第一篇：微生物檢測技術復習資料

名詞解釋

1病原微生物：感染人、動植物，導致疾病發生的有害微生物。

2無菌操作：用于防止微生物進入人體組織或其它無菌范圍的操作技術稱為無菌操作 3滅菌：用物理和化學方法殺滅或清除傳播媒介上一切微生物的方法

4菌落總數：指食品檢樣經過處理，在一定條件下培養后所得1g或1mL檢樣中所含細菌菌落的總數。

5大腸菌群：寄居于人及溫血動物腸道內的腸居菌，隨大便排出體外。食品中大腸菌群數越多，說明食品受糞便污染的程度越大。微生物：一切肉眼看不見或看不清楚的微小生物的總稱。包括病毒、細菌、真菌、原生動物和某些藻類。

7微生物檢測：基于微生物學的基本理論，利用微生物實驗技術，根據各類產品衛生標準的要求，研究產品中微生物的種類、性質、活動規律等，用以判斷環境、產品等衛生質量的一門應用技術。菌落：將細菌接種在固體培養基上經18∽24小時培養，長出肉眼可見的來源于一個細胞的細菌集團。莢膜：在某些細菌細胞外壁外存在著一層松散透明、厚度不定的膠狀物質叫莢膜。10消毒：殺滅或清除傳播媒介上病原微生物,使其達到無害化的FF。

填空簡答

1飲用水的微生物檢測

大腸菌群是指示水質受糞便污染的指示菌，細菌總數指示水體受污染物污染的情況。我國GB5749-85《中華人民共和國國家標準 生活飲用水衛生標準》中規定生活飲用水細菌總數每毫升不得超過100個，大腸菌群每升不得超過3個。培養基的分類（按物理性質）：液體、固體、半固體、脫水培養基

3病毒的組成：核酸和蛋白質革蘭氏染色：陰紅陽紫 5 細菌特殊結構的功能：

鞭毛：是細菌的運動器官，鞭毛菌在液體環境下可自由移動，速度迅速，抗原性 1化學趨向性運動，有助于細菌向營養物質處前進，而逃離有害物質.2.與細菌致病性相關

3.可用以細菌的鑒定和分類

菌毛：菌毛是在某些細菌表面存在著一種比鞭毛更細、更短而直硬的絲狀物，須用電鏡觀察。特點是：細、短、直、硬、多，菌毛與細菌運動無關，根據形態、結構和功能，可分為普通菌毛和性菌毛兩類。前者與細菌吸附和侵染宿主有關，后者為中空管子，與傳遞遺傳物質有關。

芽孢：芽孢是細菌的休眠體，對不良環境有較強的抵抗能力。耐熱性、抗逆性強（抗熱、抗輻射、抗化學物質和抗靜水壓等能力）

莢膜：①抗吞噬作用②黏附作用③抗有害物質的損傷作用④抗干燥作用⑤當缺乏營養時，莢膜可被利用作碳源和能源，有的莢膜還可作氮源。肺炎雙球菌：光滑型(簡稱S型)產生莢膜，有毒；粗糙型(簡稱R型)不產生莢膜，無毒。7 芽孢：抗逆性強

8瘋牛病

牛海綿狀腦病（Bovine spongiform encephalopathy, BSE），又稱瘋牛病，是一種侵犯牛中樞神經系統的慢性的致命性疾病，由一種非常規的病毒——朊病毒（Prion）引起的一種亞

急性海綿狀腦病，這類病還包括綿羊的搔癢病、人的克-雅氏病（Creutzfeldt-Jakob Syndrome , CJD）（又稱早老癡呆癥）、庫魯病以及最近發現的致死性家庭性失眠癥等等。

朊病毒是一類非正常的病毒，它不含有通常病毒所含有的核酸，而是一種不含核酸僅有蛋白質的蛋白感染因子。

朊病毒屬于亞病毒，亞病毒包括：類、擬、朊病毒三類。人類三大流行病原：線蟲（原生、無脊椎動物動物）分類：包括自由生活線蟲（海洋、淡水和土壤中）和危害植物的病原線蟲人類病原真菌的分類：

