第一篇：PCR檢驗實驗室檢查要點指南

《PCR檢驗實驗室檢查要點指南》概述

北京市醫療器械技術審評中心（100061）鄭婕 馮路 趙陽 王輝

摘要：目的目的 明確體外診斷試劑生產企業PCR檢驗實驗室設置和管理相關要求，指導并規范監督管理部門開展現場檢查工作。方法方法 采用收集相關文獻資料、結合北京市生產企業現狀、組織企業驗證、經過相關專家討論、公開征求意見后最終確定主要檢查要求。結果與結論結果與結論 要點指南從實驗室布局、儀器設施配置、現場及文件檢查工作流程及注意事項、人員培訓情況四個方面描述了現場檢查重點關注的內容。關鍵詞：PCR檢驗實驗室；檢查要點指南；工作流程；注意事項

中圖分類號：R955 文獻標識碼：A文章編號：1005-8257（2015）11-0004-02 PCR檢驗實驗室是指通過基因擴增的方式檢測特定的DNA或RNA的檢驗實驗室。聚合酶鏈反應（PCR）是一種在體外特異性擴增靶DNA序列的技術，其基本過程為模板雙鏈DNA的變性、引物與模板DNA的退火和在DNA 聚合酶引導下的鏈延伸反應三個階段的多次循環。每一次循環后的擴增產物均可作為下一輪循環的模板，理論上，擴增產物量呈指數形式上升，即經過n個循環后，產物量增加到2n倍，在短時間內可在體外可獲得數百萬個特異靶DNA序列的拷貝。PCR檢測試劑越來越成為臨床疾病的診斷治療監測、預后評估的重要手段。PCR檢測試劑生產企業也越來越多。但在實際檢查中，筆者發現，各個企業PCR檢測實驗室設置各不相同，管理方式千差萬別。

PCR檢驗實驗室是PCR試劑的生產企業在產品檢驗過程中不可缺少的工作環境，其環境控制水平和質量管理水平直接影響著最終產品的質量。由于該產品本身的特殊性，《體外診斷試劑生產實施細則（試行）》中，明確對PCR試劑的生產和檢驗環境做出了規定?！禤CR檢驗實驗室檢查要點指南》旨在指導北京市醫療器械現場檢查人員對PCR檢驗實驗室的現場檢查工作。同時，為PCR類體外診斷試劑生產企業在PCR檢驗實驗室的設計和管理要求方面提供參考，將于年內正式發布。1 適用范圍

本《指南》可作為北京市食品藥品監督管理局組織、實施的《醫療器械生產許可證》核發、變更、換證等現場檢查，體外診斷試劑生產實施細則檢查，醫療器械生產監督檢查等各項涉及PCR檢驗實驗室檢查的參考資料?；驕y序檢驗實驗室等涉及PCR實驗的相關部分應參照本《指南》執行。2 檢查要點及流程

2.1 現場觀察企業PCR檢驗實驗室布局 PCR檢驗實驗室的設計決定了檢驗環境的優劣，企業應提供PCR實驗室設計方案和/或平面設計圖（應標明風向或壓差梯度）。①為防止在檢驗過程中產生的氣溶膠對生產過程的不利影響，按照《體外診斷試劑生產實施細則（試行）》的要求，PCR檢驗實驗室與PCR產品生產區域應在各自獨立的建筑物中。②原則上PCR檢驗實驗室應當設置以下區域：試劑儲存和準備區、標本制備區、擴增區、擴增產物分析區。根據使用儀器的功能。區域可適當合并。若使用實時熒光定量PCR儀且不需要進行后續產物分析工作，擴增區、擴增產物分析區可合并[1]。若使用樣本處理、核酸提取及擴增檢測為一體的自動化分析儀，則標本制備區、擴增區、擴增產物分 析區可合并。

③各區域在物理空間上應完全相互獨立，各區域無論是在空間上還是在使用中，應當始終處于完全的分隔狀態。不應只是形式上的分區，不應一個區域嵌套一個區域。④各區域不應有空氣的直接相通。擴增區與擴增產物分析區各區域宜采用獨立直排方式出風。采用空調機組方式的，PCR實驗室應具備獨立空調機組；同時應考慮停機后各房間空氣連通的可能性，采取必要的控制措施。

⑤按照試劑儲存和準備區→標本制備區→擴增區→擴增產物分析區方向空氣壓力應以遞減的方式進行，使得PCR檢驗實驗室的空氣流向應按照試劑儲存和準備區→標本制備區→擴增區→擴增產物分析區方向進行，防止擴增產物順空氣氣流進入擴增前的區域?？諝饬飨驊獮閱蜗?，禁止下游污染上游。應設置合理的壓差梯度，并安裝壓差監測裝置，以有效證明空氣流向，考慮到北京常年平均風力的情況，結 附圖1 緩沖間為負壓的理想PCR實驗室設置模式 附圖2 緩沖間為正壓的理想PCR實驗室設置模式

