第一篇：人感染 H7N9 禽流感病毒標本采集及實驗室檢測策略

人感染 H7N9 禽流感 病毒標本采集及實驗室檢測策略

一、標本采集、轉送和檢測

（一）標本采集 為進行病例診斷，醫療機構應盡早采集病人的相關臨床樣本。采 集的臨床標本包括病人的上呼吸道標本（如咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽 取物、咽漱液和鼻洗液）、下呼吸道標本（如氣管吸取物、肺洗液、肺組織標本）和血清標本等。應當盡量采集病例發病早期的呼吸道標 本（尤其是下呼吸道標本）和發病7天內急性期血清以及間隔2-4周的 恢復期血清。如病人死亡，應當盡可能說服家屬同意尸檢，及時進行 尸體，采集組織（如肺組織、氣管、支氣管組織）標本。醫療機 構采集的呼吸道標本每份不少于3ml。血清標本每份分為2管，每管不 少于0.5ml。對人感染H7N9禽流感 病例可能暴露的禽類飼養或交易等場 所，由疾控機構采集禽類糞便、籠具涂拭標本和環境污水等標本，技 術要求參考《職業暴露人群血清學和環境高致病性禽流感監測方案（2011年版）》。

（二）醫療機構標本檢測和轉送

1.病例的臨床標本采集后，有條件開展核酸檢測的醫療機構要 對呼吸道標本開展H7N9禽病毒核酸檢測，沒有條件開展核酸檢測的醫 療機構應立即利用快速抗原檢測試劑進行甲型流感病毒抗原檢測，H7N9禽流感病毒核酸檢測陽性的臨床標本按照B類感染性物質進行包 裝運輸，在低溫條件下，48小時內送到當地流感監測網絡實驗室，由 當地流感監測網絡實驗室上送到省級疾控中心網絡實驗 室。甲型快速 抗原檢測陽性的標本，按上述相同的包裝要求24小時內送當地流感監 測網絡實驗室開展核酸檢測。

2、沒有條件開展上述檢測工作的醫療衛生機構發現符合病例定 義的病例后，要立即采集相關標本，按照B類感染性物質進行包裝運 輸，在低溫條件下，24小時內送到當地流感監測網絡實驗室。

3、流感網絡實驗室的檢測策略（流程圖見附件）流感網絡實驗室收檢的呼吸道標本每份分為3管，每管應不少于 1ml。1 于檢測，另外2 于復核和病毒分離。標本儲存應在-70℃ 或以下溫度，避免反復凍融。

（1）對于甲型流感病毒抗原陽性的疑似病例，在24小時內進行 H7、H5亞型的檢測，如檢測陰性，可繼續進行甲型H1N1流感和季節性 H3N2流感病毒等檢測。

（2）對于有流行病學接觸史的疑似病例，在24小時內進行甲、乙型流感通用引物、H7和H5亞型的檢測。如上述檢測均陰性，不再進 行流感病毒核酸檢測。若甲型流感病毒通用引物陽性，H7、H5亞型陰 性，可繼續進行甲型H1N1流感和季節性H3N2流感病毒等檢測。

（3）在發生病例的地區開展強化監測時，對采集的ILI和SARI 病例的呼吸道標本在48小時內進行甲、乙型流感病毒通用引物，以及 H5、H7亞型的檢測。如上述檢測均陰性，不再進行流感核酸檢測。若 甲型通用引物陽性，H7、H5亞型陰性，按照2010年全國流感監測方案 的要求開展病毒分離。（4）若當地流感監測網絡實驗室檢測結果為H7亞型禽流感病毒 核酸陽性時，應當于48小時內將其中2管呼吸道相關原始標本送省級 疾控中心網絡實驗室。

（5）省級疾控中心網絡實驗室在接到醫療機構和本省網絡實驗 室送檢的H7和H5亞型陽性的呼吸道標本時，具備相應生物安全條件的 網絡實驗室在2周內完成病毒分離工作，并將分離的毒株按要求48小 時內送國家流感中心。未能開展病毒分離的省級疾控中心網絡實驗室 將陽性病例的原始標本48小時內送國家流感中心開展病毒分離。

