第一篇：動物性食品中鹽酸克倫特羅(瘦肉精)殘留危害及其檢測方法研究進.

食品與發酵工業 Food and Fermentation Industries

動物性食品中鹽酸克倫特羅(瘦肉精殘留危害 及其檢測方法研究進展 張清安 范學輝(陜西師范大學食品工程系,西安,710062 摘 要 介紹了鹽酸克倫特羅(瘦肉精的理化特性,分析了它在動物性食品中殘留對人體和國民 經濟所造成的危害,同時又綜述了動物肌肉組織中殘留鹽酸克倫特羅(瘦肉精的各種分析檢測方 法并作了展望。關鍵詞 動物性食品,鹽酸克倫特羅,殘留,檢測方法 第一作者:碩士,講師。收稿時間:2004-06-22 1 鹽酸克倫特羅的理化特性及藥用機 理 1.1 鹽酸克倫特羅的理化特性 鹽酸克倫特羅(clenbuteerol ,CLB ,又名克 喘素、氨哮素、雙氯醇胺,俗名瘦肉精,化學名為 α2[(叔丁氨基甲基]242氨基23 , 52二氯苯甲醇 鹽酸鹽,分子式為C12 H18 Cl12 N2O·HCl ,相對分 子質量為313165。它是一種選擇性β2腎上腺 素受體激動劑,白色或類似白色的結晶體粉末, 無臭、味微苦,易溶于水、甲醇、乙醇,微溶于氯 仿,不溶于苯和乙醚,化學性質穩定,加熱到 172℃才開始分解,經260℃油煎5 min才會破 壞減半[1 ,2 ]。口服后在胃腸道中迅速吸收,10～20 min起效,2～3 h血液濃度達到峰值,作用 維持5 h左右,半衰期為25～39 h ,消除5個半 衰期(消除97 % ,約需5～8 d ,在動物眼睛、毛 發、肝、肺、腎等組織中易引起蓄積[3 ]。112 鹽酸克倫特羅的藥用機理 鹽酸克倫特羅(CLB于1964年首次在美 國合成,屬于β類興奮劑,最初在臨床上主要用 于防治人、畜支氣管哮喘和痙攣。研究證明作 為藥物CLB對呼吸、生殖、泌尿、骨骼、神經等 系統疾病具有較好治療作用。其機理在傳出神 經系統,β受體主要分布于血管、支氣管、骨骼 肌和平滑肌等部位,鹽酸克倫特羅與β受體選 擇性結合后,使β2受體出現興奮效應,主要表 現為平滑肌舒張、通氣改善等[ 4 ]。1984年美國(> 1μg/ kg· 明顯促進動物生長、改善胴體品質、提高瘦肉 率,于是歐美等國開始將CLB廣泛用于動物飼 一家公司意外發現高于治療劑量5～10倍以上 d CLB添加于飼料飼喂動物后,可 料[5]。20世紀 80年代后期 ,我國部分大專院 校和科研機構也開始向飼料企業和養殖戶推廣 該物質作為飼料添加劑使用。由于 CLB能使 飼料轉化率和瘦肉率提高 10 %～15 %,骨骼肌 脂肪降低 8%～15 %,所以養殖戶和飼料企業 經常把 CLB叫作“瘦肉精”或“肉多素”。其提 高瘦肉率機理在于 CLB通過腎上腺素刺激腺 苷酸環化酶的合成 ,從而升高環磷酸腺苷(cAMP的濃度 ,提高激素敏感脂酶的活性 ,加 快脂肪分解 ,使血液中游離脂肪

酸(FFA進入 肌肉量增加 ,進一步為蛋白質的合成提供物質 基礎;同時 ,CLB作為一種植物性神經調節劑 , 可降低血液中抑制肌肉興奮性的 Mg2 +濃度 , 間接促進肌肉興奮 ,改變細胞膜的通透性 ,參與 機體內的代謝調控及營養重新分配 —— ——抑制蛋 白質的分解和脂肪的合成 ,進而增加氮的組織 沉積[6]。2 動物性食品中鹽酸克倫特羅的殘留 危害 211 動物性食品中鹽酸克倫特羅的殘留 108

