第一篇：癌癥檢測新方向-液體活檢

液體活檢介紹

在我國癌癥篩查結果中，只有20%是早期，80%的癌癥查出來都是中晚期了，而這20%的癌癥早期還是體檢查出來的。”眾所周知，癌癥越早發現治愈率越高，但患者缺乏相應的篩查手段，體檢得來的報告結果，其靈敏度和準確度都相對較低。如今在美國，一種被稱為液體活檢的檢測方法正開始興起，為一些病人省去了手術活檢和穿刺活檢，這兩種活檢是長期需要來指導病人癌癥治療的。目前國內也有一些生物公司在研發液體活檢技術----只需抽取6~8ml血，就能篩查是否患有6大常見癌癥（肺癌、胃癌、食管癌、肝癌、大腸癌、乳腺癌），準確率超過80%，花費約2000～3000元。

液體活檢是什么？真的像宣傳的那么有效么？

液體活檢作為體外診斷的一個分支,是指一種非侵入式的血液測試,能監測腫瘤或轉移灶釋放到血液的循環腫瘤細胞(CTC)和循環腫瘤DNA(ctDNA)碎片,是檢測腫瘤和癌癥、輔助治療的突破性技術。

它的優勢在于能解決精準醫療的痛點,通過非侵入性取樣降低活檢危害,而且有效延長患者生存期,具有高性價比。液體活檢技術主要包括CTC 和ctDNA，以及外泌體檢測。

基因突變是腫瘤產生發展的重要原因，幾乎所有癌癥患者都攜帶有DNA突變，這些突變只存在于腫瘤細胞而不存在于正常細胞，因此為腫瘤組織的檢測與跟蹤提供了方便的特異性生物標記。種類繁多的突變位點及基因型也為腫瘤的精確診療提供了必要的信息。

1.液體活檢尚不能用于腫瘤早篩。早篩是指對腫瘤的預測，以及早期腫瘤的檢查。因為只有當腫瘤生長到一定階段后，CTC或者ctDNA進入血液，才能通過液體活檢的方式檢測出來。而此時，腫瘤往往已經生長到一定規模，不再是早期腫瘤了。

2.液體活檢技術不是傳統檢查的替代技術。腫瘤的初步診斷、確診和療效評估，應該根據實際情況，結合影像、腫瘤標志物和液體活檢等檢查方式綜合判斷。液體活檢在一定程度上解決了傳統技術的部分局限性，但尚不足以替代傳統檢測技術。

一、液體活檢介紹

1.循環腫瘤細胞（circulating tumor cells,CTCs）

循環腫瘤細胞（circulating tumor cells,CTCs）是游離于血液循環系統中的腫瘤細胞，來源于原發腫瘤組織，是腫瘤細胞轉移的重要方式，也是腫瘤患者術后復發的重要原因，同事還是激發癌癥致死機制的重要因素。CTC作為腫瘤細胞，不僅包含腫瘤的DNA信息，同時還包含基因組、蛋白質組等信息，是研究腫瘤組織信息的豐富來源。（1）二代CTC檢測技術 1.密度梯度離心

可將CTC與紅細胞白細胞分離，根據不同密度沉降在不同區間而進行分離。目前市場上有較多的這種類型的試劑盒，Ficoll-paque solution（Pharmacia Fine Chmeicals，Sweden），OncoQuick等。2.過濾法

依據CTC體積大雨血細胞的特性，對CTC進行捕獲。CTC的直徑約為10~20um，而血細胞大小為7~12um，通過過濾，留下體積比較大的CTC.隨著對CTC研究深入，發現很多CTC與白細胞大小類似甚至只有它一半或者更小。這些小或者超小CTC的數目比例在某些腫瘤中可高達三分之一。3.微控流芯片

針對CTC的體積和可變形性對CTC進行捕獲，CTC的捕獲率和特異性可達到80%以上。不僅能夠檢測CTC的數量，而且可以分離活細胞進行其他分析，是未來CTC檢測的發展方向，微流控芯片內CTC的分選富集方法主要分為生物化學方法和物理分離法。生物化學方法指的是選擇特異性抗體對細胞表面表達的標志物進行特異性的抗原抗體吸附，達到分選的目的，物理法主要應用外力場（電、磁場、流體場、超聲波等）基于細胞間的物理特性差異（大小、變形性、密度、介電性等）進行分離。4.其他分離方法

核心原理還是利用CTC免疫學和物理學特性，但是缺乏臨床數據驗證。（2）CTC臨床應用

1.輔助診斷。主要是在常規手段無法對早期腫瘤進行判斷時進行。

2.療效評估。癌癥患者進行化療、靶向治療后進行CTC檢測，若CTC數量減少，則提示治療方式可能有效，相比于現階段的CT、MRI等檢查手段，CTC檢測技術操作更方便，應用更簡單，可以更及時地提示醫生該患者是否適合化療或者靶向治療。

3.術后監測。以肺癌為例，肺癌患者手術后約50%可能復發，術后監測非常重要，目前主要監測手段是3或6個月進行CTC檢查，因活檢無法高頻次檢查，而CTC可以克服這個缺點，及時檢測血液中CTC的變化，在癌癥發生的早期就及時進行治療，能提高患者存活率。

