第一篇：常用實(shí)驗(yàn)室儀器使用方法

常用實(shí)驗(yàn)室器材使用方法

包括加熱裝置，攪拌器，壓縮氣體鋼瓶，玻璃儀器，玻璃儀器的干燥，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，氣壓計，真空泵等實(shí)驗(yàn)室常用器材的介紹及使用方法，注意事項等。

加熱

為了加速化學(xué)反應(yīng)，以及將產(chǎn)物蒸餾、分餾等，往往需要加熱。但是考慮到大多數(shù)有機(jī)化合物包括有機(jī)溶劑都是易燃易爆物，所以在實(shí)驗(yàn)室安全規(guī)則中就規(guī)定禁止用明火直接加熱（特殊需要除外）。

為了保證加熱均勻，一般使用熱浴進(jìn)行間接加熱。作為傳熱的介質(zhì)有空氣、水、有機(jī)液體、熔融的鹽和金屬等，根據(jù)加熱溫度、升溫的速度等需要，常用下列手段：

(1)水浴和蒸汽浴

當(dāng)加熱的溫度不超過100℃時，最好使用水浴加熱較為方便。但是必須指出（強(qiáng)調(diào)）：當(dāng)用到金屬鉀、鈉的操作以及無水操作時，決不能在水浴上進(jìn)行，否則會引起火災(zāi)或使實(shí)驗(yàn)失敗，使用水浴時勿使容器觸及水浴器壁及其底部。由于水浴的不斷蒸發(fā)，適當(dāng)時要添加熱水，使水浴中的水面經(jīng)常保持稍高于容器內(nèi)的液面。電熱多孔恒溫水浴，使用起來較為方便。

(2)油浴

當(dāng)加熱溫度在100～200℃時，宜使用油浴，優(yōu)點(diǎn)是使反應(yīng)物受熱均勻，反應(yīng)物的溫度一般低于油浴溫度20℃左右。常用的油浴有：

1）甘油 可以加熱到140-150℃，溫度過高時則會炭化。

2）植物油 如菜油、花生油等，可以加熱到220℃，常加入1%的對苯二酚等抗氧化劑，便于久用。若溫度過高時分解，達(dá)到閃點(diǎn)時可能燃燒起來，所以使用時要小心。

3）石蠟油 可以加熱到200℃左右，溫度稍高并不分解，但較易燃燒。

4）硅油 硅油在250℃時仍較穩(wěn)定，透明度好，安全，是目前實(shí)驗(yàn)室里較為常用的油浴之 一，但其價格較貴。

使用油浴加熱時要特別小心，防止著火，當(dāng)油浴受熱冒煙時，應(yīng)立即停止加熱，油浴中應(yīng)掛一溫度計，可以觀察油浴的溫度和有無過熱現(xiàn)象，同時便于調(diào)節(jié)控制溫度，溫度不能過高，否則受熱后有溢出的危險。使用油浴時要竭力防止產(chǎn)生可能引起油浴燃燒的因素。加熱完畢取出反應(yīng)容器時，仍用鐵夾夾住反應(yīng)器離開油浴液面懸置片刻，待容器壁上附著的油滴完后，再用紙片或干布檫干器壁。

攪拌器

攪拌器也是有機(jī)化學(xué)實(shí)驗(yàn)必不可少的儀器之一，它可使反應(yīng)混合物混合得更加均勻，反應(yīng)體系的溫度更加均勻，從而有利于化學(xué)反應(yīng)的進(jìn)行特別是非均相反應(yīng)。攪拌的方法有三種：人工攪拌、磁力攪拌、機(jī)械攪拌。人工攪拌一般借助于玻棒 就可以進(jìn)行，磁力攪拌是利用磁力攪拌器，機(jī)械攪拌則是利用機(jī)械攪拌器。

磁力攪拌器由于磁力攪拌器容易安裝，因此，它可以用來進(jìn)行連續(xù)攪拌尤其當(dāng)反應(yīng)量比較少或在反應(yīng)是在密閉條件下進(jìn)行，磁力攪拌器的使用更為方便。但缺點(diǎn)是對于一些粘

稠液或是有大量固體參加或生成的反應(yīng)，磁力攪拌器無法順利使用，這時就應(yīng)選用機(jī)械攪拌器作為攪拌動力。磁力攪拌器是利用磁場的轉(zhuǎn)動來帶動磁子的轉(zhuǎn)動。磁子是在一小塊金屬用一層惰性材料（如聚四氟乙烯等）包裹著的，也可以自制：用一截10# 鐵鉛絲放入細(xì)玻管或塑料管中，兩端封口。磁子的大小大約有10mm、20mm、30mm長，還有更長的磁子，磁子的形狀有圓柱形、橢圓形和圓形等，如圖2.5，可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)的規(guī)模來選用。

機(jī)械攪拌器機(jī)械攪拌器主要包括三部分：電動機(jī)、攪拌棒和攪拌密封裝置。

電動機(jī)是動力部分，固定在支架上，由調(diào)速器調(diào)節(jié)其轉(zhuǎn)動快慢。攪拌棒與電動機(jī)相連，當(dāng)接通電源后，電動機(jī)就帶動攪拌棒轉(zhuǎn)動而進(jìn)行攪拌，攪拌密封裝置是攪拌棒與反應(yīng)器連接的裝置，它可以使反應(yīng)在密封體系中進(jìn)行。攪拌的效率在很大程度上取決于攪拌棒的結(jié)構(gòu)，圖2.6介紹的老式攪拌棒是用粗玻璃棒制成的。根據(jù)反應(yīng)器的大小、形狀、瓶口的大小及反應(yīng)條件的要求，選擇較為合適的攪拌棒。

氣壓計

氣壓計的作用是指示系統(tǒng)內(nèi)的壓力，通常采用水銀氣壓計。在厚玻璃管內(nèi)盛水銀，管背后裝有移動標(biāo)尺，移動標(biāo)尺將零度調(diào)整在接盡活塞一邊玻璃管B中的水銀平面處，當(dāng)減壓泵工作時，A管汞柱下降，B管汞柱上升，兩者之差，表明系統(tǒng)的壓力。使用時必須注意勿使水或贓物侵入測壓計內(nèi)，水銀柱中也不得有氣泡存在，否則將影響測定壓力的準(zhǔn)確性。封閉式水銀測壓計的優(yōu)點(diǎn)是輕巧方便，但如有殘留空氣或引入了水或雜質(zhì)時，則準(zhǔn)確度受到影響。這種測壓計裝入水銀時要嚴(yán)格控制不讓空氣進(jìn)入，方法是先將純凈汞放入小圓底燒瓶，然后與測壓計相連的高效油泵抽氣至13033Pa(10-1mmHg)以下，并輕拍小燒瓶，使泵內(nèi)的氣泡逸出，用電吹風(fēng)微熱玻璃管使氣體抽出，然后把水銀注入U形管停止抽氣放入大氣即成。開口式水銀測壓計裝汞比較方便，比較準(zhǔn)確，所用玻璃管的比度要超過760mm。U形管兩臂汞柱的高度之差即為公共壓力與系統(tǒng)中壓力之差。

真空泵

根據(jù)使用的范圍和抽氣效能可將真空泵分為三類：

(1)一般水泵，壓強(qiáng)可達(dá)到1.333~ 100kPa(10~760mmHg)為“粗”真空。

(2)油泵，壓強(qiáng)可達(dá)0.133~133.3 Pa(0.001~1mmHg)為“次高”真空。

(3)擴(kuò)散泵，壓強(qiáng)可達(dá)0.133 Pa以下，(10-3 mmHg)為“高”真空。

在有機(jī)化學(xué)實(shí)驗(yàn)室里常用的減壓泵有水泵和油泵兩種，若不要求很低的壓力時，可用水泵，如果水泵的構(gòu)造好且水壓又高，抽空效率可達(dá)1067~3333 Pa(8~25mmHg)。水泵所能抽到的最低壓力理論上相當(dāng)于當(dāng)時水溫下的水蒸氣壓力。例如，水溫25℃、20℃、10℃時，水蒸氣的壓力分別為3192、2394、1197Pa(8-25mmHg)。用水泵抽氣時，應(yīng)在水泵前裝上安全瓶，以防水壓下降，水流倒吸；停止抽氣前，應(yīng)先放氣，然后關(guān)水泵。

若要較低的壓力，那就要用到油泵了，好的油泵能抽到133.3Pa（1mmHg）以下。油泵的好壞決定于其機(jī)械結(jié)構(gòu)和油的質(zhì)量，使用油泵時必須把它保護(hù)好。如果蒸餾揮發(fā)性較大的有機(jī)溶劑時，有機(jī)溶劑會被油吸收結(jié)果增加了蒸氣壓，從而降低了抽空效能，如果是酸性氣體，那就會腐蝕油泵，如果是水蒸氣就會使油成乳濁液而抽壞真空泵。因此使用油泵時

必須注意下列幾點(diǎn)：

在蒸餾系統(tǒng)和油泵之間，必須裝有吸收裝置。

蒸餾前必須用水泵徹底抽去系統(tǒng)中有機(jī)溶劑的蒸氣。

如能用水泵抽氣的，則盡量用水泵，如蒸餾物質(zhì)中含有揮發(fā)性物質(zhì)，可先用水泵減壓抽降，然后改用油泵。

減壓系統(tǒng)必須保持密不漏氣，所有的橡皮塞的大小和孔道要合適，橡皮管要用真空用的橡皮管。磨口玻璃涂上真空油脂。

抽真空步驟及注意事項

首先檢查真空容器所處狀態(tài)，處于真空下或者處于大氣中。決定了兩種啟動真空設(shè)備的程序：第一種，真空下操作程序。第二種，大氣狀態(tài)下操作程序。注意：第一次啟動要先打開ESP—A總控電源，總控電源上面三個燈表示三相電，三燈全亮表示正常。

1、如果容器處于低真空狀態(tài)下，不能立即打開閘板閥以免引起真空油的回流。正確的操作步驟是先打開水龍頭，然后打開機(jī)械泵(注：按下機(jī)械泵的啟動鍵)，同時打開ZDF—IV真空計電源，觀察真空計讀數(shù)到達(dá)30Pa左右時，再打開分子泵(注：先按下FDK—600K總電源，然后按下啟動鍵)，看到分子泵的工作頻率達(dá)到50Hz左右時方可打開閘板閥。

2、如果容器處于大氣下，首先要做的是檢查大漏，即關(guān)閉容器大門和放氣閥。然后打開水龍頭，閘板閥，機(jī)械泵，ZDF—IV真空計電源，觀察真空計讀數(shù)到達(dá)30Pa左右時，再打開分子泵(注：先按下FDK—600K總電源，然后按下啟動鍵)。

3、等到分子泵正常工作后(工作頻率穩(wěn)定在450Hz)，按下真空計中電離計單元的啟動鍵對真空度進(jìn)行觀測。

4、在真空達(dá)到Pa時可以打開離子泵，此時先關(guān)閉分子泵處的閘板閥，但不要關(guān)閉分子泵，等到離子泵的電壓達(dá)到4000V時(離子泵穩(wěn)定工作后)再關(guān)掉5410~10??

分子泵，機(jī)械泵。

5、如果不需要維持真空時，先關(guān)掉真空計電源，后只需要把離子泵的閘板閥關(guān)閉即可，不關(guān)閉離子泵，而是讓離子泵處于工作狀態(tài)保持其內(nèi)部環(huán)境。(注意：烘烤與離子泵不能同時打開，烘烤的目的是為了讓離子泵更好的工作，需要時可先烘烤，關(guān)閉烘烤后在打開離子泵開關(guān)。一般不需要打開烘烤。)

壓縮氣體鋼瓶

在有機(jī)化學(xué)實(shí)驗(yàn)中，有時會用到氣體來作為反應(yīng)物。如氫氣、氧氣等，也會用到氣體作為保護(hù)氣，例如氮?dú)狻鍤獾龋械臍怏w用來作為燃料，例如煤氣、液化氣等。所有這些氣體都需要裝在特制的容器中。一般都是用的壓縮氣體鋼瓶。將氣體以較高壓力貯存在鋼瓶中，既便于運(yùn)輸又可以在一般實(shí)驗(yàn)室里隨時用到非常純凈的氣體。由于鋼瓶里裝的高壓的壓縮氣體，因此在使用時必須嚴(yán)格注意安全，否則將會十分危險。

有機(jī)化學(xué)實(shí)驗(yàn)室里常用的壓縮氣體壓強(qiáng)一般接近200個大氣壓。整個鋼瓶的瓶體是非常堅實(shí)的，而最易損壞的，應(yīng)是安裝在鋼瓶出氣口的排氣閥，一旦排氣閥被損壞，后果則不堪設(shè)想，因此為安全起見，都要在排氣閥上裝一個罩子。除此之外，這些壓縮氣體鋼瓶應(yīng)遠(yuǎn)離火源和有腐蝕性的物質(zhì)，如酸、堿等。

實(shí)驗(yàn)室里用的壓縮氣體鋼瓶，一般高度約160cm，毛重約70到80公斤。對于如此龐大的物體，如果不加以固定，一旦倒下來肯定會砸壞東西或砸傷人，且不說還會有高壓氣體本身帶來的危險。因此，也是從安全考慮，應(yīng)當(dāng)將鋼瓶固定在某個地方，如固定在桌邊

或墻角等。

為了轉(zhuǎn)移方便，一般選用特制的推車。如何正確識別鋼瓶所裝的氣體種類，也是一件相當(dāng)重要的事情。雖然，所有的氣體鋼瓶外面都會貼有標(biāo)簽來說明瓶內(nèi)所裝氣體的種類及純度，但是這些標(biāo)簽往往會被損壞或腐爛。為保險起見，所有的壓縮氣體鋼瓶都會依據(jù)一定的標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)所裝的氣體被涂成不同的顏色。氫氣瓶為綠色，氧氣瓶為天藍(lán)色，氮?dú)馄繛楹谏８邏簹馄康钠針?biāo)志