2004 Vol.30 No.9(Total 201 分析與檢測 由于鹽酸克倫特羅在動物生產中有明顯的 促生長和提高瘦肉率的作用 ,受此利益驅使國 內外 CLB在養殖業中濫用問題非常嚴重。又 因 CLB在生產中的用量是治療量的 5～10倍 , 而且持續添加時間(3周以上 和在體內消除半 衰期(25～39h都很長 ,所以極易在動物組織中 蓄積殘留 [6]。在機體的各個組織中 ,CLB在眼 和毛發中殘留的濃度最高 ,如眼中 CLB殘留量 比血漿中濃度高 107倍。原因是 CLB對不同 組織有選擇性 ,首先選擇有色素沉著的眼組織 和毛發組織沉積 ,且在眼組織中主要結合在有 色素沉著的視網膜和脈絡膜上 ,而在無色素的 眼的其他部位則蓄積較少。除了眼和毛發 ,其 他器官的殘留情況是:肺、肝、腎約為血漿濃度 的20～90倍,肌肉和脂肪為3～15倍。如果在 屠宰前沒有休藥期,則殘留量將更高[6 ,7 ]。早在1987,歐盟、美國已宣布禁止使用 今世界范圍內已有數以千計甚至萬計因食用殘 留有瘦肉精的動物源食品而中毒的人員。人食 用殘留有鹽酸克倫特羅的畜產品后表現為肌肉 興奮性增強,有的人中毒后表現為肌肉震顫,重 癥者腓腸肌痙攣;同時引起心肌收縮加強,心率 加快[8 ];對高血壓患者危害更大, CLB分解脂 肪成游離脂肪酸進入血液,使血管壁彈性降低, 引起血壓升高,微循環血管膨脹,壓迫刺激周圍 的神經,引起頭痛頭暈;引起人內臟橫紋肌和平滑肌興奮性增強,表現為嘔吐和腹瀉;又因體內 K+、Ca2 +、Na +和Mg2 +等濃度的平衡破壞,導 致細胞膜生物電位去極化能力增強,復極化能 力減弱,細胞膜對離子通透性改變,心電圖可呈 “T波倒置或底平”, ST段下移等,若患者發生 死亡,則死于心臟舒張期或心肌梗死。CLB中 毒的患者群中,對患心、腦血管疾病、糖尿病、甲 狀腺亢進、青光眼、前列腺肥大者可造成威脅生 CLB作為獸用飼料添加劑我國政府也于,1997 年在“濃牧發 [1997 ]3號《關于嚴禁非法使用獸 藥的通知》 ”中已明確禁止其在飼料中添加使 用。但也有許多國家并沒有確定動物性產品中 CLB的最大殘留限量(MRL。美國

食品藥物 管理局(FDA和世界衛生組織(WHO建議鹽 酸克倫特羅在動物組織中最高殘留限量為 :肉 012μg/ kg、肝 016μg/ kg、腎 016μg/ kg、脂肪 012μg/ kg、乳 0105μg/ kg;部分歐盟成員國如英 國規定可食性組織中 MRL值為 015μg/ kg ,荷 蘭規定牛、馬肝臟組織中 MRL值 015μg/ kg[8]。212 動物性食品中鹽酸克倫特羅的殘留危害 雖然鹽酸克倫特羅的毒性并不是很強 ,小 鼠、豚鼠靜脈注射的半數致死量分別是每公斤 體重 2716 mg和 1216 mg[2]。但是由于它的半 衰期長 ,在體內代謝慢 ,極易蓄積殘留于動物體 內 ,在動物肝臟中 CLB平均濃度可達 45 mg/ kg ,也就是說 ,按臨床最高治療劑量每天 018 μg/ kg計算 ,人食用 100 g被 CLB污染的動物 肝臟攝入體內的 CLB就相當于一次治療劑量 的 10倍以上 ,因而極有可能通過食物鏈使人體 中毒而對健康構成威脅 [9]。自上世紀 80年代 中期歐美國家發現瘦肉精的毒副作用以來 ,至 命的惡果。孕婦中毒又可導致癌變、胎兒致畸 的嚴重危害性 [ 10 ,11 ]。歐盟成員國已將 CLB殘 留作為肉品進口必檢項目 ,因而這也成了 WTO成員國之間進行國際貿易的技術壁壘。由此可見 ,CLB的非法使用及殘留不但嚴重地 威脅著消費者的健康 ,而且也影響著一個國家 的對外貿易和聲譽。我們應借鑒美國、歐盟等 國家在動物產品生產和食品工業上實施的良好 生產規范(GMP、危害分析與關鍵控制點(HACCP和全過程質量控制(IKB等管理經 驗 ,并結合我國動物產品生產的特點 ,引入全過 程質量控制的新理念 ,加強養殖、屠宰加工和銷 售環節的質量管理 ,減小甚至消除 CLB殘留造 成的危害 [12 ]。3 動物性食品中鹽酸克倫特羅的檢測 方法

當前 ,造成鹽酸克倫特羅屢禁不止的原因 之一就是國內外檢測 CLB的方法、手段還不完 善 ,還沒有建立宰前監測體系和準確、迅速、方 便、精確的檢測方法 ,從而使不法分子有機可 乘。目前國內外用于檢測動物性食品中鹽酸克 倫特羅的方法主要有以下幾種。109 2004年第 30卷第 9期(總第 201期