第二篇：PCR檢驗實驗室檢查要點指南

PCR檢驗實驗室檢查要點指南

2016年8月31日，北京市食品藥品監督管理局發布了《PCR檢驗實驗室檢查要點指南（2016版）》，具體內容如下：

聚合酶鏈反應（PCR）檢驗實驗室檢查要點指南（2016版）

聚合酶鏈反應檢驗實驗室是指通過基因擴增的方式檢測特定的DNA或RNA的檢驗實驗室。聚合酶鏈反應（Polymerase Chain Reaction，PCR）是一種在體外特異性擴增靶DNA序列的技術，其基本過程為模板雙鏈DNA的變性、引物與模板DNA的退火和在DNA 聚合酶引導下的鏈延伸反應三個階段的多次循環。每一次循環后的擴增產物均可作為下一輪循環的模板，理論上，擴增產物量呈指數形式上升，即經過n個循環后，產物量增加到2n倍。PCR試劑操作簡單，短時間內在體外可獲得數百萬個特異靶DNA序列的復制，為臨床疾病的診斷、治療監測和預后評估提供了一種極有幫助的實驗室輔助手段。

PCR檢驗實驗室是PCR試劑生產企業在產品檢驗過程中不可缺少的工作環境，其環境控制水平和質量管理水平直接影響著最終產品是否合格，能否放行。由于該產品本身的特殊性，《醫療器械生產質量管理規范附錄體外診斷試劑》、《醫療器械生產質量管理規范體外診斷試劑現場檢查指導原則》條款中，明確對PCR試劑的生產和檢驗環境做出規定。此外現行衛生行業的法規、標準以及相關文獻中對于PCR檢驗實驗室均作出規定，主要涉及《全國臨床檢驗規程》（第三版）、《醫療機構臨床基因擴增管理辦法》（衛辦醫政發〔2010〕194號）、《醫療機構臨床基因擴增檢驗實驗室工作導則》及《臨床診斷中聚合酶鏈反應（PCR）技術的應用》（WS/T 230-2002）等行業標準的相關要求。本檢查指南旨在幫助北京市醫療器械監管人員增強對PCR檢驗相關過程的認知和把握，指導全市醫療器械監管人員對PCR檢驗實驗室設計建設與質量控制的監督檢查工作。同時，為PCR試劑生產企業在PCR檢驗實驗室的設計建造和管理要求提供參考。

當國家相關法規、標準、檢查要求發生變化時，應當重新討論以確保本檢查指南持續符合要求。適用范圍

本檢查指南可作為北京市食品藥品監督管理局組織、實施的體外診斷試劑產品注冊質量管理體系現場核查、《醫療器械生產許可證》現場核查、醫療器械生產監督檢查等各項涉及PCR檢驗實驗室檢查的參考資料。

基因測序檢驗實驗室等涉及PCR試劑的相關部分應當參照本檢查指南執行。核查要點

（一）現場查看生產企業PCR檢驗實驗室布局

生產企業應當提供PCR檢驗實驗室設計方案和/或平面設計圖（應當標明風向或壓差梯度）。

1.PCR檢驗實驗室與PCR試劑生產區域應當在各自獨立的建筑物或空間內，保證空氣不直接聯通，防止擴增時形成的氣溶膠造成交叉污染。

2.原則上PCR檢驗實驗室應當設置以下區域：試劑儲存和準備區、標本制備區、擴增區、擴增產物分析區。根據使用儀器的功能，區域可適當合并。若使用實時熒光定量PCR儀且不需要進行后續產物分析工作，擴增區、擴增產物分析區可合并。若使用樣本處理、核酸提取及擴增檢測為一體的自動化分析儀，則標本制備區、擴增區、擴增產物分析區可合并。3.各區域在物理空間上應當完全相互獨立，各區域無論是在空間上還是在使用中，應當始終處于完全的分隔狀態。不應當只是形式上的分區，不應當是一個區域嵌套一個區域。4.各區域不應當有空氣的直接相通。擴增區與擴增產物分析區各區域宜采用獨立直排方式出風。采用空調機組方式的，PCR檢驗實驗室應當具備獨立空調機組；同時應當考慮停機后各房間空氣連通的可能性，采取必要的控制措施。

5.按照試劑儲存和準備區→標本制備區→擴增區→擴增產物分析區方向空氣壓力應當以遞減的方式進行，使得PCR檢驗實驗室的空氣流向應當按照試劑儲存和準備區→標本制備區→擴增區→擴增產物分析區方向進行，防止擴增產物順空氣氣流進入擴增前的區域?？諝饬飨驊敒閱蜗?，禁止下游污染上游。應當設置合理的壓差梯度，并安裝壓差監測裝置，以有效證明空氣流向，壓差梯度不宜低于5帕。

