第一篇：微生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告

微生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告

姓名：阿曼古麗

學(xué)號(hào)：09070401042

班級(jí)：生物科學(xué)08-班

微生物實(shí)驗(yàn)課程已經(jīng)接近尾聲，同時(shí)訓(xùn)練我們實(shí)際動(dòng)手能力的實(shí)驗(yàn)課程也已經(jīng)全部結(jié)束，通過自己切身動(dòng)手設(shè)計(jì)，操作實(shí)驗(yàn)，感到收獲頗多。

我覺得最重要的就是實(shí)驗(yàn)過程中操作實(shí)驗(yàn)的重要性。實(shí)驗(yàn)操作可以說是實(shí)驗(yàn)成功與否的關(guān)鍵部分，可是馬虎不得。對(duì)于需要團(tuán)隊(duì)合作的實(shí)驗(yàn)，個(gè)人認(rèn)為要有強(qiáng)勢(shì)的人員搭檔，不說是精通實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程，最少也得知道實(shí)驗(yàn)的基本操作，掌握要做實(shí)驗(yàn)的基本放法，這對(duì)于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)無(wú)疑是有決定性作用的。對(duì)于個(gè)人的實(shí)驗(yàn)?zāi)芰ΓP(guān)鍵還是要看平時(shí)的實(shí)驗(yàn)積累，有些實(shí)驗(yàn)操作繁瑣復(fù)雜，需要極大的耐心，這些都應(yīng)該是逐漸培養(yǎng)起來的。

在這里我以學(xué)過的幾個(gè)實(shí)驗(yàn)為例，簡(jiǎn)單談一下自己的心得體會(huì)。

（一）環(huán)境因素對(duì)微生物生長(zhǎng)的影響

溫度對(duì)微生物學(xué)報(bào)的大分子（蛋白質(zhì)、核酸等）穩(wěn)定性、酶的活性、細(xì)胞膜的流動(dòng)性和完整性等方面有重要的影響。過高溫度會(huì)導(dǎo)致蛋白質(zhì)（酶）及核酸變性失活，細(xì)胞膜破壞等，而過低溫度會(huì)使酶活性受抑制，細(xì)胞新陳代謝活動(dòng)減弱

pH值過高或過低會(huì)使蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子所帶電荷發(fā)生變化，影響其生物活性，甚至導(dǎo)致變性失活，還可以引起細(xì)胞膜電荷變化，影響學(xué)報(bào)對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收，同時(shí)還會(huì)改變環(huán)境中物質(zhì)的可給性及有害物質(zhì)的毒性。紫外線誘導(dǎo)形成胸腺嘧啶二聚體和DNA交聯(lián)，從而抑制DNA的復(fù)制。此外，細(xì)菌具有光復(fù)合效應(yīng)。紫外線穿透力弱，加一張蠟光紙即可阻止其穿過。

在自然界中普遍存在微生物間的拮抗現(xiàn)象，許多微生物可以產(chǎn)生抗生素，能選擇性地抑制或殺死其他微生物。

常用化學(xué)消毒劑包括有機(jī)溶劑（酚、醇、醛等）、重金屬、鹵素元素及其化合物、染料和表面活性劑。有機(jī)溶劑使蛋白質(zhì)（酶）和核酸變性失活，破壞細(xì)胞膜；重金屬鹽也可使使蛋白質(zhì)（酶）和核酸變性失活，或與細(xì)胞代謝產(chǎn)物螯合使之變成無(wú)效化合物；碘與蛋白質(zhì)酪氨酸殘基不可逆結(jié)合而使蛋白質(zhì)失活；低濃度染料可抑制細(xì)菌生長(zhǎng)，革蘭氏陽(yáng)性菌比革蘭氏陰性菌對(duì)染料更加敏感。

影響微生物生長(zhǎng)的外界因素很多，其一是前面討論過的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，其二是許多物理、化學(xué)因素。當(dāng)環(huán)境條件的改變，在一定限度內(nèi)，可引起微生物形態(tài)、生理、生長(zhǎng)、繁殖等特征的改變；當(dāng)環(huán)境條件的變化超過一定極限時(shí)，則導(dǎo)致微生物的死亡。研究環(huán)境條件與微生物之間的相互關(guān)系，有助于了解微生物在自然界的分布與作用，也可指導(dǎo)人們?cè)谑称芳庸ぶ杏行У乜刂莆⑸锏纳顒?dòng)，保證食品的安全性，延長(zhǎng)食品的貨架期。

（二）革

蘭

氏

染

色

通過結(jié)晶紫初染和碘液媒染后，在細(xì)胞壁內(nèi)形成了不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物，革蘭氏陽(yáng)性菌由于其細(xì)胞壁較厚、肽聚糖網(wǎng)層次較多且交聯(lián)致密，故遇乙醇或丙酮脫色處理時(shí)，因失水反而使網(wǎng)孔縮小，再加上它不含類脂，故乙醇處理不會(huì)出現(xiàn)縫隙，因此能把結(jié)晶紫與碘復(fù)合物牢牢留在壁內(nèi)，使其仍呈紫色；而革蘭氏陰性菌因其細(xì)胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯(lián)度差，在遇脫色劑后，以類脂為主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖網(wǎng)不能阻擋結(jié)晶紫與碘復(fù)合物的溶出，因此通過乙醇脫色后仍呈無(wú)色，再經(jīng)沙黃等紅色染料復(fù)染，就使革蘭氏陰性菌呈紅色。

革蘭氏陰性菌，以[大腸桿菌]為代表。大腸桿菌為兼氣性菌種，一般生存於腸道中及厭氧的還境中。革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁的特徵為有一層out member 與陽(yáng)性菌種不同。目前對(duì)大腸桿菌的研究很多，除了它是一般食物中是否有被污染的指標(biāo)外，很多分子生物學(xué)方面的研究皆需要使用到大腸桿菌當(dāng)作實(shí)驗(yàn)宿主。