1）淺部真菌：侵犯皮膚、毛發、指甲，為慢性，頑固性，但影響身體較小；

2）深部真菌：可侵犯全身內臟，嚴重的可引起死亡。

3）此外，有些真菌寄生于糧食、飼料、食品中，能產生毒素引起中毒性真菌病。12原核微生物常見類群

1）真細菌：細菌、放線菌、藍細菌、支原體、立克次氏體和衣原體

2）古生菌 13真菌類群

鞭毛菌亞門、接合菌亞門、子囊菌亞門、擔子菌亞門、半知菌亞門細菌的基本形態

細菌的種類雖然很多，但其基本形態只有三種：球菌（葡萄球菌、雙球菌、鏈球菌、四聯球菌、八疊球菌）、桿菌、螺旋菌（弧菌和螺菌）。15 病毒的分類

1）按感染的對象分

動物病毒、植物病毒、細菌病毒、昆蟲病毒及真菌病毒，另外尚有亞病毒——類病毒(Viroids)擬病毒(Virusoid)和朊病毒(Prion)。

2）按遺傳物質分類分

DNA病毒和RNA病毒兩大類

（噬菌體寄生于細菌中病毒的總稱。）高壓蒸汽滅菌指標： 0.10MPa，121℃，20min左右純種分離的技術方法

1）固體培養基純種分離技術:① 稀釋倒平板法；② 涂布平板法 ③平板劃線分離法；④稀釋搖管法——厭氧微生物的分離

2）液體培養基純種分離技術——稀釋法（不可靠）

3）單細胞（孢子）分離——顯微分離

4）選擇培養: ① 選擇平板培養② 富集培養

問答題

1、微生物有益方面

1）微生物與糧食增產

固氮、解磷、解鉀、生長激素、分解大分子碳源等促生產功能，抗病蟲害。

2）微生物與能源供應

產乙醇、產甲烷、分解長鏈烴或脂肪酸為短鏈燃料，微生物電池、微生物采油。

3）微生物與資源開發

發酵產乙醇、丙酮、水楊酸等化工產品。

4）微生物與環境保護

微生物修復:重金屬、降解塑膠廢品、凈化污水、監測環境污染等。

5）微生物與人類健康

生物制品：菌苗、疫苗、類毒素等；

代謝產物：胰島素、白細胞介素、干擾素、鏈激酶及青霉素等抗生素。

2、微生物有害方面

1）人類疾病

1347年，鼠疫造成歐洲約2500萬人死亡。

2）動植物疾病，降低食物產量及品質

1843-1847年，歐洲馬鈴薯晚疫病，餓死100萬人，164萬逃往北美。

3）污染水源、加工食品、醫藥

完達山刺五加致死事件、太湖藍藻污染等。

4）破壞人類生活用品

家具、化妝品等損害、污染

3樣品采集的原則

1）根據檢驗目的、樣品特點、批量、檢驗方法、微生物的危害程度等確定采樣方案。

2）采樣、保存、運輸、接收過程應遵循無菌操作程序，采取必要的措施保持樣品的原有狀態，防止樣品中原有微生物的種類、數量變化(避免采樣引入新的污染或者對微生物的殺滅因子)。

3)采樣要講究方法、有代表性，不同的樣品有不同的要求，特別是某些特殊樣品。

4)注意采樣時間和種類：一般原則是根據不同疾病的特點和臨床表現，確定采樣時間和標本種類。

5)注意生物安全：采樣中避免造成人員感染、標本和環境的污染。采用防護裝備，注意安全操作和安全包裝樣品。

6)樣品的包裝、密封標志要明確，以備查詢。（用于衛生質量評價的樣品，應標明樣品名稱、編號、采樣時間、采樣量、采樣者、檢測項目等。）

利用某一特定微生物特有的基因序列，設計特異性引物進行PCR擴增。若有條帶，則說明待測樣品中含有目的菌，且目的菌的含量與條帶的亮度呈正相關；若無條帶，則說明待測樣品中無目的菌。微生物檢驗的任務

1）研究各類產品的樣品采集、運送、保存以及預處理方法，提高檢出率。

2）根據各類產品的衛生標準要求，選擇適合不同產品、針對不同檢測目標的最佳檢測方法，探討影響產品衛生質量的有關微生物的檢測、鑒定程序以及相關質量控制措施；利用微生物檢驗技術，正確進行各類樣品的檢驗。

3）正確進行影響產品衛生質量的有關微生物的快速檢測方法、自動化儀器的使用，并認真進行檢驗結果的分析和試驗方法的評價。

4）及時對檢驗結果進行統計、分析、處理，并及時準確地進行結果報告。

5）對影響產品衛生質量及人類健康的相關環境的微生物進行調查、分析與質量控制。微生物的特點：個體小、比表面大；分布廣、種類多；代謝強、繁殖快；易變異、抗性強 7 科赫法則:①分離、純化單菌落;②分別接種寄主;③從致病寄主分離出相應菌株 8 微生物檢測的意義

1）衡量動植物性產品衛生質量的重要指標，也是判定被檢產品能否食用的科學依據。

2）可以判斷產品加工環境衛生狀況，對產品被微生物污染的程度作出正確的評價，為各項

衛生管理工作提供科學依據，提供傳染病和人類、動物和食物中毒的防治措施。

3）“預防為主”：可以有效地防止或者減少食物中毒、人畜共患病的發生，保障人民的身

體健康。

4）對提高產品質量、避免經濟損失、保證出口等方面具有政治上和經濟上的重要意義。*微生物檢測與植物檢疫

植物檢疫目的：發現、檢出和鑒定有害微生物、昆蟲、雜草等，作為出證或檢疫處理的依據。外來有害生物爆發的因素：天敵、環境、寄主、潛在危害的認識（人為因素）。

關系：植物檢疫的一部分，主要負責檢測引起植物病害的微生物，防治病原物的進入或流出，保證農林園藝業安全。

設計題

病原微生物采集、分離、鑒定方案

第二篇：安全檢測技術復習資料

安全檢測技術復習資料生產安全關鍵技術包括：災前抑制、前兆檢測、早期監測、災前撲救。檢測包括檢驗和測量兩方面的含義。檢驗是分辨出被測量值所歸屬的某一范圍帶，以此來判別被測參數是否合格或現象是否存在。測量時把被測未知量與同性質的標準進行比較，確體、控制爆炸范圍、控制引爆源。檢測系統的干擾類型有電磁干擾、機械干擾、光干擾、熱干擾、溫度干擾、化學干擾、射線輻射干擾。抑制電磁干擾的措施有屏蔽技術（靜電屏蔽、電磁屏蔽、低頻磁屏蔽、驅動屏蔽）、接地技術、浮置、濾波、平衡電路。

漏方法、超聲波流量測定檢漏方法、蒸汽測定檢漏方法、遙感檢漏方法）；基于軟件的方法和技術（質量體積平衡檢漏方法、實時瞬變模型檢漏方法、壓力點分析檢漏方法、神經網絡泄漏檢測技術）。

