第一篇：潘小蘭心得體會

讓學(xué)生在書海中遨游

----讀《小學(xué)生課外閱讀的有效指導(dǎo)》心得

高縣月江鎮(zhèn)福溪小學(xué)校潘小蘭

對于語文老師來講，如何培養(yǎng)學(xué)生閱讀的習(xí)慣是一件傷腦筋的事。假期里，閑來無事時，我喜歡拿《小學(xué)語文教師》雜志細(xì)細(xì)品讀。其中有一篇《小學(xué)生課外閱讀的有效指導(dǎo)》給我流下了很深的印象，使我受益匪淺，學(xué)習(xí)到了許多方法。

在當(dāng)今信息量激增的社會里，讓學(xué)生學(xué)會搜集，處理信息，培養(yǎng)學(xué)生較強(qiáng)的課外閱讀能力已迫在眉睫，這也需要我們小學(xué)語文教師去引導(dǎo)學(xué)生在會讀一本書的基礎(chǔ)上，走出課堂，走向生活，廣泛開展課外閱讀活動，博覽群書，吸收名家名篇的語言精華。開展語文課外閱讀，不僅有利于學(xué)生開拓視野，陶冶情操，而且也是學(xué)生積累語言，豐富知識的有效方法。

當(dāng)前，課外閱讀活動的開展大多由老師自行組織安排，由于缺乏統(tǒng)一組織規(guī)劃，難免帶有很大的隨意性，學(xué)生在閱讀的質(zhì)和量上都難以得到保證。

【摘錄：《語文課程標(biāo)準(zhǔn)》中已經(jīng)明確規(guī)定：小學(xué)第一學(xué)段課外閱讀總量不少于5 萬字，以后逐漸遞加。第二學(xué)段不少于40萬字，第三學(xué)段不少于100萬字。《語文課程標(biāo)準(zhǔn)》還提倡讀整本書，并在附錄中提出了關(guān)于“課外讀物的建議。”那么，我們該做些什么？答案只有一個，那就是指導(dǎo)孩子們進(jìn)行廣泛的課外閱讀，讓孩子們在一條有航標(biāo)的書海中遨游。】

一、開展活動，創(chuàng)造良好的讀書環(huán)境。

有書才可讀，環(huán)境可育人。基于這種認(rèn)識，我們首先因地制宜，千方 1

百計地創(chuàng)造條件，在班上營造一個適合讀書的環(huán)境。

（一）在班級建圖書角。

俗話說：：“人多力量大”。舉全班之力，集小流成大渠，建成班級圖書角。我們采取的方法是：

１、訂書。號召班級學(xué)生收集起來的廢紙和廢品掙得的錢訂閱書籍。２、捐書。號召班級任課老師和學(xué)生主動捐出一些自己的精品收藏，存入圖書角備看。

３、借書。從學(xué)校圖書室借來相關(guān)圖書并定期更換。

有了這個圖書角，大家也就有了一個資源共享、自由閱讀、討論交流的平臺，課外閱讀也就有了保障。

（二）擠時間博覽群書。

時間是課外閱讀的保證。【摘錄： 調(diào)查表明：大量的課外作業(yè)不僅占據(jù)了學(xué)生課外閱讀的時間，還造成了學(xué)生身心疲乏，降低了讀書的興趣。為擠出閱讀時間，我們按照新課標(biāo) “少做題，多讀書，讀好書，多讀整部書”的要求，對課堂結(jié)構(gòu)做了調(diào)整：首先，改革作業(yè)方式，將所有作業(yè)都在課堂完成，課間不留作業(yè)，家庭作業(yè)就是讀書。其次是按排讀書時間，午飯后的30分鐘設(shè)定為讀課外書時間。另外，我們還把每周五的最后一節(jié)課定為自由讀書課，學(xué)生從班級書角中選擇自己喜愛的書籍，不出班級自由閱讀，看不完也可以帶回家繼續(xù)讀；也可以到學(xué)校網(wǎng)絡(luò)教室，去暢游學(xué)校網(wǎng)上“書庫”。至于閱讀方式，不做特別要求，他們可以一個人靜靜地讀，也可以幾個人一塊讀；可以邊讀邊議，也可以邊讀邊記。】

（三）創(chuàng)設(shè)良好的讀書氛圍。

讀書是需要一種環(huán)境氛圍的。為了讓孩子愛上讀書，學(xué)校在每個教室里貼幾句關(guān)于讀書的名人名言，引發(fā)的是學(xué)生的理性思考；我也常組織講故事比賽，讀書征文競賽等活動所激起的是學(xué)生的讀書興趣；在教室的花架上放幾盆別有情致的花卉和盆景，營造一個美的環(huán)境，讓學(xué)生在欣賞時，不覺中舍棄頑皮和浮躁，使內(nèi)心回歸平靜與閑適。通過班級環(huán)境的渲染和氛圍的營造，對同學(xué)們而言，潛移默化中使之產(chǎn)生“我要讀書”的內(nèi)在驅(qū)動力。

