冷卻到室 溫后,再在每 100ml 的小份中加 1ml 滅過(guò)菌的 1mol/L氯化鎂。

SOC 培養(yǎng)基

成分、方法同 SOB 培養(yǎng)基的配制,只是在培養(yǎng)基冷卻到室溫后,除了 在每 100ml 的小份中加 1ml 滅過(guò)菌的 1mol/L氯化鎂外, 再加 2ml 滅菌 的 1mol/L葡萄糖(18g 葡萄糖溶于足夠水中,再用水補(bǔ)足到 100ml , 用 0.22um 的濾膜過(guò)濾除菌。

TB 培養(yǎng)基

將下列組分溶解在 0.9L 水中: 蛋白胨 12g 酵母提取物 24g 甘油 4ml 各組分溶解后高壓滅菌。冷卻到 60℃ ,再加 100ml 滅菌的 170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4的 溶 液(2.31g 的 KH2PO4和 12.54gK2HPO4溶在足量的水中,使終體積為 100ml。高壓滅菌或用 2×YT培養(yǎng)基

將下列組分溶解在 0.9L 水中: 蛋白胨 16g 酵母提取物 10g 氯化鈉 4ml 如果需要用 1N NaOH(~1ml 調(diào)整 pH 至 7.0,再補(bǔ)足水至 1L。注:瓊脂平板需添加瓊脂粉 12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉 7g/L。

YPD 培養(yǎng)基

將下列組分溶解在 0.9L 水中: 蛋白胨 20g 酵母提取物 10g 葡萄糖 20g 用水補(bǔ)足體積為 1L 后,高壓滅菌。建議在高壓滅菌之前,對(duì)色氨酸營(yíng) 養(yǎng)缺陷型每升培養(yǎng)基添加 1.6g 色氨酸, 因?yàn)?YPD 培養(yǎng)基是色氨酸限制 型培養(yǎng)基。為了配制平板,需要在高壓滅菌前加入 20g 瓊脂粉。四.常用抗生素

氨芐青霉素(ampicillin(100mg/ml

溶解 1g 氨芐青霉素鈉鹽于足量的水中, 最后定容至 10ml。分裝成小份 于-20℃ 貯存。常以 25ug/ml~50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。羧芐青霉素(carbenicillin(50mg/ml 溶解 0.5g 羧芐青霉素二鈉鹽于足量的水中,最后定容至 10ml。分裝成 小份于-20℃ 貯存。常以 25ug/ml~50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng) 基。

卡那霉素(kanamycin(10mg/ml 溶解 100mg 卡那霉素于足量的水中, 最后定容至 10ml。分裝成小份于-20℃ 貯存。常以 10ug/ml~50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。甲氧西林(methicillin(100mg/ml 溶解 1g 甲氧西林鈉于足量的水中,最后定容至 10ml。分裝成小份于-20℃ 貯存。常以 37.5ug/ml終濃度與 100ug/ml氨芐青霉素一起添加于 生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

氯霉素(chloramphenicol(25mg/ml 溶解 250mg 氯霉素足量的無(wú)水乙醇中, 最后定容至 10ml。分裝成小份 于-20℃ 貯存。常以 12.5ug/ml~25ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。鏈霉素(streptomycin(50mg/ml 溶解 0.5g 鏈霉素硫酸鹽于足量的無(wú)水乙醇中,最后定容至 10ml。分裝

成小份于-20℃ 貯存。常以 10ug/ml~50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng) 基。萘啶酮酸(nalidixic acid(5mg/ml 溶解 50mg 萘啶酮酸鈉鹽于足量的水中,最后定容至 10ml。分裝成小 份于-20℃ 貯存。常以 15ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

四環(huán)素(tetracyyline(10mg/ml 溶解 100mg 四環(huán)素鹽酸鹽于足量的水中,或者將無(wú)堿的四環(huán)素溶于無(wú) 水乙醇,定容至 10ml。分裝成小份用鋁箔包裹裝液管以免溶液見(jiàn)光, 于-20℃ 貯存。常以 10ug/ml~50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

五、核酸及蛋白質(zhì)常用數(shù)據(jù)

1.核苷三磷酸的物理常數(shù) 化合物 分 子 量

λmax(pH7.0 1摩爾溶液(pH7.0 中 λmax 時(shí)的最大吸 收值

OD 280/OD260 ATP 507 259 15400 0.15 CTP 483 271 9000 0.97 GTP 523 253 13700 0.66 UTP 484 262 10000 0.38 dATP 494

259 15200 0.15 dCTP 467 271 9300 0.98 dGTP 507 253 13700 0.66 dTTP 482 267 9600 0.71 2.常用核酸的長(zhǎng)度與分子量 核酸 核苷酸數(shù) 分子量

λDNA 48502(雙鏈環(huán)狀 3.0×107 pBR322 4363(雙鏈 2.8×106 28SrRNA 4800 1.6×106 23SrRNA 3700 1.2×106 18SrRNA 1900 6.1×105 19SrRNA 1700 5.5×105 5SrRNA 120 3.6×104 tRNA(大腸桿菌 75 2.5×104 3.常用核酸蛋白換算數(shù)據(jù)(1重量換算

1μg=10-6g 1pg=10-12g 1ng=10-9g 1fg=10-15g(2分光光度換算: 1A 260雙鏈 DNA=50μg/ml 1A 260單鏈 DNA=30μg/ml

1A 260單鏈 RNA=40μg/ml 4.常用蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)參照物

(1高分子量標(biāo)準(zhǔn)參照(2中分子量標(biāo)準(zhǔn)參照(3低分子量標(biāo)準(zhǔn)參照 肌球蛋白 分子量 磷酸化酶 B 97, 400 碳酸酐酶 31, 00 肌球蛋白 212, 000 牛血清白蛋白 66, 200 大豆脻蛋白酶 21, 500β-半 乳 糖 甘

酶 B 116, 000 谷氨酶脫氫酶 55, 000 抑制劑

磷酸化酶 B 97, 400 卵白蛋白 42, 700 馬心肌球蛋白 16, 900牛 血 清 白 蛋 白

66, 200 醛縮酶 40, 000 溶菌酶 14, 400過(guò)氧化氫酶 `57, 000 碳酸酐酶 31, 000 肌球蛋白(F1 8, 100 醛縮酶 40, 000 大豆脻蛋白酶 21, 500 肌球蛋白(F2 6, 200 抑制劑 肌球蛋白(F3 2, 500 溶菌酶 14, 400 5.常用 DNA 分子量標(biāo)準(zhǔn)參照物

λDNA/HindⅢ λDNA/EcoRⅠ λ/HindⅢ +EcoRⅠ pBR322/HaeⅢ 23130 21226 21227 587 123 9416 7421 5148 405 104 6557 5804 4973 504 89 4361 5643 4268 458 80 2322 4843 3530 434 64 2027 3530 2027 267 57 564 1904 234 51 125 1584 1375 974 831 564 125 213 192 184 124 21 18 11 7 2.常用的電泳緩沖液 緩沖液 使用液 濃貯存液（每升）50×：242g Tris 堿 57.1ml 冰乙酸 100ml EDTA(pH8.0 Tris-磷酸（TPE）1×:0.09mol/L Tris-磷酸 10×:10g Tris 堿 15.5ml85%

磷酸（1.679g/ml）40ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0 Tris-硼酸（TBE）a 0.5×0.045mol/L Tris-硼酸 0.001mol/L EDTA 5×：54g Tris 堿 27.5 硼酸 20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0 堿性緩沖液 b Tris-乙酸（TAE）1×：0.04mol/L Tris-乙酸 0.001mol/L EDTA 0.5mol/L

