第一篇：16sRNA PCR 擴增及凝膠電泳分析實驗報告[本站推薦]

16sRNA PCR 擴增及凝膠電泳分析

微生物學20092474王紫楓

一、實驗目的1．熟悉細菌活化及培養過程

2．掌握PCR擴增技術及方法

3．掌握凝膠電泳分析技術

二、實驗原理

rRNA進化緩慢，具有高度保守性。不同微生物的rRNA的基因序列在某些位點以不同的幾率發生突變。同時，小核糖體亞基16sRNA分子量大，攜帶信息量大，可作為屬種鑒定的基礎。

通過篩選的細菌，做活化培養后，細菌在緩沖液酶解，通過細胞破壁、裂解、離心得到RNA相關序列，在經過設定PCR相關條件。溫度、循環次數，將裂解液加入到體系中進行擴增。在完成循環后進行凝膠電泳、拍照、序列分析。

三、實驗用品

供試菌種53種、編號試管每株兩個LB固體和液體培養基、Mg2+、無菌水、EB Buffer、TE離心管、移液槍

四、實驗步驟

1．將供試菌株編號，沒人分得3個菌株。

2．將菌株接入固體培養基進行活化，培養24小時。

3．將活化后的菌株挑一環，接入5ml液體培養基內振蕩培養16小時得到菌懸液。

4．取1.5ml菌懸液于離心管，10000轉5分鐘棄上清。

5．用無菌水洗滌一次，沉淀懸浮于150ul TE Bufler。

6．將上述懸液在沸水上煮10分鐘，水浴10分鐘，10000轉5分鐘離心后，上清液于-20℃保存。

7．取上述上清液1ul于PCR中。

8．3小時PCR擴增。

9．將擴增后的序列取1ul于EB，并注入電泳槽中。

10． 經過電泳后的凝膠，取出于紫外熒光燈中顯色，拍照并分析。

五、實驗結果

經過拍照，僅有2、3、6、9、22、38、39、40號擴增出了新的序列顯色明顯。其他沒有擴增出來的原因可能是提取過程中丟失。另外第三塊膠板沒有明顯變化的主要原因可能是電泳時入緩沖液使用了舊的緩沖液，并未出現預期的結果。

六、注意事項

1．預制固體培養基瓊脂要加夠量，否則很難凝固。

2．在轉接時，挑取的一環盡量多一些，肉眼可看見的狀態為宜，生長期長一些。

3．緩沖液先用現配。

第二篇：臨床基因擴增檢驗實驗室臨床實驗報告管理制度

臨床基因擴增檢驗實驗室臨床實驗報告管理 制度

一、目的：

規范實驗室實驗報告的管理，保證檢驗結果及時準確的發出，確保實驗報告的安全與保密。

二、適用范圍：

臨床實驗室實驗報告。

三、職責：

由臨床基因擴增檢驗實驗室專業技術人員制定程序文件，實驗室負責人審核，科室主任批準實施。

四、要求 ：

1、檢驗報告的簽發按實驗數據審核及報告程序進行。

2、當發現檢驗報告中有缺陷而對其準確性及有效性產生懷疑時，應以通知實驗室負責人、或科主任處理。

3、若某些原因應對已發出的檢驗報告做重大修改，應立即通知樣品檢驗的申請人或檢驗報告的使用者，能收回的應立即收回，不能收回的應采用另外一個文件方式或作出補充聲明。

4、檢驗報告申請人或使用者因特殊原因造成檢驗報告損壞或遺失時，憑據有效材料可向檢驗室申請補發，補發報告必須在備注欄說明補發報告。

5、樣品檢驗的申請人或檢驗報告的使用者對檢驗報告的內容有異議時，可向實驗室提出抱怨，也可向有關部門提

出申訴，按醫療糾紛申訴規定執行。

6、實驗室工作人員及報告發送者不得以任何形式占有檢驗結果、數據和技術資料，不得公開透露檢驗結果及相關信息，不得遺失檢驗報告。

7、各部門工作人員必須嚴格遵循醫學保密原則，對于違反規定者追究其相關責任。