第一篇：生物技術制藥課程實習報告格式

福建農林大學植物保護學院

（黑體，字號小三）

生物技術制藥課程實習報告

（黑體，字號小二）

（以下黑體，字號小三）

姓名：

學號：

成績：

指導老師：陳宇熹

實習地點：福建農林大學植物保護學院制藥工

程系校內實訓基地

實習時間：2010.6.28～7.9目的與意義（一級標題，小三號黑體，段前0.5行，段后0.5行）

（正文部分宋體，字號體小四，行距固定值20磅，段落首行縮進2字符）2 課程實習內容（一級標題，小三號黑體，段前0.5行，段后0.5行）

2.1全自動機械攪拌不銹鋼發酵罐（500L）（二級標題，四號黑體，段前0.5行，段后0.5行）

2.1.1 全自動機械攪拌不銹鋼發酵罐原理（三級標題小四號黑體，段前0行，段后0行）

（正文部分宋體，字號體小四，行距固定值20磅，段落首行縮進2字符）

2.1.2 全自動機械攪拌不銹鋼發酵罐外形圖（三級標題小四號黑體，段前0行，段后0行）

2.1.3 全自動機械攪拌不銹鋼發酵罐工藝流程圖（三級標題小四號黑體，段前0行，段后0行）

2.1.3 全自動機械攪拌不銹鋼發酵罐工藝操作過程（三級標題小四號黑體，段前0行，段后0行）

（正文部分宋體，字號體小四，行距固定值20磅，段落首行縮進2字符）

2.1.4 全自動機械攪拌不銹鋼發酵罐操作注意事項（三級標題小四號黑體，段前0行，段后0行）

（正文部分宋體，字號體小四，行距固定值20磅，段落首行縮進2字符）3實習小結與心得（一級標題，小三號黑體，段前0.5行，段后0.5行）

（正文部分宋體，字號體小四，行距固定值20磅，段落首行縮進2字符。根據生物技術制藥課程實習內容歸納總結并寫出該次實習的心得體會以及感受，不少于800字）

重要要求：報告絕對不允許有抄襲及雷同現象，一經發現，所有雷同報告均退回重做或以該次實習成績不及

第二篇：生物技術制藥見習報告

生物技術制藥見習報告

一藥廠見習

(一)藥廠簡介

合肥神鹿雙鶴藥業有限責任公司是北京醫藥集團有限責任公司的全資子公司，公司是一家擁有四十余年歷史，以生產中成藥為主導產品的專業化中成藥企業，公司注冊資本為9650萬元。公司先后被確定為全國醫藥行業質量效益型企業、全國中成藥工業國有重點企業（五十強）之

一、安徽省醫藥行業的骨干企業、安徽省210戶國有及國有控股重點企業、合肥市科技先導型企業、安徽省高新技術企業、合肥市科技創新型企業等榮譽稱號，公司的技術中心為安徽省省級技術中心。

四十年來公司秉承“讓生活有質量，讓生命更健康”的使命，致力于提供安全、可靠、放心的產品和服務，追求提升人類生命價值和生活品質，公司曾連續榮獲安徽省質量管理獎。公司占地面積145畝。職工460人，其中大專以上學歷占45%，高中級專業技術人員67人，執業藥師18名。經過多年的積累與發展，企業已形成較完整的營銷、研發、生產技術、質量保證體系。擁有顆粒劑、片劑、膠囊劑、丸劑等具有國內領先水平的生產線。生產工藝采用低溫回流、一步造粒等先進工藝，2002年整廠一次性順利通過了國家GMP認證。擁有高效液相、雙波長薄層掃描、十萬分之一電子天平、BGB－150B高效包衣機、小顆粒自動包裝生產線等一批國內外先進的檢測儀器和生產設備。目前已成為安徽省產能規模最大的中成藥生產企業，具有年產片劑：3億片；顆粒劑：600噸；膠囊劑：1億粒的綜合生產能力。

公司擁有溫、養胃舒、益膽片、兒瀉停顆粒、銀菊清咽顆粒、化濁輕身顆粒以及正柴胡飲膠囊等獨家產品和國家中藥保護品種。

公司的主導產品溫胃舒、養胃舒是目前國內胃藥市場上唯一辨證分型、一病兩藥的藥物,溫胃舒、養胃舒曾榮獲國家中醫藥管理局重大科技成果乙級獎、中國中藥名牌、安徽省著名商標、安徽省名牌產品和高新技術產品等稱號，并被列為國家基本藥物目錄，國家基本醫療保險藥品、國家中藥保護品種和國家社保目錄乙類。

獨家產品益膽片具有行氣散堅，清熱通淋的作用，消炎效果顯著，起效迅速。適用于急慢性膽囊炎、膽石癥、腎結石、膀胱結石等癥，被譽為膽石患者的“良藥”。

國家級新藥兒瀉停顆粒為純中藥制劑，具有療效高、見效快、劑量小、口感好，安全無毒付作用等特點，為目前治療兒童輪狀病毒性腸炎的理想藥物。

（二）制藥技術介紹

1膠囊劑

膠囊劑（capsules）將藥物直接分裝于硬質空膠囊或具有彈性的軟質膠囊中制成的固體制劑。： 根據囊材的不同分為硬、軟、腸溶膠囊。

（1）硬膠囊劑：將一定量的藥材提取物與藥粉或輔料制成均勻的粉末或顆粒充填于空心膠囊中，或將藥材粉末直接分裝于空心膠囊中制成的劑型。

（2）軟膠囊劑：將一定量的藥物、藥材提取物加適宜的輔料密封于球形、橢圓形或其他形狀的軟質囊材中制成的劑型。

（3）腸溶膠囊：硬膠囊或軟膠囊經藥用高分子處理或用其他適宜方法加工而成。囊殼不溶于胃液，能在腸液中崩解、溶化、釋放膠囊中藥物。

膠囊劑的特點：

可掩蓋藥物的不良氣味；藥物的生物利用度高（與片劑、丸劑相比）；可提高藥物的穩定性（光、熱敏感藥物）；可定時定位（直腸、陰道給藥）釋放藥物；彌補其他劑型的不足；（1）

