第一篇：過敏性哮喘血清免疫學(xué)論文

1資料與方法

1.1一般資料

2012年10月—2013年10月，選取我院兒科門診收治的穩(wěn)定期輕中度過敏性哮喘病兒62例。過敏性哮喘診斷參照兒童支氣管哮喘診斷與防治指南（2008年修訂）[1]的診斷與分度標(biāo)準(zhǔn)。入選條件：

①年齡5~14歲；

②有典型的常年性支氣管哮喘病史，伴或不伴變應(yīng)性鼻炎；

③經(jīng)體外過敏原檢測(cè)，均對(duì)戶塵螨和粉塵螨過敏，其特異性IgE為Ⅲ~Ⅵ級(jí)；

④穩(wěn)定期輕中度病兒；

⑤4周內(nèi)未使用過全身性糖皮質(zhì)激素，1周內(nèi)未吸入糖皮質(zhì)激素。

排除標(biāo)準(zhǔn)：

①患免疫性疾病或心血管病病兒；

②重度哮喘病兒；

③曾進(jìn)行過脫敏治療的病兒；

④患其他變應(yīng)性疾病病兒。按治療方法的不同分為治療組32例和對(duì)照組30例。治療組男15例，女17例；年齡5~12歲，平均年齡（7.6±1.8）歲。對(duì)照組男16例，女14例；年齡5~14歲，平均年齡（7.9±2.4）歲。

1.2治療方法

對(duì)照組按常規(guī)進(jìn)行對(duì)癥治療。治療組在常規(guī)治療的同時(shí)給予粉塵螨滴劑（暢迪，浙江我武生物科技有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字S20060012）舌下含服（將粉塵螨滴劑滴于舌下，含1~3min后吞咽）。該滴劑按濃度不同分為1~4號(hào)（粉塵螨變應(yīng)原活性蛋白濃度分別為1、10、100、333mg/L），1、2、3號(hào)分別服用1周，從1號(hào)開始，共3周，每周第1~7天用量分別為1、2、3、4、6、8、10滴；從第4周開始服用4號(hào)，每天3滴，直到滿1年。

1.3檢測(cè)指標(biāo)及方法

分別于治療前和治療1年后采集病兒靜脈血，提取血清。應(yīng)用UniCAP100儀器，采用熒光酶聯(lián)免疫法定量檢測(cè)治療前后血清總IgE（TIgE）、戶塵螨SIgG4、粉塵螨SIgG4及嗜酸性粒細(xì)胞陽離子蛋白（ECP）的水平。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。計(jì)量資料結(jié)果以x±s表示，治療前后比較用配對(duì)t檢驗(yàn)，組間比較用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。以P＜0。05為差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1組內(nèi)比較

治療組病兒治療前后血清TIgE濃度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；治療后戶塵螨SIgG4和粉塵螨SIgG4水平升高，ECP水平下降，治療前后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t＝2.178~12.707，P＜0.05）。對(duì)照組病兒治療前后血清上述指標(biāo)濃度差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

2.2組間比較治療前兩組各指標(biāo)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。治療后治療組戶塵螨SIgG4、粉塵螨SIgG4水平與對(duì)照組相比差異有顯著意義（t＝6.060、5.582，P＜0.05），而ECP和TIgE水平與對(duì)照組相比差異無顯著性（P＞0.05）。見表1。

3討論

SIT是針對(duì)IgE介導(dǎo)的變應(yīng)性疾病的對(duì)因治療方法，可以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生長(zhǎng)期的臨床免疫耐受[2]。SIT對(duì)IgE介導(dǎo)的變應(yīng)性疾病有效，尤其適用于藥物治療無效的人群[3]。SIT的具體機(jī)制尚不清楚。近年來研究表明，SIT后產(chǎn)生IgG尤其是IgG4抗體增多[2Ｇ4]。IgG4抗體能與IgE競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗原，阻斷sIgE與相應(yīng)受體的結(jié)合，從而阻斷IgE介導(dǎo)的變應(yīng)原提呈及后續(xù)的效應(yīng)Th2細(xì)胞活化[5Ｇ6]。IgG4抗體在阻斷嗜堿性粒細(xì)胞組胺釋放中也有功能性作用[7]。IgG4不能形成免疫復(fù)合物，不能固定補(bǔ)體，是一種非炎癥性免疫球蛋白。總之，IgG4能夠有效抑制變應(yīng)原和IgE相互作用，抑制其他類型免疫球蛋白復(fù)合物的形成，在免疫反應(yīng)中有抗炎作用。本文結(jié)果顯示，接受SLIT后，過敏性哮喘病兒血清sIgG4水平較治療前顯著增高，與肖曉雄等[8]的研究結(jié)果一致。這表明粉塵螨滴劑SLIT對(duì)病兒體內(nèi)的免疫狀態(tài)有明顯的調(diào)節(jié)作用，IgG4能競(jìng)爭(zhēng)性阻斷sIgE介導(dǎo)的過敏性哮喘發(fā)生發(fā)展的免疫病理進(jìn)程，從而有利于改善哮喘病兒的癥狀和體征。粉塵螨滴劑SLIT所產(chǎn)生的IgG4抗體能同時(shí)識(shí)別戶塵螨抗原和粉塵螨抗原，從而使機(jī)體產(chǎn)生對(duì)這兩種致敏原的免疫保護(hù)作用，對(duì)屋塵螨和粉塵螨的過敏性疾病同時(shí)有效。