氧氣瓶顏色為淡酞藍(lán)（天藍(lán)），字樣“氧”，字顏色為黑色，當(dāng)壓力為２０Ｍｐａ，為白色環(huán)一道，當(dāng)壓力為３０Ｍｐａ，為白色環(huán)二道；

氫氣瓶顏色為淡綠色，字樣“氫”，字顏色為大紅，當(dāng)壓力為２０Ｍｐａ，為淡黃色環(huán)一道，當(dāng)壓力為３０Ｍｐａ，為淡黃色環(huán)二道；

氨氣瓶顏色為淡黃，字樣“液氨”，字顏色為黑色； 空氣瓶顏色為黑色，字樣“氧”，字顏色為白色，當(dāng)壓力為２０Ｍｐａ，為白色環(huán)一道，當(dāng)壓力為３０Ｍｐａ，為白色環(huán)二道；

氮?dú)馄款伾珵楹谏謽印暗保诸伾珵榈S，當(dāng)壓力為２０Ｍｐａ，為白色環(huán)一道，當(dāng)壓力為３０Ｍｐａ，為白色環(huán)二道；

氯氣瓶顏色為深綠，字樣“液氯”，字顏色為白色；

溶解乙炔氣瓶顏色為白色，字樣“乙炔不可近火”，字顏色為大紅； 二

氧化碳?xì)馄款伾珵殇X白，字樣“液化二氧化碳”，字顏色為黑色，當(dāng)壓力為２０Ｍｐａ，為黑色環(huán)一道；

液化石油氣氣瓶顏色為銀灰，字樣“液化石油氣”，字顏色為大紅

玻璃儀器

化學(xué)實(shí)驗(yàn)室玻璃儀器可分為普通玻璃儀器和磨口玻璃儀器。

標(biāo)準(zhǔn)接口玻璃儀器是具有標(biāo)準(zhǔn)化磨口或磨塞的玻璃儀器。由于儀器口塞尺寸的標(biāo)準(zhǔn)化、系統(tǒng)化、磨砂密合，凡屬于同類規(guī)格的接口，均可任意連接，各部件能組裝成各種配套儀器。與不同類型規(guī)格的部件無法直接組裝時，可使用轉(zhuǎn)換接頭連接。使用標(biāo)準(zhǔn)接口玻璃儀器，既可免去配塞子的麻煩手續(xù)，又能避免反應(yīng)物或產(chǎn)物被塞子玷污的危險，口塞磨砂性能良好，使密合性可達(dá)較高真空度，對蒸餾尤其減壓蒸餾有利，對于毒物或揮發(fā)性液體的實(shí)驗(yàn)較為安全。

標(biāo)準(zhǔn)接口玻璃儀器，均按國際通用的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)制造，當(dāng)某個部件損壞時，可以選購。標(biāo)準(zhǔn)接口儀器的每個部件在其口塞的上或下顯著部位均具有烤印的白色標(biāo)志，表明規(guī)格。常用的有10，12，14，16，19，24，29，34，40等。

有的標(biāo)準(zhǔn)接口玻璃儀器有兩個數(shù)字，如10/30，10表示磨口大端的直徑為10mm，30表示磨口的高度為30mm。

使用標(biāo)準(zhǔn)接口玻璃儀器應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：（1）磨口塞應(yīng)經(jīng)常保持清潔，使用前宜用軟布揩拭干凈，但不能附上棉絮。（2）使用前在磨砂口塞表面涂以少量凡士林或真空油脂，以增強(qiáng)磨砂口的密合性，避免磨面的相互磨損，同時也便于接口的裝拆。（3）裝配時，把磨口和磨塞輕輕地對旋連接，不宜用力過猛。但不能裝得太緊，只要達(dá)到潤滑密閉要求即可。（4）用后應(yīng)立即拆卸洗凈。否則，對接處常會粘牢，以致拆卸困難。（5）裝拆時應(yīng)注意相對的角度，不能在角度偏差時進(jìn)行硬性裝拆，否則極易造成破損。磨口套管和磨塞應(yīng)該是由同種玻璃制成的。

玻璃儀器的干燥

有機(jī)化學(xué)實(shí)驗(yàn)室經(jīng)常需要使用干燥的玻璃儀器，故要養(yǎng)成在每次實(shí)驗(yàn)后馬上把玻璃儀器洗凈和倒置使之晾干的習(xí)慣，以便下次實(shí)驗(yàn)時使用。干燥玻璃儀器的方法有下列幾種：

(1)自然風(fēng)干是指把已洗凈的玻璃儀器在干燥架上自然風(fēng)干，這是常用而簡單的方法。但必須注意，若玻璃儀器洗得不夠干凈時，水珠不易流下，干燥較為緩慢。

(2)烘干是指把已洗凈的玻璃儀器由上層到下層放入烘箱中烘干。放入烘箱中干燥的玻璃儀器，一般要求不帶水珠，器皿口側(cè)放。帶有磨砂口玻璃塞的儀器，必須取出活塞才能烘干，玻璃儀器上附帶的橡膠制品在放入烘箱前也應(yīng)取下，烘箱內(nèi)的溫度保持105℃左右，約0.5h，待烘箱內(nèi)的溫度降至室溫時才能取出。切不可把很熱的玻璃儀器取出，以免驟冷使之破裂，當(dāng)烘箱已工作時，不能往上層放入濕的器皿，以免水滴下落，使熱的器皿驟冷使之破裂。

(3)吹干有時儀器洗滌后需要立即使用，可使用吹干，即用氣流干燥器或電吹風(fēng)把儀器吹干。首先將水盡量晾干后，加入少量丙酮或乙醇搖洗并傾出，先通入冷吹風(fēng)1-2min，待大部分溶劑揮發(fā)后，再吹入熱風(fēng)至完全干燥為止，最后吹入冷風(fēng)使儀器逐漸冷卻

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，主要用于在減壓條件下連續(xù)蒸餾大量易揮發(fā)性溶劑。尤其對萃取液的濃縮和色譜分離時的接收液的蒸餾，可以分離和純化反應(yīng)產(chǎn)物。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀的基本原理就是減壓蒸餾，也就是在減壓情況下，當(dāng)溶劑蒸餾時，蒸餾燒瓶在連續(xù)轉(zhuǎn)動。結(jié)構(gòu):蒸餾燒瓶可是一個帶有標(biāo)準(zhǔn)磨口接口的梨形或圓底燒瓶，通過一高度回流蛇形冷凝管與減壓泵相連，回流冷凝管另一開口與帶有磨口的接收燒瓶相連，用于接收被蒸發(fā)的有機(jī)溶劑。在冷凝管與減壓泵之間有一三通活塞，當(dāng)體系與大氣相通時，可以將蒸餾燒瓶，接液燒瓶取下，轉(zhuǎn)移溶劑，當(dāng)體系與減壓泵相通時，則體系應(yīng)處于減壓狀態(tài)。使用時，應(yīng)先減壓，再開動電動機(jī)轉(zhuǎn)動蒸餾燒瓶，結(jié)束時，應(yīng)先停機(jī)，再通大氣，以防蒸餾燒瓶在轉(zhuǎn)動中脫落。作為蒸餾的熱源，常配有相應(yīng)的恒溫水槽。

第二篇：分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室常用儀器及使用方法

實(shí)驗(yàn)一

分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室常用儀器及使用

事實(shí)證明，在科學(xué)飛速發(fā)展的今天，無論從事哪個領(lǐng)域的研究，要想突破，除了有良好的理論基礎(chǔ)外，更重要的是依賴于先進(jìn)的技術(shù)和優(yōu)良的儀器設(shè)備以及良好的研究環(huán)境。一個標(biāo)準(zhǔn)的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室除了具有一般生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)儀器設(shè)備外，還具有一些特殊用途的儀器，這些儀器一般較精密，價格昂貴。下面介紹這些儀器的使用方法和注意事項。

一、冷凍離心機(jī)

低溫分離技術(shù)是分子生物學(xué)研究中必不可少的手段。基因片段的分離、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物樣品的分離制備實(shí)驗(yàn)中都離不開低溫離心技術(shù)，心機(jī)成為分子生物學(xué)研究中必備的重要儀器。室的高速冷凍離心機(jī)為GL-20G-Ⅱ型（上海安亭）×10ml和12×1.5ml。極限轉(zhuǎn)速20000rpm。

1.安裝與調(diào)試

離心機(jī)應(yīng)放置在水平堅固的地面上，應(yīng)至少距離中，周圍空氣應(yīng)呈中性，且無導(dǎo)電性灰塵、易燃?xì)怏w和腐蝕性氣體，環(huán)境溫度應(yīng)在之間，相對濕度小于80%。試轉(zhuǎn)前應(yīng)先打開蓋門，用手盤動轉(zhuǎn)軸，輕巧靈活，無異常現(xiàn)象方可上所用的轉(zhuǎn)頭。轉(zhuǎn)子準(zhǔn)確到位后打開電源開關(guān)，然后用手按住門開關(guān)，動后立即停止，并觀察轉(zhuǎn)軸的轉(zhuǎn)向，若逆時針旋轉(zhuǎn)即為正確，機(jī)器可投入使用。2.操作程序

（1）插上電源，待機(jī)指示燈亮；打開電源開關(guān)，調(diào)速與定時系統(tǒng)的數(shù)碼管顯示的閃爍數(shù)字為機(jī)器工作轉(zhuǎn)速的出廠設(shè)定，溫控系統(tǒng)的數(shù)碼管顯示此時離心腔的溫度。

（2）設(shè)定機(jī)器的工作參數(shù)，如工作溫度，運(yùn)轉(zhuǎn)時間，工作轉(zhuǎn)速等。

（3）將預(yù)先平衡好的樣品放置于轉(zhuǎn)頭樣品架上，關(guān)閉機(jī)蓋。

（4）按控制面板的運(yùn)轉(zhuǎn)鍵，離心機(jī)開始運(yùn)轉(zhuǎn)。預(yù)先設(shè)定的值。

（5）在預(yù)先設(shè)定的運(yùn)轉(zhuǎn)時間內(nèi)（不包括減速時間）定的減速時間內(nèi)降至零。

（6）按控制面板上的停止鍵，數(shù)碼管顯示機(jī)器已準(zhǔn)備好下一次工作。

3.注意事項

（1）離心機(jī)應(yīng)始終處于水平位置，外接電源系統(tǒng)的電壓要匹配，并要求有良好的接地線，機(jī)器不使用，要拔掉電源插頭。

（2）開機(jī)前應(yīng)檢查轉(zhuǎn)頭安裝是否牢固，機(jī)腔中有無異物掉入。

（3）樣品應(yīng)預(yù)先平衡，使用離心筒離心時離心筒與樣品應(yīng)同時平衡。

（4）揮發(fā)性或腐蝕性液體離心時，應(yīng)使用帶蓋的離心管，并確保液體不外漏以免腐蝕機(jī)腔或造成事故。

在國內(nèi)，有多個廠家生產(chǎn)冷凍離心機(jī)，落地式。配有角式轉(zhuǎn)頭：10cm在預(yù)先設(shè)定的加速時間內(nèi)，其運(yùn)速升，離心機(jī)開始減速，其轉(zhuǎn)速在預(yù)先設(shè)dedT，數(shù)秒鐘后即顯示閃爍的轉(zhuǎn)速值，這時1

本實(shí)驗(yàn)6×50ml、120～30℃

至 因此低溫冷凍離 以上且具有良好的通風(fēng)環(huán)境再按運(yùn)轉(zhuǎn)鍵，轉(zhuǎn)

（5）除工作溫度、運(yùn)轉(zhuǎn)速度和運(yùn)轉(zhuǎn)時間外，不要隨意更改機(jī)器的工作參數(shù)，以免影響機(jī)器性能。轉(zhuǎn)速設(shè)定不得超過最高轉(zhuǎn)速，以確保機(jī)器安全運(yùn)轉(zhuǎn)。

（6）使用中如出現(xiàn)0.00或其它數(shù)字，機(jī)器不運(yùn)轉(zhuǎn)，應(yīng)關(guān)機(jī)斷電，10秒鐘后重新開機(jī)，待所設(shè)轉(zhuǎn)速顯示后，再按運(yùn)轉(zhuǎn)鍵，機(jī)器將照常運(yùn)轉(zhuǎn)。

（7）不得在機(jī)器運(yùn)轉(zhuǎn)過程中或轉(zhuǎn)子未停穩(wěn)的情況下打開蓋門，以免發(fā)生事故。

（8）每次操作完畢應(yīng)做好使用情況記錄，并定期對機(jī)器各項性能進(jìn)行檢修。

二、電泳儀

電泳技術(shù)是分子生物學(xué)研究不可缺少的重要手段。帶電泳大類，自由界面電泳不需支持物，泳目前已很少使用。區(qū)帶電泳需用各種類型的物質(zhì)作為支持物，纖維薄膜、非凝膠性支持物、是瓊脂糖凝膠電泳。應(yīng)用電泳法可以對不同物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析，組份分析或單個組份提取制備。下面以為例介紹其使用方法。

1.使用方法

（1）按電源開關(guān)，顯示屏出現(xiàn)“歡迎使用同時系統(tǒng)初始化，蜂鳴

U:

0V

U＝

I:

0mA

I ＝

P:

0W

P＝

T:

00:00

T＝

其中:左側(cè)大寫Mode(模式)：STD(標(biāo)準(zhǔn)

（2）設(shè)置工作程序。用鍵盤輸入新的工作程序。例如，要求工作電壓I限制在200mA以內(nèi)，功率動關(guān)掉輸出。則操作步驟如下：

①按“模式”鍵，將工作模式由標(biāo)準(zhǔn)（凝膠性支持物及硅膠―4聲，設(shè)置常設(shè)置。屏幕轉(zhuǎn)成參數(shù)設(shè)置狀態(tài)，見圖一：