含油量高或液態藥物制成固體制劑時。（2）服用劑量小、難溶于水、胃腸道不吸收的藥物，可溶于適當的油中。自動化程度高、整潔、美觀、貯存、運輸、攜帶、服用方便。膠囊劑的質量要求：

應整潔，不得有粘連、變形或破裂現象，無異臭。小劑量藥物，應先用適宜的稀釋劑稀釋，混和均勻。硬膠囊劑的內容物應干燥、疏松、混合均勻。裝量差異、水分、崩解時間應符合《中國藥典》規定。

藥物的填充

1、藥物的處理：混合均勻的細粉或顆粒。

2、空膠囊的選擇：

選擇原因：藥物的密度、晶態、顆粒大小的不同，占容積不同。

選擇原則：按藥物劑量所占容積選用最小的空膠囊。

選擇方法：經驗、試裝；或測其密度查圖可得。

3、藥物填充方法：

手工填充、硬膠囊分裝器填充、全自動膠囊填充機。

填充時需注意的問題：

定量藥粉填充時會發生少量的損失，多準備填充物。麻醉、毒性藥物除外。填充小劑量的藥粉，麻醉、毒性藥物易引濕或混合后發生共熔的藥物，加入適量稀釋劑，混合后填充。疏松性藥物小量填充時，加適量乙醇或液狀石蠟混勻后填充。中藥浸膏粉，應保持干燥，添加適當輔料混勻后填充。揮發油先用吸收劑（碳酸鈣、輕質氧化鎂、磷酸氫鈣等）吸收后填充。還可用復方中有些粉性較強藥材，且為打粉入藥吸收。

2制粒技術

近年來．一些新的制粒技術在制劑工藝改進方面起到了一定的推動作用，包括超細粉碎技術、超臨界流體重結晶過程、微丸制備技術、微膠囊技術等。超細粉碎技木把機械粉碎與氣流粉碎兩者原理結合起來，可以達到亞微米級的細度，是當今最先進的超細粉碎方法之一。超臨界流體重結晶是利用壓力使溶液由不飽和變為過飽和，此而使物質重結晶析出，可在近常溫下進行，適用于熱不穩定、易氧化物質的重結晶提純或制備微細顆粒。微丸制備技術生產能力大，可以制造0.3-30mm的球粒，顆粒直徑大小相同、分散度小含量均勻。微膠囊包覆技術在我國工業的應用剛剛起步，但隨著研究的深入，必將成為中成藥制劑中的關鍵性高新技術之一。中藥顆粒劑是在湯劑和糖漿劑的基礎上發展起來的一種新的中藥劑型，既保持了湯劑吸收快、顯效迅速等優點，又克服了湯劑服用前臨時煎煮、費時耗能、久置易霉變變質等不足。近年來，由于中藥流化床制粒技術具有干燥時間短、產品質量好、干燥過程簡單等特點，而被廣泛應用于中藥制藥行業，其制粒技術亦日益趨向成熟。

2.1 中藥制粒技術發展概況

中藥大多數是以浸膏作原料，其中含有生物堿、昔類、多糖等有效成分，同時也含有纖維素、淀粉、蛋白質、樹脂、樹膠等無效成分，并給制粒帶來很大困難。若要提高制劑質量，就必須改善顆粒外觀、色澤，努力達到防潮、掩蓋不良口味、防止藥物揮發、提高溶解度、控或緩釋等工藝要求。中藥顆粒的制備工藝為: 選料斗去雜升工業提取升濃縮斗干燥葉制粒，其中主要的工藝環節是原料的處理與制粒。為了提高顆粒成品的質量，確保臨床使用的療效，藥學工作者進行了廣泛的實驗研究。

2.2 原料的處理

根據處方中所含藥物的成分，來確定處理的方法，出現了動態溫浸技術、高速離心技術、絮凝澄清技術、大孔樹脂吸附技術、超濾技術、揮發性成分包含技術，從而提高原藥材的提取分離效果。

2.3 制粒工藝

通過輔料的選擇和工藝條件的改進，來提高顆粒的質量，改善其性狀:輔料上除了糖粉、糊精、可溶性淀粉外，還選用麥芽糊精、乳糖、微晶纖維素、微粉硅膠、經丙基淀粉等;制粒工藝上改變了傳統工藝干燥時間長，藥材中對熱不穩定成分損失較多之不足，采用了動態提取、真空低溫干燥或瞬間噴霧干燥、干法制粒、高速攪拌制粒等高新技術。實踐表明，上述制粒技術的應用，大大地提高了中藥顆粒的制備效率和成品質量，也為中藥制藥技術的進步與發展產生了積極的推動作用。

1.4.流化床制粒技術工藝原理

流化噴霧制粒，又稱沸騰制粒、“一步制粒”。該法將制粒用的輔料置于流化噴霧制粒設備的流化室內，通人濾凈的加熱空氣，使粉末預熱干燥并處于沸騰狀態，再將經預處理的藥液以霧狀間歇噴入，使輔料粉末被潤濕而凝結成多孔狀顆粒，繼續流化干燥至顆粒中含水量適宜即得。

1.4.1流化床制粒技術特點

流化床制粒技術為混合、制粒、干燥操作一步完成的新型制粒技術。適于對濕、熱敏感的藥物制粒。該技術的使用，可大大減少輔料量，浸膏在顆粒中的含量可達到50%-70%，顆粒在沸騰狀態下形成，大小均勻、外形圓整、流動性好、可壓性好、生產效率高，便于自動控制。同時由于制粒過程在密閉的制粒機內完成，生產過程不易被污染，成品質量能得到更好的保障。目前多用于無糖型、低糖型顆粒劑的制備。