2.血漿游離腫瘤DNA(Cell-Free' Circulating Tumor DNA，ctDNA)

ctDNA:是指人體血液循環系統中不斷流動的攜帶一定（包括突變、缺少、插入、重排、拷貝數異常、甲基化等）來自腫瘤基因組的DNA片段。CtDNA的主要來源包括：1.來自壞死的腫瘤細胞 2.來自凋亡的腫瘤細胞 3.循環腫瘤細胞 4.來自腫瘤細胞分泌的外排體。

cfDNA最成熟的應用是NIPT（無創產前基因檢測），抽取孕婦靜脈血分析胎兒游離的片段DNA，判斷胎兒患唐氏綜合征（21、18、13三體綜合征）的概率。已經是國內常見的優生優育篩查手段。

對ctDNA的分析包括定性和定量的分析，其中定性分析包括檢測基因突變、缺失、插入、融合、重排、拷貝數變異、甲基化、微衛星不穩定（MSI）和雜合性缺失（LOH）等，定量分析就是計算ctDNA在血液中實時的含量，定性和定量均可反應腫瘤的存在和嚴重程度。理論上說，一個細胞含有約6~7pg的DNA,1ml血能提取10ng游離DNA,相當于來自約2000~3000個凋亡細胞的DNA量，但是一般情況下只占整個循環DNA的1%，甚至0.01%。因此，這對DNA的檢測技術提出了比較高的要求。目前國內外均沒有成熟產品，主要有兩個方向：一是應用測序技術直接獲取ctDNA序列信息，另外利用DNA擴增技術（PCR）檢測包含特定序列的ctDNA的濃度。

ctDNA的技術發展可以預測向著高精度和高通量的方向發展。NGS由于其價格因素，未來還是用于研發，所以最新的研究都集中在富集靶向DNA,將富集后的DNA做深度測序可以大幅度降低成本，但是如何高效準確的富集目的DNA序列仍舊是ctDNA檢測的瓶頸。所以還是處于前期發展階段，離真正走向臨床還有一段距離要走。3．外泌體

外泌體（exosome）是細胞分泌出的小泡，小泡中包含蛋白質、DNA、信使RNA以及一些非編碼RNA，是細胞之間溝通的載體，研究發現這些外泌體與腫瘤的發生、發展、轉移以及抗藥性具有一定的相關性。腫瘤細胞以這些小泡為載體幫助其逃過免疫系統的監視，這些小泡一方面給腫瘤細胞的轉移指引方向，另一方面也創造適合腫瘤生長的微環境。

外泌體攜帶的信息多樣化。其中的蛋白質和核酸，均可用于癌癥的早診、復發監測、抗藥性監測等相關方面的分析。而且外泌體在數量上多于CTC,更容易富集，在形式上分泌小泡能夠有效保護核酸類物質，克服了ctDNA在血液中易降解的問題，在臨床應用上有廣泛前景。但是外泌體的研究尚處于臨床早期，參與公司較少。4．液體活檢技術比較

二、市場現狀

癌癥液體活檢作為基因測序產業下的一個細分領域，與基因測序有著非常相似的產業鏈模式。現有基因測序產業鏈分為上游儀器與耗材生產銷售企業，中游檢測服務提供企業，以及下游數據分析企業，由于單純提供測序服務技術門檻不高、競爭激烈，導致中游測序服務企業利潤微博。故國內大多數有能力的測序服務公司都自行提供結果分析服務，在腫瘤基因檢測領域更甚。基因測序公司提供的腫瘤檢測報告幾乎都會提供相關的基因突變位點分析，供醫生參考，因此，腫瘤液體活檢產業鏈可以劃分為上游器械耗材企業和中下游監測分析企業。上游企業的核心競爭力是技術。提供核心技術的CTC分析儀、數字PCR儀、二代測序儀及配合使用的試劑盒關鍵技術掌握在國外幾個公司手里，而且技術壁壘較高，專利保護嚴格，這幾個國外大公司相當于壟斷瓜分大部分市場。在國內基因測序行業中，國外儀器提供商的議價能力很強，為擺脫這種影響，部分國內公司奮發圖強，嘗試自主研發儀器耗材或者通過重組并購上游企業。已有幾家國內公司通過并購實現二代測序儀的生產。但在比拼核心技術方面，國內“山寨版”性能與同功能的國外版性能有不小的差距，而且國內產品同質化嚴重，競爭激烈。

目國內的腫瘤液體活檢也綁上了火箭般的速度發展。據不完全統計，自2012年以來成立做二代測序的公司都達到了200多家，而開展腫瘤液體活檢多數采用二代測序技術對ctDNA進行分析。所以液體活檢初期發展階段，在腫瘤組織活檢市場上有強勢銷售地位的公司如若緊跟CTC、ctDNA的潮流，發揮原有市場的作用，對其進行部分產品替代，即可快速搶占液體活檢市場份額。即誰有渠道進入醫院就能占山為王。

中下游企業的競爭點除了銷售渠道，就剩下數據解讀分析能力了。樣本量越大、信息越全面來源數據越可靠的數據庫必定更受市場青睞。國內的基因測序公司都在積極積累自有數據庫并優化基因數據的解讀分析能力，但都沒有形成絕對優勢，行業標準也有待建立。