六、常用緩沖液 1．磷酸緩沖液（1）25℃下 0.1mol/L 磷酸鉀緩沖液的配制 pH 5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 1mol/L K2HPO4(ml 8.5 13.2 19.2 27.8 38.1 49.7 61.5 71.7 80.2 86.6 90.8 94.0 ※ ※ 0.002mol/L EDTA 1mol/L KH2PO4(ml 91.5 86.8 80.8 72.2 61.9 50.3 38.5 28.3 19.8 13.4 9.2 6.2 說(shuō)明： Tris-甘氨酸 c 1×:50mmol/L NaOH 1mmol/L EDTA 1×:25mmol/L Tris 250mmol/L 甘氨酸 0.1% SDS 1×:5ml 10mol/L NaOH 2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0 5×:15.1g Tris 94g 苷氨酸（電泳級(jí)）（pH8.3）50ml 10% SDS(電泳級(jí) ①TBE 溶液長(zhǎng)時(shí)間存放后會(huì)形成沉淀物，為避免這一問(wèn)題，可在室溫下 用玻璃瓶保存 5×溶液，出現(xiàn)沉淀后則予以廢棄。以片都以 1×TBE 作為使用液（即 1：5 稀釋濃貯液）進(jìn)行瓊脂糖凝膠電 泳。但 0.5×的使用液已具備足夠的緩沖容量。目前幾乎所有的瓊脂糖 膠電泳都以 1：10 稀釋的貯存液作為使用液。進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠垂直槽的緩沖液槽較小，故通過(guò)緩沖液的電流量 通常較大，需要使用 1×TBE 以提供足夠的緩沖容量。②堿性電泳緩沖液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配。③Tris-甘氨酸緩沖液用 SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳。2×SDS 凝膠加樣緩沖液： 100mmol/L Tris·HCl(6.8 200mmol/L 二硫蘇糖醇（DTT）4%SDS（電泳級(jí)）0.2%溴酚藍(lán) 20%甘油 不含 DTT 的 2×SDS 凝膠加樣緩沖液可保存于室溫，應(yīng)在臨用前取（2）25℃下 0.1mol/L 磷酸鈉緩沖液的配制 pH 5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 1mol/L Na2HPO4(ml 1mol/L NaH2PO4(ml 7.9 12.0 17.8 25.5 35.2 46.3 57.7 68.4 77.4 84.5 89.6 93.2 92.1 88.0 82.2 74.5 64.8 53.7 42.3 31.6 22.6 15.5 10.4 6.8 1mol/L 貯存液現(xiàn)加于上述緩沖液中。3.凝膠加樣緩沖液 緩沖液類(lèi)型 6×緩沖液 0.25%溴酚藍(lán) Ⅰ 0.25%二甲苯青 FF 40%（W/V）蔗糖水溶液 4℃ 貯存溫度 ※: 用 蒸 餾 水 將 混 合 的 兩 種 1mol/L 貯 存 液 稀 釋 至 1000ml，根 據(jù) Henderson-Hasselbalch 方程計(jì)算其 pH 值： pH=pK’+1g([質(zhì)子受體]/[質(zhì)子供體]在此，pK’=6.86(25℃。徐州溥博生物科技有限公司 www.tmdps.cn 6 0.25 溴酚藍(lán) Ⅱ 0.25%二甲苯青 FF 15%聚蔗糖(Ficoll400 0.25%溴酚藍(lán) Ⅲ 0.25%二甲苯青 FF 30%甘油水溶液 0.25%溴酚藍(lán) Ⅳ 40%(W/V蔗糖水溶液 堿性加樣緩沖

液: 300mmol/L NaOH 6mmol/L EDTA 18%聚蔗糖(Ficoll400 Ⅴ 0.15%溴甲酚綠 0.25%二甲苯青 FF 使用以上凝膠加樣緩沖液的目的有三：增大樣品密度；以確保 DNA 均 勻進(jìn)入樣品孔內(nèi)；使樣品呈現(xiàn)顏色，從而 使加樣操作更為便利，含有 在電塊中能以可預(yù)知速率向陽(yáng)極泳動(dòng)的染料。溴酚藍(lán)在瓊脂糖中移動(dòng)的 速率約為二甲苯青 FF 的 2.2 倍，而與瓊脂糖濃度無(wú)關(guān)。以 0.5×TBF 作電泳液時(shí)，溴酚藍(lán)在瓊脂糖中的泳動(dòng)速率約與長(zhǎng) 300bp 的雙鏈線狀 DNA 相同，而二甲苯青 FF 的泳動(dòng)則與長(zhǎng) 4kb 的雙鏈線狀 DNA 相同。在瓊脂糖濃度為 0.5%～1.4%的范圍內(nèi)，這些對(duì)應(yīng)關(guān)系受凝膠濃度變化 的影響并不顯著。選用哪一種加樣染料純屬個(gè)人喜惡。但是，對(duì)于堿性凝膠應(yīng)當(dāng)使用溴甲 酚綠作為示蹤染料，因?yàn)樵趬A性 pH 條件下其顯色較溴酚更藍(lán)為鮮明。4．各種 pH 值的 Tris 緩沖液的配制 各種 pH 值的 Tris 緩沖液的配制 所需 pH 值（25℃）7．1 7．2 7．3 7．4 7．5 7．6 7．7 7．8 7．9 8．0 8.1 8.2 8.3 0.1mol/L HCl 的體積 45．7 44．7 43．4 42．0 40．3 38．5 36．6 34．5 室溫 4℃ 4℃ 4℃ 5.常用緩沖液的 pKa 值 緩沖液 Tris a b 分子量 12.1 283.3 209.3 304.3 195.2 pKa 值 8.08 7.47 7.15 6.76 6.09 緩沖范圍 7.1～7.9 7.2～8.2 6.6～7.8 6.2～7.3 5.4～6.8 HEPES MPOSc PIPES MES e d a：三羥甲基氨基甲烷；b：N-2-羥乙基哌嗪-N’-2-乙磷酸；c：3-（N嗎啉代）丙磺酸；d：N，N’-雙（2-乙磺酸）哌嗪；e：2-（N-嗎啉代）乙磺酸。32．0 29．2 26.2 22.9 19.9 6．溫度對(duì)常用緩沖液 pH 的影響 緩沖體系 Mes Ada pKa(20℃ 6.15 6.60 △pKa/10℃-0.110-0.110 徐州溥博生物科技有限公司 www.tmdps.cn 7 PiPes Aces Bes Mops Tes Hepes Tricine Tris Bicine Glycylglycine 6.80 6.90 7.15 7.20 7.50 7.55 8.15 8.30 8.35 8.40-0.085-0.200-0.160-0.013-0.200-0.014-0.210-0.310-0.180-0.280 細(xì)級(jí) 超細(xì) Sephadex G-75 20～80 10～40 30,000 10,000 9～11 5.0±0.3 6 2 40～120 3,000～ 1,000～ 12 ～ 3.92 7.5±0.5 15 24 3 15.86 ～ 超細(xì) 10～40 70,000 950,000 Sephadex G-100 40～120 4,000～ 1,000～ 15 ～ 超細(xì) 10～40 1,500,000 150,000 20 溶脹最 少平衡 Sephadex G-150 20 ～ 柱頭壓力 40～120 5,000～ 1,000～ 30 18 ～ 超細(xì) 10～40 400,000 150,000 22 Sephadex G-200 15.0±1.5 72 5 3.53 0.88 ～ 10.0±1.0 48 5 9.41 2.35 ～

七、常用凝膠的技術(shù)參數(shù) 1．葡聚糖凝膠的某些技術(shù)數(shù)據(jù) 床體積 分子量分級(jí)范圍 毫升/ 干顆粒直徑 種類(lèi)（μ）葡 聚 糖