1.5 流化床制粒技術應用的注意事項

流化床制粒是中藥制藥工業中較為常用的先進技術之一，應用越來越廣泛，但也存在著一些需要解決的問題。

1.5.1 防止噴霧干燥制粒機‘.塌床”現象的發生

1.5.2 產生“塌床”現象的原因

中藥干浸膏粉多數粘滯性太大，引濕性較強，流動J性較差;操作中風溫及風速過低，物料干燥速率太慢，粘合劑霧化液滴過大，或噴霧頻率過高等;工藝設計不合理}，習。

1.5.3 防止“塌床”的方法

對于不同的處方、不同的中藥成分，在操作中可以根實際情況，采取措施來預防和解決“塌床”現象。

1.5.4 防止顆粒大小不均

針對不同處方藥物條件及制劑要求，適當地調整噴霧干燥制粒機的操作參數，并且在噴霧過程中，應隨時根據取樣情況，觀測顆粒成型的好壞，并依此來調節霧化空氣壓力、流浸膏相對密度、進出塔風溫度、微調風門的開啟度、液體的噴霧速度等制粒參數，即可得到滿意大小的顆粒

1.5.5 噴霧干燥產品的吸潮問題

近年來，人們在顆粒生產中采取了新工藝和新輔料、改善生產環境、采用阻濕性能強的包裝材料等措施，旨在增強中藥顆粒的抗引濕性能，解決噴霧干燥產品的吸潮問題。測定臨界相對濕度(CRH)以決定加輔料量及包裝材料的選擇:CRH越大，水溶性藥物越不易吸濕，反之，則越易吸濕。中藥噴霧干燥產品，由于比表面積大，容易吸潮，含糖成分高的噴霧干燥產品更易吸潮，其CRH可低于50%，通常加人適量的白糊精、淀粉等作賦形劑，降低其吸潮性通常是賦形劑的用量越大，其吸潮性就越低。粘性低的中藥提取液，其噴霧干燥產品與賦形劑用量比為9;1 時，用95%乙醇制粒，顆粒硬而粗但CRH值低，不利于長期保存，需要好的包裝材料11610對于無糖型顆粒的包裝材料需特別強調，一般的塑料復合膜不適用，真空鍍鋁的復合膜也不太理想，最好采用BOPP,扒UPE。的復合材料，以免成品吸潮、結塊變質而失去藥用價值，致使前功盡棄n70利用中藥顆粒劑包衣的工藝，如將胃溶丙烯酸樹脂薄膜包衣技術應用于板藍根沖劑，即板藍根浸膏粉與微晶纖維素、硫酸鈣等混勻，濕法粒，顆粒

置糖衣鍋內滾動吹干，并用W號樹脂PEG乙醇溶液進行包衣，可很好解決顆粒的吸濕問題

二 超臨界流體萃取

3.1超臨界萃取原理

超臨界流體萃取分離過程的原理是超臨界流體對脂肪酸、植物堿、醚類、酮類、甘油酯等具有特殊溶解作用，利用超臨界流體的溶解能力與其密度的關系，即利用壓力和溫度對超臨界流體溶解能力的影響而進行的。在超臨界狀態下，將超臨界流體與待分離的物質接觸，使其有選擇性地把極性大小、沸點高低和分子量大小的成分依次萃取出來。當然，對應各壓力范圍所得到的萃取物不可能是單一的，但可以控制條件得到最佳比例的混合成分，然后借助減壓、升溫的方法使超臨界流體變成普通氣體，被萃取物質則完全或基本析出，從而達到分離提純的目的，所以超臨界流體萃取過程是由萃取和分離組合而成的。

3.2萃取裝置

超臨界萃取裝置可以分為兩種類型，一是研究分析型，主要應用于小量物質的分析，或為生產提供數據。二是制備生產型，主要是應用于批量或大量生產。超臨界萃取裝置從功能上大體可分為八部分：萃取劑供應系統，低溫系統、高壓系統、萃取系統、分離系統、改性劑供應系統、循環系統和計算機控制系統。具體包括二氧化碳注入泵、萃取器、分離器、壓縮機、二氧化碳儲存罐、冷水機等設備。由于萃取過程在高壓下進行，所以對設備以及整個管路系統的耐壓性能要求較高，生產過程實現微機自動監控，可以大大提高系統的安全可靠性，并降低運行成本。

3.3超臨界流體萃取的特點

1）超臨界流體CO2萃取與化學法萃取相比有以下突出的優點：

(1)可以在接近室溫(35-40℃)及CO2氣體籠罩下進行提取，有效地防止了熱敏性物質的氧化和逸散。因此，在萃取物中保持著藥用植物的全部成分，而且能把高沸點，低揮發度、易熱解的物質在其沸點溫度以下萃取出來；

(2)使用SFE是最干凈的提取方法,由于全過程不用有機溶劑,因此萃取物絕無殘留溶媒,同時也防止了提取過程對人體的毒害和對環境的污染,是100%的純天然；

(3)萃取和分離合二為一，當飽含溶解物的CO2-SCF流經分離器時，由于壓力下降使得CO2與萃取物迅速成為兩相（氣液分離）而立即分開，不僅萃取效率高而且能耗較少，節約成本；

(4)CO2是一種不活潑的氣體,萃取過程不發生化學反應,且屬于不燃性氣體,無味、無臭、無毒，故安全性好；

(5)CO2價格便宜，純度高，容易取得，且在生產過程中循環使用，從而降低成本；

(6)壓力和溫度都可以成為調節萃取過程的參數。通過改變溫度或壓力達到萃取目的。壓力固定，改變溫度可將物質分離；反之溫度固定，降低壓力使萃取物分離，因此工藝簡單易掌握，而且萃取速度快。

2）從超臨界流體性質看，其具有的特點：

(1)萃取速度高與液體萃取，特別適合于固態物質的分離提取；

(2)在接近常溫的條件下操作，能耗低于一般精餾發，適合于熱敏性物質和易氧化物質的分離；

(3)傳熱速率快，溫度易于控制；

(4)適合于揮發性物質的分離

三小結

第三篇：生物技術制藥總結

生物技術：人們以現代生命科學為基礎，結合先進的工程技術手段和其他基礎科學的科學原理，按照預先的設計改造生物體或加工生物原料，為人類生產出所需產品或達到某種目的的技術