但由于本研究觀察時(shí)間較短，對(duì)于更長(zhǎng)時(shí)間的治療以及治療結(jié)束后血清IgG4水平增高的效果如何，及其與臨床癥狀體征的相關(guān)性，能否作為評(píng)價(jià)SLIT有效性的客觀指標(biāo)，還有待進(jìn)一步研究。ECP是嗜酸性粒細(xì)胞釋放的毒性蛋白之一，在過敏性哮喘的病理生理過程中起重要作用。SIT可減少嗜酸性粒細(xì)胞聚集和活化，文獻(xiàn)報(bào)道，過敏性鼻炎病兒經(jīng)SLIT后血清及靶器官ECP水平顯著低于治療前[9]。但也有研究結(jié)果顯示，SIT治療前后血清ECP水平無差異[10]。本文結(jié)果顯示，過敏性哮喘病兒經(jīng)1年粉塵螨滴劑SLIT后ECP水平下降，但與對(duì)照組相比差異無顯著意義。目前尚未證實(shí)ECP水平與SIT療效有明確的相關(guān)性，其在SIT療效評(píng)估中的作用有限。KIM等[11]對(duì)過敏性鼻炎的研究顯示，TIgE在SIT前后差異無顯著性。本研究中哮喘病兒粉塵螨滴劑SLIT前后TIgE差異也無顯著性。提示血清TIgE水平不能作為評(píng)估SIT療效的指標(biāo)。本文對(duì)照組治療前后各指標(biāo)差異無顯著性，表明常規(guī)治療不能影響過敏性疾病的基礎(chǔ)機(jī)制，不能阻斷過敏性疾病的發(fā)生與發(fā)展。SLIT對(duì)兒童過敏性哮喘安全、有效，采用SLIT聯(lián)合藥物對(duì)癥治療的效果優(yōu)于單純使用對(duì)癥藥物治療[12]。

綜上所述，過敏性哮喘病兒經(jīng)粉塵螨滴劑SLIT1年后，血清屋塵螨和粉塵螨特異性IgG4濃度明顯增高，血清TIgE水平和ECP水平無明顯變化。停止SLIT后塵螨過敏性哮喘病兒的免疫學(xué)改變情況還需要更長(zhǎng)時(shí)間的監(jiān)測(cè)和評(píng)價(jià)。

第二篇：細(xì)胞免疫學(xué)論文

【摘要】 作為一種具有靶向性的生物大分子，單克隆抗體始終是人們關(guān)注的熱點(diǎn)之一，被廣泛用于治療腫瘤、病毒感染和抗移植排斥等。但鼠源單克隆抗體的臨床應(yīng)用受限于誘導(dǎo)產(chǎn)生人抗鼠抗體、腫瘤滲入量低、親和力低和半衰期短等。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展及其向各學(xué)科的滲透，通過基因操作技術(shù)對(duì)抗體進(jìn)行改造，可使其適用于多種疾病的治療。抗體人源化已經(jīng)成為治療性抗體的發(fā)展趨勢(shì)，同時(shí)各種抗體衍生物也不斷涌現(xiàn)，它們從不同角度克服了抗體本身的應(yīng)用局限，也為治療人類疾病提供了利器。本文簡(jiǎn)要介紹上述技術(shù)的基本原理、特點(diǎn)和治療性抗體的研究進(jìn)展。

【關(guān)鍵詞】人--鼠嵌合抗體 生物導(dǎo)彈 人源化抗體 雙特異性抗體 【正文】

一、治療性抗體技術(shù)的研究背景 2000年前，人們將自白喉?xiàng)U菌培養(yǎng)上清液中分離到的可溶性毒素注入馬體內(nèi)，發(fā)現(xiàn)得到的抗血清可以治療白喉，這是第一個(gè)用抗體治療疾病的例子。隨著免疫學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，以及抗體基因結(jié)構(gòu)的闡明，DNA 重組技術(shù)開始被用于抗體的改造，人們可以根據(jù)需要對(duì)以往的鼠抗體進(jìn)行相應(yīng)的改造，以消除抗體應(yīng)用的不利性狀或增加新的生物學(xué)功能，還可用新的技術(shù)重新制備各種形式的重組抗體，標(biāo)志著基因工程抗體時(shí)代的來臨。自第一個(gè)基因工程抗體———人--鼠嵌合抗體于1984 年誕生以來，新型基因工程抗體不斷出現(xiàn)，包括人源化抗體、單價(jià)小分子抗體（Fab、單鏈抗體、單域抗體等）、多價(jià)小分子抗體（雙鏈抗體、三鏈抗體、微型抗體等）、某些特殊類型的抗體（雙特異抗體、抗原化抗體、細(xì)胞內(nèi)抗體等）及抗體融合蛋白（免疫毒素、免疫黏連素等）等。用于制備新型抗體的噬菌體抗體庫技術(shù)成為繼雜交瘤技術(shù)之后生命科學(xué)研究中又一突破性進(jìn)展。在噬菌體抗體庫的基礎(chǔ)上，近年來又發(fā)展了核糖體展示抗體庫技術(shù)，利用核糖體展示技術(shù)篩選抗體的整個(gè)過程均在體外進(jìn)行，不經(jīng)過大腸桿菌轉(zhuǎn)化步驟，因此可以構(gòu)建高容量、高質(zhì)量的抗體庫，更易于篩選高親和力抗體和利用體外進(jìn)行的方法對(duì)抗體性狀進(jìn)行改造，核糖體展示抗體庫技術(shù)代表了抗體工程的未來發(fā)展趨勢(shì)。