二、課外閱讀需要正確的閱讀方法來指導(dǎo)。

針對有些同學(xué)讀書時走馬觀花，讀多少、忘多少、丟多少，就像竹籃打水，結(jié)果一場空，不得長進(jìn)。有些同學(xué)雖然讀書很認(rèn)真，當(dāng)時憑腦子也記得一些東西，要用時，則什么都捕捉不到了。【摘錄：《語文課程標(biāo)準(zhǔn)》中明確規(guī)定：學(xué)生是“主人”，教師是“引導(dǎo)者和組織者”。】

那么，怎樣指導(dǎo)學(xué)生掌握課外閱讀的方法呢？我采取了以下幾步措施。

1、學(xué)習(xí)老前輩的閱讀方法

① 毛澤東的“三復(fù)四溫”式閱讀和“不動筆墨不讀書”讀書法

② 王梓坤的抄讀法

③蘇步青的多讀、精讀法。

2、指導(dǎo)幾種課外閱讀的方法。

（1）瀏覽性的泛讀。對大部分淺顯易懂的書或閱讀價值不高的書籍報刊，可采取瀏覽法，即“隨便翻翻”，以大致了解其主要內(nèi)容，或通過看標(biāo)題、目錄、內(nèi)容提要、前言等，以求在有限的時間內(nèi)獲取更多有價值的信

息。

（2）探求性的速讀。有時讀書是為了達(dá)到某個特定的目的或完成某項任務(wù)，如尋求某個問題的答案，專門搜集某方面的知識等，這就要求“一目十行”。快速閱讀的奧秘在于讓大腦跑在眼球前面，掌握快速閱讀的孩子每分鐘能讀200多個字，未受訓(xùn)練的每分鐘只能讀八九十字。速讀能求得新知識新信息成倍成倍增長，趕上時代發(fā)展的需要。

（3）品味性的精讀。對名篇名著和其他文質(zhì)兼美的優(yōu)秀作品，需要靜心細(xì)讀，體會立意構(gòu)思，揣摩布局謀篇，欣賞妙詞佳句，像人吃東西那樣，經(jīng)過細(xì)嚼慢咽，才能把書中的精華變?yōu)樽约旱闹R營養(yǎng)。有的好文章要反復(fù)地讀幾遍，甚至熟讀成誦。

（4）圈點勾畫。即用相關(guān)的符號在書或文章上記錄下自己閱讀時的見解、感受，分別用各種符號做下標(biāo)注。

（5）寫讀書筆記。可作摘抄、編提綱、寫體會。

（6）作卡片。為了便于記憶和積累，鼓勵學(xué)生把名言警句、精彩片斷、佳詞妙句等寫在卡片上，以隨身攜帶，隨時翻閱、背誦。

【摘錄： 在這里，課外閱讀不是將學(xué)習(xí)內(nèi)容以定論的形式呈現(xiàn)給學(xué)生，而是通過活動的促進(jìn)和引導(dǎo)，從而擺脫種種禁錮和牽制，放飛學(xué)生的心靈，讓閱讀回歸語文生動活潑、豐富多彩的本來面目。學(xué)生的學(xué)習(xí)習(xí)慣及學(xué)習(xí)方式也同樣在這里有了轉(zhuǎn)變——啟動了學(xué)生自主學(xué)習(xí)的機(jī)制。大量地閱讀，自由地閱讀，放松地閱讀，課外閱讀成為真實的閱讀，他們從而真正體會到閱讀過程所產(chǎn)生的酣暢淋漓的心理感受以及由此引發(fā)的愉悅感，在閱讀中自然而然地獲取文意，品味作品的原汁原味。在閱讀中思考，在思考中

發(fā)現(xiàn)，在發(fā)現(xiàn)中感悟，在感悟中成長，把閱讀過程由單純的語言學(xué)習(xí)過程擴(kuò)展為思考、創(chuàng)造過程，從而提高語感水平、認(rèn)識思維水平，將觸角延伸至比課本廣闊得多、豐富得多的大千世界。】

“一分耕耘，一分收獲”，我一直堅信多讀一些好書，一定會有許多意外收獲，在這人生的黃金時間，我想我會和孩子們一如繼往地多讀好書，在書的海洋中揚(yáng)帆遠(yuǎn)航。

第二篇：潘順蘭的讀書心得體會

我讀了《新時期教師職業(yè)道德》一書，讀后感受頗深，受益匪淺。以前，自己作為一名年輕教師，以為只要上好課，完成學(xué)校布置的任務(wù)就算是一個合格的老師，可讀了本書后使我對教師這個職業(yè)有了重新認(rèn)識。《新時期教師職業(yè)道德》共用四章內(nèi)容便清晰的闡述了新時期教師的職業(yè)道德問題，其中讓我感受最深的是第二章的內(nèi)容：我們怎樣當(dāng)老師。下面我針對自己的感受談一下心得。

我們怎樣當(dāng)老師？一個簡單的問題。

大家知道，教育過程是教師以生命影響生命，以人格感召人格，以智慧點燃智慧的過程。俗話說“多看書，多學(xué)習(xí)，才能進(jìn)一步指導(dǎo)實踐！”不然只能是覺得“書到用時方恨少，事非經(jīng)過不知難。”首先當(dāng)好老師，要求我們要自覺學(xué)習(xí)，通過學(xué)習(xí)要明確教師的責(zé)任。教師必須忠誠于人民的教育事業(yè)。做到“學(xué)為人師，行為世范”。教師的責(zé)任具體表現(xiàn)在以下幾個方面：

