第一篇：invitrogen trizol rna抽提說明書

RNA抽提全過程(TRIZOL)

一，準備工作 1，實驗器具與材料：

（1）移液槍：1ml、200ul、10ul（2）吸頭：1ml、200ul、20ul

（3）吸頭臺：放置1ml吸頭的一個，放置200ul和20ul的吸頭一個（4）EP管1.5ml、100ul（5）玻璃研磨器（6）容量瓶：1000ml（7）鹽水瓶：100ml

（8）15ml塑料管一個（配75％乙醇用）

2，實驗器具的處理與準備

（1）塑料制品：（包括吸頭、EP管等）

將塑料制品逐個浸泡于1‰DEPC水中（必要時小槍頭需要用吸管打入DEPC水）37℃過夜，然后送至高壓3次，后在80℃烘烤箱中烘干（或置于37℃中8小時左右烘干），試驗前將槍頭放入吸頭臺。或直接購買經DEPC處理的槍頭和EP管,每盒大約30元,基本上試劑公司都可以購買。

（2）玻璃制品：（主要是玻璃研磨器）

先泡酸過夜，沖洗干凈后，在1‰DEPC水中泡8小時左右，37℃烘干，用蒙錫紙包裹送至干烤3次（或180度干烤）。（3）金屬制品：（鑷子等）

先洗干凈，再送干烤3次。（不需要泡DEPC水）3，試劑配制和準備：

（1）DEPC水：泡實驗器具的DEPC水的配制：1000ml雙蒸水中加1mlDEPC，放在1000ml容量瓶中靜置4小時后備用。配75％乙醇的DEPC水的配制：100ml鹽水瓶內裝40ml雙蒸水，加40ulDEPC，37℃過夜，送至高壓。

（2）75％乙醇（要在抽提時現配）：用無水乙醇和DEPC水配制（DEPC水:無水乙醇＝1:3），然后放于-20℃備用。（3）異丙醇：放入棕色瓶（4）氯仿：放入棕色瓶

（5）Trizol：100ml/瓶 存放于4℃

二，抽提時注意事項：

全程佩戴一次性手套和口罩，手套要勤換，避免戴上的一次性的手套接觸可疑污染物。

三，抽提步驟 1． 勻漿化作用

取約100mg鼠腦組織放于玻璃研磨器內，先加0.2ml的Trizol溶液，研磨組織后，倒入1.5mlEP管中，再在研磨器內加入0.8ml的Trizol溶液洗，后全部再倒入EP管中。顛倒混勻10下，室溫靜置5分鐘。2． 分離階段

每1mlTrizol中加0.2ml氯仿。蓋緊樣品管蓋，用手用力搖晃試管15秒，使其充分混勻，室溫靜置5分鐘。后12000rmp離心15分鐘。3． RNA的沉淀

將上層水相轉入新的1.5mlEP管中（約400-500ul），加入0.5ml異丙醇，混勻后放于-20℃中1小時，后12000rmp離心10分鐘。4． RNA的洗脫 小心倒掉上清，留取沉淀。加1ml現配的75%的乙醇（預冷）振蕩洗滌RNA沉淀一次，后7500rmp離心5分鐘。5． RNA的再溶解

小心倒掉上清，取沉淀置超凈工作臺開風機吹干（約30分鐘，此時RNA沉淀變透明）。注意不能讓RNA沉淀完全干燥（會極大地降低它地可溶性）。再在管中加20ul的DEPC水溶解，在55-60℃下孵育10分鐘助溶。6，RNA的保存