三、審批制度

在美國的醫療器械拿到臨床準入有“雙通道制”，第一是可以通過FDA認證，拿到臨床準入，產品可以在市場上推廣和銷售；二是獲得CLIA認證的實驗室，可以實現臨床實驗室的消費級和科研應用。CLIA實驗室能夠根據市場的現實需求，快速地開發實驗室自建項目，并通過在臨床上的應用給與可靠的臨床指導。CLIA認證解決了基礎研究和臨床應用之間低效率轉化甚至脫節的問題，對轉化醫學和研究成果轉化有非常重要的意義。美國大部分液態活檢公司都是走CLIA認證而非FDA認證。國內也借鑒這種方式來規范基因檢測公司的競爭。國內的基于基因檢測的液態活檢項目進入臨床也實行雙重監管，所有儀器設備，試劑歸CFDA報批管理，臨床實驗室歸屬衛計委這與美國CLIA認證制度類似，即要求試點單位內部有嚴格的質量控制，并且相關工作人員需經培訓合格上崗，則不受CFDA對儀器和試劑的注冊限制。未來ctDNA的發展將會嚴重依賴渠道資源及疾病樣本資源，且CFDA對產品臨床資質的管理也將越來越嚴格，未來 ctDNA公司最可能的業務模式為：

①國家批準的臨床應用試點單位自行進行臨床實驗，類似于美國CLIA實驗室；

②不具有試點資格的企業通過與醫院合作，獲取醫院外包服務資質，但以科研服務為主； ③不具有試點資格的企業通過與醫院合作，自行進行診斷試劑盒報批，并把產品投向醫院。值得注意的是，目前獲得批準的臨床試點單位數量較少，對應的樣本量也受限，在大量ctDNA公司激烈競爭市場蛋糕的情況下，獲得入場券、保證渠道及樣本優勢將會非常關鍵。所以，技術、渠道資源在ctDNA領域依然缺一不可。

四、國家政策支持

從精準醫療概念的提出，國家就制定了一系列戰略計劃積極鼓勵以DNA測序為基礎的精準醫療。2015年3月科技部召開國家首次精準醫療戰略專家會議，提出在2030年以前投入600億元用于精準醫療。同月衛計委發布《國家衛生計生委醫政醫管局關于腫瘤診斷與治療項目高通量基因測序技術臨床應用試點工作的通知》，包括14家醫療機構和6家第三方檢驗實驗室。另外發布以腫瘤個體化治療、藥物代謝酶及作用靶點基因檢測的技術指南，旨在規范化推廣相關技術。2016年4月國家發展改革委員會下發了《關于第一批基因檢測技術應用示范中心建設方案的復函》正式批復27個省市發改委關于基因檢測技術應用示范中心的建設方案，從審批進度來看，未來示范單位的審批已經逐漸放開。這一系列政策的出臺顯示出政府對腫瘤基因測序從資金到監管的全方位支持，也奠定了腫瘤基因測序的高端發展路線。

五、國內外液體活檢現有產品

六、液體活檢臨床應用方向、七、現狀及展望

2016年3月《第13屆中國肺癌高峰論壇會議》專家共識中也提到了關于液體活檢：

（1）本次頒布的共識，首先將共識的級別進行了分類，因為液體活檢屬于新生事物，在許多判斷上全球也沒有統一的標準，因此首先將共識級別進行分類，為未來共識的進一步升級奠定了基礎；

（2）共識二將液體活檢范圍擴大到了CTC、ctDNA和外泌體。隨著免疫治療對人群精準治療的需求，未來相信針對腫瘤特異性免疫細胞和相關基因組序列特征的檢測，用以展開免疫治療療效的評估會納入共識二的更新版本中；

（3）共識三提到NGS的優勢在于檢測多個基因變異，隨著一些靶點的復雜變異形式出現，期待未來的共識會從描述靶點轉為描述變異位點，單個變異位點可能使用傳統的檢測方式更加合適，而即使是單靶點遇到復雜變異形式（如無熱點突變），使用NGS更加合適；

（4）共識四提到NGS亦可用于研究探索，是其一個巨大優勢，相信未來結合其他液體活檢技術探索臨床預后和監測療效也會寫進共識；

（5）共識五非常全面的關注到了早期篩查和術后復發監測，且提到目前無論是CTC還是ctDNA用于早期篩查都都僅限于科研探索。由于技術的限制，目前的確存在證據不足問題。隨著時間進步，相信在2-3年內，不僅新的檢測技術會納入到共識五中，且應用也會進入臨床實踐級別；（6）共識六專家在2A級別共識了NGS檢測要平衡患者利益、倫理和科學探索之間的關系，這是目前精準醫療的一個重要特點，每個患者都是數據點，每個數據點都可能通過科學探索貢獻醫學和臨床，因此平衡好三者關系是推動精準醫療良性發展的重要基礎。

任何技術的臨床應用轉化都會經歷三個階段：1.技術性能指標的確認；2.臨床應用可行性的評估；3.臨床產品的轉化及落地。現階段，液體活檢技術整體還處于第一階段到第二階段的過渡中。液體活檢的內容包含cfDNA、CTC和外泌體，但其實技術成熟度、應用廣泛性、法規支持等方面有很大差異，目前在臨床實際應用中，ctDNA仍是目前最常用的液體活檢。而且，不論是NGS還是ARMS-PCR，目前應用較多的還是針對明確已知的體細胞突變進行靶向藥物治療的指導。對于多線治療失敗后無法取組織的患者進行液體活檢對于探索耐藥機制，進行療效監測。NGS相比傳統方法有巨大優勢。但是在技術尚未完善和標準化之前，野蠻生長的產業也許會帶來區域性的失控。

