第一篇：誠信制藥施工總結

江蘇誠信制藥有限公司新建廠區

施工總結

一、工程概況：

本工程位于啟東市濱江精細化工園，上海路以北，江蘇路以南，發電廠西側，該工程總用地面積為11247.3m2，總建筑面積27878.9m2，其中綜合樓4289.2 m2，研發、辦公樓4224.75m2，車間6150.6m2。

工程結構類型為框架結構，結構抗震等級為三級。本工程承臺、基礎、地梁采用C30砼，電梯井砼采用C30抗滲等級為S6，基礎砼墊層采用C15，框架梁柱、樓板等承重結構均采用C30砼。

砌體工程：±0.000標高以下采用砼實心磚，采用M10水泥砂漿砌筑； ±0.000標高以上外墻采用200厚砼多孔磚，內墻采用200厚加氣砼塊，±0.000標高以上采用M5混合砂漿砌筑。

二、工程進度控制：

本工程根據合同的要求，結合本工程的特點和我公司的實際機械、人員等情況，為保證本合同工程在合同規定的期限內完工，在施工中我們采取以下措施確保總進度計劃的實施：

(一)、從組織管理上保證工期

1、本工程實行項目法施工，根據本工程的特點，為便于管理和組織施工，我公司將組織充足精干人員，調集精良設備投入本工程項目之中。

2、建立以項目為核心的責權利體系，定崗、定人、授權，各負其責。

3、各班組堅持每天一次的生產布置會，做到當天的問題不留到下一天，并讓每個生產者清楚明天的工作，及時安排布置。

4、建立獎罰嚴明的經濟責任制，對提前完成任務的相關人員進行獎勵：未能按時完成任務的按拖延的天數進行罰款，誰拖延誰受罰。

(二)、從計劃安排上保證工期

1、在工程開工前，嚴格按照《工程施工承包合同》的總工期要求，提出工程施工總體進度計劃，并對其科學性和合理性，以及能否滿足合同工期的要求并有所提前等問題，進行認真審查。

2、在工程施工總進度計劃的控制下，還要堅持逐周編制出具體的工程施工

計劃和工作安排。

3、制定周密詳細的施工進度計劃，對影響到總工期的作業給予人力和物力的充分保證，確保總進度計劃的順利完成。

4、對生產要素認真進行優化組合、動態管理。靈活機動地對人員、設備、物質進行調度安排，及時組織施工所需的人員、物資進場，保障后勤供應，滿足施工需要，保證連續施工作業。

5、縮短進場時的籌備時間，早籌備，早施工。有計劃有程序的科學施工。

6、工程計劃執行過程中，如發現未能按期完成計劃的情況時，必須及時檢查分析原因，立即采取有效的措施，調整下周的工作計劃，使上周延誤的工期在下周趕回來。

（三）、工期完成時間

本工程于2011年11月2日開工，至2013年2月25日竣工驗收。

三、工程質量控制方面

1、工程施工過程中，質量控制在工程之初，便確立了明確的質量目標。在工程質量管理方面，以質量為中心按照公司有關質量體系要求，建立了質量保證機構，由項目經理和總工程師直接領導，嚴格執行質量體系的有關規定，突出質檢部門的權限，堅持“質量第一”的宗旨，切實將質量意識貫徹到整個施工過程中以及各施工人員，制定了質量控制措施：

①、組織技術人員認真會審設計文件與圖紙，了解和掌握工程的要求、技術標準，理解設計意圖，并對不清楚或不明確之處及時提交書面報告業主和監理工程師解決。

②、根據工程的要求和特點，編制實施性施工組織設計以及專項施工方案，確定施工方法、場地布置、進度計劃及勞動力、機械、材料計劃，并于施工過程中及時修訂以更能夠指導施工。

③、按工程施工時間段不同配備充足的勞動力資源，配齊工程需要的各類設備。各種機械設備經檢驗合格后方可以進場，設備的型號、功能滿足施工工藝的要求，并嚴格執行“設備維修保養管理制度”及“機械操作規程”。

④、認真作好技術交底工作，使各級施工人員清楚的掌握將所施部位的施工工藝和方法、技術要求及控制要點等，作到高標準、高質量的作好每道工序的“第一”，以高標準的起點約束日后的施工，確保施工操作的準確性和規范性。⑤、嚴格執行工程“三檢”制度，確保符合標準、規范的要求，對于自檢和監理工程師提出的不滿足要求的部位、工序，一律進行整改或返工。

⑥、嚴格實施測量復核制度：對工程使用的導線點、水準點，進行復核，復核無誤后建立使用于本工程的測量控制網，并報監理驗收審批。所有點位、高程測量，在工區測設完成后，由測量組復核，項目測量隊抽查的方法進行，控制所有放樣、水準測量準確，誤差符合規范要求。

⑦、嚴格進行材料控制。工程所使用的材料經過檢驗合格、報驗允許使用的情況下方可用于本工程；除甲供材料外，所有自行采購的材料，在按程序對供貨方的供貨質量、信譽、供貨能力等方面進行評價，選取合的供貨方；⑧、嚴格的過程檢驗及試驗。嚴格執行“過程檢驗和試驗控制程序”，作業班組長、專兼職質檢員對施工作業的全過程進行檢查、指導及反饋，作到每個部位、每道工序均達到優良標準。

⑨、質量記錄控制各種資料形成過程中執行“文件及資料控制程序”。項目部各職能部門對各自形成的各類資料、質量記錄進行收集、保存、歸檔的工作，同時以技術部、質檢部牽頭，對整個資料的形成、收集及歸檔進行檢查，確保工程資料的準確性、及時性及完整性。在工程后期，根據工程檔案編制要求進行竣工資料的編制，保證按時、合格的移交竣工資料。

2、有效的質量控制措施的實施，工程分別在2012年5月對綜合樓，研發樓主體結構進行了驗收工作，2012年6月對車間主體結構進行了驗收。兩次的驗收工作全部一次性通過，工程質量合格率達到100%。，得到了業主的一致好評。