提取的RNA保存于-70℃超低溫冰箱中，或立即用于逆轉錄。

TRIzol法抽提總RNA

組織100mg ↓

加1mlTRIzol ↓

研磨，勻漿（研磨時倒入液氮，研磨完后從研缽轉入EP管中，）（組織勻漿量>100mg時分裝1ml/每EP管）↓

顛倒混勻10下，室溫5分鐘 ↓

加氯仿1/5體積（0.2ml）（必須按總體積的1/5）↓

顛倒混勻15S，室溫5分鐘 ↓

4℃，離心12000rmp，15分鐘 ↓

轉上層水相（約400-500μl）于另一新1.5mlEP管中（注意勿吸入中間那層）↓

加等體積異丙醇（約400-500μl）↓

4℃，離心12000rmp，10分鐘 ↓

棄上清 ↓

加冰預冷的75%乙醇（用高壓后的DEPC水配）1ml ↓

4℃離心7500rmp，5分鐘 ↓

棄上清，超凈工作臺開風機干燥約30分鐘（不能完全干燥）↓

溶于DEPC水中至50μl（此處可按照實際情況修改，有人用50，也有人用100）（可在55-60℃水中，<10分鐘助溶）↓

立即保存于-70℃超低溫冰箱中，或立即用于逆轉錄

RNA純度檢測及定量

從36μl中取6μl，用無RNA酶的水稀釋100倍至600μl，用DU70型分光光度儀分別測定樣品在260nm、280nm波長的光密度值，計算出RNA的濃度（μg/ml）。

純RNA樣品的A260/A280比值為1.7-2.1，若低于此值，表明存在蛋白質污染，需重新用酚/氯仿抽提。RNA樣品的A260/A230比值應大于2.0，若低于該標準，提示有變性緩沖液殘留需重新用乙醇沉淀RNA，然后用750ml/L的乙醇洗滌，以除去殘留的變性緩沖液。

RNA電泳

用無Rnase水配TAE電泳液，稱1.0g新開封的瓊脂糖，加TAE電泳液至100ml，煮沸，加溴乙錠20μl，降至室溫后灌膠置DEPC水處理過的電泳槽中，凝固20min，加TAE 緩沖液浸沒膠塊。取15μl RNA加6×RNA專用上樣緩沖液3μl，混勻，用移液槍將樣品加入上樣孔內，待溴酚藍遷移至理想位置后，終止電泳，紫外燈下觀察、拍照。

上傳RNA電泳條帶如下

最下面條帶代表5s 色淺代表RNA基本無降解

如出現拖把狀條帶 則為降解較嚴重情況

但有時這種情況也可以照樣RT－PCR

我們同學就有在低溫冰箱放了幾個月的組織照樣可以出結果的

第二篇：GSY—V型全自動瀝青抽提儀說明書

一、概述：

GSY—V型全自動瀝青抽提儀可對瀝青混合料的油石比進行快速準確的測定和分析，該設備集瀝青抽提和溶劑回收為一體，整個工作過程采用全自動控制，具有功能齊全，工藝先進，自動化程度高，操作簡便等優點，與傳統的抽提設備相比，工效提高20—30倍，是監測和控制瀝青路面施工質量必不可少的設備。

二、主要技術指標：

1、抽提容量：1000g—3000g

2、抽提精度：誤差（0.1%）

3、溶劑可循環反復使用：自動回收

4、工作環境溫度：+5℃——+50℃

5、電源電壓：380V±10% 220V±10%

6、功率：（總功率）：4KW

7、轉速：5000r—10000r/min

三、工作原理

試樣（瀝青混合料）置于篩網上層，箱內注入溶劑，啟動電源后，溶劑泵向篩網內沖入溶劑，篩內試樣中的瀝青混合料在篩的無極振動及溶劑沖洗下經過各級篩網，瀝青逐漸與礦料分離流入離心機，在離心力作用下，溶液中的礦粉附于離心機中離心杯的濾紙上，瀝青三氯乙烯溶液流入蒸發箱加熱后溶劑蒸發，冷凝后流回溶劑箱。

四、控制儀器操作

1、預置工作時間，一般情況下預置20分鐘，沖振和抽提根據需要分別為15秒循環工作。

2、接通冷卻水管。

3、以上操作完畢以后，打開各個開關，此時抽提儀進入自動工作狀態，當離心筒旋轉到最后停止時，取下篩網，取出離芯杯與盛有礦粉的篩網一起置于烘箱內烘干，以備稱量。離芯機停止后，溶濟的加熱和回收部份在繼續工作，待蒸發箱內瀝青混合液全部回收結束，關掉加熱開關，整機工作結束（注：抽提時，也可以當時不回收，待抽提結束以后，再設定所需的工作溫度，進行溶劑回收。）

