第一篇：實驗一 飼料原料識別講稿

實驗一 飼料原料識別講稿

一、教學目的與要求：

通過本實驗，能正確識別常見飼料特征，進一步鞏固學習內容。

二、實驗內容：

1.能量飼料樣品：玉米、麥麩、玉米皮、高粱、小麥、燕麥。

2.蛋白質飼料樣品：豆粕、棉粕、菜粕、花生粕、芝麻粕、亞麻粕、玉米蛋白、棉籽蛋白、DDGS、胚芽粕、魚粉、肉粉、啤酒酵母。

3.礦物質飼料樣品：石粉、貝殼粉、磷酸氫鈣、食鹽。4.添加劑樣品：

⑴氨基酸：賴氨酸、蛋氨酸、蘇氨酸、⑵微量元素：硫酸亞鐵、硫酸銅、硫酸錳、硫酸鋅、碘化鉀、亞硒酸鈉、⑶維生素：VA、VD、VE、VB1、B2、B6、B12、煙酰胺、泛酸鈣、生物素，氯化膽堿

⑷其他：寡糖、微生態制劑、酶制劑、甜味劑、抗氧化劑等

5．成品料樣品：蛋雞濃縮料、蛋雞全價料、豬全價料、豬濃縮料、奶牛精料補充料、奶牛濃縮料等。

三、實驗分組：每班分3個組，實驗樣品分三個區，按順序輪流觀察。1區：能量飼料樣品和成品料樣品 2區：蛋白質飼料樣品： 3區：礦物質飼料和.添加劑樣品

四、實驗結果：寫出實驗報告

實驗二 全價飼料配方設計講稿

一、教學目的與要求：

通過本實驗，使學生能掌握用差減法和對角線法設計畜禽全價飼料飼料配方。

二、實驗內容：

（一）.用對角線法設計將豬雞的濃縮料轉換為全價飼料配方。

1.已知：某養豬戶購買了生長肥育豬濃縮料，含粗蛋白38%，請你用玉米和麩皮配制成粗蛋白15%的豬全價料。

玉米粗蛋白8.7%,麩皮粗蛋白15%,能量飼料中玉米占75%,麩皮占25%。

2.已知：玉米和蛋雞濃縮料的CP分別為8.5％和30％，產蛋高峰期CP需要量是16.5％。請用玉米和蛋雞濃縮料給產蛋高峰期蛋雞配制全價飼料，計算玉米和蛋雞濃縮料各占多少百分比？

（二）用差減法配制蛋雞和奶牛的飼料配方。1．單胃動物蛋雞全價飼料配方設計(P250)請通過試差法,用下列原料配制產蛋率大于80%的產蛋高峰期雞日糧。所用數據,請查附錄三

雞的飼養標準和附錄五飼料營養成分及營養價值表(2004年修訂版)、要求誤差： ±5% 選用河北地方飼料原料: 1.玉米,價格2.2元/kg;2.麥麩,價格1.4元/kg;3.豆粕(CP43.0%),價格3.0元/kg;4.棉粕(CP43.5%),價格2.3元/kg;5.菜粕(CP38.6%),價格2.0元/kg;6.芝麻餅(CP39.2%),價格2.0元/kg;7.磷酸氫鈣:鈣25%,磷17%,價格2.8元/kg 8.石粉:鈣34%,價格0.20元/kg 9.食鹽:價格,0.80元/kg

10.復合微量元素:添加量0.1%,價格5.0元/kg 11.復合維生素:添加量0.02%,價格70.0元/kg 12.蛋氨酸:含量98%,價格40.0元/kg 2．反芻動物精料補充料配方設計(P250-260)請通過試差法,用下列原料給奶牛配制精料補充料,奶牛體重600公斤,一胎,日產奶30kg ,乳脂率3.5%。所用數據,請查附錄四

奶牛的飼養標準和附錄五P351奶牛飼料營養成分及營養價值表, 要求誤差：±5%

選用河北地方飼料原料: 精料: 1.玉米,價格2.2元/kg;2.麥麩,價格1.4元/kg;3.豆粕(CP43.0%),價格3.0元/kg;4.棉粕(CP43.5%),價格2.3元/kg;5磷酸氫鈣:鈣25%,磷17%,價格2.8元/kg 6.石粉:鈣34%,價格0.20元/kg 7食鹽:價格,0.80元/kg 8.小蘇打, 1.50元/kg 9.牛用預混料1%,價格6元/kg(成分為維生素、微量元素等）粗飼料: 1.玉米秸,價格0.2元/kg 2.玉米青貯,價格0.3元/kg

三、實驗分組：每班每人1個組，查飼養標準和飼料營養成分表，用計算器計算。

四、實驗結果：寫出飼料配方的實驗報告

實驗三 濃縮料的配方設計講稿

一、教學目的與要求：

通過本實驗，使學生能掌握濃縮料的配方設計。

二、實驗內容：

1.用全價飼料配方轉換為濃縮料配方。

已知： 配方編號與名稱 L600 蛋雞料 2007.10.23 ──────────────────────

原料配比

───────────────────────

編號 原料名稱 原料價格 L600 ─────────────────────── 0024 芝麻餅[39.2%] 1.90 3.000 0117 棉籽粕[40%] 1.90 6.000 0120 亞麻仁粕[34.8% 1.90 2.000 0121 菜籽粕[36.6%] 1.40 2.000 0138 玉米蛋白 2.70 3.000 0279 玉米[1級8.7%] 1.60 60.000 0504 石粉 0.15 9.000 0505 磷酸氫鈣 1.90 1.500 0510 預混料 6.00 1.000 0511 食鹽 0.50 0.500 1029 大豆粕[2級43 3.50 12.000 ───────────────────────

總量 100.000 ───────────────────────

價格 1.803 ───────────────────────

配方營養

────────────────────

營養素名稱 計量單位 L600 ────────────────────

粗蛋白 % 17.05 禽代謝能 MC/Kg 2.7 粗纖維 % 2.98 鈣 % 3.93 總磷 % 0.66 非植酸磷 % 0.38

粗脂肪 % 2.93 粗灰分 % 13.14 食鹽 % 0.50 干物質 % 88.17 蛋氨酸 % 0.28 蛋胱氨酸 % 0.60 賴氨酸 % 0.70 ────────────────────

請將此飼料配方轉化為濃縮料配方。

2.直接計算濃縮料配方。已知，生長肥育豬851A的濃縮料標準是粗蛋白大于40%，粗纖維小于10%，粗灰分小于20%，鈣4%，磷2%，食鹽2%，賴氨酸2.5%,請你按此標準設計一個生長肥育豬851A的濃縮料配方。

飼料原料: 1.豆粕(CP43.0%),價格3.0元/kg;2.棉粕(CP40%),價格2.3元/kg;3.菜粕(CP38.6%),價格2.0元/kg;4.進口魚粉(CP63%)),價格12.0元/kg;5.磷酸氫鈣 :鈣25%,磷17%,價格2.8元/kg 6.石粉: 鈣34%,價格0.20元/kg 7.食鹽:價格,0.80元/kg 8.生長肥育豬1%預混料（:成分為維生素、微量元素、氨基酸、抗生素等）濃縮料添加量5%,價格12.0元/kg

三、實驗分組：每班每人1個組，用計算器計算。

四、實驗結果：寫出飼料配方的實驗報告

第二篇：實驗講稿

總論、鏈霉素毒性、肝臟在藥物代謝中的作用

一、藥理學實驗課的目的和要求：

（一）目的：

（1）

使學生掌握進行藥理學實驗的基本方法，了解獲得藥理學知識的科學途徑

（2）

驗證藥理學中的重要基本理論，更牢固地掌握藥理學的基本概念。

（3）

培養對科學工作的嚴肅的態度、嚴格的要求、嚴密的工作方法和實事求是的作風，并初步具備客觀地對事物進行觀察、比較、分析、綜合和解決問題的能力。

（二）要求：

（1）

實驗前做好預習工作，結合實驗內容，復習有關藥理學、生理學和生物化學等方面的理論知識，并領會實驗設計的原理。

（2）

實驗時認真操作，仔細觀察，并做好實驗記錄。

（3）

實驗后整理實驗結果，并進行分析思考，認真書寫實驗報告，并做好實驗室的清潔衛生，關好水、電。

二、實驗設計的基本原則

（1）

重復性

（2）對照性（3）隨機性

三、藥理學實驗的一般方法和技術

（一）實驗動物選擇的原則和方法

1、首先要根據實驗的目的選擇實驗動物

2、選用來源清楚、遺傳背景明確的實驗動物

3、選用容易獲得、價格便宜、易于飼養與管理的實驗動物

4、必須注意實驗動物種類、品系的質量及健康狀況是否良好

5、選用人畜共患疾病的實驗物物和傳統應用的實驗動物

（二）實驗動物的選擇：

常用的實驗動物有蛙、蟾蜍、小白鼠、大白鼠、豚鼠、家兔、貓、狗。常根據不同的實驗目的和要求選用不同的實驗動物，所選用的動物必須能較好地反映試驗藥物的選擇性作用并符合節約的原則。

蛙和蟾蜍：離體心肌，觀察藥物對心臟的作用。坐骨神經和腓腸肌，觀察藥物對周圍神經肌肉或橫紋肌的作用。

小白鼠：

1.小鼠屬于脊椎動物門，哺乳綱，嚙齒目，鼠科，小鼠屬動物。2.成熟早，繁殖力強。3.體形小，易于飼養管理。4.性情溫順，膽小怕驚。5.對外來刺激極為敏感。6.便于提供同胎和不同品系動物。7.喜居于光線較暗的安靜環境，習于晝伏夜動，喜歡啃咬。8.體小嬌嫩，不耐饑餓，不耐冷熱，對環境的適應性差。9.成年雌鼠在動情周期不同階段陰道粘膜可發生典型變化。適用于需要大量動物的實驗，如藥物篩選，半數致死量，藥物效價。大白鼠：與小白鼠相似，一些在小白鼠身上不便進行的實驗可用大白鼠。

豚鼠：易致敏，常用于平喘藥和抗組胺藥的實驗。

家兔：觀察藥物對心臟、呼吸的影響及農藥中毒和解救實驗。

貓：血壓穩定，常用于血壓實驗。

狗：觀察藥物對心臟泵功能和血流動力學的影響，心肌細胞電生理研究、降壓及抗休克藥的研究

（三）常用的藥物給藥途徑

1、經口給藥（灌胃）

2、皮下注射

3、肌肉注射

4、腹腔注射

5、靜脈注射

（四）實驗動物的捉拿和給藥方法

小白鼠：

捉拿法：右手提起尾部，放在鼠籠或其他糊糙面上，向后上方輕拉，迅速用左手食指和拇指捏住小鼠頸背部皮膚并以小指和手掌尺側夾其尾根部固定于手中。給藥法：

（1）

灌胃法：左手捉拿小鼠后，使口朝上，頸部輕輕拉直，右手持吸有藥液的注射器，將灌胃針頭從口角插入口腔，沿上腭向食道輕輕推進，如遇阻力應抽出灌胃針管重插。當推進約2－3公分時，動物安靜，呼吸無異常，即可將藥液緩緩推入。0.1-0.3ml/10g。

（2）

腹腔注射法：左手捉拿小鼠后，使腹部朝上。右手持盛有藥液的注射器，自左腹下部插入，針頭與腹壁的角度呈45度。針頭進入腹腔時可有抵抗力消失感。先回抽一下無氣泡或血后，輕輕推入藥液。0.1-0.2ml/10g。

（3）

皮下注射法：左手捉拿小鼠固定頭部，然后用左手無名指及小指將小鼠左后肢及背部壓在掌面，右手持注射器，自頭側背部插入皮膚，注入藥液。拔針時，輕捏針刺部位片刻，以防藥液溢出。注射量0.05－0.25ml/10g。

（4）

肌肉注射法：將小鼠捉住，固定左后肢，將注射器插入大腿肌肉，在注射前，應回抽針栓，如無回血，則可給藥。注射量一般為0.2ml/次。

（5）

尾靜脈注射法：將小鼠置入特別鼠筒中，尾巴露出。用酒精棉球擦拭使尾血管擴張。以無名指和小指夾持尾尖，用中指托起尾巴，使之固定。選其一側尾靜脈穿刺。如針頭在血管內，推注藥液無阻力。否則皮膚隆起發白，阻力增大，此時應退回針頭重新穿刺。注射量0.05-0.2ml/10g。家兔：

捉拿法：以右手抓住頭頸部皮膚，左手托起臀部，使兔在實驗者手中呈自然匐狀即可。給藥法：

（1）

腹腔注射法：同小鼠。

（2）

靜脈注射法：一般采用耳緣靜脈給藥。先將家兔固定于兔箱內，拔去注射部位的兔毛，用酒精棉球涂擦耳緣靜脈皮膚使血管擴張。以左手食指放在耳下將兔耳墊起，并以拇指按住耳尖部。右手持帶有6號針頭的注射器，盡量從血管遠端刺入血管。注射時針頭先刺入皮下，向前推進少許，然后刺入血管。針頭刺入血管后再稍向前推進，輕輕推動針栓，若無阻力和局部皮膚發白隆起現象，即可注藥。否則應將針頭退出，再重新刺入血管。注射完畢，用棉球壓住針眼，拔去針頭。

（五）實驗動物的取血方法

（1）

小白鼠、大白鼠的取血方法:

頸動靜脈和股動靜脈取血：將動物麻醉，暴露相應的血管，用注射器從血管中抽血或剪斷血管，從血管外吸血。

心臟取血：動物仰臥位固定，用連接有4－5號針頭的注射器在左側第3－4肋間于心搏最強處穿刺，當針刺入心臟時，血液由心臟收縮的力量自動壓入注射器中。也可開胸直接將注射器針刺入心臟抽取血液。

尾尖取血：即剪斷尾尖，讓其自行流血，依取血量的多少與次數處理方法不同。量需要較多時采用麻醉動物并輔以尾部按摩或加溫浴。需多次采用時可分次剪尾。

眶動脈或眶靜脈取血：先將動物倒掛壓迫眼球，使眼球突出充血后，以止血鉗迅速摘取眼球后，眼眶內很快流出血液，將血滴入預先加有抗凝劑的玻璃器皿內，直至不流為止。一般可取動物體重的4%－5%血液量。用畢動物死亡，只適于一次使用。

