第一篇：高中生物必修二實(shí)驗(yàn)十一DNA的粗提取與鑒定

實(shí)驗(yàn)十一

DNA的粗提取與鑒定 教學(xué)目的

初步掌握DNA粗提取和鑒定的方法。觀察提取出來(lái)的DNA物質(zhì)。實(shí)驗(yàn)原理

DNA在NaCl溶液中的溶解度是隨NaCl的濃度變化而改變的。DNA在0．14mol/L的NaCl溶液中的溶解度最低，據(jù)此可使溶解于NaCl溶液中的DNA析出。DNA不溶于酒精溶液，但細(xì)胞中某些物質(zhì)可以溶于酒精溶液，據(jù)此可提取雜質(zhì)較少的DNA。DNA＋二苯胺藍(lán)色（用于DNA的鑒定）實(shí)驗(yàn)步驟 1．材料制備

0.1G/ml檸檬酸鈉100ml

500ml燒杯→玻璃棒攪拌→1000r/min離心2min→吸去上清液→ 活雞血180ml

即得雞血細(xì)胞液（也可將上述燒杯置于冰箱中，靜置一天使雞血細(xì)胞自行沉淀）2．方法步驟

取血細(xì)胞液5-10ml＋20ml蒸餾水，玻璃棒沿一個(gè)方向快速攪拌

（1）提取血細(xì)胞核物質(zhì)紗布過(guò)濾，濾液中含DNA和其他核物質(zhì)，如蛋白質(zhì) 原理：血細(xì)胞的細(xì)胞膜、核膜吸水脹破，玻璃棒快速攪拌機(jī)械加速血細(xì)胞破裂（2）溶解核內(nèi)DNA：濾液＋2mol/LNaCl溶液40ml，玻璃棒沿一個(gè)方向攪拌

（3）析出含DNA的粘稠物：向上述溶液中緩緩加入蒸餾水，并輕輕地沿一個(gè)方向攪拌，出現(xiàn)絲狀物，當(dāng)絲狀物不再增加時(shí)，停止加水（此時(shí)NaCl溶液相當(dāng)于稀釋到0．14mol/L）（4）濾取含DNA的粘稠物：用多層紗布過(guò)濾，含DNA的粘稠物留在紗布上（5）DNA粘稠物再溶解：

20ml2mol/LNaCl溶液

50ml燒杯，上述粘稠物緩慢攪拌3 min（6）過(guò)濾含DNA的2mol/LNaCl溶液：用2層紗布過(guò)濾，濾液中含DNA（7）提取含雜質(zhì)較少的DNA：上述溶液＋95%酒精，緩慢攪拌，出現(xiàn)乳白色絲狀物，用玻璃棒將絲裝物卷起。（8）DNA鑒定：

實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵：

本實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵是獲取較純凈的DNA，因此應(yīng)注意：

1．充分?jǐn)嚢桦u血細(xì)胞液。DNA存在于雞血細(xì)胞核中。將雞血細(xì)胞與蒸餾水混合以后，應(yīng)用 玻璃棒沿一個(gè)方向快速攪拌，使血細(xì)胞加速破裂，并釋放出DNA 2．沉淀DNA必須用冷酒精。實(shí)驗(yàn)前必須準(zhǔn)備好大量95%的酒精，并在冰箱中（5℃以下）至少存放24小時(shí)。

3．正確攪拌含有懸浮物的溶液。在第（3）、（5）步驟，玻璃棒不要直插燒杯底部，且攪拌要輕緩，以便獲得較完整的DNA分子。在步驟（7），要將玻璃棒插入燒杯溶液中間，用手緩慢轉(zhuǎn)動(dòng)5-10min。【同類題庫(kù)】

．在“DNA的粗提取與鑒定”的實(shí)驗(yàn)中分別使用2mol／L、0．14mol／L、2mol／L、0015mol／L的氯化鈉溶液，其作用分別是（A）A．溶解、析出、溶解、溶解

C．溶解、溶解、析出、溶解 B．析出、溶解、析出、溶解

D．溶解、析出、溶解、析出 ．下列圖示中能反映DNA溶解度與NaCI溶液濃度之間關(guān)系的是（C）

．DNA在下列哪種濃度的NaCl溶液中溶解度最低（B）

A．2．00mol/L

B．0．14 mol/L

C．0．015 mol/L

D．0．10 mol/L ．在DNA的粗提取過(guò)程中，初步析出DNA和提取較純凈的DNA所用的藥品的濃度和名稱分別是（B）

①0．1 g/ml的檸檬酸鈉溶液②2．00mol/L的NaCl溶液③0．14 mol/L的NaCl溶液④體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精溶液⑤0．015 mol/L的NaCl溶液⑥0．04 mol/L的NaCl溶液 A．①③⑤

B．③④

C．②④

D．②③④ ．與析出DNA粘稠物有關(guān)的敘述，不正確的是（C）A．操作時(shí)緩緩滴加蒸餾水，降低DNA的溶解度

B．在操作A時(shí)，用玻璃棒輕緩攪拌，以保證DNA分子完整 C．加蒸餾水可同時(shí)降低DNA和蛋白質(zhì)的溶解度，兩者均可析出 D．當(dāng)絲狀粘稠物不再增加時(shí)，此時(shí)NaCl的濃度約為0.14mol/L.．（多選）下列有關(guān)“DNA粗提取”的操作中，正確的是（ABCD）A．在雞血細(xì)胞液中加入蒸餾水

B．在“析出DNA粘稠物”時(shí)，要緩緩加入蒸餾水，直至溶液中粘稠物不再增多 C．在用酒精凝集DNA時(shí)，要使用冷酒精 D．用玻璃棒攪拌時(shí)要沿一個(gè)方向 ．“DNA的粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)”中有三次過(guò)濾：（1）過(guò)濾用蒸餾水稀釋過(guò)的雞血細(xì)胞液。（2）過(guò)濾含粘稠物的0.14mol/L NaCl.（3）過(guò)濾溶解有DNA的2mol/L NaCl.以上三次過(guò)濾分別為了獲得（A）