1基因工程制藥：利用基因重組技術將外援基因導入宿主菌或細胞進行大規模培養，以獲得蛋白質藥物的過程。

2.載體：是攜帶外源目的基因或DNA進入宿主細胞，實現外援基因或DNA的無性繁殖或表達有意義的蛋白質所采用的一些DNA分子。

細胞傳代passage：將細胞從一個培養器皿中消化、分散并接種至另一個培養器皿中的操作。細胞克隆培養（clonal culture）：即單細胞分離培養，是將動物組織分散后，將一個細胞從群體細胞中分離出來，由單個細胞培養成純系細胞集群。

動物細胞的復蘇：其原則是快速融化，必須將凍存在-196℃液氮中的細胞快速融化至37℃，使細胞外凍存時的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結晶，對細胞造成損害。

細胞融合（cell fusion）：是指在外力（誘導劑或促融劑）作用下，兩個或兩個以上的異源（種、屬間）細胞或原生質體相互接觸，從而發生膜融合、胞質融合和核融合并形成雜種細胞的現象，或稱細胞雜交。

轉基因動物（transgenic animal）：采用基因工程技術將外源目的基因導入動物生殖細胞、胚胎干細胞和早期胚胎，并在受體動物的染色體上穩定整合，在經過發育途徑將外源目的基因穩定地傳給子代，通過這項技術所獲得的動物即為轉基因動物。

胚胎干細胞（embryo stem cell）：簡稱ES細胞，是從早期胚胎細胞團分離出來并能在體外培養的一種高度未分化的、具有形成所有成年細胞類型能力的全能干細胞。它是正常二倍體型，像早期胚胎細胞一樣具有發育上的全能性。

抗體工程制藥（antibody engineering pharmaceutics）：利用基因工程、細胞工程（包括動物細胞工程和植物細胞工程）和轉基因動物及轉基因植物技術生產抗體藥物的過程。

單克隆抗體（monoclonal antibody，mAb）：簡稱單抗，將能大量擴增和永生的骨髓瘤細胞和能合成分泌特異性抗體的B細胞（僅識別一種抗原表位）進行融合得到雜交瘤細胞，經篩選和克隆化的雜交瘤細胞僅能合成及分泌抗單一抗原表位的特異性抗體。

雜交瘤細胞克隆化（cloning）：是指將陽性孔中分泌抗體的單個細胞分離出來。融合后的雜交瘤細胞一般要經過3次克隆化才能達到100%的陽性克隆。

雙特異性抗體（bispecific antibody，bsAb）：亦稱雙功能抗體，是含有兩個不同配體結合位點的抗體分子，它有兩個不同的抗原結合部位（兩個臂），可分別結合兩種不同的抗原表位。嵌合抗體（chimeric antibody）：是利用DNA重組技術，將異源單抗的輕、重鏈可變區基因插入含有人抗體恒定區的表達載體中，轉化哺乳動物細胞表達的抗體，表達的抗體分子中輕、重鏈的V區是異源的，而C區是人源的，即整個抗體分子的60%~70%是人源的。

人源化抗體（humanized antibody，hAb）：通過CDR移植即把鼠抗體的CDR（互補決定區）序列移植到人抗體的可變區內所得到的抗體，也稱CDR移植抗體或改型抗體。該抗體既具有鼠源性單抗的特異性又保持了人抗體的功能（C區的功能）。

免疫原性（immunogenicity）：抗原能刺激機體特異性免疫細胞，使其活化、增值、分化，最終產生免疫效應物質（抗體或致敏淋巴細胞）的特性。

免疫反應性（immunoreactivity）：抗原與相應免疫效應物質在體內或體外相遇時，可發生

特異性結合而產生免疫反應的特性。

減毒活疫苗（live attenuated vaccine）：是通過不同的方式手段使病原體的毒性即致病

性減弱或喪失后獲得的一種由完整的微生物組成的疫苗制品。

滅活疫苗（inactivated）：是將病原體經培養增殖、滅活純化處理，使其完全喪失感染性，但保留了病原體的幾乎全部組分因此滅活疫苗具有較好的免疫原性和安全性。

亞單位疫苗（subunit vaccine）：利用微生物的某種表面結構成分（抗原）制成、能誘發

機體產生抗體的疫苗。

分解代謝阻遏（catabolite repression）：在菌體的生長階段被菌體快速利用的碳源會產

生大量的分解產物，這些代謝產物阻遏次級代謝酶系的合成，只有當這類碳源被消耗完后，阻遏作用被消除，菌體才由生長階段轉入次級代謝產物合成階段，這種發酵過程中的次級代

謝產物在碳源被消耗盡時才產生和積累的現象稱為分解代謝阻遏。

生物技術：人們以現代生命科學為基礎，結合先進的工程技術手段和其他基礎科學的科學原

理，按照預先的設計改造生物體或加工生物原料，為人類生產出所需產品或達到某種目的的技術。

種齡（inoculumage）：種子罐中培養的菌絲轉入下一級種子罐或發酵罐時得培養時間

生物技術藥物的特性？

（1）理化性質特性（1）相對分子量大（2）結構復雜：蛋白質和核酸均為生物大分子，蛋

白質含有四級結構（3）穩定性差（2）藥理學作用特性（1）活性與作用機制明確：活性物

質對生理功能的調節機制比較清楚（2）作用針對性強：有特定的靶分子、靶細胞或靶器官

（3）毒性低：生物技術藥物本身是體內天然存在的物質或它們的衍生物（4）體內半衰期短

（5）有種屬特異性（6）可產生免疫原抑制（3）生產制備特性（1）藥物分子在原料中的含量低（2）原料液中常存在降解目標產物的雜質：應采取快速分離純化的方法以除去影響