一是教書育人，對學(xué)生負(fù)責(zé)。當(dāng)好一名合格的老師，在教書育人的同時必須做到對學(xué)生負(fù)責(zé)，注重學(xué)生的發(fā)展，以學(xué)生為本，這就是說教師的責(zé)任重于泰山，教師必須做好學(xué)生的教育者，生活的導(dǎo)師和道德的引路人等角色。

二是指導(dǎo)家庭教育，對家長負(fù)責(zé)。教育下一代是全社會的共同任務(wù)，作為學(xué)生家長，也不能例外。教師必須主動自覺的與學(xué)生家長保持密切聯(lián)系，經(jīng)常通過各種形式向家長匯報學(xué)生在學(xué)校的表現(xiàn)，指導(dǎo)家長掌握科學(xué)的管理理念和方法，針對學(xué)生出現(xiàn)的問題與家長磋商，提高教育的針對性，強(qiáng)化家長的責(zé)任意識，讓家長成為學(xué)校教育的有力助手和有生力量，只有這樣，我們才能齊心協(xié)力把學(xué)生培養(yǎng)好，我們才能成為讓家長滿意的教師。

三是團(tuán)結(jié)協(xié)作，對教師集體負(fù)責(zé)。任何一個學(xué)生的成長不是一個教師成果，而是一群教師共同努力的結(jié)果，這就要求教師必須相互配合，教師個人服從集體，對教師集體負(fù)責(zé)。

四是行為世范，對社會負(fù)責(zé)。要求教師要不斷提高自己的綜合素質(zhì)，提高自己的教學(xué)質(zhì)量，使自己的教學(xué)活動保持旺盛的生命力。用自己的實踐履行對社會的責(zé)任，成為為人民服務(wù)，讓人民滿意的教師。其次當(dāng)好老師，要求我們必須有一顆仁慈的心。每一個教師都應(yīng)該用寬容和耐心去對待學(xué)生，做一個仁慈的教師。要成為一名仁慈的教師，必須做到以下幾點：

一是對學(xué)生無條件的愛。它表現(xiàn)為教師的耐心、冷靜、誨人不倦、表現(xiàn)為教師的所有教育手段的出發(fā)點都是對學(xué)生的熱愛，做到這一點非常的難，但我們必須努力去做。回想自己的教學(xué)活動，有很多時候做不到上述幾點，尤其是學(xué)生犯了錯誤的時候，自己今后一點要改正。二是對學(xué)生的高度寬容。教師對學(xué)生的仁慈主要表現(xiàn)為愛心和寬容。無論學(xué)生犯了什么錯誤，都要冷靜，都要用愛和寬容去化解。學(xué)會與學(xué)生的共處，學(xué)會用學(xué)生的眼光看問題，熱愛學(xué)生。

第三當(dāng)好老師，要求我們必須做到公正。也就是說要全面照顧到所有學(xué)生，學(xué)生正處在發(fā)展的階段，難免會出現(xiàn)問題，學(xué)生之間有差異這是正常的，我們不能因為這些差異，而放棄了對某一些學(xué)生的教育，相反我們更要積極的去對其進(jìn)行教育。要善待每一位學(xué)生，相信每一位學(xué)生，不放棄每一位學(xué)生，讓師愛的陽光灑向每一個學(xué)生。教師做到公正，有很多好處，比如： 一是有利于良好的教育環(huán)境的形成。

二是有利于教師威信的提高。公正是人格的脊梁。孔子說：“其身正，不令而行；其身不正，雖令不從。”這句話雖然是對從政者說的，但對教師同樣適用。由于學(xué)生對教師的公正品質(zhì)期望很高，教師公正與否，當(dāng)然影響他在學(xué)生心目中的形象。一個沒有威信或威信不高的教師注定將成為一個成就不高的教師。三是有利于學(xué)生的學(xué)習(xí)積極性的發(fā)揮。教師公正的對待每一個學(xué)生，會使學(xué)生覺得教師對自己重視，會更加努力地學(xué)習(xí)。

四是有利于學(xué)生的道德成長。在學(xué)生的心目中，教師往往是公正、無私、善良、正義的代表，對教師有非常美好的期待，因此教師必須做好學(xué)生的道德模范和榜樣。

五是有利于社會公正的實現(xiàn)。教師公正是社會公正的重要組成部分，而且會影響到學(xué)生的公正，因此教師的公正對于社會來說至關(guān)重要。

第四當(dāng)好老師，要求我們一定要注意自己的心態(tài)。教師職業(yè)繁重的工作、有限地選擇和過大的壓力總是客觀存在的，沒有相當(dāng)?shù)母冻龊屯度耄豢赡艿竭_(dá)成功的彼岸。而在此過程中沒有良好的心態(tài)，往往會使自己提前垮掉。影響教師心態(tài)的因素有以下幾種：

一是教師的職業(yè)壓力。教師的神經(jīng)整天繃得緊緊地，就怕學(xué)生出問題、管不好。同時在教學(xué)成績成為衡量教師的惟一尺子的今天，教師擔(dān)心成績落后被淘汰，擔(dān)心被解聘或轉(zhuǎn)崗等等都使教師產(chǎn)生無限的壓力。