100V

50mA

｜

50W

｜ 01:00

｜U: I: P: T:)；TIME(定時W限制在 電泳一般分為自由界面電泳和區(qū)如等速電泳、密度梯度電泳及顯微電泳等，這類電G薄層等，分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中最常用的DYY-12型電腦三恒多用電泳儀（北京六一儀器廠）DYY-12型電腦三恒多用電泳儀?”等字樣后，Mode：

STD

中間部分顯示程序的常設(shè)值)；VH（伏時）；STEP（分步）100W以內(nèi)，時間T為3STD）轉(zhuǎn)為定時（TIME）2

醋酸或?qū)⒁欢ɑ旌衔镞M(jìn)行（預(yù)置值）。U＝1000V，電流20分，并且到時間自常用的支持物有濾紙、｜

為電泳時實(shí)際值； 小時 模式。每按一下模式鍵，其工作方式按下列順序改變：

STD?TIME?VH?STEP?STD。

②先設(shè)置電壓U，按“選擇”鍵，先將其反顯，然后輸入數(shù)字鍵即可設(shè)置該參數(shù)的數(shù)值。按數(shù)字1000,則電壓即設(shè)置完成。

③設(shè)置電流I，按“選擇”鍵，先使I反顯，然后輸入數(shù)字200。

④設(shè)置功率P，按“選擇”鍵，先使P反顯，然后輸入數(shù)字100。

⑤設(shè)置時間以按“清除”鍵，再重新輸入。

⑥確認(rèn)各參數(shù)無誤后，按“啟動”鍵，啟動電泳儀輸出程序。在顯示屏狀態(tài)欄中顯示Start!并蜂鳴至設(shè)置值。同時在狀態(tài)欄中顯示“壓輸出。在狀態(tài)欄最下方，顯示實(shí)際的工作時間（精確到秒）

⑦每次啟動輸出時，儀器自動將此時的設(shè)置數(shù)值存入“要調(diào)用時可以按“讀取”鍵，再按“出執(zhí)行。

⑧電泳結(jié)束，儀器顯示：

2.注意事項

(1)U、I、P三個參數(shù)的有效輸入范圍是：

(2)一般情況下，當(dāng)?shù)牡胤剑梢杂萌f用表的歐姆檔逐段測量。

(3)如果輸出端接多個電泳槽，則儀器顯示的電流數(shù)值為各槽電流之和，此時應(yīng)選擇穩(wěn)壓輸出，以減小各槽的相互影響。

(4)注意保持儀器的清潔，不要遮擋儀器后方進(jìn)風(fēng)通道。嚴(yán)禁將電泳槽放在儀器頂部，避免緩沖液灑進(jìn)儀器內(nèi)部。

(5)本儀器輸出電壓較高，使用中應(yīng)不避免接觸輸出回路及電泳槽內(nèi)部，以免發(fā)生危險。

(6）長期不用儀器，應(yīng)放置在干燥通風(fēng)的清潔環(huán)境中保存。

三、分析天平

分析天平是定量分析工作中不可缺少的重要儀器，充分了解儀器性能及熟練掌握其使用方 T，按“選擇”鍵，先使 4聲，提醒操作者電泳儀將輸出高電壓，“No Load！時，首先應(yīng)關(guān)機(jī)檢查電極導(dǎo)線與電泳槽之間是否有接觸不良

T反顯，然后輸入數(shù)字Run”，并有兩個不斷閃爍的高壓符號，表示端口已有電0”鍵，按“確定”鍵，即可將上次設(shè)置的工作程序取END”，并連續(xù)蜂鳴提醒。此時按任一鍵可止鳴。U：5 3

注意安全。3000V；I：320。如果輸入錯誤，可之后逐漸將輸出電壓加 MO”號存儲單元。以后需4～400mA P：4～400W.。～ ； 法，是獲得可靠分析結(jié)果的保證。分析天平的種類很多，有普通分析天平、半自動/全自動電光分析天平及電子分析天平等。目前實(shí)驗(yàn)室常規(guī)備用的是自動化程度較高的電子分析天平。下面介紹電子分析天平PL203/01型和AL104/01型(METTLER-TOLEDO)的性能及使用方法。PL203/01型精密電子天平：最大稱量210g；實(shí)際分度值0.001g；AL104/01型高分辨率電子分析天平：最大稱量110g；實(shí)際分度值0.0001g

1.使用方法

（1）檢查并調(diào)整天平至水平位置。檢查電源電壓是否匹配（使用配置的穩(wěn)壓器），按天平儀器要求通電預(yù)熱至所需時間

（2）打開天平開關(guān)“短時點(diǎn)亮，天平回零時，可進(jìn)行正式稱量。

（3）稱量時將潔凈稱量瓶或稱量紙置于稱盤上，關(guān)上側(cè)門，天平將顯示該重量，點(diǎn)擊“?O/T?”鍵自動校對零，然后逐漸加入待稱物質(zhì)，直至所需重量為止。

（4）稱量結(jié)束應(yīng)及時除去稱量瓶（紙）

2.注意事項

（1）天平應(yīng)放置在牢固平穩(wěn)水泥臺或木臺上，室內(nèi)要求清潔、干燥，同時應(yīng)避免光線直接照射到天平上。

（2）稱量時應(yīng)從側(cè)門取放物質(zhì)，讀數(shù)時應(yīng)關(guān)閉箱門以免空氣流動引起天平擺動。

（3）揮發(fā)性、腐蝕性、強(qiáng)酸強(qiáng)堿類物質(zhì)應(yīng)盛于帶蓋稱量瓶內(nèi)稱量，防止腐蝕天平。

（4）電子分析天平若長時間不使用，則應(yīng)定時通電預(yù)熱，每周一次，每次預(yù)熱確保儀器始終處于良好使用狀態(tài)。

四、分光光度計

不同物質(zhì)對不同波長入射的吸收程度各不相同，從而形成各具特征的吸收光譜原理，應(yīng)用比色法可以對某些有色物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析。而且精度低，已遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足高精度微量分析的要求。不斷地更新?lián)Q代，人們引進(jìn)了分光光度法的概念，單色器、吸收池、接受器、顯示屏幕所組成，它不僅適應(yīng)于可見光區(qū)，同時還擴(kuò)展至紫外光區(qū)及紅外光區(qū)。光密度（而測定某一溶液對該單色光的吸收值。液定量和純度的初步判斷。下面介紹紫外可見光分光光度計的使用方法。該儀器除了能檢測核酸樣品濃度外，的測定，能檢測低至幾微升樣品（30min。on”，天平則自動進(jìn)行靈敏度及零點(diǎn)調(diào)節(jié)。待顯示屏上所有字段，關(guān)上側(cè)門，切斷電源，并做好使用情況登記。

隨著科學(xué)技術(shù)不斷發(fā)展，分光光度計隨之應(yīng)用。OD）是許多溶液中的溶質(zhì)定量的指標(biāo)之一，通過所產(chǎn)生的單色光分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中常使用紫外分光光度計進(jìn)行核酸溶還可進(jìn)行蛋白質(zhì)濃度以及細(xì)胞培養(yǎng)液濃度70μl和5～7μl），樣品無需稀釋，測量后還可全部回收。4

分光光度計由光源、GeneQantTM Pro

2h，以。根據(jù)這一分析儀器也Amersham）

但由于比色法僅限于可見光區(qū)，（使用方法

(1）打開電源開關(guān)（ON），等待數(shù)秒鐘，顯示屏上顯示一系列數(shù)據(jù)，如本機(jī)型號、當(dāng)前日期等，這些數(shù)據(jù)可以重新設(shè)置，當(dāng)出現(xiàn)“instrument Ready”即可進(jìn)入下一程序。

(2）在儀器面板上有許多功能鍵，其中包括檢測base sep、Tm、DNA、RNA、oligo、Protein595assay、Protein280 meas、cell culture等。例如，欲檢測DNA，按DNA鍵，即進(jìn)入DNA檢測程序。在顯示屏上：

以上為儀器預(yù)設(shè)置的參考數(shù)據(jù)，若按“新設(shè)定。

(3）取石英樣品杯后放入儀器上的樣品槽中，放入時注意樣品杯的光學(xué)面朝前方。

(4)按“set ref”鍵，進(jìn)行空白測試。顯示屏上出現(xiàn)一系列數(shù)據(jù)均““Insert sample 中進(jìn)行測定。

(5）一個樣品測定完畢，按“

(6）取出樣品杯，吸出樣品，然后用高純水洗幾次，自然晾干。由于樣品杯十分昂貴，使用時要小心操作。以至鉻酸洗液（濃酸中浸泡不要超過

五、數(shù)字式酸度計

酸度計是實(shí)驗(yàn)室配置溶液必備的儀器。本實(shí)驗(yàn)室的酸度計為臺式微電腦酸堿度計和溫度計（Hanna

1.使用方法

（1）將pH

70μl或5。將樣品杯取出，吸干水分，稍干燥后，同樣吸入待測樣品，放入樣品槽 ,測量pH范圍為

Pathlengh

10mm

Units

μg/μl

Use 320nm

NO

Dilution Faotor 1

Insert reference，enter”鍵，和“select”鍵可以將以上的參數(shù)進(jìn)行重7μl，容量大小根據(jù)需要。先用吸管吸高純水入樣品杯中，然 0.000”并提示插入樣品stop”鍵，返回“Instrument Ready”。可用溫水或稀鹽酸，乙醇15分鐘），表面只能用柔軟的絨布或拭鏡頭紙擦凈。0.00～14.00pH；溫度為0.0～100.0℃；

～”不能用手指拿樣品杯的光學(xué)面，用后要及時洗滌，）電極和溫度探頭與主機(jī)連接，主機(jī)與電源連接。

（2）取出電極保護(hù)套，如果有結(jié)晶鹽出現(xiàn)，這是電極常見現(xiàn)象，浸入水后就會消逝。如果薄膜玻璃或透析膜發(fā)干，可在HI170300電極保存液中浸泡1小時。

（3）pH校準(zhǔn)。將pH電極和溫度探棒浸泡在所選的標(biāo)準(zhǔn)緩沖液內(nèi)4cm（建議用pH6.86、7.01），緩沖液值可通過“D℃”或“?℃”鍵來調(diào)節(jié)。按“CAL”鍵，儀器將顯示“CAL”和“BUF”符號及“7.01”數(shù)據(jù)。當(dāng)讀數(shù)不穩(wěn)定時，屏幕會顯示“NOTREADY”；當(dāng)讀數(shù)穩(wěn)定時，屏幕會顯示“READY”和“CFM”，按“CFM”鍵確認(rèn)校準(zhǔn)值。確認(rèn)第一校準(zhǔn)點(diǎn)后，將pH電極與溫度探棒浸泡在標(biāo)準(zhǔn)緩沖液內(nèi)4cm（建議用pH4.01、9.18、10.01）；再按“CAL”鍵，儀器將顯示“CAL”和“BUF”符號及“4.01”數(shù)據(jù)。按“CFM”鍵確認(rèn)校正值。

（4）pH測量。校準(zhǔn)完畢后，儀器自動進(jìn)入溶液約4cm，停幾分鐘讓電極讀數(shù)穩(wěn)定。

2.注意事項

（1）由于pH211酸度計內(nèi)裝有可充電電池，在剛購買或長時間放置后，再使用時，通電校正測量完畢后，可將電源繼續(xù)還插入電源插座，只需關(guān)閉開關(guān)，這樣可以保證電池充電，是校正值得以儲存，下次測量時無須校正即可進(jìn)入精確測量。

（2）不可用蒸餾水、去離子水和純水浸泡電極。如果讀數(shù)偏差太大（±沒有校正或電極變干。為避免電極受損，在關(guān)機(jī)前要將狀態(tài)時，在電極浸入電極保存液前，電極要與機(jī)器分開。

（3）如儀器已測過幾種不同的樣品溶液，請用自來水清洗，樣品清洗電極。

（4）溫度會影響pH的讀數(shù)，為測量準(zhǔn)確的補(bǔ)償，用HI7669/2W溫度探棒浸入樣品中，緊靠電極并停幾分鐘，如果被測溶液的溫度已知或測量是在相同溫度下進(jìn)行，只需動手補(bǔ)償，示溫度讀數(shù)伴有℃信號閃爍。溫度可通過“

六、PCR儀

PCR儀，也稱DNA熱循環(huán)儀、基因擴(kuò)增儀，它是使一對寡核苷酸引物結(jié)合到正負(fù)上的靶序列兩側(cè)，從而酶促合成拷貝數(shù)為百萬倍的靶序列三種不同溫度進(jìn)行DNA變性、引物復(fù)性、PCR儀主要應(yīng)用于基礎(chǔ)研究和應(yīng)用研究等許多領(lǐng)域，如基因分析、序列分析、進(jìn)化分析、臨床診斷、法醫(yī)學(xué)等等。隨著分子生物學(xué)的不斷發(fā)展，因此了解PCR儀的性能，熟練掌握儀器的正確使用方法及使用過程中的注意事項，將是十分必要的。

現(xiàn)介紹PCR 擴(kuò)增儀（Tl Thermocycler）的使用方法和注意事項。

pH測量狀態(tài)，將電極與溫度探棒浸泡在待測

pH電極從溶液中拿出。當(dāng)處于關(guān)機(jī) 或在插入樣品溶液前，用待測pH值，溫度要在適合的范圍內(nèi)進(jìn)行自動溫度那么此時溫度探棒是不用連接，?℃”或“D℃”來調(diào)節(jié)。DNA片段，它的每一循環(huán)包括在DNA聚合酶催化的延伸反應(yīng)的三個過程。PCR擴(kuò)增技術(shù)也得到普及推廣應(yīng)用，6