二、各種抗體治療作用的機(jī)理與應(yīng)用 2.1 抗體的基本組成

抗體的基本單位是由4 條肽鏈組成的對(duì)稱結(jié)構(gòu)，包括2 條相同的重鏈和2 條相同的輕鏈。重鏈和輕鏈分別由可變區(qū)和恒定區(qū)組成。可變區(qū)中的互補(bǔ)決定區(qū)與抗體和抗原結(jié)合的多樣性直接有關(guān)，而恒定區(qū)的結(jié)構(gòu)與抗體的生物學(xué)活性相關(guān)。在少數(shù)情況下，抗體與抗原結(jié)合后可以對(duì)機(jī)體直接起保護(hù)作用，如用抗體中和毒素的毒性，但在多數(shù)情況下需要通過效應(yīng)功能滅活或清除外來抗原。抗體的效應(yīng)功能有2 類，一類是通過激活補(bǔ)體，產(chǎn)生多種生物學(xué)效應(yīng)，如細(xì)胞裂解、免疫黏附及調(diào)理作用，促進(jìn)炎癥反應(yīng)；另一類是通過抗體分子中的Fc 段與細(xì)胞表面Fc 受體的相互作用，通過其Fc段分別介導(dǎo)調(diào)理作用或抗體依賴性細(xì)胞毒作用。此外，治療性抗體的效應(yīng)和作用機(jī)理直接取決于它所識(shí)別的抗原決定簇，例如治療非何杰金氏B細(xì)胞淋巴瘤的抗CD20 抗體能影響細(xì)胞膜上離子通道的功能，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞的分化、增殖和凋亡。

由于多克隆抗體本身的局限性，所以直到單克隆抗體出現(xiàn)，抗體用于抗腫瘤治療才真正得以實(shí)現(xiàn)。自從1978 年成功制備出第一株抗黑色素瘤單抗以來，相繼出現(xiàn)了抗胃腸癌、肺癌、乳腺癌、白血病、淋巴瘤、胰腺癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤等的單克隆抗體。單克隆抗體殺傷腫瘤細(xì)胞的機(jī)制可能是抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞效應(yīng)（ADCC）及補(bǔ)體依賴性細(xì)胞溶解作用（CDC）。單克隆抗體與藥物、毒素或放射性物質(zhì)偶聯(lián)，成為一種全新的“生物導(dǎo)彈”，可用于導(dǎo)向治療，已越來越受到重視。另外，用單抗給予T 細(xì)胞所必需的重要表面信號(hào)分子交聯(lián)的刺激信號(hào)和生長(zhǎng)信號(hào)，體外誘導(dǎo)腫瘤特異性細(xì)胞毒T 淋巴細(xì)胞，可用于特異性、被動(dòng)性的免疫治療。

自身免疫病多與單或寡克隆抗體的異常增多有關(guān)。利用基因工程技術(shù)可制備針對(duì)這些異常抗體獨(dú)特型的抗抗體或與自身抗體結(jié)合并抑制其作用，或制備能模擬抗原的內(nèi)影像抗體用于中和體內(nèi)的自身抗體。目前針對(duì)不同的發(fā)病機(jī)制，治療方法趨于多樣化。許多變態(tài)反應(yīng)與IgE 有關(guān)。Fc 片段可與變應(yīng)原特異性IgE競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合嗜堿性粒細(xì)胞，封閉變應(yīng)原介導(dǎo)的組胺釋放。此外，還可生產(chǎn)出與患者IgE 競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合變應(yīng)原的Fab 樣分子。

2.2 免疫毒素

免疫毒素是一種毒素肽和細(xì)胞選擇性靶向配體連接的融合蛋白，它能通過靶向結(jié)構(gòu)域的特異結(jié)合功能使毒素傳遞到靶細(xì)胞并與之作用進(jìn)而殺死腫瘤細(xì)胞。早期的免疫毒素是由無修飾生物毒素和鼠源抗體連接而成的，連接的方式常為化學(xué)偶聯(lián)法。由于非人源的毒素和鼠源抗體導(dǎo)致的免疫排斥反應(yīng)，以及低親和力和無靶向特異性，使免疫毒素?zé)o法在臨床中得到運(yùn)用。