A．含核物質(zhì)的濾液、紗布上的粘稠物、含DNA的濾液 B．含核物質(zhì)的濾液、濾液中DNA粘稠物、含DNA的濾液 C．含核物質(zhì)的濾液、濾液中DNA粘稠物、紗布中DNA D．含較純的DNA濾液、紗布上粘稠物、含DNA的濾液

．為獲取較純凈的DNA，采集來(lái)的血樣可用蛋白酶處理，然后用有機(jī)溶劑除去蛋白質(zhì)。下列有關(guān)敘述，正確的是（D）

A．除去血漿中的蛋白質(zhì)

B．除去染色體上的蛋白質(zhì)

C．除去血細(xì)胞表面的蛋白質(zhì)

D．除去血細(xì)胞中所有的蛋白質(zhì)

．在“DNA的粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)”中，和“使用蛋白酶從染色體中提取DNA”中的蛋白酶具有相似作用的物質(zhì)是（D）

A．NaCl溶液

B．蒸餾水

C．檸檬酸鈉

D．冷卻的酒精 ．DNA不溶于下列何種溶液（D）

A．NaCl溶液

B．KCl溶液

C．MgCl溶液

D．酒精溶液 ．下列不同濃度的NaCl溶液中，使DNA析出最徹底和溶解度最高的是（A）①0.14mol/L ②2mol/L ③0.25mol/L ④0.015 mol/L A．①和②

B．②和①

C．②和③

D．②和④ ．下列操作中，對(duì)DNA的提取量影響較小的是（B）

A．使雞血細(xì)胞在蒸餾水中充分破裂，放出DNA等核物質(zhì) B．?dāng)嚢钑r(shí)，要用玻璃棒沿一個(gè)方向輕緩攪動(dòng)

C．在析出DNA粘稠物時(shí)，要緩緩加入蒸餾水，直至溶液中粘稠物不再增多 D．在用酒精沉淀DNA時(shí)，要使用冷酒精，甚至再將混合液放入冰箱中冷卻 E．在DNA的溶解和再溶解時(shí)，要充分?jǐn)嚢?．在“DNA的粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)”中：

（1）實(shí)驗(yàn)中兩次使用蒸餾水，第一次目的是，第二次目的是。

（2）說(shuō)明不同濃度的NaCl溶液的作用： 2mol/L NaCl的作用； 0.14mol/L NaCl的作用； 0.015 mol/L NaCl的作用；

（3）提純DNA的原理是，所用試劑為。攪拌要，目的。

（4）能否用哺乳動(dòng)物血液代替？簡(jiǎn)述理由。

[（1）使血細(xì)胞吸水破裂，溶解細(xì)胞核內(nèi)的DNA；降低NaCl溶液的濃度，降低DNA分子在NaCl溶液中的溶解度析出DNA分子（2）溶解含DNA的核物質(zhì)；使含DNA的絲狀粘稠物析出DNA分子；進(jìn)行DNA鑒定（3）DNA不溶于酒精溶液，但細(xì)胞中某些鹽類蛋白質(zhì)可溶于酒精溶液；95%的冷卻酒精；輕緩、同方向；保持DNA分子的完整性（4）不能，成熟的哺乳動(dòng)物紅細(xì)胞沒(méi)有細(xì)胞核] ．此實(shí)驗(yàn)中有幾次用玻璃棒攪拌，每次攪拌的方向是一致的；但每次攪拌的強(qiáng)度不同，請(qǐng)就此予以說(shuō)明。

（1）提取雞血細(xì)胞核內(nèi)物質(zhì)時(shí)，應(yīng)攪拌，目的是。

（2）向含核物質(zhì)的2mol/L NaCl 溶液滴加蒸餾水析出DNA粘稠物時(shí)，應(yīng)攪拌，目的是。（3）DNA粘稠物再溶解于2mol/L NaCl 溶液時(shí)，應(yīng)攪拌，目的是。（4）用95%的冷卻酒精提取含雜質(zhì)較少的DNA時(shí)，應(yīng)攪拌，目的是。

[（1）快速；加速血細(xì)胞破裂（2）輕緩；盡量保持DNA分子的完整性（3）輕緩；盡量保持DNA分子的完整性（4）輕緩；保持DNA分子的完整性] ．以下是有關(guān)DNA的粗提取實(shí)驗(yàn)的閱讀材料：

a．核酸極不穩(wěn)定，在較為劇烈的化學(xué)、物理因素和酶的作用下很容易降解。在制備DNA時(shí)要加入DNA酶（水解DNA的酶）的抑制劑檸檬酸鈉，以除去Mg，防止DNA酶的激活。b．核酸中的DNA和RNA在生物體內(nèi)均以核蛋白（由核酸和蛋白質(zhì)組成）的形式存在，DNA核蛋白在1 mol/L NaCl 溶液中溶解度很大，但在0.14mol/L NaCl 溶液中溶解度很低；而RNA核蛋白溶于0.14mol/L NaCl 溶液。

c．用苯酚處理，可使蛋白質(zhì)變性，且留在苯酚層內(nèi)；在DNA溶液中加入2．5倍體積，濃度為95%的酒精，可將DNA分離出來(lái)。此時(shí)DNA十分粘稠，可用玻璃棒攪成團(tuán)取出。d．DNA在強(qiáng)酸性環(huán)境下，水解產(chǎn)生脫氧核糖等小分子物質(zhì)，它與二苯胺酸性溶液反應(yīng)，能生成藍(lán)色化合物。

e．實(shí)驗(yàn)材料與器械：檸檬酸鈉溶液、石英砂、0.14mol/L NaCl 溶液、1 mol/L NaCl 溶液、苯酚、95%的酒精、二苯胺試劑、濃硫酸、花椰菜、研缽、燒杯、漏斗、玻璃棒、量筒、石棉網(wǎng)、酒精燈、吸管、試管等。