臨床應(yīng)用：用于革蘭氏細(xì)菌分類形態(tài)觀察前的染色。主要應(yīng)用于細(xì)菌分類和鑒定，革蘭氏染色法是細(xì)菌學(xué)中廣泛使用的一種鑒別染色法。

適用范圍：適宜石蠟切片、涂片等染色。

（三）活菌計(jì)數(shù)

菌計(jì)數(shù)法

此法又稱活菌計(jì)數(shù)法，其原理是每個(gè)活細(xì)菌在適宜的培養(yǎng)基和良好的生長(zhǎng)條件下可以通過生長(zhǎng)形成菌落。將待測(cè)樣品經(jīng)一系列 10 倍稀釋，然后選擇三個(gè)稀釋度的菌液，分別取 0.2ml 放入無(wú)菌平皿，再倒入適量的已熔化并冷至 45 ℃ 左右的培養(yǎng)基，與菌液混勻，冷卻、待凝固后，放入適宜溫度的培養(yǎng)箱或溫室培養(yǎng)，長(zhǎng)出菌落后，計(jì)數(shù)，按下面公式計(jì)算出原菌液的含菌數(shù)：

每毫升原菌液活菌數(shù)＝同一稀釋度三個(gè)以上重復(fù)平皿

菌落平均數(shù)×稀釋倍數(shù)× 5

此法還可以將稀釋的菌液取 0.2m 1 加到已制備好的平板上，然后用無(wú)菌涂棒將菌液涂布整個(gè)平板表面，放入適宜溫度下培養(yǎng)，計(jì)算菌落數(shù)，再按上公式計(jì)算出每毫升原菌液的所含活菌總數(shù)。此法可因操作不熟練造成污染，或因培養(yǎng)基溫度過高損傷細(xì)胞等原因造成結(jié)果不穩(wěn)定。盡管如此，由于該方法能測(cè)出樣品中微量的菌數(shù)，仍是教學(xué)、科研和生產(chǎn)上常用的一種測(cè)定細(xì)菌數(shù)的有效方法。土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含細(xì)菌、酵母、芽抱與抱子等的數(shù)量均可用此法測(cè)定。但不適于測(cè)定樣品中絲狀體微生物，例如放線菌或絲狀真菌或絲狀藍(lán)細(xì)菌等的營(yíng)養(yǎng)體等。

隨著微生態(tài)學(xué)的發(fā)展，微生態(tài)療法通過調(diào)整腸道菌群作為部分疾病的輔助治療已應(yīng)用于臨床。糞便標(biāo)本腸道菌群的定量檢測(cè)方法——平板活菌計(jì)數(shù)法能夠較好地判定其療效以及腸道菌群是否存在失調(diào)和失調(diào)的程度。此種方法計(jì)數(shù)的線性范圍大，能較好的反映菌落的疏密程度。重復(fù)性、平行性好，但操作較繁瑣，且測(cè)定值常受各種因素的影響，需要操作者有熟練的技術(shù)。

在同學(xué)們的相互配合和老師的耐心指導(dǎo)下，這門實(shí)驗(yàn)課也接近了尾聲，在這一學(xué)的這門實(shí)驗(yàn)課中我也學(xué)到了很多的實(shí)驗(yàn)室知識(shí)。為了保證實(shí)驗(yàn)過程高質(zhì)高量完成，除了實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備及實(shí)驗(yàn)過程外，還要求實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員必須具備相應(yīng)的素質(zhì)，實(shí)驗(yàn)操作人員必須具備較扎實(shí)的專業(yè)基礎(chǔ)、熟練的實(shí)驗(yàn)技能及高度的責(zé)任心，在工作中要善于總結(jié)，同時(shí)一定要和老師積極溝通，不懂得地方及時(shí)向他請(qǐng)教，在以后的學(xué)習(xí)和工作中，我會(huì)繼續(xù)保持這種態(tài)度，認(rèn)真完成老師交給的各項(xiàng)任務(wù)。

第二篇：微生物觀察實(shí)驗(yàn)報(bào)告

廣西大學(xué)環(huán)境工程基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)題目: 湖塘水體和沉積物中微生物的觀察

姓名：學(xué)號(hào)：

班級(jí)：組別：

指導(dǎo)教師：

實(shí)驗(yàn)（1）湖塘水體和沉積物中微生物的觀察和計(jì)數(shù)

1.實(shí)驗(yàn)概述

1.1實(shí)驗(yàn)?zāi)康募耙?/p>

水體和沉積物是水生生物繁衍生息的基本場(chǎng)所。本實(shí)驗(yàn)通過實(shí)地調(diào)查和實(shí)驗(yàn)室觀察實(shí)驗(yàn)，對(duì)湖塘水體和沉積物中微生物觀察和定性，初步了解湖塘水體和沉積物中微生物的種類和分類；了解其對(duì)水體凈化的正面和負(fù)面的影響。

1.2實(shí)驗(yàn)原理

（1）顯微鏡的原理

（2）血球計(jì)數(shù)板的結(jié)構(gòu)和計(jì)算方法。

血球計(jì)數(shù)板是一塊比較厚的特制玻片。玻片中央刻有4條槽，中央兩條槽之間的平面比其他平面略低，中央有一個(gè)小槽，槽兩邊的平面上刻有9個(gè)大方格，中間的一個(gè)大方格為計(jì)數(shù)室，其長(zhǎng)和寬均為1mm，深度0.1mm，體積0.1m3。計(jì)數(shù)室的規(guī)格是把大方格分成16個(gè)中方格，每一個(gè)中方格有分成25個(gè)小方格，總共有400個(gè)小格。

血球計(jì)數(shù)板的計(jì)算方法是：先求得每個(gè)中方格中微生物的平均值，乘以中格數(shù)，即為一個(gè)大格中的總微生物數(shù)，再乘以10000，即為稀釋后的溶液中的總微生物數(shù)。如要換成原液中的微生物總數(shù)，乘以稀釋倍數(shù)即可。