斷頭取血：用剪刀剪掉鼠頭，立即將鼠頸向下，提取動物，并對準已準備好的盛血容器，則鼠血從頸部皮膚很快滴入容器內。

（2）

兔取血法：

心臟取血：在心搏最明顯處取血。部位是胸骨左緣第3肋間隙旁約3mm處進針。

耳緣靜脈取血：局部去毛，用酒精涂擦，使血管擴張，然后以粗大針頭插入耳緣靜脈取血。

頸動靜脈和股動靜脈取血：同在、小白鼠的方法。

（六）實驗動物的處死方法

實驗結束后，常須將動物處死，常用方法如下：

頸椎脫臼法：本法適用于小鼠，用手指壓住小鼠的后頭部，捏住鼠尾，用力向上牽拉，使之頸椎脫臼致死。

空氣栓塞法：用注射器將空氣急速注入靜脈，可使動物死亡。心臟取血法：用粗針頭一次大量抽取心臟血液，可到動物立即死亡。

大量放血法：處死狗時常用此法。操作用在股三角區橫切約10cm長的切口，切斷股動脈和股靜脈。血液立刻噴出。此時可同時用自來水沖洗。動物可在3－5分鐘死亡。其它方法：蛙類可斷頭處死，也可用探針經枕骨大孔破壞腦和脊髓處死動物。

四、處方

（一）處方的結構

處方包括下列幾項：

1、病人的姓名、年齡、科別、處方日期、門診或住院號

2、處方箋上常印有R的符號，它是拉丁文Recipe的縮寫，意思是“請取”。

3、藥名、劑型和份量：藥名和份量應一起寫，每藥寫一行。劑量和份量寫在藥名的右側。藥物的用量，固體以克（g）為單位，液體以毫升(ml)為單位。一般情況下，克(g)與毫升(ml)不必寫出，其它單位，如：毫克(mg)、微克(μg)、國際單位則須注明。藥量小于1單位時，在小數點前必須加零，整數后加小數點和零，以免出差錯。

4、調配方法和用法：必要時必須寫清調配方法。用法包括每次劑量、每日用藥次數、給藥途徑與給藥時間。

5、處方醫生簽名。

（二）處方的注意事項

1、處方必須認真、嚴肅。字跡要清楚，不得任意涂改。不得用鉛筆書寫。

2、藥品名稱一律使用經正式注冊的藥名或國際非專用藥品名稱，不可使用含義不清未經公認的藥名縮寫，以免造成誤解或藥名混淆。

3、用藥方法的文字說明應準確明了。藥量不應超過中國藥典的極量。因特殊需要超過的，應加簽醫生姓名，或用“！”號示意。

4、急診處方，須立即取藥的應在處方上寫“急”字。

5、處方開好，核對無誤后，才可交與病人。

6、開寫英文處方時，制劑名放于藥名后，而拉丁文處方時，制劑名置于藥名前，藥名一般用第二格。

肝臟功能狀態對藥物作用的影響

1、目的：觀察肝功能損害時戊巴比妥鈉作用的影響。

2、原理：四氯化碳是一種肝臟毒物，其中毒動物常被作為中毒性肝炎的動物模型，用于觀察肝臟功能狀態對藥物作用的影響。

3、材料：小鼠2只、鼠籠、天平、注射器、5%四氯化碳油溶液、0、25%戊巴比妥鈉溶液。

4、方法與步驟：

在實驗前48小時先取小鼠2只，皮下注射5%四氯化碳油溶液0.1ml/10g，造成肝臟損害。實驗課中取注射過四氯化碳的小鼠和正常小鼠各1只，同樣腹腔注射戊巴比妥鈉50mg/kg（即0.25%的溶液0.2 ml/10g）。觀察動物反應。記錄各鼠的翻正反射開始消失時間和恢復時間。注射過四氯化碳的小鼠與正常小鼠的麻醉作用開始時間及麻醉持續時間有無顯著差別。

5、結果

動物 甲鼠 乙鼠

給戊巴比妥時

間

麻醉開始時

間

麻醉恢復時

間

麻醉持續時

間

6、結論：肝損害鼠較正常鼠麻醉出現更早、持續時間更長。

7、實驗結束后進行討論，肝臟的功能狀態對藥物作用究竟產生什么樣的影響？為什么？

鏈霉素的毒性及氯化鈣的對抗作用

1、目的：觀察鏈霉素對小白鼠的毒性反應及氯化鈣的對抗作用。

2、器材：1ml注射器2副，鼠籠、天平、針頭4號或5號。

3、藥品：8%硫酸鏈霉素溶液，5%氯化鈣溶液。

4、動物：小白鼠

5、方法：取小白鼠兩只，稱重，編號。觀察小白鼠的正常活動情況，甲鼠皮下注射8%硫酸鏈霉素0.1 ml/10g，仔細觀察給藥后小鼠的反應（出現反應的時間與癥狀）；乙鼠先腹腔注射5%氯化鈣溶液0.2 ml/10g，接著皮下注射8%的硫酸鏈霉素0.1 ml/10g，觀察該鼠有哪些反應，并與甲鼠比較。

觀察項目

鼠號

處理階段

呼吸（次/分）

體位

四肢肌張力

甲

給藥前

給鏈霉素后

乙

給藥前

給氯化鈣、鏈霉素

6、結論：

鏈霉素的急性毒性為神經肌肉接頭阻滯作用，表現為小白鼠肌肉松馳、翻正反射消失、可用CaCL2解救。

7、討論：

8、實驗結束后進行討論。

劑型對藥物吸收作用的影響

目的：比較不同劑型烏拉坦液對小鼠作用之差別，認識膠漿劑的延緩藥物擴散作用。

材料：小鼠2只、8%烏拉坦水溶液、8%烏拉擔膠漿液（含2.5%羧甲基纖維素）

方法與步聚：性別相同、體重接近的小鼠，稱體重，觀察小鼠的一般情況，再分別給藥。

1號：皮下注射8%烏拉坦水溶液0.2ml/10g。2號：皮下注射8%烏拉坦膠漿液0.2ml/10g。

觀察小鼠對所注射藥物的反應。記錄小鼠出現步態蹣跚，俯伏不動或臥倒，翻正反射消失等反應的時間。結果：

組別

反應性質

起效時間

維持時間 8%烏拉坦水溶液 8%烏拉坦膠漿液

傳出神經系統藥物對小鼠胃腸蠕動的影響

目的：觀察新斯的明、阿托品對小鼠胃腸平滑肌的作用。材料：小鼠3只、量尺、0.05%硫酸阿托品溶液、0.002%新斯的明溶液、碳素墨水

方法與步聚：小鼠3只實驗前禁食12小時，稱重 1號：腹腔注射0.05%硫酸阿托品溶液0.1mg/10g 2號：腹腔注射0.002%新斯的明溶液0.1mg/10g 3號：腹腔注射生理鹽水0.1mg/10g

給藥10分鐘后，用碳素墨水0.2ml灌胃。15分鐘后，將動物處死，打開腹腔，輕輕剝離腸系膜并分離出小腸。從幽門和回盲部剪斷小腸，測量小腸全長和碳末運行距離，計算碳末在小腸的運行率。綜合全班的結果，計算平均值。（標明自己小組的結果。）碳末運行率=幽門至遠端碳末處距離（cm）/小腸全長（cm）×100% 結果

組別

小腸長度（cm）

碳末運行距離（cm）碳末運行率%

0.05%阿托品溶液

0.002%新斯的明溶液 生理鹽水

抗心絞痛藥的抗心肌缺氧作用

目的：觀察抗心絞痛藥的抗心肌缺氧作用。

原理：由于心肌耗氧量大，相對于其它器官組織更易缺氧，應用異丙腎上腺素后心肌耗氧量更為增加，故藥物提高動物全身抗缺氧能力可視為藥物的抗心肌缺氧作用。

材料：小鼠4只、磨口廣口瓶（250ml或125ml）、0.1%普萘洛爾溶液、0.1%異丙腎上腺素溶液、0.005%硝酸甘油溶液

方法：將鈉石灰10g（用小紗布包扎）放在廣口瓶的底層，用以吸收小鼠呼出二氧化碳和水分，并在瓶塞磨口處涂抹適量的凡士林，以便密閉，選用同性別、體重相近的小鼠3只，稱重。1號：腹腔注射生理鹽水0.2ml/10g

2號：腹腔注射0.005%硝酸甘油溶液0.1ml/10g 3號：腹腔注射0.1%普萘洛爾溶液0.2ml/10g

15分鐘后，再對各小鼠皮下注射0.1%異丙腎上腺素溶液0.2ml/10g，再過15分鐘，將小鼠放入磨口廣口瓶內，每瓶放1只，放入后立即將瓶密閉，并記錄時間，計算出各小鼠的存活時間，統計各組的實驗結果，分析藥物作用。注意事項：

1.實驗前先用水測廣口瓶的容量，選用容量相等的廣口瓶。2.動物的性別，體重及室溫對實驗影響較大，可雌雄各半，體重相差不得超過2g。

異戊巴比妥鈉的抗驚厥作用

[目的]觀察異戊巴比妥鈉對藥物性驚厥的對抗作用。[材料]5%尼可剎米溶液、0.5%異戊巴比妥鈉溶液、生理鹽水、小鼠2只 [方法]

小鼠2只，稱重

1號：腹腔注射生理鹽水0.1ml/10g

2號：腹腔注射0.5%異戊巴比妥鈉溶液0.1ml/10g

10分鐘后，各注射5%尼可剎米溶液0.1ml/10g。觀察各鼠有無驚厥（以后肢伸直為驚厥指標）及出現驚厥的速度和程度有何不同。結果：

組別

驚厥出現時間及程度 生理鹽水

0.5%異戊巴比妥鈉

全血水楊酸鈉二室模型藥動學參數測定

目的：用比色法測定水楊酸鈉血濃度，并利用測得的血藥濃度數據計算二室模型的藥動學參數。

器材：試管（10ml×9），離心管（10ml×11），刻度吸管，注射器，細塑料管，兔氣管插管，動脈夾，小玻棒，試管架，玻璃蠟筆，移液吸管，普通剪刀及手術刀，彎血管鉗，線，天平，分光光度計，離心機，電腦。

藥品：10%及0.04%水楊酸鈉溶液，三氯化鐵和三氯醋酸混合液，3%戊巴比妥鈉溶液，0.5%肝素，生理鹽水，0.2%肝素生理鹽水。

動物：兔

方法：1.術前準備：取離心管11支，編0－10號，各加入三氯化鐵和三氯醋酸混合液2ml，9號管再加入0.04%水楊酸鈉標準溶液0.6ml，10號管再加蒸餾水0.6ml。

2.稱重，麻醉（3%戊巴比妥鈉靜脈注射，1ml/kg或25%烏拉坦腹腔麻醉，1ml/kg），固定，分離左側頸總動脈，在耳緣靜脈注射1%肝素生理鹽水（0.5ml/kg）后再做動脈插管供采血用。

3.用干燥注射器從頸總動脈取血0.6ml加入0號管。

4.從已分離出的左頸總動脈對側的耳緣靜脈注射10%水楊酸鈉溶液2ml/kg（彈丸式注射）在給藥完畢后的第1、3、5、10、20、50、80和110分鐘從頸總動脈分別取血0.6ml，依次加入第1－8號管中，振蕩。每次采血后洗凈注射器，用肝素生理鹽水濕潤備用。

5.用小玻棒攪拌0－8號管各1分鐘，分別加入蒸餾水5ml再攪拌1分鐘，3000轉/分，離心10分鐘，移液管取上清液6ml備用，9、10號管各加蒸餾水5ml，搖勻備用。

6.在分光光度計上，以波長510nm，1cm光徑比色皿，10號管調零，測0－9號管光密度d0-d10。

7.將所得數據依次輸入電腦，可得相應二室模型的藥動學參數及曲線。

注意事項：

1、10%水楊酸鈉溶液注射要快，準確（使Vmax=0）。

2、每次取血前放掉一些血，采血準確及時，采血后應洗凈注射器，用肝素生理鹽水濕潤備用。

3、攪拌順序應從低濃度向高濃度。

扭體法和藥物劑量、給藥途徑對藥物作用的影響及錄像

一、扭體法：

1、目的：觀察鎮痛藥的鎮痛作用并聯系其臨床應用。

2、動物：小白鼠，同性別，健康鼠。

3、器材：燒杯、鑷子、天平、1ml注射器、鼠籠

4、藥品：0.2%哌替啶生理鹽水溶液、生理鹽水、2%苦味酸、0.6%冰醋酸溶液。

5、方法和步驟：取體重相近同性別小鼠2只，分別稱重，標記，分成2組。腹腔注射給藥，甲組給生理鹽水0.1ml/10g，乙組給哌替啶20mg/kg(0.2%，0.1ml/10g)，20分鐘或30分鐘后，每只鼠腹腔注射0.5%冰醋酸溶液0.1ml/10g，觀察15分鐘內小鼠是否出現扭體反應（痛苦癥狀，表現為伸展后肢，收縮腹部、軀體扭曲、使腹肌間歇性地收縮等癥狀）并記錄10分鐘或15分鐘內出現扭體反應次數，綜合全實驗室結果，求甲、乙二組各鼠10或15分鐘內出現的平均扭體反應次數，并計算藥物鎮痛的百分率。

甲組平均扭體反應次數－用藥組平均扭體反應次數

藥物鎮痛百分率＝

×100%

甲組平均扭體反應次數

組別

鼠別

藥物及劑量

15分鐘內平均扭

鎮痛百分率

體反應次數

甲

乙

二、給藥途徑對藥物作用的影響

1、目的：觀察以不同給藥途徑給予同劑量的尼可剎米時，所引起藥理作用的差別。

2、材料：小鼠4只、鼠籠、天平、注射器、小鼠灌胃針頭、注射針頭、0.25%硫噴妥鈉溶液。

3、方法與步驟：取性別相同、體重相近的小鼠4只，以1、2、3、4編號，分別稱重，觀察各鼠的一般情況，依次給藥。1號鼠 以灌胃法給予0.25%硫噴妥鈉溶液(0.2ml/10g)。2號鼠 以皮下注射法給予0.25%硫噴妥鈉溶液(0.1ml/10g)。3號鼠 以腹腔注射法給予0.25%硫噴妥鈉溶液(0.2ml/10g)。

4號鼠 4號鼠 腹腔注射0.025 %氯丙嗪0.1 ml/10g，10分鐘后腹腔注射硫賁妥鈉0.2mg/10g(0.25%溶液0.2ml/10g)

每次給藥后立即記下當時時間，密切觀察小鼠的反應。動物首次出現驚厥時，也立即記下時間。從給藥到首次出現驚厥的一段時間為藥物作用的潛伏期。比較4只小白鼠結果的差別。

鼠號 性別

體重 硫噴妥鈉劑量

給藥途徑 作用潛伏期最后結果

4、對實驗結果進行討論。

抗心律失常及血壓實驗

一、目的：

1、觀察酚妥拉明、腎上腺素、心得安對血壓的影響

2、觀察酚妥拉明對腎上腺素的升壓翻轉作用

3、觀察大劑量腎上腺素所到的心律失常及心得安的對抗作用。

4、觀察中毒劑量強心苷所致心律失常及利多卡因的抗心律失常作用。

二、原理：略

三、步驟：

1、取一只家兔，稱重，腹腔注射烏拉坦（20%烏拉坦5ml/kg）。麻醉后將兔仰臥固定于手術臺上。

2、剪去兔頸部正中毛，切開正中頸部皮膚，分離左側頸總動脈，耳緣靜脈注射0.1%肝素1ml/kg。進行動脈插管，在其遠心端用絲線結扎，近心端用動脈夾夾住，向心方向插與換能器相聯的充滿抗凝劑的塑料插管，絲線結扎固定。