火災探測方法空氣離化探測法、熱檢測法、光電探測方法、光輻射或火焰輻射探測方法、定被測量標準的倍數，并用數字表示這個倍數的過程。傳感器是將非電量轉換為與之有確定對應關系的電量輸出的器件或裝置，它本質上是非電量系統與電量系統之間的接口。傳感器按能力轉換分為能量控制型傳感器（稱為無源傳感器），能量轉換型傳感器（稱為有源傳感器）。按輸入量分為物理傳感器和化學傳感器。按轉換原理分為結構型和物性型傳感器。安全檢測監控系統是由傳感器、信號調整器、輸出環節三部分組成。安全監測的目的為職業健康安全現狀進行評價、安全技術和設備監督、安全技術措施效果進行分析評價等提供可靠而準確的依據，從而達到改善勞動作業條件、改進生產工藝流程，避免和減少系統和設備的故障發生，總的來說就是確保設備的安全運行，預防和消除事故隱患，避免事故發生。安全檢測的意義：全面開展安全檢測，提高我國安全檢測的整體科研水平，對有效減少事故隱患，預防和消除重、特大安全事故的發生，遏制群死群傷、重大經濟損失和保障我國經濟和社會的可持續發展有重大意義。設備的狀態分為正常狀態、異常狀態、故障狀態。誤差的表示方法分為絕對誤差、相對誤差、引用誤差、容許誤差。誤差按規律分為系統誤差、隨即誤差、粗大誤差；按來源分為儀器誤差、人員誤差、理論和方法誤差、環境誤差；隨機誤差符合正態函數分布，具有對稱性，單豐性、有界性、抵償性。數據處理方法分為表格法，圖示法，經驗公式法。信息革命的兩大重要支柱是信息采集和信息處理，信息處理分為時域處理和頻域處理。14 動態數學模型包括微分方程和傳遞函數。15 精確度包括準確度、精密度、精確度。準確度表征系統誤差的大小，精密度表征隨機誤差的大小。儀表中三種常見的防爆措施是控制易爆氣電容式傳感器工作原理。當被測非電量引起式中A，d 變化時，電容 也會隨之變化。如果保持其中兩個參數不變而僅僅改變另一個變量，就可以把非電量的變化轉化成電容的變化。因此電容變化的大小與被測參數的大小成比例。壓電傳感器串聯時輸出電容C1,輸出電壓U1，電荷量Q1與單片間的關系是：Q1=Q，U1=2U，C1=C/2；并聯時Q1=2Q，U1=U，C1=2C。21 半導體熱敏電阻按半導體電阻隨溫度的典型特征分為負電阻系數熱敏電阻（NTC）、正電阻系數熱敏電阻（PTC）、臨界溫度熱敏電阻（CTR）。半導體的導電能力完全取決于半導體導帶內載流子數目的多少。光敏二級管載電路中一般處于反向工作狀態。赫爾效應：當電流方向與磁場方向垂直時，在與電流和磁場都垂直的金屬板的兩表面間出現電勢差。常用經驗溫標有攝氏溫標、華氏溫標、列氏溫標。熱電偶的冷端溫度補償方法溫度修正法、水浴法、補償電橋法、補償導線法。27 壓力儀表按敏感元件和轉換原理的特性分為液柱式壓力儀表、彈性式壓力儀表、負荷式壓力儀表、電測式壓力儀表。壓力儀表量程選擇，穩壓時不超過量程的3/4，測脈動壓力時不超過量程的2/3，測高壓時不超過量程的3/5。流量指單位時間流內流過管道某截面流體的體積或質量。感煙探測器有透射式感煙探測器、散射事感煙探測器、離子式感煙探測器。

容器構件破壞引起危險物質泄漏的原因有三個，容器內壓力異常上升、容器構件受到異常外部載荷、容器或管道構件材料強度降低（物料腐蝕或摩擦、材料的低溫脆性、反復應力或靜載荷作用、材料暴露于高溫）。32 管道泄漏檢測技術，基于硬件的方法和技術（聲發射技術管道檢漏方法、電纜傳感器管道檢測方法、光纖管道檢漏方法、土壤檢測檢

可燃氣體探測法。

超聲波檢測方法有脈沖反射法，共振法、穿透法、接觸法、液浸法。

磁粉檢測的三個步驟是被檢測的工件必須得到磁化、必須在磁化的工件上添加合適的磁粉、對任何磁粉的堆積必須加以觀察和解釋。36 紅外線檢測的特點非接觸性、安全性極強、檢測準確、檢測效率高。

紅外線檢測方法有被動式紅外線檢測、主動性紅外檢測。

結構防爆儀表的防爆結構有隔爆型、防爆型通風充氣型、防爆充油型、防爆安全型、特殊防爆型。

實現安全檢測儀表本質安全的基本措施有：合理選擇元件的額定功率、降低電源的容量、機械隔離與電氣隔離、關鍵部位采用不出故障元件設計。

隔離式安全柵分為檢測端安全柵、執行端安全柵。

超聲波檢測的優點，適應范圍廣、不會對工件造成破壞、僅需從一側接近被檢工件，便于復雜形狀工件的檢測、穿透能力強、靈敏度高、對確定內部缺陷的大小，位置，取向，深埋、性質等參量較之其他無損檢測方法有綜合優勢、檢驗成本低，速度快，能快速自動檢測、檢測儀器體積小，質量輕，現場使用方便、對人體及環境無害。

常用紅外診斷方法有五種；表面溫度判斷法、相對溫度差判斷法、同類比較法、熱譜圖分析法、檔案分析法。

第三篇：微生物工程考試復習資料

篩選抗生素產生菌的方法？關鍵是？與哪些要求有關？

篩選抗生素產生茵的方法包括抑菌圈法、稀釋法、擴散法、生物自顯影法等。在這些方法中，試驗茵的選擇是成功的關鍵，它直接與檢出的靈敏性、抗茵素的活性的抗茵譜有關。除使用高靈敏度的試驗茵外，采用專一性很強的篩選技術也可檢出新的抗生素。主要是利用與生長素作用機制相關的酶、酶抑制劑、激活劑、抗體等建立起來的高靈敏度、專一的篩選技術。

含微生物材料的標本采集的要求

采集菌種標本遵循的原則是材料的來源要廣泛，標本預處理的目的？

提高菌種分離的效率

自然選育的定義、原理？誘變育種的原理、方法理論基礎。

定義：不經人工處理，利用微生物的自然突變進行菌種選育的過程叫自然選育。原理：多因素低劑量的誘變效應和互變異構效應。多因素低劑量誘變效應，是指在自然環境中存在著低劑量的宇宙射線、各種短波輻射、低劑量的誘變物質和微生物自身代謝產生和誘變物質等作用引起的突變。互變異構效應是指四種堿基第六位的酮基或氨基的瞬間變構，會引起堿基的錯配。自然突變可能會產生兩種截然不同的結果，一種是菌種退化面導致目標產物產量或質量下降；另一種是對生產有益的突變。為了保證生產水平的穩定和提高。應經常地進行生產菌種的自然選育，以淘汰退化的，選出優良菌種。誘變育種的理論基礎是基因突變，突變主要包括染色體畸變和基因突變兩在類。誘變育種就是利用各種被稱為誘變劑的物理因素和化學試劑處理微生物細胞，提高基因突變的頻率，再通過適當的篩選方法獲得所需要的高產優質菌種的育種方法。誘變育種一般包括誘變和篩選兩部分，誘變成功的關鍵包括出發菌株的選擇、誘變劑種類和劑量的選擇，經及合理的使用方法。篩選部分包括初篩和復篩來測定菌種的生產能力。誘變育種是誘變和篩選過程的不斷重復，進到獲得高產菌株。