（6）各醫療機構采集的雙份血清標本48小時內送當地流感監測 網絡實驗室，由當地網絡實驗室48小時內將血清標本分別送省級疾控 中心和國家流感中心開展相關抗體檢測，進行病例診斷。

（7）對人感染H7N9禽流感 病例可能暴露的禽類飼養或交易 等場所，采集禽類糞便、籠具涂拭標本和環境污水等標本2周內開展 甲型流感通用引物、H5、H7和H9亞型檢測。有條件開展病毒分離的實 驗室對陽性標本開展病毒分離工作，陽性分離株在2周內送國家流感 中心。沒有條件開展病毒分離的實驗室在2周內將陽性標本送國家流 感中心。具體技術要求可參考《職業暴露人群血清學和環境高致病性 禽流感監測方案（2011年版）》。

（8）對于甲型通用引物陽性而不能區分型別或亞型的毒株和陽 性標本要求在48小時內送至國家流感中心。

（9）國家流感中心在接到陽性標本后2周內完成病毒分離工作。

（三）實驗室生物安全基本要求

1、H7N9禽流感病毒實驗室活動和樣本運輸按照《人間傳染的病 原微生物名錄》中高致病性禽流感病毒進行 和審批。并建立H7N9 禽流感病毒及樣本保存 制度，并采取可靠的安保措施。

2、未經培養的臨床樣本的分裝、滅活和核酸提取應當在生物安 全二級實驗室生物安全柜內開展。工作人員應著防護服，佩戴眼罩、N95及以上水平的 等個人防護裝備。

3、H7N9禽流感病毒的分離培養須在生物安全三級實驗室進行。

4、樣本采集及實驗活動過程中產生的醫療廢物要分類收集，經 壓力蒸汽滅菌或其他可靠滅菌后，按醫療廢物收集處置。

二、標本檢測結果反饋和報告 開展實驗室檢測的各級流感監測網絡實驗室和國家流感中心要 在檢測工作完成后24小時內將標本信息和檢測結果錄入到 “中國流感 監測信息系統” “傳染病監測技術平臺信息管理系統” 或（環境標本）中。病例標本檢測結果在24小時內由流感監測網絡實驗室所在疾控中 心反饋到病例所在醫院，由醫院進行病例的報告。

第二篇：2014年人感染H7N9禽流感病毒培訓試題(參考答案)

2014年人感染H7N9禽流感病毒培訓試題（參考答案）

1、什么是流感？

流行性感冒，簡稱流感，是由流感病毒引起的急性呼吸道傳染病。最常見的流感起病突然，畏寒、寒戰，高熱，體溫可達39～40℃，伴頭痛、全身肌肉關節酸痛、極度乏力、食欲減退等全身癥狀，常有咽喉痛、干咳，可有鼻塞、流涕等。如無并發癥，多于發病3～4天后癥狀好轉，但咳嗽、體力恢復常需1～2周。輕癥者如普通感冒，癥狀輕，2～3天可恢復。

2、什么是禽流感？

禽流感主要是指禽中流行的由流感病毒引起的感染性疾病。禽流感病毒可分為高致病性禽流感病毒、低致病性禽流感病毒和無致病性禽流感病毒。高致病性禽流感病毒目前只發現H5和H7兩種亞型。由于種屬屏障，禽流感病毒只在偶然的情況可以感染人，既往確認感染人的禽流感病毒有H5N1、H9N2、H7N2、H7N3、H7N7、H5N2、H10N7，癥狀表現各不相同，可以表現為呼吸道癥狀、結膜炎、甚至死亡。人感染高致病性H5N1禽流感病毒后常表現為高熱等呼吸道癥狀，往往很快發展成肺炎，甚至急性呼吸窘迫綜合癥和全身器官衰竭，甚至死亡。

3、什么是H7N9禽流感病毒？

流感病毒可分為甲(A)、乙(B)、丙(C)三型。其中，甲型流感依據流感病毒血凝素蛋白(HA)的不同可分為1-16種亞型，根據病毒神經氨酸酶蛋白(NA)的不同可分為1-9種亞型，HA不同亞型可以與NA的不同亞型相互組合形成不同的流感病毒。而禽類特別是水禽是所有這些流感病毒的自然宿主，H7N9禽流感病毒是其中的一種。H7N9亞型流感病毒既往僅在禽間發現，在荷蘭、日本及美國等地曾發生過禽間暴發疫情，但未發現過人的感染情況。