分析與檢測 國已將 HPLC法作為檢測飼料中 CLB殘留的 半確證法 ,將 GC2MS法定為確證性方法 ,主要 用于最后確認和仲裁 ,而對于動物性食品中 CLB殘留尚未有檢測標準。HPLC法中常用的 檢測器有電化學檢測器、紫外檢測器;HPLC法 優點是檢測精確度高 ,其最低檢測限范圍為 1～15 ng/ g ,而且假陽性率低 ,與 GC2MS法相 比樣品不必衍生;缺點是檢測過程煩瑣、檢測時 間長 ,需貴重儀器、難

于操作、價格昂貴 [18 ]。GC2MS法優點是能在多種殘留物同時存在情 況下對某種特定的殘留物進行定性、定量分析。與 HPLC相比 , GC2MS法靈敏度更高 ,假陽性 率更低 ,其缺點也同 HPLC法一樣。CE法非 常適用于難以用傳統的液相色譜法分離的離子 化樣品的分離與分析。優點是有很大的靈活 性 ,許多分離參數 ,如緩沖液的組成和 pH值 , 毛細管的類型以及所使用的電場的波形都可以 調節 ,操作簡便 ,所需樣品量極少 ,一般只需幾 納升。缺點是檢測時間仍很長 ,不能滿足在線 檢測 ,儀器復雜、缺乏配套的檢測器 [19 ]。((TLC [4 ,12 ,15～17 ] GC2MS、毛細管區帶電泳法。其中前3種方法最常用,中、薄層色譜法F TIR 2GC((CE、高效液相 傅立 的 R2biopharm公司分別開發出了檢測肉品、飼 色譜 2質譜聯用法

(HPLC2MS、氣相色譜 2料中 CLB殘留的 EL ISA試劑盒 ,但其價格費 葉紅外聯用法 用極高 ,每檢測一份豬肉是否含 CLB的費用是 1 200～1 400元。正因如此 ,國內許多科研院 311 感官識別 [ 13 ,14 ] 凡飼喂鹽酸克倫特羅比較嚴重的豬宰后肉 色特別鮮紅、后臀肌肉飽滿突出 ,脂肪非常薄 , 肉皮緊貼著瘦肉、瘦肉纖維比較疏松 ,肉皮與瘦 肉之間無肥肉(肥膘厚度不到 115 cm ,有時有 少量“汗水”滲出肉面 ,這種肉就很可能含有 CLB;而一般健康肉淡紅色 ,肉質彈性好 ,也不 會有 “出汗”現象。通過這種感官識別方法就可 以快速、簡單、定性對動物性食品中有無 CLB 作出初步判定。312 色譜檢測技術 目前 ,檢測 CLB殘留常用的色譜技術有高 效液相色譜(HPLC、氣相色譜 2質譜聯用法 313 免疫分析技術(IA 標記免疫分析技術是 “邁向 21世紀的醫學 檢驗技術”之一 ,其發展趨勢是 :新標記物的發 110

2004 Vol.30 No.9(Total 201 展與聯合應用、單克隆以及基因工程抗體的應 用和免疫放大技術 ,可明顯提高檢測特異性 ,靈-敏度可達 zepto(10-20、yocto(10 24 水平,即 可實現分子水平的檢測 [20 ]。目前 ,用于檢測 CLB殘留的免疫分析技術主要有放射免疫分 析技術(RIA和酶免疫分析技術(EIA。國外 已生產出運用 RIA測定 CLB殘留的試劑盒 , 還建立了類似放射免疫分析法的放射受體分析 法 ,這種方法是用受體代替抗體結合 CLB ,檢 測限可達 214 ng/ g ,國內在此方面的研究尚屬 空白 [21～23 ]。對于 EIA分析技術中檢測 CLB 殘留較高效的是酶聯免疫吸附技術(EL ISA。目前 ,英國的 Randox Laboratories Ltd和德國 所都在開發研制檢測 CLB殘留的 E