五、儀器的使用與操作

（一）儀器的安裝與連接

GSY—V型瀝青抽提儀是較為精密的試驗儀器，儀器必須置于有頂面防護的房間或棚子中，距離墻壁100cm。

儀器底座放置好后，應該校正水平，然后才能放置蒸發冷凝箱，連結控制儀和冷卻水管，在確認出380伏及零線供電正常的情況下，將儀器接通電源。

（二）使用前的檢查

儀器在長途運輸和長時間不用，再度使用前首先進行必要的檢查和試運轉，確保安全第一，以防發生意外。

1、從溶劑孔注入三氯乙烯溶劑（約十公斤）。

2、檢查儀器工作是否正常：接通電源，啟動工作開關，再按沖振及抽提鍵，使控制部份進入工作狀態。

3、檢查離心杯運轉是否正常：按抽提鍵，此時離心機處于第一級轉速運轉，觀察其轉向，正常狀態下離心機按逆時針方向旋轉[與電機旋轉方向（箭頭方向）一致]。

4、檢查噴淋蓋內噴頭是否堵塞。

（三）試驗準備

1、取下篩網，按孔徑依次從小到大自下而上放好，將稱量過的瀝青混合料試樣放入最上層的篩中。

2、將整套篩網放在振動架的漏斗上，蓋上噴淋蓋，旋緊螺栓。

3、取出離心杯，沿順時針方向放入濾紙，稱其總重。

4、將稱量好的離心杯壓入離心筒內，蓋上離心蓋，放正振動器支架，旋緊手柄，將導流管插入離心蓋的中心孔內。

（四）油石比的計算

瀝青混合料中礦料的總質量由二部分組成。

ma=m1+m2 式中：ma——瀝青混合料中礦料的總質量（g）

m1——篩網中倒出的集料烘干后的質量（g）m2——離心杯濾紙試驗前后的增重（g）

瀝青混合料中瀝青質量為瀝青混合料總質量與礦料總質量之差。

mb =m-ma 式中：mb——瀝青混合料中瀝青質量（g）

m—瀝青混合料總質量（g）

ma——

瀝青混合料中的礦料總質量（g）

瀝青混合料的油石比，可由下式求得： pa=m-ma/ma×100% 式中pa——瀝青混合料的油石比（%）

六、注意事項

1、當瀝青抽提儀在抽提的過程中，因停電而中斷抽提時，不能帶載2次起動，否則會因離心杯中的礦粉，瀝青和三氯乙烯混合液引起重心偏移，損壞離心筒，因此抽提停電，必須清理試樣及離心杯，按新的試驗重新開始。

2、長途運輸時，要特別注意防震，儀器設備要分別裝入專用包裝箱，箱內墊以塑料泡沫或軟紙，四周填充密實，勿使之松動搖晃，裝卸車時小心輕放，不能碰撞，以確保儀器外表美觀，功能完好。

3、儀器二天以上不使用，要將蒸發箱的瀝青，三氯乙烯混合液和溶劑箱的三氯乙烯放出，分別存放在專用密封塑料桶內，以防對儀器腐蝕。

4、離心筒，離心機頂蓋二個部位的密封圈，每使用1次涂一次凡土林油。

5、由于安裝使用不當，或儀器設備發生故障會使試驗無法正常進行。如果儀器嚴重損壞必須交由有關人員檢修，一般故障往往可以經過簡單處理，即可使儀器各功恢復正常，因而熟悉儀器結構的原理，掌握一定的檢查和維修技術是較為必要的。

1、篩網

3、緊轉手柄

5、漏斗

7、溶濟盤

9、溶劑輸入管

11、冷凝箱

13、泄流閥（龍頭）

2、旋轉手柄

4、噴淋蓋

6、離心蓋

8、導流管

10、溶劑注入孔

12、液位計

第三篇：RNA抽提知識

RNA抽提

1：RNA抽提原理

簡單地講，RNA抽提包含樣品的裂解和純化兩大步驟。裂解是使樣品中的RNA游離在裂解體系中的過程，純化則是使RNA與裂解體系中的其它成分，如DNA、蛋白質、鹽及其它雜質徹底分離的過程。Trizol試劑的出現基本能解決絕大部分樣品RNA抽提，該方法已經成為了 RNA 抽提的主流。