6.設置緩沖間的，緩沖間內通向內實驗室和走廊的門應當安裝連鎖裝置或采取相應措施，避免出現兩個門同時打開的情況。

7.各區間若設置傳遞窗，應當為雙側開門，要求密封嚴實，并且兩側的門應當為互鎖裝置或采取相應措施保證兩側門不會同時開啟。

（二）現場查看儀器設施配置

1.試劑儲存和準備區的功能：貯存試劑的制備、試劑的分裝和擴增反應混合液的準備，以及離心管、吸頭等消耗品的貯存和準備。配套用品一般應當包括：

（1）溫度調控范圍為2℃～8℃和（或）-20℃以下冰箱；（2）混勻器；（3）微量加樣器；（4）紫外消毒設備；

（5）消耗品：一次性手套、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭；（6）專用工作服和工作鞋(套)；（7）專用辦公用品。

2.標本制備區的功能：核酸（RNA、DNA）提取、貯存及加樣。配套用品一般應當包括：

（1）溫度調控范圍為2℃～8℃和（或）-20℃以下冰箱；（2）高速離心機；（3）混勻器；

（4）水浴箱或加熱模塊；（5）微量加樣器；（6）紫外消毒設備；（7）生物安全柜；

（8）消耗品：一次性手套、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶 濾芯）；

（9）專用工作服和工作鞋(套)；（10）專用辦公用品；

（11）如需處理大分子DNA，應當具有超聲波儀。

3.擴增區的功能：cDNA合成、DNA擴增及檢測。配套用品一般應當包括：（1）核酸擴增儀；（2）微量加樣器；（3）紫外消毒設備；

（4）消耗品：一次性手套、一次性帽子、耐高壓處理的離心管和 加樣器吸頭（帶濾芯）；（5）專用工作服和工作鞋；（6）專用辦公用品。

4.擴增產物分析區的功能：擴增片段的進一步分析測定。視檢驗 方法不同而定，基本配置如下：（1）微量加樣器；（2）紫外消毒設備；

（3）消耗品：一次性手套、一次性帽子、加樣器吸頭（帶濾芯）；（4）專用工作服和工作鞋；（5）專用辦公用品。5.設備的維護保養

應當建立設備維護保養規程，計量設備應當定期檢定。例如核酸擴增儀、微量加樣器、生物安全柜、離心機應當每年進行檢定或校準工作。

（三）現場檢查工作流程及注意事項

1.進入各工作區域應當嚴格按照單一方向進行，即試劑儲存和準備區→標本制備區→擴增區→擴增產物分析區。

2.各工作區域必須有明確的標記，不同工作區域內的設備、物品不得混用。3.不同工作區域的工作服應當加以區分，不得混用（例如可以采用不同顏色）。4.實驗室的清潔應當按照試劑貯存和準備區→標本制備區→擴增區→擴增產物分析區的方向進行。不同的實驗區域應當有其各自的清潔用具并防止交叉污染。實驗垃圾屬于醫療廢物的應當按照《醫療廢物管理條例》相關規定進行處理。5.工作結束后，應當立即對工作區進行清潔及消毒。6.貯存試劑和用于標本制備的消耗品等材料應當直接運送至試劑貯存和準備區，不能經過擴增檢測區。應當對加樣吸頭、PCR反應管等消耗品處理，防止污染。試劑盒中的陽性對照品及質控品應當保存在標本處理區。試劑應當使用分子生物學級別試劑，使用的純化水應當高壓滅菌。質檢用于原輔料、半成品、成品檢驗用的PCR反應試劑應當有相應的質量標準及操作程序。

7.為避免樣本間的交叉污染，加入待測核酸后，應當蓋好含反應混合液的反應管。應當注意PCR反應液加樣的順序，應當為空白樣品→陰性對照→樣品→陽性對照。對具有潛在傳染危險性的材料，應當在生物安全柜內開蓋，并有明確的樣本處理和滅活程序。

8.應當避免氣溶膠所致的污染，盡量減少在擴增區內的走動，擴增反應管不得在擴增區打開。9.擴增產物分析區有可能存在某些可致基因突變和有毒物質如溴化乙錠、丙烯酰胺、甲醛或放射性核素等，應當注意實驗人員的安全防護。

（四）現場檢查人員培訓情況

參與PCR檢驗的工作人員應當具備相應的專業知識和技能，包括能熟練操作相關設備,明確整個工作的流程,掌握出現污染情況的處理方法以及實驗室質量控制方法和檢測結果的解釋。

檢查人員可以通過詢問或要求人員實際操作對其進行評價，也可以通過查閱人員培訓記錄，對其進行評價。

（五）現場檢查文件情況

在檢查過程中應當特別注意現場查看、詢問、記錄的實際情況與生產企業的文件規定、記錄的符合性。

圖A和圖B所給出的PCR檢驗實驗室設置圖是較為理想的設置模式，建議企業參照此種模式設計并建立實驗室。

第三篇：PCR檢驗實驗室檢查要點指南(征求意見稿)