1pH），則是由于屏幕上會顯DNA鏈 1.使用方法

(1）接通電源開關(guān)，儀器進(jìn)入準(zhǔn)備狀態(tài)；在顯示屏上記錄了當(dāng)前儀器的溫度和蓋子（Lid）的溫度。若儀器正在運(yùn)行時，須按“

B ”鍵（start/stop），才能退出運(yùn)行并返回準(zhǔn)備狀態(tài)。

(2）編寫程序段。在準(zhǔn)備狀態(tài)下按“

C ”鍵(programs)進(jìn)入編程狀態(tài)，選定一程序號，然后按“enter”鍵，進(jìn)入下一程序；按 “A”(list)鍵后，選一文件號（empty program）；再按“enter”鍵，進(jìn)入下一程序；按“ABC”鍵，進(jìn)入下一程序，用上下左右鍵號選擇一個字母（A、B、C、D、?），然后按“enter”鍵，進(jìn)入下一程序；按“name ok”鍵，完成文件命名。

(3）設(shè)定蓋子的溫度。性溫度是95℃，那么蓋子的溫度就要設(shè)定為程序。

(4）設(shè)定變性溫度、變性時間、延伸溫度、延伸時間、退火溫度、退火時間及循環(huán)總數(shù)等參數(shù)。從第一步依次按“間，全部參數(shù)設(shè)置完后，按“

(5）運(yùn)行程序。檢查設(shè)定是否正確，屏上可觀察到系統(tǒng)運(yùn)行的情況，按“

七、凝膠成像系統(tǒng)

本系統(tǒng)屬全自動電腦控制影像分析系統(tǒng)，主要拍攝核酸的acrylamide電泳膠片。在與確定量，是分子生物學(xué)及生化蛋白試驗(yàn)的重要檢測工具。像頭，變焦鏡，電腦以及專業(yè)凝膠圖象采集及分析斑點(diǎn)測量、PCR密度的定量分析等。此外，還提供圖像采集、標(biāo)注、打印、數(shù)據(jù)和圖像發(fā)送到Word、Excel、圖像處理等功能。

1.使用方法

(1)打開電腦，啟動凝膠分析軟件，進(jìn)入用戶界面。

（2）打開采集凝膠圖像的暗箱裝置電源開關(guān)，放入凝膠，打開紫外光源或白光光源，將采集裝置與電腦上采集卡相連，然后選擇“文件”菜單中的“圖像采集”或工具欄的“圖像采集”按鈕，出現(xiàn)圖像窗口：晰，可以調(diào)節(jié)暗箱上的變焦鏡，使之清晰。可直接將圖像保存起來，也可通過“圖像處理”對圖像進(jìn)行旋轉(zhuǎn)、裁剪、濾波、調(diào)節(jié)對比度??方面的處理。

(3)對讀入的電泳凝膠圖像，可以啟動電泳凝膠分析系統(tǒng)。在“功能選擇”菜單中選擇“電泳凝膠”或在工具欄上的“電泳凝膠”工具，將出現(xiàn)泳道分析工具欄，并在“圖像顯示”子窗口中出現(xiàn)一個紅色的矩形框。還可進(jìn)入“條帶分析”系統(tǒng)，對條帶 lid temp：

℃”enter”鍵進(jìn)入，用四個移位鍵移動設(shè)定位置。先設(shè)定溫度，后設(shè)定時pgm ok”鍵，所設(shè)定的程序自動被保存。

按“Stop”可停止運(yùn)行。markers比較后，可精確計算樣本的分子量，對核酸電泳也可準(zhǔn) “開始采集”105℃。待蓋子預(yù)熱后按“start”鍵，選擇設(shè)定好的程序，開始運(yùn)行。顯示 agarose本系統(tǒng)包括暗箱，.軟件（3.3版）。該軟件提供對電泳凝膠、、“停止采集”、“采集圖像”等。如果圖像不清 7

10℃，例如變enter”鍵，進(jìn)入下一 紫外透射儀，攝 進(jìn)行編號，對“，蓋子的溫度一般比變性溫度要高 電泳膠片，及蛋白質(zhì)的二條以上的條帶進(jìn)行比較。

（4）采集圖像結(jié)束后，關(guān)閉暗箱電源開關(guān)，從暗箱中取出凝膠，并將玻璃板清洗干凈，晾干。

八、空氣恒溫?fù)u床

搖床（振蕩器）為實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)設(shè)備。SHK-99-Ⅱ型臺式空氣恒溫?fù)u床，采用微電腦控制系統(tǒng)，溫度范圍：室溫＋5℃～60℃，精度±0.5℃；時間范圍：1分鐘～99小時59分鐘；轉(zhuǎn)速范圍：60RPM～250RPM。

1.使用方法

(1）LED屏幕上各段數(shù)據(jù)：

000

00.0

屏幕上“1”表示第一段，如果是第二段則為“轉(zhuǎn)速，“Time”表示時間，不設(shè)定時可自動累計時間一直運(yùn)行。的值隨時可以修改，隨時按新值運(yùn)行。

(2）工作程序設(shè)置。按“F1”鍵，進(jìn)入設(shè)置狀態(tài)。可在速度，溫度，時間，運(yùn)行等四部分之間切換。在每一部分按“F2”鍵輸入數(shù)據(jù)，輸入完十位數(shù)據(jù)，再輸入個位數(shù)據(jù)，按“鍵，再按“F2”鍵，到小數(shù)位，再按“

(3）再按“F1”鍵，轉(zhuǎn)回運(yùn)行狀態(tài)，按“

(4）按“End”鍵，結(jié)束系統(tǒng)運(yùn)行。

2.注意事項

（1）打開電源，系統(tǒng)開始自檢，等待完畢，可以進(jìn)行第2步參數(shù)設(shè)置。若屏幕出現(xiàn)：錯誤；b.“MOTOR ERROR”，表示電機(jī)部分有錯誤。

（2）運(yùn)行過程可以打開箱蓋，這樣電機(jī)不運(yùn)行，時間也停止，蓋上蓋接著運(yùn)行。

（3）工作完畢，關(guān)閉電源。關(guān)機(jī)后，要等一段時間再開機(jī)。

九、水的凈化裝置

分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)對水的純度要求越來越高，RPM

Temp

Time

00:00 2”，“Temp”表示溫度，“RPM”表示每分鐘“Temp”、“RPM”、F2”鍵，又到十位，以此循環(huán)。Start”鍵，電機(jī)開始運(yùn)行，時間開始計時。LCD屏幕出現(xiàn)“WELCOME”字樣，系統(tǒng)自檢a.“TEMP ERROR”，表示溫度檢測線路有

一般蒸餾水常常難以滿足實(shí)驗(yàn)要求，大多要求要

Time”F2”

“ 進(jìn)行第二次蒸餾（雙蒸水），它可以去除水中的大部分有機(jī)雜質(zhì)，但制作時間較長，而且無機(jī)雜質(zhì)還是很多。許多實(shí)驗(yàn)還需要去離子水，這就需要陰陽離子交換樹脂進(jìn)行處理。目前，分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室都使用高質(zhì)量的超純水。如美國微孔濾膜公司的Milli-Q超純水制造系統(tǒng)所制造的超純水適用于許多學(xué)科領(lǐng)域，如分子克隆、各種色譜分析、氨基酸分析、DNA測序、酶反應(yīng)、組織和細(xì)胞培養(yǎng)等實(shí)驗(yàn)。下面介紹RO-MB壁掛式反滲透高純水機(jī)性能及使用方法。RO-MB反滲透高純水機(jī)（杭州永潔達(dá)）產(chǎn)水量（25℃）10L/H；產(chǎn)水水質(zhì)：RO純水：<10μs/cm，高純水：>15MΩ.cm；可用自來水制成普通實(shí)驗(yàn)用水和高純水，同時滿足不同水質(zhì)要求。在線電導(dǎo)率儀對產(chǎn)水水質(zhì)連續(xù)檢測，可保證產(chǎn)水質(zhì)量。

1.使用方法

(1)準(zhǔn)備：先檢測與純水機(jī)相連的原水管路、廢水管路連接是否正常，打開原水閥門。供電電源是否正常，檢查按鈕是否在關(guān)閉狀態(tài)（按鈕彈出狀態(tài)）220V電源插座上。

(2）開機(jī)：依次按下電源開關(guān)，泵開關(guān)，純水機(jī)啟動產(chǎn)水，同時廢水排出，指示燈亮起，并處于自動運(yùn)行狀態(tài)。

(3）取純水：若打開閥門打開時，檢測儀表顯示高純水電導(dǎo)率或電阻值。一杯水后再取新鮮水。

(4）關(guān)機(jī)：不用時可關(guān)閉個按鈕停機(jī)，自來水進(jìn)水閥門不必關(guān)閉，這時機(jī)子內(nèi)部的進(jìn)水電磁閥已自動切斷水路。只要管路閥門不漏，也可使機(jī)子保持自動待機(jī)狀態(tài)。

2.注意事項

（1）純水機(jī)的正常使用環(huán)境溫度為度不低于5℃。

（2）預(yù)處理濾芯一般三至六個月更換一次，實(shí)際使用壽命與自來水水質(zhì)、總過濾量等有關(guān)。

（3）混床濾芯產(chǎn)高純水約水中含鹽量、總用水量等有關(guān)。天開機(jī)30分鐘沖洗一次，冬季每隔

（4）使用過程若發(fā)現(xiàn)停機(jī)后泵仍頻繁地每隔數(shù)分鐘有規(guī)則地啟動數(shù)秒鐘又停機(jī)，此為管路漏水引起，需及時打開機(jī)箱加以解決。象，有利于沖洗和保護(hù)反滲透膜元件，十、消毒設(shè)備

細(xì)菌和細(xì)胞培養(yǎng)以及核酸等有關(guān)實(shí)驗(yàn)所用的試劑、RO純水或高純水出口閥門，則可獲得相應(yīng)水質(zhì)的純水。當(dāng)高純水出口 115～3噸，約二至四個月更換一次，2～3避免遭到微生物繁殖和減少污物沉積。將電源插頭插入帶有接地線的為了獲得高質(zhì)量的高純水，可以先放掉 35℃，產(chǎn)水量會隨溫度降低而下降，冬季保養(yǎng)溫實(shí)際使用壽命與自來水水質(zhì)、2天。必須注意定期沖洗維護(hù)。夏季宜每 乃屬正常現(xiàn)尤其高溫季節(jié)。器皿及實(shí)驗(yàn)用具，應(yīng)嚴(yán)格滅菌，有的實(shí)驗(yàn)

～設(shè)備停運(yùn)時間超過天開機(jī)沖洗一次。若每隔半小時以上啟動數(shù)秒鐘又停機(jī)，還要求沒有核酸酶的污染，故應(yīng)將實(shí)驗(yàn)器械，試劑等進(jìn)行高壓消毒。對于經(jīng)過導(dǎo)入DNA重組分子的菌株，操作后必須進(jìn)行嚴(yán)格的高壓消毒滅活處理。

大批實(shí)驗(yàn)物品、試劑、培養(yǎng)基等可以使用大型消毒器進(jìn)行消毒。一些不能經(jīng)受高壓、高溫消毒的試劑可用濾器濾膜除菌，器皿可用紫外線照射、75%乙醇或0.1%的十二烷基硫酸鈉（SDS）浸泡消毒。所有的細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)菌培養(yǎng)的操作，都應(yīng)在紫外線消毒后的超凈工作臺中進(jìn)行。

下面介紹立式自動壓力蒸汽滅菌器（LDZX-40BI）的使用方法。

1.使用方法

（1）開蓋：轉(zhuǎn)動手輪，使鍋蓋離開密封圈。

（2）通電：連接自動進(jìn)水裝置。接通電源，將控制面板上電源開關(guān)按至低（LOW）紅燈亮，蒸發(fā)鍋內(nèi)屬斷水狀態(tài)；缺水（（3）加水：打開水源，水位達(dá)到低水位，控制面板上低水位紅燈和缺水黃燈相繼滅，加熱（1-綠燈）亮，繼續(xù)加水至高水位（（4）堆放物品：需包扎的滅菌物品，體積不超過包裝之間留有間隙，堆放在金屬框內(nèi)，這樣有利于蒸汽的穿透，提高滅菌效果。

（5）密封高壓鍋：推橫梁入立柱內(nèi)，旋轉(zhuǎn)手輪，使鍋蓋下壓，充分壓緊。

（6）設(shè)定溫度：通電后數(shù)顯窗燈亮，上層為紅色，顯示溫度，下層為綠色，設(shè)定溫度和時間。先按控制面板上確認(rèn)鍵，綠色數(shù)顯閃爍，進(jìn)入溫度設(shè)定狀態(tài)。按一次移位鍵指相應(yīng)位置閃爍，根據(jù)所需數(shù)據(jù)位置進(jìn)行（單項循環(huán)）移位。按△增加鍵或所需溫度設(shè)定。設(shè)定完畢，按二次確認(rèn)鍵，進(jìn)行溫度確認(rèn)。

（7）設(shè)定時間：按一次確認(rèn)鍵，將溫度設(shè)定切換成時間設(shè)定；再按一次移位鍵，所指相應(yīng)位置閃爍，完畢，按二次確認(rèn)鍵，定時器開始倒計時。

（8）滅菌：在加熱初，將下排汽閥打開至垂直位置；下排汽閥待蒸汽冒出時，壓力表顯示指示為的15%為宜。安全閥設(shè)定數(shù)，超出壓力部分，安全閥將自動泄壓，并開始計數(shù)滅菌所需時間。滅菌完成，電控裝置將自動關(guān)閉加熱系統(tǒng)，伴有蜂鳴提醒；并將保溫時間切換成控制面板上電源開關(guān)按至