二是教師的職業(yè)倦怠。由于長期的高壓，教師的情緒衰竭，處于過度疲勞狀態(tài)，對工作滿意度低，工作熱情和興趣喪失，情感冷漠。這些都不利于教師的教學(xué)活動。因此教師必須克服壓力，正確的評價自己的工作，創(chuàng)新自己的教育工作，豐富自己的閑暇生活，使自己“詩意的棲居在大地上”。

第五要當(dāng)好老師，要求我們要感到自己的幸福。幸福是人生的主題和人生的根本問題。教師幸福是教師職業(yè)道德的出發(fā)點和歸宿，理解教師的幸福是理解教師職業(yè)道德和教育理論體系的重要“紐帶”。如果一位教師對從事教育事業(yè)而不感到幸福，那么她一定不是一位合格的教師。我們要善于在繁忙與勞累的工作中尋找教師幸福的意義。因為教師幸福可以有以下好處：

一是可以提升教師生命的質(zhì)量。二是可以使教師走向精業(yè)。

三是只有教師幸福才能培養(yǎng)出幸福的學(xué)生。這一點很重要，只有幸福的老師才能教出幸福的學(xué)生。

總之，通過閱讀《新時期教師職業(yè)道德》這本書讓我受益匪淺，不僅全面了解了教師職業(yè)道德的相關(guān)知識，更使自己明白了怎樣去當(dāng)一名合格的教師。今后自己要把做好一名教師作為自己的人生目標(biāo)，真正把自己生命的浪花融入到祖國的教育事業(yè)中去。

第三篇：心得體會--蘭小飛

學(xué)習(xí)心得

視頻講座、培訓(xùn)一切皆是浮云。真正決定一個人的成功是在與思想和行動力。而成功不僅僅是幾個視頻講座、幾期培訓(xùn)就能讓你走上成功之道.學(xué)習(xí)目的決定學(xué)習(xí)效果；學(xué)習(xí)心態(tài)決定學(xué)習(xí)心得。理解、體會勝于記憶、記錄。所講的不一定全部適用與自己。自己所缺的正是所要借鑒的。所謂的“拿來主義”并不是讓我們按部就班，用以別人勾勒出的成功之道的框架來規(guī)劃自己的人生。這樣的人毫無意義。因為思想空間完全被他人所占據(jù)。我們要“拿來”的是適合自己的，自己所缺漏的。并不是照單全收。

或許某個時候這些講座可以稱之為垃圾。那必定在你成功之后，因為你的過程就是經(jīng)驗。人的一生別人左右不了，關(guān)鍵在于自己。所想、所做、所經(jīng)歷、所實現(xiàn)的良性循環(huán)才能決定成功。認(rèn)識自己、看清社會、結(jié)合實際、制定目標(biāo)、計劃實施這才是最確切的形容每個草根的成功之道。

作為陳安之也好，曾仕強(qiáng)也好。他們所講的一切也都是在經(jīng)歷過之后，人只有親身經(jīng)歷了，才能領(lǐng)悟到為人處事之內(nèi)涵。或許在你經(jīng)歷過后、成功的那一天，比他們演講的更為精彩。人生是由自己勾勒出，如何炫目多彩，全在于自己。想要自己的人生耀眼，從現(xiàn)在起做好點點滴滴、圍繞著心中的藍(lán)圖，用心刻畫。

第四篇：2012-1-12潘蘭芳工作總結(jié)

湖南德客隆置業(yè)投資有限公司湘潭項目部潘蘭芳同志個人工作總結(jié)

轉(zhuǎn)眼間兔年即將過去了，我來到公司也將近半年了。從7月底踏進(jìn)公司，我參與了公司兩次開盤，一次次碩果累累，感受了1#、2#樓喜封金頂?shù)臒崃曳諊鳛橐幻驴吐∪宋沂切疫\(yùn)的。回頭看，這半年來，我也成長了許多。7月份進(jìn)入公司，正好開始接受金鵬售樓軟件的學(xué)習(xí)，為以后的工作打下了堅實的基礎(chǔ)。培訓(xùn)完，馬上開始了在售樓部的收銀工作，收銀雖然不是一項很復(fù)雜的工作，但也要求我們十分謹(jǐn)慎，每天下午將當(dāng)天收的現(xiàn)金全部繳存銀行，并制作EXCEL臺賬，報會計審核。緊接著迎來了公司第一次盛大開盤，9月4日我們德客隆制造了湘潭房產(chǎn)界的傳奇，一開盤1#、2#樓就全部售罄。這也是對我們財務(wù)人員工作的一次考核，因為在接下來的7天，我們迎來的是100多個客戶簽合同，在這一周中，我們忙得幾乎連吃飯的時候的沒有。

開盤只是工作的開始，馬上是10月份的房交會，這一次又是財務(wù)人員的一場時間戰(zhàn)，在短短三天內(nèi)，我們必須完成140多個客戶的網(wǎng)簽工作。又一次我們不負(fù)使命，及時的完成了工作。

