最新國家開放大學(xué)電大《植物生理學(xué)》形考任務(wù)4試題及答案

形考作業(yè)4

提交實驗報告

植物生理學(xué)實驗報告

實驗題目

葉綠素a、葉綠素b含量測定

日期

班級

姓名

【實驗?zāi)康摹?/p>

熟悉在未經(jīng)分離的葉綠素溶液中測定葉綠素a和葉綠素b的方法及其計算

【實驗原理】

葉綠素提取液中同時含有葉綠素a和葉綠素b，二者的吸收光譜雖有不同，但又存在著明顯的重疊，在不分離葉綠素a和葉綠素b的情況下同時測定葉綠素a和葉綠素b的濃度，可分別測定在663nm和645nm（分別是葉綠素a和葉綠素b在紅光區(qū)的吸收峰）的光吸收，然后根據(jù)Lambert-Beer定律，計算出提取液中葉綠素a和葉綠素b的濃度。

A663=82.04ρa+9.27ρb（1）

A645=16.75ρa+45.60ρb

（2）

公式中ρa為葉綠素a的濃度，ρb為葉綠素b濃度（單位為g/L），82.04和9.27　分別是葉綠素a和葉綠素b在663nm下的比吸收系數(shù)（濃度為1g/L，光路寬度為1cm時的吸光度值）；16.75和45.60分別是葉綠素a和葉綠素b在645nm下的比吸收系數(shù)。即混合液在某一波長下的光吸收等于各組分在此波長下的光吸收之和。

將上式整理，可以得到下式：

ρa=0.0127A663-0.00269A645（3）

ρb=0.0229A645-0.00468A663（4）

將葉綠素的濃度改為mg/L，則上式變?yōu)椋?/p>

ρa=12.7A663-2.69A645（5）

ρb=22.9A645-4.68A663（6）

ρT=ρa+ρb=8.02A663+20.21A645（7）

ρT為葉綠素的總濃度

【實驗器材】

1、實驗儀器:分光光度計、離心機、天平、剪刀、研缽、漏斗、移液管

2、實驗藥品：丙酮、碳酸鈣

3、實驗材料：植物葉片：①陸生花生：水生花生

②小葉黃楊新葉：小葉黃楊老葉

【實驗步驟】

1、色素的提取

取新鮮葉片，剪去粗大的葉脈并剪成碎塊，稱取0.5g放入研缽中加純丙酮5ml，少許CaCO3和石英砂，研磨成勻漿，再加80%丙酮5ml，將勻漿轉(zhuǎn)入離心管，并用適量80%丙酮洗滌研缽，一并轉(zhuǎn)入離心管，離心5min后棄沉淀，上清液用80%丙酮定容至20ml。

2、測定OD值

取上述色素提取液1ml，加80%丙酮4ml稀釋后轉(zhuǎn)入比色杯中，以80%丙酮為對照，分別測定663nm、645nm處的OD值。

4、計算

按式（5）、（6）、（7）分別計算色素提取液中葉綠素、葉綠素及葉綠素的濃度。再根據(jù)稀釋倍數(shù)分別計算每克鮮重葉片中色素的含量。

【實驗結(jié)果】

水花生（陸生）

水花生（水生）

Ρa(mg/L)

2.848

4.433

ρb(mg/L)

1.098

1.258

ρT(mg/L)

3.946

5.691

葉綠素a含量(mg/g鮮重)

0.1424

0.22165

葉綠素b含量(mg/g鮮重)

0.0549

0.0629

葉綠素總含量(mg/g鮮重)

0.1973

0.85065

珊瑚樹（新葉）

珊瑚樹（成熟葉）

Ρa(mg/L)

4.026

5.682

ρb(mg/L)

1.408

2.310

ρT(mg/L)

5.434

7.992

葉綠素a含量(mg/g鮮重)

0.2013

0.2841

葉綠素b含量(mg/g鮮重)

0.0704

0.1155

葉綠素總含量(mg/g鮮重)

0.2717

0.3996

【實驗注意事項】

1、學(xué)會自己設(shè)計組合來進行實驗研究

2、實驗時樣品要標(biāo)清楚，不能混淆

3、學(xué)會如何使用分光光度計