第一篇：木本植物基因組DNA提取方法的對比研究開題報告

1.選題依據

1.1 論文題目及研究領域

1.1.1 論文題目: 木本植物基因組ＤＮＡ提取方法的對比研究 1.1.2 研究領域: 木本植物DNA的提取研究 1.2 論文研究的理論意義和應用價值

DNA是遺傳信息的載體,是最重要的生物信息分子,是分子生物學研究的主要對象,因此DNA的提取也應是分子生物學實驗技術中的最重要、最基本的操作，如不能有效的完成DNA提取方面的工作，那就根本談不上進行分子生物學方面的實驗。植物DNA的提取和純化是植物基因工程研究的基礎操作，實施分子標記，基因文庫的構建，基因分離及遺傳轉化和鑒定等都是以提取DNA為前提。如何簡捷高效地提取到純凈、合格的DNA分子，一直是植物生物學者關注的問題。

隨著DNA分子標記技術和重組DNA技術的發展，制備完整、純度較高的基因組DNA日益顯得重要。我們在進行木本植物DNA水平遺傳多樣性研究時，首先遇到的問題是如何快速獲得較完整、純度較高的基因組DNA。由于植物細胞與動物細胞不同，具有一層堅硬的細胞壁，且含有較多的多糖、色素、脂質和多酚等物質，給植物DNA提取帶來很多困難，特別是多糖和多酚類物質不易與DNA分開。相對于草本植物，多年生木本植物的次生代謝類物質含量更高，高質量的DNA提取難度更大[1]。

大多數植物DNA提取方法所提取得到的DNA粗提物中往往含有大量RNA、蛋白質、多糖、單寧和色素等雜質，這些雜質有時很難從DNA中除去，大多數蛋白質可通過酚-氯仿-異戊醇處理后變性、沉淀除去，絕大部分RNA可通過經RNase 處理后除去。但大多數木本植物富含多糖、多酚類物質，DNA常受到嚴重的多酚污染，造成DNA沉淀物難以溶解或溶液色深；多糖污染直接影響基因組DNA的限制性核酸內切酶的酶切效果。多酚類、多糖物質的污染會造成AFLP酶切連接等后續實驗效果差，甚至后續PCR沒有擴增產物[2]。在大多數木本植物基因組DNA的提取方法中，SDS法和CTAB法是目前最為常用的兩種方法。

本試驗以細胞生物學研究為基礎，以如何獲取高質量、高純度DNA為目的，比較CTAB法和SDS法紅豆杉和銀杏基因組DNA的提取效果，對兩種方法提取的DNA進行瓊脂糖凝膠電泳分析和紫外吸收分析，分別對兩種方法所提取的紅豆杉和銀杏基因組DNA的效率和質量進行分析，從中選出一種更適合木本植物基因組DNA的提取方法。

1.3 DNA提取研究概況和發展趨勢

Avery在1944年的研究報告中寫道：“當溶液中酒精的體積達到9/10時，有纖維狀物質析出。如稍加攪拌，它就會象棉線在線軸上一樣繞在硬棒上，溶液中的其它成份則呈顆粒狀沉淀。溶解纖維狀物質并重復數次，可提高其純度。這一物質具有很強的生物學活性，初步實驗證實，它很可能就是DNA（誰能想到！）”。對DNA分子的物理化學研究導致了現代生物學翻天覆地的革命，這更是Avery所沒有想到。Fricdrich Miescher ,瑞士生物學家，有機化學家。1868年醫學畢業以后，在著名的有機化學家Hoppe-Seyle的實驗室以膿細胞為材料，研究淋巴細胞的組成。1869年他從膿細胞的細胞核中分離出含有大量磷的“核素”即是DNA,是人類第一次真正提取的的DNA。

年代初,DNA被證明是所有生物最主要的遺傳物質。隨著生物化學、分子生物學、遺傳學的發展,基因工程和生物技術的創立,DNA的有關技術也得到了飛速發展。DNA提取方法成了這些研究和應用中最重要的技術之一。目前已經建立了用于各種不同目的的DNA提取方法,這些方法也被用于生物學,尤其是生物工程的各個方面。但是,對于不同的植物樣品,由于其組織成分的差異,采取的DNA 提取方法不完全一致。.文獻綜述

2.1 南方紅豆杉概況

紅豆杉屬(Taxus L．)植物屬紅豆杉科，為常綠喬木或灌木。紅豆杉(Taxus mairei)又名紫杉、赤柏松，是第三世紀孑遺植物，被稱為植物王國里的“活化石”，因其資源稀少，被列為世界珍稀樹種加以保護，在我國為珍稀瀕危物種。在幾千萬年的歷史長河中，紅豆杉是歷經強度陽光、低薄空氣、高溫干旱、嚴寒冰川等地球氣候巨變的考驗，演化遺留下來的物種。其樹體極大的適應存活能力所具有的各種生物石堿、化合物，既是本身生存的需要，也是現在被人類認識和開發的珍稀貴重藥物。南方紅豆杉廣泛分布福建、浙江、安徽、江西、湖南、湖北、四川等省，生于海拔1300米以下，喜濕潤的微酸性粘質土壤，多生長在山的中下部及溝谷旁，常與刺栲、絲栗栲、甜櫧、木荷、杜英、楓香、杉木等混生。2.2 南方紅豆杉的化學組分

根據國家標準共測定我國南方紅豆杉的平均化學指標分別為(10項): 原料含水率7.94﹪、冷水抽提物0.385﹪、熱水抽提物0.765 ﹪、乙醚抽出物2.855﹪、NAOH抽出物12.17 ﹪、苯醇抽出物1.391 ﹪、木素含量27.01 ﹪、半纖維素含量11.78 ﹪、綜纖維素含量65.5 ﹪、PH值5.33[3]。2.3 紅豆杉主要價值

紅豆杉因其次生代謝物質紫杉醇良好的抗癌效果而受到人類的關注，從紅豆杉樹皮和嫩葉中提取的紫杉醇，是繼阿霉素和順鉑之后被公認最好的廣普、強活性天然抗癌藥。紅豆杉除了重要的藥用價值以外，其獨特的外觀造型、四季常青的鮮艷綠色，又是不可多得的綠化樹種，具有很高的觀賞價值。其次紅豆杉屬植物木材由于其優良品質還是不可多得的木材樹種。2.4 銀杏概況

銀杏（Ginkgo Liloba L.）俗稱白果，公孫樹。最早出現于3.45億年前的石炭紀，曾廣泛分布于北半球的歐、亞、美洲，與動物界的恐龍一樣稱王稱霸于世，至50萬年前，發生了第四紀冰川運動，地球突然變冷，絕大多數銀杏類植物瀕于絕種，唯有我國自然條件優越，才奇跡般的保存下來。所以，科學家稱它為“活化石”，“植物界的熊貓”。2.5 銀杏主要價值

銀杏葉也具有重要的藥用價值。到目前為止已知其化學成分的銀杏葉提取物多達160余種。主要有黃酮類、萜類、酚類、生物堿、聚異戊烯、奎寧酸、亞油酸、蟒草酸、抗壞血酸、a-已烯醛、白果醇、白果酮等。中國科學院植物所等單位于60年代用銀杏葉研制出舒血寧針劑，經試驗對冠心病、心絞痛、腦血管疾病有一定的療效。同時，銀杏葉也可以作為農藥使用[4]。

3.實驗原理

2.1 CTAB法提取原理

CTAB(cetyltriethyammoniumb romide,十六烷基三甲基溴化銨)法是一種快速簡便提取植物基因組DNA的方法：先將新鮮的葉片放在液氮中研磨，破碎其細胞，然后加入CTAB分離緩沖液。再經氯仿-異戊醇抽體除去蛋白質，最后得到DNA。

2.2 SDS法提取原理

SDS法(Sodium dodecyl sulfate，十二烷基磺酸鈉)先將新鮮的葉片在液氮中研磨破碎其細胞壁，然后加入SDS使其細胞膜破裂。并同時將蛋白質、多糖等雜質同核酸分開。加入KAc可使SDS—蛋白質復合物轉變為更小的鉀鹽形式，使沉淀更加完全[5]。

2.3 紫外吸收法分析原理

組成核酸分子的堿基，均具有一定的吸收紫外線特性，最大吸收值在波長為25038 ［3］丁曉東，呂柳新.從頑拗植物荔枝中提取基因組DNA技術的研究［J］.應用與環境生物學報.2000，6(2)：142370.［5］王景雪, 孫毅, 高武軍.-種簡便實用的植物總DNA提取方法[J].山西大學學報，2000，23(3): 27139.［8］黃豐, 周聯等.植物中藥材總DNA提取方法比較[J].中藥新藥與臨床理,1999 ,10(1): 1814.［11］李思光，羅玉萍, 陳萬秋等.獼猴桃基因組DNA的提取及其RAPD擴增研究[J].南昌大學學報，2001，25(3):264–268.