PCR檢驗實驗室檢查要點指南（征求意見稿）

PCR檢驗實驗室是指通過基因擴增的方式檢測特定的DNA或RNA的檢驗實驗室。聚合酶鏈反應（PCR）是一種在體外特異性擴增靶DNA序列的技術，其基本過程為模板雙鏈DNA的變性、引物與模板DNA的退火和在DNA 聚合酶引導下的鏈延伸反應三個階段的多次循環。每一次循環后的擴增產物均可作為下一輪循環的模板，理論上，擴增產物量呈指數形式上升，即經過n個循環后，產物量增加到2n倍。PCR操作簡單，短時間內在體外可獲得數百萬個特異靶DNA序列的拷貝，為臨床疾病的診斷、治療監測和預后評估提供了一種極有幫助的實驗室輔助手段。

PCR檢驗實驗室是PCR試劑的生產企業在產品檢驗過程中不可缺少的工作環境，其環境控制水平和質量管理水平直接影響著最終產品的是否合格，能否放行。由于該產品本身的特殊性，《醫療器械生產質量管理規范附錄體外診斷試劑》和《醫療器械生產質量管理規范體外診斷試劑現場檢查指導原則》的條款中，明確對PCR試劑的生產和檢驗環境做出規定。本檢查指南旨在幫助北京市醫療器械監管人員增強對PCR檢驗相關過程的認知和把握，指導全市醫療器械監管人員對PCR檢驗實驗室設計建設與質量控制的監督檢查工作。同時，為PCR類體外診斷試劑產品生產企業在PCR檢驗實驗室的設計建造和管理要求提供參考。

本檢查指南主要以現行醫療器械和衛生行業的法規、標準以及相關文獻中對于PCR檢驗實驗室的規定為基礎，尤其是以《全國臨床檢驗規程》（第三版）的相關要求為主，部分借鑒了《醫療機構臨床基因擴增管理辦法》（衛辦醫政發〔2010〕194號）、《醫療機構臨床基因擴增檢驗實驗室工作導則》、《臨床診斷中聚合酶鏈反應（PCR）技術的應用》（WS/T 230-2002）等行業標準的相關要求，旨在幫助北京市醫療器械監管人員增強對PCR檢驗實驗室的認知和掌握，同時為體外診斷試劑生產企業開展PCR檢驗實驗室管理活動提供參考。

當國家相關法規、標準、檢查要求發生變化時，應當重新討論以確保本檢查指南持續符合要求。

一、適用范圍

本檢查指南可作為北京市食品藥品監督管理局組織、實施的體外診斷試劑產品注冊質量管理體系現場核查、《醫療器械生產許可證》現場核查、醫療器械生產監督檢查等各項涉及PCR檢驗實驗室檢查的參考資料。

基因測序檢驗實驗室等涉及PCR實驗的相關部分應當參照本檢查指南執行。

二、檢查要點及流程

以下檢查要點的表述主要分為對現場情況和文件資料的檢查兩部分，但在實際檢查過程中應當特別注意現場查看、詢問、記錄的情況與企業的規定、文件、記錄的符合性。

（一）現場查看企業PCR檢驗實驗室布局

企業應當提供PCR實驗室設計方案和/或平面設計圖（應當標明風向或壓差梯度）。

1.PCR檢驗實驗室與PCR產品生產區域應當在各自獨立的建筑物或

空間內，保證空氣不直接連通，防止擴增時形成的氣溶膠造成交叉污染。

2.原則上PCR檢驗實驗室應當設臵以下區域：試劑儲存和準備區、標本制備區、擴增區、擴增產物分析區。根據使用儀器的功能，區域可適當合并。

若使用實時熒光定量PCR儀且不需要進行后續產物分析工作，擴增區、擴增產物分析區可合并。若使用樣本處理、核酸提取及擴增檢測為一體的自動化分析儀，則標本制備區、擴增區、擴增產物分析區可合并。

3.各區域在物理空間上應當完全相互獨立，各區域無論是在空間上還是在使用中，應當始終處于完全的分隔狀態。不應只是形式上的分區，不應一個區域嵌套一個區域。

4.各區域不應有空氣的直接相通。擴增區與擴增產物分析區各區域宜采用獨立直排方式出風。

采用空調機組方式的，PCR實驗室應當具備獨立空調機組；同時應當考慮停機后各房間空氣連通的可能性，采取必要的控制措施。

5.按照試劑儲存和準備區→標本制備區→擴增區→擴增產物分析區方向空氣壓力應當以遞減的方式進行，使得PCR檢驗實驗室的空氣流向應當按照試劑儲存和準備區→標本制備區→擴增區→擴增產物分析區方向進行，防止擴增產物順空氣氣流進入擴增前的區域。