四、工程安全文明施工控制方面

（一）、確定安全生產目標

本項目安全目標確定為“三無一杜絕一創建”，“三無”即：無工傷死亡事故；無交通死亡事故；無火災事故；“一杜絕”即杜絕重傷事故；“一創建”即：創建文明工地。

(二)、建立安全生產體系

1、建立健全安全生產管理機構，成立以項目經理為組長的安全生產領導小組，全面負責并領導本項目的安全生產工作。

2、本項目實行安全生產三級管理，即：一級管理由項目經理負責，二級管理由專職安全員負責，三級管理由領工員(或班組長)負責，各作業點設立安全監督崗。

3、按照我公司頒布的《安全生產責任制》的要求，落實各級管理人員和操作人員的安全生產責任制做到縱向到底，橫向到邊，各自作好本崗位的安全工作。

4、本項目在開工前，由項目經理部編制實施性安全施工組織設計，認真執行安全生產“五同時”原則，采取安全技術措施，確保施工安全。

5、實行逐級安全技術交底制，由經理部組織有關人員對工程項目或專項進行書面詳細安全技術交底，凡參加安全技術交底的人員要履行簽字手續，并保存資料。項目經理部專職安全員要對安全技術措施的執行情況進行監督檢查，并作好記錄。

6、加強施工現場安全教育：

1)針對工程特點，對所有從事管理和生產的人員進行全面的安全教育，重點對專(兼)職安全員、領工員：班組長、電工、機械工、場內機動車輛以及新工上崗、工人變崗和改變工藝等進行培訓教育。

2）對從事施工管理和生產的人員，未經安全教育的不準上崗；新工人(含民工、臨時工)未進行三級教育的不準上崗；變換工種或采用新技術、新工藝、新設備、新材料沒有進行培訓不準上崗。

3)通過安全教育，增強職工安全意識，樹立“安全第一、預防為主”，的思想；掌握基本生產知識和安全操作技能；提高職工遵守施工安全紀律的自覺性，認真執行安全操作規定，做到不違章指揮、不違章操作、不傷害自己、不被他人傷害，達到提高職工整體安全防護意識和自我防護能力。

7、認真執行安全檢查制度

經理部要保證檢查制度的落實，要規定定期檢查日期及參加檢查的人員，經理部每周進行一次；作業班組每天進行一次，非定期檢查應視工程情況如施工準備前、施工危險性、采取新工藝、天氣變化時、交接班中等要進行檢查，并要有領導值班，對檢查中發現的安全問題按照“三不放過”的原則制定整改措施，定人限期進行整改。使“管生產必須管安全”的原則真正落實。

（三）、文明施工

現場文明施工的程度直接關系到企業的形象，為保證工程施工文明有序，采取如下措施：

1、加強對施工人員的法制教育，杜絕一切非法活動。

2、場地內按施工組織設計挖排水溝，形成排水系統，保持場內不積水。場內設專人打掃衛生，保持環境清潔。

3、在編制施工組織設計時把文明施工作為一項主要內容之一，現場由專人分管文明施工。

4、工地適當位置處設標牌，標明工程名稱、施工單位、工期、工程主要負責人姓名和監督電話，自覺接受社會監督。

5、工程材料、構件分類分規格存放整齊。機具設備定人保養，停放要整齊有序。

6、現場施工注意工程完成后對現場進行清理，做到“工完料盡場地清”。

六、總結經驗和體會

整個項目的施工過程中，為了保證施工工期順利完成，我們在施工過程中克服了種種困難和不便，為的就是把我們負責的這項工程更快更好地完成，我們本著認真負責的態度做好這項工作，寄希望于這是一項績優工程。

南通英雄誠信制藥項目部

2013年3月5日

第二篇：生物技術制藥總結

生物技術：人們以現代生命科學為基礎，結合先進的工程技術手段和其他基礎科學的科學原理，按照預先的設計改造生物體或加工生物原料，為人類生產出所需產品或達到某種目的的技術

1基因工程制藥：利用基因重組技術將外援基因導入宿主菌或細胞進行大規模培養，以獲得蛋白質藥物的過程。

2.載體：是攜帶外源目的基因或DNA進入宿主細胞，實現外援基因或DNA的無性繁殖或表達有意義的蛋白質所采用的一些DNA分子。

細胞傳代passage：將細胞從一個培養器皿中消化、分散并接種至另一個培養器皿中的操作。細胞克隆培養（clonal culture）：即單細胞分離培養，是將動物組織分散后，將一個細胞從群體細胞中分離出來，由單個細胞培養成純系細胞集群。

動物細胞的復蘇：其原則是快速融化，必須將凍存在-196℃液氮中的細胞快速融化至37℃，使細胞外凍存時的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結晶，對細胞造成損害。

細胞融合（cell fusion）：是指在外力（誘導劑或促融劑）作用下，兩個或兩個以上的異源（種、屬間）細胞或原生質體相互接觸，從而發生膜融合、胞質融合和核融合并形成雜種細胞的現象，或稱細胞雜交。

轉基因動物（transgenic animal）：采用基因工程技術將外源目的基因導入動物生殖細胞、胚胎干細胞和早期胚胎，并在受體動物的染色體上穩定整合，在經過發育途徑將外源目的基因穩定地傳給子代，通過這項技術所獲得的動物即為轉基因動物。

胚胎干細胞（embryo stem cell）：簡稱ES細胞，是從早期胚胎細胞團分離出來并能在體外培養的一種高度未分化的、具有形成所有成年細胞類型能力的全能干細胞。它是正常二倍體型，像早期胚胎細胞一樣具有發育上的全能性。

抗體工程制藥（antibody engineering pharmaceutics）：利用基因工程、細胞工程（包括動物細胞工程和植物細胞工程）和轉基因動物及轉基因植物技術生產抗體藥物的過程。