基因工程的穩定性（提高穩定性的方法，質粒不穩定產生的原因）

基因工程茵在傳代中常出現質粒不穩定現象。質粒不穩定分為分裂不穩定和結構不穩定兩種情況。質粒不穩定常見的是分裂不穩定，它主要與兩個因素有關：一是含質粒茵產生不含質粒子代的頻率；二是這兩種茵的生長速率差異的大小。工程菌的培養一般采用分成兩階段培養法來提高質粒的穩定性。第一階段以增加菌體的生長達到一定密度為目的個源基因不表達；第二階段再誘導外源基因表達。

突變菌株的篩選方法？

篩選營養缺陷型突變菌株是通過解除協同反饋調節，可使另一分支代謝途徑中的末端產物積累。而是遺傳障礙不完全突變是一種酶活性下降的突變，不是完全喪失活性，因此不會過量積累末端產物，可避免反饋調節作用，大量積累中間產物，這種突變菌株在不添加相應物質的萊西培養基上長成很小的菌落。抗反饋阻遏和抗 反饋抑制突變菌株是通過抗 結構類似物突變的方法篩選出來的。也可從營養缺陷型的回復突變菌株獲得抗反饋突變株。通過改變菌種的遺傳特性篩選組成型突變株。

微生物代謝類型和自我調節部位？許多化合物代謝的部位是受抑制的有哪些方法？

微生物生長繁殖主要依賴兩種代謝途徑：分解代謝和合成代謝。分解代謝是從環境中吸收各種春風碳源、氮源等物質降解，為細胞的生命活動提供能源和小分子中間體。合成代謝是利用分解代謝的能量和中間估合成氨基酸、核酸等單體物質，及蛋白質、核酸、多糖等多聚物。微生物小分子物質的合成和降解是由其自我調節的。許多化合物的代謝部位是受到控制的，有三種控制方式。首先，細胞膜對大多數親水分子起一種屏障作用，但 又存在著某些輸送系統即通道。這些通道是輸送某些化合物的系統，其中有些是需能的。它們受ATP的影響，并受透性酶的調節。其次，在原核生物有兩種 控制通量的方法，即調節現有酶量和改變酶分子的活性。對酶量的調節可以通過增加或減少關鍵酶的合成或降解速率進行。其三，限制基質的有形接近。

酶激活作用與抑制作用（概念）

酶的激活作用和抑制作用是機體內存在的兩個矛盾著的過程，并且普遍存在于微生物生物的代謝中。酶的激活作用是指在某個酶促反應系統中，某種低分子質量的物質加入后，導致原來無活性或活性很低的酶轉變為有活性或活性提高，使酶促反應速率提高的過程。酶的抑制作用是指在某個酶促反應系統中，某種低分子量的物質加入后，導致酶活力降低的過程。酶活性調節的機制

酶活性調節的機制研究得最清楚的是酶的變構理論和酶分子的化學修飾調節理論。某些物質能與酶分子上的非催化部位特異地結合，引起酶蛋白的分子構象發生改變，從而改變酶的活性，這種現象稱為酶的變構調節或稱別位調節。受這種調節作用的酶稱為別構酶或變構酶，能使酶發生變構效應的物質稱為變構效應劑;如變構后引起酶活性的增強，則此效應劑稱為激活變構劑或正效應物；反之則稱為抑制變構劑或負效應物。變構調節在生物界普遍存在，它是人體內快速調節酶活性的一種重要方式。

酶分子肽鏈上的某些基團可在另一種酶的催化下發生可逆的共價修飾，從而引起酶活性的改變，這個過程稱為酶的酶促化學修飾(chemical modification)。如磷酸化和脫磷酸，乙酰化和去乙酰化，腺苷化和去腺苷化，甲基化和去甲基化以及-sh基和－s－s－基互變等，其中磷酸化和脫磷酸作用在物質代謝調節中最為常見。

酶活性調節和酶量調節的概念和區別

酶量調節與酶活性調節在調節方式上是不同的。酶活性調節不涉及酶量的變化。酶量調節中不涉及酶活性的變化，主要通過影響酶合成或酶合成的速率控制酶量的變化，最終達到控制代謝過程的目的。酶活性調節的效果是即時而又迅速的；而酶量調節涉及到酶蛋白合成，所以調節效果較慢。分支生物合成途徑的調節。

同工酶調節、順序反饋調節、協同反饋調節、累加反饋調節、激活和抑制聯合調節和酶的共價調節等。

溫度對發酵的影響主要表現在哪些方面？溫度對發酵的影響是多方面而復雜的，主要表現在對細胞生長，產物形成，發酵液的物理性質和生物合成方向等方面。發酵熱的概念，微生物產熱的特點

發酵熱是微生物發酵過程中釋放出來的凈熱量，以J/(m3*h)為單位。

生物熱產生的大小有明顯的階段性，在孢子發芽和生長初期，生物熱的產生是有限的，當進入對數生長期后，生物熱就就大量產生，成為發酵過程熱平衡的主要因素。此后生物熱的產生開始減少，隨著菌體的逐漸衰老、自溶，愈趨低落。

PH對發酵的影響，不同微生物生物最適PH和產物形成最適PH的情況及控制

影響細菌體的形態；產物穩定性；某些生物合成途徑等。

最適發酵溫度選擇根據

選擇最適發酵溫度應該考慮兩個方面：微生物生長的最適溫度和產物合成的最適溫度。當二者處于同步時應以敏感最強的一方面控制溫度。

耗氧速率、攝氧率、溶解濃度的概念及影響因素

耗氧速率：單位質量的細胞（干重）在單位時間內消耗氧的量。攝氧率：單位體積培養液在單位時間內消耗的氧量。細胞濃度直接影響培養液的攝氧率，培養基的成分和濃度顯著影響微生物的攝氧率。PH 溫度等也有影響。