L ISA試劑 盒。據報道 ,中國疾病預防控制中心營養與食 品安全研究所和上海市畜牧獸醫站與上海賽群 生物科技有限公司聯合開發研制的瘦肉精 EL ISA檢測試劑盒也已分別問世 ,且后 2家單 位聯合開發產品已投入商品化生產及實際應用 中。經與同類進口試劑進行對比試驗 ,結果顯 示國產試劑盒在靈敏度、準確性上都已達到進 口試劑盒的水平,而在穩定性、回收率方面要優 于進口試劑盒 ,且價格費用要下降很多 [24 ]。EL ISA的優點是靈敏度高、操作簡便、檢測迅 速;缺點是仍不能實現在線檢測 ,而且假陽性率 較高。314 綜合化學法 根據 CLB的化學結構與性質 ,參照國家藥 典標準方法可以進行綜合鑒別 [25 ]。因其溶于 水和乙醇 ,故可以用水進行提取。CLB可顯示 芳香一胺類的鑒別反應 ,也可以顯示氯化物的 鑒別反應 ,同時 ,用分光光度計檢測 ,可在 243 nm與 296 nm的波長處得到最大吸收。綜合分 析可以判定動物性食品中是否存在 CLB類物 質 ,且該法不需昂貴的儀器與試劑 ,也沒有復雜 的樣品前處理 ,操作簡單 ,無疑是基層衛生防疫 分析與檢測 CLB的高效在線檢測 [15 ] 原理為當分子識別部分與被識別物質相接觸 光變化以及直接 誘導電信號 ,而后利用電學測量方法進行檢測、控制和顯示輸出。國外已有用生物傳感器技術 檢測 CLB殘留的資料報道 [26] ,其優點是特異 性強、假陽性率低、高效、方便 ,國內未見有開發 成功的相關報道。總之 ,盡快研制出高效、方 便、迅速的 DIGFA試紙條和生物傳感器是檢 測 CLB殘留較為理想的方法和途徑 ,也是今后 發展趨勢。及準確度均很理想。如果研制出檢測。對于生物傳感器,其 時,可發生化學變化、熱變化、CLB的13 閆紅軍,馬巧娥.提高衛生知識水平嚴防 中毒[J ].動物醫學進展,2003 ,24(5 :127 “瘦肉精” 滴金免疫試紙條或滴金免疫測試盒則可實現 14 李 杰.瘦肉精殘留危害與動物性食品安全 [J ].中國飼料 ,2003 ,4 :31～32 工作者初選 CLB殘留的有效方法 ,但最低檢測 限較高 ,靈敏度低。4 鹽酸克倫特羅檢測技術的未來趨勢 和發展方向

根據目前國內外檢測 CLB各種方法的進 展情況以及 CLB濫用及殘留的嚴峻性 ,建立一 種克服上述各種檢測方法缺點的簡便、快速、精 確、可實現在線檢測的 CLB技術勢在必行。滴 金免疫技術(DIGFA 和生物傳感器技術(biosensor ,BS是 2種快速、高效的殘留物分析 技術。其中 DIGFA技術已成功的運用于早孕 診斷、弓形蟲病診斷、血吸蟲病診斷等 ,靈敏

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分離與提純 表 3 不同抗氧劑對豬油的抗氧化 作用(POV值 mmol/ kg 樣 品 時間 /d 0 48 013 %提取液 01062 01068 01287 013 %抗壞血酸 01062 01089 01301 013 %檸檬酸 01062 01132 01413 013 %EDTA 01062 01066 01279 3 結 論 比較了幾種不同提取方法的提取效果 ,實 驗顯示 :體積分數 75 %乙醇提取法提取率較 高 ,提取物比較容易濃縮和干燥 ,是一種較好的 提取方法。柿葉黃酮類化合物的抗氧化性較強 ,通過 對豬油的抗氧化效果試驗發現 :其抗氧化效果 比抗壞血酸和檸檬酸稍強。參考文獻 1 譚仁祥 1植物成分分析 [M]1北京 :科學出版社 , 2002.486～502 2 萬素英 ,趙亞軍 ,李 琳等 1食品抗氧化劑 [M]1北 京 :中國輕工業出版社 ,1998 Study on Extraction Method and AntiSong Changchun Bao Qingsheng(Department of Basic Courses , Anhui Technical Teachers College , Bengbu , 233100 2oxidation Property of Flavonoid Compound from Leaves of Diospyros kaki ABSTRACT The extraction method of flavonoid in leaves of Diospyros kaki was studied1 The opti2 mum extracting process was put forward , and anti2oxidation property of the extract from the leaves of Diospyros kaki was studied1 The results showed that the optimum extracting technical process was 75 % alcohol1 Effect of flavonoid from the leaves of Diospyros kaki was higher than ascorbic acid and citric acid1 Key words leaves of Diospyros kaki , flavonoid ,extraction method ,antioxidant(上接第 111頁 和國藥典 [M].北京 :化學工業出版社 ,1995.62923 彭笑蓉 ,孫文梅.競爭酶標免疫法檢測“瘦肉精” ～630 [J ].河北畜牧獸醫 ,2003 ,19(4 :42～43 26 Pizaariello A , Stred’ansky M , Stred’ansky S et al.24 張蘇華 ,黃士新.國產“瘦肉精” EL ISA試劑盒與A Solid binging matrix/ molecularly imprinted poly2 同類進口試劑盒的對比試驗 [J ].上海畜牧獸醫通mer-based sensor system for the determination of 訊 ,2003 ,4 :20～21 clenbuterol in bovine liver using differential-pulse 25 中華人民共和國衛生部藥典委員會.中華人民共