（9）干燥：物品滅菌后需要迅速干燥，須打開放汽閥和下排汽閥，將滅菌器內(nèi)的蒸汽迅速排出，使物品上殘留水蒸汽快速揮發(fā)。根據(jù)所需數(shù)據(jù)位置進(jìn)行移位；進(jìn)行時間設(shè)定確認(rèn)。℃時，將下排汽閥推向水平關(guān)閉位置；留有微量蒸汽逸出，以控制總汽流量使用最高滅菌溫度為OFF HIGH）綠燈亮，自動停止加水。按增加鍵或減少鍵，時間采用倒計時，124℃～126℃，ON處，若水位LACK）黃燈亮，電源已正常輸入。

200mm×100mm×100mm為宜，各

所??減少鍵，進(jìn)行 進(jìn)行所需時間設(shè)定。設(shè)定當(dāng)滅菌鍋內(nèi)溫度達(dá)到設(shè)定溫度，0.145Mpa～0.165Mpa范圍內(nèi)屬于END顯示；此時，將

100壓力在處；關(guān)閉電源，停止加熱待其冷卻。

（10）將蓋開啟，取出已滅菌物品。關(guān)閉水源，打開下排水閥，排盡滅菌室的水與水垢，以備下次使用。

2.注意事項

（1）堆放滅菌物品時，嚴(yán)禁堵塞安全閥的出汽孔，必須留出空位保證其空氣暢通，否則安全閥因出汽孔堵塞不能工作，造成事故。

（2）滅菌液體時，應(yīng)將液體灌裝在硬制的耐熱玻璃瓶中，以不超過選用棉花紗塞，切勿使用未打孔的橡膠或軟木塞，放蒸汽，必須待壓力表指針回零位方可排放余汽。

（3）對不同類型，不同滅菌物要求的物品，切勿放在一起滅菌，以免顧此失彼，造成損失。

實(shí)驗(yàn)二

質(zhì)粒DNA

一、實(shí)驗(yàn)原理

細(xì)菌質(zhì)粒是一類雙鏈、閉環(huán)的在于細(xì)胞質(zhì)中、獨(dú)立于細(xì)胞染色體之外的自主復(fù)制的遺傳成份，于染色體外的游離狀態(tài)，制而復(fù)制，并通過細(xì)胞分裂傳遞到后代。

DNA，大小范圍從

在滅菌液體結(jié)束時不準(zhǔn)立即釋 至200kb3/4體積為好，瓶口隨著染色體的復(fù)特別注意，的提取－堿裂解法1kb以上不等。各種質(zhì)粒都是存通常情況下可持續(xù)穩(wěn)定地處但在一定條件下也會可逆地整合到寄主染色體上，一般分離質(zhì)粒DNA的方法都包括3個步驟：①培養(yǎng)細(xì)菌，使質(zhì)粒DNA大量擴(kuò)增；②收集和裂解細(xì)菌；③分離和純化質(zhì)粒DNA。分離制備質(zhì)粒DNA的方法很多，其中常用的方法有堿裂解法、煮沸法、SDS法、羥基磷灰石層析法等。在實(shí)際操作中可以根據(jù)宿主菌株類型、質(zhì)粒分子大小、堿基組成和結(jié)構(gòu)等特點(diǎn)以及質(zhì)粒DNA的用途進(jìn)行選擇。本實(shí)驗(yàn)介紹堿裂解法提取質(zhì)粒DNA。

堿裂解法提取質(zhì)粒DNA是根據(jù)共價閉合環(huán)狀質(zhì)粒DNA和線性染色體DNA在拓?fù)鋵W(xué)上的差異來分離質(zhì)粒DNA。在pH值介于12.0-12.5這個狹窄的范圍內(nèi)，線性的DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而被變性，盡管在這樣的條件下，共價閉環(huán)質(zhì)粒DNA的氫鍵會被斷裂，但兩條互補(bǔ)鏈彼此相互盤繞，仍會緊密地結(jié)合在一起。當(dāng)加入pH4.8乙酸鉀高鹽緩沖液恢復(fù)pH至中性時，因?yàn)楣矁r閉合環(huán)狀的質(zhì)粒DNA的兩條互補(bǔ)鏈仍保持在一起，因此復(fù)性迅速而準(zhǔn)確，而線性的染色體DNA的兩條互補(bǔ)鏈彼此已完全分開，復(fù)性就不會那么迅速而準(zhǔn)確，它們相互纏繞形成不溶性網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，而復(fù)性的質(zhì)粒DNA恢復(fù)原來構(gòu)型，保持可溶性狀態(tài)。通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA，蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去，最后用酚氯仿抽提純化上清液中的質(zhì)粒DNA。

二、儀器及試劑

1.儀器及耗材：37℃恒溫?fù)u床、冷凍離心機(jī)、臺式離心機(jī)、微量移液器、50 ml離心管、1.5 ml離心管管、槍頭、各種規(guī)格的量筒、接種環(huán)、試劑瓶、100 l或者250 ml三角瓶、玻棒等。

2.試劑及配制：

LB培養(yǎng)液的配制：

酵母浸提物

5.0 g；

胰蛋白胨

10.0 g；

NaCl

10.0 g；

依次稱量后加入800 ml去離子水后攪拌至完全溶解，用5 mol/L NaOH（約0.2 ml）調(diào)節(jié)培養(yǎng)液的pH值至7.0。再加去離子水將溶液定容至總體積為1000 ml，10磅高壓滅菌20 min，冷卻后4℃保存。

溶液 Ⅰ（GET緩沖液）： 25 mmol/LTris-HCl（pH8.0）, 10 mmol/L EDTA, 50 mmol/L 葡萄糖

配制：1000 ml

mol/L Tris-HCl（pH8.0）

ml

0.5 mol/L EDTA（pH8.0）ml

20% Glucose（1.11mol/L）

ml

dH2O

910ml

將以上溶液混合裝瓶，10磅高壓滅菌20 min，冷卻后4℃保存。

溶液II（變性液）：200 mmol/L NaOH，1% SDS

配制： 500 ml

10% SDS

ml

2N NaOH

ml

取以上溶液，用滅菌去離子水定容至500 ml，充分混勻。室溫保存，此溶液保存時間最好不超過一個月，最好現(xiàn)用現(xiàn)配。

注意：SDS易產(chǎn)生氣泡，不要劇烈攪拌。

溶液 III(醋酸鉀液)：3 mol/L 醋酸鉀（KAc）緩沖液，pH 5.6。5 mol/L 冰醋酸

配制：500 ml

醋酸鉀

g

冰醋酸

57.5 ml

加入300 ml去離子水后攪拌溶解。待醋酸鉀溶解后，再加去離子水將溶液定容至高溫高壓滅菌后，4℃保存。

10×TE緩沖液（pH 8.0）：100 mmol/L Tris-HCl, 10 mmol/L EDTA

配制：1000ml mol/LTris-HCl 緩沖液(pH 8.0)

100ml

500 mmol/L EDTA(pH8.0)ml

加入約800 ml的去離子水，均勻混合。溶液定容至1 L。高溫高壓滅菌后，苯酚/氯仿/異戊醇(25 : 24 : 1)：將量取25 ml Tris-HCl（pH8.0）平衡苯酚，加入 13

500 ml。4℃保存。24 ml 氯仿和 1 ml 異戊醇，充分混合后，移入棕色玻璃瓶中，4℃保存。

其它試劑：TE（pH8.0）、異丙醇、氯仿/異戊醇（24:1）、無水乙醇、70％乙醇、氨卞青霉素貯存液（50 mg/ml）

三、操作步驟

1.菌體的培養(yǎng)和收獲

(1）將5～10 ml含有氨卞青霉素（后接入一單菌落，并保持通氣良好，于接一次，于37℃ 220 rpm振搖培養(yǎng)(2）吸取培養(yǎng)的菌液1.5 ml，轉(zhuǎn)入棄上清，將離心管倒置，使液體盡可能流盡。

2.質(zhì)粒DNA提取（堿裂解法）

（1）加100 ul 溶液Ⅰ 重懸細(xì)菌沉淀，用槍吹打直至混和均勻。

（2）加200 ul溶液 Ⅱ，蓋緊管口，液變透明，粘稠）。

（3）加150 ul溶液 Ⅲ，輕微振蕩混和

（4）12000 rpm離心6 min，取上清液至另一離心管（棄沉淀）

（5）加等量的酚/氯仿/異戊醇，旋渦混勻離心管。

（6）加1倍異丙醇，振蕩混勻，靜置倒置于吸水紙，將附于管壁的殘余液滴除凈。

（7）加200 ul 70％乙醇洗滌沉淀物，臺式離心機(jī)在室溫下晾干（或在50℃－60℃的烘箱中也可）

（8）沉淀加20μl TE, 反復(fù)吹打使質(zhì)粒

四、常見問題及可能原因

1.提取的質(zhì)粒DNA不純：變性不充分；關(guān)鍵步驟反應(yīng)時間過短；離心時間或速度不夠。

2.提取的質(zhì)粒DNA呈涂布狀：操作過程中用力過猛，動作過大；操作系統(tǒng)內(nèi)有污染。

AP）的LB培養(yǎng)基加入到容量為100ml的三角瓶中，然37℃ 220 rpm振搖過夜培養(yǎng)（約16h）后可以再轉(zhuǎn)3～4 h。的離心管中，用臺式離心機(jī)以12000 rpm

輕緩上下顛倒離心管以混合內(nèi)容物。室溫靜置10 sec，置冰上10 min(溶液出現(xiàn)白色沉淀。1 min，12000 r/min離心6min，取上清液至另一10 min，12000 rpm離心6 min。棄上清液，將離心管 12000 rpm離心2 min，棄上清液，將沉淀。DNA充分溶解，－20℃保存。14 min。5 min（溶)。

1.5 ml離心 3.與染色體DNA分離不全：變性過程不完全；試劑配制有問題（成分，濃度或pH）。

實(shí)驗(yàn)三

瓊脂糖凝膠電泳

一、實(shí)驗(yàn)原理

瓊脂糖凝膠電泳是分離和純化的多孔支持介質(zhì)（瓊脂糖凝膠）的樣品孔中，并置于靜電場上。由于架兩側(cè)帶有含負(fù)電荷的磷酸根殘基，分子的遷移速度取決于分子篩效應(yīng)。因而可依據(jù)DNA可以分離相對分子質(zhì)量相同，而構(gòu)型不同的相對分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)參照物和樣品一起進(jìn)行電泳而得到檢測。以提供一個用于確定EB)，其分子可插入下，呈桔紅色熒光，因此也可對分離的

一般瓊脂糖凝膠電泳適用于大小在膠的制備以及瓊脂糖凝膠電泳在

二、儀器及試劑

1.儀器及耗材：

水平電泳槽、電泳儀、100 ml或250 ml錐形瓶、量筒、吸頭等。

2.試劑及配制：

50×TAE緩沖液的配制：

配制1000 ml

DNA 片段的常用技術(shù)。把DNA樣品加入到一塊包含電解質(zhì)DNA分子的雙螺旋骨因此在電場中向正極移動。在一定的電場強(qiáng)度下，DNA具有不同的相對分子質(zhì)量的DNA片段泳動速度不一樣，DNA，也DNA分子。在電泳過程中可以通過示蹤染料或相對分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)參照物相對可DNA片段大小的標(biāo)準(zhǔn)。在凝膠中加入少量溴化乙錠(ethidium bromide, DNA的堿基之間，形成一種絡(luò)合物，在254～365nm波長紫外光照射DNA進(jìn)行檢測。0.2kb～50kb范圍內(nèi)的DNA片段。本實(shí)驗(yàn)介紹瓊脂糖凝

DNA片段分離中的應(yīng)用方法。

凝膠成像分析系統(tǒng)、微波爐、微量移液器、透明膠帶、點(diǎn)樣板或parafilm、2 mol/L Tris-乙酸，0.05 mol/L EDTA（pH 8.0）15 分子的大小來使其分離。凝膠電泳不僅可分離不同分子質(zhì)量的Tris

242 g

冰乙酸

57.1 ml

0.5 mol/L EDTA

ml

加入600 ml去離子水后攪拌溶解，將溶液定容至1 L后。高溫高壓滅菌，室溫保存。

1×TAE緩沖液的配制：

稱量20 ml的50×TAE緩沖液，再加入980 ml的去離子水。

溴化乙啶貯存液：10 mg/ml 溴化乙啶

配制：100 ml

稱取1 g溴化乙啶，置于100 ml燒杯中，加入80 ml去離子水后攪拌溶解。將溶液定容至100 ml后，轉(zhuǎn)移到棕色瓶中。室溫保存。

6×上樣緩沖液：0.25%溴酚藍(lán)，0.25%二甲苯青FF，30%甘油。

配制：10 ml

溴酚藍(lán)mg

二甲苯青FF

mg

甘油

ml

用6×TAE緩沖液定溶至10 ml，分裝成1 ml/管。-20℃保存。

其它試劑：DNA樣品、DNA Ladder、瓊脂糖、三、操作步驟

1.制備1％瓊脂糖凝膠(大膠用70ml，小膠用50ml)：稱取0.7 g中，加入70 ml（50ml）1×TAE，瓶口倒扣小燒杯。微波爐加熱煮沸搖勻，即成1.0%瓊脂糖凝膠液。

2.膠板制備：取電泳槽內(nèi)的有機(jī)玻璃內(nèi)槽（制膠槽）洗干凈、晾干，放入制膠玻璃板。取透明膠帶將玻璃板與內(nèi)槽兩端邊緣封好，形成模子。將內(nèi)槽置于水平位置，好梳子。將冷卻到65℃左右的瓊脂糖凝膠液混勻小心地倒入內(nèi)槽玻璃板上，使膠液緩慢展開，直到整個玻璃板表面形成均勻膠層。室溫下靜置直至凝膠完全凝固，垂直輕拔梳子，取 16