之后我又被安排負(fù)責(zé)客戶公積金貸款的工作,與公積金中心的信貸人員銜接，收集客戶相關(guān)資料，并將資料按要求制作成冊，上報公積金。1#、2#總共有24個申請公積金貸款的客戶，到目前為止已經(jīng)有18個客戶的貸款（共計417萬元）申請審批成功，8個客戶已經(jīng)放貸，其他客戶已在房產(chǎn)局做完了預(yù)抵押工作，等待公積金放款。還有2個客戶的資料已經(jīng)上報公積金待審批，預(yù)計春節(jié)前可以審批下來。剩下的4個客戶，2個是長沙鐵道部門的，自己辦理，還有2個沒有簽網(wǎng)簽合同，無法辦理。

在進(jìn)行公積金貸款工作的同時，我還兼跑房產(chǎn)局，給客戶做預(yù)告登記，預(yù)抵押，帶客戶面簽，一系列繁瑣的工作。幾乎每天三點一線，公司--公積金--房產(chǎn)局，忙碌但是很充實。

忙碌的時間總是過得特別快，這一年對公司來說是個豐收年，對我來說也意義非凡，一個全新的領(lǐng)域，一個全新的起航。

潘蘭芳

2012-01-06

第五篇：小蘭老師

鹽城師范學(xué)院論文設(shè)計

基因工程在生物制藥領(lǐng)域的應(yīng)用

孫中樓

[摘 要] 本文主要介紹了基因工程的概念、基因工程技術(shù)開發(fā)生物藥物的一般過程及一些以開發(fā)利用的基因工程藥物,生物藥物較傳統(tǒng)的化學(xué)藥物、中草藥的優(yōu)越性及它的特殊療效,同時探討了今后利用基因工程技術(shù)進(jìn)行藥物開發(fā)、研究的發(fā)展方向及廣闊的應(yīng)用前景。[關(guān)鍵詞] 基因工程 基因治療 基因重組 生物藥物基因工程概述

所謂的基因工程是指在體外將核酸分子插入病毒、質(zhì)粒或其它載體分子, 構(gòu)成遺傳物質(zhì)的新組合, 并使之參入到原先沒有這類分子的寄主細(xì)胞內(nèi), 而能持續(xù)穩(wěn)定地繁殖[1]。

基因工程的第一個重要特征是跨越天然物種屏障的能力,即把來自任何一種生物的基因放置在與其毫無親緣關(guān)系的新寄主生物細(xì)胞中去的能力。這表明人們有可能按照主觀愿望創(chuàng)造出自然界中不存在的新物種。第二個特征是, 它強(qiáng)調(diào)了一種確定的DNA 小片段在新寄主細(xì)胞中進(jìn)行擴(kuò)增的事實,才能制備到大量純化的DNA 片斷, 從而拓寬了分子生物學(xué)的領(lǐng)域, 使之在生物制藥領(lǐng)域有巨大的應(yīng)用。

基因工程自從20世紀(jì)70年代初期問世以來, 無論是在基礎(chǔ)理論研究領(lǐng)域, 還是在生產(chǎn)實際應(yīng)用方面, 都已經(jīng)取得了驚人的成績。基因組核苷酸全序列的測定與分析, 是基因工程技術(shù)促進(jìn)基礎(chǔ)生物學(xué)研究的一個出色范例。2001年2月12日, 由6國的科學(xué)家共同參與的國際人類基因組公布了人類基因組圖譜及初步分析結(jié)果, 這結(jié)果為人們提供了約3000多個基因可用來制藥, 將推進(jìn)基因制藥產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展[2]。由于基因克隆技術(shù)的發(fā)展, 已使得基因工程技術(shù)在工業(yè)生產(chǎn)尤其是制藥生產(chǎn)中發(fā)揮了重要作用。以前人們利用微生物自身生產(chǎn)有用的產(chǎn)品, 如利用青霉菌生產(chǎn)青霉素、利用鏈霉菌生產(chǎn)鏈霉素等。但是從這些生物體中分離純化這些藥物, 不僅成本昂貴, 而且技術(shù)上也相當(dāng)困難。如今將編碼這些藥物的基因克隆并轉(zhuǎn)移到合適的生物體內(nèi)進(jìn)行有效的表達(dá), 就可以方便地提取到大量的有用藥物。基因工程技術(shù)開發(fā)藥物的一般過程

利用基因工程技術(shù)開發(fā)一個藥物, 一般要經(jīng)過以下幾個步驟: ① 目的基因片斷的獲得: 可以通過化學(xué)合成的方法來合成已知核苷酸序列的DNA 片段;也可以通過從生物組織細(xì)胞中提取分離得到, 對于真核生物則需要建立cDNA 文庫。② 將獲得的目的基因片

鹽城師范學(xué)院論文設(shè)計

斷擴(kuò)增后與適當(dāng)?shù)妮d體連接后, 再導(dǎo)入適當(dāng)?shù)谋磉_(dá)系統(tǒng)。③ 在適宜的培養(yǎng)條件下, 使目的基因在表達(dá)系統(tǒng)中大量表達(dá)目的藥物。④將目的藥物提取、分離、純化,然后制成相應(yīng)的制劑。