第二篇：DNA提取方法和試劑作用匯總

1試劑的作用

氯仿的作用？

氯仿：克服酚的缺點；加速有機相與液相分層。

最后用氯仿抽提：去除核酸溶液中的跡量酚。（酚易溶于氯仿中）

用酚-氯仿抽提細胞基因組DNA時，通常要在酚-氯仿中加少許異戊醇，為什么？

異戊醇：減少蛋白質變性操作過程中產生的氣泡。異戊醇可以降低表面張力，從而減少氣泡產生。另外，異戊醇有助于分相，使離心后的上層含DNA的水相、中間的變性蛋白相及下層有機溶劑相維持穩定。

用乙醇沉淀DNA時，為什么加入單價的陽離子？

用乙醇沉淀DNA時，通常要在溶液中加入單價的陽離子，如NaCl 或 NaAc，Na+中和DNA分子上的負電荷，減少DNA分子之間的同性電荷相斥力，而易于聚集沉淀。DNA提取分為三個基本步驟

每個步驟的具體方法可根據樣品種類、影響提取的物質以及后續步驟的不同而有區別。

.細胞的破碎

細菌有堅硬的細胞壁，首先要破碎經胞。方法有三種;①機械方法：超聲波處理法、研磨法、勻漿法;②化學試劑法：用SDS處理細胞;③酶解法：加入溶菌酶或蝸牛酶，都可使細胞壁破碎。

利用研磨或者超聲破碎細胞，并通過加入去污劑以除掉膜脂。

加入蛋白酶，醋酸鹽沉淀，或者酚/氯仿抽提，以除掉細胞內的蛋白，如與DNA結合的組蛋白。將DNA在冷乙醇或異丙醇中沉淀，因為DNA在醇中不可溶而黏在一起，這一步也能除掉鹽分。另外，目前也有利用吸附過柱的方法提取DNA的商業化試劑盒。

DNA提取的幾種方法(1).濃鹽法

A.利用RNA和DNA在電解溶液中溶解度不同，將二者分離，常用的方法是用1M 氯納抽提,得到的DNA粘液與含有少量蛋白質 氯仿一起搖蕩,使乳化,再離心除去蛋白質,此時蛋白質凝膠停留在水相及氯仿相中間，而DNA位于上層水相中,用2倍體積95%乙醇可將DNA 鈉鹽沉淀出來.B.也可用0.15 MNaCL液反復洗滌細胞破碎液除去RNA,再以1MNaCL提取脫氧核糖蛋白,再按氯仿---異醇法除去蛋白.兩種方法比較,后種方法使核酸降解可能少一些.C.以稀鹽酸溶液提取DNA 時,加入適量去污劑,如SDS可有助于蛋白質與DNA 的分離。在提取過程中為抑制組織中的DNase對DNA 的降解作用,在氯化鈉溶液中加入檸檬酸鈉作為金屬離子的烙合劑.通常用.15MNaCL,0.015M檸檬鈉,并稱SSC溶液,提取DNA.（2）.陰離子去污劑法;用SDS或二甲苯酸鈉等去污劑使蛋白質變性,可以直接從生物材料中提取DNA.由于細胞中DNA與蛋白質之間常借靜電引力或配位鍵結合,因為陰離子去污劑能夠破壞這種價鍵,所以常用陰離子去污劑提取DNA

（3）.苯酚抽提法：苯酚作為蛋白變性劑,同時抑制了DNase的降解作用.用苯酚處理勻漿液時,由于蛋白與DNA 聯結鍵已斷,蛋白分子表面又含有很多極性基團與苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。離心分層后取出水層，多次重復操作，再合并含DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性質，用乙醇沉淀DNA。此時DNA是十分粘稠的物質，可用玻璃漫漫繞成一團，取出。此法的特點是使提取的DNA保持天然狀態

（4）.水抽提法:利用核酸溶解于水的性質,將組織細胞破碎后,用低鹽溶液除去RNA，然后將沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中,離心后收集上清液.在上清中加入固體氯化鈉調節至2.6M.加入2倍體積95%乙醇,立即用攪拌法攪出.然后分別用66%，80%和95%乙醇以及丙銅洗滌,最后在空氣中干燥,既得DNA樣品.此法提取的DNA中蛋白質含量較高,故一般不用.為除蛋白可將此法加以改良,在提取過程中加入SDS.1.動物來源的DNA的提取 1.1經典提取方法

酚抽提法、異丙醇沉淀法以及甲酞胺裂解法是提取DNA最為經典的方法，目前很多方法的改進都是在這些方法的基礎上進行的，這三種方法均利用蛋白酶K和十二烷基硫酸鈉(SDS)消化破碎細胞。在前兩種方法中裂解液先用酚/氯仿去除蛋白質，再分別用乙醇或異丙醇沉淀DNA。甲酞胺法是利用高濃度的甲酞胺解聚蛋白質與DNA的結合，然后利用透析來處理DNA樣品。這些經典方法獲得的DNA純度很高，能夠滿足各種試驗的要求，但操作繁瑣，用時長，且所用試劑具有一定的毒性。

1.2 玻璃棒纏繞法

該 法 用 鹽酸肌裂解細胞，然后將細胞裂解物小心鋪在離心管中的乙醇上，用一個帶鉤的或前端為U形的玻璃棒在這兩層液體的交界面慢慢攪動，沉淀出的膠狀DNA纏繞在玻璃棒上。玻璃棒上的DNA經多次乙醇浸泡并于室溫下蒸干乙醇，由膠狀逐漸回縮，然后浸人TE中過夜，使其重新吸水膨脹進而和玻璃棒分離。這種方法對操作技術要求較高，但簡單快速。

1.3 血細胞DNA的快速提取法

采用 非離子變性劑NP40(乙基苯基聚乙二醇)代替SDS裂解細胞，提取細胞核，然后用酚/氯仿抽提DNA。這樣從血液中分離獲得的DNA純度高，能夠滿足各種臨床檢驗和實驗的需要。也可采用NP40和Tween-20同時作用破碎細胞膜，以避免SDS對以后步驟的負面作用。Ba sun i等 [‘〕采用了4種常用的從血液中提取DNA的方法:High Pure Viral Nucleic 試劑盒法、QlAamp試劑盒法、Tri-PureTM試劑分離提取法以及經典酚抽提法，對通常作拋棄處理的血凝塊進行人DNA 及病毒DNA的抽提，發現前兩種方法可以迅速高效獲得目的DNA，從而建立了由血凝塊中提取DNA的方法，擴大了臨床檢驗樣本的來源。

1.4 玻璃顆粒吸附法

在該 法 中首先利用含異硫氰酸肌的細胞裂解液裂解細胞，然后加人含有能夠與DNA 結合的玻璃顆粒的緩沖液，經沉淀收集結合染色體DNA的玻璃顆粒，利用洗脫液進行洗脫獲得DNA。不僅玻璃顆粒可以與DNA 進行結合，一定大小的硅膠顆粒也可以與 DNA進行結合，據此，不少實驗工作者實踐了很多利用顆粒結合DNA 的提取方法。Pichler等[2〕在從抹香鯨(Physeter macrocephalus)牙齒及骨骼中抽提DNA時采用了一種以二氧化硅為吸附介質的方法，從抹香鯨標本骨骼組織中鉆取的少量粉末中獲得了足夠用于分析的DNA產物，此方法擴大了對稀有哺乳動物DNA研究的取材范圍。Caldarelli-stefano等[3〕在從福爾馬林固定、石蠟包埋的人體組織標本中提取DNA時利用小磁珠作為結合核，也獲得了理想的純化 DNA。很多試劑公司也依此設計生產了許多顆粒提取試劑盒，Pint。等[4]就探討了采用 Gibc。公司的GlassMAX系統，對福爾馬林固定的組織進行DNA提取的具體操作方法，目前這些試劑盒在臨床上廣為應用，省時省力。