以下是DNA粗提取實(shí)驗(yàn)的步驟，請(qǐng)根據(jù)以上閱讀材料回答有關(guān)問(wèn)題：（1）研磨：取10克花椰菜加適量的、和石英砂，研磨成勻漿。（2）過(guò)濾。（3）將濾液稀釋6倍，其目的是：。（4）離心處理，產(chǎn)生沉淀。

（5）取沉淀物，置于2毫升1 mol/L NaCl 溶液中，使DNA核蛋白再次溶解，再加2毫升苯酚充分震蕩后靜止，待其分層后棄其上層苯酚。這一步的目的是除去。（6）如何將剩余溶液中的DNA提取出來(lái)？。（7）如何證明提取物質(zhì)確實(shí)是DNA分子？。

其實(shí)驗(yàn)過(guò)程的要點(diǎn)是向放有DNA的試管中加入適量該試劑，混合均勻后，將試管置于中5min，待試管后，觀察試管中的顏色變化。這個(gè)實(shí)驗(yàn)也說(shuō)明DNA耐溫，前次溫度有利于，后次溫度則有利于DNA。

[（1）檸檬酸鈉溶液、1 mol/L NaCl 溶液（3）使DNA核蛋白溶解度降低而析出（5）（DNA核蛋白中的）蛋白質(zhì)（6）向下層溶液中加2．5倍體積，濃度為95%的酒精，此時(shí)用玻璃棒攪動(dòng)，玻璃棒上成團(tuán)的物質(zhì)即是DNA（7）用適量濃硫酸處理提取物，再滴加二苯胺酸性溶液數(shù)滴，如有藍(lán)色物質(zhì)出現(xiàn)即可證明提取物為DNA。沸水浴；冷卻；高；加快染色反應(yīng)的速度；析出。] ．“DNA的粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)中，A、B、C、D、E五個(gè)小組除下表中所列處理方法不同外，其他操作步驟均相同，而且正確，但實(shí)驗(yàn)結(jié)果卻不同。組別

實(shí)驗(yàn)材料

提取核物質(zhì)時(shí) 加入的溶液

去除雜質(zhì)時(shí) 加入的溶液

DNA鑒定時(shí) 加入的試劑

A

雞血

蒸餾水

95％的酒精(25C)

二苯胺

B 菜花

蒸餾水

95％的酒精(冷卻)雙縮脲，C 人血漿

蒸餾水

95％的酒精(冷卻)

二苯胺

D

人血細(xì)胞

2mol／L的氯化鈉

0．14mol／L的氯化鈉

雙縮脲

E

雞血

蒸餾水

95％的酒精(冷卻)

二苯胺

(1)實(shí)驗(yàn)材料選擇錯(cuò)誤的組別是。其原因是。

(2)實(shí)驗(yàn)步驟(不包括實(shí)驗(yàn)材料)均正確，但得不到DNA的組別是。

(3)沸水浴中試管顏色變藍(lán)的組別是；藍(lán)色較淡的是，其原因是。(4)B組實(shí)驗(yàn)不成功的最主要原因是。[(1)C、D 人的血漿中沒(méi)有細(xì)胞結(jié)構(gòu)，成熟的紅細(xì)胞中沒(méi)有細(xì)胞核，選用這些材料得不到DNA或得到的DNA很少

(2)C(3)A、E A 冷卻的酒精對(duì)DNA的凝集效果較佳，該組使用的是25℃的酒精

(4)菜花細(xì)胞在蒸餾水中不能被破壞，得不到DNA(應(yīng)采用研磨的方法)] ．在“DNA的粗提取與鑒定”的實(shí)驗(yàn)中，有同學(xué)按書(shū)本知識(shí)和自己的思路，試做了如下實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)你判斷實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

(1)他把與檸檬酸鈉混合的新鮮血液放在幾層紗布上過(guò)濾，紗布上最主要的結(jié)構(gòu)是。

(2)他在含有DNA、RNA及蛋白質(zhì)等的混合物中加入大量的物質(zhì)的量濃度為2．0mol/L的氯化鈉溶液后，通過(guò)攪拌后，放在幾層紗布上過(guò)濾，他得到的濾液中一定含有實(shí)驗(yàn)?zāi)康闹行枰崛〉某煞质恰?/p>

(3)他在上述濾液中加入冷酒精(體積分?jǐn)?shù)為95％)，并用玻璃棒向—個(gè)方向攪拌，溶液中的絲狀物的主要成分是。

(4)他把含有DNA、RNA、蛋白質(zhì)與氯化鈉的混合溶液稀釋成物質(zhì)的量濃度為0．14mol/L的氯化鈉溶液后，放在幾層紗布上過(guò)濾，他得到的濾液中含量最多的成分是。[血細(xì)胞

DNA DNA 水] ．請(qǐng)利用如下實(shí)驗(yàn)材料做相關(guān)實(shí)驗(yàn)，再選擇其中的一種實(shí)驗(yàn)材料，設(shè)計(jì)一個(gè)實(shí)驗(yàn)，以展示你的科學(xué)素養(yǎng)和創(chuàng)新才能。

(1)如用上述材料做觀察植物細(xì)胞的有絲分裂、葉綠體中色素的提取和分離、觀察植物的向性運(yùn)動(dòng)等實(shí)驗(yàn)。你選擇的最佳材料依次是(填圖中序號(hào)即可)。

(2)如用紫色洋蔥表皮做完細(xì)胞的質(zhì)壁分離及復(fù)原實(shí)驗(yàn)后，又用此裝片觀察細(xì)胞分裂，結(jié)果未觀察到處于分裂期的細(xì)胞。請(qǐng)解釋原因。(3)創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案

實(shí)驗(yàn)課題：探究鎳為植物生活所必需的礦質(zhì)元素

材料用具：完全營(yíng)養(yǎng)液甲、缺鎳的完全營(yíng)養(yǎng)液乙、適當(dāng)?shù)娜萜骱凸潭ú牧稀㈤L(zhǎng)勢(shì)相似的玉米幼苗，含鎳的無(wú)機(jī)鹽。方法步驟： ①； ②； ②。