空氣流向應當為單向，禁止下游污染上游。應當設臵合理的壓差梯度，并安裝壓差監測裝臵，以有效證明空氣流向，壓差梯度不宜低于5帕。

6.設臵緩沖間的，緩沖間內通向內實驗室和走廊的門應當安裝連鎖裝臵或采取相應措施，避免出現兩個門同時打開的情況。

7.各區間若設臵傳遞窗，應當為雙側開門，要求密封嚴實，并且兩側的門應當為互鎖裝臵或采取相應措施保證兩側門不會同時開啟。

（二）現場查看各區儀器設施配臵

1.試劑儲存和準備區的功能：貯存試劑的制備、試劑的分裝和擴增反應混合液的準備，以及離心管、吸頭等消耗品的貯存和準備。配套用品一般應當包括：

（1）2℃～8℃和-20℃以下冰箱。（2）混勻器。（3）微量加樣器。（4）紫外消毒設備。

（5）消耗品：一次性手套、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭。（6）專用工作服和工作鞋(套)。（7）專用辦公用品。

2.標本制備區的功能：核酸（RNA、DNA）提取、貯存及加樣。配 套用品一般應當包括：（1）2-8℃冰箱、-20℃以下冰箱。（2）高速離心機。（3）混勻器。

（4）水浴箱或加熱模塊。（5）微量加樣器。（6）紫外消毒設備。（7）生物安全柜。

（8）消耗品：一次性手套、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶 濾芯）。

（9）專用工作服和工作鞋(套)。（10）專用辦公用品。

（11）如需處理大分子DNA，應當具有超聲波儀。

3.擴增區的功能：cDNA合成、DNA擴增及檢測。配套用品一般應當包括：

（1）核酸擴增儀。（2）微量加樣器。（3）紫外消毒設備。

（4）消耗品：一次性手套、一次性帽子、耐高壓處理的離心管和 加樣器吸頭（帶濾芯）。（5）專用工作服和工作鞋。（6）專用辦公用品。

4.擴增產物分析區的功能：擴增片段的進一步分析測定。視檢驗 方法不同而定，基本配臵如下：（1）微量加樣器。（2）紫外消毒設備。

（3）消耗品：一次性手套、一次性帽子、加樣器吸頭（帶濾芯）。（4）專用工作服和工作鞋。（5）專用辦公用品。5.設備的維護保養

應當建立設備維護保養規程，計量設備應當定期檢定。例如核酸擴增儀、微量加樣器、生物安全柜、離心機應當每年進行檢定或校準工作。

（三）檢查工作流程及注意事項

1.進入各工作區域應當嚴格按照單一方向進行，即試劑儲存和準備區→標本制備區→擴增區→ 擴增產物分析區。

2.各工作區域必須有明確的標記，不同工作區域內的設備、物品不得混用。

3.不同工作區域的工作服應當加以區分，不得混用（例如可以采用不同顏色）。工作人員離開各工作區域時，不得將本區域工作服帶出。

4.實驗室的清潔應當按試劑貯存和準備區→標本制備區→擴增區→擴增產物分析區的方向進行。不同的實驗區域應當有其各自的清潔用具并防止交叉污染。實驗垃圾屬于醫療廢物的應當按《醫療廢物管理條例》相關規定進行處理。

5.工作結束后，應當立即對工作區進行清潔及消毒。6.貯存試劑和用于標本制備的消耗品等材料應當直接運送至試劑貯存和準備區，不能經過擴增檢測區。

試劑盒中的陽性對照品及質控品應當保存在標本處理區。試劑應當使用分子生物學級別試劑，使用的純化水應當高壓滅菌。質檢用于原輔料、半成品、成品檢驗用的PCR反應試劑應當有相應的質量標準及操作程序。

7.為避免樣本間的交叉污染，加入待測核酸后，應當蓋好含反應混合液的反應管。對具有潛在傳染危險性的材料，應當在生物安全柜內開蓋，并有明確的樣本處理和滅活程序。

8.應當避免氣溶膠所致的污染，盡量減少在擴增區內的走動，擴增反應管不得在擴增區打開。

9.擴增產物分析區有可能存在某些可致基因突變和有毒物質如溴化乙錠、丙烯酰胺、甲醛或放射性核素等，應當注意實驗人員的安全防護。

（四）檢查人員培訓情況

參與PCR檢驗工作人員應當具備相應的專業知識和技能，包括能熟練操作相關設備,明確整個工作的流程,掌握出現污染情況的處理方法以及實驗室質量控制方法和檢測結果的解釋。