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第二篇：瘦肉精(鹽酸克倫特羅)快速檢測卡

豬繁殖與呼吸綜合癥抗體快速檢測試劑盒

——（膠體金法）使用說明書

1、檢測原理

豬藍耳病抗體快速檢測試劑盒（膠體金法），系采用膠體金免疫層析技術，檢測樣品（血清、血漿或全血）中藍耳病抗體的方法。在玻璃纖維紙上預包被金標記滅活豬藍耳病抗體（Au-Agl）,在硝酸纖維素膜上檢測線和對照線處分別包被豬藍耳病抗原（Ag2）和兔抗豬藍耳病抗體。當檢測樣品為陽性時，樣品中豬藍耳病抗體與膠體金標記豬藍耳病抗原（Au-Agl）結合形成復合物，由于層析作用復合物沿紙條向前移動，經過檢測線時與預包被的豬藍耳病抗原(Ag2)形成“Au-Agl-豬藍耳病抗體-Ag2-固相材料”免疫復合物而凝聚顯色，游離金標記抗原則在對照線處與兔抗豬藍耳病抗體結合而富集顯色。陰性樣品則僅在對照線處顯色。操作簡便，快速，結果直觀、準確，靈敏度高，容易判定。

2、試劑組成

“豬藍耳病抗體”快速檢測卡（20 塊）； 說明書1份

3、用途

用于檢測豬血清/血漿/全血樣品中豬繁殖與呼吸綜合癥（又稱藍耳病，以下同，Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）抗體。

4、操作步驟以及結果判讀：

⑴ 將檢測卡從鋁箔袋中取出，水平放置并做好標記。

⑵ 在檢測卡的加樣孔內加入2滴（70-100ul）待檢血清/血漿/全血標本。⑶ 20分鐘內觀察并記錄實驗結果。

陽性：對照線區（C）和檢測線區（T）各出現一條紫紅色線。檢測線(T)的顏色越深，表明豬藍耳病抗體的滴度越高。

陰性：只有對照線區(C)出現一條紫紅色線。

無效：未出現紫紅色線或只在檢測線區（T）出現紫紅色線，對照線區（C）未出現紫紅色線。

5、儲存及有效期：

原包裝在2-30℃陰涼避光干燥處儲存，有效期為12 個 月，批號和有效期見包裝盒。

6、注意事項：

(1)檢測卡在室溫下一次性使用。

(2)自來水、蒸餾水或去離子水不能作為陰性對照。

(3)實驗環境應保持一定濕度，避風，避免在過高溫度下進行試驗。

(4)試劑盒在室溫下保存.如在2-8℃冷藏，使用前降至室溫后方可打開鋁箔袋進行檢測操作。

第三篇：鹽酸克倫特羅快速檢測

鹽酸克倫特羅快速檢測

摘 要

本實驗采用了百睿TM鹽酸克倫特羅快速檢測卡對樣品進行定性檢測。鹽酸克倫特羅快速檢測卡適用于尿樣、瘦肉、肝臟、肺臟、腎臟和飼料等樣本中鹽酸克倫特羅的測定。檢出限為3ng/mL（3ppb）。關鍵詞 鹽酸克倫特羅快速檢測卡

定性

檢出限

前 言

鹽酸克倫特羅(Clenbuterol,CLB),又名瘦肉精,分子式為C12H18Cl2N2O?HCl,藥品名為克喘素、氨哮素等,為白色或類白色的結晶粉末,無臭、味苦,易溶于水、甲醇、乙醇,微溶于丙酮、氯仿,不溶于乙醚和苯,化學性質穩定;它是一種人工合成的B-腎上腺素受體激動劑,具有擴張支氣管的作用,常用來防治哮喘、肺氣腫等肺部疾病(Mersmann,1998)。當其應用劑量達到治療量的5~10倍時,又具有能量重分配作用,可使肌肉合成增加,脂肪沉積減少,因此將其俗稱為瘦肉精,在養豬業中一些非法使用者將其作為一種生長促進劑添加到飼料中(Kuip-er,1998),用以改善胴體的品質,但同時也造成了豬肉中鹽酸克倫特羅的殘留。當人們食用含有鹽酸克倫特羅殘留的肉品后,常常造成心動過速,低血鉀,低磷酸鹽血癥,肌肉震顫,頭暈,口干,失眠甚至于癱瘓等中毒癥狀,對心臟病患者更有生命危險。國家農業部農牧發[2002]1號文5關于發布食品動物禁用的獸藥及其他化合物清單的通知6中,鹽酸克倫特羅被列為所有食品動物禁止使用。