4、H7N9禽流感感染病例的主要臨床表現？

患者一般表現為流感樣癥狀，如發熱、咳嗽、少痰，可伴有頭痛、肌肉酸痛、腹瀉等全身癥狀。重癥患者病情發展迅速，多在發病3～7天出現重癥肺炎，體溫大多持續在39℃以上，出現呼吸困難，可伴有咯血痰。?？焖龠M展為急性呼吸窘迫綜合征、膿毒癥、感染性休克，甚至多器官功能障礙，部分患者可出現胸腔積液等表現。

5、如何預防H7N9流感？

流感是一種急性呼吸道感染性疾病。勤洗手、室內勤通風換氣、注意營養、保持良好體質有利于預防流感等呼吸道傳染病。出現打噴嚏、咳嗽等呼吸道感染癥狀時，要用紙巾、手帕掩蓋口

鼻，預防感染他人。此外，還要特別注意盡量避免直接接觸病死禽、畜。

6、公眾如何保護自己？

保持勤洗手、咳嗽和打噴嚏時遮掩口鼻等個人衛生習慣，能夠有效預防流感等呼吸道傳染疾病。同時還應避免接觸病死禽、畜。

7、醫務人員感染H7N9禽流感病毒的風險大嗎？

由于醫務人員比普通公眾接觸患有感染性疾病病人的機會更多，建議醫務人員在診治病人過程中采取必要的防護措施。在接診疑似或確診H7N9禽流感病例時，應采取標準預防加飛沫傳播預防和接觸預防。

第三篇：醫院人感染H7N9禽流感病毒 - 武威市衛生局

醫院人感染H7N9禽流感病毒

核酸檢測標準操作程序

一、目的確保人感染H7N9禽流感病毒核酸檢測過程標準化、規范化，降低人為不規范操作對檢測結果造成的影響，保證結果的準確性和可重復性。

二、適用范圍

醫療機構臨床基因擴增檢驗實驗室按照《關于醫院開展人感染H7N9禽流感病毒核酸檢測有關工作的通知》（衛辦醫政函?2013?383號）和《關于做好醫療機構人感染H7N9禽流感檢測試劑供給保障工作的通知》（衛發明電?2013?29號）有關要求，使用國家疾病預防控制中心制備或商品化試劑盒開展人感染H7N9禽流感病毒核酸檢測工作。

三、樣本采集、運送和保存

盡量采集病例發病早期的呼吸道樣本(上呼吸道樣本包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液和鼻洗液, 下呼吸道樣本包括痰液、氣管吸取物、肺洗液、肺組織等)?？蓪⒈?、咽拭子收集于同一采樣管中，以便提高檢出率。患者有下呼吸道樣本時，應優先采集。

根據試劑說明書對樣本采集方法有關要求，制訂樣本采集標準操作程序（SOP），并組織樣本采集人員進行培訓及考

核。樣本的采集應當嚴格按照SOP進行。

樣本采集后，按照《人間傳染病的病原微生物名錄》中高致病性禽流感病毒的相關規定進行包裝，用密封容器立即送往實驗室。若氣溫高時，需放入冰塊降溫。樣本抵達實驗室后，應盡快進行檢測，24小時內能檢測的樣本可臵于2～8℃暫時保存，24小時內無法檢測的樣本則應臵于≤-70℃狀態保存。如無-70℃保存條件時，可于-20℃冰箱暫存。樣本避免反復凍融。

樣本采集、處理、運輸及保存不當時，可因病毒RNA降解出現假陰性結果，也可因為樣本“污染”出現假陽性結果。

四、PCR檢測

（一）樣本處理

樣本的核酸提取應當在樣本處理區進行。按所采用的商品化試劑盒說明書要求，取適量待檢樣本、陽性及陰性對照進行核酸提取。樣本應盡可能新鮮，提取過程應嚴防RNA酶污染及操作不當導致的RNA降解。提取過程如涉及離心步驟，應采用低溫冷凍離心機；在生物安全柜內進行加樣、提取過程中，為防止RNA降解，可將試管架臵于托盤內平鋪的碎冰上。提取好的RNA應及時用于檢測，否則應當-70℃保存。如無-70℃保存條件，可于-20℃冰箱暫存。