目標產物穩定性的物質（3）制備工藝條件溫和：目的產物不穩定（4）分離純化困難：需要

多種不同原理的層析單元操作才能達到要用的純度（5）產品易受有害物質（4）質量控制特

性

質粒的特點：（1）是指獨立于原核生物染色體之外具有自主復制能力的遺傳物質。（2）質粒

具有遺傳傳遞和遺傳交換的能力（3）質粒具有不相容性：兩種親緣關系密切的不同質粒不

能在同一宿主細胞中穩定共存。4..共價閉合環狀DNA(ccDNA)，開環DNA(ocDNA)，線狀

DNA(lDNA)在瓊脂糖凝膠電泳中

5.復制子松弛型復制子的復制和宿主蛋白的合成功能

無關，宿主染色體DNA復制受阻時，質粒仍可復制；嚴謹型復制子的復制與宿主蛋白質的合成相關，因此在每個宿主細胞中為低拷貝數，僅1~3個。

6.克隆表達的質粒載體涉及三個要素：

（1）復制子（2）選擇標記：由質粒攜帶的賦予宿主細胞新的表型的基因，用于鑒定和篩選

轉化有質粒的宿主細胞。常見的標記：氨芐西林（Amp），卡那霉素（Kan）（3）多克隆位點

（MCS）：質粒載體中由多個限制性內切酶識別序列密集排列形成的序列。

7.目的基因常用制備方法

(1)化學合成法（2）PCR法：在含有DNA模板、引物、DNA聚合酶、dNTP的緩沖溶液中通

過下列步驟擴增DNA：a）變性：雙鏈DNA模板加熱變性，解離成單鏈模板；b）退火：降

低溫度，引物與單鏈模板結合；c）延伸：溫度調整至DNA聚合酶最適宜溫度，最終與單鏈

模板形成雙鏈，并開始下一個變性、退火、延伸循環。（3）基因文庫法（4）cDNA文庫法

8.影響目的基因與載體之間連接效率的主要因素：

9.（1）DNA片段之間的連接方式：粘性末端的連接效率高于平頭末端。（2）目的基因與載

體的濃度和比例：增加DNA濃度可以提高連接效率，目的基因與載體DNA的摩爾數比應大

于1.（3）連接溫度、時間、連接酶的活性及緩沖液。

9.重組DNA導入大腸桿菌，常用的感受態細胞制備方法：氯化鈣法

10.重組子的篩選與鑒定：

（1）載體遺傳標記法：a)抗生素抗性篩選法

b)互補篩選法：重組子轉化成宿主細胞，載體的表達產物與宿主細胞中營養缺陷性突變發生

互補作用，從而實現重組子的篩選。藍白斑篩選：lacZα基因可編碼β—半乳糖苷酶α氨基

端的α互補肽段，與宿主細胞編碼的缺陷型β—半乳糖苷酶α實現互補，可分解底物5-溴-4-

氫-3-吲哚-β-D-半乳糖苷，形成藍色菌落。由于lacAα基因的插入失活而成白色，空載體的宿主細胞呈藍色。c)營養缺陷篩選法d噬菌斑篩選法(2)核酸分子雜交法

(3)限制性內切酶圖譜法(4)DNA序列測定法：雙脫氧終止法(5)目的基因表達產物測定法

12.外源基因在大腸桿菌中的表達形式：

(1)胞內表達：(a)非融合蛋白的胞內表達：形成包涵體（B）融合蛋白的胞內表達：在大腸桿

菌內較穩定（2）分泌表達：（a)分泌至周質（b）分泌至胞外

11.外源基因在原核生物中表達的重要調控元件

(1)啟動子：是DNA鏈上能與RNA聚合酶結合并起始mRNA合成的一段序列，是決定外源基

因在原核生物中表達效率的關鍵因素。(2)核糖體結合位點：SD序列(3)終止子

13.大腸桿菌中外源蛋白表達效率的影響因素：(1)外源基因密碼子：偏好密碼子（蛋白質合成迅速，錯配率低）和稀有密碼子(2)mRNA結構：減少G、C含量，增加A、T含量(3)表達

載體：高拷貝數、適用范圍廣、穩定性高、表達產物容易純化(4)外源蛋白穩定性

14.分離純化技術應滿足下列要求：(1)技術條件要溫和，能保持目的產物的生物活性；(2)選

擇性要好(3)回收率要高(4)兩個技術之間要能直接銜接(5)整個分離純化過程要快

15.基因重組蛋白的主要分離技術

(1)離心(2)沉淀(3)膜分離(4)雙水相萃取

16基因重組蛋白的主要純化技術:

(1)離子交換層析(2)親和層析(3)凝膠過濾層析(4)反相層析和疏水層析

17.選擇分離純化方法的依據：

（元，層析分離次序的選擇也同樣重要。(3)根據分離純化工藝的要求來選擇(a)具有良好的穩

定性、重復性和較高的安全性(b)盡可能減少組成工藝的步驟(c)分離純化工藝所用的時間要

盡可能的短(d)工藝和技術必須高效

18．基因工程藥物的質量控制要點

(1)蛋白質含量的測定(2)蛋白質純度檢測(3)蛋白質分子質量測定(4)蛋白質等電點測定(5)蛋

白質序列分析(6)內毒素分析、宿主蛋白與核酸殘留分析

19.蛋白質含量的測定

(1)紫外吸收法(2)BCA法(3)Lowry法(4)考馬斯亮藍法(5)SDS-PAGE掃描分析法

20.蛋白質純度的檢測：電泳法、層析法、質譜法、末端氨基酸殘基分析法

21.蛋白質Mr測定有SDS-PAGE法、凝膠層析法、質譜法

22.蛋白質等電點測定的常用方法：等電聚焦法。

23.蛋白質序列的分析:N-端氨基酸序列分析，C-端氨基酸序列分析

根據體外培養時動物細胞對生長基質的依賴性，可將動物細胞分為

(1)貼壁依賴性細胞(2)非貼壁依賴性細胞(3)兼性貼壁細胞

1.動物細胞培養的環境條件

(1)培養溫度（哺乳類37℃，昆蟲25~28℃）(2)pH值（大多數7.2~7.4）(3)通氧量（一定量的CO2）(4)防止污染(5)基本營養物質(6)滲透壓

3.動物細胞的培養特性

(1)比微生物細胞大得多，無細胞壁，抗機械強度低，對剪切力敏感，適應環境能力差；(2)