實(shí)驗(yàn)預(yù)期：。

為進(jìn)一步驗(yàn)證鎳元素一定是必需元素．還應(yīng)增加的實(shí)驗(yàn)步驟及結(jié)果是：。

[（1）①⑤③（2）高度分化的細(xì)胞一般不能繼續(xù)分裂（3）①取長(zhǎng)勢(shì)相似的等量玉米幼苗，編為甲、乙兩組；②甲組用營(yíng)養(yǎng)液甲培養(yǎng)，乙組用營(yíng)養(yǎng)液乙培養(yǎng)，其余條件均相同且適宜；③定期觀察并記錄兩組幼苗的生長(zhǎng)情況。實(shí)驗(yàn)預(yù)期：①若兩組長(zhǎng)勢(shì)相似，則鎳不是玉米生活所必需的營(yíng)養(yǎng)元素；②若甲組生長(zhǎng)正常，乙組生長(zhǎng)不良，則鎳是玉米生活所必需的營(yíng)養(yǎng)元素。在乙組缺鎳的培養(yǎng)液中加入適量含鎳的無(wú)機(jī)鹽，若癥狀在不久后消失，則鎳一定是玉米生活所必需的營(yíng)養(yǎng)元素。]

第二篇：dna粗提取和鑒定

dna粗提取和鑒定

實(shí)驗(yàn)用具

洋蔥或其他植物、洗潔精、食鹽、攪拌機(jī)或研缽(我們采用的是家用豆?jié){機(jī))、紗布、漏斗、燒杯、玻璃棒、量筒(10mL一支)、滴管、試管(20mL兩支)、天平，dna粗提取和鑒定。95%酒精、蒸餾水、0.015mol/L的NaCl溶液、二苯胺試劑。

實(shí)驗(yàn)材料的選取

凡是含有DNA的生物材料都可以考慮，但是使用DNA含量相對(duì)較高的生物組織，成功的可能性更大。

原理

①加入蒸餾水能使雞血細(xì)胞破裂

蒸餾水對(duì)于雞血細(xì)胞來(lái)說(shuō)是一種低滲液體，水分可以大量進(jìn)入血細(xì)胞內(nèi)，使血細(xì)胞脹裂，再加上攪拌的機(jī)械作用，就加速了雞血細(xì)胞的破裂(細(xì)胞膜和核膜的破裂)，從而釋放出DNA。

②加入洗滌劑和食鹽的作用

洗滌劑是一些離子去污劑，能溶解細(xì)胞膜，有利于DNA的釋放;食鹽的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解。

③研磨不充分，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生的影響

研磨不充分會(huì)使細(xì)胞核內(nèi)的DNA釋放不完全，提取的DNA量變少，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，導(dǎo)致看不到絲狀沉淀物、用二苯胺鑒定不顯示藍(lán)色等。

④此步驟獲得的濾液中可能含有的細(xì)胞成分?

可能含有核蛋白、多糖和RNA等雜質(zhì)。

實(shí)驗(yàn)步驟

1.破碎細(xì)胞，獲取含DNA的濾液

動(dòng)物細(xì)胞的破碎比較容易，以雞血細(xì)胞為例，在雞血細(xì)胞液中加入一定量的蒸餾水，同時(shí)用玻璃棒攪拌，過(guò)濾后收集濾液即可。如果實(shí)驗(yàn)材料是植物細(xì)胞，需要先用洗滌劑溶解細(xì)胞膜。例如，提取洋

.蔥的DNA時(shí)，在切碎的洋蔥中加入一定的洗滌劑和食鹽，進(jìn)行充分的攪拌和研磨，過(guò)濾后收集研磨液。

2.去除濾液中的雜質(zhì)

方案一的原理是DNA在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同;方案二的原理是蛋白酶分解蛋白質(zhì)，不分解DNA;方案三的原理是蛋白質(zhì)和DNA的變性溫度不同。

注意事項(xiàng)

①用高鹽濃度的溶液溶解DNA，能除去在高鹽中不能溶解的雜質(zhì);用低鹽濃度使DNA析出，能除去溶解在低鹽溶液中的雜質(zhì)。因此，通過(guò)反復(fù)溶解與析出DNA，就能夠除去與DNA溶解度不同的多種雜質(zhì)。

②方案二是利用蛋白酶分解雜質(zhì)蛋白，從而使提取的DNA與蛋白質(zhì)分開(kāi);方案三利用的是DNA和蛋白質(zhì)對(duì)高溫耐受性的不同，從而使蛋白質(zhì)變性，與DNA分離。

DNA的析出與鑒定

將處理后的溶液過(guò)濾，加入與濾液體積相等、冷卻的酒精溶液，靜置2～3min，溶液中會(huì)出現(xiàn)白色絲狀物，這就是粗提取的DNA，鑒定材料《dna粗提取和鑒定》。用玻璃棒沿一個(gè)方向攪拌，卷起絲狀物，并用濾紙吸取上面的水分。

取兩支20ml的試管，各加入物質(zhì)的量濃度為2mol/L的NaCl溶液5ml，將絲狀物放入其中一支試管中，用玻璃棒攪拌，使絲狀物溶解。然后，向兩支試管中各加入4ml的二苯胺試劑。混合均勻后，將試管置于沸水中加熱5min，待試管冷卻后，比較兩支試管溶液顏色的變化，看看溶解有DNA的溶液是否變藍(lán)。

實(shí)驗(yàn)步驟

1.稱取30克已切碎的洋蔥，放入研缽中，加入少量石英砂助研，倒入10mL 2mol/L的氯化鈉溶液，充分研磨。

洋蔥含有揮發(fā)性刺激物，有效減少刺激，才能使實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行。上課前，教師可先將洋蔥放入冰箱冷凍一會(huì)兒，使其涼透但又不能結(jié)冰;或?qū)⒀笫[切成幾大塊，放入清水泡一會(huì)兒，讓其揮發(fā)性刺激物溶于水，可以減輕刺激。然后將洋蔥切碎備用。研磨的目的主要是使洋蔥細(xì)胞破裂，使DNA溶于2mol/L的氯化鈉溶液，沒(méi)必要將洋蔥研成粥糊狀，后者既浪費(fèi)時(shí)間又影響實(shí)驗(yàn)效果。研磨時(shí)，切忌使用攪拌器(榨汁機(jī))。使用攪拌器雖可以提高研磨效率，但攪拌器將洋蔥切成極細(xì)小的顆粒，無(wú)法通過(guò)過(guò)濾將洋蔥顆粒剔除。只能將酒精直接倒入濾液中，許多洋蔥小顆粒因?yàn)檩p會(huì)漂浮起來(lái)，DNA藏在其中，無(wú)法分辨。學(xué)生看不到白色纖維狀粘稠物的DNA。