單克隆抗體（monoclonal antibody，mAb）：簡稱單抗，將能大量擴增和永生的骨髓瘤細胞和能合成分泌特異性抗體的B細胞（僅識別一種抗原表位）進行融合得到雜交瘤細胞，經篩選和克隆化的雜交瘤細胞僅能合成及分泌抗單一抗原表位的特異性抗體。

雜交瘤細胞克隆化（cloning）：是指將陽性孔中分泌抗體的單個細胞分離出來。融合后的雜交瘤細胞一般要經過3次克隆化才能達到100%的陽性克隆。

雙特異性抗體（bispecific antibody，bsAb）：亦稱雙功能抗體，是含有兩個不同配體結合位點的抗體分子，它有兩個不同的抗原結合部位（兩個臂），可分別結合兩種不同的抗原表位。嵌合抗體（chimeric antibody）：是利用DNA重組技術，將異源單抗的輕、重鏈可變區基因插入含有人抗體恒定區的表達載體中，轉化哺乳動物細胞表達的抗體，表達的抗體分子中輕、重鏈的V區是異源的，而C區是人源的，即整個抗體分子的60%~70%是人源的。

人源化抗體（humanized antibody，hAb）：通過CDR移植即把鼠抗體的CDR（互補決定區）序列移植到人抗體的可變區內所得到的抗體，也稱CDR移植抗體或改型抗體。該抗體既具有鼠源性單抗的特異性又保持了人抗體的功能（C區的功能）。

免疫原性（immunogenicity）：抗原能刺激機體特異性免疫細胞，使其活化、增值、分化，最終產生免疫效應物質（抗體或致敏淋巴細胞）的特性。

免疫反應性（immunoreactivity）：抗原與相應免疫效應物質在體內或體外相遇時，可發生

特異性結合而產生免疫反應的特性。

減毒活疫苗（live attenuated vaccine）：是通過不同的方式手段使病原體的毒性即致病

性減弱或喪失后獲得的一種由完整的微生物組成的疫苗制品。

滅活疫苗（inactivated）：是將病原體經培養增殖、滅活純化處理，使其完全喪失感染性，但保留了病原體的幾乎全部組分因此滅活疫苗具有較好的免疫原性和安全性。

亞單位疫苗（subunit vaccine）：利用微生物的某種表面結構成分（抗原）制成、能誘發

機體產生抗體的疫苗。

分解代謝阻遏（catabolite repression）：在菌體的生長階段被菌體快速利用的碳源會產

生大量的分解產物，這些代謝產物阻遏次級代謝酶系的合成，只有當這類碳源被消耗完后，阻遏作用被消除，菌體才由生長階段轉入次級代謝產物合成階段，這種發酵過程中的次級代

謝產物在碳源被消耗盡時才產生和積累的現象稱為分解代謝阻遏。

生物技術：人們以現代生命科學為基礎，結合先進的工程技術手段和其他基礎科學的科學原

理，按照預先的設計改造生物體或加工生物原料，為人類生產出所需產品或達到某種目的的技術。

種齡（inoculumage）：種子罐中培養的菌絲轉入下一級種子罐或發酵罐時得培養時間

生物技術藥物的特性？

（1）理化性質特性（1）相對分子量大（2）結構復雜：蛋白質和核酸均為生物大分子，蛋

白質含有四級結構（3）穩定性差（2）藥理學作用特性（1）活性與作用機制明確：活性物

質對生理功能的調節機制比較清楚（2）作用針對性強：有特定的靶分子、靶細胞或靶器官

（3）毒性低：生物技術藥物本身是體內天然存在的物質或它們的衍生物（4）體內半衰期短

（5）有種屬特異性（6）可產生免疫原抑制（3）生產制備特性（1）藥物分子在原料中的含量低（2）原料液中常存在降解目標產物的雜質：應采取快速分離純化的方法以除去影響