2：了解你的實驗樣品

如果你研究某個實驗樣品，并且要抽提它的RNA，以下的信息一定要先行收集：該樣品的RNA含量、酶含量、特殊雜質含量。如果你對樣品的特點一無所知，當樣品稍微有一點復雜時，抽提RNA的實驗就會碰到許多問題。以血液為例，如果你不知道鳥的血液中有核細胞的含量是人血的千倍左右，而使用人血一樣的起始量去抽提鳥血的基因組 DNA，怎么可能成功？失敗了又怎么知道原因所在？同時，只有對實驗樣品有所了解，才能正確選擇抽提方法。但同時提醒的是：沒有信息是可怕的，更可怕的是將錯誤的信息當真的了。

3：實驗樣品量的取用

樣品與Trizol的比例。這個問題非常重要，應該獲得足夠的重視。Trizol的Protocol，提供了一個簡單的比例，1ml 裂解液可以用于 50-100mg 組織或5-10X106個細胞；我的建議是，樣品量絕對要小于資料所提供的。起始樣品用多大，并沒有具體的說法。如果不是樣品量有限，則以能抽提出滿足數次成功實驗所需的RNA，作為決定樣品起始量的基礎，會比較合理的。不要因為 1ml 裂解液可以抽提 100mg 樣品，就一定使用 100mg 樣品。裂解液的用量，表面上與抽提的結果(純度及得率)沒有關系，然而，在實際操作中，對結果是有比較大的影響的。裂解液的用量原則是：確保能徹底裂解樣品，同時使裂解體系中核酸的濃度適中。濃度過低，將導致沉淀效率低，影響得率；濃度過高，去除雜質的過程復雜且不徹底，導致純度下降。不同得樣品其RNA含量差別很大。高豐度(2-4ug/mg)的如肝臟，胰腺，心臟，中豐度(0.05-2ug/mg)的如腦，胚胎，腎臟，肺，胸腺，卵巢，低豐度(<0.05ug/mg)的如膀胱，骨，脂肪。考慮后續實驗，一般情況下，高豐度的樣品取用量大概是10-20mg/ml Trizol,中豐度樣品50mg/ml Trizol,低豐度樣品我們可以根據客戶提供的實驗樣品量酌情取用。重申一下，不是越多越好，在考慮樣品在1ml Trizol里能充分裂解的同時，還得考慮大量的樣品可能也會帶來大量的雜質！利用Trizol試劑抽提血清樣品時，Trizol /血清比值不要小于7/3。石蠟樣品由于RNA降解嚴重，含量大打折扣，所以取樣時應該按低豐度樣品原則取用。

3：裂解方法

裂解的目的就是破壞細胞的結構，釋放出里面的RNA，使其溶解于裂解液中。絕大部分樣品的裂解，比如凍存的細胞，心、肝、脾、肺、腎等，利用Trizol試劑，普通的勻漿方法就可以達到滿意的效果！但是如果碰到比較特殊的樣品，我們可能要附加一些其他的輔助手段。1）骨骼。骨骼組織質地堅硬，普通的勻漿器根本無法使其破碎，以致RNA不能完全釋放溶解在TRIZOL試劑中，碰到這種類型的樣品，我們必須先利用液氮把樣品破碎成粉末狀，Trizol懸浮混勻再利用Minibeadbeater勻漿5分鐘。取上清, 2000g 4℃離心5min再取上清 去沉淀。2）細菌 Trizol雖然對細胞的裂解效果出眾，但是對細菌堅韌的細胞壁還是無可奈何，這時我們可以利用超聲來輔助破壁。將細菌重懸于300ul的Trizol中，置于Bioruptor冰水浴中，M 檔 30s “on”、30“off”超聲處理1—2 min.取出用Trizol將體積補至1ml。3)酵母 酵母細胞跟細菌一樣，還是因為細胞壁的原因，不能充分裂解。Zymolyase在37℃ 40分鐘可以很好的消化掉酵母細胞壁，這里需要提醒的是消化緩沖液不能有外源性RNA酶污染，最好附加使用RNA酶抑制劑，做好了這點就不用擔心這步有RNA降解的問題。4）石蠟包埋樣品 石蠟包埋的組織樣品在加Trizol裂解前必須先脫蠟，脫蠟的效果直接影響后續實驗，所以我們為使脫蠟充分，選用高溫脫蠟與二甲苯脫蠟相結合的兩步脫蠟法。脫蠟后加入Trizol勻漿。5）脂肪 脂肪組織可以直接用Trizol 勻漿，這里需要提醒的是脂肪組織勻漿后，需室溫靜置5min，再室溫7500g 離心5分鐘，去除上面的脂肪層再繼續后續實驗！