2.研磨后，用漏斗和紗布將汁液過(guò)濾到小燒杯中，得到濾液。

3.向?yàn)V液中加入95%的酒精溶液20mL，沿?zé)诰従彽谷耄灰饎?dòng)或攪拌。

此時(shí)，燒杯中的液體分為上、下兩層，下層較渾濁，上層澄清，很快上層溶液中就會(huì)有白色纖維狀粘稠物析出，用玻璃棒可將其輕輕卷起。這就是記錄生命遺傳信息的重要物質(zhì)——DNA。DNA析出的過(guò)程中，切忌震動(dòng)和攪拌(不震動(dòng)易于分層，我們就能很容易觀察到上清液中的絲狀物;攪拌會(huì)使非常柔軟的DNA斷裂成小段，不易取出)。如果用玻璃棒DNA不易卷起，可改用表面打毛的牙簽，DNA提取物就纏繞在牙簽上了。

4.鑒定：取兩支試管，編為1、2號(hào)，各加入2mol/L的氯化鈉溶液2mL，向1號(hào)試管中加入一些白色纖維狀物，振蕩使其溶解，然后向兩支試管中各加入2mL二苯胺試劑，沸水浴加熱5分鐘。

注意事項(xiàng)

1.以血液為實(shí)驗(yàn)材料時(shí)，每100ml血液中需要加入3g檸檬酸鈉防止血液凝固。

2.加入洗滌劑后，動(dòng)作要輕緩、柔和，否則容易產(chǎn)生大量的泡沫，不利于后續(xù)步驟地操作。加入酒精和用玻璃棒攪拌時(shí)，動(dòng)作要輕緩，以免DNA分子的斷裂，導(dǎo)致DNA分子不能形成絮狀沉淀。

3.二苯胺試劑要現(xiàn)配現(xiàn)用，否則會(huì)影響鑒定的效果。

4.DNA的溶解度與NaCl溶液濃度的關(guān)系：

當(dāng)NaCl溶液濃度低于0.14mol/L時(shí)，隨濃度的升高，DNA的溶解度降低;當(dāng)NaCl溶液濃度高于0.14mol/L時(shí)，隨濃度升高，DNA的溶解度升高。

5.盛放雞血細(xì)胞液的容器，最好是塑料容器。

雞血細(xì)胞破碎以后釋放出的DNA，容易被玻璃容器吸附，由于細(xì)胞內(nèi)DNA的含量本來(lái)就比較少，再被玻璃容器吸附去一部分，提取到的DNA就會(huì)更少。因此，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中最好使用塑料的燒杯和試管，這樣可以減少提取過(guò)程的DNA的損失。

第三篇：dna粗提取與鑒定

dna粗提取與鑒定

實(shí)驗(yàn)原理

DNA在氯化鈉溶液中的溶解度，是隨著氧化鈉的濃度的變化而改變的，dna粗提取與鑒定。當(dāng)氯化鈉的物質(zhì)的量濃度為 2 mol/L時(shí)，DNA的溶解度最大，濃度為 0.14 mol/L時(shí)，DNA的溶解度最低。利用這一原理，可以使溶解在氯化鈉溶液中的DNA析出。

DNA不溶于95%的酒精溶液，但是細(xì)胞中的某些物質(zhì)則可以溶于酒精溶液。利用這一原理，可以進(jìn)一步提取出含雜質(zhì)較少的DNA。

DNA中含有脫氧核糖，能與二苯胺(沸水浴)反應(yīng)生成藍(lán)色物質(zhì)，因此，二苯胺可以作為鑒定DNA的試劑。

目的要求

1.學(xué)會(huì)DNA的粗提取和鑒定的方法。

2.觀察提取出來(lái)的DNA物質(zhì)的顏色和形狀。

材料用具

材料：活雞或鮮血雞血。

儀器：離心機(jī)、恒溫水裕鍋、載玻片，玻璃棒，濾紙，滴管，量簡(jiǎn)(100 mL，l個(gè))，燒杯(100 mL，l個(gè)，50 mL、500 mL各 2個(gè))，試管(20 mL，2個(gè))，漏斗，試管夾，紗布。

試劑：酒精的體積分?jǐn)?shù)為95%的溶液(實(shí)驗(yàn)前置于冰箱內(nèi)冷卻24 h)，蒸餾水，檸檬酸鈉的質(zhì)量濃度為 0.1g/mL的溶液，氯化鈉的物質(zhì)的量濃度分別為 2 mol/L和0.015 mol/L的溶液，二苯胺試劑。

方法步驟

實(shí)驗(yàn)前需要制備雞血細(xì)胞液(由教師完成)，制備的方法是：取檸檬酸鈉的質(zhì)量濃度為 0.1 g/mL的溶液(抗凝劑)100 mL，置于500 mL燒杯中。將宰殺活雞流出的雞血(約180 mL)注入燒杯中，同時(shí)用玻璃棒攪拌，使血液與檸檬酸鈉溶液充分混合，以免凝血。然后，將血液倒入離心管內(nèi)，用 1000 r/min的離心機(jī)離，鑒定材料《dna粗提取與鑒定》。2min，此時(shí)血細(xì)胞沉淀于離心管底部。實(shí)驗(yàn)時(shí)，用吸管除去離。心管上部的澄清液，就可以得到雞血細(xì)胞液。

1.提取雞血細(xì)胞的細(xì)胞核物質(zhì)