1實驗步驟

（1）使用前將待測樣本溶液恢復至室溫

（2）取出檢測卡平放，用移液槍吸取待測樣品溶液100ul，垂直加于加樣孔，開始計時

（3）結果應在3~5min讀取，其他時間判讀無效，根據示意圖判定結果。

【結果判斷】

陰性（-）：兩條紫紅色條帶出現。表示樣品中鹽酸克倫特羅濃度低于3 ng/mL，或不含有。

陽性（+）：檢測T線無顯色，則表示樣品中鹽酸克倫特羅濃度高于3 ng/mL。

無效：未出現質控C線，表明操作過程不正確或檢測卡已失效。實驗結果

實驗結果如下圖 1

由圖可知，左邊表示樣品中鹽酸克倫特羅濃度低于3 ng/mL，或不含有鹽酸克倫特羅；右邊樣品中鹽酸克倫特羅濃度高于3 ng/mL。

3結果與討論

3.1實驗原理

若待測樣品溶液中不含鹽酸克倫特羅,當樣品溶液進入測試端,鹽酸克倫特羅金標單抗在硝酸纖維素膜上層析泳動,被硝酸纖維素膜上檢測印跡處的鹽酸克倫特羅-BSA偶聯物攔截形成鹽酸克倫特羅-BSA偶聯物)金標鹽酸克倫特羅單抗 復合物,并在該印跡處形成紅色的條帶(檢測線);測試端多余的金標鹽酸克倫特羅單抗在硝酸纖維素膜上繼續層析可被對照印跡羊抗鼠IgG單克隆抗體捕獲形成紅色的對照條帶(對照線)。當待測尿樣中含有一定量的鹽酸克倫特羅時,鹽酸克倫特羅與鹽酸克倫特羅金標單抗形成復合物,從而與硝酸纖維素膜上的鹽酸克倫特羅-BSA偶聯物形成競爭,抑制了檢測印跡處包被的鹽酸克倫特羅-BSA偶聯物捕獲鹽酸克倫特羅金標單抗的量,而不能在檢測線形成紅色印跡或形成顏色較淺的紅色印跡,多余的盒標鹽酸克倫特羅單抗繼續層析在對照印跡處形成對照線。根據該反應模式,檢測線顏色深淺與樣品中鹽酸克倫特羅含量呈負相關,即檢測線顏色越淺表示樣品中鹽酸克倫特羅含量越高。3.2 試紙條組成

1.樣品墊的作用是盡快地將加樣孔中的樣品吸附到試紙中去，以利于繼續加樣； 2.結合墊中則是含有膠體金標記的鹽酸克倫特羅單抗；

3.硝酸纖維素膜上則預先標記了兩種物質，在檢測線處標記的是鹽酸克倫特羅-BSA偶聯物。

4.吸收墊一般由吸水紙構成，主要作用是保持從加樣墊到吸收墊之間的毛細管作用力[1]。

參考文獻

[1] 姜艷彬，孫冠如，王海，等.鹽酸克倫特羅膠體金快速檢測試紙條的研制[J].中國畜牧獸醫.2010(10): 109-113.

第四篇：食品中抗生素殘留危害及檢測方法

食品中抗生素殘留危害及檢測方法

隨著人們生活質量的提高，食品安全問題越來越為廣大消費者所關注，特別是農藥和抗生素等藥物殘留問題更是廣大消費者所關注的焦點問題。在食品安全這個全球關注的熱點問題上，如何快速、準確地檢測食品安全的問題已成為重中之重。要檢測抗生素在食品中的殘留，必須選擇特異性強、靈敏度高、高效快速的檢測方法。因此，研究各種抗生素類殘留檢測的方法，提高其靈敏度與選擇性具有十分重要的意義。

抗生素具有哪些危害

人們吃了有抗生素殘留的肉、蛋、奶等食物后，會造成抗生素在人體內蓄積，使人產生對抗生素的抗性，引起各種組織器官病變，甚至癌變。

對人類健康的危害

對人體腸道菌群的影響

人體腸道菌群是一個平衡的生態系統，對保持人體健康起著非常重要的作用。如果人們長期攝入含有抗生素的食品后，會使敏感菌群被殺滅或抑制，而耐藥菌群卻大量繁殖，從而打破原來的平衡狀態造成菌群失調，這就可能會導致長期腹瀉或營養不良，嚴重時還可造成耐藥菌感染，給臨床治療帶來困難。

引起過敏和變態反應 青霉素、四環素、磺胺類及某些氨基糖苷類抗生素能使部分人群發生過敏反應和變態反應，氯霉素可破壞機體造血功能，誘發再生障礙性貧血。經常食用含抗生素的動物性食品，輕者出現皮膚瘙癢、蕁麻疹、關節腫痛，重者導致血管性水腫、休克、甚至死亡。

導致細菌耐藥性增加

目前，由于抗生素的廣泛使用，使得細菌的耐藥性不斷增加，食用含抗生素殘留的動物性食品后，人體內細菌的耐藥性增加。同時，動物體內的耐藥性菌株的耐藥性也可能轉移到人體細菌中，從而對人類產生極大的危害。

其他毒害作用

動物性食品中殘留的鏈霉素進入人體后可引起腎損害和聽神經受損。長期攝入氨基糖苷類抗生素殘留嚴重超標的動物性食品，可損害第8 對腦神經，出現頭暈、頭痛、耳鳴、耳聾、惡心、嘔吐等癥狀。四環素會引起肝損傷，與骨骼或牙齒中的鈣質結合后，使骨骼及牙齒黃染，還可影響兒童的生長發育。鄰氯青霉素、頭孢菌素等可引起人類免疫性疾病；氯霉素會損害人的造血功能，抑制蛋白質