倍增時間長，生長緩慢，正常二倍體細胞的生長壽命是有限的；(3)對培養基要求高，易受

微生物污染，培養時需要添加抗生素；(4)生長大多需貼附于基質，相互粘連以集群形式存

在，并有接觸抑制現象；(5)多半將產物分泌在細胞外，便于收集和純化；(6)對蛋白質的合成條件和修飾功能與細菌不同，動物細胞可對蛋白質進行完善的翻譯后修飾，特別是糖基化，與天然產品更一致，更適合于臨床應用。

4.原代培養的主要步驟

(1)從健康動物體內無菌條件下取出適量組織，剪切成小薄片；(2)加入適宜濃度的胰蛋白酶

或膠原酶和EDTA等進行消化作用使細胞分散；(3)將分散的細胞進行洗滌并純化后，以2×

10^6~7×10^6 /ml的濃度加到培養基中，37℃下進行原代培養，并適時進行傳代培養。分為

組織塊培養和單層細胞培養兩種方法。

5.動物細胞深低溫保存的基本原理

在-70℃以下時，細胞內的酶活性均已停止，即代謝處于完全停滯狀態，故可以長期保存。

在不加任何條件下直接凍存細胞時，細胞內和外環境中的水都會形成冰晶，能導致細胞內發

生機械損傷、電解質濃度升高、滲透壓改變、脫水、pH改變、蛋白質變性等，能引起細胞

死亡。目前為了保存細胞，都采用液氮低溫（-196℃）凍存的方法。

6.動物細胞的復蘇

其原則是快速融化，必須將凍存在-196℃液氮中的細胞快速融化至37℃，使細胞外凍

存時的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結晶，對細胞造成損害。

7.動物細胞營養要求特點

(1)碳源不能為無機物，大多為葡萄糖；(2)氮源不能為無機物，主要為各種氨基酸；(3)在很

多情況下尚需添加5%~20%的小牛血清或適量的動物胚胎浸出液。

8.動物細胞的大規模培養方法

(1)懸浮培養法(2)微載體培養法(3)多孔載體培養法(4)微囊化培養法(5)中空纖維培養法

9.誘導動物細胞融合的方法主要有:(1)病毒法(2)PEG法(3)電擊法(4)激光法

10.轉基因動物生物反應器（整體掌握？）

(1)轉基因動物乳腺生物反應器（藥用蛋白，如抗凝血Ⅲ、抗胰蛋白酶、葡萄糖苷酶、C蛋白）

(2)轉基因動物血液生物反應器（人血紅蛋白、抗體或非活性狀態的融合蛋白）(3)轉基因動

物尿液生物反應器（促性腺激素）(4)轉基因雞（蛋）生物反應器（人干擾素）

1.單克隆抗體技術的基本原理

基于動物細胞融合技術得以實現的，即骨髓瘤細胞和B細胞的融合。骨髓瘤細胞在體外

培養能大量無限增殖，但不能分泌特異性抗體；抗原免疫的B細胞能產生特異性抗體，但在體外不能無限增殖。將免疫B細胞和骨髓瘤細胞融合后形成的雜交瘤細胞，繼承了兩個親代

細胞的特性，既具有骨髓瘤細胞能無限增殖的特性，又具有免疫B細胞合成和分泌特異性抗

體的能力。通常使用HAT（H為次黃嘌呤、A為氨基蝶呤、T為胸腺嘧啶核苷）選擇培養基

對雜交瘤細胞進行篩選。未融合的脾細胞因不能在體外長期存活而死亡，未融合的骨髓瘤細

胞合成DNA的從頭合成途徑被培養基中的A阻斷，又因缺乏HGPRT（次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸

核糖轉移酶）和TK（胸腺嘧啶核苷激酶），不能利用培養基中的H和T完成DNA的合成過

程而死亡。只有融合的雜交瘤細胞由于從脾細胞獲得了HGPRT和TK，因此能在HAT培養基

中長期存活與繁殖并分泌抗體。

2.單克隆抗體的大量制備主要方法:（1）體內培養法（2）體外培養法

6.重組ScFv的應用:(1)用于構建和生產免疫毒素(2)用于腫瘤的影像分析和治療

7.噬菌體抗體庫技術的基本原理:用PCR技術從人免疫細胞中擴增出整套的VH和VL基因，克隆到噬菌體載體上并以融合蛋白的形式表達在其外殼表面。這樣一來噬菌體DNA中有抗

體基因的存在，同時在其表面又有抗體分子的表達，可以方便地利用抗原-抗體特異性結合而篩選出所需要的抗體，并進行克隆擴增。

7.噬菌體抗體庫構建過程

(1)從外周血或脾、淋巴結等組織中分離B細胞，提取mRNA并反轉錄為cDNA；

(2)應用抗體輕鏈和重鏈引物，根據建庫的需要通過PCR技術擴增不同的抗體基因片段；

(3)構建噬菌體載體；(4)用表達載體轉化細菌，構建全套抗體庫。

通過多輪的抗原親和吸附（結合）-洗脫-擴增，最終篩選出抗原特異的抗體克隆。其中，噬

菌體抗體庫的篩選是關鍵環節和步驟。

減毒活疫苗的優缺點：

優點：

（1）通過自然感染途徑接種，可以誘導包括體液免疫、細胞免疫和粘膜免疫在內的更全面的免疫應答，使機體獲得更廣泛的免疫保護；（2）由于使用的是活的微生物他們可以在體內