新型免疫毒素是將毒素肽和細(xì)胞選擇性靶向配體都進(jìn)行改造后，再用工程菌或工程細(xì)胞實(shí)現(xiàn)高效表達(dá)。細(xì)胞選擇性靶向配體使用了工程抗體、轉(zhuǎn)鐵蛋白、表皮生長(zhǎng)因子以及IL-2等。抗體的改造主要集中在降低免疫原性、提高親和力和增強(qiáng)實(shí)體腫瘤滲入率等方面，包括改用小分子工程抗體、人源化抗體、人源抗體和突變的高親和力抗體等。

2.3 抗體－細(xì)胞因子融合蛋白

細(xì)胞因子能激活某些免疫細(xì)胞，包括單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞、T細(xì)胞和B細(xì)胞等。應(yīng)用細(xì)胞因子治療癌癥能夠引起免疫應(yīng)答，但這種免疫反應(yīng)是非特異的，常產(chǎn)生全身毒性。有人嘗試使用抗體工程技術(shù)將細(xì)胞因子與抗體連接形成融合蛋白，通過靶向作用，細(xì)胞因子在腫瘤組織的靶細(xì)胞上聚集，在局部殺傷腫瘤細(xì)胞，而非特異性毒性將減少或消失。常用的細(xì)胞因子包括IL-

2、IL-12和GM-CSF 等，融合的部位可以是全長(zhǎng)型抗體或ScFv的N端或C端。抗體－細(xì)胞因子融合蛋白作為一種新型的腫瘤免疫治療藥物，其抗體功能域可引導(dǎo)細(xì)胞因子濃集在腫瘤組織的微環(huán)境中，之后抗體部分直接抑制腫瘤細(xì)胞活性，并誘導(dǎo)二次免疫應(yīng)答，多重作用的相加使抗體－細(xì)胞因子融合蛋白對(duì)腫瘤的抑制作用明顯強(qiáng)于單獨(dú)使用抗體或細(xì)胞因子。由于全長(zhǎng)型抗體Fc上存在兩個(gè)效應(yīng)細(xì)胞結(jié)合位點(diǎn)，功能更為強(qiáng)大，其中一個(gè)位點(diǎn)與細(xì)胞因子結(jié)合，激活效應(yīng)細(xì)胞，另一個(gè)與FcγR結(jié)合，引發(fā)抗體依賴細(xì)胞的細(xì)胞毒作用(ADCC)。

三、治療性抗體的制備技術(shù)與研究意義

由識(shí)別一種抗原決定簇的細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的均一性抗體稱為單克隆抗體，可視為第二代抗體。由于其具有特異性高、親和力強(qiáng)、效價(jià)高、血清交叉反應(yīng)少等優(yōu)點(diǎn)，已經(jīng)在基礎(chǔ)研究、臨床診斷及治療、免疫預(yù)防等領(lǐng)域發(fā)揮了重要作用。在治療上，單克隆抗體主要用于抗腫瘤、抗器官移植排斥反應(yīng)、抗感染、解毒等。近年來將單抗與核素、各種毒素（如白喉外毒素或蓖麻毒素）或藥物通過化學(xué)偶聯(lián)或基因重組制備成導(dǎo)向藥物，用于腫瘤的治療成為研究的重點(diǎn)。制備單克隆抗體的常規(guī)方法是免疫小鼠，雜交瘤可在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中產(chǎn)生無限量單克隆抗體。對(duì)大多數(shù)雜交瘤來說，現(xiàn)已可用體外方法生產(chǎn)單克隆抗體而無需應(yīng)用動(dòng)物。體外單克隆抗體生產(chǎn)系統(tǒng)已有多種，但大規(guī)模生產(chǎn)治療性單克隆抗體需用中空纖維系統(tǒng)，其成功與否取決于雜交瘤的固有特性，如細(xì)胞生長(zhǎng)和單克隆抗體生產(chǎn)能力等。因此，大量生產(chǎn)以供臨床研究應(yīng)用還有困難，但有幾種方法可以解決這些問題，如嵌合單克隆抗體、人源化單克隆抗體和全人單克隆抗體的產(chǎn)生。其中，人源化抗體是一個(gè)重要的里程碑，并伴隨著一系列重大的技術(shù)革新，如PCR技術(shù)、抗體庫技術(shù)、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物等。人源化抗體的形式也從最初的嵌合抗體、改型抗體等逐步發(fā)展為今天的人抗體。抗體人源化已經(jīng)成為治療性抗體的發(fā)展趨勢(shì)，同時(shí)各種抗體衍生物也不斷涌現(xiàn)，它們從不同角度克服了抗體本身的應(yīng)用局限，也為治療人類疾病提供了更多利器。