摘要：文章綜述了抗生素殘留的來源與途徑, 介紹了抗生素殘留對人類健康、乳制品生產、環境及其他方面造成的危害，分析了檢測抗生素殘留的方法，包括微生物檢測法、儀器檢驗法、免疫學分析法等，并指出了這些檢測方法的研究現狀與發展前景。

對乳制品生產工藝的危害

由于含有抗生素的奶無法制成酸奶、奶酪等一些高質量牛奶產品，容易造成大量原料奶的浪費，給乳品企業造成經濟損失。另一方面，一些不法奶戶在高溫季節為防止鮮乳的酸敗，往往向牛乳中摻雜各種抗生素，從而造成乳中抗生素殘留，對人體也造成了很大的危害。

對環境的危害

一些性質穩定的藥物被排泄到環境中仍能穩定存在很長時間，從而造成環境中的藥物殘留。鏈霉素、土霉素在環境中不易降解；螺旋霉素低濃度降解很快，但濃度高時需6 個月才能降解完；桿菌肽鋅在有氧的條件下完全降解需3～4個月，在無氧環境中降解所需要的時間更長。據報道，動物養殖場污水處理池中紅霉素、復紅霉素、磺胺甲唑質量濃度可達69g/L，這些藥物的排放污染了環境，破壞了生態平衡。

抗生素殘留量的檢測方法

隨著社會的進步和人們對抗生素殘留的日益重視，在客觀上就要求改進傳統的檢測方法。引進先進的檢測儀器，尋求一種快速、精確的檢測方法，使得檢測結果更加準確、可靠。

微生物檢測方法

微生物檢測方法的主要原理是根據抗微生物藥對特異微生物的抑制作用，來定性或定量檢測受檢樣品中殘留的抗微生物藥。微生物檢測法應用較為廣泛，是抗生素殘留檢測的傳統方法，但測定時間長，結果誤差較大，操作復雜。其優點是費用低，一般實驗室都能操作。

氯化三苯四氮唑法（TTC）

這是目前我國食品衛生標準中用來檢查牛乳中抗生素殘留的檢測方法。如果牛乳中有抗生素存在，當乳中加入菌種（嗜熱鏈球菌）經培養后，菌種不增殖。此時，加入的TTC 指示劑不發生還原反應，所以仍呈無色狀態。如果沒有抗生素存在，則加入菌種就可增殖，TTC 還原變成紅色，使樣品染成紅色。

棉拭法或紙片法

這是檢測胴體內可疑抗生素殘留的現場試驗方法，簡便而又有一定準確性，被世界普遍采用，具有廣域的靈敏性。它是用棉拭插入待檢部位浸潤20min取出，放入有枯草桿菌的培養基中培養18h～24 h，或用圓濾紙從腎臟或乳取樣，與含有枯草桿菌等細菌的營養瓊脂貼合培養，通過觀察棉拭周圍有無抑菌圈或根據其大小判定有無抗菌物質存在。該法的特點是能夠確定抗生素的種類，提高檢出率和準確率。如，氯霉素最低檢出限量為0.01mg/kg、土霉素為0.05mg/kg等。

杯蝶法

樣品經處理后，注入牛津杯中，與含菌液的檢定平板貼合。培養后，根據抑菌圈的有無及大小判定結果。采用不同的試驗菌種，可檢測不同的抗生素。如檢測肉中四環素類抗生素用蠟樣芽孢桿菌；檢測青霉素用金黃色葡萄球菌；檢測鏈霉素或雙氫鏈霉素用枯草桿菌。

電泳生物檢測法

該法靈敏度較高。Fusac（1989）應用電泳和微生物自顯影技術測定動物組織中殘留的氨基糖苷類抗生素（如，雙氫鏈霉素、卡那霉素等），取得了滿意的結果。

瓊脂擴散法

Korkela 以豬腎為樣品采用瓊脂擴散法對幾種抗生素殘留檢測進行了比較。能檢測出土霉素和鏈霉素的殘留。Untermann（1986）報道，采用枯草桿菌進行瓊脂擴散法檢測出了牛、豬及山羊的肌肉中和腎臟內抗生素的殘留。

儀器檢驗方法

儀器檢驗方法是利用抗生素分子中的基團所具有的特殊反應或性質來測定其含量，進行定性定量

和藥劑鑒定。其敏感性較高，但有的檢測程序較復雜或檢測費用較高。

液相色譜法（LC）

德國Russel 報道了液相色譜法檢測氯霉素殘留，檢測限為10μg/kg，回收率為63%～79%。Jefery等（1994）報道了用LC法測定沙拉沙星在海峽鲇魚肌肉中的殘留，沙拉沙星的檢測限為1.4ng/g，回收率為85.4％～104％。