長時間起作用而誘導較強的免疫反應，且由于活的微生物有增殖的特性，理論上只需要接

種一次，即可達到滿意的免疫效果；（3）可能引起水平傳播擴大免疫效果，增強群體免疫屏

障；(4)一般不需要再疫苗中添加佐劑，生產工藝一般不需要濃縮純化，價格低廉。

缺點：

(1)一般減毒活疫苗均保留一定殘余毒力，對一些個體如免疫缺陷者可能誘發嚴重疾病，并

且由于種種原因如基因修飾等，減毒活疫苗可能出現毒力回復即“返祖”現象；(2)減毒活

疫苗是活的微生物制劑，可能造成環境污染而引發交叉感染等，并可能滯留在環境中形成傳

染源；(3)缺損顆粒可能干擾免疫效果，因此產品分析評估較為困難；(4)保存運輸等條件要

求較高，如需冷藏等。

1.滅活疫苗的特點：(1)滅活疫苗常需多次接種；(2)接種滅活疫苗產生的抗體滴度隨著時

間而下降；(3)滅活疫苗需要量大。

第七章 發酵工程制藥

1.發酵類型：(1)微生物菌體發酵(2)微生物的酶(3)微生物的代謝產物發酵(4)微生物轉化發

酵(5)生物工程菌發酵

2.微生物發酵生產藥物的分類：(1)抗生素類(2)氨基酸類(3)核苷酸類(4)維生素類(5)甾體類

激素(6)多糖類(6)治療酶及酶抑制劑

3.菌種保藏方法：(1)斜面低溫保藏法(2)石蠟油封存法(3)沙土管保藏法(4)麩皮保藏法(5)甘

油懸液保藏法(6)冷東真空干燥保藏法(7)液氮超低溫保藏法(8)宿主保藏法

4.種子液具備的條件：(1)菌種的生長活力強，轉種至發酵罐后能迅速生長，延遲期短；(2)

生理狀態穩定；(3)菌體總量及濃度能滿足大容量發酵罐的要求；(4)無雜菌污染，保證純種培養；()保持穩定的生產能力

5.微生物的發酵方式：（1）分批發酵（2）補料—分批發酵（3）半連續發酵（4）連續發酵

5.發酵過程的中間分析項目：（1）產物產量（2）PH值（3）糖（4）氨基氮（5）菌絲形

態

6.發酵過程的影響因素及控制：（1）菌體濃度的影響及控制（2）營養物質對發酵的影響

及控制（3）溫度的影響及控制（4）PH的影響及控制（5）溶氧的影響及控制（6）二氧化碳的影響及控制（7）泡沫的影響及控制（8）染菌對發酵的影響

第四篇：生物技術制藥教學大綱

第一章 緒論（2學時）第一節 生物技術概述 1 生物技術的概念 2 生物技術發展史 第二節 生物技術制藥 1 生物技術制藥的概念 2 生物技術在制藥中的應用 我國生物技術制藥現狀和發展前景 4 醫藥生物技術發展展望

第二章 生物藥物（10學時）

1．生物藥物的來源、特性、分類與制備。（2學時）

2．氨基酸類藥物：氨基酸類藥物研究概況；在醫藥中的應用；氨基酸生產。（2學時）3．多肽、蛋白質類藥物：多肽、蛋白質類藥物的特點、分離純化方法、工業生產制備過程。（2學時）

4．核酸類藥物：概述（分類、應用）；生產方法；核酸類藥物的制備。（2學時）5．糖類藥物：制備；純化。（2學時）

第三章 基因工程制藥（8學時）

通過本章學習，了解基因工程藥物研制的意義，掌握基因工程藥物的研制過程、研制方法。1概述。

2基因工程藥物生產的基本過程。(2)3目的基因的獲得：直接分離法；從基因文庫中篩選；逆轉錄法；人工合成法。4目的基因與運載體的體外重組：常用載體；目的基因與運載體的體外重組。5重組分子導入受體細胞；導入方法；影響轉化的因素；陽性重組體的篩選。(2)6基因表達：大腸桿菌中的基因表達；真核基因在原核生物中的表達方式；真核基因在真核生物中的表達；真核基因在動物細胞中的表達。(2)7基因工程下游技術；下游技術的要求；基因工程菌的穩定性；基因工程菌發酵。8基因工程藥物的分離、純化：分離純化的基本過程；分離純化的技術。

9基因工程藥物的質量控制:材料的質量控制;培養過程的質量控制;純化工藝工程的質量控制。(2)第四章 動物細胞工程制藥（8學時）1 概述： 形態及生理特性。（2）生產用的動物細胞：生產用動物細胞的要求；生產用動物細胞的獲取。4 基因工程細胞的構建和篩選；真核細胞基因表達載體的構建；基因載體的導入和高效表達工程細胞株的篩選。（2）動物細胞的培養條件和培養基 6 動物細胞培養的基本方法（2）7 動物細胞大量培養的方法和操作方式 動物細胞生物反應器及檢測控制系統：攪拌式生物反應器；氣升式生物反應器；流化床生物反應器。（2）

第五章 抗體制藥（4學時）1概述

2單克隆抗體：制備；細胞融合；雜交瘤的培養、篩選及克隆化。（2）

3鼠源性單克隆抗體的改造：Ig分子的結構模式圖；結構改造；基因工程抗體。4抗體的應用：臨床檢驗；層析介質；導向藥物。（2）

第五篇：《生物技術制藥》課程教學過程的體會

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《生物技術制藥》課程教學過程的體會

《生物技術制藥》課程教學過程的體會

摘要：《生物技術制藥》是一門實踐性很強的綜合性課程，是農業院校生物工程、生物技術專業的重要課程之一。文章主要總結了筆者在多年教學過程中的一些體會，以便于更好地激發學生學習興趣，建立和實踐結合的教學模式，培養學生創新思維和創新意識。