空氣除菌設備？

空氣的除菌必須配備一定量的空氣壓縮機和空氣除菌設備。空氣除菌設備流程。包括粗過濾器，空壓機，空氣貯罐，空氣冷卻器，空氣分離器，空氣加熱器，空氣過濾器。標準發酵罐的結構？

標準發酵罐是既有機械攪拌又有壓縮空氣分布裝置的發酵罐，主要部件包括罐身，攪拌器，擋板，冷卻裝置，空氣分布裝置，軸封等。

高溫快速滅菌設備。答：加熱器中，培養基與蒸汽混合，迅速上升到130—140度。連消

塔式連續滅菌設備有套管式和氣液混合式兩種。

不同發酵動力學類型特征？

發酵類型即動力學模型是為了描述菌體生長，碳原利用與代謝產物形成速度變化，以及它們相互之間的動力學關系。第一型特點：菌體生長，碳源利用和產物形成幾乎都在相同的時間出現高峰，即表現出產物直接與碳源利用有關。第二型特點：在發酵的第一時期菌體迅速增長，而產物的形成很少或全無；在第二時期產物以高速度形成，生長也可能出現第二高峰，碳源利用在這兩個時期都很高。第三型特點是：產物形成一般在菌體生長接近或達到最高生長時期，產物形成與碳源利用無準量關系，產量遠低于碳源的消耗量。

空氣溶膠過濾除菌的原理？

微生物并非一種簡單的幾何形狀，介質空間隙往往遠大于顆粒直徑。微粒隨氣體通過過濾層時，濾層纖維所形成的網格阻礙氣流前進，使氣流無數次改變運動速度和運動方向，饒過纖維前進，這些改變引起微粒對過濾層纖維產生慣性沖擊，阻力，重力沉降，布朗擴散，靜電吸引等作用，而將微粒攔截。高溫短時間滅菌原理？

溫度超過微生物最適生長溫度上限時，微生物細胞中的蛋白質會發生不可逆的凝固變性變化，在很短時間引起微生物的死亡。吸附作用力？

它是范德華力，它是一組分子引力的總稱，包括三種力，即定向力，誘導力，和色散力。

吸附過程基礎理論？

固體表面的分子或原子與液體表面分子一樣，處于特殊的狀態，具有不飽和的剩余力，即存在著表面力，所以它們能夠吸附外界物質如分子，原子或離子使這些物質在吸附劑表面附近形成多分子層或單分子層，而降低表面能，使自身達到穩定狀態。分配常數，分離因素？

K為分配常數，在常溫下C為常數，單位為MOL/L。條件是必須是稀溶液；溶質對兩溶劑的互溶度沒影響；必須是同一種分子類型，即不發生締結和解離。

泡沫產生的原因，泡沫穩定性因素及對發酵的影響 ？

原因但是由于幾方面造成的，包括外力，微生物代謝及培養基的成分等。泡漠的穩定性主要與液體的表面性質對如表面張力，表面黏度和飽漠的機械強度有密切的關系。影響有泡漠生成過多，會引起“逃液”，使得發酵體積的減少，直接影響了收率。泡沫升到罐頂，頂到軸封或逃液，都增加了雜菌污染的機會。

發酵液處理的目的？

目的是改變發酵液的物理性質，加快懸浮液中固形物沉降的速度；盡可能使產物轉入便于以后處理的相中，能夠除去部分雜質。COHN方程是？

log(S/S0)=-Ks*I式中S—離子強度為I時的蛋白質的溶解度；S0表示純溶劑[既I=0]時，蛋白質的溶解度；KS——鹽析常數，與溫度和PH無關；I——離子強度

有機溶劑沉淀法，溶劑萃取原理，有機溶劑的選擇？答：是利用與水可以互溶的有機溶劑使產物沉淀的方法。原理是這種沉淀作用是多種效應的結果，但其主要作用是降低水溶液的介電常數。當有機溶液濃度曾大時，水對蛋白質等分子表面上荷電基團或親水基團的水化程度降低，或者是說溶液的介電常數降低，因而靜電吸引力增大。最好的的是乙醇和丙酮。

12．酶合成調節的誘導作用、阻遏、機制

13.末端產物阻遏和分解代謝產物阻礙

第四篇：藥品微生物檢測技術部分知識點梳理A

A（僅供中藥制藥技術專業參考)藥品微生物檢測技術部分知識點梳理□

一、微生物的概念

微生物是指那些形體微小、結構簡單、必須借助顯微鏡才能看見的微小生物類群的總稱。（μm →光學顯微鏡 or nm →電子顯微鏡 1μm=10-6m 1nm=10-9m）

二、微生物的分類

1、按結構分為三大類：非細胞型（病毒virus）、原核細胞型（“三菌”和“三體”細菌、藍細菌、放線菌；支原體、衣原體、立克次體）、真核細胞型（真菌、原生動物、顯微藻類）。

2、按生物學特性分類：病毒、細菌、藍細菌、放線菌、支原體、衣原體、立克次體、真菌。

三、微生物的特點

1、類群：種類多、分布廣、繁殖快、易培養、易變異、代謝能力強。

2、個體：小（個體微小）、簡（結構簡單）、低（進化地位低）。

四、藥品無菌檢測的概念及意義

1、概念：無菌檢測法系用于檢測藥典要求無菌檢測的藥品、醫療器具、原料、輔料及其他品種是否無菌的一種方法（若供試品符合無菌檢測法的規定，僅表明了供試品在該檢測條件下未發現微生物污染）。

2、意義：凡是直接進入人體血液循環系統、皮下組織、肌肉或者作用于燒（燙）傷、潰瘍等部位的樣品，如果含有活菌，進入人體后往往會產生劇烈的反應，引起一系列并發癥，對患者的安全都可能構成威脅。因此，無菌檢測在藥品監督和監控有著十分重要的意義。

五、藥品無菌檢測概況

1、基本原理：無菌檢測是利用無菌操作的方法，將被檢測的藥品分別加入適合需氧菌、厭氧菌和真菌生長的液體培養基中，置于適宜溫度下培養一段時間后，觀察有無微生物生長，來判斷藥品是否合格的方法。