4：分相

Trizol里含有的物質之一“酚”去除蛋白質是有一定的飽和度的。超過了該飽和度，裂解體系中的蛋白質不會被一次去除，裂解勻漿后的樣品，按1ml Trizol 加200ul 的氯仿，震蕩離心，絕大部分樣品在這一步是不需要用特殊方法對待的，但對于蛋白含量比較高的組織樣品必須要二次抽提，甚至多次抽提方可徹底去除。這里要著重提到的是血清樣品！離心分相后，取上清這一步是分相實驗的操作難點，一定要謹慎，萬不可混入有機相污染，原則是寧缺勿濫！

5:異丙醇的沉淀

異丙醇的沉淀，目的是使RNA從裂解體系中沉淀下來，從而實現RNA與其它雜質 – 主要是鹽 – 的分離。實際操作中，有的雜質也會與RNA一起被醇沉淀下來，尤其是當其它雜質的濃度也比較高的時候。異丙醇的沉淀并不是非常特異性的，有機大分子及一些鹽，當濃度達到一定水平后，都可能同步被沉淀下來。在不影響后續實驗的情況下，我們是可以忽略這些鹽污染。有些實驗樣品，由于前期用藥物或某種方法處理過，導致會殘留有一些特殊的雜質，之所以殘留，往往是因為這些雜質與RNA有一些相似性：你沉淀我沉淀，你吸附我吸附。這些特點決定了它們往往是非常強的酶抑制劑，對后續實驗影響非常大。這里介紹有幾種方法除去這些雜質：1）TRIzol 提供的一個沉淀方案：一半異丙醇加一半高鹽溶液替代純粹的異丙醇，可以大大降低多糖殘留。2）介質純化：遇到一些與RNA共同沉淀下來且影響后續實驗的一些雜質，可以利用BioMag公司提供的連有 Oligo dT的磁珠純化出總RNA中的mRNA，這個方法優點是基本能解決絕大多數有雜質污染的總RNA（目前沒有遇到這種方法處理不了的），缺點是成本比較高。對與RNA含量少的樣品，直接異丙醇沉淀得率會很低，而且基本看不見沉淀物，這也會給后續的操作帶來很大的麻煩，進一步損失RNA。遇到這種情況我們可以使用一種媒介(Golycogen)跟RNA共同沉淀下來，這種媒介物質既能很好的跟RNA共同沉淀下來，又不會影響后續實驗。不要迷信試劑說明書里的標準方法；有時，使用標準方法碰到問題在標準方法中是找不到答案的，要具體問題具體分析。

6：洗滌

洗滌注意四點：首先一定要將沉淀懸浮起來；第二就是要有一定的時間，尤其是當RNA沉淀比較大時 ；第三是少量多次；第四則是去上清要徹底。在異丙醇沉淀后，絕大多數時是能看見管底的白色沉淀，但還是有時候是看不見的，即使是加過Golycogen的。遇到這種情況不要慌，沒看見不等于沒有，遇到這種情況可以先用移液器小心的吸去上清，注意槍頭不要碰到管壁。加入75%乙醇，上下顛倒幾次，短暫離心后用移液器吸去上清，同時仔細觀察管壁是否有掛液。如果有，那沒問題，可以確定沉淀都附在管壁上了。

7：RNA的溶解和保存

純化后的RNA溶解以水為主，用無Rnase酶的水溶解的RNA基本上還算穩定，其穩定與溫度成反比，與濃度成正比。所以抽提好的RNA應盡快保存在-70℃，避免反復凍融，同時注意不要把濃度稀釋的太低，大概保持在1000ng/ul。如果溫度合適，保存中RNA發生降解或者消失，其原因應該是酶殘留導致的酶解。