克干分 得水值 肽及球形 蛋白質(zhì) 分子）Sephadex 40～ 120 G-10 Sephadex 40～ 120 G-10 Sephadex G-25 100～300 粗級(jí)(≈5 ～ 100 目 1,000～ 50～150 中級(jí)(≈100～200 100～ ～1500 1500 3.5 2.5 ～ 1.5±3.5 ～700 ～700 2～ 3 1.0±0.1（線 性 子篩 時(shí) 間（h）（kPa）沸 室 水 溫 浴(2.5cm 直徑柱 3 1 40～120 5000～ 1000～ 30 ～ 40 3 1 10～40 800,000 200,000 20 ～ 20.0±2.0 25 72 5 0.39 1.57 ～ 2.聚丙烯酰胺凝膠的技術(shù)數(shù)據(jù) 排阻的下限 型號(hào)(分子量 Bio-gel-P-2 Bio-gel-P-4 6 2 4～6 5,000 5,000 1.5±0.2 Bio-gel-P-6 Bio-gel-P-10 Bio-gel-P-30 Bio-gel-P-60 1,600 3,600 4,600 10,000 30,000 60,000(分子量 200～2,000 500～4,000 1,000～5,000(ml/g 干凝膠 3.8 5.8 8.8 時(shí)間(室溫,h 2～4 2～4 2～4 2～4 10～12 10～12 分級(jí)分離范圍 膨脹后的床體積 膨 脹 所 需 最 少 目 5,000～17,000 12.4 20,000～50,000 14.9 30,000～70,000 19.0 40,000 ～ 19.0 100,000 20 細(xì)級(jí) ～ 800(≈200～ 400 目 超細(xì) Sephadex G-50 粗級(jí) 中級(jí) 10～40 Bio-gel-P-100 100,000 24 Bio-gel-P-150 150,000 50,000~150,000 24.0 80,000 ～ 34.0 200,000 24 100～200 50～150 1,500～ 500～ Bio-gel-P-200 200,000 48 Bio-gel-P-300 300,000 100～400,000 40.0 48 徐州溥博生物科技有限公司 www.tmdps.cn 8 3．瓊脂糖凝膠的技術(shù)數(shù)據(jù) 瓊脂糖含量 排阻的下限 分級(jí)分離的范圍（分 型號(hào) %（W/W）（分子量）子量）Sepharose 4B Sepharose 2B Sagavac 10 Sagavac 8 Sagavac 6 Sagavac 4 Sagavac 2 Bio-gel A-0.5M Bio-gel A-1.5M Bio-gel A-5M Bio-gel A-15M Bio-gel A-50M 4 2 10 8 6 4 2 10 8 6 4 2 2.5×105 7×10 2×10 5 7．染料在非變性聚丙烯酰胺凝膠中的遷移速度 生產(chǎn)廠家 0.3×10 ～3×10 2×10 ～25×10 6 6 6 凝膠濃度（%）3.5 溴酚藍(lán) 100bp 65bp 45bp 20bp 15bp 12bp 二甲苯青 FF 460bp 260bp 160bp 70bp 50bp 45bp Pharmacia 6 5.0 8.0 12.0 15.0 20.0 1×104～2.5×105 2.5×10 ～7×10 5×10 ～2×10 4 6 4 5 6 15×10 6 2×10 ～15×10 5 6 Seravac

八、遺傳密碼 密碼子的第二位 150×106 0.5×10 1.5×10 5×10 6 6 5×105～15×107 <1×10 ～0.5×10 <1×10 ～1.5×10 1×10 ～5×10 4 6 4 4 6 U UUU UUC Phe Phe C UCU UCC Ser Ser A UAU UAC Tyr Tyr 終 止 G UGU UGG Gys Gys 終（白）止 琥 UGG Trp G 密 碼 CGA CGC CGA CGC AGU AGC AGA AGC GGU GGC GGA Arg Arg Arg Arg Ser Ser Arg Arg Gly Gly Gly U C A G U C A G U C A G 子 的 第 三 位（3 端’）止 乳A U C 6 6

15×106 50×10 6 4×104～15×106 1×10 ～50×10 6 6 5 6 Bio-Rad 6 UUA U Leu UCA Ser UAA（石）終 赭 UGA Bio-gel A-150M 1 150×10 1×10 ～150×10 4．各處凝膠所允許的最大操作壓 凝膠 Sephadex G-10 G-15 G-25 G-50 G-75 9.8 9.8 9.8 9.8 4.9 最大靜水壓（kPa）密碼 子的 第一 位（5’ CUG 端）AUU AUC A AUA AUG GUU GUC G GUA GUG Ile Ile Ile Met Val Val Val Val ACU ACC ACA ACG GCU GCC GCA GCG Thr Thr Thr Thr Ala Ala Ala Ala AAU AAC AAA AAG GAU GAC GAA GAG Leu CCG Pro CAG CUU CUC C CUA Leu Leu Leu CCU CCC CCA Pro Pro Pro CAU CAC CAA UUG Leu UGG Ser UAG（珀）His His Gln Gln Asn Asn Lys Lys Asp Asp Glu Glu 5．瓊脂糖凝膠濃度與線性 DNA 分辨范圍 凝膠濃度（%）0.5 0.7 1.0 1.2 1.5 2.0 線性 DNA 長(zhǎng)度（bp）1000～30000 800～12000 500～10000 400～7000 200～3000 50～2000 GGG Gly 6．染料在變性聚丙烯酰胺凝膠中的遷移速度 凝膠濃度（%）5．0 6．0 8．0 10．0 20．0 溴酚藍(lán) 35bp 26bp 19bp 12bp 8bp 二甲苯青 FF 140bp 106bp 75bp 55bp 28bp 徐州溥博生物科技有限公司 www.tmdps.cn 9

第二篇：分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室常用試劑毒性說(shuō)明

分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室常用試劑毒性說(shuō)明

（1）Tris 吸入，攝入，皮膚吸收可造成傷害。戴好手套和護(hù)目鏡。

（2）氨基乙酸：吸入，攝入，皮膚吸收可造成傷害。戴好手套和護(hù)目鏡。避免吸入塵埃。

（3）X-半乳糖(X-gal)：對(duì)眼睛和皮膚有毒性。使用粉劑時(shí)遵循常規(guī)注意事項(xiàng)。應(yīng)注意的是，X-gal 溶液是在一種有機(jī)溶劑（DMF）中制備的。

（4）β-半乳糖苷酶：有刺激性，可產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng)。吸入，攝入，皮膚吸收可造成傷害。戴好手套和護(hù)目鏡。（5）苯二胺 ：吸入，攝入，皮膚吸收可造成傷害。戴好手套和護(hù)目鏡。在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。

（6）苯酚：有劇毒性和高度腐蝕性，可致嚴(yán)重?zé)齻Ｎ耄瑪z入，皮膚吸收可造成傷害。戴好合適的手套和護(hù)目鏡，穿好防護(hù)服，在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。若有皮膚接觸藥物，可用大量清水沖洗，并用肥皂和水清洗，不要用乙醇洗。

（7）苯甲基磺酰氟化物(PMSF)：為一有劇毒的膽堿酯酶抑制劑。對(duì)上呼吸道的黏膜、眼睛和皮膚有極大損害。戴好合適的手套和護(hù)目鏡，在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。萬(wàn)一眼睛或皮膚接觸到此藥品，立即用大量的水沖洗，丟棄被污染的衣物。

（8）苯甲酸：有刺激性。吸入，攝入，皮膚吸收可造成傷害。戴好手套和護(hù)目鏡，不要吸入。（9）苯甲酸芐酯：有刺激性。吸入，攝入，皮膚吸收可造成傷害。避免接觸眼睛。戴好合適的手套和護(hù)目鏡。

（10）苯乙醇：有刺激性。吸入，攝入，皮膚吸收可造成傷害。戴好手套和護(hù)目鏡，遠(yuǎn)離火源、火花和明火。

（11）丙烯酰胺（未聚合的）：為一種潛在的神經(jīng)毒素，可通過(guò)皮膚吸收（有累積效應(yīng)）。避免吸入塵埃。稱(chēng)量丙烯酰胺和亞甲基雙酰胺粉末時(shí)，戴好手套和面罩，在化學(xué)通風(fēng)櫥內(nèi)操作。聚合的丙烯酰胺是無(wú)毒的，但是使用時(shí)也應(yīng)小心，因?yàn)槠渲锌赡芎坝猩倭课淳酆系谋０贰?/p>