2、檢測數量：一次試驗所用供試品最小包裝容器的數量。

3、檢測量：一次試驗所用供試品的總量（g或ml）.4、培養基及其用量：每個容器內培養基的用量應符合接種的供試品體積不得小于培養基體積的10%。硫乙醇酸鹽流體培養基每管裝量不小于15ml，改良馬丁培養基不小于10ml。

5、無菌檢測范圍：各種注射劑、眼用及外傷用制劑、植入劑、可吸收的止血劑。

六、藥品無菌檢測方法

1、直接接種法（培養14d）

特點：操作簡單

適用范圍：無抑菌作用和無防腐作用藥品

1接種陽性對照目的：○

2檢測陽性菌在加入供試品的培養基中能否生長○

3驗證供試品有無抑菌活性物質○

2○3○1的試驗。接種陽性對照試驗定義：是○

1無抑菌作用及抗革蘭陽性菌→金黃色葡萄球菌根據供試品的特性選取陽性對照菌：○

2抗革蘭陰性菌為主→大腸埃希菌○

3抗厭氧菌→生孢梭菌——（以上3者）硫乙醇酸○

鹽流體培養基

4抗真菌→白色念珠菌——改良馬丁培養基○

接種陰性對照目的：檢測稀釋劑或相應溶劑是否含有微生物

接種陰性對照試驗定義：藥品檢測的同時取稀釋劑或相應溶劑作為陰性對照品，按照藥品無菌檢測的方法進行檢測的試驗。

2、薄膜過濾法（優先用）

特點：實用性廣、準確性高

適應范圍：任何類型藥品

濾器分為：封閉式薄膜過濾器（優先用 孔徑小于0.45um，直徑47mm）、傳統開放式薄膜過濾器

檢測原理：供試品通過集菌儀的定向蠕動加壓作用，實施正壓過濾并在濾器內進行培養，用以檢測供試品是否含菌。（詳P135）

說明：由于本人的水平和能力有限，難免有疏漏和不足之處，懇請提出寶貴意見，以便改正。

2013年5月

第五篇：表面微生物檢測方法

空氣、食品接觸面微生物檢驗方法、檢驗標準 目的：

檢測生產車間空氣、操作人員手部、與食品有直接接觸面的機械設備的微生物指標，生產區域環境當中病原微生物的監控，達到規定標準，以控制食品成品的質量。參照標準：

中華人民共和國國家標準《一次性使用衛生用品衛生標準》GB15979－1995、《HACCP原理與實施》、中華人民共和國國家標準《公共場所空氣微生物檢驗方法細菌總數測定》GB/T 18204.1－2000、中華人民共和國進出口商品檢驗行業標準SN 0169-92/SN 0172-92/ SN 0170-92、出入境檢驗檢疫局二000四年《出入食品微生物檢驗培訓教材》中《出入食品生產廠衛生細菌檢驗方法》、日本東京冷凍食品檢驗方法。采樣與檢測方法：

3.1空氣的采樣與測試方法 3.1.1樣品采集：(1)取樣頻率：

a)車間轉換不同衛生要求的產品時，在加工前進行采樣，以便了解車間衛生清掃消毒情況。b)全廠統一放長假后，車間生產前，進行采樣。

c)產品檢驗結果超內控標準時，應及時對車間進行采樣，如有檢驗不合格點，整改后再進行采樣檢驗。

d)實驗性新產品，按客戶規定頻率采樣檢驗。e)正常生產狀態的采樣，每周一次。（2）采樣方法

在動態下進行，室內面積不超過30 m2，在對角線上設里、中、外三點，里、外點位置距墻1 m；室內面積超過30 m2，設東、西、南、北、中五點，周圍4點距墻1 m。采樣時，將含平板計數瓊脂培養基的平板(直徑9 cm)置采樣點(約桌面高度)，并避開空調、門窗等空氣流通處，打開平皿蓋，使平板在空氣中暴露5 min。采樣后必須盡快對樣品進行相應指標的檢測，送檢時間不得超過6h，若樣品保存于0～4℃條件時，送檢時間不得超過24h。3.1.2菌落培養：

（1）在采樣前將準備好的平板計數瓊脂培養基平板置37℃±1℃培養24 h，取出檢查有無污染，將污染培養基剔除。（2）將已采集樣品的培養基在6 h內送實驗室，細菌總數于37℃±1℃培養48h觀察結果，計數平板上細菌菌落數。（3）菌落計算：

a)記錄平均菌落數，用“個/皿”來報告結果。用肉眼直接計數，標記或在菌落計數器上點計，然后用5～10倍放大鏡檢查，不可遺漏。

b)若培養皿上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2 個或2個以上菌落計數。3.2工作臺（機械器具）表面與工人手表面采樣與測試方法： 3.2.1樣品采集：(1)取樣頻率：

a)車間轉換不同衛生要求的產品時，在加工前進行擦拭檢驗，以便了解車間衛生清掃消毒情況。

b)全廠統一放長假后，車間生產前，進行全面擦拭檢驗。

c)產品檢驗結果超內控標準時，應及時對車間可疑處進行擦拭，如有檢驗不合格點，整改后再進行擦拭檢驗。

d)實驗新產品，按客戶規定擦拭頻率擦拭檢驗。e)對工作表面消毒產生懷疑時，進行擦拭檢驗。f)正常生產狀態的擦拭，每周一次。（2）采樣方法：

a)工作臺（機械器具）：用浸有滅菌生理鹽水的棉簽在被檢物體表面（取與食品直接接觸或有一定影響的表面）取25cm2 的面積，在其內涂抹10次，然后剪去手接觸部分棉棒，將棉簽放入含10mL滅菌生理鹽水的采樣管內送檢。

b)工人手：被檢人五指并攏，用浸濕生理鹽水的棉簽在右手指曲面，從指尖到指端來回涂擦10次，然后剪去手接觸部分棉棒，將棉簽放入含10mL滅菌生理鹽水的采樣管內送檢。（3）采樣注意事項： 擦拭時棉簽要隨時轉動，保證擦拭的準確性。對每個擦拭點應詳細記錄所在分場的具體位置、擦拭時間及所擦拭環節的消毒時間 3.2.2 細菌·大腸菌群的檢測培養: 樣液稀釋：將放有棉棒的試管充分振搖。此液為1：10稀釋液。如污染嚴重，可十倍遞增稀釋，吸取1ml 1：10樣液加9ml無菌生理鹽水中，混勻，此液為1：100稀釋液。3.2.2.1 細菌總數：