那么液體活檢走到臨床，還有哪些問題需要解決？（1）技術層面

一方面，CTC和ctDNA檢測手段有待進一步提高。CTCs僅少量存在于外周血，且異質性很大，所以CTC的分離技術還面臨著很多挑戰，目前尚未找到特異的CTCs的表面標志物，所以依賴表面標志物的分離策略難以避免假陰性的出現，多種生物、物理技術被用來分離CTCs，使得CTCs的得率有了很大的提升，但是不同技術的原理不同，導致分離得到的細胞也各異，對CTCs的認識還處于盲人摸象的階段，改進和規范化CTCs的分離技術顯得至關重要。目前ctDNA檢測常用驅動基因的檢測，如外周血EGFR突變檢測，盡管具有高的特異性，但是敏感性徘徊于50%~70%左右，成為ctDNA檢測臨床應用的瓶頸。

另一方面，基因突變、表觀遺傳學變化和基因差異表達是個體化診療的主要檢測目標。對應的檢測技術包括等位基因特異PCR、甲基特異PCR，芯片技術和NGS；其原理和技術參數均有不同。在臨床應用中，只有很好的將樣本類型與相關檢測技術相匹配才能獲得最優化的臨床產品。滿足可并行檢測體細胞基因單一位點突變、基因擴增和融合等多種突變類型，降低樣本用量。綜合分析當前常用技術不難發現，真正符合這一要求的技術并不多，如常用的等位基因特異PCR技術靈敏度在1～10%左右，可基本滿足腫瘤組織基因檢測的要求，但在基因突變豐度如此低的液體活檢樣本面前卻顯得束手無策；ddPCR技術靈敏度可以達到0.1‰，可以用于低豐度基因突變檢測，并已經成功應用于血漿EGFR檢測。但ddPCR只能對已知突變位點進行檢測，且不適用于融合基因。相比之下，NGS作為高通量的檢測技術優勢就顯得非常明顯；通過不斷的優化，已經出現靈敏度達到萬分之一的NGS檢測試劑盒。而且NGS可以同時檢測多種基因突變類型，包括體細胞突變、基因擴增和融合，可以對突變豐度低到0.02%的基因進行檢測，且特意性達到96%，因此非常適合對液體活檢進行基因檢測。第三，CTC和ctDNA的診斷價值還需要更多的研究去驗證。目前，CTC在臨床上的使用還局限在術后或晚期病人計量外周血中CTCs的數量，預測預后，CTCs在早期患者中的研究很少，所以CTCs能否用于實體瘤早期診斷還不明確；CTCs表現出很大的異質性，經歷了EMT的CTCs，它的表型和基因型是否能準確復制原發腫瘤，如何通過對CTCs的特點分析來指導個體化治療還有待進一步研究。同樣，明確EGFR-TKIs治療過程中ctDNA中敏感和耐藥基因的動態變化規律還需要更多的臨床數據； ctDNA是否能用于癌癥篩查還需要解決以下疑問：首先，增加檢出靈敏性的同時也增加了基因雜音的干擾，從而導致了假陽性的增加；其次，不是所有的癌癥都與離散的和一致的早期基因突變有關，很多癌癥在疾病的任何階段以意想不到的方式產生多種突變；此外，不是所有的腫瘤都會以相同的方式向血液中釋放ctDNA；最重要的是，任何新的診斷檢測必須經歷臨床驗證，這是常規獲批的必要步驟。（2）醫學倫理層面

尚不成熟的技術推向市場帶給大眾的是恐慌多于福祉。近年來，肺癌的流行病學譜已發生了遷移，不吸煙、年輕、女性患者比例逐年增高。原來單純以年齡和吸煙狀態作為危險因素定義的依據遠遠不夠。其次是如何取得早篩和過度診斷治療的平衡。如果我們窮盡各種檢測手段，仍然沒有發現可見腫瘤，是否需要對這部分人群進行后續的隨訪復查？篩查本身的并發癥，患者的精神憂慮和經濟負擔又如何衡量？

綜合來看，液態活檢應用前景廣闊，但是現階段更多處于科研探索階段，亟待大規模的臨床研究驗證。液體活檢可以作為組織活檢的補充。能應用到臨床上必須經過反復確認，并且是CFDA批準的試劑盒，必須嚴格區分臨床應用和臨床研究，對患者的安全負責。對于液態活檢產品靈敏度和特異性是最關鍵要考慮的因素。NGS將會得到廣泛應用，但是對數據的有效性分析將是一個不小的挑戰，對數據的解讀直接影響對患者預后判斷，需要進一步提高NGS數據分析。

第二篇：探究癌癥尿液檢測試劑

探究癌癥尿液檢測試劑

吉林生物研究院發明快速檢測癌癥的尿液檢測試劑

吉林生物研究院日前生產出一種可快速檢測癌癥的尿液檢測試劑，這種檢測試劑能在5分鐘內發現癌癥的早期跡象，從而為治療爭取更多時間。

吉林生物研究院的科研人員發表公報說，他們研發的這種檢測試劑可以從病人的尿液中找到消化系統類癌癥和其他癌癥的腫瘤標志物，與傳統檢測方法相比，其檢測結果更加準確，而且成本不高。腫瘤標志物是監測及追蹤癌癥發展的重要工具。

參與研究的人員介紹說，這種檢測方法操作方便，只需從被檢測者身上取5ml尿液即可，便可很快完成檢測，整個過程只需5-10分鐘。

研究人員認為，這種檢測方法目前可以投入實際應用，但仍需進一步對其完善的基礎上可以制造出更簡便快捷精準的癌癥診斷試劑。

第三篇：早期檢測可以揪出癌癥因子[最終版]