（12）蛋白酶K：有刺激性。吸入，攝入，皮膚吸收可造成傷害。戴好手套和護(hù)目鏡。

（13）碘化丙錠：吸入，攝入，皮膚吸收可造成傷害。刺激眼睛、皮膚、黏膜和上呼吸道。可誘導(dǎo)突變并可能致癌。戴好手套和護(hù)目鏡，穿好防護(hù)服，在通風(fēng)櫥內(nèi)小心操作。

（14）碘乙酰胺：能堿基化蛋白質(zhì)上的氨基，從而影響抗原的氨基酸序列分析。有毒性。吸入，攝入，皮膚吸收可造成傷害。戴好手套和護(hù)目鏡。在通風(fēng)櫥內(nèi)操作，勿吸入塵埃。

（15）疊氮化鈉：有劇毒性，可阻斷細(xì)胞色素電子轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)。含此藥物的溶液要明確標(biāo)記。吸入，攝入，皮膚吸收可造成傷害。戴好手套和護(hù)目鏡，并小心使用。此藥品為氧化劑，故保存時(shí)要遠(yuǎn)離可燃物品。（16）多聚甲醛：有劇毒。易通過(guò)皮膚吸收，并對(duì)皮膚、眼睛、黏膜和上呼吸道有嚴(yán)重破壞性。避免吸入塵埃。戴好手套和護(hù)目鏡，在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。多聚甲醛是甲醛的未解離形式。

（17）3，3’-二氨基聯(lián)苯胺四氫氯化物：為一種致癌劑，操作時(shí)要非常小心。避免吸入氣體。戴好手套和護(hù)目鏡。在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。

（18）二甲苯：可燃，高濃度有麻醉作用。吸入，攝入，皮膚吸收可造成傷害。戴好手套和護(hù)目鏡。在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。始終遠(yuǎn)離熱源、火花和明火。（19）二甲苯藍(lán)：見(jiàn)二甲苯。

（20）二甲次胂酸鈉：可能為致癌劑，并含有砷，有劇毒性。戴好手套和護(hù)目鏡，只在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。（20）二甲次胂酸鈉：可能為致癌劑，并含有砷，有劇毒性。戴好手套和護(hù)目鏡，只在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。（21）N，N-二甲基酰胺(DMF)：刺激眼睛、皮膚和黏膜。可通過(guò)吸入，攝入，和皮膚吸收發(fā)揮其毒性。慢性吸入可導(dǎo)致肝、腎損害。戴好手套和護(hù)目鏡，在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。

（22）二甲亞砜(DMSO)：吸入，攝入，皮膚吸收可造成傷害。戴好手套和護(hù)目鏡，在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。DMSO為可燃物保存于密封容器中。遠(yuǎn)離熱源、火花和明火。

（23）二硫蘇糖醇(DTT)：為一強(qiáng)還原劑，有惡臭味。吸入，攝入，皮膚吸收可造成傷害。當(dāng)使用固體形 1 式或高濃度溶液時(shí)，戴好手套和護(hù)目鏡并在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。

（24）4ˊ，6-二脒基-2ˊ-苯基吲哚鹽酸(DAPI)：可能為一種致癌劑。吸入，攝入，皮膚吸收可造成傷害。可引起刺激。避免吸入。戴好手套和護(hù)目鏡，在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。

（25）放射性物質(zhì)：當(dāng)計(jì)劃的一個(gè)實(shí)驗(yàn)涉及放射性物質(zhì)的使用時(shí)，應(yīng)包括以下內(nèi)容：同位素的理化性質(zhì)（如半衰期，放射型，輻射能量），輻射物質(zhì)的化學(xué)形式，其輻射度（具體的活性）總量，化學(xué)濃度，需要使用多少就預(yù)定多少，使用放射性物質(zhì)時(shí)，要始終戴好手套和護(hù)目鏡，穿實(shí)驗(yàn)室工作服。X和γ射線為由儀器產(chǎn)生放射性物質(zhì)輻射出的短波電磁波，它們會(huì)叢放射源輻射出來(lái)或聚成光束。它們的潛在危險(xiǎn)決定于暴露于其中的時(shí)間、強(qiáng)度和它的波長(zhǎng)。

（26）放線菌素D：是一種畸胎劑和致癌劑，有劇毒。吸入，攝入，皮膚吸收可造成傷害，甚至是致命的。應(yīng)避免吸入。戴好手套和護(hù)目鏡，并始終在化學(xué)通風(fēng)櫥內(nèi)操作，放線菌D見(jiàn)光分解。

（27）高壓玻璃器皿時(shí)要格外小心。高壓鍋和金屬容器中的玻璃器皿，宜放入金屬網(wǎng)中或蒲氏隔板中。在真空狀態(tài)下使用玻璃器皿，如真空收集器、干燥設(shè)備或氬氣條件下的反應(yīng)器等，要謹(jǐn)慎操作。戴好護(hù)目鏡。（28）過(guò)二硫酸銨：對(duì)黏膜組織、上呼吸道、眼睛和皮膚有極大的破壞性。吸入可致命。戴好手套和護(hù)目鏡，穿好防護(hù)服。必須在化學(xué)通風(fēng)櫥內(nèi)操作。操作后要徹底清洗。

（29）過(guò)氧化氫：有腐蝕性、毒性，對(duì)皮膚有強(qiáng)損害性。吸入，攝入，皮膚吸收可造成傷害。戴好手套和護(hù)目鏡，只在化學(xué)通風(fēng)櫥內(nèi)操作。

（30）環(huán)乙酰亞胺：吸入，攝入，皮膚吸收可造成傷害。戴好手套和護(hù)目鏡，只在化學(xué)通風(fēng)櫥內(nèi)操作。（31）磺基蓖麻酸（二水合物）；對(duì)黏膜和呼吸系統(tǒng)有極大破壞性。不要吸入粉塵，戴好手套和護(hù)目鏡，在化學(xué)通風(fēng)櫥內(nèi)操作。

（32）甲氨蝶呤(MTX)：為一種致癌劑和致畸胎劑。吸入，攝入，皮膚吸收可造成傷害。暴露于其中可導(dǎo)致胃腸反應(yīng)，骨髓抑制，肝或腎損害。戴好手套和護(hù)目鏡，在化學(xué)通風(fēng)櫥內(nèi)操作。

（33）甲醇：有毒，可致失明。吸入，攝入，皮膚吸收可造成傷害。要有足夠的通風(fēng)以減少揮發(fā)氣。不要吸入這些氣體。戴好手套和護(hù)目鏡，在化學(xué)通風(fēng)櫥內(nèi)操作。

（34）甲基磺酸乙酯(EMS)：為一種可誘導(dǎo)機(jī)體突變和突變和致癌的揮發(fā)性有機(jī)溶劑。吸入，攝入，皮膚吸收可造成傷害。

（35）甲醛：有劇毒性和揮發(fā)性。也是一種致癌劑。可通過(guò)皮膚吸收，對(duì)皮膚、眼睛、黏膜和上呼吸道有刺激或損傷。避免吸入氣體。戴好手套和護(hù)目鏡。始終在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。遠(yuǎn)離熱源、火花和明火。（36）甲酸：有劇毒，對(duì)黏膜組織、上呼吸道、眼睛、皮膚有極大的損傷。吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。

（37）甲酰胺：可導(dǎo)致畸胎。其揮發(fā)的氣體刺激眼睛、皮膚、黏膜和上呼吸道。吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。操作高濃度甲酰胺時(shí)要在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。盡可能將反應(yīng)的溶液蓋住。（38）焦磷酸鈉：有刺激性。吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。不要吸入粉塵。（39）焦碳酸二乙酯(DEPC)：是一種潛在的蛋白質(zhì)變質(zhì)劑，且為可疑的致癌劑。開(kāi)啟時(shí)瓶口不要指向操作者或其他人。瓶?jī)?nèi)壓可導(dǎo)致噴濺。戴好手套并穿實(shí)驗(yàn)室工作服，在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。（40）聚丙烯酰胺：無(wú)毒性，但仍應(yīng)謹(jǐn)慎使用，因?yàn)槠渲锌赡芎猩倭课淳酆系奈镔|(zhì)。