1.5 三乙醇胺月桂基硫酸鹽(TLS)法

由于 常 規 方法中使用的蛋白酶K的水解條件不好掌握，采用TLS來提取組織、細胞以及外周血DNA可以克服這一弊端。TLS是一種較強的表面活性劑，將其直接作用于細胞或組織勻漿，可迅速溶解細胞膜、核膜，而且蛋白質與其結合后即失去對DNA 的結合，進一步的純化可采用常規方法。

1.6 臨床病理標本的DNA提取方法

由于 PC R技術不僅可用于基因分離、核酸序列分析，還可用于突變體和重組體的構建、基因表達調控研究、基因病的診斷及腫瘤發生機理的探討等。近年來，PCR技術已廣泛應用于病理學研究，尤其對福爾馬林固定石蠟包埋病理標本進行相關的研究更成為關注的焦點。對于從這些病理標本中提取 DNA的方法研究也很多。一般采用酚/氯仿抽提法，該法雖然效率較高，但費時費力，而且其操作中要求多次離心，增加了樣品污染的可能性。近年來很多高效靈敏的方法在實踐中得以采用，這些方法通常采用加熱或微波法〔s〕去除包埋的石蠟，使用Sephadex G-5。柱色譜或鹽析法[s7等去除蛋白質。高文濤[71等在研究福爾馬林固定石蠟包埋組織 DNA提取方法對PCR的影響時，發現在組織切片中加人鰲合樹脂(Chelating Resin，亞氨基二乙酸)提取獲得的DNA可取得較好的PCR擴增結果。Coombs等〔s〕則采用熱循環方法，將標本上的蠟融人樣品溶液，在酶的作用下進行裂解，然后用Chelex-100進行吸附，離心去蠟，這種方法安全、簡便、有效、經濟。1.7 鹽析法

該 法用 飽 和氯化鈉代替有機溶劑去除蛋白質，所獲得的DNA質量可以滿足PCR模板的要求，但產率相對較低，純度較差。譚建明等[9]對上述鹽析法進行了改進，即將處理過的樣本加人SDS和蛋白酶K后，在56'C 消化1h，然后用飽和氯化鈉沉淀蛋白質，并經離心除去，上清直接用乙醇沉淀DNA。該法簡化了DNA的抽提步驟，可用于人體各種樣本DNA的提取，所獲DNA的純度可以滿足各種檢測的需要。植物來源的DNA提取

利用 基 因工程手段對植物進行定向改造，已成為當今植物育種學發展的一個新領域，植物基因工程操作離不開植物基因組總 DNA的制備，不同植物的核酸結合蛋白的情況各不相同，因而要采取不同的提取方法[10]。由于植物中次生代謝產物— 多酚類化合物可介導DNA降解，而多糖的污染也是影響植物DNA純度最常見的問題，這些多糖能抑制限制酶、連接酶及DNA聚合酶等酶類的生物活性。因此要從富含多酚和多糖的植物組織中分離獲得高質量的基因組 DNA也并非易事[11l。目前采用的方法有以下幾種。

2.1 十六烷基三乙基澳化按(CTAB)法

CTAB 是 一種陽離子去污劑，它能與核酸形成復合物，這些復合物在低鹽溶液中會因溶解度的降低而沉淀，而在高鹽溶液中可解離，從而使DNA和多糖分開，再用乙醇沉淀DNA 而除去CTAB。在該法中使用的聚維酮(PVP)與多酚結合形成復合物，從而可有效避免多酚類化合物介導的DNA降解[121。王卓偉等[13〕在對桑葉DNA提取方法研究過程中發現PVI〕還能有效地去除多糖。羅志勇等[14〕在研究中對這種方法進行了幾點改進: ①提高CTAB的濃度;②對于含多酚類較多的植物，增加CTAB提取緩沖液中琉基乙醇的含量，同時加人PVP使其與多酚類物質結合形成復合物;③增加低鹽沉淀緩沖液的量;④增加高鹽溶液中鹽的濃度。用改進的方法從人參、西洋參、三七等藥用植物中分離獲得了高純度的DNA, Porebski等[1s]在沉淀粗提 DNA時，將提取緩沖液中氯化鈉的濃度提高至2.5m o卜L-’以使DNA在高鹽緩沖條件下優先沉淀，可更有效地除去多糖。Stein等[16] 對傳統的CTAB法進行了優化，創建了一種從新鮮草本植物樣本中提取DNA的方法。首先在特制的有96個孔的托盤上種植植物樣本，并依照不同樣本在托盤中的位置進行編號，然后取適量植物葉子分裝在充滿提取液的塑料袋中，除去袋中的空氣并封口，再用特制的手工勻化器將各袋中的樣本混勻，56`C孵育 1h后將袋中的液體取出進行離心以及DNA 的沉淀。Xin等〔17〕則采用簡易的96孔托盤作為提取時的容器，將多種植物樣本經研磨處理后分別放在不同的孔中進行提取，在一天內由一人就可完成上千個樣本的DNA提取，為高通量植物基因分析及篩選提供了極大的便利。

2.2 SDS法

為 了避 免 CTAB法試驗步驟多、操作繁瑣的不足之處，近年來又提出了利用SDSTris-Cl--EDTA等直接裂解細胞使其釋放出DNA的方法]。在該法后續的DNA純化過程中通常采用酚/氯仿處理，但對于植物 DNA純化不是一個很好的選擇，因為酚的使用可降低DNA的提取效率和純度。在用該法提取DNA的過程中采用較大的離心力和較長的離心時間，然后用氯仿一異戊醇代替酚來去除變性蛋白質，從而克服了由于酚的摻人及殘留對以后酶切帶來的困難。用琉基乙醇代替SDS，對大豆DNA分離提取能夠更有效地去除蛋白質，而且可以有效防止褐變，獲得天然雙鏈高分子量的DNA產物，并且減少了SDS對 PCR、隨機擴增多態性DNA技術(Random amplified polymorphic DNA, RAPD)等操作的影響。在對辣椒DNA進行提取時為了提高DNA的產率將待提取的植物材料首先在液氮中研磨成粉末，并且針對辣椒葉子中多酚類物質極少的特點將其中的加人PVP的步驟省去，消除了PVP對以后操作的影響.2.3 氯化千法在對稱猴桃的基因組DNA 提取過程中選用了氯化節法，與其他方法相比該法的得率較高，其原因可能是氯化節不僅可與植物細胞壁上的多糖經基反應生成醚，而且與細胞液中多糖物質的All基反應，起到破壞糖鏈的作用，利于DNA的釋放和提純。

2.4 高鹽低pH法

該 法 中 所用的提純試劑僅為無機鹽和異丙醇。通常采用的無機鹽為醋酸鉀，低pH的醋酸鉀是有效的蛋白質沉淀劑。與一般氯仿一異丙醇反復抽提去除蛋白質的操作相比該法操作更方便省時，所需樣品量少，適用于 瀕危植物DNA的提取。

2.5 果膠酶法

Ste ve n等 [2s采用果膠酶對植物細胞破碎后的抽提混合物進行消化處理使與DNA共沉淀的膠狀物質分解成小的片段，從而無法與DNA一起沉淀下來，降低了DNA的純化難度，提高純化效率。微生物來源DNA的提取

常規 的微 生物DNA提取多是根據某種微生物的具體特點選擇合適的方法。在實際的科學研究過程中，很多科學工作者通過實踐總結出許多快速實用的提取方法，現擇其中比較典型的加以總結。

3.1 細菌質粒的提取方法

質粒是獨立于細菌染色體DNA之外的環狀DNA，它能攜帶外源基因進人細菌進行擴增，或表達外源基因，是基因工程中常用的載體，在DNA重組技術、DNA測序、轉基因等方面具有廣泛的應用。對于細菌質粒的提

取比較經典的方法有:堿裂解法、煮沸法、SDS裂解法以及Triton-溶菌酶裂解法等。這些方法的選擇取決于質粒的大小、細菌菌株的性質等。Keunosky等GE_發展了一種以 Zn'+誘導DNA沉淀的方法，在該法中利用一定濃度的ZnCl:溶液使一定體積的細菌菌液質粒DNA大量沉淀，無需多次離心，大大簡化了抽提的步驟。

近年 來，一些生物技術公司，比如Promega公司及Qiagen公司等紛紛推出質粒抽提試劑盒，這些試劑盒多運用樹脂材料或硅膠來特異性的吸附質粒DNA，提取過程用時少，效率高。