為簡(jiǎn)化計(jì)，通常取4個(gè)角上的4個(gè)中格進(jìn)行計(jì)數(shù)，取其平均值，作為每個(gè)中格中微生物的平均值。

計(jì)算公式：微生物數(shù)（mL）=（100個(gè)小格內(nèi)的微生物數(shù)/100）*400*10000*稀釋倍數(shù)

2.實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

2.1實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)

選擇一個(gè)池塘，對(duì)湖塘和水體和沉積物采樣，觀察其中微生物并計(jì)數(shù)。要求手繪觀察圖像，計(jì)算微生物數(shù)量。

2.1.1實(shí)驗(yàn)設(shè)備和材料

（1）實(shí)驗(yàn)設(shè)備

顯微鏡、血球計(jì)數(shù)板、載玻片、蓋玻片、滴管、移液管

（2）實(shí)驗(yàn)材料

校園池塘的水體和沉積物

2.2實(shí)驗(yàn)過程（實(shí)驗(yàn)步驟、記錄、數(shù)據(jù)、分析）

（1）用壓滴法制作表本片

取一塊潔凈的載玻片置于實(shí)驗(yàn)平臺(tái)上，用滴管吸取湖水或含有沉積物的混合液，滴加在載玻片中央，用干凈的蓋玻片覆蓋在滴液上，不要有氣泡，即制成標(biāo)本片。

（2）用顯微鏡觀察標(biāo)本片上的微生物。

（3）加被測(cè)樣品到血球計(jì)數(shù)板

取干凈的血球計(jì)數(shù)板，用蓋玻片蓋住計(jì)數(shù)室，用細(xì)口滴管吸取少量已經(jīng)充分搖勻的湖水和沉積物的混合液，滴于蓋玻片邊緣，微生物自行深入計(jì)數(shù)室，靜止5-10min，待微生物自然沉降穩(wěn)定后計(jì)數(shù)。

（4）計(jì)數(shù)

先用低倍鏡尋找大方格網(wǎng)的位置（視野不要太亮），找到計(jì)數(shù)格后，換用40倍物鏡觀察計(jì)數(shù)。

2.3結(jié)論

手繪觀察到的微生物的形狀，相對(duì)大小(見附圖)

計(jì)算樣品微生物數(shù)量

2.4 建議（如果有）

實(shí)驗(yàn)（2）湖塘水體和沉積物中微生物的革蘭氏染色和定性

1.實(shí)驗(yàn)概述

1.1實(shí)驗(yàn)?zāi)康募耙?/p>

水體和沉積物是水生生物繁衍生息的基本場(chǎng)所。本實(shí)驗(yàn)通過實(shí)地調(diào)查和實(shí)驗(yàn)室觀察實(shí)驗(yàn)，對(duì)湖塘水體和沉積物中微生物觀察和定性，初步了解湖塘水體和沉積物中微生物的種類和分類；了解其對(duì)水體凈化的正面和負(fù)面的影響。

1.2實(shí)驗(yàn)原理

微生物細(xì)胞由蛋白質(zhì)、核酸等兩性電解質(zhì)及其它成分組成，表現(xiàn)出兩性電解質(zhì)的性質(zhì)。細(xì)菌的等電點(diǎn)pI在2-5之間，所以當(dāng)pH>5時(shí)，細(xì)菌帶負(fù)電荷，容易與帶正電荷的堿性染料結(jié)合而被染色。微生物體內(nèi)的不同結(jié)構(gòu)和染料的結(jié)合能力不同，故可用不同染料對(duì)微生物的不同結(jié)構(gòu)分別染色。

2.實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

2.1實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)

對(duì)池塘水體和沉積物中得細(xì)菌進(jìn)行革蘭氏染色和定性，進(jìn)行微生物形態(tài)圖的繪制。

2.1.1實(shí)驗(yàn)設(shè)備和材料

（1）實(shí)驗(yàn)設(shè)備

顯微鏡、接種環(huán)、載玻片、酒精燈。

（2）試劑

草酸銨結(jié)晶紫染液、革蘭氏碘液、95%乙醇、番紅

（3）實(shí)驗(yàn)材料

校園池塘的水體和沉積物

2.2實(shí)驗(yàn)過程（實(shí)驗(yàn)步驟、記錄、數(shù)據(jù)、分析）

（1）涂片

取干凈的載玻片于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，在正面邊角作記號(hào)，滴一滴無(wú)菌蒸餾水在玻片中央，灼燒接種環(huán)，冷卻后取樣品，與玻片上水滴混勻，在玻片上涂布成一層均勻的薄層，涂布面不宜過大。

（2）固定

即干燥，干燥過程最好在空氣中晾干。為加速干燥，可在微小火焰上烘干，烘干后在火焰上方快速通過3-4次，使菌體完全固定在載玻片上。不宜長(zhǎng)時(shí)間高溫烘烤，易致急速失水使菌體變形。

（3）初染

滴加草酸銨結(jié)晶紫染色液染色1-2min，水洗。

（4）媒染

滴加革蘭氏碘液，染1-2min，水洗。

（5）脫色

滴加95%乙醇，洗約45s，接著水洗。或滴加95%乙醇，將玻片搖晃幾次即傾倒乙醇，如此重復(fù)2-3次后水洗。

（6）復(fù)染

滴加番紅，染2-3min，水洗并干燥。

（7）鏡檢

顯微鏡觀察。

2.3結(jié)論

觀察顏色，并判斷是G（紫色）還是G（紅色）。手繪觀察到的微生物圖像，標(biāo)明顏色。

2.3.1注意事項(xiàng)：

（1）涂片所用載玻片要潔凈無(wú)油漬。

（2）細(xì)菌不宜多，涂片不宜厚，宜薄而均勻。

（3）染色過程中勿使染色液干涸。用水洗后，應(yīng)該甩去玻片上殘水以免染色液被稀釋而影響染色效果。

（4）革蘭氏染色成敗的關(guān)鍵是脫色時(shí)間是否合適。如脫色過度，G易被誤認(rèn)為G。而脫色時(shí)間過短，G易被誤認(rèn)為G。脫色時(shí)間長(zhǎng)短還受涂片厚薄，脫色時(shí)玻片晃動(dòng)程度影響。