早期檢測可以揪出癌癥因子 2013-07-15 00:15:36 北京娛樂信報 發表評論

信報訊（記者閆崢）我國80%的癌癥患者確診時即屬于中晚期。昨天，記者獲悉，市疾控中心等共同啟動癌癥早早期檢測項目，希望更多的患者能通過早早期檢測揪出癌癥的苗頭。專家介紹，癌癥發展到晚期，5年生存率極低。晚期肺癌一般存活期只有1年，肝癌晚期出現黃疸和腹水存活期為1至3個月。就肺癌而言，如果能早期發現，手術后可以作為慢性病治療，存活幾年、十幾年沒有問題。而目前我國每年新發胃癌患者中，七成都是晚期患者；而在日韓，早期胃癌患者占85%。我國的癌癥治療能力并不低，一些大醫院的設備和診治水平已經接近發達國家，但癌癥防控的能力比較低。

記者了解到，90%的早期癌癥是沒有明顯癥狀的，許多人剛剛患癌時沒有任何感覺，等到癌癥發展到中晚期出現了疼痛、出血、明顯消瘦等狀況時才開始察覺并重視，這時去就醫，大多數患者已經失去了治愈的機會。想要早期發現癌癥只能依靠定期體檢，但健康體檢和防癌體檢是兩碼事。

據介紹，普通的健康體檢不包括腫瘤篩查，不能發現腫瘤的蹤跡及癌癥潛伏的隱患。近年來，市疾控中心和市預防醫學研究中心將科研重點放在癌癥的更早期檢測上，通過驗血發現包括肝癌、乳腺癌、食道癌、前列腺癌等十多種常見腫瘤的發生概率，并給予受檢者預防性建議，對腫瘤的早期防治提供超早期的預警。

據悉，目前國內已有部分公立醫院和第三方基因檢測機構開展類似的癌癥早期檢測項目，但價格比較貴。市疾控中心授權國藥陽光健康管理研究院在全國開展P53基因檢測后，檢查者的費用將明顯下降。

第四篇：液體乳中三聚氰胺的快速檢測 拉曼光譜法（KJ201908）

附件8

液體乳中三聚氰胺的快速檢測

拉曼光譜法

（KJ201908）

范圍

本方法規定了液體乳制品中三聚氰胺快速測定方法。

本方法適用于生鮮乳、滅菌乳、巴氏殺菌乳、調制乳和發酵乳等液態乳制品中三聚氰胺含量的快速測定。

原理

樣品經沉淀、溶劑提取，加表面增強拉曼試劑對信號增強，進行拉曼光譜掃描。以704±10cm-1處的拉曼特征峰作為三聚氰胺定量基準峰，以925±10cm-1或類似基質中穩定存在的拉曼峰為參比峰，根據三聚氰胺峰與參比峰的相對強度對三聚氰胺的濃度繪制標準曲線，內置儀器內進行判別。

試劑和材料

除另有規定外，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T

6682規定的二級水。

3.1

試劑

3.1.1

三氯乙酸。

3.1.2

三氯乙酸溶液（5%）：準確稱取三氯乙酸（3.1.1）50

g于1

L容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，混勻后備用。

3.1.3

表面增強試劑：金或銀納米粒子溶膠，或相當者。

注：表面增強試劑的參考配制方法：

納米金溶膠：取100mL0.01%氯金酸（AuCl3·HCl·4H2O）水溶液加熱至沸，劇烈攪拌下準確加入1.0mL

1%檸檬酸三鈉（Na3C6H5O7）水溶液，金黃色的氯金酸水溶液在2min內變為紅色，繼續煮沸15min，冷卻后用蒸餾水補加到100mL。增強試劑配制用水為GB/T

6682規定的一級水。

納米銀溶膠：取200mL1.0mM硝酸銀（AgNO3）水溶液加熱沸騰，劇烈攪拌下逐滴準確滴加5.0mL1%檸檬酸三鈉（Na3C6H5O7）水溶液，持續煮沸1h，溶液變為灰綠色，冷卻后用蒸餾水補加到200mL。增強試劑配制用水為GB/T

