DF-1雞胚成纖維傳代細(xì)胞的染色體制備及核型分析、致瘤性試驗(yàn)研究方案

材料與方法 細(xì)胞 DF-1細(xì)胞、CEF細(xì)胞、Hela細(xì)胞。裸鼠 2月齡（或體重18～22g）、或乳鼠（3~5日齡）、或小鼠（8~10g）。細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)液 細(xì)胞生長(zhǎng)液為無(wú)血清培養(yǎng)基。細(xì)胞染色體制備和核型分析

4.1 染色體標(biāo)本制備 按常規(guī)方法分別將DF1細(xì)胞進(jìn)行秋水仙素處理、細(xì)胞消化與低滲處理、細(xì)胞固定與在固定、滴片與染色。

4.2 染色體特征及數(shù)目、細(xì)胞核型分析 取有絲分裂中期的細(xì)胞進(jìn)行姬母薩染色檢查，（總共需要150個(gè)視野的圖片）。細(xì)胞致瘤性試驗(yàn)

5.1 細(xì)胞樣品的制備 按常規(guī)方法制備好DF-1細(xì)胞。

5.2 陽(yáng)性對(duì)照細(xì)胞 將Hela細(xì)胞經(jīng)胰酶消化分散，離心收集細(xì)胞。制成含活細(xì)胞數(shù)約106cells/0.2ml的細(xì)胞懸液。

5.3 陰性對(duì)照細(xì)胞 按常規(guī)方法制備的雞胚成纖維細(xì)胞（CEF），制成含活細(xì)胞數(shù)約107cells/0.2ml的細(xì)胞懸液。

5.4 致瘤性試驗(yàn)

5.4.1和5.4.2任選其一。

5.4.1 將細(xì)胞樣品分別皮下注射裸鼠30只，每只107 cells /0.2ml細(xì)胞。

5.4.2 取3~5日齡乳鼠或8~10g小鼠，用抗胸腺血清處理后，將細(xì)胞樣品分別皮下接種18只，每只107 cells /0.2ml細(xì)胞。

5.4.3 陽(yáng)性對(duì)照 每只裸鼠皮下或肌肉注射106 cells /0.2ml，共注射5只裸鼠，為陽(yáng)性對(duì)照。（如以乳鼠或小鼠試驗(yàn)，注射劑量不變，數(shù)量為3只）。

5.4.4 陰性對(duì)照：每只裸鼠皮下注射107 cells /0.2ml，共注5只裸鼠，為陰性對(duì)照。（如以乳鼠或小鼠試驗(yàn)，注射劑量不變，數(shù)量為3只）。

5.5 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物檢查及處理

5.5.1 逐日觀察至14日，檢查有無(wú)結(jié)節(jié)或腫瘤形成。如有結(jié)節(jié)或可疑病灶，應(yīng)在觀察至少7～14日后剖檢，進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。

5.5.2 未發(fā)現(xiàn)結(jié)節(jié)的動(dòng)物，對(duì)其中的一半動(dòng)物觀察21日后剖檢，另外一半動(dòng)物觀察12周后剖檢，觀察各個(gè)淋巴結(jié)核器官中是否形成結(jié)節(jié)，如有懷疑，應(yīng)進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。不應(yīng)有移植瘤形成。

5.5.3 陽(yáng)性對(duì)照組觀察21日后，應(yīng)出現(xiàn)明顯的腫瘤。

5.5.4 陰性對(duì)照組觀察21日，應(yīng)為陰性。

試驗(yàn)要求提供以上的圖片