3、記錄正常血壓變化，然后依次給藥（每次給藥后要注入少量生理鹽水以沖洗管內殘留藥物，待血壓等指標恢復到原水平或平穩后再給下一藥物）觀察血壓變化

給藥順序：1/10000 腎上腺素0.1% ml/kg →1%酚妥拉明0.1% ml/kg →

1%酚妥拉明0.1% ml/kg ＋1/10000 腎上腺素0.1% ml/kg →0.1%普萘洛爾0.5ml/kg →0.1%普萘洛爾0.5ml/kg＋1/10000 腎上腺素0.1% ml/kg

4、在家兔的四肢皮下插入心電電極。(紅—右前，藍—左前，黑—右下)

5、觀察心電圖變化。

給藥順序：1/5000 腎上腺素1ml/kg →(竇律恢復5分鐘后)0.1%普萘洛爾0.5ml/kg(記錄1分鐘后)→1/5000 腎上腺素1ml/kg6、觀察強心苷對心臟毒性及利多卡因的抗心律失常作用：快速推注去乙酰毛花苷4~7支/只，一出現心律失常立即停止給藥，并馬上緩慢靜推0.3%利多卡因2~3ml/只。

四、對實驗結果進行討論。

氯丙嗪對乙醚麻醉的影響

【目的】

觀察氯丙嗪對中樞抑制劑乙醚麻醉的影響，了解乙醚吸入麻醉方法。【材料】

密閉玻璃麻醉箱（或玻璃罩）、秒表、注射器（2ml）.【藥品】

0.5%氯丙嗪、麻醉乙醚、生理鹽水。【實驗動物】

200～300g的大鼠。【方法和步驟】

(1)體重相近之大鼠兩只，觀察一般生活狀況后一只腹腔注射氯丙嗪5ml/100g；另一只作為對照給予相同容量的生理鹽水腹腔注射。30min后觀察一般活動狀態并進行麻醉實驗。

(2)兩只大鼠分別放入兩只等體積的密閉玻璃麻醉箱(或玻璃罩)內，觀察和記錄兩只大鼠有關興奮、興奮期的持續時間和進入麻醉的時間。

【實驗結果】

自行列表記錄結果 【注意事項】

（1）

藥液一定要注入腹腔，避免溢出。（2）

氯丙嗪和生理鹽水注射器避免混用。

腎上腺素對普魯卡因毒性的影響

【目的】觀察腎上腺素對皮下注射普魯卡因毒性的影響，了解血管收縮藥對預防局麻藥中毒的作用。

【器材】小白鼠、2%鹽酸普魯卡因注射液，含1：20000腎上腺素的2%鹽酸普魯卡因、注射器2付

【方法與步驟】取性別相同、體重相近的健康小白鼠2只，稱重后分別標記。甲鼠皮下注射2%普魯卡因0.2ml/10g，乙鼠皮下注射含腎上腺素之普魯卡因0.2ml/10g。觀察兩鼠發生驚厥的潛伏期及死亡率（綜合全班實驗結果）。

口服與腹腔注射硫酸鎂的作用比較

【目的】觀察硫酸鎂口服與注射給藥的作用有何不同，掌握硫酸鎂口服與注射給藥對機體的作用。

【動物】小鼠2只。【藥品】12%MgSO4。

【器材】大燒杯、天平、1ml注射器、小鼠灌胃器。

【方法】取小鼠2只，1只由腹腔注射12%MgSO4 0.1ml/10g（1.2g/kg），另一只灌胃給予同樣劑量（1.2g/kg）的MgSO4。觀察并記錄動物出現的癥狀。

【注意事項】被灌胃給藥的小鼠如果也出現抑制，甚至呼吸麻痹而死亡，系由技術操作失誤，可能是將灌胃針頭穿透食管或胃臟，使MgSO4進入胸腔或腹腔所致。應及時補作。

第三篇：實驗專題講稿

第一課時

同學們好，今天我們來復習實驗專題。

實驗是物理這門學科的基礎，它幾乎貫穿在初中所有章節的內容當中，研究近年來全國各地中考實驗題的變化，我們發現，現在的中考實驗題的考查重點：

1、基本儀器的使用

2、實驗的原理、實驗方法和操作過程

3、探究能力、分析能力和應用能力

初中物理課堂實驗大體可以分成兩類，一類是測量性實驗，這類實驗的主要目的是完成對物體的某一物理量的測量工作。如測量物體的運動速度、測物質的密度、測力的大小、測量物體的溫度、測定值電阻的阻值、測燈泡的電阻、測燈泡的電功率等。另一類是探究性實驗，其目的是通過實驗來探尋某一方面的物理規律。如：探究杠桿的平衡條件、影響摩擦力大小的因素、液體內部壓強的規律、二力平衡因條件、影響動能大小的因素、影響電阻大小的因素、歐姆定律、焦耳定律、電磁鐵的磁性強弱影響因素、磁場對電流的作用等。這一講我們重點來復習一下測量性實驗。

測量性實驗可以分為直接測量和間接測量。有些物理量可以通過我們已經學過的實驗器材直接測量得到，如：長度測量、溫度測量等。同學們復習時應重點把握測量工具的正確使用和讀數方法、減小誤差的方法。而有些物理量在初中階段我們無法直接測量出來，必需通過其它量的測量再利用所學的物理知識計算得到我們所需要的這個物理量。這樣的測量方法屬于間接測量。主要的實驗有：測量物體的運動速度、測量物質的密度、測導體的電阻、燈泡的電功率、滑輪組的機械效率等等。關于這類測量同學們應該抓住其中的重點：就是測量的原理。以上實驗測量原理的共同點是，通過另兩個相關量的測量再利用公式計算完成測量任務。

復習中我們除了要注重對實驗原理的復習，同時還要重點復習實驗的過程。尤其要注意實驗中某些特殊器材的使用和操作中的細節。我們來看這道例題：

這道題綜合考查了電路的連接、滑動變阻器的使用方法、滑動變阻器的作用以及滑片的移動會對電表示數造成什么樣的影響等。整個實驗中滑動變阻器起到了非常重要的作用，有它在，才使得我們的實驗教程更科學，實驗結果更準確。縱觀初中的電學實驗，我們發現很多電學實驗中都要用到滑動變阻器，那它在不同的電路中又分別起到了什么作用呢？我們一起來復習一下，一共有四個電學實驗都用到了滑動變阻器，它們分別是：探究電流與電壓和電阻關系即歐姆定律的實驗、測量定值電阻阻值的實驗、測量燈泡電阻的實驗和測燈泡電功率的實驗。這四個實驗中，滑動變阻器都有一個共同的作用就是“保護電路”。具體來講就一是保護用電器不會被燒壞；二是保護電表的示數不能超過相應的量程。

歐姆定律的探究實驗是從兩個方面來進行的，當探究電流與電壓的關系時，應該使用同一個電阻同時改變定值電阻兩端的電壓再看電壓改變時電流會發生什么樣的變化。當探究電流與電阻的關系時，應該更換不同阻值的電阻，同時控制定值電阻兩端電壓一定，再看電流會發生什么樣的變化。最終綜合得出結論。這兩方面的探究都是用滑動變阻器來調節電壓表的示數，但一次是為了改變它的示數，而另一次是為了控制它的示數不變，而且都是利用滑動變阻器實現多次實驗從而找到普遍規律。在測量定值電阻阻值的實驗中通過調節滑片同樣可以改變待測電阻兩端電壓，這樣做是為了多次測量取平均值，從而減小實驗誤差。而測燈泡電阻時，滑動變阻器可以改變燈泡兩端電壓，多次實驗后我們發現每次測得的燈泡電阻間的差距比較大，從而發現燈泡電阻受溫度的影響比較明顯。而定值電阻則不同，它的阻值比較穩定，當電壓改變時電阻幾乎沒有明顯地變化，所以我們用多次測量取平均值的方式來減小測量誤差，但測燈泡電阻時，由于電壓的改變改變了燈泡的亮度，我們實驗用的燈泡是白熾燈，它屬于熱光源，亮度改變本身就因為它的溫度發生明顯變化所造成的，所以這就導致它的電阻在電壓不同時發生明顯的變化，因而這個實驗不能多次測量取平均值。而這就是我們在做這個實驗時多次測量后發現的問題。在測燈泡電功率的實驗中，同樣當燈泡兩端電壓發生改變時，我們也發現燈泡的亮度發生了改變，同時通過計算也發現燈泡的實際功率也有明顯的改變，從而發現燈泡的亮度是由實際功率決定的，實際功率越大，燈泡越亮。這個實驗中也不能取平均值。

從以上所講到的一系列問題我們應該注意到，滑動變阻器在不同的實驗中的作用既有相同點，也有不同點，看似都是為了多次實驗，但最終目的又各有不同。縱觀初中所有的物理實驗，也有很多實驗也是要多次實驗的，它們的目的有的是為了尋找普遍規律，有些是為了多次測量取平均值減小誤差，還有的是為了多次實驗彼此進行比較看能否有所發現。同學們在復習時也應該注意進行這方面的歸納和總結。同時，一些實驗中的特殊器材為什么要用它，怎樣用好它，使用時應該注意哪些問題，也應該成為同學們復習的重點。

好，下面請同學們完成以下幾道習題。

同學們，我們下一講再見！

第二講

同學們好，上一講我們重點復習的是測量性實驗，這一講我們來進行探究性實驗的復習。這一類實驗的目的是通過實驗來探尋物理規律，并以此來學習探究物理問題的基本方法，培養同學們的科學的探究能力、對實驗信息的處理分析能力和應用實驗結論解決實際問題的能力。同學們復習時應該重點積累探究的基本方法，包括控制變量法、轉換法、等效替代法、實驗推理法等。同學們應該注意每一個實驗各自使用了哪一種或哪幾種實驗方法，同時還應該注意每一種探究方法具體的操作要求、注意事項。

首先我們來看什么是控制變量法。物理學中在探究某一物理現象與多個因素（多變量）間的關系時，把多因素的問題變成多個單一因素問題分別探究，每一次只改變其中的某一個因素，同時控制其余幾個因素不變，從而研究被改變的這個因素對事物的影響，分別研究之后再綜合分析，這種探究方法叫控制變量法。這種方法也是近年來中考的熱點，同時也是我們以后探究其它物理問題所常用的方法之一。這種方法在很多實驗中都被用到，比如：探究液體蒸發的快慢與哪些因素有關、探究滑動摩擦力的大小與哪些因素有關、探究液體壓強的大小與哪些因素有關等等。

第二種常用的探究方法是轉換法。有些實驗中我們發現，有些物理現象不容易觀察，或有些物理量不便于直接測量出來，于是我們就用容易觀察到的物質或現象，來顯示不易觀察到的物質和現象，或者用容易測量的物理量來顯示不易測量的物理量之間的關系。這樣的方法就叫轉換法。

下面我們來看這道例題。本題的前兩問考的就是控制變量法，當探究動能與速度的關系時就應該控制小球的質量不變而只改變小球滾到水平桌面的速度。同時在本實驗中，小球到達水平桌面的速度是通過小球靜止釋放時的高度來控制的。所以，如果探究動能與物體質量的關系時，就要保持小球滾到水平面的速度相同，也就是小球釋放的高度相同，而改變小球的質量。在這個實驗中，小球的動能大小我們是沒法測量，不便于直接比較的，所以就通過小球撞擊木塊后，比較木塊滑行的距離來判斷小球動能的大小。這里就用到了轉換法。當然這也不是唯一可以轉換的方式，同學們也可以想想還有沒有其它方式可以用來衡量小球動能的大小呢？同樣，也可以思考一下，還有沒有其它方式可以控制小球的速度大小？例如就有人想到了用一跟壓縮的彈簧來推動小球，彈簧的壓縮程度不同時，小球被推出的速度就不同，我們課堂上的實驗方法并不是唯一的，大家可以把視野放得更開闊一些。第三種常用的探究方法是等效替代法。在保證某種效果相同的前提下，將復雜的物理問題和物理過程轉化為等效的、簡單的、易于研究的物理問題和物理過程，這種探究方法我們稱之為等效替代法。例如在探究平面鏡成像實驗時就用到了等效替代法。請看例題。

實驗中我們用到了一支等大的蠟燭來代替像，而只有等大的蠟燭并且只在放在適當的位置才能使它與點燃蠟燭的像完全重合。此時，該蠟燭在大小和位置上就與像是等效的。

透過玻璃觀察蠟燭A/其實看到的也是光穿過玻璃板折射后形成的虛像，這種虛像的位置跟實際蠟燭的位置會出現錯位現象，是必對實驗的等效性造成影響。玻璃板越厚，這種錯位現象就越明顯，因此這兩種玻璃應該選擇薄一些的。當玻璃板背后的蠟燭與像完全重合時，就說明平面鏡所成的像與物體的大小相等。當玻璃板放置得不夠豎直時，蠟燭的像將成顯在空中，另一支蠟燭在桌面上無論移動到什么位置都無法與像完全重合，就不能起到替代像的作用。

第四種探究方法：實驗推理法。一些物理規律，由于受實驗條件限制，無法直接用實驗驗證，需要先進行實驗，再根據實驗發展趨勢進行合理推理得出結論，這探究方法叫實驗推理法。如牛頓第一定律的得出、真空不能傳聲等。

針對近年來中考實驗題的考查重點和變化趨勢，同學們在復習時應該抓住以下重點：

1、注重對實驗的方法和原理的復習。

2、重點復習實驗的操作過程，實驗的操作規范，特殊器材的使用方法和它在實驗中的作用。

3、注重知識間的遷移與整合，利用所學知識解決在實驗中遇到的問題。

4、培養科學的探究能力、對實驗信息的處理分析能力和應用實驗結論解決實際問題的能力。

下面請同學們完成以下幾道習題。今天的課就上到這里，同學們，再見！

第四篇：植物病理學 實驗講稿

園藝植物病理學實驗講稿

生命科學與農林學院

2014年8月

目錄

實驗一

植物病害癥狀的觀察 實驗二

植物病理徒手切片制作 實驗三

真菌的形態觀察

實驗四

鞭毛菌亞門真菌形態觀察 實驗五

接合菌亞門真菌形態觀察 實驗六

子囊菌亞門真菌形態觀察 實驗七

擔子菌亞門真菌形態觀察 實驗八

半知菌亞門真菌形態觀察 實驗九

培養基的制作 實驗十

病原菌的分離培養 實驗十一

植物的抗病性鑒定

實驗一

植物病害癥狀的觀察

一、實驗目的

1.認識各類病害對植物造成的危害，了解植物病害的種類及其多樣性，2.初步掌握主要病害的癥狀表現及其特點，學會植物病害癥狀的描述，為今后病害的診斷奠定基礎。

二、實驗原理

植物病害的癥狀是植物患病后由于異常生理活動而發生在細胞和組織上的病理變化，最后表現為肉眼可見的形態變化。有些癥狀也可用嗅覺、味覺或觸摸進行觀察。有的癥狀是單個細胞表現的癥狀，在這類癥狀中，最常見的是受某種病毒侵染的植株中所見到的細胞質內含體。