3.2 真菌DNA提取方法

對 真菌 DNA的提取關鍵是破碎細胞，通常采取酶解破壁法或以液氮冷凍處理增加細胞壁脆性的物理破壁法。在這兩種方法中酶解破壁法較為簡單，易于操作和控制，而物理破壁法在處理過程中容易造成細胞核的大量破損。在提取獲得核酸一蛋白質復合物后，對其中蛋白質的沉淀也多采用傳統的氯仿一異戊醇沉淀法或高鹽沉淀法。韓利剛等C25用CTA13法直接從絲狀真菌的新鮮菌絲中提取DNA，并將所提取的DNA進行 RAPD，得到了較清晰的擴增圖譜。Loeffler 等[Z6為滿足快速靈敏準確的臨床檢驗的需要，利用MagNA Pure LC系統建立了一種實用的快速提取方法，該法自動化程度高，避免了可能的交叉污染。Manian等[z7〕在對真菌進行DNA抽提時采用幾個循環的快速制冷、煮沸以破碎真菌細胞壁，并通過Qiagen 公司的QIAquick DNA純化柱，迅速從極微量的真菌中獲得高純度的DNA大分子。3.3 結核桿菌DNA的提取方法

利用 PC R微孔板雜交技術檢測臨床標本中結核桿菌DNA是診斷結核桿菌感染的一種快速靈敏和特異的方法。從不同的臨床標本中獲得DNA是檢測準確和成功的關鍵。而不同來源的結核桿菌又分別受到不同來源材料的影響，所以提取方法各不相同。同時由于結核桿菌的細胞壁比較厚不易破碎，一般的微波法、異硫氰酸肌法、凍融法等難以破壞結核桿菌的細胞壁。通常采取的方法有:經典酶一酚一氯仿法，堿一SDS裂解法，堿裂解煮沸法，超聲裂解法，Chelex-100 法，玻璃粉一硅吸附法等。楊正林等[28〕通過對以上幾種方法的比較發現玻璃粉一硅吸附法操作簡單，假陽性低，適合臨床檢測使用。3.4 土壤微生物總DNA的提取方法

土壤 中 細 菌的含量豐富，種類齊全，從中提取細菌DNA可用于檢測不可培養的細菌，跟蹤某些目標菌或重組基因在自然環境中的行為，也可用來解釋土壤微生物生態系統中的基因的多樣性及其隨環境的變化。從土壤中提取和純化DNA是最關鍵的技術之一。Courtoi:等[29]對比了在土壤中直接裂解微生物體、然后提取DNA和先將微生物菌體通過梯度離心與土壤顆粒分開再進行提取的方法，利用PCR技術以及雜交技術檢測不同方法獲得DNA的種類和純度，發現前一種方法具有更高的效率，能夠提取獲得較多微生物物種的 DNA。張瑞福等[30]采用SDS高鹽提取法和透析袋回收法對9種不同來源的土壤進行微生物DNA的提取，與通常采用的對菌體細胞的超聲破碎法以及對粗提DNA的微型柱純化法相比，既保證了一定提取與回收效率，又兼顧了DNA的質量，使DNA在提取和純化過程中不會受到損傷。4 海洋生物DNA的提取方法

海洋 是 地 球上最大的生物資源庫，同時由于海水的保護使海洋生物變化很少，物種得到較好的保存，這樣就為研究生命現象的基本問題提供了豐富的資料。在利用這些資源探討諸如生命的起源、生物進化、生物與環境的關系、改造海洋生物以為人類服務(如生產某種藥物)時離不開對生物核酸的研究。對于海洋來源的動物、植物、微生物由于其不同于陸生生物的組織和細胞結構特點往往采用不同的DNA提取方法。

張海 琪 等 [31_在對不同方法保存的大黃魚(Pseudosciaena crocea)肌肉樣品基因組 DNA進行提取時發現，經福爾馬林、乙醇及含有EDTA的乙醇保存的樣品可以同鮮活樣品和冷凍樣品一樣獲得基因組DNA，但相比之下采用乙醇作為固定劑更方便快速，所提取的DNA用于RAPD分析，獲得了滿意的效果。楊文新等[32〕利用75%的乙醇固定鮑魚(Haliotis discus)樣本并進行DNA的提取，證明用乙醇固定海洋動物組織是一種切實可行的方法，材料處理后可同步提取，增加了實驗的同步性、可比性，適用于大量樣本的提取。由于組織中含有許多DNA酶，絕大多數DNA酶需要一個二價陽離子作為輔助因子，因此采用含適量EDTA的乙醇固定劑是野外標本采集和運輸的一種更簡便有效的方法。

韓兵 社 等 33:針對傳統的有機溶劑提取工藝進行改進，應用多種萃取液體系從廢棄物魷魚肝臟中提取核酸，與原工藝相比，核酸提取產量提高30%-60%，整體工藝得到簡化，而且避免了有機物的殘留。

赤 潮 是 在特定的環境前提條件下，海水中的某些浮游生物、原生動物或細菌爆發性增殖或高度聚集而引起水體變色的一種有害生態現象，對海洋漁業、水產資源以及人類的健康造成很大的威脅。發生赤潮的生物類型主要為藻類，銅綠微囊藻(Microcytis aeruginosa)是造成赤潮的藻類之一。陸源等[34〕用乙醇乙醚混合液對純化的銅綠微囊藻作預處理，破壞了其膠質鞘，從而使蛋白酶K和 SDS能更好地直接作用于其細胞壁，細胞內的DNA釋放完全，提高了總DNA的得率。通過提取獲得的DNA有助于開展對有害藻類的研究，為防范赤潮提供依據。在對 紫 菜(Porphyras p.)進行DNA提取時，郭寶太等[35〕先用海螺酶處理樣品制備紫菜體細胞，然后用SDS和蛋白酶K裂解細胞提取總DNA，再用Wizard DNA clean-up;樹脂進行純化。經海螺酶處理的紫菜細胞解決了通常采用的液氮破碎細胞后裂解物勃稠、DNA得率低且有嚴重的多糖污染等難題。但這種方法對植物組織需求量較多，不適于個體體積小的紫菜。劉必謙等[36〕采用美國Roche公司的DNA Isolation Kit for Cell and Tissue和上海生工公司的UNIQ-10小量柱式基因組DNA提取試劑盒對個體體積較小的圓紫菜(Porphyra suborbiculato)、鐵釘菜(Ishige okamurae)等進行DNA 的提取，獲得高純度的基因組DNA，完全能滿足酶切片段長度多態性(Amplified Fragment Length Polymorphism, AFLP)技術的需要。

陳子 桂 等[371以海洋尾絲蟲(Uronema marinum)為材料，針對纖毛蟲難以建立培養以及個體豐度不高等特點，就微量條件下提取DNA的方法進行了探討，成功地獲得了活體直接提取、活體酚/氯仿抽提、固定標本直接提取以及固定標本酚/氯仿抽提等四種簡便有效的微量DNA提取方法，解決了纖毛蟲微量DNA提取的困難。

綜合 DN A的提取方法，雖然不同生物 DNA的提取方法不盡相同，但各種提取方法也有很多相通之處，可以相互借鑒。隨著生物技術的飛速發展，對這一技術的經驗總結將會越來越多，一些生物領域新的DNA提取方法也將逐漸固定下來，更為簡捷、高效的方法也必將出現，為基因工程提供更高純度的DNA.1）學習并掌握動物組織總DNA的提取方法及其原理。（2）從肝臟組織中提取到一定量的純凈的DNA樣品。【實驗原理】

DNA是一切生物細胞的重要組成成分，主要存在于細胞核中。通過研磨和SDS作用破碎細胞；苯酚和氯仿可使蛋白質變性，用其混合液（酚：氯仿：異戊醇）重復抽提，使蛋白質變性，然后離心除去變性蛋白質；RNase降解RNA，從而得到純凈的DNA分子。【儀器、材料、試劑】

（一）儀器 1．高速離心機 2．烘箱 3．冰箱 4．水浴鍋 5．微量移液器 6．高壓滅菌鍋

（二）材料 1．生理鹽水

2．十二烷基硫酸鈉（SDS）3．三羥甲基氨基甲烷（Tris）4．乙二胺四乙酸（EDTA）5．飽和酚 6．氯仿 7．異戊醇 8．無水乙醇 9．75%乙醇 10．蛋白酶K 11．RNase酶

12．手術剪刀、鑷子、吸水紙 13．微量取液器

14．研缽、1.5mL 離心管、一次性手套、1.5mL離心管架、記號筆

（三）試劑配制 1．Tris–HCL 1mol/L PH8.0 50ml 配制方法：

40ml雙蒸水，6.057g固體Tris放入燒杯中溶解，用濃鹽酸調PH值到8.0，轉移到50ml容量瓶中，加入雙蒸水定容，搖勻后，轉到準備好的輸液瓶中，貼上標簽，高壓滅菌后，降至室溫，4℃保存備用。

