第一篇:二苯胺試劑鑒定DNA
二苯胺試劑:鑒定 DNA。
二苯胺試劑得配制
A 液:1。5 g 二苯胺溶于 100 mL 冰醋酸中,再加 15 mL 濃硫酸,用棕色瓶保存。如冰醋酸呈結晶狀態,則需加溫后待其熔化,再使用。
B 液:乙醛得體積分數為 0、2%得溶液.配制:將 0、1 mL B 液加入到 10 mL A 液中,現配現用.DNA 得粗提取與鑒定
實驗原理
1、DNA 在NaCl 溶液中得溶解度,就是隨著 NaCl 得濃度得變化而改變得。
當NaCl 得物質得量濃度為0、14 mol/L 時,DNA 得溶解度最低.利用這一原理,可以使溶解在NaCl 溶液中得DNA 析出。
2、DNA 不溶于酒精溶液,但就是細胞中得某些物質則可以溶于酒精溶液.利用這一原理,可以進一步提取出含雜質較少得 DNA。
3、DNA 遇二苯胺(沸水浴)會染成藍色,因此,二苯胺可以作為鑒定 DNA 得試劑。
注意事項
1、步驟 3 析出含 DNA 得黏稠物中,蒸餾水要沿燒杯內壁緩緩加入,不能一次快速倒入。
2、實驗中有多個步驟都要用玻璃棒進行攪拌,但就是在不同得步驟中玻璃棒得用法不同。
實驗用具
雞血細胞液(5~10 mL);體積分數為 95%得冷酒精,蒸餾水,質量濃度為0、1 g/mL得檸檬酸鈉溶液,物質得量濃度分別為 2 mol/L 與0.015 mol/L 得 NaCl 溶液,二苯胺試劑;燒杯(100 mL,1 個, 50 mL,500 mL,各 2 個),漏斗,試管(20 mL,2個),玻璃棒,滴管,量筒(100 mL,1 個),紗布,鑷子,濾紙,鐵架臺,鐵環,三角架,酒精燈,石棉網,載玻片,試管夾。
實驗原理:
1、析出溶解在 NaC1溶液中得 DNA。
2、用冷酒精提取出含雜質較少得DNA.
3、DNA 在沸水浴時被二苯胺染成藍色。
方法步驟:
1.提取細胞核物質:順時針方向攪拌,稍快,稍重.5 min
2.溶解 DNA:
3。析出含 DNA 得黏稠物:蒸餾水300mL,逆時針方向攪拌,緩慢
4。過濾:取黏稠物
5。再溶解:順時針方向攪拌,較慢。3 min
6。過濾:取濾液。
7.提取出含雜質較少得 DNA,逆時針方向攪拌,稍慢.5 min
8.DNA 得鑒定:沸水浴5min
【實驗十二】DNA 得粗提取與鑒定
實驗原理
DNA 在氯化鈉溶液中得溶解度,就是隨著氧化鈉得濃度得變化而改變得。當氯化鈉得物質得量濃度為 2 mol/L 時,DNA得溶解度最大,濃度為 0.14 mol/L 時,DNA 得溶解度最低。利用這一原理,可以使溶解在氯化鈉溶液中得 DNA 析出.DNA 不溶于95%得酒精溶液,但就是細胞中得某些物質則可以溶于酒精溶液。利用這一原理,可以進一步提取出含雜質較少得 DNA。
DNA 中含有脫氧核糖,能與二苯胺(沸水浴)反應生成藍色物質,因此,二苯胺可以作為鑒定 DNA 得試劑。
目得要求 1、學會 DNA 得粗提取與鑒定得方法。
2、觀察提取出來得 DNA 物質得顏色與形狀。
材料用具
材料:活雞或鮮血雞血。
儀器:離心機、恒溫水裕鍋、載玻片,玻璃棒,濾紙,滴管,量簡(100 mL,l個),燒杯(100 mL,l 個,50 mL、500 mL 各 2個),試管(20 mL,2 個),漏斗,試管夾,紗布.試劑:酒精得體積分數為 95%得溶液(實驗前置于冰箱內冷卻 24 h),蒸餾水,檸檬酸鈉得質量濃度為 0。1g/mL得溶液,氯化鈉得物質得量濃度分別為 2 mol/L 與 0.015 mol/L 得溶液,二苯胺試劑。