以上方法大部分是以微生物或組織細(xì)胞作為表達(dá)系統(tǒng),通過微生物發(fā)酵或組織細(xì)胞培養(yǎng)來進(jìn)行藥物生產(chǎn)。近年來, 通過轉(zhuǎn)基因動物來進(jìn)行藥物生產(chǎn)的“生物藥廠”成為目前轉(zhuǎn)基因動物研究的最活躍的領(lǐng)域, 也是基因工程制藥中最富有誘人前景的行業(yè)。轉(zhuǎn)基因動物制藥具有生產(chǎn)成本低、投資周期短、表達(dá)量高、與天然產(chǎn)物完全一致、容易分離純化等優(yōu)勢, 尤其是適合于一些用量大、結(jié)構(gòu)復(fù)雜的血液因子, 如人血紅蛋白(Hb)、人血白蛋白(HSA)、蛋白C(Pro tein C)等。英國的愛丁堡制藥公司通過轉(zhuǎn)基因羊生產(chǎn)α1-抗胰蛋白酶(α1-AAT)用于治療肺氣腫, 每升羊奶中產(chǎn)16 g AAT, 占奶蛋白含量的30%, 估計每只泌乳期母羊可產(chǎn)70 g AAT[3]。另外, 轉(zhuǎn)基因植物制藥比轉(zhuǎn)基因動物制藥更為安全, 因為后者有可能污染人類的病原體。目前, 已經(jīng)開發(fā)出許多轉(zhuǎn)基因植物藥物, 例如腦啡肽、α-干擾素和人血清蛋白, 以及兩種最昂貴的藥物即葡萄糖腦苷脂酶和粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞群集落因子等[4]。基因工程藥物

基因工程藥物自20 世紀(jì)70 年代末期以來, 有了飛躍的發(fā)展。1978 年首次通過大腸桿菌生產(chǎn)由人工合成基因表達(dá)的人腦激素和人胰島素, 1980 年美國聯(lián)邦最高法院裁定微生物基因工程可以獲得專利, 1982 年第一個由基因工程菌生產(chǎn)的藥物—— 胰島素, 在美國和英國獲準(zhǔn)使用以來,各種基因工程藥物猶如雨后春筍, 得到了蓬勃發(fā)展。我國的醫(yī)藥技術(shù)的研發(fā)和產(chǎn)業(yè)化也取得了長足的進(jìn)展。3.1 抗生素類

傳統(tǒng)的抗生素生產(chǎn), 主要利用化學(xué)合成或微生物發(fā)酵來獲得, 其生產(chǎn)過程中菌種的表達(dá)水平比較低, 生產(chǎn)成本比較高, 而且在使用過程中容易產(chǎn)生耐藥菌群。而利用基因工程技術(shù)可以對生產(chǎn)菌種進(jìn)行基因改造, 得到表達(dá)水平高、產(chǎn)品目的性強(qiáng)的菌株, 如大腸桿菌生產(chǎn)青霉素酰胺酶。德國一個科研小組對生產(chǎn)半合成青霉素的材料6 APA, 用基因工程來增強(qiáng)大腸桿菌的青霉素酰胺酶活性。將大腸桿菌的基因PBR 322 的質(zhì)粒克隆化所形成的菌株, 其酶活力比原株提高50 倍, 從而提高6APA 生產(chǎn)能力。我國王以光利用基因重組技術(shù)對螺旋霉素產(chǎn)生菌進(jìn)行改造, 增強(qiáng)了丙酰基轉(zhuǎn)移酶的基因在螺旋霉素產(chǎn)生菌中的表達(dá), 并提高了丙酰螺旋霉素的產(chǎn)量[5]。3.2 活性多肽類

鹽城師范學(xué)院論文設(shè)計

在人體中存在一系列含量較低, 但生理活性很高, 而且在人體代謝過程中起著重要的調(diào)節(jié)作用的活性多肽類物質(zhì)如激素等, 這些物質(zhì)在臨床上可以作為藥物來治療相應(yīng)的因此類物質(zhì)失衡而造成的疾病。此類藥物的制劑多來源于各種動物的臟器, 生產(chǎn)方法復(fù)雜, 成本高, 個別產(chǎn)品還必須從動物的尸體中進(jìn)行提取, 無法進(jìn)行大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn),自基因工程技術(shù)問世以來, 通過基因重組技術(shù), 可以由微生物進(jìn)行生產(chǎn), 這是基因工程技術(shù)的最大成就之一, 以下是這類藥物中比較典型的兩個。3.2.1 胰島素

Genentech 公司在1978 年, 由Goeddel 等學(xué)者應(yīng)用基因重組技術(shù)開發(fā)出使用大腸桿菌生產(chǎn)人胰島素。隨著基因工程技術(shù)的不斷發(fā)展, 生產(chǎn)胰島素的工藝和技術(shù)也不斷得到完善, 在臨床上已經(jīng)完全取代了由動物臟器提取得到的產(chǎn)品。目前, 我國新疆轉(zhuǎn)基因羊已能夠成功表達(dá)人胰島素原[6] , 為胰島素的生產(chǎn)開發(fā)了新途徑。3.2.2 生長素