（1）以無菌操作，選擇1～2個稀釋度各取1ml樣液分別注入到無菌平皿內，每個稀釋度做兩個平皿（平行樣），將已融化冷至45℃左右的平板計數瓊脂培養基傾入平皿，每皿約15ml，充分混合。

（2）待瓊脂凝固后，將平皿翻轉，置36℃±1℃培養48 h后計數。（3）結果報告：報告每25cm2食品接觸面中或每只手的菌落數 3.2.2.2大腸菌群：（1）平板法: a)以無菌操作，選擇1～2個稀釋度各取1ml樣液分別注入到無菌平皿內，每個稀釋度做兩個平皿（平行樣），將已融化冷至45℃左右的去氧膽酸鹽瓊脂培養基傾入平皿，每皿約15ml，充分混合。待瓊脂凝固后,再覆蓋一層培養基，約3-5 ml。

b)待瓊脂凝固后，將平皿翻轉，置36℃±1℃培養24h后計數。c)結果計算：以平板上出現紫紅色菌落的個數乘以稀釋倍數得出。d)結果報告：報告每25cm2食品接觸面中或每只手的菌落數（2）試管法: a)以無菌操作，選擇3個稀釋度各取1ml樣液分別接種到BGLB肉湯培養基中，每個稀釋度接種三管。

b)置BGLB肉湯管于36℃±1℃培養48±2h。記錄所有BGLB肉湯管的產氣管數。

c)結果報告：按BGLB肉湯管產氣管數，查MPN表報告每25cm2食品接觸面中或每只手的大腸菌群值。

3.2.3 金黃色葡萄球菌檢測（1）定性檢測

a)取1ml 稀釋液注入滅菌的平皿內，傾注15-20ml的B-P培養基，（或是吸取0.1稀釋液，用L棒涂布于表面干燥的B-P瓊脂平板），放進36±1℃的恒溫箱內培養48±2小時。b)從每個平板上至少挑取1個可疑金黃色葡萄球菌的菌落作血漿凝固酶實驗。

c)結果報告：B-P瓊脂平板的可疑菌落作血漿凝固酶實驗為陽性，即報告手（工器具）上有金黃色葡萄球菌存在。（2）定量檢測 a)以無菌操作，選擇3個稀釋度各取1ml樣液分別接種到含10﹪氯化鈉胰蛋白胨大豆肉湯培養基中，每個稀釋度接種三管。

b)置肉湯管于36±1℃的恒溫箱內培養48小時。劃線接種于表面干燥的B-P瓊脂平板，置36℃±1℃培養45～48小時。

c)從B-P瓊脂平板上，挑取典型或可疑金黃色葡萄球菌菌落接種肉湯培養基，36℃±1℃培養20～24小時。

d)取肉湯培養物做血漿凝固酶試驗，記錄試驗結果。

e)報告結果：根據凝固酶試驗結果，查MPN表報告每25 cm2食品接觸面中或每只手的金黃色葡萄球菌值。

3.3工廠環境中病原體的檢測計劃與方法

檢測計劃：為了保證食品安全，工廠應該對生產環境中的病原微生物進行檢測和評估，檢測項目包括李斯特菌，沙門氏菌等病原體微生物，化驗室應該按照一定的計劃對生產場所環境中的病原體進行檢測，其中包括地面、下水道、排水溝、墻壁、天花板、設備框架、運輸的支架，冷藏裝置、速凍機、傳送帶、設備的螺絲、維修工具等部位。當某個點檢測到病員微生物時，應該對環境中的相似點加大檢測頻率；在把所有的預定點檢測完后，應該對環境中的病原微生物的存在狀況進行全面評估，在下一次環境檢測循環過程中加強檢測容易出現病原體的環境點，達到持續改進的目的。

檢測頻率: 每月兩次,每次每個區域至少選取5個檢測點,分別進行檢測。

3.3.1 環境李斯特菌的檢測方法（3MTM PetrifilmTM 環境李斯特菌的測試片）3.3.1.1 用涂抹棒，海綿或者其他采樣設備收集環境樣本。

3.3.1.2 將收集的樣本添加10毫升滅菌的緩沖蛋白胨水，將樣本與緩沖蛋白胨混合1分鐘，將樣品置于室溫（20-30℃）1小時，最久不超過1.5小時，以修復損傷的李斯特菌。3.3.1.3 將測試片放在平坦處，掀起上層膜。

3.3.1.4 用移液器垂直滴加3毫升樣品到下層膜中央，將上層膜緩慢蓋下，以免產生氣泡。3.3.1.5 輕輕將塑料壓板放在位于接種區上層膜上，不要壓，扭轉或者滑動壓板。提起壓板等至少十分鐘，以使膠體凝固。

3.3.1.6 將測試片透明面朝上，可疊放至十片，在37℃±1℃培養26-30小時，可以用標準菌落記數器或者其他光學放大器判讀，不要記數圓形輪廓上的菌落，因為他們不受選擇性培養基的影響。

3.3.1.7 對于定性檢測，根據紫紅色菌落是否存在，結果記為檢出或者未檢出。3.3.2 環境中沙門氏菌的檢測方法

3.3.2.1采樣地點: 選取采樣點時因盡量選取微生物容易滋生的地方 冷凍車間

FD車間

東區初加工

傳遞窗口表面、排水溝、排水溝出口、墻壁、地面

卸料間 墻壁、墻角、地面、天花板、物料車表面

東區精加工

地面、墻壁、墻角、排水溝、排水溝出口、速動機鏈條、天花板

暫存間

墻壁、地面、天花板、墻角、墻縫

西區初加工

傳遞窗口表面、地面、墻壁、排水溝、排水溝出口

挑選間

墻壁、地面、天花板、墻角、墊板

西區精加工

地面、墻壁、墻角、排水溝、排水溝出口、速動機鏈條、天花板

包裝室

墻壁、地面、天花板、金探傳送帶表面、落地料存放處

3.3.2.2 操作步驟

3.3.2.2.1采樣應在生產開始后進行，用已浸潤過的棉拭在選定的被測表面旋轉涂抹約100cm2的面積，然后將棉拭放回涂抹試管并蓋緊。3.3.2.2.2將樣品帶回實驗室，每5個點混合成一個樣品, 登記編號,按照SN0170-92標準及時檢測，若有陽性結果出現，應逐步對所混合的每個點分別檢測。