將制備好的雞血細(xì)胞液5 mL～10mL，注入到50 mL燒杯中。向燒杯中加入蒸餾水20 mL，同時(shí)用玻璃棒充分?jǐn)嚢? min，使血細(xì)胞加速破裂。然后，用放有紗布的漏斗將血細(xì)胞液過(guò)濾至500mL。取其濾液。

2.溶解細(xì)胞核內(nèi)的DNA

將氯化鈉的物質(zhì)的量濃度為 2 mol的溶液40mL加入到濾液中，并搖動(dòng)燒杯，使其混合均勻，這時(shí)DNA在溶液中呈溶解狀態(tài)。

3.析出含DNA的粘稠物

沿?zé)瓋?nèi)壁緩緩加入蒸餾水，同時(shí)用玻璃棒不停地輕輕攪拌，這時(shí)燒杯中有絲狀物出現(xiàn)，注意觀察絲狀物呈什么顏色。繼續(xù)加入蒸餾水，溶液中出現(xiàn)的粘稠物會(huì)越來(lái)越多。當(dāng)粘稠物不再增加時(shí)停止加入蒸餾水(這時(shí)溶液中氯化鈉的物質(zhì)的量濃度相當(dāng)于0.14 mol/L)。

4.濾取含DNA的粘稠物

用放有多層紗布的漏斗，過(guò)濾步驟3中的溶液至 500mL的燒杯中，含 DNA的粘稠物被留在紗布上。

5.將DNA的粘稠物再溶解

取 1個(gè) 50 mL燒杯，向燒杯內(nèi)注入氯化鈉的物質(zhì)的量濃度為 2 mol/L的溶液 20mL。用鈍頭鑷子將紗布上的粘稠物夾至氯化鈉溶液中，用玻璃擇不停地?cái)嚢瑁拐吵砦锉M可能多地溶解于溶液中。

6.過(guò)濾含有DNA的氯化鈉溶液

取1個(gè)100 mL燒杯，用放有兩層紗布的漏斗過(guò)濾步驟5中的溶液。取其濾液，DNA溶于濾液中。

7.提取含雜質(zhì)較少的DNA

在上述濾過(guò)的溶液中，加入冷卻的、酒精的體積分?jǐn)?shù)為 95%的溶液 50mL(使用冷卻的酒精，對(duì)DNA的凝集效果較佳)，并用玻璃棒攪拌，溶液中會(huì)出現(xiàn)含雜質(zhì)較少的絲狀物。用玻璃棒將絲狀物卷起，并用濾紙吸取上面的水分。這種絲狀物的主要成分就是DNA。注意觀察絲狀物是什么顏色的。

8.DNA的鑒定

取兩支20 mL的試管，各加入氯化鈉的物質(zhì)的量濃度為0.015 mol/L的溶液5 mL，將絲狀物放入其中一支試管中，用玻璃棒攪拌，使絲狀物溶解。然后，向兩支試管中各加入4mlL的二苯胺試劑。混合均勻后，將試管置于沸水中加熱 5 min，待試管冷卻后，觀察并且比較兩支試管中溶液顏色的變化。將觀察的結(jié)果填寫(xiě)在《實(shí)驗(yàn)報(bào)告冊(cè)》上。

結(jié)論

步驟8的2支試管中溶液顏色的變化說(shuō)明了什么?將得出的結(jié)論填寫(xiě)在《實(shí)驗(yàn)報(bào)告冊(cè)》上。

討論

1.提取雞血中的DNA時(shí)，為什么要除去血液中的上清液?

2.步驟回和步驟3中都需要加入蒸餾水，兩次加入的作用相同嗎?為什么?

3.DNA的直徑約為20×10-10 m，實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的絲狀物的粗細(xì)是否表示1個(gè)DNA分子直徑的大小?

第四篇：dna的粗提取與鑒定

dna的粗提取與鑒定

實(shí)驗(yàn)十一 DNA的粗提取與鑒定

教學(xué)目的1、初步掌握DNA的粗提取和鑒定的方法

2、觀察提取出來(lái)的DNA物質(zhì)

實(shí)驗(yàn)原理

1、DNA在NaCl溶液中的溶解度，是隨著NaCl的濃度的變化而改變的，dna的粗提取與鑒定。當(dāng)NaCl的物質(zhì)的量濃度為0.14mOl/L時(shí),DNA的溶解度最低。利用這一原理，可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。

2、DNA不溶于酒精溶液，但是細(xì)胞中的某些物質(zhì)則可以溶于酒精溶液。利用這一原理，可以進(jìn)一步提取出含雜質(zhì)較少的DNA。

3、DNA遇二苯胺(沸水浴)會(huì)染成藍(lán)色，因此，二苯胺可以作為鑒定DNA的試劑。

注意事項(xiàng)

1、步驟3析出含DNA的黏稠物中，蒸餾水要沿?zé)瓋?nèi)壁緩緩加入，不能一次快速倒入。

2、實(shí)驗(yàn)中有多個(gè)步驟都要用玻璃棒進(jìn)行攪拌，但是在不同的步驟中玻璃棒的用法不同。

實(shí)驗(yàn)用具

雞血細(xì)胞液(5～10mL);體積分?jǐn)?shù)為95%的冷酒精，蒸餾水，質(zhì)量濃度為0.1g/mL的檸檬酸鈉溶液，物質(zhì)的量濃度分別為2mol/L和0.015mol/L的NaCl溶液，二苯胺試劑;燒杯(100mL，1個(gè)，50mL，500mL，各2個(gè))，漏斗，試管(20mL，2個(gè))，玻璃棒，滴管，量筒(100mL，1個(gè))，紗布，鑷子，濾紙，鐵架臺(tái)，鐵環(huán)，三角架，酒精燈，石棉網(wǎng)，載玻片，試管夾。

課時(shí)安排

一課時(shí)