植物病害的癥狀可區別為兩類不同性質的特征：病狀和病征。病狀是一定的寄主植物和病原在一定外界條件的影響下相互作用結果的外部表現，是以各自的生理機能或特性為基礎的，而每種生物的生理機能，都是在質上有特異性，并且是相對穩定的。病變，作為這種相互作用過程的結果，一般說其發展是定向的。病狀作為病變過程的表現，其特征也是較穩定的和具有特異性的。這就是利用病狀診斷植物病害的基礎。

病征是由病原微生物的群體或器官著生在病體表面所構成的，它更直接地暴露了病原物在質上的特點。如真菌子實體在寄主表面形成的霉層、黑點等。由植物病毒、植原體、許多病原細菌、非侵染性植物病害等沒有病征的表現。病征的出現與否和出現的明顯程度，雖受環境條件的影響很大，但一經表現出來卻是相當穩定的特征，所以根據病征能夠正確的判定病害。不同植物的任何病害都具有其獨特癥狀，通常在病害發生過程中按一定順序出現。病理學家正是根據這種順序出現的癥狀在田間診斷植物病害。

病狀和病征，尤其是前者，作為診斷病害的依據也有其局限性。首先是許多植物病害常產生相似的病狀，因此要從各方面的特點去綜合判斷；其次，植物常因作物品種的變化或受害器官的不同，而使病狀有一定幅度的變化；第三，病害的發生發展是一個過程，有初期和后期，病狀也隨之而發展變化；第四，環境條件對病狀和病征有一定的影響，尤其是濕度對病征的產生有顯著地作用，加之發病后期病部往往會長出一些腐生菌的繁殖器官。因此，癥狀的穩定性和特異性只是相對的，要認識癥狀的特異性和變化的規律，在觀察植物病害時，須認真地從癥狀的發展變化

中去研究和掌握癥狀的特殊性；觀察和采集植物病害標本，仔細地區別病征的那種微小的、似同而異的特征，這樣才能正確地診斷病害。

三、實驗材料、試劑與器材

1.按照植物病害的病狀類型（變色、壞死、斑點、腐爛、畸形）和病征類型（粉狀物、霉狀物、點狀物、菌核、溢膿等）準備植物病害的盒裝標本、瓶裝浸漬標本及新鮮標本（不同類型的病狀和病征的標本可根據當地的情況準備）。

2.各類癥狀的掛圖、模型、多媒體課件等。3.實體顯微鏡、手持擴大鏡、水果刀、載玻片等。

四、實驗步驟

（一）病狀的觀察

1．斑點 觀察玉米大斑病、棉花角斑病、棉花黑斑病、大麥條紋病、小麥根腐葉斑病、大蔥或大蒜紫斑病、花生網斑病、番茄早疫病、十字花科霜霉病等標本，注意不同類型病害所表現病斑的形狀、大小、顏色等的異同以及病斑上有無輪紋、花紋伴生，同時注意觀察各類病斑上有無病征以及病征的特點。斑點類發生在葉、莖、果等部位，受病組織局部壞死，一般有明顯的邊緣。斑點中還可以伴生輪紋、花紋等特點，根據病斑的顏色、形狀等特點而分為褐斑、黑斑、紫斑、角斑、條斑、大斑、小斑、胡麻斑、輪紋斑、網斑等多種類型。

2．腐爛 觀察甘薯黑斑病和干腐病病薯、馬鈴薯晚疫病和環腐病病薯、棉苗立枯病、柑桔潰瘍病等病害標本，認識該類病害對植物所造成的危害，同時掌握這類病害的病狀特點。腐爛類病狀發生在植物的各個部位，由于組織分解的程度不同，有軟腐、干腐之分。根據腐爛的部位，有根腐、基腐、莖腐、果腐、花腐等名稱，還伴隨有各種顏色變化的特點，如褐腐、白腐、黑腐等。

3．萎蔫 觀察棉花、黃瓜等植物枯萎病、棉花和茄子黃萎病、玉米和茄科植物青枯病、馬鈴薯環腐病等標本，注意區別枯萎、黃萎、青枯等病狀類型，必要時可以剖開病株莖桿觀察微管束是否褐變。典型的萎蔫病狀是植物根、莖的維官束組織受到破壞而發生的葉片或枝條萎垂現象，皮層組織完好，萎蔫病害常無外表的病征。植物受萎蔫菌侵染后，不一定都能引起萎蔫，發病初期有半邊葉片、半個枝條萎垂的現象，但更常見的是全株性萎蔫。

提示 對于萎蔫類病害病狀的觀察應以新鮮標本為主，有條件時最好在田間進行，這類病害發生具有一定的地域性，觀察時要注意其微管束組織的病變，干標本則失去了原有的特點。

4．變色 變色主要有兩種類型。一種表現為黃化，是整個植株或葉片部分地或全部地均勻褪綠、變黃，或呈現其它的顏色。多數伴生有整株或部分的畸形。另一種為花葉，病株葉片色澤濃淡不均，深綠與淺綠部分相間夾雜，一般遍及全株，上部葉片較為顯著，無病征表現。比較觀察煙草花葉病、蘋果花葉病、小麥黃矮病、瓜類、十字花科和茄科植物的病毒病病狀、注意每一種病害的病狀特點。

5．畸形 畸形類病狀由不同組織、器官的病變，如葉片的膨腫、皺縮、小葉、蕨葉；果實的縮果及其它畸形；整個植株的徒長、矮縮；局部器官如花器和種子的退化變形和促進性的變態等。瘤、癭、癌、叢枝和發根也是常見的畸形病狀。觀察桃縮葉病、十字花科根腫病、馬鈴薯癌腫病、果樹根癌病、桑樹根結線蟲病、油菜白銹病、番茄蕨葉病、棗瘋病、泡桐叢枝病、玉米黑粉病、小麥粒線蟲病、水稻惡苗病等，歸納各類標本的病狀類型。

（二）病征的觀察

1．粉狀物 借助手持擴大鏡或實體解剖鏡觀察麥類銹病、十字花科白銹病、麥類白粉病、、玉米黑粉病和麥類黑粉病等病害標本，注意粉狀物的顏色、質地和著生狀況等。

2．霉狀物 借助手持擴大鏡或實體解剖鏡觀察黃瓜霜霉病、甘薯軟腐病、瓜類軟腐病、柑桔青霉病、番茄灰霉病和番茄葉霉病等病害標本或瓶裝標本。注意區別霜霉、黑霉、綿霉、青霉和灰霉等不同類型的霉狀物。

3．點狀物 取小麥白粉病、瓜類炭疽病、棉花莖枯病、芹菜斑枯病、蘋果樹腐爛病和麥類赤霉病等病害標本，借助手持擴大鏡或實體解剖鏡觀察，注意點狀物是埋生、半埋生還是表生，以及在寄主表面的排列狀況、顏色等。

4．菌核 觀察油菜菌核病和水稻紋枯病等病害標本，注意菌核的大小、形狀、顏色、質地等，并觀察菌核萌發狀況。

5．溢膿 溢濃為細菌性病害特有的病征。觀察水稻白葉枯病、水稻細菌性條斑病、十字花科細菌性軟腐病、棉花角斑病和黃瓜角斑病等病害標本，注意溢膿的顏色、出現位置等。用剪刀將植物病組織剪成 4mm 2的小塊，放于載玻片上，加一滴水，蓋上蓋玻片，在顯微鏡下觀察或直接用載玻片對光觀察噴菌現象。

五、實驗報告及作業

將上述病害標本的發病部位，病狀類型和病癥類型，填于下表：

植物病害癥狀觀察表

病害名稱

發病部位

病狀類型

病癥類型

1.植物病害的主要特征是什么? 2.癥狀在病害診斷上有什么作用? 3.植物病害對農業生產的危害性如何?

實驗二

植物病理徒手切片制作

一、實驗目的

觀察植物病害病原物的形態，進行病原物的分類鑒定，研究受病組織的組織結構病變，受病植物組織與病原物的解剖學關系，以及對于難得一見病原物的保存備用等，都需將材料制成適當的顯微玻片標本。因此，徒手制片技術也是植物病理學研究的重要手段之一。通過本次實驗系統學習實踐常用的徒手制片技術，為以后開展植物病理學的有關研究工作奠定堅實的制片技術基礎。

二、實驗材料、試劑和器材 1．受病植物組織

2.解剖針、刀片、剃刀、移置環、酒精燈、載玻片、蓋玻片、毛筆、淺玻皿、浮載劑、70%酒精、乳酚油、展片臺、光學顯微鏡

三、實驗內容及方法

徒手制片的方法有整體封藏法、徒手切片法、組織透明制片法和涂抹制片法等多種。限于時間本實驗實踐最為常用的整體封藏法和徒手切片法兩種。(一)

整體封藏法

對于生長在植物病部表面或培基上的菌絲體、分生孢子、分生孢子梗和其他孢子器官以及線蟲等，可直接擇取少許封藏在適當的浮載劑中，在顯微鏡下觀察，根據材料的特點和觀察的目的可采用不同的方法封藏制片。常用的方法的概括為挑、刮、撥、撕四種。

1挑：對于在植物受病部位或基質表面生長繁茂的霉狀病原體(如霜霉菌)粉狀病原體(如銹菌、白粉菌)以及培養基上的許多培養菌，可用尖細的解剖針等直接挑取封埋制片，挑取病原體的量，在保證選材典型的前提下，越少越好，以免互相重疊，分辯不清。

取黃瓜霜霉病葉，小麥白粉病葉分別挑取霉狀物和粉狀物鏡檢病原菌的形態特點。

2刮：對病部病原體稀少，或用放大鏡也難辯認霉層的病害標本，可采用兩側具刀的三角刮針(或可用刀片代替)刮取病原物制片。刮的方法是，用刮針的一刃，蘸浮載劑少許，在病部順同一個方向刮取2—3次，將刮得的病原蘸在載玻片的浮載劑

中封片鏡檢。浮載劑在保證浮載質量的前提下要盡量少，否則少量的病原體在大滴的浮載劑中極易分散漂流，在顯微鏡下難以尋找。取玉米小斑病葉，在病斑背面刮制片，鏡檢分生孢子梗和分生孢子的形態。

3撥：對于產生在植物表皮下或半埋生于基物內的病原體孢子器官。如子囊殼、分生孢子器、閉囊殼等，可將病原體連同寄主組織一同撥下，放入浮載劑中，用兩支解剖針，一支穩定材料，另一支撥出植物組織，使病原體外露制片。取小麥全蝕病或白粉病標本，撥小黑點制片，鏡檢子囊果的形態。

4撕：對于寄生在植物表皮細胞上的病原真菌，也可以將此有病原物的表皮撕下來制片鏡檢，這種方法不僅能看到病原物形態，而且可以觀察病原物與寄主的解剖學關系。

在毛毛雨天自田間取回感染白粉病的麥苗(或在保溫箱中取接種染病的麥苗)。用刀片割破葉背表皮再用小鑷子輕輕撕下，放在浮載劑中制片鏡檢白粉病菌分生孢子梗、分生孢子和吸器形態。(二)徒手切片法

欲觀察受病組織病變，病菌侵入和寄主體內擴展過程，以及埋生在基物內真菌子實體的形態結構等，都需將有關材料切成薄片，進行鏡檢，徒手切片是最常用的簡便易行的方法，不需要特殊的設備，而且節省時間，切成的片子不僅可作臨時觀察，也可進一步制成永久性玻片標本。

徒手切片的基本用具是剃刀或刀片。切片時先選取材料并作適當的修整，以左手的食指和姆指捏住材料，中指頂住材料下端，使材料上端突出于手指以上2—3毫米。右手握穩刀，從左向右后方斜向切割。注意刀口必須以材料面垂直。否則所得切面不正。同時雙手不應緊靠身體，而是要活動自如。用臂力均勻地沿刀口后部起拉向前方，連續切割4—5片后，用毛筆蘸水輕輕沿刀口取下，放入盛有水的淺玻皿中，在此過程中左手握著的材料不要放下，否則再切時難按原位置拿材料，此外，在切片過程中，必須常用毛筆蘸水濕潤材料，以免材料干涸不便切割。

對于過于柔軟或較薄的材料，可以夾在“夾持物”中，進行切片更為方便。新鮮胡鮮卜和馬鈴薯塊都可作“夾持物”用。實驗室中通常將通草、接骨木或向日葵的莖髓，剪成適當大小，浸于70%酒精中備用。

切割一定數量的薄片后，用移置環在淺玻皿中選取合用的材料薄片，放在載玻片的水滴中，鏡檢合格者即酒精燈上將水烘干并擺正材料，然后加一滴乳酚油或其浮載劑；放在展片臺上略加熱，鏡檢如無氣泡，即可小心加蓋片，用吸水紙吸除多余的浮載劑，最后貼好標簽，平放于切片板上，待干燥適宜時封固。

徒手切片的缺點是對于微小或過大，柔軟、多汁、肉質及堅硬的材料不易切取，也難制成連續切片，此外切片的厚薄也難一致。切片機切片即可克服這些缺點。

病名： 學名： 制片人： 時間：

切片的標簽制法

四、實驗報告及作業

1．每人交兩片符合質量要求的玻片標本。

2.整體封藏法和徒手切片法兩種基本徒手制片技術都在什么情況下使用? 徒手切法制片有什么優缺點? 怎樣解決這種方法本身存在的問題? 附：常用浮載劑及封固劑

1.水作浮載劑：最常用，但易于干燥，僅適于暫時性檢查，不易封固保存，且易形成氣泡(檢查材料以酒精、5%明膠、水或稀肥皂水稍浸，洗凈后再以水浮載可除去氣泡)。

2.乳酚油：也較常用，成分及配比如下：

苯酚結晶(加熱熔化)20ml

乳酸20ml

甘油40ml

蒸餾水20ml

乳酚油不易干燥，標本可存放幾天以上，為使標本易于辯別，常在其中加染料苯胺藍(棉藍)，用量是0.05—0.1%(也有的加0.2—0.5%的錐蟲藍等)，因其是酸性染料，可染真菌原生質而不染細胞壁，故對分隔難辨的真菌孢子等可由此染色而看清。此法一般只用觀察菌態，不適于測量孢子的大小(因為乳酚油的折射率近于孢子和菌絲體，1.43左右)。另一方面，此法制片，封固比較困難(因為乳酚油易于和封固劑起化學作用而分解)，可用達馬樹脂(和乳酚油不起化學作用)和等量蜂蠟混配做封固劑，蜂蠟放于玻璃皿中在水槽上熔化(溫度勿過高)，達馬樹脂在鐵罐中熔化(溫勿過度)，然后將蜂蠟倒入熔化的達馬樹脂中攪和而成(加少量的貼金膠水，可增進與玻璃的附著力)，封固時以“L”形銅棒等在煤氣燈上燒熱后，蘸少許封固劑在蓋玻片周圍封固，此封固劑干燥快，經久不壞。但由于其致癌作用而逐漸被淘汰而改用甘油乳酸液。