2．生理鹽水: 0.85%NaCL 100ml 配制方法：

在20ml雙蒸水中溶解0.85g固體NaCL，加水定容至100ml，搖勻后，轉到準備好的輸液瓶中，貼上標簽，高壓滅菌后，降至室溫，4℃保存備用。3．EDTA 0.5mol/L PH8.0 50ml 配制方法：

將9.08g的EDTA·Na2·2H2O溶解于40ml雙蒸水，用1g的NaOH顆粒（慢慢逐步加入）調PH值到8.0，用50ml容量瓶定容，如果EDTA難溶，先加NaOH溶解，然后逐步加EDTA·Na2·2H2O。

4．TES緩沖液（釋放DNA）100ml 配制方法：

將0.5844g的5 mol/lNaCl溶解于80ml雙蒸水，在分別加入1ml的0.5 mol/l EDTA、0.2ml的Tris-HCl(pH=8.0)，加定容至100ml, 搖勻后，轉到準備好的輸液瓶中，貼上標簽，高壓滅菌后，降至室溫，4℃保存備用。

5．10% SDS（變性劑 破細胞壁）100ml 配制方法：

將10g的十二烷基硫酸鈉（SDS）溶解于80ml雙蒸水于68℃加熱溶解，用濃HCl調至PH=7.2，定容至100ml，搖勻后，轉到準備好的輸液瓶中，貼上標簽，4℃保存備用。6．蛋白酶K（降解蛋白質）：20mg/mL 無菌三蒸水溶解。7．RNA酶（降解RNA）配制方法：

將胰RNA酶（RNA酶A）溶于10mmol/L的Tris·CL（PH7.5）、15mmol/LNaCL中，配成10mg/ml的濃度，于100℃加熱15min，緩慢冷卻至室溫，分裝成小份存于–20℃。8．氯仿：異戊醇=24：1 100ml 按24:1的比例加入氯仿、異戊醇，搖勻，轉到準備好的瓶中，貼上標簽，4℃保存備用。9．TE緩沖液（溶解DNA）PH8.0 50ml 配制方法：

將0.5ml 的10mmol Tris-HCl(PH8.0)、0.1ml的0.5mol/l EDTA(PH8.0)加入到50ml的容量瓶中，調PH8.0定容至50ml搖勻后，轉到準備好的瓶中，貼上標簽，高壓滅菌后，降至室溫，4℃保存備用。【實驗步驟】

1．組織塊解凍，用生理鹽水洗去血污，剪取約0.5g組織，放入1.5ml離心管中，剪碎。2．加入0.45ml TES混勻，再加入50ul SDS（10%），5.0ul蛋白酶K（20mg/ml），充分混勻后，于56°C保溫4-6h，每2h搖1次。3．放置到室溫，加入等體積飽和酚（500ul），顛倒混勻，10000r/m，離心10m，分離水相和有機相，小心吸取上層含核酸的水相，到一個新的1.5ml離心管。4．加入等體積酚：氯仿：異戊醇（25：24：1），顛倒混勻，10000r/m，離心10分鐘，取上層轉移到新的1.5ml離心管中。5．加入等體積氯仿：異戊醇（24：1），顛倒混勻，10000r/m，離心10分鐘，取上層清液到一個新的1.5ml離心管。6．加入2.5倍體積的-20°C預冷的無水乙醇沉淀DNA，觀察現象。7．12000 r/m，離心10分鐘，棄乙醇。8．-20°C保存的75%乙醇洗滌，10000 r/m，離心5分鐘，去乙醇，55°C干燥DNA。9．加入適量TE溶解DNA（具體依DNA的多少而定），-20°C保存備用。【注意事項】

1．抽提每一步用力要柔和，防止機械剪切力對DNA的損傷。2．取上層清液時，注意不要吸起中間的蛋白質層。3．乙醇漂洗去乙醇時，不要蕩起DNA。

4．離心后，不要晃動離心管，拿管要穩，斜面朝外。

第三篇：教育研究方法開題報告

桂林市農村留守兒童教育問題研究”課題

開題報告

數學科學學院 數學與應用數學 201010700015 徐小鴻 一．研究的背景

所謂留守兒童，是指父母雙方或一方流動到其他地區工作，孩子留在戶籍所在地不能和父母共同生活在一起的兒童,大規模的人口流動形成了一個特殊群體：留守兒童。父母外出打工后，孩子留在了家中(主要在農村)，他們被稱為留守兒童。

由于地理和歷史等原因，我國不同區域的經濟發展很不平衡，農村人地矛盾尖銳。在市場經濟迅猛發展的推動下，大量農村剩余勞動力為改變生存狀況外出務工，其中大部分為夫妻一同外出，因經濟等原因無法將子女帶在身邊，由此引發“留守兒童”問題。由于留守兒童多由祖輩照顧，父母監護教育角色的缺失，對留守兒童的全面健康成長造成不良影響，“隔代教育”問題在“留守兒童”群體中最為突出。

據調查顯示，父母外出打工后，與留守兒童聚少離多，溝通少，遠遠達不到其作為監護人的角色要求，而占絕對大比例的隔代教育又有諸多不盡人意處，這種狀況容易導致留守兒童“親情饑渴”，心理健康、性格等方面出現偏差，學習受到影響。

二、研究目的：

課題研究、實施的主要目的在于將留守兒童的這一特殊群體的問題與社會轉型期少年兒童發展中普遍存在的共性問題區別開來，真實、全面地了解留守兒童的心理、學習、生活狀態，了解留守兒童的教育狀況、分析留守兒童長遠發展趨勢和中國社會的長遠發展趨勢，探索有效推進留守兒童教育、發展的方法和手段，為學校和政府相關部門制定政策提供背景資料和學術支持。

三、課題研究的價值

1、通過本課題的研究，找到農村留守兒童的學習、生活和行為習慣方面存在的問題，分析這些問題產生的原因。

2、加強家校聯系，對留守兒童的學習、生活和行為習慣進行指導，培養留守兒童健全的個性心理品質及社會適應能力。

3、有計劃地推行行之有效的措施與方法，狠抓落實，全面推廣“留守兒童之家”工程，為留守兒童創建健康、安全、平等的成長環境。

四、國內外相近課題研究情況： 由于國外國情的差異，留守兒童比例較少，留守兒童教育問題并不十分突出，所以相關的課題研究基本沒有。

國內對留守兒童問題的關注，主要是近幾年才有的。中央教科所和部分市縣教育部門對留守兒童教育問題的研究逐漸增多，大多正在課題研究過程。

五、研究的方法 1、文獻資料法

搜集、整理與課題有關的教育教學理論，為課題研究提供充實可行的理論依據。、問卷調查法

抽樣調查桂林市農村的一些學校留守兒童基本情況及存在的問題。3、教育實驗法

對留守兒童與其他學生進行比較實驗研究，以便發現、驗證因果規律。4、經驗總結法

對收集的資料和實驗研究結果主要運用經驗總結法，探求留守兒童的教育方法和手段。5、案例研究法

選擇恰當的學生樣本，通過跟蹤調查、教育引導，摸索留守兒童教育的一般規律。

六、正文提綱：

1、桂林市農村留守兒童基本情況調查研究。

2、桂林市農村留守兒童生存現狀分析。

3、桂林市農村留守兒童教育中存在的問題及產生原因。

4、桂林市農村留守兒童個案研究。

5、桂林市農村留守兒童教育的對策與建議。

七、進度安排

第一階段：準備階段（2013年4月15――2011年4月30）

計劃開題，收集資料調查桂林市留守兒童教育現狀，確定研究子課題，搜集已有研究成果，學習理論，寫出研究實驗方案。

第二階段：實驗階段（2012年5月――2012年5月）

堅持學習、實踐、研究。邊實施，邊改進，邊研究，積累收集資料，總結歸納桂林市農村留守兒童教育存在的問題，研究桂林市農村留守兒童教育的對策，撰寫階段研究報告、典型案例分析或論文。