（二）試劑準備

試劑準備應當在試劑準備區進行。根據所用的試劑盒，樣本可進行甲型流感病毒核酸、禽流感H7亞型或H7N9病毒核酸的檢測。試劑的配制按所用商品化試劑盒說明書進行。除酶混合物外，其它試劑在使用前應當在室溫充分復融，混勻并瞬時低速離心。反應液分裝時盡量避免產生氣泡，上機前注意檢查各反應管是否蓋緊，以免管內溶液泄露污染儀器。分裝有擴增反應液的反應管應當扣蓋或裝入密實袋內再轉移至樣本處理區。

（三）加樣

加樣應當在樣本處理區進行。加樣時應當使樣品完全落入反應液中，不應有樣品粘附于管壁上，加樣后應盡快蓋緊管蓋。

按試劑、儀器說明書完成加樣和PCR反應管準備。

（四）PCR擴增檢測

PCR擴增檢測在擴增區進行。待檢PCR管轉移至擴增區，按順序臵于PCR儀上，編輯樣本信息，按試劑和儀器說明書設定循環參數。

（五）結果分析

根據所用試劑盒說明書設臵基線值（baseline）。熒光閾值（threshold）設定以閾值線剛好超過陰性對照品擴增曲線（無規則的噪音線）的最高點為原則，且Ct值應大于

所設臵的擴增循環數（或顯示為undet）。使用儀器配套軟件自動分析結果。

（六）質量控制

檢測過程對可能出現的假陽性和假陰性進行質量控制，除了檢測商品試劑盒所提供陽性和陰性對照外，每次臨床樣本檢測時，至少應當有1份弱陽性和3份陰性質控樣本（多份陰性質控樣本設臵對實驗室“污染”所致假陽性的監控更為有效），隨機放在所檢測標本的中間。弱陽性質控樣本可為檢測陽性的滅活稀釋后保存的臨床樣本、滅活病毒或假病毒顆粒等，如所采用的商品化試劑盒有“內標”控制假陰性，或弱陽性質控樣本來源困難，可暫不設弱陽性質控。陰性質控樣本采用標本采集管內溶液即可。質控樣本應與臨床標本同等對待，參與樣本核酸提取和擴增檢測全過程。

試劑盒中的陽性和陰性對照用于判斷實驗室的有效性，按試劑盒說明書進行。

（七）實驗結果的判定與解釋。

按照試劑盒說明書進行。對于出現弱陽性結果的樣本應進行重復檢測，并注意與可能的實驗室輕度或樣本交叉“污染”所致假陽性結果區別。

五、檢測結果報告

按照試劑盒說明書進行。

六、其它注意事項

（一）人感染H7N9禽流感病毒實驗室活動、樣本采集和運輸按照《人間傳染的病原微生物名錄》中高致病性禽流感病毒進行管理。從事人感染禽流感檢測的技術人員必須經過生物安全培訓并具備相應的實驗技能，在檢測過程中必須采取生物安全防護措施（使用眼罩、N95型口罩等）。樣本核酸提取必須在Ⅱ級生物安全實驗室，經過年檢合格的二級生物安全柜內進行。實驗室應具有良好的通風。

（二）注意儀器設備的日常和定期維護，加樣器、擴增儀和溫育設備應進行定期校準。試劑盒及一次性使用的無DNA酶和RNA酶PCR反應管、離心管、帶濾芯吸頭等應進行每批質檢。

（三）實驗應嚴格分區操作；各區物品、工作服等均應當專區專用，不得交叉使用。實驗后應及時清潔工作臺，以防污染。

（四）每批實驗室后，可采取實驗室通風、10%次氯酸鈉溶液擦洗地臺面、紫外照射等措施，消除可能存在的擴增產物氣溶膠污染。

（五）使用中國疾控中心制備試劑開展檢測工作時，可參考相應試劑盒說明書（見附件1、2）有關要求。