第一篇：河北科技大學HPLC法進行地塞米松磷酸鈉中特殊雜質的檢查及含量測定

實驗五HPLC法進行地塞米松磷酸鈉中特殊雜質的檢查及含量測定

一．目的要求

1.掌握實驗中藥物特殊雜質的來源和檢察原理。

2.掌握高效液相色譜法用于特殊雜質檢查及含量測定的方法。

二、實驗方法

有關物質取本品，加流動相溶解并稀釋制成每1ml中約含1mg的溶液，作為供試品溶液；取地塞米松對照品適量，精密稱定，加甲醇溶解并稀釋成每1ml中約含1mg的溶液，作為對照品溶液；精密量取供試品溶液與對照品溶液各1ml，置100ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。照含量測定項下的色譜條件，取對照溶液20μl注入液相色譜儀，調節檢測靈敏度，使地塞米松磷酸鈉色譜峰的峰高為滿量程的15%～20%，再精密量取供試品溶液與對照溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的2倍。供試品溶液色譜圖中如有與地塞米松保留時間一致的峰，按外標法以峰面積計算，含量不得超過0.5%；其他單個雜質峰面積不得大于對照溶液中地塞米松磷酸鈉峰面積的1/2，其他雜質峰面積的和不得大于對照溶液中地塞米松磷酸鈉峰面積的2倍。

【含量測定】照高效液相色譜法（附錄V D）測定。

色譜條件與系統適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以三乙胺溶液（取三乙胺7.5ml，加水至1000ml,用磷酸調節pH值至3.0±0.05）－甲醇－乙腈（55：40：5）為流動相；檢測波長為242nm.理論板數按地塞米松磷酸鈉峰計算一般為7000，地塞米松磷酸鈉與地塞米松的分離度應大于4.4。

測定法 取本品適量，精密稱定，置50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取適量，用流動相定量稀釋制成每1ml中含40μg的溶液，精密量取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取地塞米松磷酸鈉對照品適量，精密稱定，同法測定。按外標法以峰面積計算，即得。

四、注意事項：

五、思考題：

1.何謂反相高效液相色譜法？其常用的固定相和流動相有哪些？如何選擇？

2.液相色譜流動相、樣品前處理注意事項有哪些？