方法步驟
實驗前需要制備雞血細胞液(由教師完成),制備得方法就是:取檸檬酸鈉得質量濃度為 0。1 g/mL得溶液(抗凝劑)100 mL,置于500 mL燒杯中.將宰殺活雞流出得雞血(約180 mL)注入燒杯中,同時用玻璃棒攪拌,使血液與檸檬酸鈉溶液充分混合,以免凝血.然后,將血液倒入離心管內,用 1000 r/min 得離心機離。2min,此時血細胞沉淀于離心管底部。實驗時,用吸管除去離。心管上部得澄清液,就可以得到雞血細胞液.1.提取雞血細胞得細胞核物質
將制備好得雞血細胞液 5 mL~10mL,注入到 50 mL 燒杯中。向燒杯中加入蒸餾水 20 mL,同時用玻璃棒充分攪拌 5 min,使血細胞加速破裂。然后,用放有紗布得漏斗將血細胞液過濾至500mL.取其濾液。
2.溶解細胞核內得DNA
將氯化鈉得物質得量濃度為 2 mol得溶液 40mL加入到濾液中,并搖動燒杯,使其混合均勻,這時 DNA在溶液中呈溶解狀態。
3.析出含 DNA 得粘稠物
沿燒杯內壁緩緩加入蒸餾水,同時用玻璃棒不停地輕輕攪拌,這時燒杯中有絲狀物出現,注意觀察絲狀物呈什么顏色。繼續加入蒸餾水,溶液中出現得粘稠物會越來越多.當粘稠物不再增加時停止加入蒸餾水(這時溶液中氯化鈉得物質得量濃度相當于0、14 mol/L)。
4。濾取含 DNA得粘稠物
用放有多層紗布得漏斗,過濾步驟 3 中得溶液至 500mL 得燒杯中,含 DNA 得粘稠物被留在紗布上。
5.將DNA 得粘稠物再溶解
取 1個 50 mL 燒杯,向燒杯內注入氯化鈉得物質得量濃度為 2 mol/L 得溶液 20mL。用鈍頭鑷子將紗布上得粘稠物夾至氯化鈉溶液中,用玻璃擇不停地攪拌,使粘稠物盡可能多地溶解于溶液中。
6。過濾含有 DNA 得氯化鈉溶液
取1個100 mL 燒杯,用放有兩層紗布得漏斗過濾步驟 5 中得溶液。取其濾液,DNA溶于濾液中。
7.提取含雜質較少得 DNA
在上述濾過得溶液中,加入冷卻得、酒精得體積分數為 95%得溶液 50mL(使用冷卻得酒精,對 DNA 得凝集效果較佳),并用玻璃棒攪拌,溶液中會出現含雜質較少得絲狀物。用玻璃棒將絲狀物卷起,并用濾紙吸取上面得水分。這種絲狀物得主要成分就就是DNA。注意觀察絲狀物就是什么顏色得.8.DNA 得鑒定
取兩支20 mL得試管,各加入氯化鈉得物質得量濃度為0.015 mol/L得溶液5 mL,將絲狀物放入其中一支試管中,用玻璃棒攪拌,使絲狀物溶解.然后,向兩支試管中各加入4mlL 得二苯胺試劑。混合均勻后,將試管置于沸水中加熱 5 min,待試管冷卻后,觀察并且比較兩支試管中溶液顏色得變化。將觀察得結果填寫在《實驗報告冊》上。
結論
步驟8得 2 支試管中溶液顏色得變化說明了什么?將得出得結論填寫在《實驗報告冊》上.討論
1。提取雞血中得 DNA 時,為什么要除去血液中得上清液?
2.步驟回與步驟 3 中都需要加入蒸餾水,兩次加入得作用相同嗎?為什么? 3。DNA 得直徑約為 20×10-10 m,實驗中出現得絲狀物得粗細就是否表示 1 個 DNA分子直徑得大小?