物體表面涂抹菌落總數計算方式：物體表面細菌總數（cfu/c㎡）=平皿上菌落的平均數*采樣液稀釋倍數/采樣面積（cm2）

根椐GB15979－2002《一次性衛生用品衛生標準》的標準,生產環境衛生指標 1 裝配與包裝車間空氣中細菌菌落總數應≤2 500 cfu/m3。2 工作臺表面細菌菌落總數應≤20 cfu/cm2。

3.工人手表面細菌菌落總數應≤300 cfu/只手，并不得檢出致病菌。人員和環境衛生檢測方法

一、空氣采樣及檢驗方法

1培養基：普通營養瓊脂平板，按GB4789.28中3.7條配制 2采樣（空氣沉降法）

2.1布點：面積小于30平方米的車間，設一對角線，在線上取3點，即中心一點，兩端在距墻1米處各取一點；面積大于30平方米的車間，設東、西、南、北、中5個點，其中東、西、南、北點均距墻1米。

2.2采樣高度：與地面垂直高度80-150厘米。

2.3采樣方法；用直徑為9厘米的普通營養瓊脂平板在采樣點上暴露20分鐘蓋上送檢培養。3培養：于37℃培養24小時。4檢測頻率：每周 空氣質量標準：

生車間、熟車間、成品車間：低于100個 半成品庫、成品庫：低于10個

二、設備的采樣與檢驗方法

根據生產過程所要求的重點衛生部位，實驗室對其進行涂抹采樣，進行細菌總數檢驗。1采樣方法

1.1涂抹法（適用于表面平坦的設備和工器具產品接觸面）

取經過滅菌的鋁片框（框內面積為50平方厘米）放在需檢查的部位上，用無菌棉球蘸上無菌生理鹽水擦拭鋁片中間方框部分，擦完后立即將棉球投入盛有10毫升無菌生理鹽水的試管中，此液每毫升代表5平方厘米。

1.2貼紙法（適用于表面不平坦的設備和工器具接處面）

將無菌規格紙（5×5厘米，紙質要薄而軟）用無菌生理鹽水泡濕后，于需測部分分別貼上兩張，兩張紙面積共50平方厘米，然后取下放入盛有10毫升無菌生理鹽水的試管中，此液每毫升代表5平方厘米。2檢驗方法

2.1細菌總數的檢驗

將上述樣液充分振搖，根據衛生情況，相應地做10倍遞增稀釋，選擇其中2-3個合適的稀釋度作平皿傾注培養，培養基用普通營養瓊脂，每個稀釋度作2個平皿，每個平皿注入1毫升樣液，于37℃培養24小時后計菌落數。結果計算

表面細菌總數（cfu/cm2）=平皿上菌落的平均數×樣液稀釋倍數/30×2 2.2致病菌的檢驗

沙門氏菌，參照GB4789.4進行 金黃色葡球菌，參照GB7918.5進行

4.檢驗合格標準：細菌總數10－100個∕cm2，5.關鍵點：細菌總數≤10個∕cm2 一般區域：細菌總數≤100個∕cm2

三、人員手表面細菌污染情況的檢驗

1.采樣方法：用一支蘸有無菌生理鹽水的棉拭子涂擦被檢對象手的全部，反復兩次，涂擦的時候棉拭子要相應地轉動，擦完后，將手接觸部分剪去，將棉拭子放入裝有10毫升無菌生理鹽水的試管內送檢培養。

2.檢驗方法：同工器具表面細菌總數檢驗方法。

3.結果計算：每只手表面的細菌總數（cfu/只手）=平皿上菌落的平均數×樣液稀釋倍數

四、消毒液藥效的微生物學鑒定法

1采樣對象：正常使用的消毒液，和已知配制好備用的消毒液 2采樣及檢驗方法

在無菌條件下，用無菌吸管吸取1毫升樣液，加入9毫升稀釋液中混勻，對于醇類與酚類消毒劑，稀釋液用普通營養肉湯即可；對于含氯消毒劑、含碘消毒劑，需在肉湯中加入0.1%硫代硫酸鈉，對洗必泰、季銨鹽類消毒劑，需在肉湯中加入3%（W/V）土溫80和0.3%卵磷脂；對醛類消毒劑，需在肉湯中加入0.3%甘氨酸；對于含有表面活性劑的各種復方消毒劑，需在肉湯中加入（W/V）土溫80，以中和被檢樣液中的殘效作用，將注入了樣液的稀釋液充分搖勻，取1毫升注入平皿，隨之倒入普通營養瓊脂，待瓊脂凝固后，翻轉平皿，將平皿于37℃條件下培養24小時后計平板上生長的菌落數。3結果分析

平板上有菌生長，表明被檢樣液中有殘存活菌，若每個平板菌落數在10個以下，仍可用于消毒，若每個平板菌落數超過10個，說明每毫升被檢樣液含菌量已超過100個，即不宜在用于消毒。

該公式是一個經驗公式.它的理論模式依據是:100CM2的面積上10MIN降落的菌落數, 等于1升空氣中所含的細菌總數.系數50000基于上述假說和單位換算而來.細菌總數(CFU/M3)=5/10T*100/A*1000*N=50000*N/AT

5/10T:實際放置了5MIN;

100/A:A單一培養皿面積;

1000:1M3=1000L啊,換算成m3

1、空氣細菌落菌數單位既然是cfu/m3，那采樣時應該還要記錄放置平皿的高度。

2、食品安全管理體系中罐頭行業有個標準如下：

落下菌數

空氣污染程度

評價

30以下

清潔

安全

30～50

中等清潔

50～70

低等清潔

應加注意

70～100

高度污染

對空氣要進行消毒

100以上

嚴重污染

禁止加工

3、是否可根據企業相應的加工產品微生物指標進行自行制定？