2.4 建議（如果有）

2.思考題

（1）涂片為何要固定？固定時(shí)要注意什么？

答：原因有三

1、固定細(xì)菌，防止沖掉

2、變形蛋白易染色

3、殺死細(xì)菌，防止感染。實(shí)驗(yàn)中固定是用酒精燈烘干水樣，應(yīng)注意控制溫度，控制時(shí)間，防止將菌體燒成灰燼，無(wú)法染色。固定時(shí)用載玻片背面靠近火源，而不是直接烘載玻片正面。

（2）革蘭氏染色如果只做1-4步，不用番紅復(fù)染，能否分辨革蘭氏染色結(jié)果？為什么？

答：能。在酒精脫色后，不被酒精脫色而保留紫色者為革蘭氏陽(yáng)性菌（G＋），被酒精脫色為革蘭氏陰性菌。最后一步用番紅染液復(fù)染，是為了讓結(jié)果更清楚。

（3）革蘭氏染色在微生物學(xué)中有何實(shí)踐意義？

指導(dǎo)教師評(píng)語(yǔ)及成績(jī)：

成績(jī)：指導(dǎo)教師簽名

批閱日期

第三篇：微生物分離實(shí)驗(yàn)報(bào)告（定稿）

微生物分離實(shí)驗(yàn)報(bào)告

實(shí)驗(yàn)儀器及材料

土樣：18號(hào)土樣 試劑及培養(yǎng)基

培養(yǎng)基：果膠酶篩選培養(yǎng)基；幾丁質(zhì)酶真菌篩選培養(yǎng)基；果膠酶劃線分

離培養(yǎng)基；幾丁質(zhì)酶劃線培養(yǎng)基；細(xì)菌半固體培養(yǎng)基；淀粉培養(yǎng)基；葡萄糖酵解培養(yǎng)基；乳糖酵解培養(yǎng)基；蛋白胨水培養(yǎng)基

a)試劑：草酸銨結(jié)晶紫染液、番紅復(fù)染液等各種染料以及盧戈氏碘液、95%

乙醇、5%孔雀綠水溶液、無(wú)菌水等

儀器

錐形瓶（500mL×2；300mL×2；100mL×3）、培養(yǎng)皿（20套）、試管（20支）、移液管（3支）、燒杯、玻璃棒、載玻片、蓋玻片、光學(xué)顯微鏡、涂布棒、U型管、德漢氏小管、酒精燈、漏斗、接種環(huán)、濾紙、棉塞、牛皮紙、無(wú)菌操作臺(tái)、滅菌鍋、紗布等

細(xì)菌的篩選，分離純化及鑒定 細(xì)菌的篩選

土樣處理

配制生理鹽水：在燒杯中配置200ml0.85％的生理鹽水，用移液管各移取9ml于五支潔凈試管，再移取90ml配置好的生理鹽水于三角燒瓶，并放入少許玻璃珠，包好滅菌；

加土樣：冷卻后準(zhǔn)確稱取10g土樣放入盛有90ml無(wú)菌生理鹽水并帶有少許玻璃珠的三角燒瓶中，充分震蕩搖勻，然后放在30℃恒溫培養(yǎng)箱中靜置15min。

果膠酶菌種篩選

梯度稀釋：用一支無(wú)菌吸管吸取1ml土壤懸液加入到盛有9ml無(wú)菌水的試管中充分混勻，此為10-1稀釋液，以此類推制成10-

2、10-3兩種稀釋度的土壤溶液（如下圖）；

涂布：配制果膠酶篩選培養(yǎng)基，110度滅菌20-30分鐘，冷卻后倒平板在培養(yǎng)皿蓋周邊用記號(hào)筆做好標(biāo)記，分別寫上10-

1、10-3兩種稀釋度字樣，每稀釋度標(biāo)記三皿，然后用無(wú)菌吸管分別由10-

3、10-1兩管土壤稀釋液中吸取適量對(duì)好放入已寫好稀釋度的平板中央位置，每皿準(zhǔn)確放入0.2ml，用無(wú)菌玻璃棒在培養(yǎng)基表面輕輕地涂布均勻，其方法是將菌液先沿一條直線輕輕地來回推動(dòng)，使之均勻分布，然后改變方向90度沿另一垂直線來回推動(dòng)，平板內(nèi)邊緣處改變方向用涂布棒再涂布幾次；

培養(yǎng)：將平板倒置于30℃恒溫箱中培養(yǎng)1-2天；

果膠酶透明圈平板檢測(cè)：取10-1涂布平皿，用0.5％的剛果紅染色15-20min后，倒掉剛果紅，用1mol/L的NaCl脫色幾分鐘至觀察到透明圈，則說明水解圈內(nèi)的菌有水解果膠的能力；

菌落描述：取此菌進(jìn)行菌落形態(tài)描述，就菌落的大小（大、中，小），顏色（白，黃，粉紅等），干濕（干、濕），邊緣（整齊，不整齊），表面（光滑，粗糙，有無(wú)突起等）分別進(jìn)行闡述并詳細(xì)記錄； 細(xì)菌的分離純化

劃線分離：制備果膠酶劃線培養(yǎng)基，滅菌后倒平板，挑取具有水解圈的菌種，第一次劃線分離培養(yǎng)1-2天后取分離所得單菌落再進(jìn)行第二次劃線分離，劃線分離的具體方法是：先在平皿上劃定區(qū)域，然后將接種針在火焰上進(jìn)行滅菌操作，取含菌種的培養(yǎng)皿，在火焰上方（注意：不