人類生長素臨床用于治療侏儒癥和肌肉萎縮癥, 傳統(tǒng)制造方法是由人腦下垂體抽提精制而得, 其原料來源困難, 產(chǎn)量受到極大限制。全世界侏儒癥患者中僅有1%可以得到治療, 原因是生長素價格極其昂貴, 達(dá)每克5 000 美元。1979 年Genentech 公司由Goeddel 等學(xué)者應(yīng)用基因重組技術(shù)首先開發(fā)出使用大腸桿菌生產(chǎn)人生長素,近年來還開發(fā)了以酵母菌來生產(chǎn)生長素, 其產(chǎn)量可達(dá)到1.4×106 ～4.7×106 分子/ 細(xì)胞。目前, 我國基因工程人生長素已研制成功, 并投入市場和用于臨床使用。

除上述藥物外, 運(yùn)用基因工程技術(shù)生產(chǎn)的這類藥物還有神經(jīng)生長因子(PDGH)、人基底成纖維細(xì)胞生長因子、絨毛膜促性腺激素等。3.3 細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)因子

基因工程技術(shù)用于細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)因子的產(chǎn)品較多, 臨床廣泛應(yīng)用于抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)等。近年來, 由于基因重組和細(xì)胞融合兩大技術(shù)的進(jìn)步, 加上高壓液相層析技術(shù)、氨基酸序列分析裝置以及蛋白質(zhì)的精制和解析技術(shù)的改進(jìn), 使一些調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫活性物質(zhì)的研究和開發(fā)得到快速發(fā)展, 如干擾素(INF)、白介素(IL)、集落刺激因子(CSF)和腫瘤壞死因子(TNF)等。

干擾素是其中研究較為廣泛, 技術(shù)比較成熟, 產(chǎn)業(yè)化較早的一個產(chǎn)品。第一代干擾素是從血液中進(jìn)行提取而得到。據(jù)芬蘭的K Cantell 報道, 處理23 000 L 血液, 所得純度1%以下的干擾素不足100 mg , 所以產(chǎn)量很低。而且由于血源質(zhì)量不能保證, 可能造成血源性傳染病的傳播。第二代干擾素是采用基因工程技術(shù)進(jìn)行生產(chǎn)的, 其生產(chǎn)水平可達(dá)250 000

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分子/ 細(xì)胞, 每升可含2.5 億單位, 成本顯著下降, 產(chǎn)品純度很高, 含量可達(dá)90%以上[7]。目前, 已經(jīng)商品化的基因工程干擾素有α、β、γ三種, 而且生產(chǎn)技術(shù)也在不斷完善。俄羅斯科學(xué)家構(gòu)建了以假單胞菌為載體的表達(dá)系統(tǒng)來生產(chǎn)基因工程干擾素, 與傳統(tǒng)的大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)相比其培養(yǎng)周期短, 細(xì)胞易于破碎便于提取。隨著基因重組技術(shù)的不斷發(fā)展, 一些研究人員對干擾素基因進(jìn)行改造, 構(gòu)建靶向干擾素基因及表達(dá)載體。利用限制性內(nèi)切酶分別從含有抗乙型肝炎S 抗原(HbsAg)人源單鏈抗體與人干擾素a 質(zhì)粒中切出目的基因, 連接到pET 22b 質(zhì)粒中, 構(gòu)建成單鏈抗體靶向干擾素表達(dá)載體, 在大腸桿菌中表達(dá)成功[8]。3.4 疫苗

傳統(tǒng)的疫苗是病源微生物的減毒或滅活物質(zhì), 但這些疫苗都不理想, 有可能發(fā)生回復(fù)突變, 恢復(fù)毒性;或者因為滅活不適當(dāng)引起疾病流行。利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)的新型疫苗, 可以克服傳統(tǒng)疫苗價格昂貴、安全性能差等缺點, 能為目前尚無有效疫苗的某些特殊疾病如艾滋病, 提供有效的治療手段。

第一個商品化的基因工程疫苗是抗人乙型肝炎病毒(HBV)的疫苗。我國大約有10%的人口受到HBV 的侵害, HBV 的感染通常還與特殊的肝癌(HCC)有著密切的關(guān)系, 每年全世界死于HCC 的病人有30 萬左右。HBV 具有高度的寄主專一性, 只能感染人類和黑猩猩, 這意味著只能從肝炎患者身上才能獲得有限數(shù)量的病毒, 供做疫苗使用, 而且從患者血液中提取制備的疫苗, 還有傳染艾滋病的可能。利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)的抗HBV 疫苗克服了傳統(tǒng)疫苗的缺點, 質(zhì)量和安全性高, 用量極少, 一般劑量為10 mg 以下, 接種3 次, 為普通藥品用量的千分之一。1982 年P(guān) Valenzuela 等人將S 基因(HBV 表面抗原基因)的一個片段克隆在一種載體上, 結(jié)果在酵母中合成出來HBV 表面抗原(HbsAg)顆粒, 其產(chǎn)量達(dá)25ug/ L , 酵母表達(dá)系統(tǒng)現(xiàn)在已經(jīng)能夠大規(guī)模生產(chǎn)供給人類使用的重組肝炎疫苗[9]。