目標產物穩定性的物質（3）制備工藝條件溫和：目的產物不穩定（4）分離純化困難：需要

多種不同原理的層析單元操作才能達到要用的純度（5）產品易受有害物質（4）質量控制特

性

質粒的特點：（1）是指獨立于原核生物染色體之外具有自主復制能力的遺傳物質。（2）質粒

具有遺傳傳遞和遺傳交換的能力（3）質粒具有不相容性：兩種親緣關系密切的不同質粒不

能在同一宿主細胞中穩定共存。4..共價閉合環狀DNA(ccDNA)，開環DNA(ocDNA)，線狀

DNA(lDNA)在瓊脂糖凝膠電泳中

5.復制子松弛型復制子的復制和宿主蛋白的合成功能

無關，宿主染色體DNA復制受阻時，質粒仍可復制；嚴謹型復制子的復制與宿主蛋白質的合成相關，因此在每個宿主細胞中為低拷貝數，僅1~3個。

6.克隆表達的質粒載體涉及三個要素：

（1）復制子（2）選擇標記：由質粒攜帶的賦予宿主細胞新的表型的基因，用于鑒定和篩選

轉化有質粒的宿主細胞。常見的標記：氨芐西林（Amp），卡那霉素（Kan）（3）多克隆位點

（MCS）：質粒載體中由多個限制性內切酶識別序列密集排列形成的序列。

7.目的基因常用制備方法

(1)化學合成法（2）PCR法：在含有DNA模板、引物、DNA聚合酶、dNTP的緩沖溶液中通

過下列步驟擴增DNA：a）變性：雙鏈DNA模板加熱變性，解離成單鏈模板；b）退火：降

低溫度，引物與單鏈模板結合；c）延伸：溫度調整至DNA聚合酶最適宜溫度，最終與單鏈

模板形成雙鏈，并開始下一個變性、退火、延伸循環。（3）基因文庫法（4）cDNA文庫法

8.影響目的基因與載體之間連接效率的主要因素：

9.（1）DNA片段之間的連接方式：粘性末端的連接效率高于平頭末端。（2）目的基因與載

體的濃度和比例：增加DNA濃度可以提高連接效率，目的基因與載體DNA的摩爾數比應大

于1.（3）連接溫度、時間、連接酶的活性及緩沖液。

9.重組DNA導入大腸桿菌，常用的感受態細胞制備方法：氯化鈣法

10.重組子的篩選與鑒定：

（1）載體遺傳標記法：a)抗生素抗性篩選法

b)互補篩選法：重組子轉化成宿主細胞，載體的表達產物與宿主細胞中營養缺陷性突變發生

互補作用，從而實現重組子的篩選。藍白斑篩選：lacZα基因可編碼β—半乳糖苷酶α氨基

端的α互補肽段，與宿主細胞編碼的缺陷型β—半乳糖苷酶α實現互補，可分解底物5-溴-4-

氫-3-吲哚-β-D-半乳糖苷，形成藍色菌落。由于lacAα基因的插入失活而成白色，空載體的宿主細胞呈藍色。c)營養缺陷篩選法d噬菌斑篩選法(2)核酸分子雜交法

(3)限制性內切酶圖譜法(4)DNA序列測定法：雙脫氧終止法(5)目的基因表達產物測定法

12.外源基因在大腸桿菌中的表達形式：

(1)胞內表達：(a)非融合蛋白的胞內表達：形成包涵體（B）融合蛋白的胞內表達：在大腸桿

菌內較穩定（2）分泌表達：（a)分泌至周質（b）分泌至胞外

11.外源基因在原核生物中表達的重要調控元件

(1)啟動子：是DNA鏈上能與RNA聚合酶結合并起始mRNA合成的一段序列，是決定外源基

因在原核生物中表達效率的關鍵因素。(2)核糖體結合位點：SD序列(3)終止子

13.大腸桿菌中外源蛋白表達效率的影響因素：(1)外源基因密碼子：偏好密碼子（蛋白質合成迅速，錯配率低）和稀有密碼子(2)mRNA結構：減少G、C含量，增加A、T含量(3)表達

載體：高拷貝數、適用范圍廣、穩定性高、表達產物容易純化(4)外源蛋白穩定性

14.分離純化技術應滿足下列要求：(1)技術條件要溫和，能保持目的產物的生物活性；(2)選

擇性要好(3)回收率要高(4)兩個技術之間要能直接銜接(5)整個分離純化過程要快

15.基因重組蛋白的主要分離技術

(1)離心(2)沉淀(3)膜分離(4)雙水相萃取

16基因重組蛋白的主要純化技術:

(1)離子交換層析(2)親和層析(3)凝膠過濾層析(4)反相層析和疏水層析

17.選擇分離純化方法的依據：

（元，層析分離次序的選擇也同樣重要。(3)根據分離純化工藝的要求來選擇(a)具有良好的穩

定性、重復性和較高的安全性(b)盡可能減少組成工藝的步驟(c)分離純化工藝所用的時間要

盡可能的短(d)工藝和技術必須高效

18．基因工程藥物的質量控制要點

(1)蛋白質含量的測定(2)蛋白質純度檢測(3)蛋白質分子質量測定(4)蛋白質等電點測定(5)蛋

白質序列分析(6)內毒素分析、宿主蛋白與核酸殘留分析

19.蛋白質含量的測定

(1)紫外吸收法(2)BCA法(3)Lowry法(4)考馬斯亮藍法(5)SDS-PAGE掃描分析法

20.蛋白質純度的檢測：電泳法、層析法、質譜法、末端氨基酸殘基分析法

21.蛋白質Mr測定有SDS-PAGE法、凝膠層析法、質譜法

22.蛋白質等電點測定的常用方法：等電聚焦法。

23.蛋白質序列的分析:N-端氨基酸序列分析，C-端氨基酸序列分析

根據體外培養時動物細胞對生長基質的依賴性，可將動物細胞分為

(1)貼壁依賴性細胞(2)非貼壁依賴性細胞(3)兼性貼壁細胞

1.動物細胞培養的環境條件

(1)培養溫度（哺乳類37℃，昆蟲25~28℃）(2)pH值（大多數7.2~7.4）(3)通氧量（一定量的CO2）(4)防止污染(5)基本營養物質(6)滲透壓

3.動物細胞的培養特性

(1)比微生物細胞大得多，無細胞壁，抗機械強度低，對剪切力敏感，適應環境能力差；(2)

倍增時間長，生長緩慢，正常二倍體細胞的生長壽命是有限的；(3)對培養基要求高，易受

微生物污染，培養時需要添加抗生素；(4)生長大多需貼附于基質，相互粘連以集群形式存

在，并有接觸抑制現象；(5)多半將產物分泌在細胞外，便于收集和純化；(6)對蛋白質的合成條件和修飾功能與細菌不同，動物細胞可對蛋白質進行完善的翻譯后修飾，特別是糖基化，與天然產品更一致，更適合于臨床應用。