第二篇:二苯胺鑒定dna
二苯胺鑒定dna
實驗原理1.DNA在NaCl溶液中的溶解度,是隨著NaCl的濃度的變化而改變的,二苯胺鑒定dna。當NaCl的物質的量濃度為0.14 mol/L時,DNA的溶解度最低。利用這一原理,可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。2.DNA不溶于酒精溶液,但是細胞中的某些物質則可以溶于酒精溶液。利用這一原理,可以進一步提取出含雜質較少的DNA。3.DNA遇二苯胺(沸水浴)會染成藍色,因此,二苯胺可以作為鑒定DNA的試劑。
DNA分子中2-脫氧核糖殘基在酸性溶液中加熱降解,產生2-脫氧核糖并形成ω-羥基-γ-酮基戊酸,后者與二苯胺試劑反應產生藍色化合物,其反應如下圖。藍色化合物在595nm處有最大吸收,且DNA在40μg ~400μg范圍內時,吸光度與DNA濃度成正比。在反應液中加入少量乙醛,可以提高反應靈敏度。
甲基綠能把DNA染成綠色,為什么在DNA粗提取與鑒定試驗中則用二苯胺鑒定?帶著這個問題我上網查資料,經過我反復的思考,哈哈.....終于想明白了。我們在觀察DNA、RNA的分布實驗中用的是甲基綠和吡羅紅混合染色劑染色,由于甲基綠和吡羅紅與DNA、RNA的親和力不一樣,呈綠色的是DNA,呈紅色的是RNA,我們很容易用顯微鏡觀察到DNA、RNA主要分布在那里?里面強調的是用甲基綠和吡羅紅混合染色劑,所以隱含的意思是不能單獨使用一種染色劑,要是單獨用甲基綠染色就會把RNA染成綠色,鑒定材料《二苯胺鑒定dna》。DNA粗提取與鑒定這個實驗,DNA鑒定則換成用二苯胺,在這個DNA粗提取過程中,用改變氯化鈉濃度辦法將蛋白質與DNA分開,用冷酒精處理進一步將DNA與RNA、蛋白質分開。一系列的操作就是要獲得純度較高的DNA,最后獲得的純度較高的DNA不能排除有RNA,所以此時用甲基綠鑒定DNA、RNA都被染成綠色,所以不能說綠色一定是DNA拍賣公司而改用二苯胺就不一樣了,DNA和二苯胺反應的產物成藍色,RNA則沒有這種顏色反應。所以用二苯胺鑒定呈藍色的一定是DNA,并且藍色深淺與DNA含量高低有關。
1、二苯胺與甲基綠能否混用
這是用于鑒定DNA的存在的兩種試劑,二苯胺加熱法中,呈現藍色反應。用甲基綠溶液直接滴在有DNA絲狀物的載玻片或玻棒上,呈藍綠色反應。只用一種即可,不混合用。前者要加熱,后者不加熱。
2、兩者都可以和DNA反應,應該怎樣區分它們呢
甲基綠甲基綠是堿性染料。它是綠色粉末狀,能溶于水(溶解度8%)和酒精(溶解度3%)。甲基綠是最有價值的細胞和染色劑,細胞學上常用來染染色質,跟酸性品紅一起可作植物木質部的染色
3、DNA的鑒定→DNA的鑒定可用二苯胺法,DNA遇到二苯胺變為藍色;還可以用“甲基綠”法,“甲基綠”使DNA變為藍綠色。
用“甲基綠”法鑒別DNA時,可將“甲基綠”直接滴到玻璃棒的絲狀物上后,要用水充分沖洗掉浮色后再觀察。
配制二苯胺試劑→取0.1毫升B液,滴入到10毫升A液中,混勻。⑦鑒定→取4毫升DNA提取液放入試管中,加入4毫升二苯胺試劑,混勻后觀察溶液顏色(不變藍)。用沸水浴(100°)加熱10分鐘。在加熱過程中,隨時注意試管中溶液顏色的變化(逐漸出現淺藍色)。
第三篇:鑒定dna的方法
鑒定dna的方法
如何做親子鑒定? 首先根據做dna親子鑒定的目的的不同可將親子鑒定分為司法鑒定和個人鑒定,鑒定dna的方法。個人鑒定只需要提供被鑒定者的樣本無需提供任何證件就可以做,但是個人dna檢測的結果僅供個人參考了解不可用作為司法用途使用;司法鑒定必須按照嚴格的司法程序進行,被鑒定人必須提供身份證、戶口本、結婚證或者出生證明等能夠證明身份的相關證件還必須提供相關單位(比如:派出所、法院、律師或者公安機關)出具的委托函才可以進行,這樣做出的鑒定結果才具有法律效力。
如何做親子鑒定能夠得到準確無誤的鑒定結果?