（41）聚乙二醇(PEG)：吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。避免吸入粉末。戴好手套和護(hù)目鏡。（42）菌種（運(yùn)輸）：健康教育福利部門(mén)根據(jù)運(yùn)輸器具將各種細(xì)菌劃分為不同的類(lèi)別。大腸桿菌的非病原種（K12）和枯草芽孢桿菌為第一類(lèi)，正常運(yùn)輸條件下是無(wú)危害或危害性很微小的。但是沙門(mén)菌、嗜血桿菌、鏈霉菌和假單孢菌的一些菌種為第二類(lèi)。第二類(lèi)細(xì)菌為“一般潛在危害劑：能造成不同嚴(yán)重程度的疾病，但在普通實(shí)驗(yàn)室技術(shù)下可操作。”（43）抗淬滅劑：見(jiàn)苯二胺。

（44）考馬斯亮藍(lán)：吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。

（45）聯(lián)結(jié)劑(DMP)：刺激眼睛、皮膚和黏膜。可通過(guò)吸入，攝入，皮膚吸收發(fā)揮其毒性。不要吸入氣體，戴好手套、面罩和護(hù)目鏡。

2（46）鏈霉素：有毒性，懷疑為致癌劑和突變誘導(dǎo)劑。可導(dǎo)致過(guò)敏反應(yīng)。吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。

（47）亮肽素；吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。

（48）鄰苯二甲酸二丁酯：吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。不要吸入氣體。（49）磷酸二氫鈉：吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。（50）磷酸：高腐蝕性。吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。

（51）磷酸鉀：吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。不要吸入粉塵，在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。（52）磷酸鈉：刺激眼睛和皮膚。吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。不要吸入粉塵。（53）磷酸氫鈉：吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。（54）硫氰酸胍：吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。（55）硫氰酸胍鹽；見(jiàn)硫氰酸胍。

（56）硫酸：劇毒性，對(duì)黏膜組織、上呼吸道、眼睛和皮膚有極大的損傷。可造成燒傷，與其他物質(zhì)（如紙）接觸可能引發(fā)火災(zāi)。戴好手套和護(hù)目鏡，在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。

（57）硫酸鎂：吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。

（58）氯仿：刺激眼睛、呼吸道、皮膚和黏膜。為一種致癌劑。有肝、腎毒性。有揮發(fā)性。避免吸入蒸汽。戴好手套和護(hù)目鏡。在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。

（59）氯化銨：吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。（60）氯化鈣：吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。（61）氯化鉀：吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。

（62）氯化鋰：刺激眼睛、呼吸道、皮膚和黏膜。吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。

（63）氯化鎂：吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。（64）氯化錳：吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。（65）氯化鐵：吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。

（66）氯化鋅：有腐蝕性，對(duì)胎兒有潛在危險(xiǎn)。吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。

（67）3-（N-嗎啉）-丙磺酸：吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。刺激眼睛、呼吸道、皮膚和黏膜。戴好手套和護(hù)目鏡。在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。（68）沒(méi)食子酸丙酯(NPG0：見(jiàn)苯甲酸。（69）檸檬酸鈉：見(jiàn)檸檬酸。

（70）檸檬酸：有刺激性。吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。（71）硼酸：吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。

（72）羥胺：有腐蝕性和毒性。吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。（73）氫氧化銨：為氨的水溶液。具有腐蝕性。操作時(shí)要小心。氨氣可從氨水中揮發(fā)出來(lái)，具有腐蝕性、毒性和爆炸性。戴好手套。必須在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。

（74）氫氧化鉀：劇毒性。吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。溶液為強(qiáng)堿性，當(dāng)心使用。戴好手套。（75）氫氧化鈉：溶液有劇毒，強(qiáng)堿性，當(dāng)心使用。戴好手套。其他所有高濃度堿溶液都應(yīng)以類(lèi)似方式操作。

（76）秋水仙堿：有劇毒，可致命，可導(dǎo)致癌癥和可遺傳的基因損害。吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。不要吸入粉塵。

（77）β-巰基乙醇：吸入或皮膚吸收可致命，攝入有害。高濃度溶液對(duì)黏膜、上呼吸道、皮膚和眼睛有極大損害。β-巰基乙醇有難聞氣味。戴好手套和護(hù)目鏡。在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。

（78）去氧膽酸鈉：刺激黏膜和呼吸道。吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。使用粉末時(shí)，戴好手套和護(hù)目鏡。不要吸入粉塵。

3（79）溶劑；謹(jǐn)慎操作。

（80）溶菌酶：對(duì)黏膜有腐蝕性。戴好手套和護(hù)目鏡。（81）三氯乙酸：有很強(qiáng)的腐蝕性。戴好手套和護(hù)目鏡。

（82）三乙胺：有劇毒，易燃。對(duì)皮膚、眼睛、黏膜和上呼吸道有強(qiáng)腐蝕性。吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。始終在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。遠(yuǎn)離熱源、火花和明火。

（83）三乙醇胺：吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。始終在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。（84）十二烷基磺酸鈉(SDS)：有毒性和刺激性，有嚴(yán)重?fù)p傷眼睛的危險(xiǎn)。吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。不要吸入粉塵。

（85）雙丙烯酰胺：是一種潛在的神經(jīng)毒素，可通過(guò)皮膚吸收，避免吸入，在稱(chēng)量時(shí)，戴好手套和護(hù)目鏡。（86）四環(huán)素：吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。

（87）N，N，N’，N’-四甲基乙二胺：對(duì)皮膚、眼睛、黏膜和上呼吸道有極大損傷。吸入可致命，長(zhǎng)時(shí)間接觸可產(chǎn)生嚴(yán)重刺激或燒傷。戴好手套和護(hù)目鏡。穿防護(hù)服，必須在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。使用完畢要徹底清洗。易燃性，其揮發(fā)氣體可到達(dá)一定距離，形成引燃源，瞬間發(fā)生火災(zāi)。遠(yuǎn)離熱源、火花和明火。（88）四水合乙酸鎂：吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。（89）四唑氮藍(lán)；有危險(xiǎn)性，小心操作。

（90）碳酸鈉：吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。

（91）同位素125I；在甲狀腺，為一潛在的健康殺手。無(wú)論何種形式的同位素都用鉛板遮擋。操作同位素時(shí)，要戴一到兩副手套，著取決于同位素的用量和所進(jìn)行的操作難度。

（92）胃酶抑素：吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。（93）胃酶抑素：吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。

（94）硝酸：具有揮發(fā)性，操作時(shí)要小心。吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。遠(yuǎn)離熱源、火花和明火。

（95）硝酸銀：強(qiáng)氧化劑，小心操作。皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。與其他物質(zhì)接觸會(huì)發(fā)生爆炸。

（96）溴酚藍(lán)：皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。

（97）5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷：對(duì)眼睛和皮膚有毒性。皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。（98）5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸酯：有毒性。吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。（99）5-溴-2’-脫氧脲苷；為致畸胎劑。吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。有刺激性。戴好手套和護(hù)目鏡。在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。

（100）溴乙啡啶：為一種強(qiáng)致突變劑，有毒性。避免吸入粉塵。操作含此染料的溶液時(shí)，戴上手套。（101）血（人類(lèi)）和血產(chǎn)品和愛(ài)普斯坦病毒：其中可能含有隱藏的傳染性物質(zhì)，如乙型肝炎病毒、HIV，可能造成實(shí)驗(yàn)上室傳染。戴一次性手套，使用吸槍式吸管，在生物安全櫥中、操作，防止形成懸浮和污染。污染的塑料器皿在丟棄前要高壓處理；污染的液體高壓處理或丟棄前用漂白粉處理至少30min。（102）N，N’-亞甲基丙烯酰胺：為毒藥，作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)。吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。有刺激性。戴好手套和護(hù)目鏡。