6682規定的一級水。

3.1.4

促凝劑：金溶膠的促凝劑：稱取5.85

g氯化鈉，溶于100

mL水中，搖勻，備用，或配制成其他相當的無機鹽溶液。銀溶膠的促凝劑：稱取5.85

g氯化鈉和2

g氫氧化鈉，溶于100

mL水中，搖勻，備用，或配制成其他相當的無機鹽溶液。

3.2

參考物質

三聚氰胺參考物質中文名稱、英文名稱、CAS號、分子式、相對分子質量見表1，純度≥99%。

表1

三聚氰胺中文名稱、英文名稱、CAS登記號、分子式、相對分子質量

中文名稱

英文名稱

CAS登錄號

分子式

相對分子質量

三聚氰胺

Melamine

108-78-1

C3H6N6

126.12

注：或等同可溯源物質。

3.3

標準溶液配制

三聚氰胺標準工作液（500

μg/mL）：精密稱取三聚氰胺標準品（3.2）適量，分別置于100

mL容量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為500

μg/mL的標準儲備液。于4℃避光保存，有效期1個月。

儀器和設備

4.1

便攜式拉曼光譜儀

穩頻激光光源：發射波長為785±1

nm，線寬<0.1

nm，能量≥250

mW；光譜分辨率≤15

cm-1；光譜響應范圍500

cm-1~2000

cm-1，或大于該響應范圍。

4.2

移液器：200

μL、1

mL和5

mL。

4.3

渦旋振蕩器。

4.4

離心機：轉速≥6000

r/min。

4.5

電子天平：感量為0.01

g。

4.6

塑料具塞離心管：2

mL。

分析步驟

5.1

試樣的提取

取0.5

g樣品加到2

mL離心管中，再加入1ml

5%三氯乙酸溶液，渦旋30

s混勻；放入離心機，以不低于6000

r/min轉速離心1

min；上清液備用。

5.2

測定步驟

5.2.1

拉曼光譜儀器參考條件

激光能量≥250

mW，數據采集時間≥2

s。

5.2.2

測定

在儀器樣品池中依次加入100

μL促凝劑，100

μL表面增強試劑，50

μL樣品（5.1），快速搖晃均勻，等待20

s檢測（檢測需在樣品加入后1

min內完成）。

5.3

質控試驗

每批樣品應同時進行空白試驗和加標質控試驗。

5.3.1

空白試驗

稱取空白試樣，按照5.1和5.2步驟與樣品同法操作。

5.3.2

加標質控試驗

準確稱取空白試樣10

g置于15

mL具塞離心管中，加入50

μL三聚氰胺標準工作液（500

μg/mL）（3.3），使三聚氰胺濃度為2.5

mg/kg，按照5.1和5.2步驟與樣品同法操作。

結果判定要求

儀器軟件將測試結果與標準譜圖庫中的三聚氰胺進行匹配計算，根據譜圖704

cm-1（±10

cm-1）處特征拉曼光譜及內置校準曲線，對樣品中的三聚氰胺進行結果判定：顯示測試結果并判定陰性或陽性。陰性代表該樣品不含有三聚氰胺或低于2.5

mg/kg，陽性則代表該樣品含有三聚氰胺且大于等于2.5

mg/kg。液態乳表面增強拉曼光譜圖參見圖1。

圖1

液態乳表面增強拉曼光譜圖

6.1

質控試驗要求

空白試樣測定結果應為陰性，加標質控樣品測定結果應為陽性。

性能指標

7.1

檢測限

2.5mg/kg。

7.2

靈敏度

靈敏度應≥99%。

7.3

特異性

特異性應≥85%。

7.4

假陰性率

假陰性率應≤1%。

7.5

假陽性率

假陽性率應≤15%。

注：性能指標計算方法見附錄A。

確證

本方法為初篩方法，當檢測結果為陽性時，應對結果進行確證。

其他

本方法所述納米表面增強試劑及促凝劑信息及操作步驟是為給方法使用者提供方便，在使用本方法時不做限定。方法使用者在使用替代試劑或操作步驟前，須對其進行考察，應滿足本方法規定的各項性能指標。

本方法參比標準為GB/T

22388-2008

《原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測方法》。

附錄A

快速檢測方法性能計算表

表A.1

性能指標計算方法

樣品情況a

檢測結果b

總數

陽性

陰性

陽性

N11

N12

N1.=N11+N12

陰性

N21

N22

N2.=N21+N22

總數

N.1=N11+N12

N.2=N21+N22

N=N1.+N2.或N.1+N.2

顯著性差異(х2)

c2=(|N12-N21|-1)2/(N12+N21),自由度（df）=1

靈敏度（p+，%）

p+=N11/N1.特異性（p-，%）

p-=N22/N2.假陰性率（pf-，%）

pf-=N12/N1.=100-靈敏度

假陽性率（pf+，%）

pf+=N21/N2.=100-特異性

相對準確度，%c

（N11+N22）/(N1.+N2.)

注：

a由參比方法檢驗得到的結果或者樣品中實際的公議值結果；

b由待確認方法檢驗得到的結果。靈敏度的計算使用確認后的結果。

N：任何特定單元的結果數，第一個下標指行，第二個下標指列。例如：N11表示第一行，第一列，N1.表示所有的第一行，N.2表示所有的第二列；N12表示第一行，第二列。

C為方法的檢測結果相對準確性的結果，與一致性分析和濃度檢測趨勢情況綜合評價。

本方法負責起草單位：江蘇省食品藥品監督檢驗研究院。

驗證單位：山東省食品藥品檢驗研究院、江南大學、四川省食品藥品檢驗檢測院

主要起草人：徐春祥、張淵、張征、顏春榮、胡明燕、劉麗強、姚歡

第五篇：2017年上半年廣東省造價工程師考試安裝計量：液體滲透檢測考試試題

2017年上半年廣東省造價工程師考試安裝計量：液體滲透

檢測考試試題

一、單項選擇題（共25題，每題2分，每題的備選項中，只有 1 個事最符合題意）

1、某工程本月按照預算價格應結算的工程款為1000萬元，已知本月人工單價較基期上漲了1.0%，人工費在總費用中所占比重為15%，材料價格上漲了20%，材料費在總費用中所占比重為40%，則本月應結算的工程價款是__萬元。A．1120 B．1050 C．1085 D．1095

2、有關道路等級及路面等級劃分，下列敘述正確的是（）。A．公路按等級劃分為快速路、主干路、次干路和支路 B．城市道路等級劃分為高速路、一、二、三、四級路 C．二級公路應采用高級或次高級路面 D．三級公路應采用中級路面