人源化抗體是從鼠源單抗到全人抗體的過渡形式，在鼠單抗的基礎(chǔ)上，用人抗體恒定區(qū)置換鼠抗體的相應(yīng)部位，形成人鼠嵌合抗體。利用DNA重組技術(shù)將鼠單抗的輕、重鏈可變區(qū)基因插入含有人抗體恒定區(qū)的表達(dá)載體中，轉(zhuǎn)化哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)人鼠嵌合抗體，其人源化程度可達(dá)到70%左右。嵌合抗體完整地保留了異源單抗的可變區(qū)，最大限度地保持了其親和性，降低了免疫原性。美國(guó)食品藥品管理局（FDA）批準(zhǔn)的抗體藥物中有4個(gè)是嵌合抗體。但由于其整個(gè)可變區(qū)都是異源的，所以嵌合抗體的異源性還很明顯，解決HAMA的效果并不理想。

由于天然抗體主要是通過調(diào)理作用、ADCC 或依賴補(bǔ)體的細(xì)胞毒效應(yīng)起到殺傷靶細(xì)胞的作用，因此天然抗體的細(xì)胞毒效應(yīng)有限。下列幾種途徑可以增加抗體對(duì)靶細(xì)胞的殺傷，如免疫結(jié)合物、抗體細(xì)胞因子融合蛋白、雙特異性抗體、細(xì)胞內(nèi)抗體等。

雙特異性抗體亦稱雙功能抗體，是同一抗體的3 個(gè)抗原結(jié)合部位分別針對(duì)3 個(gè)不同的抗原，在結(jié)構(gòu)上是雙價(jià)的，而與抗原結(jié)合的功能是單價(jià)的。雙特異性抗體可以用化學(xué)交聯(lián)、細(xì)胞融合和基因工程等方法獲得。由于它可以同時(shí)與3 種抗原發(fā)生反應(yīng)，并使之交聯(lián)，因而可介導(dǎo)標(biāo)記物與靶抗原的結(jié)合，或使某種效應(yīng)分子定位于靶細(xì)胞；此外，又由于它與抗原結(jié)合的單價(jià)性，不易引起靶抗原的調(diào)變，從而可提高抗體的某些生物學(xué)效應(yīng)。雙特異性抗體重鏈的異質(zhì)性使其FC 片段與FC受體結(jié)合的能力明顯減弱，減少了該抗體在體內(nèi)的非特異性分布。雙特異性抗體的這些特性使它在診斷和治療上有廣泛的應(yīng)用前景。目前，作為治療腫瘤用的雙功能抗體常采用抗腫瘤相關(guān)抗原（TAA）及CD3 或抗TAA 及CD16，這類雙特異性抗體在

荷瘤動(dòng)物模型中無論是抑瘤試驗(yàn)還是殺傷試驗(yàn)均獲得了良好結(jié)果。無論采用何種免疫活性細(xì)胞的效應(yīng)分子，其殺傷均無MHC限制，這為臨床應(yīng)用提供了許多方便，目前已有一些雙功能抗體正在進(jìn)行臨床試驗(yàn)。

一般的抗體在細(xì)胞內(nèi)合成后分泌到胞外，如果在抗體的N端或C端加入引導(dǎo)序列，就能使抗體表達(dá)定位在亞細(xì)胞部位，如胞漿、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)或細(xì)胞核部位。這種在細(xì)胞內(nèi)合成并作用于細(xì)胞內(nèi)組分的抗體稱為細(xì)胞內(nèi)抗體或內(nèi)抗體。細(xì)胞內(nèi)抗體可以提供一種獨(dú)有的研究分子功能的新方法，它可以在細(xì)胞內(nèi)抑制病毒復(fù)制、抑制生長(zhǎng)因子受體或癌蛋白表達(dá)，因此有用于基因治療的前景，研究較多的是用細(xì)胞內(nèi)抗體抑制I型人類免疫缺損病毒I型（HIV-I）和抗腫瘤。

雙特異抗體是指具有兩種抗原結(jié)合特性的抗體，可同時(shí)結(jié)合兩個(gè)不同的抗原或抗原決定簇。與mAb相比，雙特異抗體具有以下優(yōu)點(diǎn)：(1)較低濃度即可殺傷或溶解腫瘤細(xì)胞；(2)對(duì)低表達(dá)或不表達(dá)腫瘤相關(guān)抗原的腫瘤細(xì)胞有殺傷或抑制作用；(3)激活結(jié)合的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞，發(fā)揮多種生物學(xué)效應(yīng)，協(xié)助殺傷腫瘤細(xì)胞。早期研制雙特異抗體的方法是采用細(xì)胞工程，即將兩株各自分泌不同特異性單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞再融合得到四源雜交瘤，或?qū)⒁恢觌s交瘤細(xì)胞與免疫的脾細(xì)胞融合得到三源雜交瘤，這兩種雜交瘤被稱為二次雜交瘤)。多倍雜交瘤細(xì)胞的穩(wěn)定性差，BsAb的產(chǎn)量少且活性低，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，臨床應(yīng)用時(shí)存在人抗鼠抗體免疫反應(yīng)(HAMA)，因此不適用于臨床。20世紀(jì)90年代起，基因工程和蛋白質(zhì)工程在抗體生產(chǎn)和改造中得到了成功應(yīng)用，由此產(chǎn)生了抗體工程。應(yīng)用抗體工程生產(chǎn)BsAb，具有分子量小、方法穩(wěn)定、可大量生產(chǎn)、成本顯著降低和操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)。