（103）亞精胺：有腐蝕性。吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。有刺激性。戴好手套和護(hù)目鏡。在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。

（104）亞鐵氰化鉀：吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。有刺激性。戴好手套和護(hù)目鏡。在通風(fēng)櫥內(nèi)相當(dāng)謹(jǐn)慎地操作。遠(yuǎn)離強(qiáng)酸。

（105）鹽酸：有揮發(fā)性。吸入，攝入，皮膚吸收可致命。對(duì)皮膚、眼睛、黏膜和上呼吸道有極大損害。戴好手套和護(hù)目鏡。在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。

（106）鹽酸胍：刺激黏膜、上呼吸道、皮膚和眼睛。吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。

（107）鹽酸胍鹽：見(jiàn)鹽酸胍。

4（108）乙醇：吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。（109）乙基亞硝基脲：見(jiàn)N-乙基-N-亞硝基脲

（110）N-乙基-N-亞硝基脲（ENU）：有致癌性，為潛在的突變誘導(dǎo)劑。吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。用1ml/LNaOH溶液清洗所有接觸過(guò)ENU的物品。（111）乙酸銨：吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。

（112）乙醇胺：有毒性。吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。具有高腐蝕性，并可與酸發(fā)生強(qiáng)烈反應(yīng)。

（113）乙酸：使用時(shí)要非常小心。吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。

（114）乙酸鈉：見(jiàn)乙酸。

（115）乙酸鈾酰：吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。（116）異丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）：吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。（117）異丁烯酸酯：有毒。吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。不要吸入其氣體。（118）異硫氰酸胍鹽：見(jiàn)硫氰酸胍鹽。

（119）抑肽酶：吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷還可導(dǎo)致過(guò)敏反應(yīng)。暴露其中可引起胃腸反應(yīng)，肌肉疼痛，血壓改變或支氣管痙攣。戴好手套和護(hù)目鏡。不要吸入粉塵，必須在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。

（120）月桂酰基氨酸鈉：吸入，攝入，皮膚吸收可造成損傷。戴好手套和護(hù)目鏡。不要吸入粉塵。

---------部分核實(shí)，未全面核實(shí)

第三篇：分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室常用試劑的配制方法

一.常用貯液與溶液

1mol/L亞精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亞精胺于足量的水中，使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20℃。

1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20℃。

10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：將77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔徑的濾膜過(guò)濾除菌。

10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（組分V或分子生物學(xué)試劑級(jí)，無(wú)DNA酶）于9.5ml水中（為減少變性，須將蛋白加入水中，而不是將水加入蛋白），蓋好蓋后，輕輕搖動(dòng)，直至牛血清蛋白完全溶解為止。不要渦旋混合。加水定容到10ml，然后分裝成小份貯存于-20℃。

1mol/L二硫蘇糖醇（DTT）：在二硫蘇糖醇5g的原裝瓶中加32.4ml水，分成小份貯存于-20℃。或轉(zhuǎn)移100mg的二硫蘇糖醇

至微量離心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫蘇糖醇溶液。

8mol/L乙酸鉀（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸鉀于足量的水中，加水定容到100ml。

1mol/L氯化鉀（KCl）：溶解7.46g氯化鉀于足量的水中，加水定容到100ml。

3mol/L乙酸鈉（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸鈉于約90ml水中，用冰乙酸調(diào)溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。

0.5mol/L EDTA:配制等摩爾的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三鈉鹽。或稱(chēng)取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。

1mol/L HEPES：將23.8gHEPES溶于約90ml的水中，用NaOH調(diào)pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。

1mol/L HCl：加8.6ml的濃鹽酸至91.4ml的水中。

25mg/ml IPGT：溶解250mg的IPGT（異丙基硫代-β-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份貯存于-20℃。

1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2·6H2O于足量的水中，定容到100ml。

100mmol/L PMSF：溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的異丙醇中，定容到10ml。分成小份并用鋁箔將裝液管包裹

或貯存于-20℃。

20mg/ml蛋白酶K（proteinase K）：將200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，輕輕搖動(dòng)，直至蛋白酶K完全溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml，然后分裝成小份貯存于-20℃。

10mg/mlRnase（無(wú)DNase）（DNase－free RNase）：溶解10mg的胰蛋白R(shí)NA酶于1ml的10mmol/L的乙酸鈉水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的Tris－HCl調(diào)pH至7.5，于-20℃貯存。（配制過(guò)程中要戴手套）

5mol/L氯化鈉（NaCl）：溶解29.2g氯化鈉于足量的水中，定容至100ml。

10N氫氧化鈉（NaOH）：溶解400g氫氧化鈉顆粒于約0.9L水的燒杯中（磁力攪拌器攪拌），氫氧化鈉完全溶解后用水定容至1L。

10％SDS（十二烷基硫酸鈉）：稱(chēng)取100gSDS慢慢轉(zhuǎn)移到約含0.9L的水的燒杯中，用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。用水定容至1L。

2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使終體積為100ml。

100％三氯乙酸（TCA）:在裝有500gTCA的試劑瓶中加入100ml水，用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。（稀釋液應(yīng)在臨用前配制）

2.5％ X－gal（5-溴-4-氯-3-吲哚－β-半乳糖苷）：溶解25mg的X－gal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用鋁箔包裹裝液管，貯存于-20℃。

100×Denhardt試劑（Denhardt's regent）

成分及終濃度

配制100ml溶液各成分的用量

2%聚蔗糖（Ficoll，400型）

2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）

2%BSA（組分V）

水

2g 2g 2g

加水至總體積為100ml

依照上表稱(chēng)取各組分，溶于水中定容。過(guò)濾除菌及雜質(zhì)，分裝成小份于-20℃貯存。

10×標(biāo)準(zhǔn)DNA連接酶緩沖液（standard DNA ligase buffer）（粘端、平端連接）

成分及終濃度

配制10ml溶液各成分的用量

0.5mol/L Tris-HCl 100mmol/L MgCl2 100mmol/L DTT 2mmol/L ATP

5mmol/L 鹽酸亞精胺（可選）

0.5mg/ml BSA（組分V）（可選）

水

5ml 1mol/L 貯液

1ml 1mol/L 貯液

1ml 1mol/L 貯液

200ul 100 mmol/L 貯液

50ul 1 mmol/L 貯液

0.5ml 10 mg/mL 貯液

2.25ml

將配制好的緩沖液分裝成小份，貯存于-20℃。

mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions）

可以購(gòu)買(mǎi)到100mmol/L純dNTPs貯液，-80℃可貯存至少6個(gè)月。

10mmol/L dNTP混合液

成分及終濃度

配制20ul溶液各成分的用量

10mmol/L dATP 10mmol/L dCTP 10mmol/L dGTP 10mmol/L dTTP 水

2ul 100 mmol/L dATP 貯液

2ul 100 mmol/L dCTP 貯液

2ul 100 mmol/L dGTP 貯液

2ul 100 mmol/L dTTP 貯液

12ul

20％PEG 8000/2.5M NaCl

成分及終濃度

配制10ml溶液各成分的用量

質(zhì)量濃度為20％聚乙二醇

2.5mol/L 氯化鈉

水 20g

50ml 5 mol/L 氯化鈉 或 14.6g 固體氯化鈉

補(bǔ)足100ml

加聚乙二醇于含有氯化鈉的燒杯中，加水至終體積100ml，用磁力攪拌器攪拌溶解。

20×SSC

成分及終濃度

配制1L溶液各成分的用量

300mmol/L 檸檬酸三鈉（二水）

3mol/L 氯化鈉

水

88.2g 175.3g 補(bǔ)足1L

溶解檸檬酸三鈉（二水）和氯化鈉于約0.9L水中，加幾滴10N NaOH溶液調(diào)pH為7.0，用水補(bǔ)足體積至1L。

DEPC（焦碳酸二乙酯）處理水

加100ul DEPC 于 100ml 水中，使DEPC的體積分?jǐn)?shù)為0.1％。在37℃溫浴至少12h，然后在15 psi 條件下高壓滅菌20min，以使殘余的DEPC失活。DEPC會(huì)與胺起反應(yīng)，不可用DEPC處理Tris緩沖液。