0.5 g）瓊脂糖置于錐形瓶3次至瓊脂糖全部融化，并在固定位置放（下膠帶，將凝膠及內(nèi)槽放入電泳槽中。添加1×TAE電泳緩沖液至沒過膠板為止。

3.加樣：在點(diǎn)樣板或parafilm上混合DNA樣品和上樣緩沖液，上樣緩沖液的最終稀釋倍數(shù)應(yīng)不小于1X。用10 ul微量移液器分別將樣品加入膠板的樣品小槽內(nèi)，每加完一個樣品，應(yīng)更換一個加樣頭，以防污染，加樣時勿碰壞樣品孔周圍的凝膠面。（注意：加樣前要先記下加樣的順序）。

4.電泳：加樣后的凝膠板立即通電進(jìn)行電泳，電壓60－100V，樣品由負(fù)極（黑色）向正極（紅色）方向移動。電壓升高，瓊脂糖凝膠的有效分離范圍降低。當(dāng)溴酚藍(lán)移動到距離膠板下沿約1cm處時，停止電泳。

(5）電泳完畢后，取出凝膠，用含有0.5 ug/ml的溴化乙錠1×TAE用清水漂洗10 min。

(6)觀察照相：在紫外燈下觀察，DNA存在則顯示出紅色熒光條帶，采用凝膠成像系統(tǒng)拍照保存。

四、常見問題及注意事項

1．配瓊脂糖時應(yīng)使其完全熔化后方可制膠。

2．瓊脂糖凝膠易于破碎，操作時要輕緩。

3．電泳時應(yīng)注意電源線路，預(yù)防觸電。

4．溴化乙淀具有致癌作用，配制及使用時應(yīng)帶乳膠或一次性塑料手套。并在專門的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)使用。

5．紫外線對人體有損傷作用，開燈時間不宜太長，注意防護(hù)。

6．DNA帶形狀模糊：DNA加樣過多；電壓太高；凝膠中有氣泡。

7．質(zhì)粒DNA的存在形式有3種，①共價閉環(huán)DNA（cccDNA），常以超螺旋形式存在；②開環(huán)DNA（ocDNA），此種質(zhì)粒DNA的兩條鏈中有一條發(fā)生一處或多處斷裂，因此可以自由旋轉(zhuǎn)從而消除張力，形成松弛的環(huán)狀分子；③線狀DNA，因質(zhì)粒處斷裂而造成。因此質(zhì)粒DNA電泳的結(jié)果中有可能出現(xiàn)三條泳帶，它們的泳動速度為：cccDNA > 線狀DNA > ocDNA。min，再DNA的兩條鏈在同一溶液染色約 DNA18

DNA

實(shí)驗(yàn)四

限制性內(nèi)切核酸酶的酶切與鑒定

一、實(shí)驗(yàn)原理

限制性內(nèi)切酶是一類能識別雙鏈分子中特異核苷酸序列的水解酶，主要存在于原核生物中。根據(jù)限制酶的識別切割特性、催化條件及是否具有修飾酶活性可分為 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型三大類。其中Ⅱ類酶在分子克隆和基因操作中最為有用，是常用的分子生物學(xué)工具酶。

限制性內(nèi)切酶識別序列長度一般為4～8個呈回文序列的特異核苷酸對。一般情況下，識別序列越長，在同一DNA分子中識別位點(diǎn)出現(xiàn)的頻率就越小。許多限制性內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)已被確定。例如EcoRl 酶的識別與切割序列為以下6個堿基對。

5′??GAATTC??3′

EcoR I以獨(dú)特的方式識別并裂解這個順序，形成兩個 和

……G

這些末端為互補(bǔ)的，即粘性末端，并可在連接酶的催化下與由相連接。

限制性內(nèi)切酶主要用于基因組基因片段的分離與回收以及單酶切、雙酶切或部分酶切等不同方式。大量的酶切反應(yīng)。小量酶切反應(yīng)主要應(yīng)用于質(zhì)粒的酶切鑒定，DNA，大量酶切反應(yīng)用于制備目的基因片段，體積為

本實(shí)驗(yàn)為EcoR I對質(zhì)粒性內(nèi)切核酸酶酶切位點(diǎn)。瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行鑒定酶切效果。

二、儀器與試劑

1.儀器：

水浴鍋、離心管、移液器、吸頭、2.試劑：

質(zhì)粒pUC18、EcoR I限制性內(nèi)切核酸酶、內(nèi)切酶反應(yīng)緩沖液、瓊脂糖、電泳緩沖液、樣緩沖液、溴化乙啶染液、無菌水等。

三、操作步驟

3′??

……CTT AA DNA的片段化、重組DNA分子物理圖譜的構(gòu)建等。根據(jù)酶切目的和要求不同，可有pUC18的小量酶切。在用特定的限制性內(nèi)切核酸酶對質(zhì)粒進(jìn)行酶切反應(yīng)后，CTT AAG?? 5′

5′突出末端：

AATTC……

EcoR I產(chǎn)生的其它分子末端DNA分子的構(gòu)建與鑒定、載體中目的可分為小量酶切反應(yīng)和體積為20 μ50～100 μl，DNA

在質(zhì)粒的雙鏈環(huán)狀DNA電泳設(shè)備等。

l, 含0.210通常可采用1 μg 30ug。6×上

G……根據(jù)酶切反應(yīng)的體積不同，～用量在～分子上有多個限制

1．限制性內(nèi)切酶反應(yīng)一般在滅菌的0.2或0.5ml PCR薄壁離心管中進(jìn)行。

2.酶切反應(yīng)體系（10ul）：

酶解緩沖液（10×buffer）ul

限制性內(nèi)切酶

0.5 ul EcoR I(7.5U)

底物DNA（質(zhì)粒）

滅菌ddH2O

限制性內(nèi)切酶最后加入，手彈混勻或用吸頭輕輕上下吹吸，混勻后離心15s。37℃水浴消化

3.酶切完畢，分子量標(biāo)準(zhǔn)物同時進(jìn)行電泳以確定應(yīng)，或加入適量酶后繼續(xù)反應(yīng)。

5.經(jīng)電泳觀察酶切反應(yīng)完全后，將上述反應(yīng)液置將剩余酶切產(chǎn)物保存于

四、注意事項

1.限制性內(nèi)切酶需保存于

2.限制性內(nèi)切酶溶液通常含有溶液底部，所以要充分搖勻。

3.加樣時吸頭垂直進(jìn)入試劑管，避免碰到管壁，每加完一樣要換一個吸頭，同時在已加的樣品前做個記號以防止錯加或漏加，避免污染。

4.酶（置于冰盒上）應(yīng)最后加入，盡量減少室溫接觸機(jī)會。加酶時吸頭深入不可過深。

5.酶解消化反應(yīng)溫度及時間根據(jù)該酶使用說明書而定。

6.注意酶的用量，加入的酶量按的10%，以避免酶液中甘油干擾反應(yīng)活性的可能，即在識別序列以外的位點(diǎn)進(jìn)行切割。此外，反應(yīng)體系中甘油的質(zhì)量分?jǐn)?shù)大于12%，以及缺少

五、相關(guān)問題

2h。取5ul酶切產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，?C20℃?zhèn)溆谩?20℃，操作時應(yīng)將酶保持在冰浴中，避免長時間置于高溫中。NACL和存在M

x ul（依質(zhì)粒濃度而定）

加至10 ul 鑒定酶切反應(yīng)效果，DNA片段的大小。如果酶切不完全，可繼續(xù)65℃水浴中10～15min，中止酶切反應(yīng)，50%甘油，加入反應(yīng)管后，因密度較大，往往沉淀至

1-3U/ug DNA計算，酶的體積應(yīng)低于反應(yīng)總體積

。酶量過大（≥25U/ug DNA）時，有產(chǎn)生所謂星號 20

6000 r/min，DNA.酶解消化反

必須用 等情況下，都有可能出現(xiàn)星號活性。

1.酶的保存

不同的限制酶往往保存在大致相似的緩沖液中，這種特定配方的緩沖液能使酶活性維持較長時間。常用的保存緩沖液各組分作用如下：

Tris-HCl（7.4―7.8）：

維持穩(wěn)定的pH范圍。

50-100mmol/L

NaCl或KCl：提供一定的離子強(qiáng)度。

0.1mmol/L EDTA：

1mmol/L

DTT：

200-500ug/ml BSA：

度，防止蛋白質(zhì)分子濃度過低而導(dǎo)致酶分子變性。

50%的甘油：

1-5 g/L的Triton-100：

白質(zhì)分子的表面變性作用。

2.酶單位的定義

限制酶的單位通常定義為：1U的酶能在約完成酶切1ug的λDNA。確定限制酶單位的具體操作方法是分別向列的酶（1U左右），當(dāng)電泳觀察到酶切片段的條帶不再發(fā)生變化時說明已作用完全，割的最少酶量定為1U的酶量。

3.限制酶的作用條件

限制酶切割DNA的反應(yīng)中，酶切條件是實(shí)驗(yàn)成功的重要因素，其中包括反應(yīng)的溫度、時間與反應(yīng)的緩沖體系，除了這些條件外，只有在正確選擇酶反應(yīng)條件時才能達(dá)到最佳酶切效果。

（1）作用溫度

早期的酶切反應(yīng)都在37℃進(jìn)行，這種方法雖然簡單、統(tǒng)一，但卻不能達(dá)到每個酶的最適反應(yīng)溫度。為了達(dá)到最佳酶切的效果，最好根據(jù)所選用的酶確定所需要的反應(yīng)溫度。

（2）緩沖體系

限制酶反應(yīng)的緩沖體系大致相同，都含有以下組分：約作用是將酶反應(yīng)體系的pH維持在7.5-8.5；約

絡(luò)合掉能激活限制酶的鎂離子。

保護(hù)酶分子上的還原性基團(tuán)。

牛血清白蛋白提高溶液中蛋白質(zhì)的濃

使酶液保存于-20℃不至凍結(jié)。

這是一種非離子型表面活性劑，能防止蛋50ul合適的反應(yīng)緩沖體系中，在1ug的底物中加入一系DNA的純度與濃度也會影響酶切效果，100mmol/L10mmol/L的MgCl2，作用是為限制酶提供激

1h內(nèi)完全切Tris-HCl，的活因子；1mmol/L的DTT，作用是保護(hù)還原性基團(tuán)；約150mmol/L的NaCl，作用是提供合適的離子強(qiáng)度。由于認(rèn)識的局限性，早期的限制酶反應(yīng)體系僅根據(jù)其中NaCl含量的不同分為高鹽、中鹽與低鹽三種，這同樣不能使每種酶獲得最適反應(yīng)條件。現(xiàn)在提供酶的很多廠商能提供4-10種緩沖體系，其中各必需成分之間只有很小的差別，目的是使每種酶都發(fā)揮最大的作用。

緩沖液一般配成10倍的濃度，使用時以1/10的比例加入，當(dāng)然為了減小吸量誤差也可自行配制5倍的緩沖液。

(3)反應(yīng)體積與時間

酶反應(yīng)體積一般不宜小于20ul。因?yàn)檫^小的反應(yīng)體積在加入各種成分時易產(chǎn)生誤差，甘油含量易超過10%。在37℃保溫可因水分蒸發(fā)而明顯改變反應(yīng)體系中各成分的濃度，從而影響酶活力。同時還要考慮反應(yīng)完畢進(jìn)行電泳時，所加樣品中DNA的量能夠在電泳中顯出清晰的泳帶。

常規(guī)的酶切反應(yīng)一般控制在60min內(nèi)進(jìn)行，但也可以根據(jù)切割對象與所用的酶將保溫時間延長至十幾個小時。

(4)DNA的純度與濃度

除了上述酶反應(yīng)條件外，影響酶切效果的最主要因素是DNA的純度。例如，樣品中含有大量RNA雜質(zhì)時會因減少了酶的有效濃度而影響酶切效果；某些雜蛋白未除凈而結(jié)合在DNA時也會影響酶切效果。至于抽提過程中未除凈的各種影響因素就更多了，可能是微量的氯仿、SDS、EDTA、酚、EB、乙醇或是瓊脂糖凝膠中的硫酸根離子等。

DNA純度的另一個指標(biāo)是不可含有微量的DNA酶。如果酶切后電泳結(jié)果顯示出不清晰條帶或成為一片紅色（術(shù)語稱Smear）時，可肯定系統(tǒng)中已經(jīng)污染了DNA酶。

DNA樣品中含有大量RNA時可用RNA酶處理；含有結(jié)合在DNA上的雜蛋白與DNA酶時都可用氯仿/異戊醇抽提；當(dāng)樣品中含有氯仿、SDS、硫酸根等抑制酶切的小分子物質(zhì)時可以通過沉淀更換一個新的緩沖體系。當(dāng)然，酶切失敗時也不能排除除DNA外的一切因素，如無菌水，EP管，吸咀等的干凈程度以及內(nèi)切酶自身的酶活性情況。

除純度外，DNA的濃度也會影響酶切效果，一般DNA質(zhì)量濃度在1ug/20ul才能得到較好的酶切效果，質(zhì)量濃度高達(dá)1.5ug/20ul時就可能發(fā)生酶切困難。