四、治療性抗體的研究方向與存在問題

抗體應(yīng)用于人類疾病的治療已有很長(zhǎng)的歷史，但其發(fā)展歷程是曲折的，自單克隆抗體;雜交瘤技術(shù)宣告誕生以來，歷經(jīng)多年反復(fù)。目前，F(xiàn)DA 已經(jīng)批準(zhǔn)21 個(gè)治療性單抗上市。近年來，科學(xué)界和醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)界都對(duì)治療性抗體的研究表現(xiàn)出越來越多的關(guān)注。人源化抗體和人抗體的出現(xiàn)為治療性抗體的廣泛應(yīng)用帶來了新的希望。但人抗體是否可以解決鼠抗體臨床應(yīng)用中出現(xiàn)的所有問題，還有待大量臨床試驗(yàn)的檢驗(yàn)。影響抗體免疫原性的因素很多，如抗原呈遞方式、次級(jí)信號(hào)系統(tǒng)以及患者的個(gè)體差異性等，而抗體的人源化只能解決一個(gè)方面的問題。同樣，抗體衍生物也會(huì)面臨諸如免疫原性、毒副作用等自身固有的問題，所以可行的發(fā)展方向是在完善人抗體技術(shù)的同時(shí)，推進(jìn)治療性小分子抗體衍生物的研究。根據(jù)臨床實(shí)際設(shè)計(jì)靈活的治療方案，使人源化抗體和抗體衍生物互為補(bǔ)充，達(dá)到最佳治療效果。從已上市的抗體藥物不難看出，未來的治療性抗體將朝著人源化和小型化發(fā)展，兩條途徑的結(jié)合將最大程度地克服鼠單抗的缺陷使抗體藥物得到更為深入和廣泛的應(yīng)用。

五、治療性抗體的發(fā)展前景

單克隆抗體技術(shù)的問世,使研究和生產(chǎn)治療性單抗藥物成為現(xiàn)實(shí)。隨著基因工程技術(shù)的發(fā)展,新型的重組抗體技術(shù)也隨之而生。

人們可以利用DNA重組技術(shù)對(duì)鼠源抗體進(jìn)行人源化改造、構(gòu)建合成或半合成抗體庫及噬菌體抗體庫,從中篩選獲得人源抗體,甚至利用轉(zhuǎn)基因小鼠直接獲得人源抗體。抗體藥物發(fā)展的趨勢(shì)也從鼠源、人-鼠嵌合、人源化到全人源。近年獲得批準(zhǔn)的抗體藥物以全人源為主。1996年至2008年間進(jìn)入臨床研究的人源化單克隆抗體中45%用于治療腫瘤,28%個(gè)用于治療免疫紊亂。抗體藥物的發(fā)展進(jìn)入研發(fā)、回報(bào)的良性循環(huán),成了國(guó)際制藥業(yè)爭(zhēng)奪的焦點(diǎn)。文章就治療性抗體發(fā)展的歷史、現(xiàn)狀、市場(chǎng)及未來展望作了簡(jiǎn)要綜述。利用抗體工程研制更有效的治療性抗體的前景非常光明盡管還存在很多問題。實(shí)踐已經(jīng)證明，許多新型工程抗體可以在原核或真核細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)高效表達(dá)，它們具有較長(zhǎng)的半衰期和生物學(xué)效應(yīng)，大多為ScFv、Fab或它們的多聚體，能夠有效進(jìn)入腫瘤細(xì)胞，具有比較理想的治療效果。新型抗體工程技術(shù)的不斷出現(xiàn)，將為抗體改造提供了強(qiáng)有力的技術(shù)平臺(tái)。相信不久的將來，治療性抗體會(huì)在人類疾病的治療中扮演重要的角色。

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第三篇：急診科內(nèi)科論文呼吸科論文：呼吸科臨床藥師對(duì)哮喘患者的用藥監(jiān)護(hù)

急診科內(nèi)科論文呼吸科論文：

呼吸科臨床藥師對(duì)哮喘患者的用藥監(jiān)護(hù)

［摘要］哮喘患者易發(fā)生異常免疫反應(yīng)，因此，對(duì)哮喘患者實(shí)施藥物治療監(jiān)護(hù)尤為重要。筆者作為一名呼吸科臨床藥師，在參與臨床藥物治療過程中，總結(jié)了幾點(diǎn)對(duì)哮喘患者的藥物監(jiān)護(hù)體會(huì)。

［關(guān)鍵詞］哮喘;特應(yīng)性體質(zhì);不良反應(yīng);藥學(xué)監(jiān)護(hù)