為保證dna 親子鑒定結果的準確無誤,對于選擇dna鑒定的終端用戶一定要選擇專業權威機構,確保dna鑒定結果的準確權威、司法公正、科學嚴謹!
做dna鑒定如何取樣? dna親子鑒定的樣本可以是血液、血痕、毛發、口腔細胞、體液、骨骼、牙齒、胎兒羊水等,只要能夠提取dna其鑒定結果的準確度是一樣的,若您在取樣的過程中有任何的疑問都可以撥打0371-61719977進行電話咨詢,我們的專家醫生會為您答疑解惑!
胎兒親子鑒定是指利用基因技術鑒定胎兒遺傳意義上的父親,鑒定材料《鑒定dna的方法》。當胎兒遺傳意義上的父親是誰不得而知時,“產前親子鑒定”可從孕婦的羊水中提取細胞,通過鑒定胎兒的DNA(脫氧核糖核酸)確認父子關系。
胎兒親子鑒定必須提供的樣本為:胎兒樣本(羊水、絨毛)、母親DNA樣本、假定父親DNA樣本
懷孕多久可以做胎兒親子鑒定呢?
在懷孕期做胎兒鑒定的最早時間可以在妊娠時間滿8周以后通過抽取胎兒絨毛組織來做或者在懷孕16周也就是4個月的時候通過抽取羊水進行鑒定,不管是絨毛還是羊水做胎兒dna鑒定都和孩子出生后用血液做親子鑒定的結果同樣準確不會出現出現不同的檢測結果。
為什么胎兒鑒定中一定要提供母親DNA樣本?
因為羊水樣本抽自母體,其中含有母親DNA成份,如果在實驗中從羊水中提取的是母親DNA而非胎兒DNA,那么在沒有母親DAN樣本對比的情況下,就和假定父親DNA樣本進行鑒定對比,其結果就沒有準確性可言了,所以在胎兒羊水鑒定中必須提供母親DNA樣本。
DNA和RNA的鑒別,較常用的方法是利用兩類核酸中不同的戊糖各自具備的不同的顏色反應,而得以定性鑒別。其中鑒定DNA的方法稱為二苯胺法,鑒定RNA的方法稱為地衣酚(苔黑酚,3,5-二羥基甲苯)法。上述顏色反應不但可用于兩類核酸的定性鑒定,也是定糖法定量測定核酸的依據。
第四篇:dna胎兒性別鑒定
dna胎兒性別鑒定
在沒有出現母血DNA胎兒性別檢測方法前,一般是利用羊水穿刺術、絨毛采檢術、B超等方法來測試,dna胎兒性別鑒定。這些方法不僅需要懷孕的周數長,而且對母體和胎兒具有一定的創傷,可導致1%的流產率。
其實在香港早就出現了這種準確率高達98%的胎兒性別鑒定方法:母血DNA胎兒性別檢測,該項技術運用先進精確的DNA基因工程科學技術,自手臂抽取血液進行檢測,是目前最早最安全的檢測胎兒性別方法,只需8周即可進行檢驗。
醫學家們已經證明早在妊娠8周母血循環中就可監測出胎兒性別。通過母血細胞分離、純化、可用于早期胎兒性別鑒定與遺傳學診斷,常用的胎兒細胞類型滋養細胞和有核紅細胞,從母血中分離、純化胎兒細胞在技術和臨床研究上取得了很大的進展,作為無創性產前診斷方法其有著一定的臨床應用價值,及深遠的意義。
在香港這項檢測已經相當成熟,費用也較為便宜。而且,因為準確率高、對孕婦和胎兒均無任何的傷害,是目前最受歡迎的性別鑒定方法!