檢查員可以通過詢問或要求企業實際操作的方式對其進行評價，也可以通過查閱生產企業的培訓記錄的適宜性和完整性對其進行綜合評價。

附件：理想的PCR檢驗實驗室設計 圖A 緩沖間為負壓的理想PCR實驗室設臵模式

圖B 緩沖間為正壓的理想PCR實驗室設臵模式

圖A和圖B所給出的PCR檢驗實驗室設臵圖應是較為理想的設臵模式，推薦有能力的參照此種模式設計。

第四篇：(北京市)PCR實驗室檢查要點

企業PCR檢驗實驗室布驗收注意事項

企業應當提供PCR實驗室設計方案和/或平面設計圖（應當標明風向或壓差梯度）。1.PCR檢驗實驗室與PCR產品生產區域應當在各自獨立的建筑物或空間內，保證空氣不直接連通，防止擴增時形成的氣溶膠造成交叉污染。

2.原則上PCR檢驗實驗室應當設置以下區域：試劑儲存和準備區、標本制備區、擴增區、擴增產物分析區，根據使用儀器的功能，區域可適當合并。若使用實時熒光定量PCR儀，且不需要進行后續產物分析工作，擴增區、擴增產物分析區可合并。若使用樣本處理、核酸提取及擴增檢測為一體的自動化分析儀，則標本制備區、擴增區、擴增產物分析區可合并。

3.各區域在物理空間上應當完全相互獨立，各區域無論是在空間上還是在使用中，應當始終處于完全的分隔狀態。不應只是形式上的分區，不應一個區域嵌套一個區域。

4.各區域不應有空氣的直接相通。擴增區與擴增產物分析區各區域宜采用獨立直排方式出風。

采用空調機組方式的，PCR實驗室應當具備獨立空調機組；同時應當考慮停機后各房間空氣連通的可能性，采取必要的控制措施。

5.按照試劑儲存和準備區→標本制備區→擴增區→擴增產物分析區方向空氣壓力應當以遞減的方式進行，使得PCR檢驗實驗室的空氣流向應當按照試劑儲存和準備區→標本制備區→擴增區→擴增產物分析區方向進行，防止擴增產物順空氣氣流進入擴增前的區域。

空氣流向應當為單向，禁止下游污染上游。應當設置合理的壓差梯度，并安裝壓差監測裝置，以有效證明空氣流向，壓差梯度不宜低于5帕。

6.設置緩沖間的，緩沖間內通向內實驗室和走廊的門應當安裝連鎖裝置或采取相應措施，避免出現兩個門同時打開的情況。

7.試劑和標本通過機械連鎖不銹鋼（不建議使用電子連鎖方式）傳遞窗傳遞，保證試劑和標本在傳遞過程中不受污染（人物分流）。若設置傳遞窗，應當為雙側開門，要求密封嚴實，并且兩側的門應當為互鎖裝置或采取相應措施保證兩側門不會同時開啟。

理想的PCR實驗室布局圖：

8、潔凈實驗區的緩沖間部分面積不能超過主實驗室的八分之一,這是有規定的。

9、在實驗區的外墻上和各扇門上都安裝有風量可調的回風口，空氣通過回風口向室內換氣。

10、主體為彩鋼板、鋁合金型材。室內所有陰角、陽角均采用鋁合金50內圓角鋁，從而解決容易污染、積塵、不易清掃等問題。結構牢固，線條簡明，美觀大方，密封性好。

實驗室的墻體，包括頂棚，應結構牢固、氣密性好；所有陰角宜采用圓弧形線條過渡；墻體內壁光潔、不吸附、耐腐蝕、易清洗消毒；地面材料應滿足無縫隙、無滲漏、光潔、耐腐蝕的要求。

11、在三個實驗區和三個緩沖區頂部以及傳送窗內部安裝有紫外燈，供消毒用。在試劑準備區和標本制備區 還設置移動紫外線燈，對實驗桌進行局部消毒。天津市臨床檢驗中心需按照《醫療機構臨床基因擴增檢驗工作導則》對醫療機構臨床基因擴增檢驗實驗室的檢驗質量適時進行督查，并將檢查結果上報衛計委。

第五篇：PCR實驗室檢查要點(2016)

聚合酶鏈反應（PCR）檢驗實驗室

檢查要點指南（2016版）

聚合酶鏈反應檢驗實驗室是指通過基因擴增的方式檢測特定的DNA或RNA的檢驗實驗室。聚合酶鏈反應（Polymerase Chain Reaction，PCR）是一種在體外特異性擴增靶DNA序列的技術，其基本過程為模板雙鏈DNA的變性、引物與模板DNA的退火和在DNA 聚合酶引導下的鏈延伸反應三個階段的多次循環。每一次循環后的擴增產物均可作為下一輪循環的模板，理論上，擴增產物量呈指數形式上升，即經過n個循環后，產物量增加到2n倍。PCR試劑操作簡單，短時間內在體外可獲得數百萬個特異靶DNA序列的復制，為臨床疾病的診斷、治療監測和預后評估提供了一種極有幫助的實驗室輔助手段。