4.原代培養的主要步驟

(1)從健康動物體內無菌條件下取出適量組織，剪切成小薄片；(2)加入適宜濃度的胰蛋白酶

或膠原酶和EDTA等進行消化作用使細胞分散；(3)將分散的細胞進行洗滌并純化后，以2×

10^6~7×10^6 /ml的濃度加到培養基中，37℃下進行原代培養，并適時進行傳代培養。分為

組織塊培養和單層細胞培養兩種方法。

5.動物細胞深低溫保存的基本原理

在-70℃以下時，細胞內的酶活性均已停止，即代謝處于完全停滯狀態，故可以長期保存。

在不加任何條件下直接凍存細胞時，細胞內和外環境中的水都會形成冰晶，能導致細胞內發

生機械損傷、電解質濃度升高、滲透壓改變、脫水、pH改變、蛋白質變性等，能引起細胞

死亡。目前為了保存細胞，都采用液氮低溫（-196℃）凍存的方法。

6.動物細胞的復蘇

其原則是快速融化，必須將凍存在-196℃液氮中的細胞快速融化至37℃，使細胞外凍

存時的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結晶，對細胞造成損害。

7.動物細胞營養要求特點

(1)碳源不能為無機物，大多為葡萄糖；(2)氮源不能為無機物，主要為各種氨基酸；(3)在很

多情況下尚需添加5%~20%的小牛血清或適量的動物胚胎浸出液。

8.動物細胞的大規模培養方法

(1)懸浮培養法(2)微載體培養法(3)多孔載體培養法(4)微囊化培養法(5)中空纖維培養法

9.誘導動物細胞融合的方法主要有:(1)病毒法(2)PEG法(3)電擊法(4)激光法

10.轉基因動物生物反應器（整體掌握？）

(1)轉基因動物乳腺生物反應器（藥用蛋白，如抗凝血Ⅲ、抗胰蛋白酶、葡萄糖苷酶、C蛋白）

(2)轉基因動物血液生物反應器（人血紅蛋白、抗體或非活性狀態的融合蛋白）(3)轉基因動

物尿液生物反應器（促性腺激素）(4)轉基因雞（蛋）生物反應器（人干擾素）

1.單克隆抗體技術的基本原理

基于動物細胞融合技術得以實現的，即骨髓瘤細胞和B細胞的融合。骨髓瘤細胞在體外

培養能大量無限增殖，但不能分泌特異性抗體；抗原免疫的B細胞能產生特異性抗體，但在體外不能無限增殖。將免疫B細胞和骨髓瘤細胞融合后形成的雜交瘤細胞，繼承了兩個親代

細胞的特性，既具有骨髓瘤細胞能無限增殖的特性，又具有免疫B細胞合成和分泌特異性抗

體的能力。通常使用HAT（H為次黃嘌呤、A為氨基蝶呤、T為胸腺嘧啶核苷）選擇培養基

對雜交瘤細胞進行篩選。未融合的脾細胞因不能在體外長期存活而死亡，未融合的骨髓瘤細

胞合成DNA的從頭合成途徑被培養基中的A阻斷，又因缺乏HGPRT（次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸

核糖轉移酶）和TK（胸腺嘧啶核苷激酶），不能利用培養基中的H和T完成DNA的合成過

程而死亡。只有融合的雜交瘤細胞由于從脾細胞獲得了HGPRT和TK，因此能在HAT培養基

中長期存活與繁殖并分泌抗體。

2.單克隆抗體的大量制備主要方法:（1）體內培養法（2）體外培養法

6.重組ScFv的應用:(1)用于構建和生產免疫毒素(2)用于腫瘤的影像分析和治療

7.噬菌體抗體庫技術的基本原理:用PCR技術從人免疫細胞中擴增出整套的VH和VL基因，克隆到噬菌體載體上并以融合蛋白的形式表達在其外殼表面。這樣一來噬菌體DNA中有抗

體基因的存在，同時在其表面又有抗體分子的表達，可以方便地利用抗原-抗體特異性結合而篩選出所需要的抗體，并進行克隆擴增。

7.噬菌體抗體庫構建過程

(1)從外周血或脾、淋巴結等組織中分離B細胞，提取mRNA并反轉錄為cDNA；

(2)應用抗體輕鏈和重鏈引物，根據建庫的需要通過PCR技術擴增不同的抗體基因片段；

(3)構建噬菌體載體；(4)用表達載體轉化細菌，構建全套抗體庫。

通過多輪的抗原親和吸附（結合）-洗脫-擴增，最終篩選出抗原特異的抗體克隆。其中，噬

菌體抗體庫的篩選是關鍵環節和步驟。

減毒活疫苗的優缺點：

優點：

（1）通過自然感染途徑接種，可以誘導包括體液免疫、細胞免疫和粘膜免疫在內的更全面的免疫應答，使機體獲得更廣泛的免疫保護；（2）由于使用的是活的微生物他們可以在體內

長時間起作用而誘導較強的免疫反應，且由于活的微生物有增殖的特性，理論上只需要接

種一次，即可達到滿意的免疫效果；（3）可能引起水平傳播擴大免疫效果，增強群體免疫屏

障；(4)一般不需要再疫苗中添加佐劑，生產工藝一般不需要濃縮純化，價格低廉。

缺點：

(1)一般減毒活疫苗均保留一定殘余毒力，對一些個體如免疫缺陷者可能誘發嚴重疾病，并

且由于種種原因如基因修飾等，減毒活疫苗可能出現毒力回復即“返祖”現象；(2)減毒活

疫苗是活的微生物制劑，可能造成環境污染而引發交叉感染等，并可能滯留在環境中形成傳

染源；(3)缺損顆粒可能干擾免疫效果，因此產品分析評估較為困難；(4)保存運輸等條件要

求較高，如需冷藏等。

1.滅活疫苗的特點：(1)滅活疫苗常需多次接種；(2)接種滅活疫苗產生的抗體滴度隨著時

間而下降；(3)滅活疫苗需要量大。

第七章 發酵工程制藥

1.發酵類型：(1)微生物菌體發酵(2)微生物的酶(3)微生物的代謝產物發酵(4)微生物轉化發

酵(5)生物工程菌發酵

2.微生物發酵生產藥物的分類：(1)抗生素類(2)氨基酸類(3)核苷酸類(4)維生素類(5)甾體類

激素(6)多糖類(6)治療酶及酶抑制劑

3.菌種保藏方法：(1)斜面低溫保藏法(2)石蠟油封存法(3)沙土管保藏法(4)麩皮保藏法(5)甘

油懸液保藏法(6)冷東真空干燥保藏法(7)液氮超低溫保藏法(8)宿主保藏法

4.種子液具備的條件：(1)菌種的生長活力強，轉種至發酵罐后能迅速生長，延遲期短；(2)