第三階段：結題階段（2013年6月――2013年6月）收集、整理實驗原始資料，撰寫實驗課題研究報告和課題總結，進行結題驗收和研究成果交流。

八、目前的困惑

1、怎么樣做到盡可能深入了解留守兒童的真實情況，做到數據的均衡性。

2、怎樣能和留守兒童的父母做一個交流，探討下有關留守兒童中的一些問題在那些父母心里的真實想法，或者讓他們重視孩子身心成長的重要性。

九、參考文獻 ［1］ 徐群．關注留守兒童教育與創建和諧新農村［J］．現代農業科技，2007（11）:156-157．

［2］ 常青.農村留守兒童人格特征研究——以江西玉山縣為例［D］．華東師范大學碩士論文，2007：17-23． ［3］ 方銘琳．留守兒童的關愛教育機制［J］．中國農村教育，2007（10）:32．

第四篇：15年開題報告研究方法

15年開題報告研究方法

隨著新課程改革的不斷深人，“教師成為研究者”的觀念逐漸深人人心。開展和參與課題研究是教師獲得自我持續發展能力的最佳途徑。事實證明，通過開展課題研究，邊學習邊做課題，邊研究邊實踐，逐漸成為研究型的教師不乏其人。

課題研究是教育科研活動的一項重要內容。“凡事預則立，不預則廢”。對于課題研究，開題報告如同建筑師的藍圖。有了好的開題報告，才能使研究工作者有計劃、有系統、有組織地開展研究工作，以保證課題研究任務的順利完成。因此，制定開題報告是課題由設想轉化為實際行動的關鍵步驟。當前許多教師由于過去從未做過課題研究，現在要申報課題，撰寫課題開題報告不知從何人手。為了使廣大教師更加積極而有效地開展課題研究活動，培養、提高教師撰寫課題開題報告的能力和水平，本文從課題開題報告的含義、作用、結構等方面來談教師應該如何規范撰寫開題報告，力求對教師提供一點啟示。

一、課題開題報告的含義與作用

著名的物理學家愛因斯坦說過，提出一個問題比解決一個問題更重要。何謂有價值、有創見性的問題?這樣的問題從何而來呢?這需要研究者長期實踐、細心觀察和深思熟慮。當自己提出的課題得到上級認可后，就要把自己的研究方案設計好，即撰寫科研課題開題報告。

課題開題報告就是課題研究方案的設計、規劃和制定。換言之，就是當課題方向確定之后，課題負責人在調查研究的基礎上撰寫的課題實施計劃。開題報告主要說明這個課題有價值進行研究，自己有條件進行研究以及準備如何開展研究等問題，也可以說是對課題的論證和設計。

撰寫課題開題報告是提高選題質量和水平的重要環節，是創新新知，不是可有可無的。正如學者文翁說過，“搞好開題報告的主要目的是促使大家理清研究思路，完善研究設計”。制定課題研究計劃和安排，是為解決自己提出的問題提供探索的途徑。課題開報告初步規定了課題研究各方面的具體內容和步驟，對整個研究工作的順利開展起著關鍵的作用。對于科研經驗較少的人來講，一個好的方案，可以使他們明確課題研究的方向，避免發生進行一段時間后不知道下一步干什么的情況，保證整個研究工作有條不紊地進行。可以說，課題開題報告水平的高低，是一個課題質量與水平的重要反映。沒有科學的開題報告，就沒有科學而有價值的成果。隨著教育科研管理工作規范化不斷加強，開題論證問題越來越受到教育科研管理部門的重視。

二、撰寫課題開題報告的基礎性工作

寫好科研課題開題報告要了解其基本結構與寫法，但“汝果欲學詩，功夫在詩外”，重要的還是要做好基礎性工作。首先，要了解別人在這一領域研究的基本情況。研究工作最根本的特點就是要有創造性，熟悉了別人在這方面的研究情況，才不會在別人已經研究很多、很成熟的情況下，重復別人走過的路，而是站在別人研究的基礎上，從更高層次、更有價值的方面去研究;其次，要掌握與研究課題相關的基礎理論知識。理論基礎扎實，研究工作才能有一個堅實的基礎，否則，沒有理論基礎，你就很難深人進去，很難有真正的創造。因此，我們進行教育科學研究，一定要多方面地收集資料。要加強理論學習，只有這樣制定出的開題報告才能更科學、更完善。

三、課題開題報告的結構

撰寫開題報告是進行科研課題申請后的首要工作。通過開題報告的思考與寫作可以幫助我們清楚地了解自己為什么要做這個課題，究竟想做什么，想得到什么，怎么做，能否達到自己的預期目標?若分析后覺得不現實，則可以立即調整自己的方向和目標，使課題目標的達成有可能性，從而避免“大題小作”或“小題大作”。課題開題報告的寫法根據課題研究的類別略有不同。但一般地說，科研課題開題報告主要包括以下幾個方面:

1.課題研究的背景

2.國內外同一研究領域的現狀與趨勢分析、本課題與之聯系和區別

3.課題研究的實踐意義與理論價值

4.課題核心概念的界定

5.課題研究的目標

6.課題研究的內容(所要解決的主要問題)

7.課題研究的過程

8.課題研究的方法

9.預期研究成果

10.完成課題研究的可行性分析

11.參考文獻

四、課題開題報告撰寫規范

(一)課題提出的背景

首先，要闡明課題研究的背景，即根據什么、受什么啟發而進行這項研究的。因為任何課題研究都不是憑空來的，都有一定的背景和思路。其次，要闡明為什么要研究這個課題、研究它有什么價值，能解決什么問題。一般可以先從現實需要方面去論述，指出現實中存在這個問題，需要去研究，去解決，本課題的研究有什么實際作用，然后，再寫課題的理論和學術價值，最后就是所要解決的主要問題，課題研究所要解決的主要問題要有針對性、可操作性，這是課題研究的生命力所在。解決的重要問題與提出的背景間有著必然的、照應的聯系，不能游離或架空。

這些都要寫得具體，不能漫無邊際地空喊口號，寫成諸如堅持黨的教育方針、實施素質教育、提高教育教學質量等一般性的口號。一位高中化學教師在課題開題報告中對其課題意義是這樣寫的:“高考實施3十x方案后，化學學科作為一門選考科目，其教育、教學必將受到一定影響。如何在當前的形勢下進一步提高高中化學教學和教育水平，這是化學工作者所面臨的一個急待解決的問題。本課題正是以3十x對高中化學教學的影響為引線，以1999屆至xx屆為觀察樣本，運用觀察、統計、訪問等現代教育科學研究方法，……研究如何在3十x實施過程中調整教學模式，提高學生綜合素質等問題，為在教學改革的新形勢下提高高中化學教學水平進行有益的探討”。這樣有針對性地寫使別人一看就覺得科學性、實用性比較強，的確有價值。

(二)國內外同一研究領域的現狀與趨勢分析、本課題與之聯系和區別

闡述這部分內容必須采用文獻資料研究的方法，通過查閱資料、搜索發現國內外近似或界于同一課題研 究的歷史、現狀與趨勢。

歷史背景方面的內容：按時間順序，簡述本課題的來龍去脈，著重說明本課題前人研究過沒有?哪些方面已有人作過研究?取得了哪些成果?這些研究成果所表達出來的觀點是否一致?如有分歧，那么他們的分歧是什么?存在什么不足，通過歷史對比，說明各階段的研究水平。

現狀評述，重點論述當前本課題國內外的研究現狀，著重評述本課題目前存在的爭論焦點，比較各種觀點的異同，闡述本課題與之聯系及區別，力求表現出自己課題研究的個性及特色。這一部分的內容應力求精當，力求體現自身研究的價值。

發展方向方面的內容：通過縱(向)橫(向)對比，肯定本課題目前國內外已達到的研究水平，指出存在的問題，提出可能的發展趨勢，指明研究方向，提出可能解決的方法。

(三)課題研究的實踐意義和理論價值

實踐意義，指向操作層面，即通過課題研究對學校、教師、學生的可持續發展有什么促進，在具體的教育教學實踐中有哪些好處。它的闡述是通過假設關系，勾勒出通過研究可能會或一定會產生的實踐效果。

中小學的教育科研更多地取向于應用研究和發展研究，在理論方面的學術研究價值可能比較匱乏，但也不可否認，通過研究，可能達到了對某一相關理論的細化和補充，對某一理論進行了具體闡述與充實，或許還會產生賦予全新內涵的實用理論。這部分內容有就寫，無則免。

(四)課題核心概念的界定

界定即定義，課題界定，即對課題的詮釋，對課題的核心概念進行說明。采用歸納和演繹的方法，引用教育理論、整合文獻知識等，以分段或標題陳述的形式確定概念及其內涵與外延，采用分——總的方法，對課題中的研究對象、范疇、方法，抽取出本質屬性分別給予概括，最終形成對整個研究課題名稱的科學界定。

