第一篇：農桿菌侵染煙草葉片表皮細胞實驗步驟

農桿菌侵染煙草葉片表皮細胞實驗步驟

整理人：早熟組趙鳳利

一、準備試劑：

1.加有三抗的YEB或LB液體培養基，用于搖菌；

2.滲透液(50ml)：250mg D-glucose，5ml MES 原液，5ml Na3PO4·12H2O 原液，5ul 1M 乙酰丁香酮原液，加dH2O至50ml。

1).500 mM MES(Sigma)：4.88 g溶于50ml dH2O，保存于4℃

2).20 mM Na3PO4·12H2O(BDH)：0.38 g 溶于50ml dH2O，保存于4℃

3).1M 乙酰丁香酮：0.196 g，加DMSO至1 ml，可分裝成小劑量，存于-20℃。

二、實驗步驟：

1.將檢測成功的農桿菌菌液過夜擴搖，28℃,200rpm；

2.取1-1.5 ml 菌液，加到滅菌的1.5ml離心管中；

3.1000 g，10 min，沉淀菌體(室溫)，去上清，加1 ml 滲透液，懸浮菌體；

4.重復步驟3，進一步除去少量的抗生素；

5.取少量懸浮菌液稀釋10倍，測定OD600值，并乘以10，作為懸浮菌液的OD600值；注：如果懸浮菌液的OD600值在1.5-2.0之間，說明有大量的死菌細胞，將降低轉化的效率。

6.確定懸浮菌液對滲透液的滴定度，計算稀釋系數，使最終懸浮菌液(用于侵染)為0.5-5.0 ml，OD600為0.01-0.1，通常0.5-1.0 ml的最終懸浮菌液就能滿足侵染了；

如：需要OD600=0.1的500 ul最終懸浮菌液，而測定的懸浮菌液的OD600=0.4，則最終懸浮菌液中，懸浮菌液的用量為(0.1*500)/0.4=125 ul，則需要滲透液為375 ul。

7.在1.5ml離心管中，配好最終懸浮菌液，準備侵染；

8.侵染前，將煙草放于白色熒光燈下1 h，使其氣孔打開；

9.選擇倒三葉和倒四葉，用于侵染(于兩葉脈之間侵染)，一株選兩葉，侵染一種菌液；

10.用去掉針頭的注射器，輕柔地摩擦待轉葉片的背部(0.5 cm2)，或用小針頭刺穿，以去除其蠟質層；

11.侵染前，用記號筆標記待轉區域；

12.將第7步中的最終懸浮菌液吸入1ml去針頭的注射器中

13.將注射器對著葉片背面的待轉區域，一手按著葉片上面，另一手輕輕推動活塞，直到看到液體擴散，再侵染其他部位，侵染后，用記號筆圈定侵染區域；

14.將侵染后的煙草放回培養室

15.2-3天后：

1).亞細胞定位實驗：切掉侵染區域，制片，熒光顯微鏡觀察；

2).啟動子GUS活性：GUS染色，75%酒精脫色，觀察結果。

參考文獻：Nature Protocols, 2006: 2019-2025.

第二篇：六年級下冊洋蔥表皮細胞實驗教案范文

分組實驗內容：觀察洋蔥表皮細胞課案

實驗名稱：觀察洋蔥表皮細胞實驗內容：教科版小學科學六年級下冊，第一單元《微小世界》第5節《用顯微鏡觀察身邊的生命世界

（一）》觀察洋蔥表皮細胞。實驗類型：分組實驗

實驗準備：教師：按學生妹三人一組，每組：洋蔥、小刀、清水、滴管、鑷子、吸水紙、載玻片、蓋玻片、顯微鏡、放大鏡。學生：書本、抹布。實驗教學過程：

一、談話導入

師：這是一個洋蔥，如果從它的內表皮上揭下一塊，你能看到些什么？如果用上放大鏡又能看到些什么？如果用上顯微鏡又能看到些什么？

二、制作洋蔥表皮玻片標本

1、師：為了能更好地觀察它，首先我們要制作一個玻片標本。（師演示）1)在一個干凈的玻璃載片中間滴一滴清水

2)用鑷子把取下的洋蔥表皮放到栽玻片的水滴中央，注意標本要平展開，不能折疊。

3)用蓋玻片（或另一個玻璃載片）傾斜著蓋到標本上面，放蓋玻片時，先放一端，再慢慢放下另一端，注意不要有氣泡。

4)從標本的邊緣滴一滴稀釋的碘酒，并把玻片微微傾斜，再用吸水紙吸掉多余的水。

2、學生以組為單位制作玻片標本

二、用肉眼和放大鏡觀察洋蔥表皮

1、先用肉眼觀察洋蔥表皮，將看到的畫在科學記錄本上（或書上13頁）

2、材料員發給每位同學放大鏡，大家用放大鏡觀察洋蔥表皮將看到的畫到科學記錄本或書上。

3、交流用肉眼和放大鏡觀察到的有何不同。

三、用顯微鏡觀察洋蔥表皮

實驗過程：

1、用小刀將洋蔥表皮剝下一薄層，用顯微鏡觀察。

2、制作洋蔥切片：先取下一小片，用鑷子取下，輕放在滴了碘酒的載玻片上，用蓋玻片從右向左滑動放在切片上，再用吸水紙吸去多余的水。

3、將制作好的切片放在顯微鏡下，調好焦距觀察

4、觀察時用左眼觀察顯微鏡，右眼看圖，右手畫出細胞形狀圖

5、填好實驗報告冊，得出結論 實驗結論：

洋蔥表皮是由無數細胞構成的。生物體是由細胞構成的，的。細胞是有生命的，它會生長、繁殖、變化、衰老和死亡。生物體生長發育的過程中就是在它生長、繁殖、變化的過程，生物體的衰老、死亡也是由細胞的衰老、死亡引起的 師：如果我們將洋蔥表皮的玻片標本放到顯微鏡下觀察，又會有什么新的發現呢？

2、師出示顯微鏡，介紹各部分的名稱、功能及使用方法（如果學生五年級時已使用過，也可叫學生介紹老師指導更正，具體內容見13頁）

3、每2人一個顯微鏡觀察洋蔥表皮，不會使用的同學可根據13頁的提示進行操作。每組的材料員監督大家進行規范的操作，對不規范操作且不改正的同學取消其使用資格。同樣將顯微鏡下的發現畫到科學記錄本或書上。

4、交流我們在顯微鏡下的發現

（洋蔥表皮由一個個比較規則的多邊形組成。洋蔥表皮上的一個個小房間似的結構，是洋蔥的細胞。閱讀12頁的資料，了解胡克發現細胞的故事。讓學生談談對細胞的認識。）