3、關于混凝土模板及支架拆除，說法正確的是（）。A．梁側模拆除時對混凝土強度無任何要求

B．拆模時應先拆除承重模板，后拆除非承重模板

C．后張法預應力構件的側模應在預應力鋼筋張拉前拆除 D．同種構件的底模拆除時對混凝土的強度要求相同

4、對于國家投資的項目，施工圖的建筑面積不得超過初步設計的（），否則必須重新報批。A．9.9% B．8.6% C．3.5% D．5%

5、某工作的總時差為3天，自由時差為1天，由于非承包商的原因，使該工作的實際完成時間比最早完工時間延遲了5天，則承包商可索賠工期最多是（）天。A．1 B．2 C．3 D．4

6、建筑物地下室所有墻體都應設置水平防潮層，其中一道設置在地下室墻附近，另一道設置的位置應當是（）。

A．室外地面散水以上150～200mm處 B．室內地坪以下60mm處 C．墊層與地面面層之間

D．室外地面散水以下150～200mm處

7、地下室應按（）外邊線所圍水平面積計算。A．外墻勒腳 B．外墻防潮層 C．外墻保護墻 D．外墻上口

8、采用綜合單價的工程量清單，將綜合單價與各分部分項工程的工程量相乘可以得到各分部分項工程的__。A．直接費 B．部分費用 C．全部費用 D．全部造價

9、地下污水處理場及城市水、電、氣、通信等公用設施。A．地表至-10m深度空間建設的地下工程。B．-30m～-10m深度空間內建設的地下工程 C．-30m以下建設的地下工程

D．一50m以下建設的深層開發建設工程

10、計算現澆混凝土樓梯工程量時，正確的做法是（）。A．以斜面積計算

B．扣除寬度小于500mm的樓梯井 C．伸人墻內部分不另增加 D．整體樓梯不包括連接梁

11、評標委員會提出書面評標報告后，招標人一般應當在__日內確定中標人，但最遲應當在投標有效期結束30個工作日前確定。A．5 B．10 C．15 D．20

12、空心墩按壁厚分為厚壁與薄壁，其中（）為厚壁。A．t/D≥1/10 B．t/D≥1/8 C．t/D≤1/12 D．t/D≤1/6

13、項目規模合理化的制約因素不包括__。A．投資因素 B．技術因素 C．市場因素 D．環境因素

14、為縮短總工期，應該采取措施縮短雙代號網絡計劃中（）。A．總時差最大的工作的持續時間 B．自由時差為零的工作的持續時間

C．關鍵線路上某一項或幾項工作的持續時間 D．所有非關鍵線路的持續時間

15、一棟四層坡屋頂住宅樓，勒腳以上結構外圍水平面積每層為930m2，建筑物頂層全部加以利用，凈高超過2.1m的面積為410m2，凈高在1.2～2.1m的部位面積為200m2，其余部位凈高小于1.2m，該住宅樓的建筑面積為（）m2。A．3100 B．3300 C．3400 D．3720

16、城市地下貯庫的布置，應處理好與交通的關系，對小城市的地下貯庫起決定作用的是（）。

A．市內供應線長短

B．對外運輸的車站、碼頭等位置 C．市內運輸設備類型 D．貯庫類型和重要程度

17、下列關于建設工程索賠程序的說法，正確的是__。

A．設計變更發生后，承包人應在28天內向發包人提交索賠通知 B．索賠事件在持續進行，承包人應在事件終了后立即提交索賠報告

C．索賠意向通知發出后的14天內，承包人應向工程師提交索賠報告及有關資料

D．工程師在收到承包人送交的索賠報告的有關資料后28天內未予答復或未對承包人進一步要求，視為該項索賠已被認可

18、以下屬于中級抹灰施工方法和施工工藝的是（）。A．三遍成活，陽角找方，一底層，一中層，一面層 B．兩遍成活，一底層，一中層，表面壓光 C．多遍成活，一底層，數中層，分層趕平D．兩遍成活，一底層，一面層，陽角找方

19、下列關于工程變更的說法中不正確的是__。A．工程變更總是由承包商提出的

B．工程師審批工程設計變更時應與業主及設計單位協商 C．工程的變更指令應以書面的形式發出

D．發生工程變更，若合同中有適用于變更工程的價格，則應以此價格計算變更工程價款 20、（）、墻梁和基礎梁等。A．抗風柱 B．排水槽 C．女兒墻 D．吸熱膜

21、信息分類體系必須考慮到項目各個參與方所應用的編碼體系的情況，項目信息的分類體系應能滿足不同項目參與方高效信息交換的需要，這體現了工程造價信息分類的__原則。A．穩定性 B．兼容性 C．可擴展性 D．綜合實用性

22、在FIDIC施工合同條件中，下列索賠事件，承包商不能得到經濟補償的是__。

A．修改設計 B．施工條件變化 C．傳染病導致的工期延誤 D．業主原因拖期

23、經濟等方面的專家不得少于成員總數的__。A．1/2 B．3/5 C．3/4 D．2/3

24、推行工程量（）模式，目的是適應我國建筑市場發展的要求和國際市場競爭的需要，逐步與國際慣例接軌。A．預算計價 B．動態計價 C．清單計價 D．靜態計價

25、材料和設備價格基礎的__就是“估算日期”。A．開始日期 B．結束日期 C．截止日期 D．中間日期

二、多項選擇題（共25 題，每題2分，每題的備選項中，有 2 個或 2 個以上符合題意，至少有1 個錯項。錯選，本題不得分；少選，所選的每個選項得 0.5 分）

1、工程的特點有__。A．大額性 B．動態性 C．復雜性 D．組合性 E．層次性

2、塔器類設備的半機械化吊裝機具主要包括__。A．絞磨 B．卷揚機 C．滑輪組 D．鋼絲繩

3、關于外墻磚砌體高度計算說法正確的有__。

A．有屋架且室外均有天棚者算至屋架下弦底另加200mm B．無天棚者算至屋架下弦另加 300mm C．平屋面算至鋼筋混凝土底板 D．有框架渠時算至梁底 E．坡屋面算至梁底