(5)終止酶切反應(yīng)的方法

如果需對酶切片段進(jìn)行連接或標(biāo)記等操作時，首先要將限制酶滅活。滅活的方法可分為三種：第一種是向反應(yīng)緩沖體系中加入終濃度為10-12.5mmol/L的EDTA，原理是絡(luò)合掉酶反應(yīng)中所需的鎂離子。但這種方法會影響需鎂離子的后續(xù)反應(yīng)。所以一般加入EDTA后，要用乙醇沉淀法來更換緩沖體系，以除去EDTA，但這樣就會造成DNA的損失。第二種方法是熱失活：一般的酶如EcoRⅠ等在65℃保溫60min即可；另一些酶如Hind Ⅲ等需在85℃保溫 22 30min方能達(dá)到目的；極端的例子是Ttb Ⅲ甚至不能用加熱的方法使之失活。熱失活方法的特點(diǎn)是簡單并且未向體系中引入任何物質(zhì)，特別適用于連續(xù)進(jìn)行幾個酶切反應(yīng)；熱失活法的另一個特點(diǎn)是不用更換體系，所以不會造成DNA的損失。第三種方法是用酚和氯仿抽提使之失活，之后以乙醇沉淀DNA片段。這種方法的特點(diǎn)是處理條件劇烈，能使酶徹底失活（不像第一種方法中酶蛋白并未變性而只是沒有激活因子而已）。

實(shí)驗(yàn)五

大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備及轉(zhuǎn)化

一、實(shí)驗(yàn)原理

體外連接的重組DNA分子導(dǎo)入合適的宿主細(xì)胞中才能大量的進(jìn)行復(fù)制、增殖和表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)，用含Ca2+ 的溶液處理大腸桿菌細(xì)胞會易于吸收外源DNA。大腸桿菌吸收外源DNA的過程被稱為轉(zhuǎn)化。細(xì)菌處于容易吸收外源DNA的狀態(tài)稱為感受態(tài)。用理化方法可以誘導(dǎo)細(xì)胞進(jìn)入感受態(tài)，如電轉(zhuǎn)化法、CaCL2法。

CaCL2法是目前實(shí)驗(yàn)室常用的制備感受態(tài)細(xì)胞的方法，其原理是使細(xì)菌處于0°C、CaCl2低滲溶液中，細(xì)胞膨脹成球形，細(xì)胞膜的通透性發(fā)生改變，外源DNA附著于細(xì)胞膜表面，經(jīng)42°C短時間熱沖擊處理，促進(jìn)細(xì)胞吸收DNA復(fù)合物。宿主細(xì)胞一般是限制―修飾系統(tǒng)缺陷的變異株，即不含限制性內(nèi)切酶和甲基化酶的突變株，而質(zhì)粒載體攜帶有某一抗生素抗性基因，如抗氨卞青霉素的基因（AP＋）。若將轉(zhuǎn)化的細(xì)胞涂布與于含氨卞青霉素的平板上，則只有那些含有被轉(zhuǎn)化質(zhì)粒的細(xì)胞才能生存并生長增殖。從而可以篩選出哪個克隆含有質(zhì)粒。

本實(shí)驗(yàn)以E.coli JM109菌株為受體細(xì)胞，受體菌使其處于感受態(tài)，然后與pUC18質(zhì)粒共保溫實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化。將經(jīng)過轉(zhuǎn)化后的全部受體細(xì)胞進(jìn)行適當(dāng)稀釋，在含有氨卞青霉素的平板培養(yǎng)基上培養(yǎng)，只有轉(zhuǎn)化體才能存活，化的受體細(xì)胞則因無抵抗氨卞青霉素的能力而死亡。轉(zhuǎn)化子經(jīng)過擴(kuò)增后，可將轉(zhuǎn)入的質(zhì)粒DNA分離提取出來，用于電泳分析、限制性內(nèi)切酶圖譜的制作以及

二、儀器及試劑

1.儀器：

恒溫?fù)u床、電熱恒溫培養(yǎng)箱、電熱恒溫水浴鍋、超凈工作臺、分光光度計、高速冷凍離心機(jī)、臺式離心機(jī)。

2.材料

E.coli JM109受體菌、質(zhì)粒pUC18。

3.試劑：

LB培養(yǎng)液（1L）：

胰蛋白胨

10g

酵母粉

5g

NaCl

10g（高鹽）或

氨芐青霉素（Ampicillin）

100mg/ml

用CaCl2處理而未有轉(zhuǎn)DNA測序等實(shí)驗(yàn)。5g（低鹽）在三角瓶中將胰蛋白胨 10g，酵母粉 5g以及 NaCl 5g溶于1L的重蒸水中并高壓滅菌。待冷卻至55℃，向溶液中加入1.5ml 100mg/ml 的氨芐青霉素。然后貯存于4℃?zhèn)溆谩?/p>

LB平板培養(yǎng)基：

胰蛋白胨

10g

酵母粉

5g

NaCl

10g

瓊脂

13g

在三角瓶中依次將上述配方加入1L的重蒸水中并高壓滅菌。待培養(yǎng)基降溫至養(yǎng)基并輕輕旋轉(zhuǎn)以使溶解的瓊脂均勻分布于整個培養(yǎng)基溶液中，根據(jù)需要加入氨芐青霉素，然后可直接從三角瓶中倒出培養(yǎng)基鋪制平板。90mm直徑的培養(yǎng)皿約需培養(yǎng)基完全凝結(jié)后，倒置平皿并貯存于4℃?zhèn)溆谩?/p>

其它試劑：

0.1M CaCl2溶液、滅菌蒸餾水

三、操作步驟

1.感受態(tài)細(xì)菌的制備：

（1）用接種環(huán)從E.coli JM109菌平板上挑取一單克隆菌落，培養(yǎng)基的試管中中，37℃ 220 rpm振蕩培養(yǎng)過夜（12～16h）。

（2）取0.5 ml過夜菌液接種到裝有50ml LB液體培養(yǎng)基三角瓶中中，振蕩培養(yǎng)2－3h，隔20－30min測量OD600值，至OD600值為轉(zhuǎn)至1.5ml 離心管中，每管1ml菌液，按需要決定管數(shù)。

（3）4℃，12000 rpm，離心2 min，以回收細(xì)菌。

（4）倒凈上清液，倒置離心管于濾紙上1min，使殘留的痕量培養(yǎng)液流盡。冰預(yù)冷的0.1mol/L CaCl2懸浮細(xì)胞，冰浴30 min。

（5）4℃，12000 rpm，2 min。

（6）倒凈上清液，倒置離心管1min，使殘留液流盡。每管加CaCl2重新懸浮細(xì)胞（重懸時操作要輕），即成感受態(tài)細(xì)胞懸浮液。

2.細(xì)菌轉(zhuǎn)化：

（1）取3只滅菌的Ep管，分別編號1、2、3、分別加入以下各組分：加入

5g，30接種于裝有0.3-0.4。無菌條件下將細(xì)菌100 ul冰預(yù)冷的 50℃，取出培50ml培養(yǎng)基。5ml LB液體37℃，220 rpm每管加1ml0.1 mol/L 10～20ng

或 ～ 質(zhì)粒DNA（體積小于10ul），同時做兩個對照組：

1號：受體菌對照組：

100ul感受態(tài)細(xì)胞懸浮液+2ul無菌ddH2O

2號：質(zhì)粒DNA對照組：100ul 0.1mol/L CaCl2+2ul pUC19

3號：正常轉(zhuǎn)化組：100ul感受態(tài)細(xì)胞懸浮液+2ul pUC19

（2）輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物，冰浴30min，促進(jìn)DNA分子在感受態(tài)細(xì)胞表面的吸附。

（3）轉(zhuǎn)入便于DNA分子的吸附進(jìn)入，提高轉(zhuǎn)化率。

（4）迅速轉(zhuǎn)入冰上冷卻

（5）使受體菌恢復(fù)正常生長狀態(tài)，并且表達(dá)

（6）取200ul37℃恒溫培養(yǎng)箱倒置培養(yǎng)可將之置于37℃恒溫培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)，100ul左右，用移液器吹打重懸，再全部涂于含

（7）觀察并記錄轉(zhuǎn)化子出現(xiàn)的數(shù)目，計算轉(zhuǎn)化率。

四、注意事項：

1.實(shí)驗(yàn)中所用的器皿均要滅菌，以防止雜菌和外源

2.實(shí)驗(yàn)過程中要注意無菌操作，溶液移取、分裝等均應(yīng)在無菌超凈工作臺上進(jìn)行。

3.必須設(shè)對照組，以檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)過程中是否有污染。

4.整個實(shí)驗(yàn)過程均需置于冰上。

5.選用對數(shù)生長期細(xì)胞，42℃水浴2min，通過熱刺激增強(qiáng)CaCL2的作用，2min，修復(fù)細(xì)胞膜。600u無抗生素lLB液體培養(yǎng)基，搖勻后于37℃，Ampicillin抗性基因。Ampicillin的LB平板，將平板置于無菌臺直至液體被吸收，12－16h后觀察結(jié)果，其余保存于4℃。如果平板上沒有長出菌落，同時將剩下的500ul菌液離心，Ampicillin的LB平板上，置 DNA

OD600不應(yīng)高于0.6。26

使細(xì)胞膜產(chǎn)生通道，220 rpm，振蕩倒掉大部分上清，37℃培養(yǎng)。60min。留 加菌液涂在含 的污染。

實(shí)驗(yàn)六

動物組織細(xì)胞基因組

一、實(shí)驗(yàn)原理

真核生物的一切有核細(xì)胞（包括培養(yǎng)細(xì)胞）都能用來制備基因組的DNA是以染色體的形式存在于細(xì)胞核內(nèi)，質(zhì)、脂類和糖類等分離，又要保持組織細(xì)胞在含仿/異戊醇抽提分離蛋白質(zhì)，得到的

蛋白酶K在勻漿后提取EDTA則抑制細(xì)胞中分子完整地分離出來。

二、儀器及試劑

1.恒溫水浴鍋、臺式離心機(jī)、紫外分光光度計（離心管（滅菌）

SDS（十二烷基硫酸鈉）和蛋白酶DNA的反應(yīng)體系中，Dnase

、吸頭（滅菌）DNA提取 因此，制備DNA分子的完整。提取KDNA溶液經(jīng)乙醇沉淀使SDS和EDTA（乙二胺四乙酸二鈉）存在下保持很高的活性。SDS可破壞細(xì)胞膜、活性；而蛋白酶K可將 27

DNA的原則是既要將DNADNA核膜，并使組織蛋白與蛋白質(zhì)降解成小肽或氨基酸，GeneQuant）DNA。真核生物DNA與蛋白 DNA分離，使DNA 的一般過程是將分散好的的溶液中消化分解蛋白質(zhì)，再用酚和氯從溶液中析出。的重要特性是能在的 儀器：、移液器、玻璃勻漿器、2.試劑：

（1）細(xì)胞裂解緩沖液：

Tris(pH8.0)

mmol/L

EDTA(pH 8.0)

500 mmol/L

NaCL

mmol/L

SDS

10%

胰RNA酶

20ug/ml

（2）蛋白酶K：

稱取20mg蛋白酶k溶于1ml滅菌的雙蒸水中，?C20℃?zhèn)溆谩?/p>

（3）TE緩沖液（pH 8.0）：高壓滅菌，室溫貯存。

（4）酚?氯仿?異戊醇（25:24:1）、（5）異丙醇、冷無水乙醇、70%乙醇、滅菌水。

三、操作步驟

1.取新鮮或冰凍動物組織塊0.1g（0.5cm3），盡量剪碎。置于玻璃勻漿器中，加入1ml的細(xì)胞裂解緩沖液勻漿至不見組織塊，轉(zhuǎn)入1.5ml 離心管中，加入蛋白酶K（500ug/ml）20μl，混勻。在65℃恒溫水浴鍋中水浴30min，也可轉(zhuǎn)入37℃水浴12～24h，間歇振蕩離心管數(shù)次。于臺式離心機(jī)以12000 rpm離心5min，取上清液入另一離心管中。

2.加2倍體積異丙醇，倒轉(zhuǎn)混勻后，可以看見絲狀物，用100ul 吸頭挑出，涼干，用200ul TE 重新溶解。（可進(jìn)行PCR反應(yīng)等，需要進(jìn)一步純化的按下列步驟進(jìn)行）

3.加等量的酚?氯仿?異戊醇振蕩混勻，離心12000 rpm，5min。

4.取上層溶液至另一管，加入等體積的氯仿?異戊醇，振蕩混勻，離心12000 rpm，5min。

5.取上層溶液至另一管，加入1/2體積的7.5mol/L乙酸氨加入2倍體積的無水乙醇，混勻后室溫沉淀2min，離心12000 rpm ,10min。

6.小心倒掉上清液，將離心管倒置于吸水紙上，將附于管壁的殘余液滴除掉。

7.用1ml 70%乙醇洗滌沉淀物1次，離心12000 rpm，5min。

8.小心倒掉上清液，將離心管倒置于吸水紙上，將附于管壁的殘余液滴除掉，室溫干燥。

9.加200ul TE重新溶解沉淀物，然后置于4℃或?C20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

10.吸取適量樣品于GeneQuant上檢測濃度和純度。

四、常見問題

1.選擇的實(shí)驗(yàn)材料要新鮮，處理時間不易過長。

2.在加入細(xì)胞裂解緩沖液前，細(xì)胞必須均勻分散，以減少

3.提取的DNA不易溶解：不純，含雜質(zhì)較多；加溶解液太少使?jié)舛冗^大。沉淀物太干燥，也將使溶解變得很困難。

4.電泳檢測時DNA成涂布狀：操作不慎；污染核酸酶等。

5.分光光度分析DNA應(yīng)加入SDS至終濃度為

6.酚/氯仿/異戊醇抽提后，其上清液太黏不易吸取：含高濃度的的量或減少所取組織的量。

A280/A2600.5%，并重復(fù)步驟 DNA團(tuán)塊形成。1.8；不純，含有蛋白質(zhì)等雜質(zhì)。在這種情況下，2～8。DNA，可加大抽提前緩沖液29