課前準(zhǔn)備

制備雞血細(xì)胞液，方法是：將質(zhì)量濃度為0.1g/mL的檸檬酸鈉溶液100mL，置于500mL燒懷中，注入新鮮的雞血(約180mL)，用玻璃棒攪拌，使其充分混合，以免凝血。靜置于冰箱內(nèi)一天，使血細(xì)胞自行沉淀。也可以用離心機(jī)離心2 min(轉(zhuǎn)速1000轉(zhuǎn)/分)。用吸管吸去上清液。

板書(shū)

實(shí)驗(yàn)十一 DNA的粗提取與鑒定

實(shí)驗(yàn)原理

1、析出溶解在NaC1溶液中的DNA。

2、用冷酒精提取出含雜質(zhì)較少的DNA。

3、DNA在沸水浴時(shí)被二苯胺染成藍(lán)色。

方法步驟：

1、提取雞血細(xì)胞的細(xì)胞核物質(zhì)：順時(shí)針?lè)较驍嚢瑁钥欤灾亍? min2、溶解細(xì)胞核內(nèi)的DNA3、析出含DNA的黏稠物：蒸餾水300mL，逆時(shí)針?lè)较驍嚢瑁徛?/p>

4、過(guò)濾：取黏稠物

5、再溶解：順時(shí)針?lè)较驍嚢瑁^慢。3 min6、過(guò)濾：取濾液。

7、提取出含雜質(zhì)較少的DNA，逆時(shí)針?lè)较驍嚢瑁月? min8、DNA的鑒定：沸水浴5min((1)無(wú)變化(2)藍(lán)色)

上節(jié)課我們通過(guò)幾個(gè)驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)，證明了DNA是主要的遺傳物質(zhì)，自我鑒定《dna的粗提取與鑒定》。那么DNA是什么樣的物質(zhì)呢?今天我們就通過(guò)實(shí)驗(yàn)將它提取出來(lái)，進(jìn)行觀察和鑒定。

通過(guò)預(yù)習(xí)，我們知道選用雞血細(xì)胞液作為實(shí)驗(yàn)材料。在制備雞血細(xì)胞液時(shí)，所用的檸檬酸鈉有防止血液凝固的作用。

制備過(guò)程中，一定要用剛宰殺的雞的新鮮血，并且要與抗凝劑充分混合，防止凝血。我們采用靜置一天的方法，獲得雞血細(xì)胞液。

大家在動(dòng)手做實(shí)驗(yàn)之前先要明確幾個(gè)需要注意的問(wèn)題。

1、要嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)的方法步驟去操作。

2、實(shí)驗(yàn)中有多個(gè)步驟都要用玻璃棒進(jìn)行攪拌，使用時(shí)玻璃棒不要碰到燒杯底，在不同的步驟中玻璃棒的用法不同，每一步的用法參照黑板上的指導(dǎo)去操作。

3、在DNA的鑒定中，所用的二苯胺是一種有毒性的試劑，大家在使用時(shí)注意不要讓藥液接觸到皮膚或身體的其他部位，也不要近距離觀察。

下面在實(shí)驗(yàn)進(jìn)行過(guò)程中，要思考每一操作步驟要達(dá)到什么目的。

在進(jìn)行步驟1時(shí)，利用攪拌的5分鐘，做如下提問(wèn)：

為什么要加蒸餾水?加入蒸餾水后細(xì)胞將會(huì)怎樣?

(讓細(xì)胞內(nèi)溶液的濃度大于周?chē)芤旱臐舛龋?xì)胞會(huì)吸水以至脹破)

為什么要用力攪拌?

(可以加速血細(xì)胞和細(xì)胞核的破裂)

所以下一步驟過(guò)濾將濾去的是細(xì)胞膜和核膜等物質(zhì)。

在進(jìn)行步驟3時(shí)，要向全班明確：這一步驟是這個(gè)實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵，注意加蒸餾水的方法和使用玻璃棒的方法，千萬(wàn)不能太快太猛，防止打碎DNA。

觀察濾取出來(lái)的黏稠物的顏色。

有的同學(xué)提取的黏稠物較少，原因可能是在溶解DNA時(shí)不充分，也可能是析出黏稠物時(shí)攪拌的快了。

將黏稠物再溶解時(shí)一定要充分，多攪拌。以免有DNA損失。

加入冷酒精時(shí)動(dòng)作要慢。

當(dāng)玻璃棒上出現(xiàn)絲狀物纏繞時(shí)，繼續(xù)慢慢攪拌。至不再增加時(shí)，取出吸干上面的水分。仔細(xì)觀察絲狀物呈什么顏色?(黃色)

這些絲狀物要用二苯胺鑒定。使用二苯胺時(shí)要注意不要接觸到藥液。進(jìn)行沸水浴時(shí)，在實(shí)驗(yàn)室較為通風(fēng)的地方集體進(jìn)行。

利用沸水浴的5 min。

步驟3中加入蒸餾水的目的?與步驟1有什么區(qū)別?

(步驟3中加蒸餾水是使NaCl溶液的濃度逐漸降至0.14mol/L，使DNA的黏稠物析出。而步驟1加蒸餾水是為了讓細(xì)胞吸水脹破)

步驟7為什么要加50mL的冷酒精?

(因?yàn)镈NA不溶于冷酒精，而其他物質(zhì)可以溶解在酒精中，使含雜質(zhì)較少的DNA絲狀物可以析出。懸浮于溶液中)

現(xiàn)在大家從水浴鍋中拿出試管，比較兩個(gè)試管中溶液的顏色有什么不同?

(有絲狀物的試管變成藍(lán)色，另一試管還是原來(lái)顏色)

這一鑒定結(jié)果說(shuō)明什么問(wèn)題?

(提取出的絲狀物是DNA)

那么你看到的絲狀物的粗細(xì)是不是DNA分子的直徑呢?