大約20 年前, 人們發(fā)現(xiàn)“裸露”DNA 注入體內(nèi)能夠誘發(fā)免疫反應(yīng), 科學(xué)家們進(jìn)行了大量研究, 開發(fā)出了新型的核酸疫苗。所謂核酸疫苗, 是指將編碼某種抗原蛋白的外源基因(DNA 或RNA)直接轉(zhuǎn)移到動物體內(nèi), 通過宿主表達(dá)系統(tǒng)合成抗原蛋白, 誘導(dǎo)宿主對該抗原蛋白產(chǎn)生免疫應(yīng)答, 以達(dá)到預(yù)防和治療疾病的目的[10]。現(xiàn)已開發(fā)出多種核酸疫苗, 例如: 流感核酸疫苗、艾滋病疫苗、狂犬病疫苗、結(jié)核病疫苗[11] 和乙型肝炎疫苗和戊肝疫苗等[12]。3.5 基因治療制品

基因治療在1990 年開始進(jìn)行實驗, 1993 年美國FDA 給人類基因治療下的定義為:

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“基于對活性細(xì)胞遺傳物質(zhì)的改變而進(jìn)行的醫(yī)學(xué)治療, 這種改變可以在活體外進(jìn)行, 然后應(yīng)用于人體, 或者直接在人體內(nèi)進(jìn)行”。因此,基因治療存在兩種方式, 即間接體內(nèi)法和體內(nèi)法。間接體內(nèi)法主要是通過在體外進(jìn)行基因轉(zhuǎn)移, 篩選可表達(dá)外源基因的細(xì)胞, 然后再轉(zhuǎn)移到體內(nèi);體內(nèi)法則是直接在體內(nèi)改變與修復(fù)遺傳物質(zhì)。隨著分子生物學(xué)、基因重組技術(shù)的發(fā)展, 有關(guān)目的基因的獲得方法已趨成熟, 但是, 目的基因的轉(zhuǎn)移傳遞系統(tǒng)、目的基因的表達(dá)調(diào)控以及療效和安全性還需進(jìn)一步研究證實。目前, 基因轉(zhuǎn)移系統(tǒng)主要是兩類: 一類是由病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移系統(tǒng), 主要包括逆轉(zhuǎn)錄病毒(Rt)、腺病毒(Ad)、皰疹病毒(HSV)和腺病毒相關(guān)病毒(AAV)載體等。Naldini 等開發(fā)出一種基于HIV 的重組Rt 載體, 不需要輔助細(xì)胞, 能廣泛感染各種非分裂細(xì)胞, 同時保留了能整合在宿主染色體上的特點。世界上第一例基因治療所采用的載體即是Rt 載體, 治療腺苷酸脫羧酶缺乏所致的嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺乏癥(ADA-SCID)。另外一類是非病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移系統(tǒng), 包括脂質(zhì)體、分子偶聯(lián)載體、基因槍和裸DNA 等[13]。

另外, 反義核苷酸技術(shù)也應(yīng)用于基因治療, 尤其在抗乙肝病毒的基因治療方面, 包括反義DNA、反義RNA 和核酶RNA 等。2001 年, Ro baczew ska 等首次通過靜脈給予反義DNA, 選擇性抑制北京鴨HBV 在鴨肝臟中的復(fù)制和表達(dá), 證明了反義DNA 在動物實驗中的有效性[14]。美國Viag ene 公司研究出一種被稱為“艾滋病毒免疫制劑”,該藥為一種鼠逆病毒與核心蛋白編碼的基因序列和HIV 表面抗原RNA 結(jié)合產(chǎn)物, 在小鼠和靈長類動物試驗中確定該藥能誘導(dǎo)出強(qiáng)的HIV-特異性殺傷細(xì)胞。結(jié)束語

基因工程技術(shù)使藥品開發(fā)發(fā)生了根本性的轉(zhuǎn)變。傳統(tǒng)的

藥品開發(fā)方式是在大量的化學(xué)合成物質(zhì)和微生物代謝產(chǎn)物中進(jìn)行隨機(jī)篩選, 得到其中的有效成分作為新的藥物。采用基因工程技術(shù)開發(fā)新藥, 是通過對致病機(jī)理的研究, 找到那些可用于治療目的的有效成分以及其編碼基因, 經(jīng)過基因重組將其轉(zhuǎn)入適當(dāng)?shù)妮d體, 大量表達(dá)其有效成分作為治療藥物。同時,基因工程技術(shù)給藥品生產(chǎn)技術(shù)帶來了革命性變化。過去一些生產(chǎn)困難的產(chǎn)品, 如激素、酶、抗體等一些生物活性物質(zhì), 通過基因工程手段可以高質(zhì)量、高收率地付諸生產(chǎn), 同時生產(chǎn)成本也大幅度降低, 提高了患者的用藥水平和生活質(zhì)量。

基因工程技術(shù)在傳統(tǒng)醫(yī)藥不能有效治療的一些疾病, 如癌癥、艾滋病、遺傳病等的診斷、治療和預(yù)防等方面提供了有效的新手段, 并取得了一些重大的突破。如發(fā)現(xiàn)了致癌基因,可使癌癥的早期診斷和治療藥物的開發(fā)成為可能。隨著分子生物學(xué)和基因重組技術(shù)的發(fā)展, 我們相信這些嚴(yán)重危害人類生命的疾病, 在不久的將來會得到有效的預(yù)防和治療。

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