生理狀態穩定；(3)菌體總量及濃度能滿足大容量發酵罐的要求；(4)無雜菌污染，保證純種培養；()保持穩定的生產能力

5.微生物的發酵方式：（1）分批發酵（2）補料—分批發酵（3）半連續發酵（4）連續發酵

5.發酵過程的中間分析項目：（1）產物產量（2）PH值（3）糖（4）氨基氮（5）菌絲形

態

6.發酵過程的影響因素及控制：（1）菌體濃度的影響及控制（2）營養物質對發酵的影響

及控制（3）溫度的影響及控制（4）PH的影響及控制（5）溶氧的影響及控制（6）二氧化碳的影響及控制（7）泡沫的影響及控制（8）染菌對發酵的影響

第三篇：制藥質量總結樣板（定稿）

第一部分 2017工作總結

一、成績

1、QA團隊管理

2017年QA團隊由年初4人增加到6人。

2、體系管理

2017年結合公司ISO9001由2008升級到2015，重新修訂和完善公司質量管理體系文件。

3、審計管理

2017年接受管理評審、內部審核、認證審核、監督審核和客戶審核56次。

4、產品質量改進/產品質量回顧 2017年完成公司36種產品質量回顧。

5、放行管理

2017年完成50種物料，30000批次放行；36種中間產品1800批次產品放行；36種產品3600批次放行。

6、驗證管理

2017年完成年初既定的20項驗證項目。

7、生產過程監控

2017年按照公司要求完成所有的監控項目。

8、偏差/投訴管理

2017年共完成偏差調查報告20份，其中設備管理方面4份、生產過程5份，其他11份。

9、供應商管理

2017年按照年初計劃完成供應商審計42家。

10、召回/追溯管理

2017年完成模擬召回和追溯演練20批次。

11、變更管理

2017年完成變更16項，其中物料變更2項、設備設施變更7項，其他7項。

12、培訓

2017年按照年初計劃，完成42項培訓。

13、法規/標準管理

2017年收集和識別法律法規12項目，并將其轉化為公司相關文件并實施。

14、計量管理

2017年新成立計量室后，按照國家相關計量法規對公司計量器具進行管理，其中送外檢62次，內部校驗260次。

15、其他

配合公司其他部門完成相關工作。

二、不足

1、QA團隊成員知識和能力略顯不足

2、計量管理與技能不足

3、驗證管理知識欠缺

4、偏差管理不足

三、改進

1、針對QA人員職責和知識水平，制定和實施相關知識培訓。

2、加外部計量管理知識和技能培訓

3、參加外部驗證和偏差管理培訓

第二部分 2018工作計劃 1、2018年管理評審、內部審核（自檢）計劃 2、2018年體系轉版計劃 3、2018年驗證計劃 4、2018年供應商審計計劃 5、2018年項目變更計劃 6、2018年質量培訓計劃 7、2018年檢定/校驗計劃 8、2018年產品質量改進計劃

第四篇：制藥實驗總結

1、溶液1，2，3，的作用？

溶液Ⅰ的作用：懸浮大腸桿菌菌體，而且加溶液I后，必須要將菌體懸浮徹底，不得有塊狀大顆粒狀呈現，是質粒DNA提取的首要關鍵。且其中含有的溶霉菌可以水解菌體細胞壁的主要化學成分肽聚糖中的β-1,4糖苷鍵，因而具有溶菌作用。

溶液

2、提供堿性條件，在NaOH與SDS的共同作用下使大腸桿菌瞬間裂解，并變性核DNA。當細胞懸浮于NaOH和十二烷基酸鈉（SDS）溶液中使，在高pH（堿性環境）的作用下細胞發生裂解，此外蛋白質和染色體DNA發生變性與細胞碎片一起沉淀下來。溶液3：（醋酸鉀和醋酸），該溶液所含有的高濃度鉀離子與溶液體系中的十二烷基硫酸鈉（即SDS與NaOH所形成的可溶性物質）發生反應形成十二烷基硫酸鉀（potassium dodecylsulfate,PDS），從而將與之結合的絕大部分大腸桿菌蛋白質以及很長的基因組DNA一起沉淀沉淀，與質粒分離開來；中和氫氧化鈉使質粒DNA復性。

因為基因組DNA太長了，長長的DNA自然容易被PDS給共沉淀了，盡管SDS并不與DNA分子結合。

2、各試劑的作用？ 溶液

1、葡萄糖的作用是使懸浮后的大腸桿菌不會很快沉積到管子的底部，增加溶液的粘度，維持滲透壓及防止DNA受機械剪切力作用而降解。EDTA是Ca2+ 和Mg2+等二價金屬離的螯合劑，在溶液I中加入EDTA，是要把大腸桿菌細胞中的二價金屬離子都螯合掉，從而起到抑制 DNase對DNA的降解和抑制微生物生長的作用。另外也可保證溶菌酶活性。任何生物化學反應，首先要控制好溶液的pH，因此用適當濃度的和適當pH值的Tris-Cl溶液，是再自然不過的了

溶液

2、提供堿性條件，在NaOH與SDS的共同作用下使大腸桿菌瞬間裂解，并變性核DNA。當細胞懸浮于NaOH和十二烷基酸鈉（SDS）溶液中使，在高pH（堿性環境）的作用下細胞發生裂解，此外蛋白質和染色體DNA發生變性與細胞碎片一起沉淀下來。溶液

3、醋酸中和堿。

25/24/1的酚/氯仿/異戊醇：

A．水飽和酚的比重略比水重，碰到高濃度的鹽溶液，離心后酚相會跑到上層，不利于含質粒的水相的回收；加入氯仿后可以增加比重，使得酚/氯仿始終在下層，方便水相的回收；

B．酚與水有很大的互溶性，如果單獨用酚抽提后會有大量的酚溶解到水相中，而酚會抑制很多酶反應。而且含質粒DNA的水相會部分進入到酚中，造成損失！C．添加異戊醇，主要是為了讓離心后上下層的界面更加清晰，方便了水相的回收。