(不是。DNA分子直徑只有2nm。絲狀物是多個(gè)DNA分子聚在一起形成的)

下面請(qǐng)同學(xué)們將實(shí)驗(yàn)用具，按原樣擺放整齊，實(shí)驗(yàn)桌要保持清潔。

今天我們通過(guò)實(shí)驗(yàn)將DNA提取出來(lái)進(jìn)行了觀察和鑒定，那么DNA的化學(xué)組成，分子結(jié)構(gòu)和復(fù)制是怎樣的?我們下節(jié)課再繼續(xù)研究。

第五篇：dna的粗提取和鑒定

dna的粗提取和鑒定

在溶液中,DNA鏈略帶負(fù)電荷,而鹽離子可被吸引到DNA的負(fù)電荷上,中和這些負(fù)電荷,只要控制鹽的濃度,就能夠使DNA片段或者散開(kāi),或者聚合在一起,因此,食鹽能保持溶液中的濃度與細(xì)胞液相當(dāng)，dna的粗提取和鑒定。DNA不溶于酒精,但細(xì)胞中的某些物質(zhì)則可以溶于酒精。利用這一原理,就可以用酒精萃取DNA。DNA與二苯胺作用生成藍(lán)色沉淀,即可觀察到。

提取生物大分子的基本思路是選用一定的物理或化學(xué)方法分離具有不同物理或化學(xué)性質(zhì)的生物大分子。對(duì)于DNA的粗提取而言，就是要利用DNA與RNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等在物理和化學(xué)性質(zhì)方面的差異，提取DNA，去除其他成分。

DNA和蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同，利用這一特點(diǎn)，選擇適當(dāng)?shù)柠}濃度就能使DNA充分溶解，而使雜質(zhì)沉淀，或者相反，以達(dá)到分離目的。

此外，DNA不溶

.于酒精溶液，但是細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)則溶于酒精。利用這一原理，可以將DNA與蛋白質(zhì)進(jìn)一步的分離。

DNA對(duì)酶 高溫和洗滌劑的耐受性

蛋白酶能水解蛋白質(zhì)，但是對(duì)DNA沒(méi)有影響。大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受60—80oC的高溫，而DNA在80oC以上才會(huì)變性。洗滌劑能夠瓦解細(xì)胞膜，但對(duì)DNA沒(méi)有影響。

DNA的鑒定

在沸水浴條件下，DNA遇二苯胺會(huì)被染成藍(lán)色，因此二苯胺可以作為鑒定DNA的試劑。

實(shí)驗(yàn)用具

洋蔥或其他植物、洗潔精、食鹽、攪拌機(jī)或研缽(我們采用的是家用豆?jié){機(jī))、紗布、漏斗、燒杯、玻璃棒、量筒(10mL一支)、滴管、試管(20mL兩支)、天平。95%酒精、蒸餾水、0.015mol/L的NaCl溶液、二苯胺試劑。

實(shí)驗(yàn)材料的選取

凡是含有DNA的生物材料都可以考慮，但是使用DNA含量相對(duì)較高的生物組織，成功的可能性更大，鑒定材料《dna的粗提取和鑒定》。

原理

①加入蒸餾水能使雞血細(xì)胞破裂

蒸餾水對(duì)于雞血細(xì)胞來(lái)說(shuō)是一種低滲液體，水分可以大量進(jìn)入血細(xì)胞內(nèi)，使血細(xì)胞脹裂，再加上攪拌的機(jī)械作用，就加速了雞血細(xì)胞的破裂(細(xì)胞膜和核膜的破裂)，從而釋放出DNA。

②加入洗滌劑和食鹽的作用

洗滌劑是一些離子去污劑，能溶解細(xì)胞膜，有利于DNA的釋放;食鹽的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解。

③研磨不充分，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生的影響

研磨不充分會(huì)使細(xì)胞核內(nèi)的DNA釋放不完全，提取的DNA量變少，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，導(dǎo)致看不到絲狀沉淀物、用二苯胺鑒定不顯示藍(lán)色等。

④此步驟獲得的濾液中可能含有的細(xì)胞成分?

可能含有核蛋白、多糖和RNA等雜質(zhì)。

實(shí)驗(yàn)步驟

1.破碎細(xì)胞，獲取含DNA的濾液

動(dòng)物細(xì)胞的破碎比較容易，以雞血細(xì)胞為例，在雞血細(xì)胞液中加入一定量的蒸餾水，同時(shí)用玻璃棒攪拌，過(guò)濾后收集濾液即可。如果實(shí)驗(yàn)材料是植物細(xì)胞，需要先用洗滌劑溶解細(xì)胞膜。例如，提取洋

.蔥的DNA時(shí)，在切碎的洋蔥中加入一定的洗滌劑和食鹽，進(jìn)行充分的攪拌和研磨，過(guò)濾后收集研磨液。

2.去除濾液中的雜質(zhì)

方案一的原理是DNA在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同;方案二的原理是蛋白酶分解蛋白質(zhì)，不分解DNA;方案三的原理是蛋白質(zhì)和DNA的變性溫度不同。

注意事項(xiàng)

①用高鹽濃度的溶液溶解DNA，能除去在高鹽中不能溶解的雜質(zhì);用低鹽濃度使DNA析出，能除去溶解在低鹽溶液中的雜質(zhì)。因此，通過(guò)反復(fù)溶解與析出DNA，就能夠除去與DNA溶解度不同的多種雜質(zhì)。

②方案二是利用蛋白酶分解雜質(zhì)蛋白，從而使提取的DNA與蛋白質(zhì)分開(kāi);方案三利用的是DNA和蛋白質(zhì)對(duì)高溫耐受性的不同，從而使蛋白質(zhì)變性，與DNA分離。

DNA的析出與鑒定

將處理后的溶液過(guò)濾，加入與濾液體積相等、冷卻的酒精溶液，靜置2～3min，溶液中會(huì)出現(xiàn)白色絲狀物，這就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一個(gè)方向攪拌，卷起絲狀物，并用濾紙吸取上面的水分。

取兩支20ml的試管，各加入物質(zhì)的量濃度為2mol/L的NaCl溶液5ml，將絲狀物放入其中一支試管中，用玻璃棒攪拌，使絲狀物溶解。然后，向兩支試管中各加入4ml的二苯胺試劑。混合均勻后，將試管置于沸水中加熱5min，待試管冷卻后，比較兩支試管溶液顏色的變化，看看溶解有DNA的溶液是否變藍(lán)。