3.甘油乳酸液：也可加苯胺藍等染料，其成分如下：

乳酸

500ml

甘油

1000ml

蒸餾水

500ml

4.水合氯醛碘液：成分配比如下：

水合氯醛

100g

碘化鉀

5g

碘

1.5g

水

100ml

碘與碘化鉀研和，加水溶解。然后與水合氯醛混合，此浮載劑較好，能使真菌組織透明，并染上顏色，能彌補乳酚油的不足，一一看清細胞壁和其它結構，此法制片只可保存幾天，不宜久存，為保存，可除去碘液再用乳酚油浮載后封存。5.甘油：此浮載劑適于保存藻類、水霉菌等柔軟標本將標本放在一滴10%的甘油中，加蓋玻片，水分蒸發后，隨時補加甘油至水分蒸發凈，制成的標本玻片平放可經久不壞，(擦去多余甘油，用香脂油或其它封固劑封固，可永久保存)。6.甘油明膠：成分及配方如下：

明膠

5g

甘油

35ml

水

30ml

明膠在水中浸透，加熱至35℃溶化，加甘油攪和，用紗布過濾后使用。

徒手切片及其它標本，都可用此劑浮載制片，標本染色(或不染)后，先用甘油脫水(干燥標本可不脫水)，挑取小團甘油明膠放在載片上，微加熱，待其熔化而氣泡消失后，將標本取出吸除去多余甘油后移入熔化的甘油明膠中，加蓋玻片輕輕下壓，擦去蓋玻片周圍的多余甘油明膠。平放十幾天，干后長期保存，用香脂或其它固劑封固后長久保存。

此浮載劑對于干燥標本易出氣泡，用醋酸甘油先予處理可防此弊，成分配比如下：

醋酸鉀(2%水溶液)300ml

甘油

120ml

酒精

180ml

標本放在載玻片上加小滴醋酸甘油，微加熱以除氣泡，并蒸去大部分油劑，趁熱加入小團甘油明膠，熔化后加蓋玻片，其后步驟同上。

實驗三

真菌的形態觀察

真菌分布廣泛，種類繁多，已報導的將近

45000多種，是植物病原生物中最主要的一大類群，它所引起的病害占植物病害的80%以上，盡管真菌形態差異很大，但基本結構相似，大多數真菌有營養體和繁殖體之分，營養體是指吸收養分的器官，繁殖體是指從營養體上產生的各種類型的孢子。

真菌產生孢子的機構，無論是有形性的還是無性的，統稱為子實體。真菌的孢子分為無性孢子和有性孢子兩類。無性孢子有游動孢子、孢囊孢子、分生孢子和厚垣孢子；有性孢子有休眠孢子囊、卵孢子、接合孢子、子囊孢子和擔子孢子。真菌孢子的形態特征是鑒定和分類學上的重要依據，其營養體及其變態和菌組織體則是真菌分類的重要參考依據，有的還是重要的鑒別特征和分類依據。

一、實驗目的

通過本次實驗熟悉真菌的營養體和繁殖體的基本形態，為以后真菌病害的病原物鑒定和真菌分類奠定初步基礎。

二、實驗內容、材料和方法(一)真菌的營養體 1菌絲和菌絲體

除少數原始的類群以外，真菌典型的營養體是極為細小的絲狀體，這種絲狀體稱為菌絲，生長成叢的菌絲稱為菌絲體，低等真菌的菌絲是無隔的，大多數真菌是有隔的。

(1)挑取馬鈴薯晚疫病菌(Phytophthora infestans)或瓜果腐霉病菌(Pythium aphanidermatum)制片，鏡檢無隔菌絲。

(2)挑取立枯絲核菌(Rhizoctonia solani)制片鏡檢有隔菌絲。

(3)觀察各種病原真菌在平面和斜面培養基上形成的菌落，注意菌落大小、形狀、厚薄、質地、顏色等形態特點。2菌絲組織體

有些真菌的菌絲體，在一定的條件下或一定的發育階段，可形成特殊的組織體，常見有菌核、子座和根狀菌索。

(1)菌核：菌核是由擬薄壁組織和疏絲組織形成的一種休眠體，既是真菌貯藏養分的器官，又是真菌用以度過不良環境的休眠機構，菌核大小不一，色澤和形狀也各不相同。菌核中的菌絲組織已有分化現象，外皮組織細胞排列緊密，色深壁厚，具有保護作用，為擬薄壁組織；內層細胞壁薄色淡，排列疏松，仍可維持營養作用，為疏絲組織。

肉眼觀察麥角病、油菜菌核病、黃瓜菌核病和大蔥菌核病標本，比較菌核形狀、大小、顏色；鏡檢細辛菌核病的菌核制片，注意比較表皮與內部組織細胞的排列特點。

(2)子座：子座是由擬薄壁組織和疏絲組織形成的容納子實體的座墊狀結構，或由菌絲體與部分寄主組織結合而成的稱為假子座。子座是真菌從營養體到繁殖體的過渡機構，除可在其上或其內形成子實體外，也有度過不良環境的作用。

肉眼觀察稻曲病菌(Ustilaginoidea virens)的分生孢子座；鏡檢蘋果樹腐爛病菌(Valsa mali)和稻

香

柱菌(Epichloe typhina)所形成的子座制片，注意子座形狀，著生部位及內部繁殖體類別。

(3)根狀菌索：少數高等真菌的菌絲體還可糾結成繩索狀的組織體，形如高等植物的根，故稱根狀菌索，其作用是幫助菌體蔓延和抵抗不良環境，根狀菌縈組織也有表皮和內部組織的分化。

肉眼觀察林木上根狀菌索的外部形狀，注意和菌核比較，找出二者區別。

3菌絲體上分化出的吸收養分組織

(1)吸器：是寄生在細胞間的真菌，特別是一些專性寄生菌在菌絲體上形成的吸收養分的器官，形狀有球狀、絲狀、掌狀、裂片狀等。

鏡檢小麥白粉病菌(Blumeria graminis)吸器制備片，注意吸器的形狀及其形成的部位。

(2)假根：為伸入基物內的菌絲體，形如高等植物的根系，故稱假根。假根除用其吸收養分外，還有固著菌體的作用。

挑取培養基中培養的甘薯軟腐病菌(Rhizopus nigricans)的菌絲(注意針尖要插入培養基內)制片鏡檢或鏡檢根足霉(Rhizopus sp.)制備片，注意假根與普通營養菌絲的區別。

(3)附著胞：從幻燈片或照片觀察病菌侵染寄主植物形成附著胞的形態。

(4)菌環和菌網：捕食性真菌常由菌絲分化成菌環和菌網組織來捕捉線蟲等小動物，然后再由菌絲侵入線蟲體內吸取營養。(二)真菌的繁殖體——孢子

真菌的繁殖方式分無性和有性兩種，分別產生無性孢子和有性孢子兩大類型。真菌的無性繁殖包括斷裂、出芽和產生孢子等，真菌的有性生殖包括質配、核配和減數分裂三個階段。

1無性孢子：不經過性細胞或性器官的結合便能產生孢子，稱為無性孢子。真菌產生的無性孢子類型很多，主要的有游動孢子、孢囊孢子、分生孢子和厚垣孢子。

(1)游動孢子：游動孢子為鞭毛菌亞門真菌特有的無性孢子，產生在由菌絲頂端細胞或由菌絲分化成的孢子囊梗的頂端細胞膨大形成的孢子囊內、具鞭毛，能游動。

制片鏡檢用線麻粒誘發的綿霉和水霉的游動孢子囊和游動孢子，鏡檢番茄晚疫病菌(Phytophthora infestans)的游動孢囊梗、游動孢子囊和游動孢子。(2)孢囊孢子：孢囊孢子為接合菌亞門真菌特有的無性孢子，生成方式和游動孢子相似，也是內生的，但無鞭毛，不能游動。

挑取黑根霉(Rhizopus sp.)制片(或取制備片)鏡檢孢子囊梗，孢子囊和孢囊孢子，注意觀察孢子囊的形態及其著生位置及孢囊孢子的形態，顏色和產生的數目。(3)分生孢子：子囊菌亞門真菌和大部分半知菌亞門真菌都產生分生孢子，分生孢子外生在分生孢子梗上，形狀、大小、顏色不一，單生，鏈生或集生，分生孢子梗

有的散生，有的束生，有的產生在分生孢子盤上或分生孢子器內，產生在分生孢子器內的分生孢子也叫器孢子。

取玉米大斑病(Exserohilum turcicum)的病葉，用刀片輕輕刮取病斑上的霉狀物制片鏡檢分生孢子梗和分生孢子或挑取斜面培養基上培養的小麥根腐病菌(Bipolaris sativum)制片鏡檢分生孢子梗和分生孢子，另取蘋果灰斑病(Phyllosticta pirina)制片鏡檢分生孢子器和器孢子，注意分生孢子的形狀，色澤，細胞數目及著生情況。(4)厚垣孢子：鏡檢厚垣孢子制備片，菌絲中或孢子中個別細胞膨大、細胞壁加厚的孢子即厚垣孢子。

2有性孢子：由兩個不同的性細胞或性器官相結合而產生的孢子叫有性孢子，有性孢子主要有以下4種。

(1)卵孢子：部分鞭毛菌亞門真菌的有性孢子，由菌絲上產生的兩種異形配子囊交配產生。制片鏡檢谷子白發病菌(Sclerospora graminicola)的卵孢子或鏡檢大豆霜霉病菌(Peronospora manshurica)卵孢子制備片，注意卵孢子形狀、大小、顏色，孢壁形態。

(2)接合孢子：為接合菌亞門真菌的有性孢子，由兩個同形配子囊交配而成。鏡檢毛霉(Mucor)接合孢子制片，注意接合孢子的大小，形狀，顏色及表現特點。(3)子囊孢子：為子囊菌亞門真菌產生的有性孢子，由兩個異形配子囊交配生成，子囊孢子產生在子囊內，多為8個，子囊除極少數子囊菌裸生外，多數子囊菌生于子囊果中。取山楂白粉病(Podosphaera oxyacanthae)病葉，用解剖針將白粉上的小黑點(閉囊殼)仔細撥至載玻片上的水滴中，加蓋片并輕輕壓破閉囊殼，鏡檢閉囊殼，子囊、子囊孢子和附屬絲的形態，特別注意子囊的數目和附屬絲的特點，另取油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotium 132)制備片，鏡檢子囊盤、子囊和子囊孢子。

(4)擔孢子：為擔子菌亞門真菌的有性孢子，由菌絲結合后減數分裂而成，外生于擔子或先菌絲上。挑取萌發的玉米絲黑穗病菌(Sphacelotheca reiliana)制片鏡檢冬孢子、先菌絲及擔孢子的形態，另取小麥腥黑穗病菌(Tilletia caries)冬孢子萌發的制備

片，鏡檢冬孢子、先菌絲及擔孢子的形態，比較兩種黑粉病菌的區別。

另外還有一種有性孢子為休眠孢子囊，由兩個游動配子結合而成，為二倍體，萌發時減數分裂釋放出單倍體的游動孢子。如壺菌、根腫菌可產生休眠孢子囊，根腫菌產生的休眠孢子囊萌發時通常只釋放出一個游動孢子，有時也稱為休眠孢子。

三、實驗報告及作業

1繪有隔菌絲，無隔菌絲和菌核剖面圖。

2繪分生孢子、孢囊孢子、卵孢子及子囊孢子的形態圖。 3菌絲有無隔膜是否反應一定的進化關系? 4菌核和子座在形態和功能上有何不同?

5真菌吸器的有無與寄生性的強弱是否有一定關系?

6分生孢子和孢囊孢子的生成過程，形成數量(與產孢細胞比較)及著生部位等方面

有何不同?

7卵孢子、接合孢子、子囊孢子和擔子孢子在有性生殖過程中形成的時期有何不同?

實驗四

鞭毛菌亞門真菌形態觀察

鞭毛菌是一類低等真菌，其中不少是水生的。它們的共同特征是無性繁殖時產生有鞭毛的游動孢子。根據菌體的形態和游動孢子鞭毛的特征分為根腫菌綱、壺菌綱、絲壺菌綱和卵菌綱。其中與植物病害關系較為密切的有根腫菌綱、壺菌綱、卵菌綱。

一、實驗目的

了解鞭毛菌亞門中根腫菌綱、壺菌綱和卵菌綱真菌的主要形態特征，掌握與植物病害有關的重要屬的形態特征、分類依據及所致病害的癥狀特點，同時學習使用檢索表來鑒定病菌，為分類鑒定打下初步基礎。

二、實驗儀器與用品

顯微鏡、幻燈機、投影儀、計算機及多媒體教學設備；載玻片、蓋玻片、浮載劑（蒸餾水或乳酚油）、吸水紙、解剖刀、挑針、鑷子、紗布、刀片、通草、酒精燈、無菌水等。

三、實驗材料

1．蕓苔根腫菌（Plasmodiophora brassicae）2.馬鈴薯粉痂菌（Spongospora subterranea）3．禾谷多粘霉（Polymyxa graminis）

4.玉蜀黍節壺菌（Physoderma maydis）

5．串囊水霉（Saprolegnia.monilifera）

6.稻綿霉（Achlya oryzae）

7.瓜果腐霉（Ｐythium aphanidermatum）

8.致病疫霉（Phytophthora infestans）

9.禾生指梗霉(Sclerospora graminicola)

10.葡萄霜霉病菌（Plasmopara viticola）

11.寄生霜霉（Peronopora parasitica）

12.瓜類霜霉病菌（Pseudoperonospora cubensis）

13.萵苣盤梗霉（Bremia lactucae）

14.十字花科白銹病菌（Albugo candida）

以上病害標本或新鮮材料、掛圖、病原菌永久玻片，多媒體教學課件（包括幻燈片、錄象帶、光盤等影像資料）以及水霉和腐霉游動孢子形成與釋放的錄相帶等。

四、實驗內容和方法

（一）根腫菌綱（Plasmodiophoromycetes）

1.蕓苔根腫菌 取甘藍根腫菌切片，鏡檢切片中的病原菌。有的寄主細胞內可見到許多堆集在一起的魚籽狀顆粒，是病菌的休眠孢子。休眠孢子近球形。

2.馬鈴薯粉痂菌 鏡檢馬鈴薯粉痂病菌切片，在寄主根的皮層組織的受害細胞中可看

到病原菌的休眠孢子，球形至多角形，多個休眠孢子聚集呈海綿狀或空心球。

3.禾谷多粘霉 選取有褐點的根，用解剖刀或鑷子撕取小麥根基皮層，制成臨時玻片，鏡檢。病菌的休眠孢子常有規律地呈條狀排列。

提示 被寄生的表皮細胞呈褐色小點，必須仔細觀察才能見到。

（二）壺菌綱（Chytridiomycetes）

玉蜀黍節壺菌（Physoderma maydis）觀察由玉蜀黍節壺菌引起的玉米褐斑病標本。用針挑取受害病組織內呈黃色粉末狀物制成臨時玻片，或對病組織作徒手切片，鏡檢可見到許多金黃色扁球狀的休眠孢子，休眠孢子橢圓形，一面扁平有蓋。