8：RNA質量的檢測問題

將抽提好的RNA直接用于后續的實驗，是唯一可靠的檢測方法；除此之外的檢測方法，都是相對的，不可全信。目前實驗室用于正式實驗前檢測RNA質量的方法，一是電泳，二是NANO-Drop。電泳檢測的主要是RNA的完整性和大小，該方法還是比較可信的；同時電泳還可以用于估計核酸的濃度，其準確度與經驗有關；另外，電泳也可能提供某些雜質污染的信息，但是同樣與經驗有關。NANO-Drop檢測的是純度和核酸含量。然而，由于NANO-Drop不能確保非常準確，所以，提供的結果并不十分可信。一般講，同時進行NANO-Drop檢測和電泳檢測，綜合二者的結果，可以做出一個更合理的判斷。但由于這兩個方法都有缺陷，所以，即使出現壞的結果能用于后續實驗而好的結果卻不能用于后續實驗，也不用大驚小怪。（A260/A280 比值低 – 蛋白質殘留但更可能是苯酚殘留。A260 值提示的含量與電泳檢測時提示的含量有可見的誤差可初步判斷是苯酚殘留。）

第四篇：TRIpure Reagent總RNA抽提試劑操作方法及步驟說明書

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TRIpure Reagent

TRIpure Reagent總RNA提取試劑

目錄號：RN01 ? 試劑盒組成、儲存、穩定性： 試劑盒組成

TRIpure（4℃避光）

(RN0101)50 ml

(RN0102)

ml ? 儲存事項：

TRIpure 在室溫下能穩定保存12個月。盡管如此，為達到最佳效果，我們建議保存在2~8°C的環境下。

? 重要提示：

本品中含有苯酚，具有毒性和腐蝕性。如果吸入體內、接觸皮膚、吞食等會導致中毒、灼傷以及其他身體傷害。使用本制品時應穿戴防護物品，如防護服裝、手套、眼罩、面罩等。如果不小心接觸，應立即用大量的水沖洗并前往醫院治療。

? 1.注意事項：

樣品用TRIpure勻漿后，如果不即刻加入氯仿之前，置于-70°C下可放置一個月以上。保存在75%乙醇中的RNA沉淀，2-8°C可以保存一周，-20°C條件下可以保存1年。RNA半衰期比較短，容易降解，建議提取后盡快進行后續實驗，如反轉錄成cDNA，Northern Blot等。

2.若下游實驗對DNA非常敏感，建議用 RNase free DNase I（貨號：RN45）對RNA進行處理。

3.自備試劑：氯仿、異丙醇（新開封或提取RNA專用）、75%乙醇(用DEPC處理過的水配制)、RNase free water或者DEPC處理過的水。

4.本公司生產TRIpure Reagent質量優異，可以完美替代Invitrogen的Trizol Reagent。提取質量和下游實驗完全一樣。已經銷售8年數萬瓶。從無質量問題。客戶如果購買本公司TRIpure Reagent證明不能替換Invitrogen的Trizol，無條件退貨，并3倍銷售價格賠償。

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? RNA抽提操作步驟：（實驗前請先閱讀注意事項）

提示：用TRIpure 抽提RNA時要戴手套和護眼罩。避免接觸皮膚和衣服。在化學通風櫥完成操作。避免呼吸道吸入。如無特殊說明，所有的操作應該在在15~30°C的室溫條件下。1.勻漿

a.植物組織：取新鮮植物組織在液氮中充分研磨或將植物組織剪碎后直接在TRIpure中迅速研磨，每50-100mg組織加入1ml TRIpure，混勻。注意：樣品體積一般不要超過TRIpure體積的10%。

b.動物組織：取新鮮或-70℃凍存動物組織盡量剪碎，每30-100mg組織加入1ml TRIpure，勻漿儀進行勻漿處理。或在液氮中研磨后加入TRIpure 1ml混勻。注意：樣品體積一般不要超過TRIpure體積的10%。

c.單層培養細胞：盡量去除干凈殘留培養液后直接往直徑3.5 cm的培養板中加入1ml 的TRIpure覆蓋并反復吹打裂解細胞。依據培養板的面積而不是依據細胞的數量來決定所需的TRIpure 量（每10cm2加1ml）。當TRIpure 量不足時可導致抽提的RNA中污染有DNA。