關鍵詞：生物技術制藥；教學內容；教學方法

中圖分類號：G642 文獻標識碼：A 文章編號：1674-0432（2013）-04-0286-1

眾所周知醫藥衛生領域是現代生物技術最先登上的舞臺、發展最迅速、潛力也最大的一個領域。醫藥事業的發展對生物制藥教育和人才培養提出了更新的要求。生物技術制藥內容較多、基礎理論性與實踐性都較強。筆者針對該學科的特點，通過對生物技術制藥的教學方法等方面進行調整，教學方法上結合了多種方式，取得了良好的效果。

生物技術制藥的學科特點

生物技術制藥雖然是一門新興學科，但也是一門綜合性學科，涉及到細胞生物學、生物化學、免疫學等生物學學科以及生物技術制藥、藥理學等藥學學科。本課程涉及的知識面廣，各知識點之間密切相關，不僅包括與生物技術相關的一些基本理論，還包括與藥物制劑、藥物質量控制等相關藥學知識。

修訂教學大綱、更新教學內容

為將教學改革思路融入課程教學當中，進一步明確課程教學要求，不斷提高教育教學質量，我們在總結原《教學大綱》執行情況、分析相關課程的教學內容，結合該領域中的理論和實踐的新進展、新技術修訂教學大綱。以“強調知識更新，優化教學內容和縮減教學時數”為指導思想，使內容豐富，結構系統完整，既注重少而精，又注重由淺入深，循序漸進。在修訂過程中遵循了以下原則：

（1）適應性。教學大綱應符合學校對生物專業辦學定位、專業培養目標、培養規格、層次對教學內容的特殊要求。（2）前瞻性。教

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學大綱應較好地反映生物技術制藥所在領域的先進成果及其發展趨勢，充分體現教學改革的成果，為學生的自主發展和進一步深造及教師不同教學風格的展現留有發展的空間。（3）一致性。先承后續、相關課程的教學內容安排要求協調一致，以減少有關知識講授的簡單重復。（4）協調性。教學大綱修訂要處理好知識傳授、能力培養和素養提升的關系，做到三者的協調統一。

教學方法、方式的優化

3.1 啟發式教學

傳統的板書講授方式使學生對教書的認識被無形中的限制為照本宣科、讓他自己看書也能看懂的過程。因此，在我們的實際教學過程中，應注意將課程本身應用性強、結合實際緊密的特點貫穿在整個教學過程中，以基礎性，發展性知識為主線，一般性知識為輔助的教學原則，引導學生邊學邊想邊分析，并通過課堂提問來激發學生的思維活動，培養學生的想象力和獨立思考的能力，使教與學兩方面緊密結合起來。禽流感、SARS等病毒引發全國范圍重要疫情的時候也恰好是目前學生經歷過的事情，采用這樣活生生的例子來講授疫苗和藥物開發能夠讓學生有更深刻的感受，教學活動是教與學兩方面構成，只有將教師的講授和學生的思維活動有機結合起來，學生才會對所學的知識記憶深刻、才會自覺地去思考。

3.2 探究式教學

探究式學習具有學生參與度高，啟發性強，利于提高學生綜合素質等特點，是近年來廣受重視的教學方式。通過這種學生間小組合作解決給定問題的過程中，鍛煉了學生團隊精神，也鍛煉了學生查閱文獻和組織文獻的能力，更鍛煉了學生的語言組織能力和宣講能力，進而鍛煉學生們與人交流的能力；同時還補充了教師在課堂上不能充分覆蓋的知識點，對豐富教師的知識結構也起到了很好的作用。

3.3 加強現代化信息技術的應用

運用集圖、文、聲于一體的現代信息多媒體教學模式來指導生物技術制藥教學工作，充分發揮現代信息技術的特點，使其直觀化、形象化，增強學習效果。比如為提高教學質量，加強學生能力培養，通過視頻了解基因工程乙肝疫苗、胃病疫苗、禽流感疫苗生產的原理及

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生產工程，真實地再現了工廠實際生產操作過程，有利于學生今后在相關行業盡早地適應工作需要。通過給學生觀看部分教學多媒體錄像，有目的性的拋出一些問題，讓大家帶著問題去觀看，這樣有的放矢，可以使學生對問題的理解更為透徹、深入。同時充分利用各種信息資源庫，或者直接訪問數字圖書館中的內容，獲得學科的最新信息，從而更好的把握教學內涵，了解該學科發展動態。

充分結合試驗教學，推動理論學習

理論教學和實驗教學是生物技術制藥中不可分割的兩個方面，所以要引導學生重視實驗，提高實驗教學質量。比如讓學生根據實際條件自行設計試驗方案，交由老師統一審定試驗的可行性并進行修訂，然后由學生按照修訂后的方案執行整個試驗過程并提交完整試驗報告，教師根據學生從設計到實施到完成報告整個過程的表現進行綜合、全面評價。還可以組織學生深入到一些制藥公司進行實地觀看生物技術制藥等的生產全過程，增強學生的感性認識，縮短實驗室教學與生產實踐之間的距離。

近年，社會對制藥工程人才的需求已發生一些變化，尤其是提高了對動手能力的要求，能完成相關的工作，其次要有綜合運用的能力，能將理論與實踐有機結合并不斷創新的能力。在5年的教學工作中，也逐漸品味出教與學的關系、從不同的角度和位置探索促進二者共進的方法。希望能有效促進學生學習的主動性和積極性，提高其動手能力和綜合運用能力，有利于學生更好的適應將來社會和工作的需求。

參考文獻

[1] 任長松著.探究式學習――學生知識的自主建構[M].教育科學出版社，2005，2：5.[2] 翟西峰，王之緯.藥劑學教學中應重視學生創新能力的培養.衛生職業教育，2002，20（12）：47.[3] 張惠斌.未來藥學的發展趨勢及藥學人才培養的要求.藥學教育，200，2：1.[4] 夏煥章，熊宗貴.生物技術制藥（第2版）[M].北京：高等教育出版社，1999.作者簡介： 王媛媛（1978-）女，博士，沈陽農業大學生物科技

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學院講師，研究方向：生物工程。

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