（三）卵菌綱(Oomycetes)水霉目(Saprolegniales)

1.串囊水霉 引起水稻爛秧，又稱水稻爛秧水霉菌。孢子囊圓筒形或棍棒狀，層出式，即新的孢子囊從老的空孢子囊內基部長出，游動孢子具明顯的兩游現象。

2.水稻爛秧綿霉菌 孢子囊圓筒形或棍棒狀，合軸分枝，新的孢子囊從老孢子囊的基部外側長出，呈聚傘形排列，游動孢子第一個活動時期很短，休止孢在孢子囊頂部孔口處聚集成團。

霜霉目（Peronosorales）

1.腐霉屬（Pythium）觀察瓜果的腐爛病病果上的白色菌絲體，將生長旺盛的小塊菌絲體移至清水中培養24～48h，菌絲頂端即形成大量游動孢子囊，用針挑取在清水中培養過的菌絲，觀察腐霉菌的游動孢子囊，絲狀、姜瓣狀或球狀等，頂生或間生，無特殊分化的孢囊梗。孢子囊不脫落，萌發時在其頂端產生一管狀物，原生質經管狀物排出而形成泡囊。游動孢子產生在泡囊內。

2.疫霉屬（Phytophthora）取馬鈴薯或番茄晚疫病標本制片觀察。孢囊梗2~3支成叢自氣孔伸出，假軸狀分枝，小梗基部膨大，多次產生孢子囊，使孢子囊梗上部呈節狀；孢子囊近球狀、卵形或梨形等，具乳突。

3.霜疫霉屬（Peronophthora）取荔枝霜疫霉病標本挑取霉層觀察，孢囊梗直立，雙叉銳角分枝，孢囊梗多級有限生長。孢子囊檸檬形、橢圓形，乳突明顯。

4.霜霉屬（Peronospora）取十字花科植物（油菜、白菜等）的霜霉病標本從葉背面刮取霉層觀察，孢囊梗二叉狀銳角分枝，末端尖銳。

按照寄生霜霉的觀察方法，選取禾生指梗霉、葡萄霜霉病菌、瓜類霜霉病菌、萵苣盤梗霉等材料，對照下列檢索表，制片觀察各種霜霉病的病原菌或觀察病菌永久玻片標本，掌握霜霉科幾個常見屬的主要形態特征。霜霉科主要屬的檢索表

1.孢囊梗粗壯，上部為重復2～3次的不規則二叉分枝…………指梗霉屬（Sclerospora）1.孢囊梗較細……………………………………………………………………………………2 2.孢囊梗單軸分枝，小軸與主軸成直角，分枝末端平鈍………單軸霉屬（Plasmopara）2.孢囊梗呈現銳角二叉分枝……………………………………………………………………3 3.分枝兩側不對稱，頂端尖銳……………………………假霜霉屬（Pseudoperonospora）3.分枝兩側對稱…………………………………………………………………………………4 4.分枝頂端尖細……………………………………………………… 霜霉屬（Peronospora）4.分枝頂部膨大，呈盤狀，具3～4個指狀周生小梗…………………盤梗霉屬（Bremia）5.白銹菌屬（Albugo）鏡檢莧菜白銹病菌組織切片，或取以上病葉徒手切片制成臨時玻片鏡檢。孢囊梗平行排列在寄主表皮下，短棍棒形，孢子囊串生。白銹菌危害癥狀是在寄主表面產生乳白色或粉狀的皰斑，這是病菌在寄主表皮下形成的孢子囊堆，白色粉狀物是成熟的孢子囊。

五、實驗報告及作業

1.鞭毛菌亞門真菌的共同特征和分類依據是什么？

2.以營養體、無性繁殖、有性生殖來比較鞭毛菌亞門三個綱的區別。

3.觀察十字花科蔬菜根腫病菌、馬鈴薯粉痂病菌、禾谷多粘霉菌、玉米褐斑病菌、水霉菌或綿霉菌，繪休眠孢子囊或游動孢子囊圖。

4.繪瓜果腐霉病菌、馬鈴薯晚疫病菌或十字花科蔬菜白銹病菌孢囊梗、孢子囊，卵孢子圖。

5.繪瓜類霜霉病菌、萵苣霜霉病菌、葡萄霜霉病菌孢囊梗、孢子囊圖。6.詳繪大白菜霜霉病和粟白發病的病原形態圖（包括無性繁殖和有性生殖）。7.卵菌綱真菌有哪些特點？結合它們的生物學特性、寄生性及病害特點說明本綱真菌進化的情況。

實驗五

接合菌亞門真菌形態觀察

接合菌亞門真菌的共同特征是有性生殖產生接合孢子。大多數是腐生的，少數可以引起農產品的腐爛。接合菌營養體為發達的無隔菌絲體，無性繁殖產生具細胞壁的孢囊孢子，有性生殖產生接合孢子。孢子囊的形態、孢囊孢子釋放以及寄生性等是重要的分類依據。

一、實驗目的

通過實驗掌握接合菌的一般形態及其所致病害的癥狀類型，了解同宗配合和異宗配合的含義及同型配子囊、異型配子囊的差別。

二、實驗儀器與用品

顯微鏡、幻燈機、投影儀、計算機及多媒體教學設備；滅菌培養皿、載玻片、蓋玻片、浮載劑（蒸餾水或乳酚油）、吸水紙、解剖刀、挑針、鑷子等。

三、實驗材料

甘薯軟腐病新鮮標本、掛圖、病原菌永久玻片，多媒體教學課件（包括幻燈片、錄象帶、光盤等影像資料）等；根霉屬的甘薯軟腐病、犁頭霉和毛霉“﹢、﹣”菌株的斜面培養物或培養皿平板培養物；三角瓶裝PDA培養基。

四、實驗內容和方法

（一）甘薯軟腐病癥狀觀察

受害甘薯變軟腐爛，有時散發出酒味，病薯表面長出白色、灰色至黑色毛狀物。仔細觀察，能見到白色菌絲體中有許多小黑點。小黑點是病菌的孢子囊。

用針挑取霉層制片、鏡檢，觀察孢子囊、孢囊孢子、孢囊梗及囊軸、假根的形態。

（二）匐枝根霉培養物的鏡檢觀察

用挑針仔細地從培養的匐枝根霉菌中挑取少許連有培養基的培養物，制成臨時玻片，在低倍鏡下檢查。或者用實體解剖鏡直接觀察培養皿上的菌體。觀察菌絲的形態和具有分枝的孢囊梗及其基部的假根，孢囊梗之間有匍枝狀的菌絲相連，在孢囊梗基部有深入寄主細胞或基質中分枝狀的假根。在每一個孢囊梗的頂端產生一個圓球狀的孢子囊，用高倍鏡觀察孢子囊內部的構造，在未成熟的孢子囊內，往往只有大量的小顆粒體，接近成熟的或成熟的孢子囊內則充滿了許多褐色圓形的孢囊孢

子。孢子囊壁破裂后，孢子散出，露出鑼錘形的囊軸。

（三）接合孢子觀察

取根霉屬和犁頭霉屬接合孢子玻片觀察，并注意原配子囊、配囊柄及配子囊的發育特點。成熟的接合孢子深褐色，表面粗糙。犁頭霉菌的接合孢子在配子囊柄的著生處有附屬絲，注意觀察配囊柄的形狀及大小。

（四）異宗配合現象觀察

取融化了的PDA培養基、滅菌培養皿置于鋪有濕紗布的桌上，在灑精燈火焰附近，按無菌操作要求，將培養基倒進滅菌培養皿內，每個 9cm 皿內倒入10～15ml培養基，冷卻后即成平板。取具有“﹢、﹣”性征分化并有親和性的匐枝根霉、犁頭霉或毛霉兩個菌株，分別按下列圖示方式接種到三個培養皿的平板上，在培養皿的底部寫上所接種的菌株編號、接種日期，在 25°C 溫箱中培養一周，觀察異宗配合現象。記錄哪個培養皿中形成了接合孢子。

五、實驗報告及作業

1.接合菌亞門真菌的主要特點是什么？與鞭毛菌亞門有何區別？

2.根據+、-菌株平板接種培養結果，說明其產生接合孢子的原因？

3.何為同型配子囊、異型配子囊？

4.哪些接合菌與病蟲害的生物防治有關？怎樣利用它們？

5.繪匍枝根霉菌孢子囊、孢囊梗、孢囊孢子、假根、匍匐菌絲和接合孢子形態圖。

實驗六

子囊菌亞門真菌形態觀察

子囊菌是一類高等真菌。菌絲體一般都很發達，有隔膜，具分枝，有的菌絲體可以形成菌核、子座等機構。子囊菌的共同特點是有性生殖產生子囊和子囊孢子。子囊菌所致病害的種類很多，其中許多是重要的經濟作物病害。子囊菌亞門分綱的主要依據是子囊果及子實層的有無、子囊果的類型、子囊的特征等。據此分6個綱：半子囊菌綱、不整囊菌綱、核菌綱、腔菌綱、盤菌綱和蟲囊菌綱。

一、實驗目的

通過實驗，了解子囊菌亞門各個綱病原菌的主要形態特征，掌握子囊菌中與植物病害有關的重要屬的形態特征、分類依據及所致主要病害的癥狀特點。

二、實驗儀器與用品

顯微鏡、幻燈機、投影儀、計算機及多媒體教學設備；滅菌培養皿、載玻片、蓋玻片、浮載劑（蒸餾水或乳酚油）、吸水紙、解剖刀、挑針、鑷子、紗布、刀片、通草、擦鏡紙、無菌水等。

三、實驗材料

1.桃縮葉病(Tapharina deformans)和李袋果病(T.pruni)2.散囊菌(Eurotium sp.)3.禾白粉病菌(Blumeria graminis)

4.向日葵白粉病菌(Erysiphe cichoracearum)5.瓜白粉病菌(Sphaerotheca fuliginea)

6.桃白粉病菌(Podosphaera tridactyla)7.洋槐白粉病菌(Microsphaera sp.)

8.桑里白粉病菌(Phyllactinia corylea)9.葡萄白粉病菌(Uncinula necator)

10.甘薯黑斑病菌(Ceratocystis fimbriata)11.玉蜀黍赤霉菌(Gibberella zeae)

12.蘋果樹腐爛病菌(Valsa mali)13.小麥全蝕病菌(Gaeumannomyces graminis)14.黑麥麥角菌(Claviceps purpurea)15.竹多腔菌(Myriangium haraeanum)

16.蔥葉枯病菌(Mycosphaerella sp.)17.苜蓿輪紋病菌(Pleospora herbarum)

18.核盤菌（Sclerotinia sclerotiorum）

19.紫云英菌核病菌(S.trifoliorum)

以上病害標本或新鮮材料、掛圖、病原菌永久玻片、多媒體教學課件（包括幻燈片、錄象帶、光盤等影像資料）。

四、實驗內容和方法

（一）半子囊菌綱(Hemiascomycetes)

外囊菌屬(Taphrina)取桃縮葉病或李袋果病材料作臨時玻片，在顯微鏡下檢

查。可看見子囊在寄主葉片的表皮下排列成柵欄狀，形成無包被的子囊層，子囊下有足胞，常含孢子4～8個。子囊圓筒形，近球形或橢圓形。

（二）不整囊菌綱(Plectomycetes)

散囊菌屬(Eurotium)觀察示范鏡下散囊菌的閉囊殼、子囊或散在閉囊殼內的子囊孢子。閉囊殼壁薄，只有2~3層細胞構成。子囊孢子單胞、近圓形。

（三）核菌綱(Pyrenomycetes)白粉菌目(Erysiphales)

本目是專性寄生菌。白粉菌侵染植物可引起多種植物的白粉病。白粉菌菌絲表生，在寄主體表擴展蔓延。一般在葉部引起褪綠或黃色斑，以后葉面出現白色或灰白色的粉狀物，即白粉菌的無性繁殖形成的分生孢子。生長后期，在病部形成許多黑色小顆粒。這些小黑點是白粉菌的閉囊殼。閉囊殼有附屬絲，附屬絲呈絲狀，其形態因種而異。閉囊殼內子囊數目也不一樣，一至多個。附屬絲的形狀和子囊數目的多少是分屬的依據。

選取小麥白粉病、向日葵白粉病、瓜白粉病、桃白粉病、洋槐白粉病、桑里白粉病、葡萄白粉病等不同材料。在實體解剖鏡下觀察閉囊殼及附屬絲的輪廓及形態。挑取閉囊殼作臨時玻片，在顯微鏡下檢查。注意閉囊殼的形狀、有無孔口、閉囊殼表面附屬絲的形狀和著生部位。然后輕輕擠壓蓋玻片，使閉囊殼破裂。觀察閉囊殼內的子囊，數數是單子囊還是多子囊。

對照下列檢索表，觀察各種白粉病的病原菌永久玻片或標本，掌握白粉菌科幾個常見屬的主要形態特征及所致病害癥狀。白粉菌主要屬檢索表

1.閉囊殼內單個子囊……………………………………………………………………………2 1.閉囊殼內多個子囊……………………………………………………………………………3 2.附屬絲菌絲狀…………………………………………………… 單囊殼屬(Sphaerotheca)2.附屬絲剛直，較粗，頂端二叉狀重復分枝，分枝末端螺旋狀卷曲………… ………………………………………………………………叉絲單囊殼屬(Podosphaera)3.附屬絲菌絲狀…………………………………………………………………………………4 3.附屬絲非菌絲狀………………………………………………………………………………5 4.附屬絲發育不良，較短……………………………………… 布氏白粉菌屬（Blumeria）

4.附屬絲較長………………………………………………………………粉菌屬(Erysiphe)5.附屬絲剛直，基部膨大，頂端尖銳…………………………………球針殼屬(Phyllactinia)5.附屬絲基部不膨大……………………………………………………………………………6 6.附屬絲粗，剛直，頂端二叉狀重復分枝，分枝末端卷曲……叉絲殼屬(Microsphaera)6.附屬絲不分枝，頂端卷曲………………………………………… 鉤絲殼屬(Uncinula)

球殼菌目（Sphaeriales）

1.長喙殼屬(Ceratocystis)觀察甘薯黑斑病菌培養物，挑取病菌灰白色物中間深褐色或黑色毛刺狀小點，觀察病菌的子囊殼。子囊殼深色、球形，有長頸，開口處有須狀物，稱口須。輕壓蓋玻片將子囊殼壓破，成熟的子囊孢子頭盔狀，子囊壁早期膠化消解。