注意：貼壁培養細胞往往不能完全從培養瓶（皿）脫落，這并不意味著裂解不完全，此時細胞膜實際已經完全破裂開，并已釋放出全部RNA，繼續做即可。d.細胞懸液： 離心收集細胞。在TRIpure 試劑中用移液管反復吹打來裂解細胞。每5~10×106的動物細胞，植物或酵母菌細胞或每1×107細菌加1ml的TRIpure。在加入TRIpure 前應避免洗滌細胞，因為那樣會增加mRNA降解的可能性。破裂某些酵母菌和細菌可能需要使用勻漿器。

e.血液：推薦使用本公司的TRIpure Reagent LS(貨號：RN02)，這是全血或者液體樣品專用的TRIpure Reagent，LS就是Liquid Sample 液體樣品的首字母簡寫。相當于Invitrogen公司的 TRIzol LS。

2.3.將勻漿樣品劇烈震蕩后在室溫條件下放置5分鐘以使核蛋白體完全解離。可選步驟： 在4°C的條件下以12,000 rpm的離心力離心10分鐘，取上清。如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或肌肉，植物的塊莖結節等可離心去除。杭州昊鑫生物科技股份有限公司

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離心后的沉淀中包含有細胞外膜，多糖，以及高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織的樣品時，上層是大量油脂應除去。取澄清的勻漿液進行下一步。4.每1ml TRIpure加0.2ml氯仿。蓋緊管蓋，劇烈震蕩15秒并將其在室溫下放置2~3分鐘。5.在4°C 12,000 rpm的離心力高速冷凍離心10-15分鐘。離心后混合物分成三層：下層紅色有機苯酚氯仿層，中間層，上層無色的水樣層。RNA無一例外地存在于水樣層當中。水樣層的容量大約為所加TRIpure 容量的50-60%。（有機層和中間層是蛋白和DNA，如果需要提取，請聯系我們索取提取方法）。6.將水樣層轉移到一干凈的離心管中，加入等體積異丙醇。顛倒混勻后室溫放置10分鐘。

RNA沉淀在離心前通常不可見，離心后在管側和管底形成膠狀沉淀。

7.8.9.在室溫或者4°C 12,000 rpm 離心10分鐘，棄上清。

加入75%乙醇洗滌沉淀。每使用1?ml?TRIpure用1?ml?75%乙醇對沉淀進行洗滌。在室溫或者4°C 12,000 rpm離心3分鐘，棄上清，注意不要丟失RNA沉淀。注意：剩余的少量液體可短暫離心，然后用槍頭吸出，注意不要吸棄沉淀。? 10.室溫放置2-3分鐘，晾干。加入30-100μl RNase free water，充分溶解RNA，得到的RNA保存在-70℃，防止降解。

注意：沉淀不要過分干燥，以免難于溶解。

第五篇：TRIpure LS 總RNA抽提試劑操作方法及步驟說明書

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TRIpure Reagent LS 液體樣本總RNA提取試劑

目錄號：RN02 ? 試劑盒組成、儲存、穩定性： 試劑盒組成

TRIpure LS（4℃避光）(RN0201)50 ml

(RN0202)

ml

? 儲存事項：

TRIpure LS在室溫下能穩定保存12個月。盡管如此，為達到最佳效果，我們建議保存在2~8°C的環境下。

? 重要提示：

本品中含有苯酚，具有毒性和腐蝕性。如果吸入體內、接觸皮膚、吞食等會導致中毒、灼傷以及其他身體傷害。使用本制品時應穿戴防護物品，如防護服裝、手套、眼罩、面罩等。如果不小心接觸，應立即用大量的水沖洗并前往醫院治療。

? 1.注意事項：

樣品用TRIpure LS勻漿后，如果不即刻加入氯仿之前，置于-70°C下可放置一個月以上。保存在75%乙醇中的RNA沉淀，2-8°C可以保存一周，-20°C條件下可以保存1年。RNA半衰期比較短，容易降解，建議提取后盡快進行后續實驗，如反轉錄成cDNA，Northern Blot等。