4、田近乎常壓的設備進行氨滲漏試驗，當達到試驗壓力后5min，試紙未出現__色為合格。A．紅 B．藍 C．黑 D．黃

5、庖工項目管理規劃的作用包括__。A．制定施工項目管理目標 B．規劃合同談判策略及目標 C．著眼于項目的全過程

D．對施工企業各相關部門進行績效評價

6、根據《工程造價咨詢單位管理辦法》的規定，下列表述中正確的是__。A．工程造價咨詢單位合并時，應交回原資質證書，重新申請資質等級 B．新開辦的工程造價咨詢單位只能申請乙級工程造價咨詢單位資質等級 C．工程造價咨詢單位資質年檢結論分為優良、合格和不合格三種 D．對于年檢不合格的工程造價咨詢單位，其限期整改時間為1年 E．工程造價咨詢單位停業半年以上時，應當辦理備案手續

7、空圈、暖氣包槽，壁龕的開口部分并入相應的工程量內的項目是__。A．石材樓地面 B．橡膠板樓地面 C．塑料板樓地面

D．現澆水磨石樓地面 E．菱苦土樓地面

8、閥門等需要拆卸的附件連接上。A．焊接 B．法蘭 C．熱熔 D．絲扣

9、高分子材料種類很多，工程通常根據機械性能和使用狀態將其劃分為__。A．塑料 B．玻璃 C．橡膠

D．合成纖維

10、下列關于建筑物的場地平整工程量的表述中錯誤的是__。A．按實際體積計算 B．按地下室面積計算

C．按基坑開挖上口面積計算

D．按設計圖示尺寸以建筑物首層面積計算 E．展開面積計算

11、硅酸鹽水泥的技術性質是其具體應用的主要依據，以下說法錯誤的是__。A．硅酸鹽水泥不宜用于海岸堤防工程

B．水泥的終凝時間指從加水拌和到水泥漿達到標號強度的時間 C．體積安定性是指水泥在硬化過程中體積不收縮的特性 D．水泥的凈漿強度是評定水泥強度等級的依據 E．水泥堿含量越低越好

12、不定型密封材料有下列的__。A．聚酯橡膠-PVC密封條 B．瀝青嵌縫油膏 C．聚氯乙烯接縫膏 D．自粘性橡膠 E．聚氨酯密封條

13、溫度、壓力及法蘭密封面的形式，可分為__。A．橡膠墊片 B．塑料墊片 C．金屬墊片 D．玻璃墊片

14、在吊裝用的索具中，常用的吊裝工具有__。A．繩索 B．滾杠 C．吊索 D．吊鉤

15、早強劑多用于搶修工程和冬季施工的混凝土。目前常用的早強劑有下列的__。A．硫酸鹽早強劑 B．三乙醇胺早強劑 C．引氣劑

D．氯鹽早強劑 E．復合早強劑

16、工程造價所具有的不同于其他商品的特點有__。A．大額性 B．連續性 C．差異性 D．層次性 E．同一性

17、燃氣工程中，人工燃氣按制取方法不同可分為__。A．干餾燃氣 B．裂化燃氣 C．氣化燃氣 D．天燃燃氣

18、在施工中較常用的球罐拼裝方法有__。A．分片組裝法 B．拼半球組裝法 C．環帶組裝法 D．拼大片組裝法

19、在下列方法中，__是控制成本的方法。A．網絡計劃圖 B．香蕉曲線圖 C．直方圖

D．S形曲線控制法 E．控制圖法

20、針對預應力筋的布置要點以下說法正確的是__。A．波浪形曲線

B．波浪形曲線曲率不宜過大 C．波浪形曲線曲率不宜過小

D．預應力筋的重心應盡可能地距離截面重心遠些 E．預應力筋的重心應盡可能地距離截面重心近些

21、噪聲的減弱與林帶的__有密切關系。A．樹木種類 B．配置方法 C．高度 D．位置 E．密度

22、項目組織結構中的層次包括__。A．決策層 B．經營層 C．協調層 D．執行層 E．操作層

23、下列情況屬于重大偏差的是__。

A．投標文件沒有投標人授權代表簽字和加蓋公章

B．投標文件載明的招標項目交代期限低于招標文件規定期限 C．明顯不符合技術規格、技術標準的要求 D．投標文件附有招標人不能接受的條件

E．投標文件在實質上響應招標文件，但個別地方存在漏項或者提供了不完整的技術信息和數據情況

24、某工程雙代號時標網絡計劃執行到第4周末和第10周末時，檢查其實際進度如下圖前鋒線所示，檢查結果表明（）。

A．第4周末檢查時工作B拖后1周，但不影響工期 B．第4周末檢查時工作A拖后1周，影響工期1周

C．第10周末檢查時工作I提前1周，可使工期提前1周 D．第10周末檢查時工作G拖后1周，但不影響工期

E．在第5周到第10周內，工作F和工作I的實際進度正常

25、低溫不脆裂、抗拉強度高、伸長率較大等優點的防水卷材有（）。A．SBS改性瀝青防水卷材 B．APP改性瀝青防水卷材 C．石油瀝青紙胎油氈 D．聚氯乙烯防水卷材 E．三元乙丙橡膠防水卷材