2.赤霉屬（Gibberella）取培養在麥粒上的玉蜀黍赤霉菌子囊殼，制成臨時玻片鏡檢，在顯微鏡下觀察。子囊殼藍色或紫色，散生或聚生。子囊孢子多個細胞，梭形。

3.黑腐皮殼屬（Valsa）取蘋果樹腐爛病菌切片鏡檢，子囊殼埋生在子座內，有長頸伸出子座。子囊孢子單細胞，香蕉形。

4.頂囊殼屬（Gaeumannomyces）觀察小麥全蝕病害標本，注意病株基部根系生長不良，莖基部葉鞘枯腐，葉鞘內有黑色小顆粒狀物，即病菌的子囊殼。取含有子囊殼葉鞘做切片，置顯微鏡下觀察子囊殼形態，子囊殼頂端有短喙；子囊孢子細線狀，多細胞。

5.麥角菌屬（Claviceps）取黑麥麥角菌切片，置顯微鏡下觀察，頭狀子座內壁周圍有瓶狀子囊殼，子囊殼開口向外。子囊殼內有子囊和子囊孢子。子囊細長，子囊孢子線形。

（四）腔菌綱(Loculoascomycetes)

1.多腔菌屬（Myriangium）取竹多腔菌切片置顯微鏡下觀察，可見到很發達的子囊座組織。子囊球形，單生，子囊孢子有縱橫隔膜, 磚格狀。

2.球腔菌屬（Mycosphaerella）取蔥葉枯病菌切片，置顯微鏡下觀察,單腔多子囊。子囊圓柱形至棍棒形，有雙層壁。子囊初期束生，后平行排列；子囊孢子橢圓形，雙胞。

3.格孢腔菌屬（(Pleospora)取苜蓿輪紋病病菌切片，置顯微鏡下觀察，囊孢子長圓

形或卵圓形，磚格狀（多細胞，有縱橫分隔）。

(五)盤菌綱(Discomycetes)核盤菌屬（Sclerotinia）取油菜菌核病菌子囊盤切片，置顯微鏡下觀察，子囊盤具長柄；子囊孢子橢圓形或紡錘形。觀察油菜菌核病癥狀及菌核萌發標本，菌核球形至豆瓣形，鼠糞狀，一般生子囊盤4～5個。菌核上形成的子囊盤具長柄。

五、實驗報告及作業

1.子囊菌亞門各綱的主要特征是什么？ 2.繪外囊菌屬和散囊菌屬的形態圖。

3.白粉屬和單絲殼屬、叉絲殼屬和叉絲單囊殼屬的主要區別是什么？ 4.繪白粉屬、叉絲單囊殼屬、球針殼屬、鉤絲殼屬的形態圖。5.繪赤霉屬、多腔菌屬、核盤菌屬形態圖。6.子囊菌有性繁殖體的病征類型和特點是什么？

實驗七

擔子菌亞門真菌形態觀察

擔子菌亞門真菌一般稱作擔子菌，是真菌中最高等的。其共同特征是有性生殖產生擔孢子。擔子菌亞門的分綱依據是擔子果的有無，擔子果的發育類型可分為三個綱：冬孢菌綱、層菌綱、腹菌綱。與植物病害關系密切的是冬孢菌綱。根據擔子的來源及特征，擔孢子的數目及位置，冬孢菌綱分為銹菌目和黑粉菌目。銹菌的分類主要依據冬孢子的形態，排列和萌發的方式。而黑粉菌的分類主要依據冬孢子的萌發方式，孢子的分隔，排列及其大小，形狀及是否有不孕細胞等進行分類。

一、實驗目的

通過實驗了解擔子菌亞門冬孢菌綱主要病原菌的形態特征，掌握銹菌目和黑粉菌目中與植物病害有關的重要屬的形態特征、分類依據及所致主要病害的癥狀特點。

二、實驗儀器與用品

顯微鏡、幻燈機、投影儀、計算機及多媒體教學設備，滅菌培養皿、載玻片、蓋玻片、浮載劑（蒸餾水或乳酚油）、吸水紙、解剖刀、挑針、鑷子、紗布、蒸餾水滴瓶、通草、刀片、擦鏡紙、酒精燈、無菌水、PDA培養基等。

三、實驗材料

銹菌目（Uredinales）：

1.菜豆銹菌（Uromyces.appendiculatus）2.禾柄銹菌（Puccinia graminis f.sp.tritici）3.禾葉銹菌（Puccinia recondita）

4.禾條銹菌（Puccinia striiformis）

5.梨膠銹菌（Gymnosporangium haraeanum）6.薔薇多胞銹菌（Phragmidium rosae-multiflorae）7.亞麻銹菌（Melampsora lini）

8.花椒鞘銹菌（Coleosporium xanthoxyli）9.松櫟銹菌（Cronartium quercum）

10.棗層銹菌（Phakopsora zizyphi-vulgaris）

黑粉菌目（Ustilaginales）：

1.小麥散黑粉菌（Ustilago tritici）

2.玉蜀黍黑粉菌（U.maydis）

3.絲軸黑粉菌（Sphacelotheca reiliana）

4.高粱堅粒黑粉菌（Sphacelotheca sorghi）5.高粱散粒黑粉菌（Sphacelotheca cruenta）6.高粱團黑粉菌（Sorosporium ehrenbergii）7.小麥網腥黑穗菌（Tilletia caries）

8.小麥光腥黑穗菌（Tilletia tritici）9.稻尾孢黑粉菌（Neovossia horrida）

10.稻葉黑粉菌（Entyloma oryzae）11.小麥條黑粉菌（Urocystis tritici）

以上病菌引起的病害標本或新鮮材料、掛圖、病原菌永久玻片和病菌的PDA培養物;多媒體教學課件（包括幻燈片、錄象帶、光盤等影像資料）。

四、實驗內容和方法

（一）冬孢子萌發試驗

冬孢菌綱不同類型冬孢子萌發方法是不同的，幾種常見的冬孢子的萌發方法如下：

1．小麥網腥黑穗菌和光腥黑穗菌 將冬孢子撒在保濕器皿內的用1%硝酸鈣液潤濕的濾紙上，在17～ 22℃ 下培養，每天于日光燈下照射4h，3d后檢查萌發情況。

2．小麥條銹病菌 取帶冬孢子病葉在0.5～1%檸檬酸中浸15min，再放于兩層潮濕的濾紙之間，于-2~-5℃ 下冷凍5d后，挑取冬孢子置于水滴內，在冰箱內（4℃）保存48h即可萌發。

（二）銹菌目（Uredinales）

1.單胞銹菌屬（Uromyces）觀察菜豆銹病或茭白銹病標本，挑取冬孢子制成玻片觀察。冬孢子具柄，單細胞。

2.柄銹菌屬 觀察小麥桿銹病、小麥葉銹病或小麥條銹病標本，冬孢子堆黑色。將有冬孢子堆的寄主葉片組織切下，制切片于顯微鏡下觀察。冬孢子有一隔膜，分隔處稍縊縮，柄不膠化。

4.膠銹菌屬（Gymnosporangium）從用水浸泡過的膠銹菌冬孢子角上用挑針挑取冬孢子制片觀察，冬孢子雙胞，分隔處不縊縮或稍縊縮。柄絲狀，很長，含膠質。

5.多胞銹屬（Phragmidium）挑取玫瑰銹病組織上的冬孢子，制片觀察，冬孢子多細胞，通常下部膨大易膠化。

6.柵銹菌屬（Melampsora）取亞麻銹菌病組織制作徒手切片觀察。冬孢子無柄，集成殼狀或墊狀，冬孢子僅側面結合成一層，埋生于寄主表皮下。

7.鞘銹菌屬（Coleosporium）取花椒銹病組織制作切片觀察，冬孢子堆生于葉背或排列成環狀，圓形黃褐色。冬孢子無柄，集成殼狀或墊狀的孢子粒，集生于寄主表皮層下。

8.柱銹菌屬（Cronartium）取馬尾松銹病標本制片觀察，冬孢子堆生于葉背，毛狀，冬孢子梭形。

9.層銹菌屬（Phakopsora）取棗銹病組織制作切片觀察，冬孢子堆呈黑色，冬孢子

排成2～4層，長橢圓形或多角形。

（三）黑粉菌目（Ustilaginales）

1.黑粉菌屬（Ustilago）孢子堆外露，很少由寄主組織長期包裹，擔子分隔，擔孢子生在擔子每一細胞的側面。

挑取小麥散黑粉（穗）病組織上的冬孢子制成玻片觀察。冬孢子球形或近球形。另取冬孢子萌發切片觀察。冬孢子萌發產生4個細胞的擔子，從擔子的不同細胞分別生出絲狀分枝，不產生擔孢子。

挑取玉米瘤黑粉病組織上的冬孢子制片觀察，冬孢子球形至卵形。另取冬孢子萌發切片觀察。冬孢子萌發時產生有隔擔子，擔子頂端或分隔處側生梭形的擔孢子。

2.軸黑粉菌屬（Sphacelotheca）冬孢子堆周圍有膜（不孕菌絲），中央有寄主組織，擔子分隔，擔孢子生在擔子每一細胞的側面。

挑取高粱絲黑穗病組織上的冬孢子制片觀察。冬孢子卵圓形或球形，暗褐色，有時混生有不孕細胞，不孕細胞無色透明。

取高粱堅粒黑穗病標本觀察。孢子堆生于子房中，冬孢子多圓形或近圓形，不孕細胞長圓形至近圓形。

取高粱散粒黑穗病標本觀察。冬孢子堆有由菌絲體組成的灰白色被膜，冬孢子球形，分散。

3.團黑粉菌屬（Sorosporium）觀察高粱長粒黑穗病標本，病粒（即菌癭）外層包有一層淺黃色薄膜。孢子堆結合成孢子球，孢子球的結合很松。稍加壓就分散，無不孕細胞。

4.腥黑粉菌屬（Tilletia）取小麥網腥黑穗病或小麥光腥黑穗病標本觀察。冬孢子單生，孢子堆成熟時呈粉未狀，冬孢子較小。孢子堆生于子房內，外包果皮，內部充滿黑紫色粉狀孢子，有腥味。

5.尾孢黑粉菌屬（Neovossia）取水稻粒黑穗病標本挑片觀察，孢子堆寄生于子房內，產生黑粉。挑取黑粉制片，顯微鏡下可見，孢子球形，常有一部分未成熟的透明孢子。

6.葉黑粉菌屬（Entyloma）取水稻葉黑粉病標本，切片觀察。孢子堆生于葉的兩面，圓形至長條形。孢子多角形，結合緊密。取萌發的擔孢子玻片觀察，擔孢子頂

生于擔子上，紡錘形。

7.條黑粉菌屬（Urocystis）取小麥稈黑粉病標本，制片觀察。一至多個厚垣孢子集結成牢固的孢子球，孢子球外有淡色而小的不孕細胞包圍。

五、實驗報告及作業

1.繪黑粉菌屬、腥黑粉菌屬和條黑粉菌屬冬孢子形態圖。2.繪腥黑粉菌屬冬孢子萌發圖。

3.繪柄銹菌屬、單胞銹菌屬、柵銹菌屬和膠銹菌屬冬孢子形態圖。

實驗八

半知菌亞門真菌形態觀察

半知菌亞門真菌的種類很多，其中不少是植物病害的重要病原菌。半知菌的分類主要是根據無性階段的形態特征，包括分生孢子的形態、載孢體的類型、產孢方式等。半知菌亞門分3個綱。芽孢綱：營養體為單細胞或發育程度不同的菌絲體或假菌絲，通過產生芽孢子繁殖；絲孢綱：營養體是發達的菌絲體，分生孢子不產生在分生孢子盤或分生孢子器內；腔孢綱：分生孢子產生在分生孢子盤或分生孢子器內。與植物病害關系比較密切的是絲孢綱和腔孢綱。

一、實驗目的

通過實驗認識半知菌子實體的類型及重要致病菌屬的形態特征，掌握常見植物病原半知菌屬的鑒別特征。

二、實驗儀器與用品

顯微鏡、幻燈機、投影儀、計算機及多媒體教學設備，滅菌培養皿、載玻片、蓋玻片、浮載劑（蒸餾水或乳酚油）、吸水紙、解剖刀、挑針、鑷子、紗布、刀片、通草、酒精燈、放大鏡，恒溫箱，方木塊，剪刀等。

三、實驗材料

半知菌引起的病害標本或新鮮材料、掛圖、病原菌永久玻片和病菌的PDA培養物；多媒體教學課件（包括幻燈片、錄象帶、光盤等影像資料）。

絲孢綱（Hyphomycetes）

1.立枯絲核菌（Rhizoctonia solani）

2.齊整小核菌（Sclerotium rolfsii）

3.稻梨孢（Pyricularia oryzae）

4.玉蜀黍平臍蠕孢（Bipolaris maydis）

5.玉米大斑突臍蠕孢（Exserohilum turcicum）

6.大麗輪枝菌（Verticillium dahliae）

7.蕓苔鏈格孢（Alternaria brassicae）

8.球座尾孢（Cercospora personata）

9.梨黑星孢（Fusicladium virescens）

10.灰葡萄孢（Botrytis cinerea）

11.粉紅聚端孢（Trichothecium roseum）

12.意大利青霉（Penicillium italicum）

13.褐孢霉（Fulvia fulva）

14.尖孢鐮刀菌（Fusarium oxysporum）

腔孢綱（Coelomycetes）

1.膠孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides）2.葡萄痂圓孢（Sphaceloma ampelinum）

3.梨殼囊孢（Cytospora carphosperma）

4.芹菜生殼針孢（Septoria apiicola）

5.高粱生殼二孢（Ascochyta sorghina）

6.甜菜蛇眼病菌（Phoma beta）

7.梨葉點霉（Phyllosticta pyrina）

四、實驗內容和方法

（一）絲孢綱

1.絲核菌屬（Rhizoctonia）觀察預先培養的棉花立枯病菌或小麥紋枯病菌菌落。菌核褐色至黑褐色。挑取菌絲制片觀察，菌絲粗壯，菌絲分枝呈直角，分隔處常縊縮。

2.小核菌屬（Sclerotium）取花生白絹病或小麥、大豆、棉花、煙草等白絹病菌標本或培養觀察，病菌菌絲白色絹絲狀；菌核圓形至長圓形，褐色至黑色，表面暗色，中心無色，組織致密，干時極硬，彼此無菌絲相連。

3.梨孢屬（Pyricularia）取水稻稻瘟病標本，用挑針挑取病葉上的霉狀物制片觀察。分生孢子梗細長，淡褐色，頂部以合軸式延伸，呈曲膝狀，分生孢子多胞，梨形。

4.平臍蠕孢屬（Bipolaris）取玉米小斑病葉，挑取病斑上的霉層觀察。分生孢子梗單生或叢生，上部呈曲膝狀彎曲；分生孢子蠕蟲形或長橢圓形，多胞，臍點稍微突出，平截狀。