2.若下游實驗對DNA非常敏感，建議用 RNase free DNase I（貨號：RN45）對RNA進行處理。

3.自備試劑：氯仿、異丙醇（新開封或提取RNA專用）、75%乙醇(用DEPC處理過的水配制)、RNase free water或者DEPC處理過的水。

4.本公司生產TRIpure Reagent LS質量優異，可以完美替代Invitrogen的Trizol Reagent LS。提取質量和下游實驗完全一樣。

? RNA抽提操作步驟：（實驗前請先閱讀注意事項）杭州昊鑫生物科技股份有限公司

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提示：用TRIpure LS抽提RNA時要戴手套和護眼罩。避免接觸皮膚和衣服。在化學通風櫥完成操作。避免呼吸道吸入。如無特殊說明，所有的操作應該在15~30°C的室溫條件下。1.勻漿

a.生物液體：每0.25ml液體樣品(血清，血漿，腦脊液等等)加入0.75ml TRIpure LS，用加樣槍吹打液體樣品幾次以幫助裂解樣品中細胞。每5~10×106個細胞至少加入0.75ml TRIpure LS。TRIpure LS 和液體樣品的終體積比總是3：1。b.動物組織：用glass或強力勻漿器攪勻組織樣品，每50~100mg組織或者0.25ml組織懸液加0.75ml的TRIpure LS。一般50~100mg組織體積都要小于0.25ml，如果組織樣品的體積小于0.25ml，加入滅菌水將組織樣品體積調整到0.25ml以保證體積比例是3：1。

c.單層生長細胞：直接往直徑3.5 cm的培養板中加入0.3ml-0.4ml的TRIpure LS裂解細胞，用加樣槍吹打幫助充分裂解細胞。依據培養板的面積而不是依據細胞的數量來決定所需的TRIpure LS量（每10cm2加0.3-0.4ml）。不需要往裂解物里面加水，因為培養板中附著殘留的培養液已經充分稀釋了TRIpure LS。注意：貼壁培養細胞往往不能完全從培養瓶（皿）脫落，這并不意味著裂解不完全，此時細胞膜實際已經完全破裂開，并已釋放出RNA，繼續做即可。d.細胞懸液：通過離心來沉淀細胞。在TRIpure LS試劑中用移液管反復吹打來裂解細胞。每5~10×106的動物細胞，植物或酵母菌細胞或每1×107細菌加0.75ml的TRIpure LS。和步驟b一樣用滅菌水調節樣品體積到0.25毫升。在加入TRIpure LS前應避免洗滌細胞，因為那樣會增加mRNA降解的可能性。破裂某些酵母菌和細菌可能需要使用勻漿器。

e.植物組織：取新鮮植物組織在液氮中充分研磨或將植物組織剪碎后直接在TRIpure LS中迅速研磨，每50-100mg組織加入0.75ml TRIpure LS，和步驟b一樣用滅菌水調節樣品體積到0.25毫升，混勻。

2.3.將勻漿樣品劇烈震蕩后在室溫條件下放置5分鐘以使核蛋白體完全解離。可選步驟： 在4°C的條件下以12,000 rpm的離心力離心10分鐘，取上清。杭州昊鑫生物科技股份有限公司

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如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或肌肉，植物的塊莖結節等可離心去除。離心后的沉淀中包含有細胞外膜，多糖，以及高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織的樣品時，上層是大量油脂應除去。取澄清的勻漿液進行下一步。4.每0.75ml TRIpure LS加0.2ml氯仿。蓋緊管蓋，劇烈震蕩15秒并將其在室溫下放置2~3分鐘。5.在4°C 12,000 rpm的離心力高速冷凍離心10-15分鐘。離心后混合物分成三層：下層有機苯酚氯仿層，中間層，上層無色的水樣層。RNA無一例外地存在于水樣層當中。水樣層的容量大約為所加TRIpure LS容量的70%。（有機層和中間層是蛋白和DNA，如果需要提取，請聯系我們索取提取方法）。6.將水樣層轉移到一干凈的離心管中，加入等體積異丙醇。顛倒混勻后室溫放置10分鐘。

RNA沉淀在離心前通常不可見，離心后在管側和管底形成膠狀沉淀。

7.8.在室溫或者4°C 12,000 rpm 離心10分鐘，棄上清。

加入75%乙醇洗滌沉淀。每使用0.75ml TRIpure LS用1ml 75%乙醇對沉淀進行洗滌。9.在室溫或者4°C 12,000 rpm離心3分鐘，棄上清，注意不要丟失RNA沉淀。注意：剩余的少量液體可短暫離心，然后用槍頭吸出，注意不要吸棄沉淀。? 10.室溫放置2-3分鐘，晾干。加入30-100μl RNase free水，充分溶解RNA，得到的RNA保存在-70℃，防止降解。

注意：沉淀不要過分干燥，以免難于溶解。