圖 細(xì)菌的劃線分離示意圖

能離火焰太近）打開培養(yǎng)皿蓋，先拿接種針在上蓋處劃線以降溫，然后用接種針輕挑所選菌落一到兩下，將平皿蓋上放好，再取剛剛冷卻了的干凈平皿在1區(qū)進(jìn)行劃線接種操作。操作完畢后對(duì)接種針進(jìn)行滅菌操作，完成后在火焰上方打開平皿蓋，將接種針冷卻后從1區(qū)引線到2區(qū)，再如圖所示劃線，劃完后引線到3區(qū)，同上進(jìn)行劃線，劃線完畢后蓋蓋平放；

純種保藏：再配制一份普通細(xì)菌培養(yǎng)基，分裝試管后滅菌，制得斜面，將純種劃線接種在斜面上培養(yǎng)保存并進(jìn)行下一步的鑒定。

a)純種果膠酶水解能力的測(cè)定

配制果膠酶篩選培養(yǎng)基，110度滅菌20-30分鐘，冷卻后倒平板在培養(yǎng)皿蓋周邊用記號(hào)筆做好標(biāo)記，將分離純化的細(xì)菌點(diǎn)種于平板上（注意：點(diǎn)種的量不宜過多，以3～4個(gè)為宜），在30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1～2天，取培養(yǎng)后的平皿用0.5％的剛果紅染色15-20min后，倒掉剛果紅，用1mol/L的NaCl脫色幾分鐘至觀察到透明圈，測(cè)量并記錄透明圈的大小

b)簡(jiǎn)單染色步驟 i.涂片 取一塊載玻片，在上邊用膠頭滴管加半滴無(wú)菌水，用接種環(huán)無(wú)菌操作將沾有菌的接種環(huán)置于載玻片上的無(wú)菌水種涂抹，待看到微弱的渾濁即可；（注意取菌不要太多）

ii.干燥與固定

涂菌面朝上，通過火焰以干燥并固定菌物，固定過程應(yīng)使載玻片通過火焰2-3次，注意溫度的控制，過熱的溫度會(huì)將細(xì)菌殺死，溫度以手背感覺微微發(fā)燙為標(biāo)準(zhǔn)；

iii.染色

將載玻片平放于載波片支架上，滴加結(jié)晶紫染液覆蓋涂菌部位即可，染色1.5min iv.水洗

傾去染液，將載玻片的涂菌面朝下，自來水沖洗，水流不宜太急、太大，至洗出水無(wú)色為止；

v.干燥

用吸水紙吸去多余水分后自然干燥； vi.鏡檢

將制備好的樣片置于顯微鏡下進(jìn)行觀察，先低倍觀察，再高倍觀察，并找出適當(dāng)?shù)囊曇昂螅瑢⒏弑剁R轉(zhuǎn)出，在涂片上加香柏油，用油鏡觀察細(xì)菌的形態(tài)。

c)革蘭氏染色步驟 i.涂片

先在載玻片一側(cè)用記號(hào)筆標(biāo)記間隔的四個(gè)區(qū)域，在另一側(cè)四個(gè)區(qū)域的位置分別滴加半滴無(wú)菌水。分別取四種活躍生長(zhǎng)期菌種（大腸桿菌，金黃色葡萄球菌，枯草桿菌和一種自選菌）按常規(guī)方法涂片（不宜過厚），用酒精燈按照簡(jiǎn)單染色中所述干燥和固定的方法對(duì)四種菌進(jìn)行干燥和固定。

ii.初染

滴加草酸銨結(jié)晶紫染液使之覆蓋涂菌部位，染色1.5min后水洗； iii.媒染

先用盧戈氏碘液沖去殘留水跡，再用碘液覆蓋1min后水洗； iv.脫色

先用乙醇沖去水跡，然后用95%乙醇覆蓋脫去色素，脫色約30s，立即用水沖洗；

v.復(fù)染

先用番紅洗去水跡，然后滴加番紅復(fù)染1.5min后水洗； vi.鏡檢

將制備好的樣片置于顯微鏡下進(jìn)行觀察，先低倍觀察，再高倍觀察，并找出適當(dāng)?shù)囊曇昂螅瑢⒏弑剁R轉(zhuǎn)出，在涂片上加香柏油，用油鏡觀察細(xì)菌。分別以大腸桿菌與金黃色葡萄球菌所染顏色作為對(duì)照，來判斷枯草桿菌以及另一種自選菌的染色結(jié)果。

d)芽孢染色步驟 i.涂片，加熱干燥及固定

在潔凈蓋玻片接近中部?jī)商幏謩e滴一滴無(wú)菌水，分別接種枯草芽孢桿菌及梭狀芽孢桿菌。然后按照常規(guī)方法加熱干燥及固定；

ii.孔雀綠加熱染色

用木夾夾住載玻片，向載玻片上滴加5%孔雀綠水溶液使之完全覆蓋涂菌部位，然后在酒精燈上微微加熱（孔雀綠著色能力強(qiáng)，加熱可使較難染色的芽孢染成綠色，且再難洗脫）至染液冒蒸汽開始計(jì)時(shí)并維持5min，注意加熱時(shí)應(yīng)以有蒸汽微微冒出為宜，過熱或加熱不足均會(huì)影響觀察效果，且加熱時(shí)在載玻片上隨時(shí)補(bǔ)加染液，切勿讓涂片干涸；

iii.水洗

水洗一定要等載玻片冷卻后進(jìn)行，否則可能導(dǎo)致載玻片的破裂。具體水洗按常規(guī)方法進(jìn)行； iv.復(fù)染

用0.5%番紅水溶液復(fù)染2min； v.水洗并干燥

按常規(guī)方法水洗后自然干燥； vi.鏡檢

先在低倍鏡下尋找視野范圍，然后換用高倍鏡調(diào)焦，最后加香柏油在油鏡下仔細(xì)尋找兩種細(xì)菌以及其周圍或內(nèi)部染成綠色的芽孢。

e)半固體穿刺法觀察細(xì)菌運(yùn)動(dòng)性 i.配制培養(yǎng)基

配制半固體牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，分裝于4支試管內(nèi)，110度滅菌20-30分鐘，正立于燒杯中冷卻至室溫；