支氣管哮喘(簡(jiǎn)稱哮喘)是一種慢性呼吸道疾患，由多種細(xì)胞特別是肥大細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞參與的慢性氣道炎癥，患者常反復(fù)發(fā)作性喘鳴、胸悶、咳嗽、呼吸困難［1-2］。重者可危及生命。同時(shí)，哮喘患者多為家族特應(yīng)性體質(zhì)，易發(fā)生異常免疫反應(yīng)，如果藥物選用不當(dāng)，可能會(huì)發(fā)生藥物過敏反應(yīng)，甚至可能再次誘發(fā)哮喘的急性發(fā)作。筆者作為呼吸科臨床藥師，在參與臨床工作過程中，總結(jié)了幾點(diǎn)對(duì)哮喘患者的藥物監(jiān)護(hù)體會(huì)。

1重視對(duì)哮喘患者的問診

很多哮喘患者具有特應(yīng)性體質(zhì)，好發(fā)過敏性疾病或出現(xiàn)藥物過敏。遺傳也是哮喘的根源性因素［3］。因此，藥師在提出用藥方案前，應(yīng)詳細(xì)詢問患者既往病史、食物藥物過敏史、藥物治療史、家族史等，特別是對(duì)哮喘診斷不明確的患者，更要仔細(xì)問診。一些老年患者不能正確表述藥物治療史和過敏史，個(gè)別患者是在出現(xiàn)過敏反應(yīng)后才回憶起既往使用該藥過敏，因此，藥師問診中不要只簡(jiǎn)單問患者是否有藥物過敏，而應(yīng)將易導(dǎo)致過敏和誘發(fā)哮喘的藥物如青霉素、頭孢菌素、鏈霉素、復(fù)方新諾明、阿司匹林片、吲噠帕胺片等舉例說明，用以提示患者。藥師只有全面掌握患者藥物治療史、藥物過敏史等，才能更好地預(yù)防和避免發(fā)生藥物不良反應(yīng)。

2發(fā)生藥物不良反應(yīng)要采取積極措施

哮喘患者應(yīng)用法莫替丁片出現(xiàn)過敏反應(yīng):一例69歲男性患者，主因咳嗽反復(fù)發(fā)作11年，加重伴發(fā)熱1 d，于2009年5月28日由我院急診收入呼吸科治療。該患者2002年已由我院呼吸科診斷為“支氣管哮喘”。此次入院診斷為支氣管哮喘急性發(fā)作。并給予抗感染、平喘、抗過敏及對(duì)癥治療，應(yīng)用了注射用頭孢美唑鈉、茶堿緩釋片、茶堿注射液、強(qiáng)的松片、孟魯司特鈉等。治療第4天，患者咳喘癥狀未得到較好控制，遂停用口服激素，改為注射用甲潑尼龍琥珀酸鈉40 mg靜點(diǎn)，1次/d，同時(shí)給予法莫替丁片20 mg(上海信宜制藥，批號(hào):081202)口服，2次/d，用于預(yù)防激素引起的胃潰瘍出血。次日，患者服用法莫替丁片20 mg后，開始靜脈滴注注射用頭孢美唑，約15 min后，患者主訴腹部及四肢瘙癢，但未見明顯皮疹，考慮注射用頭孢美唑過敏，立即停用該藥，并給于氯雷他定10 mg，口服抗過敏治療，約30 min后患者瘙癢癥狀緩解。患者睡前再次服用法莫替丁片20 mg，約10 min后，再次出現(xiàn)腹部及四肢瘙癢，經(jīng)治療癥狀緩解。停用法莫替丁片，改用硫糖鋁混懸液1 g口服，3次/d，其他治療不變，患者未再出現(xiàn)藥物不良反應(yīng)。上述ADR的發(fā)生過程，基本確定為法莫替丁片引起的不良反應(yīng)。

法莫替丁片在呼吸科使用較多，主要原因:①研究表明，哮喘患者中胃食管反流病(Gastroesoph-ageal reflux disease，GERD)高達(dá)34%～89%，而普通人群中發(fā)生率為8%左右，GERD與支氣管哮喘發(fā)病之間的關(guān)系見于2種情況:一種是GERD誘發(fā)哮喘(其發(fā)病機(jī)制可能與迷走神經(jīng)反射或胃內(nèi)容物微量誤吸有關(guān));另一種情況是患支氣管哮喘在前，由于應(yīng)用各種平喘藥物松弛平滑肌，導(dǎo)致GERD［4］。伴胃食管反流的哮喘患者常常使用H2受體阻滯劑治療。②對(duì)有應(yīng)用全身糖皮質(zhì)激素治療指征的中重度哮喘急性發(fā)作的患者，可用H2受體阻滯劑防治消化性潰瘍。③法莫替丁片不良反應(yīng)較少，不抑制肝藥酶，因此，不影響茶堿等呼吸科常用藥物的代謝，使用較為安全［5－6］，常用于有呃逆、反酸等癥狀的消化性潰瘍患者。