PCR檢驗實驗室是PCR試劑生產企業在產品檢驗過程中不可缺少的工作環境，其環境控制水平和質量管理水平直接影響著最終產品是否合格，能否放行。由于該產品本身的特殊性，《醫療器械生產質量管理規范附錄體外診斷試劑》、《醫療器械生產質量管理規范體外診斷試劑現場檢查指導原則》條款中，明確對PCR試劑的生產和檢驗環境做出規定。此外現行衛生行業的法規、標準以及相關文獻中對于PCR檢驗實驗室均作出規定，主要涉及《全國臨床檢驗規程》（第三版）、《醫療機構臨床基因擴增管理辦法》（衛辦醫政發〔2010〕194號）、《醫療機構臨床基因擴增檢驗實驗室工作導則》及《臨床診斷中聚合酶鏈反應（PCR）技術的應用》（WS/T 230-2002）等行業標準的相關要求。本檢查指南旨在幫助北京市醫療器械監管人員增強對PCR檢驗相關過程的認知和把握，指導全市醫療器械監管人員對PCR檢驗實驗室設計建設與質量控制的監督檢查工作。同時，為PCR試劑生產企業在PCR檢驗實驗室的設計建造和管理要求提供參考。

當國家相關法規、標準、檢查要求發生變化時，應當重新討論以確保本檢查指南持續符合要求。

一、適用范圍

本檢查指南可作為北京市食品藥品監督管理局組織、實施的體外診斷試劑產品注冊質量管理體系現場核查、《醫療器械生產許可證》現場核查、醫療器械生產監督檢查等各項涉及PCR檢驗實驗室檢查的參考資料。

基因測序檢驗實驗室等涉及PCR試劑的相關部分應當參照本檢查指南執行。

二、檢查要點

（一）現場查看生產企業PCR檢驗實驗室布局

生產企業應當提供PCR檢驗實驗室設計方案和/或平面設計圖（應當標明風向或壓差梯度）。

1.PCR檢驗實驗室與PCR試劑生產區域應當在各自獨立的建筑物或空間內，保證空氣不直接聯通，防止擴增時形成的氣溶膠造成交叉污染。

2.原則上PCR檢驗實驗室應當設臵以下區域：試劑儲存和準備區、標本制備區、擴增區、擴增產物分析區。根據使用儀器的功能，區域可適當合并。若使用實時熒光定量PCR儀且不需要進行后續產物分析工作，擴增區、擴增產物分析區可合并。若使用樣本處理、核酸提取及擴增檢測為一體的自動化分析儀，則標本制備區、擴增區、擴增產物分析區可合并。

3.各區域在物理空間上應當完全相互獨立，各區域無論是在空間上還是在使用中，應當始終處于完全的分隔狀態。不應當只是形式上的分區，不應當是一個區域嵌套一個區域。

4.各區域不應當有空氣的直接相通。擴增區與擴增產物分析區各區域宜采用獨立直排方式出風。采用空調機組方式的，PCR檢驗實驗室應當具備獨立空調機組；同時應當考慮停機后各房間空氣連通的可能性，采取必要的控制措施。

5.按照試劑儲存和準備區→標本制備區→擴增區→擴增產物分析區方向空氣壓力應當以遞減的方式進行，使得PCR檢驗實驗室的空氣流向應當按照試劑儲存和準備區→標本制備區→擴增區→擴增產物分析區方向進行，防止擴增產物順空氣氣流進入擴增前的區域。空氣流向應當為單向，禁止下游污染上游。應當設臵合理的壓差梯度，并安裝壓差監測裝臵，以有效證明空氣流向，壓差梯度不宜低于5帕。

6.設臵緩沖間的，緩沖間內通向內實驗室和走廊的門應當安裝連鎖裝臵或采取相應措施，避免出現兩個門同時打開的情況。

7.各區間若設臵傳遞窗，應當為雙側開門，要求密封嚴實，并且兩側的門應當為互鎖裝臵或采取相應措施保證兩側門不會同時開啟。

（二）現場查看儀器設施配臵 1.試劑儲存和準備區的功能：貯存試劑的制備、試劑的分裝和擴增反應混合液的準備，以及離心管、吸頭等消耗品的貯存和準備。配套用品一般應當包括：

（1）溫度調控范圍為2℃～8℃和（或）-20℃以下冰箱；（2）混勻器；（3）微量加樣器；（4）紫外消毒設備；

（5）消耗品：一次性手套、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭；（6）專用工作服和工作鞋(套)；（7）專用辦公用品。