氣相色譜法（GC）

該法有許多高靈敏、通用性或專一性強的檢測器供選用。Plomp和Maes報道了在血液和羊水中甲砜霉素的快速氣相色譜檢測方法，檢測限為0.1μg/mL，甲砜霉素血清的回收率為91.3％，羊水的回收率為90.3％。

薄層色譜法（TLC）

該法經常作為樣品篩選方法。其優點是速度快，有利于現場應用，且已在飼料、組織和體液等的分析中得到了廣泛的應用。Bossuyt 等（1976）報道用TLC 法測定牛奶中新霉素的殘留。但新霉素的檢測限為15μg/g，遠高于牛奶中的新霉素殘留限量。

高效薄層色譜法（HPTLC）

該法現已成為僅次于HPLC的殘留分析法。HPTLC在獸藥殘留的快速篩選檢測方面應用廣泛。測定組織樣品時需在樣品展開后噴以硫酸-高氯酸試液，靈敏度可提高10倍，檢測限達10μg/kg。

高效液相色譜法（HPLC）

這是目前廣泛應用的一種理化檢測方法。該法對抗生素殘留的檢測具有較高的靈敏性。Anadan等（1995）報道了用HPLC法測定雞脂肪、肝臟、腎臟、肺臟及皮膚中恩諾沙星及代謝產物環丙沙星濃度，檢測限為0.003 μg/g，在各種組織中提取回收率均大于70％。Rolinski 等（1997）用HPLC 法檢測了肉雞組織和雞蛋中諾氟沙星殘留，檢測限為0.0025μg/g。

超臨界流體色譜法（SFC）

該法可彌補GC和HPLC法的不足，但不可能取代二者。SFC 最大優點是可以方便地連接各種靈敏的檢測器。Pensabene 等將雞蛋樣品進行超臨界流體萃取后進行磺胺類藥物的殘留分析，檢測限為25 μg/kg，回收率為81％~101%。

毛細管電泳法（CE）Ackermans 等將豬肉樣品加乙腈提取，離心后上清液過濾膜后直接進行毛細管區帶電泳分析。測出肉樣中15 種磺胺類藥物的檢測限在2 mg/kg~9mg/kg 的范圍內。

聯用技術

聯用技術可揚長避短，一般兼分離、定量和定性（分子結構信息）于一體，因而特別適用于確證性分析。常見的聯用技術有薄層色譜-質譜（TLC-MS）、氣相色譜-質譜（GC-MS）、液相色譜-質譜（LC-MS）等。色譜和質譜聯用由于實現了高效層析分離和檢測聯機，可用微電腦控制層析條件、程序和數據處理，其特異性、靈敏度和重復性均好，并可一次同時完成同一樣本中多種藥物及其代謝物的檢測。

免疫分析法

免疫分析法主要有放射免疫分析（RIA）、酶免疫分析（EIA）、熒光免疫分析（FIA）和酶聯免疫吸附法（ELISA）。與常規的理化分析技術相比，免疫分析技術最突出的優點是操作簡單、容量大、速度快、儀器化程度低且分析成本低，分析效率則為HPLC 或GC 的幾十倍以上。免疫分析法能與其他技術聯用。

放射免疫分析（RIA）

Mahon 等曾將卡那霉素與人血清白蛋白直接連接制備結合抗原，并建立了血清樣品的放射免疫測定法，檢測限為10 ng/mL。1984 年Arnold 等即建立了氯霉素的放射免疫測定法，其檢測限為0.21μg/kg。酶聯免疫吸附法（ELISA）

Prithipal Singh 等（1989）建立了檢測豬血中磺胺二甲嘧啶的ELISA 方法，其檢測范圍為10ng/mL~1 000 ng/mL。國內劉智宏等（1998）建立了檢測血清中磺胺二甲基嘧啶的ELISA 方法，其檢測限為50 ng/mL。楊紅（1999）建立了測定牛奶、豬血漿等樣本的ELISA 檢測方法，其檢測限約0.025 ng/mL。

第五篇：蔬菜水果中27種有機磷農藥殘留快速掃描檢測方法研究

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蔬菜水果中27種有機磷農藥殘留快速掃描檢測方法研究

作者：黃錦沛

來源：《新農村》2012年第07期

摘 要：當前，隨著社會經濟持續發展進而人們生活水平不斷提高，人們對生活質量的要求越來越高，蔬菜水果的質量問題受到了人們的高度重視，其中蔬菜水果的農藥殘留污染問題受到了全球消費者的關注。因此，檢測蔬菜水果的農藥殘留情況成為提高人們生活質量的主要途徑。本篇文章針對當前蔬菜水果農藥殘留問題的現狀，對蔬菜水果中27種有機磷農藥殘留快速掃描檢測方法進行了深入的探究。