甲酰胺（deionized formamide）

直接購(gòu)買(mǎi)或加Dowex XG8 混合樹(shù)脂于裝有甲酰胺的玻璃燒杯中，用磁力攪拌器輕輕攪拌1h，可去除甲酰胺中的離子。經(jīng)Whatman 1號(hào)濾紙過(guò)濾除去樹(shù)脂后分成小份，充氮?dú)庥?80℃貯存（防止氧化）。

磷酸緩沖液（phosphate buffer）

按照下表所給定的體積，混合1 mol/L 的磷酸二氫鈉（單堿）和1mol/L 磷酸氫二鈉（雙堿）貯液，獲得所需pH的磷酸緩沖液。配制1 mol/L 的磷酸二氫鈉（NaH2PO4·H2O）貯液：溶解138g于足量水中，使終體積為1L;1mol/L 磷酸氫二鈉（Na2HPO4）貯液:溶解142g于足量水中使終體積為1L。

1mol/L 磷酸二氫鈉（ml）

1mol/L 磷酸氫二鈉（ml）

最終pH值

877 850 815 775 735 685 625 565 510 450 390 330 280 123 150 185 225 265 315 375 435 490 550 610 670 720 6.0 6.1 6.2 6.3 6.4 6.5 6.6 6.7 6.8 6.9 7.0 7.1 7.2

TE（用于懸浮和貯存DNA）

成分及終濃度

配制100ml溶液各成分的用量

10mmol/L Tris－HCl 1mmol/L EDTA 水

1ml 1mol/L Tris-HCl（pH7.4-8.0，25℃）

200ul 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）

98.8ml

Tris緩沖液（Tris-HCl buffer）

將121g的Tris堿溶解于約0.9L水中，再根據(jù)所要求的pH（25℃下）加一定量的濃鹽酸（11.6N），用水調(diào)整終體積至1L。

濃鹽酸的體積（ml）

pH

8.6 14 21 28.5 38 46 56 66 71.3 76 9.0 8.8 8.6 8.4 8.2 8.0 7.8 7.6 7.4 7.2

二.電泳緩沖液、染料和凝膠加樣液

電泳緩沖液

50×Tris-乙酸（TAE）緩沖液

成分及終濃度

配制1L溶液各成分的用量

2mol/L Tris堿

1mol/L 乙酸

mmol/L EDTA 水

242g

57.1 ml的冰乙酸（17.4 mol/L）

200ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）

補(bǔ)足1L

5×Tris-硼酸（TBE）緩沖液

成分及終濃度

配制1L溶液各成分的用量

445 mmol/L Tris堿

445 mmol/L 硼酸鹽mmol/L EDTA 水

54g 27.5g 硼酸 ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）

補(bǔ)足1L

染料

1％溴酚藍(lán)（bromophenol blue）

加1g水溶性鈉型溴酚藍(lán)于100ml水中，攪拌或渦旋混合直到完全溶解。

1％二甲苯青FF（xylene cyanole FF）

溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。

10mg/ml的溴化乙錠（ethidium bromide）

小心稱(chēng)取1g溴化乙錠，轉(zhuǎn)移到廣口瓶中，加100ml水，用磁力攪拌器攪拌直到完全溶解。用鋁箔包裹裝液管，于4℃貯存。

凝膠上樣液（gel loading solutions）

6×堿性凝膠上樣液（室溫貯存）

成分及終濃度

配制10ml溶液各成分用量

0.3 N 氫氧化鈉mmol/L EDTA 18％聚蔗糖（400型）

0.15％溴甲酚綠

0.25％二甲苯青FF 水

300ul 10N 氫氧化鈉

120ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）

1.8g 15mg 25mg 補(bǔ)足到10ml

6×聚蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）

成分及終濃度

配制10ml溶液各成分用量

0.15％溴酚藍(lán)

0.15％二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 15％聚蔗糖（400型）

水

1.5ml 1％溴酚藍(lán)

1.5ml 1％二甲苯青FF

100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）

1.5g 補(bǔ)足到10ml

6×溴酚藍(lán)/二甲苯青/聚蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）

成分及終濃度

配制10ml溶液各成分用量

0.25％溴酚藍(lán)

0.25％二甲苯青FF 15％聚蔗糖（400型）

水

2.5ml 1％溴酚藍(lán) 2.5ml 1％二甲苯青FF 1.5g 補(bǔ)足到10ml

6×甘油凝膠上樣液（4℃貯存）

成分及終濃度

配制10ml溶液各成分用量

0.15％溴酚藍(lán)

0.15％二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 50％甘油

水

1.5ml 1％溴酚藍(lán)

1.5ml 1％二甲苯青FF

100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）

3ml 3.9ml

6×蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）

成分及終濃度

配制10ml溶液各成分用量

0.15％溴酚藍(lán)

0.15％二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 40％聚蔗糖

水

1.5ml 1％溴酚藍(lán)

1.5ml 1％二甲苯青FF

100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）

4g

補(bǔ)足到10ml

10×十二烷基硫酸鈉/甘油凝膠上樣液（室溫貯存）

成分及終濃度

配制10ml溶液各成分用量

0.2％溴酚藍(lán)

0.2％二甲苯青FF 200 mmol/L EDTA 0.1％SDS 50％甘油

水

20mg 20mg

4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)100ul 10％ SDS 5ml 補(bǔ)足到10ml

三.常用培養(yǎng)基

LB培養(yǎng)基

將下列組分溶解在0.9L水中：

蛋白胨

10g

酵母提取物

5g

氯化鈉

10g

如果需要用1N NaOH（～1ml）調(diào)整pH至7.0，再補(bǔ)足水至1L。注：瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g/L。

SOB培養(yǎng)基

將下列組分溶解在0.9L水中：

蛋白胨

20g

酵母提取物

5g

氯化鈉 0.5g mol/L 氯化鉀

2.5ml

用水補(bǔ)足體積到1L。分成100ml的小份，高壓滅菌。培養(yǎng)基冷卻到室溫后，再在每100ml的小份中加1ml滅過(guò)菌的1mol/L氯化鎂。

SOC培養(yǎng)基

成分、方法同SOB培養(yǎng)基的配制，只是在培養(yǎng)基冷卻到室溫后，除了在每100ml的小份中加1ml滅過(guò)菌的1mol/L氯化鎂外，再加2ml滅菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足夠水中，再用水補(bǔ)足到100ml，用0.22um的濾膜過(guò)濾除菌）。

TB培養(yǎng)基

將下列組分溶解在0.9L水中：

蛋白胨

12g

酵母提取物

24g

甘油

4ml

各組分溶解后高壓滅菌。冷卻到60℃，再加100ml滅菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4的溶液（2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使終體積為100ml。高壓滅菌或用0.22um的濾膜過(guò)濾除菌）。

2×YT培養(yǎng)基

將下列組分溶解在0.9L水中：

蛋白胨

16g

酵母提取物

10g

氯化鈉

4ml

如果需要用1N NaOH（～1ml）調(diào)整pH至7.0，再補(bǔ)足水至1L。注：瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g/L。

YPD培養(yǎng)基

將下列組分溶解在0.9L水中：

蛋白胨

20g

酵母提取物

10g

葡萄糖

20g

用水補(bǔ)足體積為1L后，高壓滅菌。建議在高壓滅菌之前，對(duì)色氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型每升培養(yǎng)基添加1.6g色氨酸，因?yàn)閅PD培養(yǎng)基是色氨酸限制型培養(yǎng)基。為了配制平板，需要在高壓滅菌前加入20g瓊脂粉。