如：在《培養學生創新精神和實踐能力策略研究》這個課題中，對課題的界定為：

本課題的研究就是圍繞著教育改革與發展的核心問題，運用心理學、教育學、社會學理論和知識，積極探索與研究培養學生創新精神與實踐能力的途徑、方法、手段及學校環境等方面的問題，為職業學校進行學生創新精神與實踐能力的培養提供可借鑒的實踐模型。

創新精神是指人的綜合性的積極穩定的創造性心理品質，是人們在認識世界、改造世界時表現出來的一種不因循守舊而積極求新的精神，是驅動外顯創新行為的內隱動力。人的一切創新活動都是以創新精神為基礎，沒有創精神便沒有人的一切創新活動。因此人類的創新精神是創新活動的根本動力與靈魂。

實踐能力是指人們運用理論知識、操作、分析、解決問題的能力。

支撐性理論也就是課題研究的理論依據。理論支撐行動，科學的理論是科學研究的保證。比如：我們要進行活動課實驗研究，就必須以課程理論、學習心理學理論、教育心理學理論為研究試驗的理論依據;進行教育模式創新實驗研究，就必須以教學理論、教育實驗理論為理論依據

(五)課題研究的目標

課題研究的目標就是通過研究，要達到什么目標?研究的目標是比較具體的，不能籠統地講，必須清楚地寫出來。只有目標明確而具體，才能知道工作的具體方向是什么，才知道研究的重點是什么，思路就不會被各種因素所干擾。研究目標一般包含以下三方面：

1.教師：通過研究希望獲得某一(些)教育教學規律，落實在知識產品上，表現為教師教育知識的增長，教育經驗的豐富，教育方法的創新和教育理論的發展等。

2.學生：通過研究所要達到的培養人才的目標，落實在學生的身上，表現為學生的發展和成長。

3.學校：通過研究所要達到的學校教育工作改革和發展的目標，落實在學校工作過程中，表現在學校的效益上。

確定課題研究目標時，一方面要考慮課題本身的要求，另一方面要考慮課題實際的工作條件與工作水平。

(六)課題研究的內容(所要解決的主要問題)

有了課題的研究目標，就要將研究題目依據研究目標展開、細化為若干小問題。課題越大，內容越多，越要具體，研究范圍較大的課題應列出各子課題的內容。

目前在這方面存在的主要問題是:

1、只有課題而無具體研究內容;

2、研究內容與課題不吻合;

3、課題很大而研究內容卻很少;4,把研究的目的、意義當作研究內容。

因此，我們要學會把課題進行分解，一點一點地去做。例如：《初中語文活動課實驗研究》的開題報告指出，本課題研究的中心是，如何科學有序、切實有效地開展初中語文活動課。具體內容包括下列三個方面:

1、根據初中各年級學生的情況和語文教學要求，對初中各年級語文活動課對學生認知領域、情感領域和動作技能領域素質的發展進行詳細的目標規定，從而建立初中語文活動類課程的目標體系。

2、根據初中各年級語文活動課目標和語文學科的特點，安排初中各年級語文活動課的內容，內容的安排力求充實、精確、有序，并初步形成一個相對完整的活動課內容體系。

3、根據初中各年級語文活動課目標內容和初中各年級學生的特點，探索初中語文活動類課程的學習活動方式，確定活動類課程的教學時間、空間及程序，并在此基礎上形成多種切實可行的可操作的語文活動教學模式。

(七)課題研究的過程(步驟和計劃)

課題研究的步驟，就是課題研究在時間和順序上的安排。研究的步驟要充分考慮研究內容的相互關系和難易程度，一般情況下，都是從基礎性問題開始，分階段進行。一般劃分為三個階段：前期準備階段、中期實施階段、后期總結階段。每一個階段有明顯的時間設定，從什么時間開始，至什么時間結束都要有規定，要有詳盡的研究內容安排、具體的目標落實，從而保證研究過程的環環緊扣，有條不紊、循序漸進。

每一階段的工作任務和要求，不僅要胸中有數，還要落實到書面計劃中。從而保證課題研究按時保質保量完成，課題研究的管理也可據此對課題研究進行檢查、督促和管理。

(八)課題研究的方法

任何科學研究除了要應用哲學方法和一般科學方法之外，還要有具體的研究方法、技術手段。“研究方法”這部分，主要反映一項課題的研究通過什么方法來驗證我們的假設，為什么要用這個方法?以及要“做什么”、“怎么做”。教育研究的方法很多，包括文獻研究法、調查研究法、實驗研究法、個案研究法、經驗總結法、行動研究法等等。一個大的課題往往需要多種方法，小的課題可能主要是

一、兩種方法。比如，要研究學生實踐能力的現狀必定離不開調查法;要研究問題家庭學生的教育對策可采用個案法等等。這一部分是課題方案設計的主體，課題研究是否有價值、目標任務如何得到研究落實，在這部分應給人一覽無余的感覺。

(九)課題研究的預期成果與表現形式

課題研究成果預測即研究過程中可能會帶來什么成果?成果形式包括研究報告、教育教學論文、專著、影像資料(含課件)、典型的教案、教具學具、學生作品等。課題不同，研究成果的內容、形式也不一樣，但不管形式是什么，課題研究必須有成果，否則，就是這個課題沒有完成。在開題報告中設計出成果形式，可以使研究者明確將來用什么表現研究成果，以便從開始就可以著手努力積累材料、構思框架、進行分工，以利于研究成果的順利問世。同時也有利于課題管理者據此對課題進行檢查驗收。

(十)完成課題的可行性分析

可行性，即研究課題的可實施性，是指課題研究所需的條件是否具備，如研究所需的信息資料、實驗器材、研究經費、學生的知識水平和技能及研究者的學歷、學習能力、研究能力和研究經驗等等是否具備。它建構于先進的理念、科學的設計、扎實的功底等，一句話，就是要從若干方面說明對本課題的研究，我們有實力、有能力、有潛力去完成。

成立課題組、健全研究機構，做到研究任務、時間、人員三落實;制度保證：制定課題管理條例、規范學習、研究制度，以激勵為杠桿，激活教師研究熱情;經費保證：設立課題研究專項經費，保證研究過程中相關書籍、必要設備的添置及外出學習、開展活動等的經費來源;技術保證：聘請專家擔任顧問，選派骨干外出培訓，組織外出參觀學習等;課題研究與學校工作相協調：做到教學科研化，科研教學化，使學校教育教學與教育科研同步發展、共同提高。

第五篇：教育研究方法開題報告材料

有關大學生考試作弊現象的研究

（一）研究背景分析

1．選題背景

在當今社會上，應試教育已經是普遍的一種選拔人才的教育制度，不論中小學生，還是高中生，甚至是大學生，都必須面臨考試。而現在許許多多的在校大學生們都需要通過考試，從而獲得學分，當獲得足夠多的學分時，才能夠順利畢業；否則將面臨無法畢業的情況。可是，現在的大學校園生活里，學生的學習氛圍越來越淡薄，許多學生把精力、心思都放在社團活動或者是兼職等方面上。已經不再像高中時期那樣，把所有心思都放在學習上。也有不少大學生平時總是逃課或者是不聽課，導致一點知識都沒有學進去，然而，不管怎樣在大學里，所有學生都必須通過考試來獲得學分，而且想要申請一些獎項時，申請條件中總會有要求學生的成績要很好，所以這時成績顯得尤為重要，但是，對于那些沒有認真學習過的學生而言，要順利通過考試，那是相當有難度的，于是，他們為了通過考試，盲目地選擇了作弊。

2．選題意義

當代社會，誠信問題已經是大眾所關注的焦點，現在許多公司或者是招聘單位都會明確表明他們需要的人才具備誠信的品質。因為誠信在當今社會中起著舉足輕重的地位，誠信往往與許多事情有關系，例如：商品質量、公司信譽度、員工素質等等，誠信往往能夠決定一個單位的存亡問題，所以對于要在社會建立一個立足點，誠信是必不可少的。