5.突臍蠕孢屬（Exserohilum）取玉米大斑病病葉，用挑針挑或刮取其上的黑色霉狀物制片，置顯微鏡下觀察。其分生孢子梗暗色，具分隔，一般少分枝，上部呈曲膝狀。分生孢子棱形，多胞，臍點明顯突出于基細胞外部。

提示 觀察時注意與平臍蠕孢屬的區別，主要在于其臍點是否突出。

6．鐮孢屬（Fusarium）取瓜類枯萎病菌培養觀察，氣生菌絲白色，絨毛狀，在PDA培養基上底部呈淡黃色或淡紫色；挑針挑取培養物制片觀察，小型分生孢子量大，無色，卵圓形，單胞，偶爾雙胞；大型分生孢子無色，紡鍾形或鐮刀形，1～5個隔膜，基部有時有一顯著的突起，稱足胞。

提示 有時可觀察到厚垣孢子，頂生或間生于菌絲體上。

7.輪枝孢屬（Verticillium）取培養好的棉花黃萎病菌平皿，直接放于顯微鏡載物臺上觀察，其分生孢子梗細長直立具分隔，呈輪狀分枝。分生孢子梗呈直角分枝，分生孢子單胞，生于分枝頂端。

提示 培養菌用的培養基不宜太厚以便透射光能穿透，平皿放到載物臺上小心移動，使視野覆蓋菌落邊緣，這樣才能找到理想的輪狀分枝結構。

8.鏈格孢屬（Alternaria）取白菜黑斑病病葉，用挑針挑取病斑上的黑色霉狀物制片，顯微鏡下觀察。分生孢子長棍棒狀，具縱橫分隔，呈磚格狀，頂端有一長條形喙狀細胞。

9.尾孢屬（Cercospora）取芹菜早疫病（斑點病）病葉，挑取霉層制片，分生孢子梗不分枝或少有分枝；分生孢子單生，鞭狀，具多數分隔。

10.黑星孢屬（Fusicladium）挑取梨黑星病葉上的煤煙狀霉層制片，分生孢子梗暗色，頂部稍屈曲，孢痕明顯；分生孢子淡褐色，1～2胞，瓜子形。

提示 注意分生孢子梗的孢痕，在顯微鏡透射光源照射下呈現亮點。

11.葡萄孢屬（Botrytis）取黃瓜或番茄灰霉病標本，挑取其上的灰霉狀物制片觀察。分生孢子梗頂端分枝，末端膨大并產生小突起，其上著生多數分生孢子，外觀呈葡萄穗狀。

12.聚端孢屬（Trichothecium）取棉鈴紅粉病標本，挑取霉層制片觀察，分生孢子梗直立，少分隔或不分隔，分生孢子無色雙胞，洋梨形，常以基部交錯相連的方式在孢子梗頂端聚集成孢子鏈。

13.青霉屬（Penicillium）取柑桔青霉病標本或病菌培養，挑片觀察。分生孢子梗集結成束，“掃帚狀”分枝，分枝末端為瓶狀小梗，生孢子著生在瓶狀小梗上。褐孢霉屬（Fulvia）取番茄葉霉病標本，挑取霉層制片顯微鏡下觀察。分生孢子梗基部細，上部粗，分生孢子串生，孢子鏈常分枝并有芽狀突起。

（二）腔孢綱

1.炭疽菌屬（Colletotrichum）取蘋果炭疽病標本制片觀察，分生孢子盤埋生于寄主表皮下，墊狀無剛毛，成熟后突破表皮，分生孢子梗平行排列成一層，分生孢子單胞。

提示 切片時最好用新鮮采集的標本，如果標本干燥可用蒸餾水濕潤一下再進行切片，切出的絲條越薄越好，若用乳酚油作浮載劑效果更好。

2.痂圓孢屬（Sphaceloma）取葡萄黑痘病標本，切片觀察，孢子梗排列緊密，自盤狀子座基部產生；分生孢子盤黑色；分生孢子梗極短，緊密排列于子座上，分生孢子無色單胞，中部縊縮，內含1—2個油球。

3．殼囊孢屬（Cytospora）取梨樹腐爛病病樹皮，徒手切片觀察，子座暗褐色，多腔室，似迷宮狀，分生孢子器著生于瘤狀子座組織內；分生孢子香蕉形。分生孢子與膠體物質混合，吸水膨脹后連同孢子自孔口擠出成為分生孢子角。

4．殼針孢屬（Septoria）取芹菜斑枯病病葉，做徒手切片，分生孢子器球形；分生孢子無色，針狀，多胞。

提示 分生孢子的橫隔須經染色后才能觀察清楚；切片操作的最后一步即將切片放到載物臺上時再加水浮載樣品，這樣立即觀察可看到分生孢子自孔口向外噴射的現象。

5.殼二孢屬（Ascochyta）取高粱粗斑病標本制作切片觀察，分生孢子器黑色，分生孢子器扁球形，分生孢子圓筒形，雙胞無色。

6．莖點霉屬（Phoma）取甜菜蛇眼病標本，切片觀察，分生孢子器著生于寄主表皮下，呈輪紋狀排列，分生孢子器球形，分生孢子無色單胞，卵圓形。

7．葉點霉屬（Phyllosticta）多寄生于葉上。取蘋果灰斑病葉，制作徒手切片觀察，分生孢子器球形，有孔口，分生孢子極小（小于15μm），卵圓形。

提示 葉點霉屬的形態與莖點霉屬很難區分，應結合發病部位一起認識。

五、實驗報告及作業

1.繪梨孢屬、尾孢屬和鐮孢霉屬的分生孢子梗和分生孢子形態圖。2.繪炭疽菌屬、盤二孢屬的分生孢子盤和分生孢子形態圖。

實驗九

培養基的制作

一、實驗目的

了解培養基的配制原理，掌握培養基的制備方法。

二、實驗原理

在植物病理學研究工作中經常要使用各種不同的培養基。培養基是按照生物生長繁殖所需要的各種營養，用人工方法配制而成的營養基質。其中含有碳源、氮源、無機鹽、維生素以及水份等。微生物在培養基上生長繁殖還必須在最適pH范圍內才能生長得更好，因此對不同種類的微生物應將培養基調節到一定的pH值范圍。

培養基的種類很多，不同的微生物所需要的培養基不同。依物理性狀可分為液體的、固體的和半固體的三種。固體培養基是在液體培養基中加入1.5～2%的瓊脂，半固體培養基是加入0.2～0.5%的瓊脂。瓊脂（agar）又稱瓊膠或洋菜，是由海藻加工而成，其化學性質穩定，一般微生物均不能分解利用。它在 95℃ 熱水中溶化成溶膠，冷卻到 45℃ 以下時又重新凝固，故一般實驗中常用它作為凝固劑。

根據營養物質來源的不同，培養基可分為天然、半合成和合成培養基三類。天然培養基是以自然界原有的有機物為材料經滅菌后制成，如馬鈴薯、胡蘿卜、水果、大麥粒、高粱粒等。半合成培養基中既有一些天然的有機物質，又有一些成分簡單或明確的化合物。如常用的馬鈴薯葡萄糖培養基（PDA），肉汁胨培養基（NA）等。合成培養基是由一些成分明確的化合物配制而成的，沒有任何成分不明確的物質，常用于研究微生物的生理生化性狀，如查氏（Czapek）培養基等。

根據培養基用途不同，可分為生長繁殖培養基、富集培養基、貯存培養基、選擇性培養基和鑒別培養基等。在植物病理學研究中，最常用培養基有馬鈴薯葡萄糖培養基，主要用于分離培養病原真菌。

在培養基配制完之后，必須經過滅菌，以便徹底殺死其中原有的一切微生物。

三、實驗材料、試劑與儀器

1．材料 馬鈴薯。

2．試劑 葡萄糖、瓊脂等。

3．儀器與用品 高壓蒸汽滅菌鍋、pH試紙（或酸度計）、試管、鋁鍋、攪拌棒、三角瓶、燒杯、漏斗、量筒、紗布、棉花、天平等。

四、實驗步驟

PDA培養基（馬鈴薯葡萄糖培養基）配方

去皮馬鈴薯 200g

葡萄糖 20g 瓊脂 15～20g

蒸餾水 1000ml 自然pH

在PDA培養基配方中也可用蔗糖代替葡萄糖，這樣配制的培養基也稱為PSA培養基。1．稱量 稱量去皮馬鈴薯 200g，葡萄糖 20g，瓊脂15-20g。

提示 瓊脂加入的量取決于瓊脂的質量，質量好的 15g 就夠了，質量差的應適當增加。另外，在夏天氣溫較高時，適當增加用量。

2．將馬鈴薯切成小塊，放入鍋中，加水1000ml，煮沸30min。用紗布濾去馬鈴薯殘渣。

3．將馬鈴薯濾液放回鍋中，加入瓊脂，加熱熔化。

提示在瓊脂融化的過程中，需要用玻璃棒不斷攪拌，并控制火力不要使培養基溢出或燒焦。

4．加入葡萄糖。葡萄糖容溶解后，加入適量的水以補充加熱過程中損失的水分，定容至1000ml。

提示 通常在制作培養基的鍋內用紅藍鉛筆標記出不同體積的刻度，1000ml，2000ml等，在定容時直接將水加至已標記的刻度即可。

5．分裝 根據不同的實驗目的，可將配制的培養基分裝于試管內或三角瓶內。分裝試管，其量為管高的1/5，滅菌后制成斜面。分裝三角瓶的容量以不超過三角瓶容積之一半為宜。

6．加塞 在管口或瓶口塞上棉塞。棉塞要用未脫脂的經彈松的棉花，棉塞可過濾空氣，防止雜菌侵入并可減緩培養基水分的蒸發，故在植物病理學研究工作中普遍使用。正確的棉塞是形狀、大小、松緊與管口或瓶口完全適合，過緊時妨礙空氣流通，操作不便；過松則達不到濾菌的目的且棉塞過小往往容易掉進試管內。正確的棉塞頭較大，約有1/3在外，2/3在試管內。分裝過程中注意不要使培養基沾染在管（瓶）口上以免浸濕棉塞，引起污染。如不使用棉塞也可用橡皮塞或特制的金屬、塑料試管帽，為讓空氣可以自由進出，橡皮塞不要過緊，滅菌前應夾一紗線在管口。

7．包扎 加塞后，將試管用線繩捆好，再在棉塞外包一層牛皮紙，以防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞，其外再用一道線繩扎好。用記號筆注明培養基名稱、配制日期、組別、制作人等

8．滅菌 將上述培養基以0.103Mpa，121C , 高壓蒸氣滅菌20min。

9．擱置斜面 將滅菌的試管培養基冷至 50C 左右（以防斜面上冷凝水太多），將試管口端擱在玻棒或其他合適高度的器具上，擱置的斜面長度以不超過試管總長的一半為宜。

培養基經滅菌后，必須放在 37℃ 溫箱培養24h，無菌生長者方可使用。PDA培養基一般不需要調pH。對于要調節pH的培養基，一般用pH試紙測定其pH。如果培養基偏酸或偏堿時，可用1mol/LNaOH或1mol/LHCl溶液進行調節。調節時應逐滴加入NaOH或HCl溶液，防止局部過酸或過堿破壞培養基成分。

提示 pH不要調過頭，以避免回調而影響培養基內各離子的濃度。配制低pH的瓊脂培養基時，若預先調好pH并在高壓蒸氣下滅菌，則瓊脂因水解不能凝固。因此，應將培養基的成分和瓊脂分開滅菌后再混合，或在中性pH條件下滅菌，再調整pH。

五、實驗報告及作業

各組上交按計劃制備的培養基。

1．為什么有的培養基要調pH值，有的可以不調

2．加壓蒸氣滅菌為什么比干熱滅菌所要求的溫度低、時間短

3．想一想，試一試，將幾只試管包扎在一起比較牢固？

第五篇：實驗一

實驗一創業項目的選擇LED照明

1.1產品介紹

LED（Light Emitting Diode），發光二極管，是一種固態的半導體器件，它可以直接把電轉化為光。LED的心臟是一個半導體的晶片，晶片的一端附在一個支架上，一端是負極，另一端連接電源的正極，使整個晶片被環氧樹脂封裝起來。半導體晶片由兩部分組成，一部分是P型半導體，在它里面空穴占主導地位，另一端是N型半導體，在這邊主要是電子。但這兩種半導體連接起來的時候，它們之間就形成一個“P-N結”。當電流通過導線作用于這個晶片的時候，電子就會被推向P區，在P區里電子跟空穴復合，然后就會以光子的形式發出能量，這就是LED發光的原理。而光的波長決定光的顏色，是由形成P-N結材料的禁帶寬度決定的。自20世紀60年代世界第一個半導體發光二極管誕生以來，LED照明由于具有壽命長、節能、色彩豐富、安全、環保的特性，被譽為人類照明的第三次革命。

1.2市場現狀

據統計，地球上每天使用的電量是相當驚人的,所以，這些年我們都致力于尋找節約、環保的新能源，而本公司的LED燈順應時代，應運而生。白光LED的光電轉化率高達95%以上，節能性十倍于普通白熾燈，兩倍于熒光燈。眾所周知，白熾燈的使用會引起惰性氣體的污染，熒光燈的使用會引起汞的污染，而白光LED燈在使用時不會放出任何有害氣體損害生態環境，是新的環保光源，因此，LED節能燈有很大的發展潛力。

當前，照明約占世界總能耗的20%左右。中國從2003年開始，就已經頻頻遭遇電力短缺的危機，由此也引發了社會對替代能源和新能源的思考。有統計數據顯示，僅LED路燈節能一項，每年就能為中國節省約一座三峽大壩所發的電力。在全球能源危機緊張的今天，LED照明產品的節能優勢則預示了其不可撼動的未來行業龍頭地位：據業內人士以1支11瓦優質節能燈為例，用數字證明了產品的絕對優勢：這樣一支節能燈在6000小時的壽命期內，將比具有相同效果的60瓦白熾燈少耗電294千瓦時，節約支出160多元。

根據中國光學電子協會光電分會的統計，我國的LED照明產品自2003年起，正以每年25%以上的速度增長，其中超高亮照明LED更以每年50%的速度飛躍發展。到2013年，閱讀燈、櫥窗燈、戶外照明、投光燈、家用照明、家用電器光源等傳統燈具將逐步被LED取代。業內專家直言，僅中國民用照明市場來講，存在的商機就達400億元人民幣。

2011年2月底，國家相關部門在中國半導體照明市場產業現狀及未來發展機會暨“Green Lighting China 2011 展會暨論壇”的新聞發布會上透露，將于近期出臺傳統白熾燈的退出時間表，這一信息預示著LED照明市場的繁榮期即將到來。目前，我國農村地區和部分小城市大多數照明都是以傳統燈泡為主。

1.3競爭優勢

1.4企業未來的發展

1.5總結