無水乙醇：回收后的水相含有足夠多的鹽，DNA在無水乙醇中的溶解度小，因此只要加入2倍體積的乙醇，在室溫放置幾分鐘后離心就可以將質粒DNA沉淀出來。70%乙醇：如果感覺發生了鹽的沉淀，就用70％的乙醇多洗幾次。（除鹽），3、注意事項

（2）用不新鮮的0.4 M NaOH，即便有SDS也無法有效溶解大腸桿菌。因此必須使用新鮮的0.4 M NaOH試劑進行配制。

（3）SDS易產生氣泡，不要劇烈攪拌。（4）變性時間不宜過長。

（5）用移液器操作時一定要小心，特別是加入溶液二、三后一定不要劇烈震蕩，以免切碎DNA。

質粒DNA的酶切鑒定及瓊脂糖凝膠電泳

1、限制性核酸內切酶的特性，在基因工程中的作用？ 特性（基因工程）、定義。

作用基因工程的重要工具，能切割DNA獲得目的基因，切割質粒留下連接位點。此外，雙切酶能保證基因的定向插入，提高重組率。產生粘性末端惑平末端。

目前, 基因工程上, 限制酶主要應用于以下兩方面

（1）目的基因與載體的重組

細菌細胞中的限制酶能水解外源DNA , 因此必須通過適當的載體(質粒或噬菌體)的幫助才能將外源DNA引人受體細胞并在其中增殖和表達。將供體DNA與載體用同樣的限制酶處理, 使載體帶上各種各樣的外源DNA片斷, 然后引人受體細菌細胞增殖, 菌細胞增殖, 再篩選出所需的菌株, 便獲得帶有某一目的基因的繁殖系.用這種方法, 已成功地將酵母菌的咪哇甘油磷酸脫水酶基因、夕一異丙基蘋果酸脫氫酶基因和色氨酸合成酶基因通過幾噬菌體轉人大腸桿菌。2）建造新的基因載體作為基因載體,在引人受體細胞后, 必須有較高的復制率, 以求獲得大量的基因產物；必須具備一個選擇性標志, 以便篩選；還要有一至多種限制酶的作用位點（每種酶只有一個切口）；

2、瓊脂糖凝膠電泳的注意事項?

一、配膠：

1、電子稱的使用，要時刻保持電子稱的精確性，清潔性，根據不同濃度的膠配置瓊脂糖。

2、加TAE的量要適當，以免配出的膠太薄導致膠孔太淺或濃度太低。

3倒膠前，膠托要洗干凈，并擦干，倒膠時要待膠冷到一定溫度搖勻，盡量不要產生氣泡。若膠的溫度過高要頂著膠托，防止膠變形。

二、點樣電泳

1孔板要干凈，loading點樣要均勻，控制1~2ul的量，并做好對應標記。2點樣后及時蓋上膠墊注意不要蓋反。

5加樣時槍頭要上緊，吸樣均勻準確，排液時槍頭不要有殘留

3點電泳前要檢查膠是否合格，點樣要對準膠孔，盡量點完所有的樣。4不要忘記點marker并擺正膠位，正負極不要接反。

三、EB染色

1切膠要準，取膠要穩，泡膠要慎以免EB濺起。2碰到EB的手套要及時丟棄 3 EB要適時更換，盤子及時清洗 4抹布要分清，不可交叉使用。

四、圖像分析儀的使用

1使用前要清潔，避免影響膠圖清新度。2 照膠時應經量減少開紫外燈的時間。

5觀察時要帶防護眼鏡，避免眼睛被紫外損傷。

3拍照時先關攝像頭再關紫外燈，嚴格按照照膠流程操作。4照好的膠要及時丟棄。

3、膠回收試劑盒在回收DNA時各試劑的作用？ PCR

一、降低退火溫度對反映有何影響？

1在理想狀態下，退火溫度足夠低，以保證引物同目的序列有效退火，同時還要足夠高，以減少非特異性結合。

2如果溫度過低，擴增特異性差，雜帶較多，背景深。PCR擴增在變性階段吸熱,在退火和延伸階段放熱,每一個PCR循環呈現放熱效應,同時退火溫度高導致平臺期的前移和焓值的降低，4、退火溫度與時間，取決于引物的長度、堿基組成及其濃度，還有靶基序列的長度。

二、延長變性時間對反映有何影響？

變性時間延長會導致酶活性的降低。

GC含量過高的片段，可以適當延長變性時間。

三、循環次數是不是越多越好？

不是的，隨著反應的進行，酶會逐漸失活、dNTP等原料會逐漸消耗掉。

PCR敏感性太高,循環過多容易產生假陽性結果，比方說把試劑中原本極其微量的雜質序列片段放大擴增，影響對正常結果的判斷。

因此在一定范圍內，隨著反應循環數的增加，產物會增多；但超過了就不好了。一般設置30-35個循環就很夠了

四、PCR的五大元素？

參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 引物：

引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。設計引物應遵循以下原則：

①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。

②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。

③引物堿基：G+C 含量，G+C太少擴增效果不佳，G+C 過多易出現非特異條帶。ATGC最好隨機分布，避免核苷酸的成串排列。

④避免引物內部出現二級結構，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產生非特異的擴增條帶。

⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數第二個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點，被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點，這對酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性：引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。引物量：引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。

(2)酶及其濃度 目前有兩種Taq DNA聚合酶供應，一種是從棲熱水生桿菌中提純的天然酶，另一種為大腸菌合成的基因工程酶。催化一典型的PCR反應約需酶量2。5U(指總反應體積為100ul時)，濃度過高可引起非特異性擴增，濃度過低則合成產物量減少。