很多內地孕婦通過咨詢我們赴港生子的好處,才得知香港有這項技術。在香港不是每個醫生都做這項服務的,其中有一個我們長期合作的私家醫生有做母血DNA胎兒性別鑒定,性別鑒定《dna胎兒性別鑒定》。
香港天愛母嬰收集所有性別鑒定方法比較如下:、DNA 驗血:孕婦懷孕經B超確認有7-8周,胎兒正常的情況下可測出胎兒性別,準確率是98%,對孕婦和胎兒沒有任何影響。、羊膜穿刺術:主要是為了診斷胎兒是否有染色體方面或神經管的缺陷,通常在懷孕16~20周實施。準確度可達99%,但是有1%的流產機率。、絨毛采檢術:在懷孕12~14周左右即能判斷胎兒的性別,但它可能造成流產(3%~5%),還可能傷害胎兒,造成其手腳的殘缺。、超聲波掃描:超聲波是一種聲波,它對胎兒沒有不良影響,嬰兒必須在3~4月準確度較高。利用超聲波診斷胎兒性別時,男嬰的準確度可達95%以上,女嬰的可靠度則只有85%左右,但是受到醫生主觀視覺,胎兒體位等因素影響。
香港天愛母嬰服務公司聲明: 本公司主營業務是服務內地孕婦赴香港生孩子咨詢及赴港生子全程一條龍服務。因之前很多內地孕婦做完母血DNA胎兒性別鑒定,不是她們想要的就打掉了。我們公司負責人和員工都有自己的信仰,看到這種事情的發生心里都不舒服。所以從今年下半年開始,孕婦需報自己的出生年月及末次月經,經我公司算完是你想要的性別,再幫孕婦預約香港私家醫生抽血做性別鑒定。
第五篇:dna粗提取和鑒定
dna粗提取和鑒定
實驗用具
洋蔥或其他植物、洗潔精、食鹽、攪拌機或研缽(我們采用的是家用豆漿機)、紗布、漏斗、燒杯、玻璃棒、量筒(10mL一支)、滴管、試管(20mL兩支)、天平,dna粗提取和鑒定。95%酒精、蒸餾水、0.015mol/L的NaCl溶液、二苯胺試劑。
實驗材料的選取
凡是含有DNA的生物材料都可以考慮,但是使用DNA含量相對較高的生物組織,成功的可能性更大。
原理
①加入蒸餾水能使雞血細胞破裂
蒸餾水對于雞血細胞來說是一種低滲液體,水分可以大量進入血細胞內,使血細胞脹裂,再加上攪拌的機械作用,就加速了雞血細胞的破裂(細胞膜和核膜的破裂),從而釋放出DNA。
②加入洗滌劑和食鹽的作用
洗滌劑是一些離子去污劑,能溶解細胞膜,有利于DNA的釋放;食鹽的主要成分是NaCl,有利于DNA的溶解。
③研磨不充分,對實驗結果產生的影響
研磨不充分會使細胞核內的DNA釋放不完全,提取的DNA量變少,影響實驗結果,導致看不到絲狀沉淀物、用二苯胺鑒定不顯示藍色等。
④此步驟獲得的濾液中可能含有的細胞成分?