筆者既往參與藥物治療的患者中，未發(fā)生過因使用法莫替丁片出現(xiàn)不良反應(yīng)的情況。通過查閱該藥不良反應(yīng)的相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道及H2受體拮抗劑與哮喘等文獻(xiàn)獲知，H2受體拮抗劑對(duì)GERD伴哮喘(特別是GERD為哮喘發(fā)作或/和加重誘因)及哮喘伴免疫功能低下、反復(fù)氣道感染者有一定療效。單純哮喘患者因H2受體功能下降，可導(dǎo)致H1受體功能相對(duì)亢進(jìn)，產(chǎn)生氣道痙攣，導(dǎo)致不同癥狀的過敏性疾病，甚至誘發(fā)和加重哮喘患者的病情。筆者將結(jié)論及時(shí)反饋給醫(yī)生，使得哮喘患者正確用藥，減少法莫替丁片ADR的發(fā)生率。

因此，當(dāng)發(fā)生ADR時(shí)，臨床藥師不僅要認(rèn)真填寫不良反應(yīng)報(bào)告，更要認(rèn)真分析原因，尋找藥物治療規(guī)律，避免相似的問題再次發(fā)生。

同時(shí)，藥師要具備良好的溝通能力，主動(dòng)向患者做好解釋工作和用藥指導(dǎo)，解除他們的用藥顧慮，提高患者的用藥依從性。

3積極為臨床醫(yī)生提供合理化用藥建議

臨床藥師應(yīng)掌握可能引起支氣管痙攣的藥物，避免因藥物使用不當(dāng)而誘發(fā)或加重哮喘的發(fā)作。例如，有些哮喘患者并發(fā)高血壓、心動(dòng)過速，需要使用β-腎上腺素受體阻滯劑。在選擇藥物時(shí)，應(yīng)禁用非選擇性β-腎上腺素受體阻滯劑。原因:β2-腎上腺素受體在氣道和肺組織內(nèi)廣泛分布，可引起支氣管平滑肌舒張，抑制肥大細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等釋放炎癥介質(zhì)。非選擇性β-腎上腺素受體阻滯劑可阻滯β2-腎上腺素受體，而引起不同程度的支氣管痙攣。這類藥對(duì)正常人影響較小，但對(duì)哮喘患者而言，有時(shí)可誘發(fā)或加重哮喘的發(fā)作。

因此，要禁用普萘洛爾、吲哚洛爾等非選擇性β-腎上腺素受體阻滯劑。可以慎用選擇性β1-腎上腺素受體阻滯劑，如阿替洛爾、美托洛爾等。另外，患有青光眼的哮喘患者使用噻嗎洛爾滴眼液時(shí)，也可誘發(fā)加重哮喘。可誘發(fā)哮喘的藥物，如非甾體類解熱鎮(zhèn)痛藥—阿司匹林、布洛芬、吲哚美辛等，此類藥物因抑制了花生四烯酸合成前列腺素的環(huán)氧合酶途徑，而使脂氧合酶途徑的代謝增加，導(dǎo)致LT生成增多，使氣道平滑肌發(fā)生強(qiáng)烈收縮［3］;再如，血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑—卡托普利、依那普利等，對(duì)糖尿病性高血壓有良好的治療效果，但應(yīng)慎用于有哮喘的高血壓患者，因?yàn)樵撍帟?huì)抑制緩激肽降解，體內(nèi)過多的緩激肽會(huì)引起哮喘患者刺激性、持續(xù)性干咳，可以選用血管緊

張素Ⅱ受體抑制劑;乙酰半胱氨酸是呼吸科常用的黏液溶解劑，可用于哮喘患者粘液腺分泌增多，痰液黏，不易咳出，但該藥禁用于哮喘急性發(fā)作期，因?yàn)樵撍幍难趸a(chǎn)物可加重氣管痙攣，導(dǎo)致氣道反應(yīng)性增加。

哮喘是一種難以根治、容易反復(fù)發(fā)作的肺部慢性疾病［7-8］，我國(guó)哮喘的患病率為0.5%～1.5%，且發(fā)病率還在不斷上升［9］。有效的藥物治療可以控制哮喘進(jìn)一步發(fā)展。我院呼吸科病房收治的哮喘患者多為高齡且病情較重，其中一些患者還存在基礎(chǔ)疾病，如冠心病、高血壓、糖尿病等。藥物治療往往是在遵循《支氣管哮喘防治指南》的基礎(chǔ)上，采取多種藥物聯(lián)合的方式，藥物治療復(fù)雜。同時(shí)，一些患者對(duì)自身疾病和用藥缺乏正確認(rèn)識(shí)，因此，患者用藥監(jiān)護(hù)尤為重要。

作為呼吸科臨床藥師，應(yīng)了解呼吸科及相關(guān)學(xué)科的醫(yī)學(xué)知識(shí)，深入臨床，培養(yǎng)以患者為中心的臨床思維;同時(shí)，應(yīng)具備扎實(shí)的藥學(xué)知識(shí)，在不斷的臨床實(shí)踐中積累藥物治療經(jīng)驗(yàn)，才能在參與患者用藥決策時(shí)，為臨床醫(yī)生提出合理化的用藥建議，降低ADR的發(fā)生率。通過科學(xué)的藥學(xué)監(jiān)護(hù)，達(dá)到哮喘的治療目標(biāo):迅速控制哮喘癥狀并予以維持，防止形成不可逆性氣道阻塞，避免病情的進(jìn)一步惡化而引發(fā)的死亡。

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