(3)dNTP的質量與濃度 dNTP的質量與濃度和PCR擴增效率有密切關系，dNTP粉呈顆粒狀，如保存不當易變性失去生物學活性。dNTP溶液呈酸性，將其PH調節到7.0～7.5，小量分裝，-20℃冰凍保存。多次凍融會使dNTP降解。尤其是注意4種dNTP的濃度要相等(等摩爾配制)，如其中任何一種濃度不同于其它幾種時(偏高或偏低)，就會引起錯配。濃度過低又會降低PCR產物的產量。dNTP能與Mg2+結合，使游離的Mg2+濃度降低。(4)模板(靶基因)核酸 模板核酸的量與純化程度，是PCR成敗與否的關鍵環節之一，傳統的DNA純化方法通常采用SDS和蛋白酶K 來消化處理標本。SDS的主要功能是： 溶解細胞膜上的脂類與蛋白質，因而溶解膜蛋白而破壞細胞膜，并解離細胞中的核蛋白，SDS還能與蛋白質結合而沉淀； 蛋白酶K 能水解消化蛋白質，特別是與DNA結合的組蛋白，再用有機溶劑酚與氯仿抽提掉蛋白質和其它細胞組份，用乙醇或異丙醇沉淀核酸。提取的核酸即可作為模板用于PCR反應。一般臨床檢測標本，可采用快速簡便的方法溶解細胞，裂解病原體，消化除去染色體的蛋白質使靶基因游離，直接用于PCR擴增。RNA模板提取一般采用異硫氰酸胍或蛋白酶K 法，要防止RNase降解RNA。

(5)Mg2+濃度 Mg2+對PCR擴增的特異性和產量有顯著的影響，Mg2+濃度過高，反應特異性降低，出現非特異擴增，濃度過低會降低Taq DNA聚合酶的活性，使反應產物減少。酵母菌原生質體的分離與再生

高壓蒸汽滅菌的注意事項？（微生物實驗）

第一，無菌包不宜過大(小于50cm×30cm×30cm)，不宜過緊，各包裹間要有間隙，使蒸汽能對流易滲透到包裹中央。消毒前，打開貯槽或盒的通氣孔，有利于蒸汽流通。而且排氣時使蒸汽能迅速排出，以保持物品干燥。消毒滅菌完畢，關閉貯槽或盒的通氣孔，以保持物品的無菌狀態。

第二，布類物品應放在金屬類物品上，否則蒸汽遇冷凝聚成水珠，使包布受潮。阻礙蒸汽進入包裹中央，嚴重影響滅菌效果。

⑥瓶裝液體滅菌時，要用玻璃紙和紗布包扎瓶口；如有橡皮塞時，應插入針頭排氣；⑦應有專人負責，每次滅菌前，應檢查安全閥的性能，以防壓力過高發生爆炸，保證安全使用；

第五篇：制藥公司實習總結

制藥公司實習總結

2010年7月7日，我們藥學專業一行三十人來到了山東博士倫福瑞達制藥有限公司（以下簡稱福瑞達），開始了為期一個月的實習。在這一個月里，我們做了很多，想了很多，收獲也很多。

行在福瑞達

福瑞達在濟南共有兩個廠區，一個是坐落于山大路南口的老廠區，一個是位于高新技術開發區的新廠區。我們三十人被分成三個小組，我們組的實習路線是新廠區——老廠區——新廠區。由于新廠區離學校較遠而且坐公交車不方便，因此我們每天要先坐公交車到達較近的老廠區，然后再坐二十分鐘的公司班車去新廠區。雖然時間有點漫長，但是和同學們這一路上的歡聲笑語卻是美好一天的開始。一路上總是會有看不完的風景，美輪美奐的奧體中心、川流不息的人群車輛、枝葉繁茂的青翠柏楊、平地而起的高樓大廈……細細觀察車窗外的濟南，你會發現這座四千年的古城每一天都有新的變化。

吃在福瑞達

要說起在福瑞達實習期間的伙食，豈一個爽字了得！據我所知，我們整個院里也就我們的伙食最好了，不但經濟實惠而且美味可口。去新廠實習的第一天中午，剛進食堂就驚喜于眼前的情景，一排排桌椅整齊的排列著，白色的地面一塵不染，打飯的師傅統一著裝，帶著白色的口罩和帽子。我不由得感嘆：“哇，真是太干凈了！”旁邊的同學說：“顯然啊，人家gmp都能認證上，更別說這區區一個食堂了。“我很認同的使勁點了點頭。這個餐廳是半自助式的，每人中午三份菜是限量的，米飯、饅頭和湯是不限量的，我觀察了一會兒發現這里沒有一個人會大把大把地浪費糧食，大家都盡量將自己的米飯或饅頭吃干凈后才倒入收殘桶中，這讓我不由得感慨福瑞達人的自覺性和高素質。公司的飯菜質量很不錯，而且懂得科學搭配，每頓有葷有素，每周有粗有細。在那里吃了一個星期的飯，我都覺得自己胖了不少。后來我們再到老廠區的時候，由于原食堂搬遷在即，飯菜是由快餐店送過來的，所以不如以前那么可口，但是已經算是很不錯了。雖然現在實習已經結束了，但是福瑞達的美味飯菜給我留下了深刻的印象。

穿在福瑞達

眾所周知，按空間中細菌的數量可將藥廠劃分為a、b、c、d四個等級，其中a 區級別最高，因此針對于不同的工作區域也有不同的著裝要求。還沒有開始正式實習之前，老師就要求我們在實習期間不能穿短褲，不能穿涼鞋、拖鞋，雖然在如此炎熱的天氣里做出這樣的規定似乎有點不近人情，但我們理解這也是為達到生產條件，保障藥品質量而要求。剛開始的幾天我們是在外沿區域打掃衛生，因此只需要穿上隔離衣，戴上帽子，穿上鞋套就可以了。后來我們進b區工作時就要按更嚴格的規定換成專門的無菌衣，從頭武裝到腳，只能露出兩個眼睛，雖說這衣服有透氣孔，但整個人被裝在里面也是很不舒服的，半天下來身上的衣服都被汗給浸透了。可是他們有些工作人員卻要一穿穿一整天，想想他們真的很不容易，若不是沒有吃苦耐勞的精神還真是撐不下來，由此，我不禁更加佩服他們了。

學在福瑞達