可能含有核蛋白、多糖和RNA等雜質。
實驗步驟
1.破碎細胞,獲取含DNA的濾液
動物細胞的破碎比較容易,以雞血細胞為例,在雞血細胞液中加入一定量的蒸餾水,同時用玻璃棒攪拌,過濾后收集濾液即可。如果實驗材料是植物細胞,需要先用洗滌劑溶解細胞膜。例如,提取洋
.蔥的DNA時,在切碎的洋蔥中加入一定的洗滌劑和食鹽,進行充分的攪拌和研磨,過濾后收集研磨液。
2.去除濾液中的雜質
方案一的原理是DNA在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同;方案二的原理是蛋白酶分解蛋白質,不分解DNA;方案三的原理是蛋白質和DNA的變性溫度不同。
注意事項
①用高鹽濃度的溶液溶解DNA,能除去在高鹽中不能溶解的雜質;用低鹽濃度使DNA析出,能除去溶解在低鹽溶液中的雜質。因此,通過反復溶解與析出DNA,就能夠除去與DNA溶解度不同的多種雜質。
②方案二是利用蛋白酶分解雜質蛋白,從而使提取的DNA與蛋白質分開;方案三利用的是DNA和蛋白質對高溫耐受性的不同,從而使蛋白質變性,與DNA分離。
DNA的析出與鑒定
將處理后的溶液過濾,加入與濾液體積相等、冷卻的酒精溶液,靜置2~3min,溶液中會出現白色絲狀物,這就是粗提取的DNA,鑒定材料《dna粗提取和鑒定》。用玻璃棒沿一個方向攪拌,卷起絲狀物,并用濾紙吸取上面的水分。
取兩支20ml的試管,各加入物質的量濃度為2mol/L的NaCl溶液5ml,將絲狀物放入其中一支試管中,用玻璃棒攪拌,使絲狀物溶解。然后,向兩支試管中各加入4ml的二苯胺試劑。混合均勻后,將試管置于沸水中加熱5min,待試管冷卻后,比較兩支試管溶液顏色的變化,看看溶解有DNA的溶液是否變藍。
實驗步驟
1.稱取30克已切碎的洋蔥,放入研缽中,加入少量石英砂助研,倒入10mL 2mol/L的氯化鈉溶液,充分研磨。
洋蔥含有揮發性刺激物,有效減少刺激,才能使實驗順利進行。上課前,教師可先將洋蔥放入冰箱冷凍一會兒,使其涼透但又不能結冰;或將洋蔥切成幾大塊,放入清水泡一會兒,讓其揮發性刺激物溶于水,可以減輕刺激。然后將洋蔥切碎備用。研磨的目的主要是使洋蔥細胞破裂,使DNA溶于2mol/L的氯化鈉溶液,沒必要將洋蔥研成粥糊狀,后者既浪費時間又影響實驗效果。研磨時,切忌使用攪拌器(榨汁機)。使用攪拌器雖可以提高研磨效率,但攪拌器將洋蔥切成極細小的顆粒,無法通過過濾將洋蔥顆粒剔除。只能將酒精直接倒入濾液中,許多洋蔥小顆粒因為輕會漂浮起來,DNA藏在其中,無法分辨。學生看不到白色纖維狀粘稠物的DNA。
2.研磨后,用漏斗和紗布將汁液過濾到小燒杯中,得到濾液。
3.向濾液中加入95%的酒精溶液20mL,沿燒杯壁緩緩倒入,不要震動或攪拌。
此時,燒杯中的液體分為上、下兩層,下層較渾濁,上層澄清,很快上層溶液中就會有白色纖維狀粘稠物析出,用玻璃棒可將其輕輕卷起。這就是記錄生命遺傳信息的重要物質——DNA。DNA析出的過程中,切忌震動和攪拌(不震動易于分層,我們就能很容易觀察到上清液中的絲狀物;攪拌會使非常柔軟的DNA斷裂成小段,不易取出)。如果用玻璃棒DNA不易卷起,可改用表面打毛的牙簽,DNA提取物就纏繞在牙簽上了。
4.鑒定:取兩支試管,編為1、2號,各加入2mol/L的氯化鈉溶液2mL,向1號試管中加入一些白色纖維狀物,振蕩使其溶解,然后向兩支試管中各加入2mL二苯胺試劑,沸水浴加熱5分鐘。
注意事項
1.以血液為實驗材料時,每100ml血液中需要加入3g檸檬酸鈉防止血液凝固。
2.加入洗滌劑后,動作要輕緩、柔和,否則容易產生大量的泡沫,不利于后續步驟地操作。加入酒精和用玻璃棒攪拌時,動作要輕緩,以免DNA分子的斷裂,導致DNA分子不能形成絮狀沉淀。
3.二苯胺試劑要現配現用,否則會影響鑒定的效果。
4.DNA的溶解度與NaCl溶液濃度的關系:
當NaCl溶液濃度低于0.14mol/L時,隨濃度的升高,DNA的溶解度降低;當NaCl溶液濃度高于0.14mol/L時,隨濃度升高,DNA的溶解度升高。
5.盛放雞血細胞液的容器,最好是塑料容器。
雞血細胞破碎以后釋放出的DNA,容易被玻璃容器吸附,由于細胞內DNA的含量本來就比較少,再被玻璃容器吸附去一部分,提取到的DNA就會更少。因此,實驗過程中最好使用塑料的燒杯和試管,這樣可以減少提取過程的DNA的損失。