核心概念的界定

作弊一詞的含義，在《當代漢語詞典》中，是指用欺騙的手法做違法亂紀或不合規定的事情。

（二）文獻綜述

我國已有許多學者對大學生考試作弊進行研究，探討究竟是什么因素影響大學生，導致他們在考試中進行作弊。

《高校對話型全員德育新體系研究》中，第九章《對話的艱難性——大學生德育工作中的另類問題剖析》談論到作弊這樣問題。其中文中的第一部分講述了作弊問題，作者分成三部分闡述，第一部分是大學生作弊的主要類型，在此作者提出了三個類型：紙條傳遞型、肢體語言表達型、信息技術應用型。作者比較詳細地講述了這些作弊類型；而第二部分講的是大學生作弊的主要原因，作者從宏觀角度和微觀角度來分析大學生的作弊行為。從宏觀角度講，作者認為社會不良風氣、高校人才評定標準的偏頗和高等教育教學管理工作中的弊端導

致大學生考試作弊；從微觀角度出發，則是大學生自身做人標準問題出現偏差；第三部分則是高校德育工作的應對策略，作者從強化輿論宣傳、建立健全制度、教學改革等角度提出自己的見解。

還有其他相關文章，在翟紅的《大學生考試作弊成因分析及對策》中，從作弊的行為特點、心理等方面進行研究，又如曹容平、董九元、王剛等人寫的《當代大學生考試作弊行為特征研究》通過數據分析等也對大學生考試作弊這一現象進行探討。

2011年3月8日，在《武進日報》中，有一篇《英國大學生作弊嚴重論文買賣交易額超2億英鎊》，里面講述了英國大學生的作弊現象。

在《教育·實踐·創新：高職高專學生思想政治教育研究》里，何酉寧和楊浩的《大學生作弊行為的原因分析及對策研究——以成都紡織高等專科學校為例》，具體分析了成都紡織高等專科學校里大學生作弊的現象。

（三）研究內容及目標

1．研究內容

（1）研究大學生考試作弊現狀。

（2）研究大學生考試作弊原因，從家庭因素、社會因素、學校因素、個人因素等等方面進行研究，并提出一些建議。

2．研究目標

詳細分析并整理大學生考試作弊的原因并就這些原因提出對學校、對學生都有效的意見或建議。

（四）研究的方法及具體措施

1．研究的方法：

（1）圖書館查找文獻。學校圖書館是一個資源庫，到圖書館里查找有關考試作弊的相關文獻，有利于我們更好的研究“大學生考試作弊原因”的這個課題。

（2）網上查找。網上有很多關于大學生考試作弊的相關內容，我們可以借此作為參考

2．研究的具體措施

（1）我們組成員聚在一起討論對于這個課題所要研究的方向、步驟、分工。

（2）我們組成員各自去圖書館或網絡上查找相關的書籍、資料、報告等等。

（五）研究人員分工及步驟

XXX：

搜集資料，包括通過網絡檢索以及圖書館館藏書籍的查閱等手段，其

中網絡工具的檢索使用較多。最后對工作進行總結。

在選定課題后分析選題背景，界定大學生考試作弊原因的核心概念以及選題的意義。

調查國內相關高校學生考試作弊的研究綜述。

XXX：

負責整合資料，研究內容的最終確定以及探究研究目標。

XXX：

確定研究人員的分工以及研究步驟。

研究步驟：

1、小組討論，草擬研究課題

2、調查資料，估計課題實施的可行性

3、最終確定研究課題

4、明確分工，開始行動

5、小組討論分析資料

6、按原本的分工，將分析結果以書面形式呈現。

7、作總結

（六）課題研究條件分析

作為研究人員的馬曉銘、黎小英、胡文君都是韶關學院教育學院2010級小學教育專業的學生，作為身處被調查對象集中校園中的一名大學生，在正確選擇調查問題方面有相對優勢。

現今社會推行誠信為人的準則，作為教育中較為高層次的大學生作弊現象更被公眾所關注，因此調查分析大學生作弊屢禁不止現象的原因、找出解決問題的方案就顯得十分必要。我們的組員在再三思慮后決定將其作為我們的調查研究對象。

作為社會上眾人關注的問題之一，有關大學生考試作弊現象的研究的相關成果也不少。以下是部分我們搜索到的資料。

《大學生考試作弊屢禁不止的原因及對策》——曲秀英2004.03.31 經濟導報

《大學生考試作弊現象淺析》——明哲2005.3 吉林農業科技學院學報第14卷第1期

《淺析大學生考試作弊行為原因及對策》——丁娜、馬健平、張洪綱 2009 文化與教育技術

《大學生考試作弊的原因和對策》——李寶華 遼寧教育研究，1999.05

《高校學生考試作弊的現狀調查及其對策》——王金彪，張麗霞 2004.01 大學教育科學

《大學生考試作弊的原因與對策》——王術，陳耀武 2008.08 高等教育農業

《加強考風建設、構建和諧校園》——范玉輝，周先進 2007.03 華中農業大學學報

《高校學生考試作弊問題的調查研究與對策》——陸桂平，陳龍，王小全 2002.02 中國高等醫學教育

《試論大學生考試作弊行為的現狀與對策》——陳志國，郭宏英 2009.3 中小企業管理與科技

《大學生考試作弊淺析》——王麗萍，梅永剛 2008.7（第13卷）西安郵電學院學報

《大學生學業作弊現象成因及對策探討》——徐亞，徐甜甜 2007（第三期）職業圈

《關于大學生考試作弊現象的探討》——崔玉波，喬志和，王忠民 2010.06 教書育人.高校論壇

《大學生考試作弊行為的博弈分析與對策》——孫世民，李世峰 2004

（8）高等農業教育

《大學生考試作弊成因分析與對策探討》——漆勇政，魏友博 2003

（5）；83-86 高等農業

（七）課題研究預期的成果表達形式

大學生考試作弊的現狀：

在現在的大學校園里，大學生考試作弊現象是實實在在地存在的，不論是中小學學校還是高等學府，考試作弊總是存在的。學生作弊無非是為了取得自己想要的成績，所以只要還存在考試制度，那么學生考試作弊就會一直存在。

研究預期成果：

一、找出大學生作弊的主要原因：

1.學生自身學習興趣不濃

學生自身的興趣、愛好不同導致對某一方面的投入精力不足，我們常說每個人的智力水平基本差不多，不存在智力過大的差異，之所以有學習成績好的學生，學生差的學生，主要是學生對于學習的態度不同。有的學生把學習知識當作興趣；有的則把學習當作負擔，但相反的可能動手的能力比較強等；還有的學生不愛學習，熱衷于經商；還有的家庭生活困難的學生平時大部分時間和精力用于家教等方面，以致對學習用心不足，考試只好企圖作弊過關。

2.學生之間的“傳幫”作用

剛剛入學的新生，有的可能在高中時或多或少積累了一些作弊經驗，但由于剛剛步入大學的校門，如果學校抓的嚴，或許收斂一些，如果有機可乘，便可通過作弊獲得成績合格。但時間不長，高年級的學生便會向低年級的學生、老鄉便會向老鄉傳授作弊經驗、心得，這是一個非常可怕的現象，如果長此以往，而不加治理，學校的名聲可能會

毀于一旦。

3.學生的心理原因

⑴ 學生的不平衡心理，有的學生平時不努力學習，如果考試作弊成功，將會取得一個好的分數，而平時努力學習的學生不作弊可能考試成績并不理想，這樣一來，好的學生有的就會出現不平衡心理，如果意志力薄弱，也會加入作弊的行列。

⑵ 學生之間的同情心，有的學生看到別人總是被抓科，補考還不過，而且大家又是同班同學，平時處得又比較好，于是考試時就會伸出援助之手，如果不幫忙，又怕同學的關系弄僵，更助長了作弊之風。⑶ 賭博心理，這類學生主要是平時根本不努力學習，上課逃課，考試經常不及格。經常作弊如果過了固然好，考試不過也不會太在乎。

4.社會激烈競爭與大學生就業壓力增加帶來的影響

隨著高校擴招后的畢業生數量大幅增加,社會競爭加劇,就業緊張,優秀畢業生倍受社會青睞。各類資格考試、等級考試將用人單位迷惑,用人單位對人才的評價標準也首先是以學習成績為標準,不考慮學生的綜合素質高低,在招聘人才時只選用成績好、證書多的學生。這種錯誤的價值導向造成了很多學生為了證明自己是優秀的,用作弊來提高自己的考試分數,而學習成績較好的學生為了能在找工作時勝過別人,也加入到作弊的行列。

二、解決方案：

1.幫助學生樹立正確的道德觀、人生觀和價值觀。

2.科學地進行考試方式和教育方式的改革。

3.積極深化素質教育,建立科學的素質評價體系。

4.健全并嚴格執行考試制度,加強監督與管理。