2.標本制備區的功能：核酸（RNA、DNA）提取、貯存及加樣。配套用品一般應當包括：

（1）溫度調控范圍為2℃～8℃和（或）-20℃以下冰箱；（2）高速離心機；（3）混勻器；

（4）水浴箱或加熱模塊；（5）微量加樣器；（6）紫外消毒設備；（7）生物安全柜；

（8）消耗品：一次性手套、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶 濾芯）；

（9）專用工作服和工作鞋(套)；（10）專用辦公用品；

（11）如需處理大分子DNA，應當具有超聲波儀。

3.擴增區的功能：cDNA合成、DNA擴增及檢測。配套用品一般應當包括：

（1）核酸擴增儀；（2）微量加樣器；（3）紫外消毒設備；

（4）消耗品：一次性手套、一次性帽子、耐高壓處理的離心管和 加樣器吸頭（帶濾芯）；（5）專用工作服和工作鞋；（6）專用辦公用品。

4.擴增產物分析區的功能：擴增片段的進一步分析測定。視檢驗 方法不同而定，基本配臵如下：（1）微量加樣器；（2）紫外消毒設備；

（3）消耗品：一次性手套、一次性帽子、加樣器吸頭（帶濾芯）；（4）專用工作服和工作鞋；（5）專用辦公用品。5.設備的維護保養

應當建立設備維護保養規程，計量設備應當定期檢定。例如核酸擴增儀、微量加樣器、生物安全柜、離心機應當每年進行檢定或校準工作。

（三）現場檢查工作流程及注意事項 1.進入各工作區域應當嚴格按照單一方向進行，即試劑儲存和準備區→標本制備區→擴增區→ 擴增產物分析區。

2.各工作區域必須有明確的標記，不同工作區域內的設備、物品不得混用。

3.不同工作區域的工作服應當加以區分，不得混用（例如可以采用不同顏色）。

4.實驗室的清潔應當按照試劑貯存和準備區→標本制備區→擴增區→擴增產物分析區的方向進行。不同的實驗區域應當有其各自的清潔用具并防止交叉污染。實驗垃圾屬于醫療廢物的應當按照《醫療廢物管理條例》相關規定進行處理。

5.工作結束后，應當立即對工作區進行清潔及消毒。6.貯存試劑和用于標本制備的消耗品等材料應當直接運送至試劑貯存和準備區，不能經過擴增檢測區。應當對加樣吸頭、PCR反應管等消耗品處理，防止污染。試劑盒中的陽性對照品及質控品應當保存在標本處理區。試劑應當使用分子生物學級別試劑，使用的純化水應當高壓滅菌。質檢用于原輔料、半成品、成品檢驗用的PCR反應試劑應當有相應的質量標準及操作程序。

7.為避免樣本間的交叉污染，加入待測核酸后，應當蓋好含反應混合液的反應管。應當注意PCR反應液加樣的順序，應當為空白樣品→陰性對照→樣品→陽性對照。對具有潛在傳染危險性的材料，應當在生物安全柜內開蓋，并有明確的樣本處理和滅活程序。8.應當避免氣溶膠所致的污染，盡量減少在擴增區內的走動，擴增反應管不得在擴增區打開。

9.擴增產物分析區有可能存在某些可致基因突變和有毒物質如溴化乙錠、丙烯酰胺、甲醛或放射性核素等，應當注意實驗人員的安全防護。

（四）現場檢查人員培訓情況

參與PCR檢驗的工作人員應當具備相應的專業知識和技能，包括能熟練操作相關設備,明確整個工作的流程,掌握出現污染情況的處理方法以及實驗室質量控制方法和檢測結果的解釋。

檢查人員可以通過詢問或要求人員實際操作對其進行評價，也可以通過查閱人員培訓記錄，對其進行評價。

（五）現場檢查文件情況

在檢查過程中應當特別注意現場查看、詢問、記錄的實際情況與生產企業的文件規定、記錄的符合性。

附件：

理想的PCR檢驗實驗室設計

圖A 緩沖間為負壓的理想PCR檢驗實驗室設臵模式

圖B 緩沖間為正壓的理想PCR檢驗實驗室設臵模式

圖A和圖B所給出的PCR檢驗實驗室設臵圖是較為理想的設臵模式，建議企業參照此種模式設計并建立實驗室。

參考資料：

1.《關于發布醫療器械生產質量管理規范的公告》（國家食品藥品監督管理總局公告2014年第64號）

2.《關于發布醫療器械生產質量管理規范附錄體外診斷試劑的公告》（國家食品藥品監督管理總局公告2015年第103號）

3.《關于印發醫療器械生產質量管理規范現場檢查指導原則等4個指導原則的通知》（食藥監械監〔2015〕218號）

4.《生物安全實驗室建筑技術規范》（GB50346-2004）5.《實驗室生物安全通用要求》（GB19489-2008）

6.《臨床診斷中聚合酶鏈反應（PCR）技術的應用》（WS/T203-2002）7.全國臨床檢驗操作規程[第3版]，中華人民共和國衛生部醫政司，2006年11月2日

8.Setting Up a PCR Laboratory—Theodore E.Mifflin，Department of Pathology, University of Virginia, Charlottesville, Virginia 22908 9.Establishment of PCR laboratory in developing countries—World Health Organization[SEA-HLM-419]