四.常用抗生素

氨芐青霉素（ampicillin）（100mg/ml）

溶解1g氨芐青霉素鈉鹽于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以25ug/ml～50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

羧芐青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）

溶解0.5g羧芐青霉素二鈉鹽于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以25ug/ml～50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

甲氧西林（methicillin）（100mg/ml）

溶解1g甲氧西林鈉于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以37.5ug/ml終濃度與100ug/ml氨芐青霉素一起添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml）

溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以10ug/ml～50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml）

溶解250mg氯霉素足量的無(wú)水乙醇中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以12.5ug/ml～25ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

鏈霉素（streptomycin）（50mg/ml）

溶解0.5g鏈霉素硫酸鹽于足量的無(wú)水乙醇中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以10ug/ml～50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml）

溶解50mg萘啶酮酸鈉鹽于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以15ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

四環(huán)素（tetracyyline）（10mg/ml）

溶解100mg四環(huán)素鹽酸鹽于足量的水中，或者將無(wú)堿的四環(huán)素溶于無(wú)水乙醇，定容至10ml。分裝成小份用鋁箔包裹裝液管以免溶液見(jiàn)光，于-20℃貯存。常以10ug/ml～50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

第四篇：分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室

分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室（P2設(shè)計(jì)）

1.功能：進(jìn)行分

組織培養(yǎng)前實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)

標(biāo)簽：產(chǎn)經(jīng)/公司實(shí)驗(yàn)室 微生物 潔凈室 設(shè)計(jì)說(shuō)明 通風(fēng)柜 實(shí)驗(yàn)臺(tái) 家俱

組織培養(yǎng)前實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)

在進(jìn)行植物組織培養(yǎng)工作之前，首先應(yīng)對(duì)工作中需要哪些最基本的設(shè)備條件有個(gè)全面的了解，以便因地制宜地利用現(xiàn)有房屋，或新建、改建實(shí)驗(yàn)室。實(shí)驗(yàn)室的大小取決于工作的目的和規(guī)模。以工廠化生產(chǎn)為目的，實(shí)驗(yàn)室規(guī)模太小，則會(huì)限制生產(chǎn)，影響效率。

在設(shè)計(jì)組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室時(shí)，應(yīng)按組織培養(yǎng)程序來(lái)沒(méi)計(jì)，避免某些環(huán)節(jié)倒排，引起日后工作混亂。植物組織培養(yǎng)是在嚴(yán)格無(wú)菌的條件下進(jìn)行的。要做到無(wú)菌的條件，需要一定的設(shè)備、器材和用具，同時(shí)還需要人工控制溫度、光照、濕度等培養(yǎng)條件。

實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)原則：保證無(wú)菌操作，達(dá)到工作方便，防止污染。

實(shí)驗(yàn)室組成：化學(xué)實(shí)驗(yàn)室、洗滌菌室、無(wú)菌操作室（接種室）、培養(yǎng)室、細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)室、其他小型儀器設(shè)備。

1)化學(xué)實(shí)驗(yàn)室（準(zhǔn)備室）：完成所使用的各種藥品的貯備、稱(chēng)量、溶解、配制、培養(yǎng)基分裝等。主要設(shè)備：藥品柜、防塵櫥（放置培養(yǎng)容器）、冰箱、天平、蒸餾水器、酸度計(jì)及常用的培養(yǎng)基配制用玻璃儀器.2)洗滌、滅菌室：完成各種器具的洗滌、干燥、保存、培養(yǎng)基的滅菌等。

主要設(shè)備：水池、操作臺(tái)、高壓滅菌鍋、干燥滅菌器（如烘箱）等。

3)無(wú)菌操作室（接種室）：主要用于植物材料的消毒、接種、培養(yǎng)物的轉(zhuǎn)移、試管苗的繼代、原生質(zhì)體的制備以及一切需要進(jìn)行無(wú)菌操作的技術(shù)程序。

主要設(shè)備：紫外光源、超凈工作臺(tái)、消毒器、酒精燈、接種器械（接種鑷子、剪刀、解剖刀、接種針）等。

接種室宜小不宜大，一般7～8平米，要求地面、天花板及四壁盡可能密閉光滑，易于清潔和消毒。配置拉動(dòng)門(mén)，以減少開(kāi)關(guān)門(mén)時(shí)的空氣擾動(dòng)。接種室要求干爽安靜，清潔明亮。在適當(dāng)位置吊裝1～2盞紫外線滅菌燈，用以照射滅菌。最好安裝一小型空調(diào)，使室溫可控，這樣可使門(mén)窗緊閉，減少與外界空氣對(duì)流。接種室應(yīng)設(shè)有緩沖問(wèn)，面積1m2為宜。進(jìn)入無(wú)菌操作室前在此更衣?lián)Q鞋，以減少進(jìn)出時(shí)帶入接種室雜菌。緩沖間最好也安一盞紫外線滅菌燈，用以照射滅菌。

4)培養(yǎng)室：培養(yǎng)室是將接種的材料進(jìn)行培養(yǎng)生長(zhǎng)的場(chǎng)所。培養(yǎng)室的大小可根據(jù)需要培養(yǎng)架的大小、數(shù)目、及其他附屬設(shè)備而定。其設(shè)計(jì)以充分利用空間和節(jié)省能源為原則。

第五篇：分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室工作制度

分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室工作制度 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室分為試劑準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、文庫(kù)構(gòu)建區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、純化區(qū)、測(cè)序準(zhǔn)備區(qū)、測(cè)序區(qū)合計(jì)7個(gè)獨(dú)立工作區(qū)域：各區(qū)實(shí)驗(yàn)用品應(yīng)有明顯標(biāo)識(shí)，嚴(yán)禁混用； 實(shí)驗(yàn)室工作人員均取得國(guó)家要求上崗資質(zhì)； 為有效防止后擴(kuò)增區(qū)產(chǎn)物的污染，實(shí)驗(yàn)工作人員應(yīng)遵循單向走動(dòng)原則。試劑準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)品制備區(qū)→文庫(kù)構(gòu)建區(qū)→純化區(qū)→測(cè)序準(zhǔn)備區(qū)→測(cè)序區(qū)，物品傳遞需通過(guò)傳遞窗進(jìn)行，嚴(yán)禁人和物品反向流動(dòng)，進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室必須更換有該室特殊標(biāo)識(shí)的工作服和鞋套，工作服及拖鞋均有專(zhuān)門(mén)的衣柜存放，每個(gè)區(qū)均有專(zhuān)用的一次性手套、口罩、帽子并有固定存放處。4 實(shí)驗(yàn)室工作人員必須嚴(yán)格按照PCR實(shí)驗(yàn)室操作程序進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前必須先做好室內(nèi)及工作臺(tái)的清潔消毒，離心管、吸頭等一次性用品均需高壓滅菌處理或用商品化專(zhuān)用耗材。建立門(mén)禁，非本室人員未經(jīng)允許不得進(jìn)入，工作人員在工作時(shí)也不能隨意進(jìn)出，以免造成不應(yīng)有的污染。

6實(shí)驗(yàn)前后應(yīng)用70%乙醇清潔實(shí)驗(yàn)室和實(shí)驗(yàn)臺(tái)面，并打開(kāi)紫外燈消毒30分鐘，試驗(yàn)中使用過(guò)的吸頭、離心管等應(yīng)置于1mol/L HCL溶液中浸泡，消毒后集中處理，廢棄物置于有生物危害標(biāo)志的待處理區(qū)。7 每天下班前處理好廢棄物品，關(guān)好水、電、門(mén)窗。定期校準(zhǔn)和維護(hù)好PCR儀、離心機(jī)、水浴箱、冰箱等儀器設(shè)備。核心儀器設(shè)備應(yīng)做好使用登記工作。