ii.在無(wú)菌操作臺(tái)上右手握接種針,以針挑取菌苔.垂直刺入半固體瓊脂培養(yǎng)的中心直至接近(但勿觸及)試管底,然后循原路退出。如圖所示：

iii.接種完成后在30℃條件下培養(yǎng)兩天觀察并判斷其運(yùn)動(dòng)性。

第四篇：食品微生物綜合實(shí)驗(yàn)報(bào)告

食品微生物綜合實(shí)驗(yàn)報(bào)告

項(xiàng)目一:食品中細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定…………………………1

項(xiàng)目二： 革蘭氏染色技術(shù)………………………………5

項(xiàng)目三：飲用水中大腸菌群測(cè)定………………………7

指導(dǎo)老師：郭永班級(jí):食品1002班學(xué)號(hào)：2010040734

姓名：任冠華

食品微生物綜合實(shí)驗(yàn)報(bào)告

項(xiàng)目一：食品中細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定

1.目的

本方法規(guī)定了食品中菌落總數(shù)的測(cè)定方法。本方法適合于各類食品中菌落總數(shù)的測(cè)定。2.設(shè)備和材料

溫箱：36±1℃。恒溫水浴：46±1℃。電爐 吸管。廣口瓶或三角瓶：容量為500ml玻璃珠：直徑約5mm。平皿：直徑為90mm。試管。酒精燈。試管架。滅菌刀或剪子。滅菌鑷子。3.測(cè)定步驟 檢樣稀釋及培養(yǎng)

（1）以無(wú)菌操作，將檢樣25g(或mL)剪碎放于含有225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶?jī)?nèi)(瓶?jī)?nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠)或滅菌乳缽內(nèi)，經(jīng)充分振搖或研磨做成1∶10的均勻稀釋液。（2）用1mL滅菌吸管吸取1∶10稀釋液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL滅菌生理鹽水 或其他稀釋液的試管內(nèi)(注意吸管尖端不要觸及管內(nèi)稀釋液)，振搖試管，混合均勻，做成1∶100的稀釋液。（3）另取1mL滅菌吸管，按上條操作順序，做10倍遞增稀釋液，如此每遞增稀釋一次，即換用1支1mL火菌吸管。

（4）根據(jù)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)?biāo)本污染情況的估計(jì)，選擇2～3個(gè)適宜稀釋度，分別在做10倍遞增稀釋的同時(shí)，即以吸取該稀釋度的吸管移1mL稀釋液于滅菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿。（5）稀釋液移入平皿后，應(yīng)及時(shí)將涼至46℃營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(可放置于46±1℃水浴保溫)注入平皿約15mL，并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使混合均勻。同時(shí)將營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入加有1mL稀釋液的滅菌平皿內(nèi)作空白對(duì)照

（6）待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置36±1℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)48±2h。菌落計(jì)數(shù)方法

做平板菌落計(jì)數(shù)時(shí)，可用肉眼觀查，必要時(shí)用放大鏡檢查，以防遺漏。在記下各平板的菌落數(shù)后，求出同稀釋度的各平板平均菌落總數(shù)。

菌落計(jì)數(shù)的報(bào)告

食品微生物綜合實(shí)驗(yàn)報(bào)告

（1）平板菌落數(shù)的選擇

選取菌落數(shù)在30～300之間的平板作為菌落總數(shù)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)。一個(gè)稀釋度使用兩個(gè)平板，應(yīng)采用兩個(gè)平板平均數(shù)，其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生長(zhǎng)時(shí)，則不宜采用，而應(yīng)以無(wú)片狀菌落生長(zhǎng)的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)，若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計(jì)算半個(gè)平板后乘2以代表全皿菌落數(shù)。平皿內(nèi)如有鏈狀菌落生長(zhǎng)時(shí)(菌落之間無(wú)明顯界線)，若僅有一條鏈，可視為一個(gè)菌落；如果有不同來源的幾條鏈，則應(yīng)將每條鏈作為一個(gè)菌落計(jì)。（2）稀釋度的選擇

應(yīng)選擇平均菌落數(shù)在30～300之間的稀釋度，乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。

若有兩個(gè)稀釋度，其生長(zhǎng)的菌落數(shù)均在30～300之間，則視兩者之比如何來決定。若其比值小于或等于2，應(yīng)報(bào)告其平均數(shù)；若大于2則報(bào)告其中較小的數(shù)字。

若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300，則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。

若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。

若所有稀釋度均無(wú)菌落生長(zhǎng)，則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)報(bào)告之。

若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30～300之間，其中一部分大于300或小于30時(shí)，則以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。菌落數(shù)的報(bào)告

菌落數(shù)在100以內(nèi)時(shí)，按其實(shí)有數(shù)報(bào)告，大于100時(shí)，采用二位有效數(shù)字，在二位有效數(shù)字后面的數(shù)值，以四舍五入方法計(jì)算。為了縮4.出現(xiàn)的問題

①接種過程操作速度太慢，導(dǎo)致培養(yǎng)基與接種液無(wú)法充分混合。②平板劃線不規(guī)律。③儀器使用不熟練，配合不夠默契。5.參照國(guó)標(biāo)得出結(jié)論部分食品國(guó)標(biāo) 短數(shù)字后面的零數(shù)，也可用10的指數(shù)來表示。

食品微生物綜合實(shí)驗(yàn)報(bào)告

瓶（桶）裝飲用水菌落總數(shù)限量是≤20CFUmL，/總大腸菌群（MPN/100mL或CFU/100mL）不得檢出，耐熱大腸菌群（MPN/100mL或CFU/100mL）不得檢出，大腸埃希氏菌（MPN/100mL或CFU/100mL）不得檢出常溫液態(tài)奶≤10cfu/ml。6.結(jié)論：

自來水（或啤酒）的培養(yǎng)基均未培養(yǎng)出菌落，表示自來水（或啤酒）中菌落總數(shù)合格。土壤（或污水）的培養(yǎng)基中發(fā)現(xiàn)有大量菌落，則自來水和啤酒中無(wú)超標(biāo)現(xiàn)象，符合衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。

項(xiàng)目二:細(xì)菌涂片制作及革蘭氏染色技術(shù)

食品微生物綜合實(shí)驗(yàn)報(bào)告

一．目的

學(xué)習(xí)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌等細(xì)菌涂片制作、干燥和固定技術(shù)。掌握細(xì)菌的簡(jiǎn)單染色和革蘭氏染色技術(shù) 二．設(shè)備和材料

菌種

大腸桿菌16h 牛肉膏蛋白胨瓊脂斜面培養(yǎng)物，金黃色葡萄球菌16h 牛肉膏蛋白胨瓊脂斜面培養(yǎng)物。溶液和試劑

草酸銨結(jié)晶紫染液，革蘭氏碘液，95%乙醇，番紅復(fù)染液等。儀器和其他用品

酒精燈，載玻片，顯微鏡，雙層瓶（內(nèi)裝香柏油和二甲苯），擦鏡紙，接種環(huán)，試管架，鑷子，載玻片夾子，濾紙，滴管和無(wú)菌生理鹽水等。三．測(cè)定步驟

1、細(xì)菌涂片制作

（1）涂片。用接種環(huán)從試管培養(yǎng)液中取一環(huán)菌，于載玻片中央涂成薄層即可，或先滴一滴無(wú)菌水于載玻片中央，用接種環(huán)從斜面挑出少許

（2）干燥。涂片后自然干燥，也可在酒精燈上略加熱，使之迅速干燥。

（3）固定。固定的方法主要取決于勇什么染色方法，常用的有火焰固定法和化學(xué)固定法，火焰固定法的主要操作要領(lǐng)是：手持載玻片一端，標(biāo)本面向上，在燈的火焰外側(cè)迅速來回移動(dòng)3~4次，約3~4s.2、革蘭氏染色法

涂片→干燥→草酸銨結(jié)晶紫（60s）→水洗→革蘭氏碘液媒染（60s）→95%酒精脫色（30s）→水洗→番紅（2min）→水洗→干燥→鏡檢。

脫色是革蘭氏染色關(guān)鍵的一步，可直接用95%酒精沖洗脫色，直到流下的酒精無(wú)明顯的紫色為止。然后，應(yīng)立即用水沖洗，以避免脫色時(shí)間過長(zhǎng)而影響最終染色結(jié)果。另外，挑菌量、固定溫度、染色時(shí)間也是影響結(jié)果的重要因素，只有通過反復(fù)實(shí)踐，才能獲得滿意的結(jié)果。

食品微生物綜合實(shí)驗(yàn)報(bào)告

四．注意事項(xiàng): 1.革蘭氏染色成敗的關(guān)鍵是酒精脫色。如脫色過度，革蘭氏陽(yáng)性菌也可被脫色而染成陰性菌；如脫色時(shí)間過短，革蘭氏陰性菌也會(huì)被染成革蘭氏陽(yáng)性菌。脫色時(shí)間的長(zhǎng)短還受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影響，難以嚴(yán)格規(guī)定。

2.染色過程中勿使染色液干涸。用水沖洗后，應(yīng)吸去玻片上的殘水，以免染色液被稀釋而影響染色效果。

項(xiàng)目三：飲用水中大腸菌群測(cè)定

食品微生物綜合實(shí)驗(yàn)報(bào)告

一、目的：

1.學(xué)習(xí)食品中大腸菌群檢測(cè)程序、方法。2.掌握食品中大腸菌群檢測(cè)結(jié)果的報(bào)告方式

二、實(shí)驗(yàn)器材

1.培養(yǎng)基：乳糖膽鹽發(fā)酵管，伊紅美藍(lán)瓊脂、乳糖發(fā)酵管、蛋白胨 2.試劑：革蘭氏染液

3.器皿：水浴、均質(zhì)器或乳缽、載片等 三．內(nèi)容、方法與步棸 1.檢樣稀釋

以無(wú)菌操作將檢樣25mL(或g)放于有225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶?jī)?nèi)(瓶?jī)?nèi)予置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠)或滅菌乳缽內(nèi),經(jīng)充分振搖或研磨做成1:10的均勻稀釋液。固體檢樣最好用均質(zhì)器,以8 000-10 000 r/min的速度處理1min,做成1:10的均勻稀釋液。用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1mL,注入含有9mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內(nèi),振搖試管混勻,做成1:100的稀釋液。

另取1mL滅菌吸管,按上條操作依次做10倍遞增稀釋液,每遞增稀釋一次,換用1支1mL滅菌吸管。

根據(jù)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)z樣污染情況的估計(jì),選擇三個(gè)稀釋度,每個(gè)稀釋度,接種3管、2.乳糖發(fā)酵試驗(yàn)

將待檢樣品接種于乳糖 膽鹽發(fā)酵管內(nèi),接種量在1mL以上者,用雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管,1mL及1mL以下者,用單料乳糖膽鹽發(fā)酵管。每一稀釋度接種3管,置36±1℃ 溫箱內(nèi),培養(yǎng)24±2h,如所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)氣,則可報(bào)告為大腸菌群陰性,如有產(chǎn)氣者,則按下列程序進(jìn) 7

食品微生物綜合實(shí)驗(yàn)報(bào)告

行。3.分離培養(yǎng)

將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上,置36±1℃ 溫箱內(nèi),培養(yǎng)18-24h,然后取出,觀察菌落形態(tài),并做革蘭氏染色和證實(shí)試驗(yàn)。4.證實(shí)試驗(yàn)

在上述平板上,挑取可疑大腸菌群菌落1-2個(gè)進(jìn)行革蘭氏染色,同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管,置 36±1℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)24±2h,觀察產(chǎn)氣情況。凡乳糖管產(chǎn)氣、革蘭氏染色為陰性的無(wú)芽胞桿菌,即可報(bào)告為大腸菌群陽(yáng)性。5.報(bào)告

根據(jù)證實(shí)為大腸菌群陽(yáng)性的管數(shù),查MPN檢索表,報(bào)告每100mL(g)大腸菌群的MPN值。

食品微生物綜合實(shí)驗(yàn)報(bào)告

四．總結(jié)

1.實(shí)驗(yàn)步驟多且繁瑣，因此需要小組成員的共同協(xié)作，從實(shí)驗(yàn)器材的刷洗到檢樣的稀釋，以及培養(yǎng)基的配制等等都是需要每個(gè)成員認(rèn)真密切配合的，如果哪位成員粗心大意或者偷懶少做步驟都會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果的變化，而這是我們食品工作者的禁忌。所以說，與隊(duì)友的配合

食品微生物綜合實(shí)驗(yàn)報(bào)告

和一絲不茍、任勞任怨的精神是至關(guān)重要的。

2.作為一個(gè)學(xué)生，很多東西都不懂，因此做實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，必須要閱讀實(shí)驗(yàn)步驟和實(shí)驗(yàn)要求，最重要的是認(rèn)真聽取老師的觀點(diǎn)和方法以及注意事項(xiàng)。

3.實(shí)驗(yàn)過程中，我們每個(gè)人都難免會(huì)有出錯(cuò)或者是不懂得地方，這時(shí)候一定要虛心求教，不能不懂裝懂。尤其是當(dāng)隊(duì)友提出我們不正確的時(shí)候，不能不服氣，更不能莽撞惡語(yǔ)傷人。

5.做實(shí)驗(yàn)時(shí)我覺得我的技術(shù)還不嫻熟，一些細(xì)節(jié)還掌握不夠比如涂片始終涂不均勻，導(dǎo)致鏡檢時(shí)觀察到的現(xiàn)象總是一團(tuán)一團(tuán)或一對(duì)一對(duì)的。還有一個(gè)問題就是，雖然按照嚴(yán)格的步驟進(jìn)行了操作，但就是做不出結(jié)果，現(xiàn)實(shí)與期望的相差太遠(yuǎn)，我想這里面的原因就是因?yàn)榧夹g(shù)和細(xì)節(jié)沒有達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)要求。

6.通過這次試驗(yàn)我認(rèn)識(shí)到團(tuán)隊(duì)的力量是無(wú)窮的，個(gè)人太過渺小了。一粒沙雖微不足道，但聚沙能成塔；一滴水渺小無(wú)比，但匯集能成海。這個(gè)實(shí)驗(yàn)要想成功團(tuán)隊(duì)各個(gè)成員要有明確的分工，我們小組做的實(shí)驗(yàn)之所以不太成功，一方面的原因就是分工不太明確，每個(gè)人對(duì)自己的任務(wù)都不太清楚，尤其是我自己更不清楚，做實(shí)驗(yàn)時(shí)有點(diǎn)無(wú)所事事。7.這次做實(shí)驗(yàn)雖然出現(xiàn)了諸多問題，但是我還是受益匪淺學(xué)到了很多知識(shí)。

第五篇：西南科技大學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告

西南科技大學(xué)

實(shí)驗(yàn)報(bào)告 專業(yè)班級(jí)：姓名：學(xué)號(hào)：課程名稱：

指導(dǎo)教師：

環(huán)境與資源學(xué)院 年月日

一實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)環(huán)境工程微生物實(shí)驗(yàn)最基本的操作，從實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)準(zhǔn)備、污水中細(xì)菌分純培養(yǎng)、污水中細(xì)菌計(jì)數(shù)到菌落觀察和菌體染色鏡檢，掌握與環(huán)境工程相關(guān)微生物檢驗(yàn)的基本操作技能。

二實(shí)驗(yàn)儀器與藥品

2.1 實(shí)驗(yàn)儀器：每組試管13支，培養(yǎng)皿13個(gè)，1mL移液管10支，5mL移液管3支，100mL與250mL錐形瓶各1個(gè)，400mL燒杯1只，吸耳球1個(gè)，鑷子1把，剪刀1把，酒精燈1個(gè)，火柴1盒，接種針與接種環(huán)各1個(gè)，記號(hào)筆1支，試管架1個(gè)，顯微鏡1臺(tái)。漏斗、量筒、天平、高壓蒸汽消毒器、電爐等分別3套共用。

2.2 實(shí)驗(yàn)藥品：牛肉膏、蛋白胨、瓊脂粉、氯化鈉等。

三實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與方法

3.1實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備（1）每組做試管、錐形瓶和移液管的棉塞；配制固體基礎(chǔ)培養(yǎng)基（每?jī)山M共同配600mL）、0.85％生理鹽水（每?jī)山M共同配600mL）；分裝固體培養(yǎng)基——6支試管（每支5mL）做斜面，剩余裝入250mL錐形瓶中；統(tǒng)一包扎消毒。（2）在高壓消毒過程中，開啟操作臺(tái)紫外燈消毒30min左右。（3）取水樣。（見書P299）

3.2 細(xì)菌分純與培養(yǎng)：

3.2.1 細(xì)菌分純

3.3.2 細(xì)菌計(jì)數(shù)

（1）平板涂布法計(jì)數(shù)

（2）傾倒法計(jì)數(shù)

四實(shí)驗(yàn)結(jié)果

注：以圖表形式反映結(jié)果

五個(gè)人總結(jié)

注：總結(jié)自己在實(shí)驗(yàn)過程中的感受和建議。