的小于

實(shí)驗(yàn)七

DNA的定量

一、實(shí)驗(yàn)原理

核酸分子（DNA或RNA）由于含有嘌吟環(huán)和嘧啶環(huán)的共軛雙鍵，在260 nm的紫外吸收峰，其吸收強(qiáng)度與核酸的濃度成正比，這個物理特性為測定核酸溶液濃度提供了基礎(chǔ)。OD260相當(dāng)于dsDNA 50 ug/ml，ssDNA 33 ug/ml和ssRNA 40 ug/ml。可以此來計算核酸樣品的濃度。

紫外分光光度法不但能確定核酸的濃度，還可通過測定260nm和280nm的紫外線吸收值的比值（A260/A280）估計核酸的純度，純的DNA制品的比值為1.8，RNA的比值為DNA高于1.8,則可能有RNA污染，低于1.8則有蛋白質(zhì)污染。

對于很稀的核酸溶液，可用熒光光度法進(jìn)行測定。DNA 本身并不產(chǎn)生熒光，但在熒光染料溴化乙錠（EB）插入DNA 的堿基對平面之間并與之結(jié)合后，DNA樣品能在紫外光的激發(fā)下產(chǎn)生桔紅色熒光。熒光強(qiáng)度與被結(jié)合的EB的量成正比，而被結(jié)合的EB的量又與核酸分子長度和含量成正比，使用一系列已知的不同濃度DNA溶液作標(biāo)準(zhǔn)對照，可比較出被測DNA溶液的濃度。靈敏度可達(dá)1～5ng。由于是基于目測，所以是估計水平。簡便，但準(zhǔn)確性較低。

二、儀器及試劑

1.儀器：Amersham

GeneQantTM Pro 紫外可見分光光度儀，瓊脂糖凝膠電泳設(shè)備。

2.試劑及配制：

5×上樣緩沖液：

配制10 ml

2.0, 波長處有特異若 該方法經(jīng)濟(jì)

0.5 mol/L EDTA(pH8.0)

ml

10% SDS

ul

50% 甘油

2.5 ml

0.2% 溴酚藍(lán)

mg

0.2% 二甲苯青FF

mg

加去離子水至10 ml

其它試劑：0.1×TE、DNA標(biāo)準(zhǔn)液，EB儲存液（10 mg/ml），三、實(shí)驗(yàn)步驟

1.紫外分光光度法

（1）用0.1×TE對待測DNA樣品按1:20或合適的倍數(shù)稀釋。

（2）開機(jī)，儀器會自動對光路及分析軟件進(jìn)行檢測，待顯示屏上出現(xiàn)“instrument Ready”時，進(jìn)入核酸測定窗口

（3）調(diào)零。先用0.1×TE緩沖液注入樣品杯，放入樣品槽，關(guān)閉蓋板。點(diǎn)擊“set ref”鍵，儀器自動校正零點(diǎn)。將樣品槽內(nèi)的樣品杯取出，換上待測樣品。

（4）吸70 ul已稀釋的DNA樣品轉(zhuǎn)入石英樣品杯，放入樣品槽，關(guān)閉蓋板。如果樣品很少，可以用5～7ul的石英樣品杯。點(diǎn)擊“enter” 鍵，儀器即進(jìn)入分析狀態(tài)。窗口同時顯示260和280nm處的光密度（OD值）及260/280nm和280/260nm的比率以及DNA樣品的濃度等。

（5）打開蓋板，取出石英樣品杯，吸出樣液，用高純水清潔石英樣品杯，風(fēng)干后，再加入下一個待測樣品。

（6）DNA純度：以O(shè)D260/ OD280比值來反映。當(dāng)OD60 /OD80比值 <1.8時，說明樣品存在蛋白質(zhì)或酚等雜質(zhì)，可采用平衡酚/氯仿―異戊醇再抽提除去蛋白質(zhì)或用乙醚抽提去除殘留酚，再用無水乙醇沉淀，TE懸浮后再測定。當(dāng)OD60/OD280比值>2.0，說明樣品存在RNA污染，可以用RNA酶處理樣品去處RNA。

2.EB熒光分析法

（1）瓊脂糖凝膠的制備。

（2）樣品的準(zhǔn)備。把待測DNA樣品進(jìn)行1:2連續(xù)稀釋，并準(zhǔn)備一份DNA標(biāo)準(zhǔn)液作對照。

（3）上樣。稀釋樣品與上樣緩沖液按1:5混合均勻后上樣。

（4）電泳。用100V穩(wěn)壓電泳至溴酚藍(lán)指示劑遷移到凝膠的3/4處停止電泳。

（5）取出凝膠，入EB熒光染液中作用20min，取出后清水漂洗干凈，然后紫外檢測。肉眼可見到的最高稀釋度約含DNA 80ng。此法也可用于了解核酸樣品中的嚴(yán)重污染干擾核酸紫外線吸收物質(zhì)的情況。

四、常見問題

1． 紫外分光光度法不能區(qū)分三種構(gòu)型，也不能區(qū)分染色體染色體DNA、以及偏高。

2．OD320值是背景，若溶液鹽濃度越高，3．的光面以避免干擾測定。

DNADNA和DNA解鏈的增色效應(yīng)等因素的影響，因此測得的數(shù)據(jù)往往比實(shí)際濃度 RNA等。由于測定吸收光度OD320也越高。要小心不要摔破，32

DNA分子的超螺旋、開環(huán)、線狀A(yù)260時，難以排除 持杯時也不要接觸透明RNA、分子的構(gòu)型，如質(zhì)粒測樣品時使用的石英樣品杯比較貴，實(shí)驗(yàn)八

PCR基因擴(kuò)增

一、實(shí)驗(yàn)原理

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reaction，PCR）是一種體外核酸擴(kuò)增系統(tǒng)，其原理類似DNA分子的天然復(fù)制過程，是將在待擴(kuò)增的DNA片段和與其兩側(cè)互補(bǔ)的兩個寡聚核苷酸引物，經(jīng)變性、退火和延伸若干個循環(huán)后，生物學(xué)中一種有助于DNA克隆及基因分析的必需工具。

PCR的工作程序?qū)嶋H上是一個在模板種脫氧核苷酸等存在的情況下，DNA聚合酶依賴的酶促合成反應(yīng)。擴(kuò)增的特異性取決于引物與模板DNA的結(jié)合。整個擴(kuò)增過程分三步：①變性，加熱使模板裂而形成兩條單鏈；②退火，突然降低溫度后模板存在兩條模板鏈之間的結(jié)合，但由于引物的高濃度、物與模板之間；③延伸，在DNA聚合酶及鎂離子等的存在條件下，從引物的結(jié)合單核苷酸，形成與模板鏈互補(bǔ)的新的循環(huán)，樣本中的DNA量就增加一倍，新形成的40個循環(huán)后，DNA 可擴(kuò)增106～109倍。

二、儀器及試劑

1.儀器：PCR儀、臺式離心機(jī)、移液器及吸頭、2.試劑：

10X PCR 緩沖液配制（部分隨Taq

250～500 mmol/L

100～500 mmol/L

15～20 mmol/L

0.5%

1mg/L

其它試劑：模板DNA、dNTP 混合液、凝膠、等

DNA擴(kuò)增 DNA、一對已知序列的寡核苷酸引物和四DNA引物按堿基配對原則互補(bǔ)結(jié)合，也結(jié)構(gòu)簡單等特點(diǎn)，DNA鏈。完成以上三步為一個循環(huán)，每經(jīng)過一個DNA鏈又成為下一輪循環(huán)的模板。現(xiàn)用圖示說明PCRPCR薄壁管、電泳儀等： KCl Tris-Cl（pH8.4）

MgCl2

Tween-20

BSA Taq聚合酶、上游和下游寡核苷酸引物、瓊脂糖33

2n 倍。該技術(shù)已成為分子DNA主要的結(jié)合發(fā)生在引: 3 ′端開始，經(jīng)過25～ 雙鏈間的氫鍵斷 原理酶提供）

三、操作步驟

1.PCR 體系（40ul）：

4ul

10XPCR 緩沖液

4ul

25mM MgCl2（根據(jù)不同公司PCR 緩沖液的不同而定）

Xul

模板DNA ≥50ng

1ul

上游引物（50-100ng）

1ul

下游引物（50-100ng）

1ul

dNTP Mixture（終濃度

0.4 ul

Taq聚合酶

加ddH2O至40ul

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2.將上述試劑依次加入PCR薄壁管。加樣后用手輕彈混勻，使反應(yīng)成分集于管底。

3.PCR反應(yīng)熱循環(huán)程序設(shè)置：

（1）95℃

300s

變性

（2）94℃

45s

變性

（3）55℃

45s

退火（根據(jù)不同引物可能有不同退火溫度）

（4）72℃

45s

延伸（每分鐘可延伸

重復(fù)步驟2-4共 30 循環(huán)

（5）72℃

600s

延伸

反應(yīng)結(jié)束后短暫離心，吸取少量（10ul）進(jìn)行分析，其余置

4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

4.瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產(chǎn)物。

20－200uM）1kp）6000 rpm 15 sec

離心

四、注意事項：

1.PCR 體系所加成分的實(shí)際用量應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)者選用的該成分的終濃度及所擁有的貯備液濃度進(jìn)行核算。

2.加樣時要認(rèn)真,吸頭垂直進(jìn)入試劑管，每加完一樣要換一個吸頭，同時在已加的樣品前做個記號以防止錯加或漏加，避免污染。

3.Taq聚合酶（置于冰盒上）應(yīng)最后加入，盡量減少室溫接觸機(jī)會。加酶時吸頭深入不可過深，酶量不能過多。

五、影響PCR的主要因素

1.模板DNA

單鏈、雙鏈DNA白水解酶等的污染。模板用量依具體實(shí)驗(yàn)而定，PCR反應(yīng)時模板變性要充分。

2.PCR引物

PCR引物設(shè)計是否成功是能否獲得高質(zhì)量應(yīng)用時，需注意以下重要環(huán)節(jié)：

（1）PCR引物的長度約為以使它們在相近的溫度下與其互補(bǔ)序列結(jié)合。隨機(jī)的，應(yīng)避免連續(xù)出現(xiàn)4個以上的單一堿基，否則會使引物在G+C富集序列區(qū)錯誤引發(fā)。引物免選用T ,尤其應(yīng)避免連續(xù)出現(xiàn)

（2）一般來說，PCR引物長度選擇24bp左右為宜。

（3）要避免引物分子自身序列互補(bǔ)，否則會形成發(fā)夾樣二級結(jié)構(gòu)。兩個互之間的3，末端序列不能有明顯的互補(bǔ)性，以免形成引物二聚體。

（4）引物的熔點(diǎn)溫度（引物的GC/AT應(yīng)與要擴(kuò)增的模板

（5）引物的3，末端必須與模板嚴(yán)格互補(bǔ)，而

（6）目前在引物選擇中已廣泛應(yīng)用計算機(jī)軟件，從基因序列，并對設(shè)計的引物在引物二聚體形成、自身互補(bǔ)性及特異性等方面進(jìn)行分析評價。PCR

18～30個核苷酸，并且成對引物間的2個以上T500bp時，引物長度選擇 Tm值）要適當(dāng)。DNA相當(dāng)或略高些。一般熔點(diǎn)溫度以大于DNA樣品盡量純凈，不能有核酸酶、蛋一般為100ul反應(yīng)液有105-106個目標(biāo)分子。PCR產(chǎn)物最關(guān)鍵的因素之一。在設(shè)計和G＋C含量應(yīng)相似。G+C含量應(yīng)為45%～55%之間。堿基分布是尤其是不應(yīng)在其3，端出現(xiàn)3個連續(xù)G或C，3，端堿基最好選用A、G、C,盡可能地避16-18bp；PCR產(chǎn)物≥5kb時，PCR引物相 Tm值與引物的堿基組成和長度有關(guān)；PCR55℃為宜。5，末端的要求可靈活些。EMBL或Genebank中查找有關(guān)

均可作為的模板。產(chǎn)物≤

（7）用于亞克隆的引物，常在引物的5，端加上限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)。為了保證內(nèi)切酶有效酶切擴(kuò)增產(chǎn)物，一般在酶切位點(diǎn)的5，端再加上幾個額外的堿基。

（8）引物的濃度，在終濃度為0.2～1.0 umol/L的范圍內(nèi)產(chǎn)量基本相同，低于0.2 umol/L時會影響產(chǎn)量。但過高時一乃不經(jīng)濟(jì)，二則會出現(xiàn)非特異擴(kuò)增及增加引物二聚體的產(chǎn)生。

3.熱穩(wěn)定DNA聚合酶（如Taq DNA聚合酶）

一般用量為2.5 U/100uL 反應(yīng)體積。酶量過多易導(dǎo)致非特異性產(chǎn)物的產(chǎn)生。適溫度為75℃，在低溫下仍保留相當(dāng)高的活性，易引起不完全配對的引物伸及引物二聚體的擴(kuò)增延伸，所以應(yīng)注意防止非特異性產(chǎn)物的出現(xiàn)。

4.dNTPs

PCR常用的dNTP濃度在50-200umol/L。四種

低則反應(yīng)速度下降，過高則特異性下降，可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)來確定最適的

5.PCR緩沖液

因PCR反應(yīng)中的dNTP能與Mg2+結(jié)合，影響反應(yīng)液中游離應(yīng)按不同條件，確定合適的Mg2+濃度。一般在標(biāo)準(zhǔn)的Mg2+濃度約為1.5mmol/L。Mg2+離子濃度可顯著影響出現(xiàn)非特異擴(kuò)增，過低則酶活性顯著下降。應(yīng)用無核酸酶的及5mmol的二硫蘇糖醇（DTT）對酶有一定的保護(hù)作用。

6.PCR循環(huán)的溫度

預(yù)變性：起始變性的時間應(yīng)該長些，以使變性充分。一般為不完全時，DNA雙鏈會很快復(fù)性，影響PCR反應(yīng)，但若變性溫度太高（不宜超過會影響Taq酶的活性。

變性：一般為94℃ 30s或95℃ 20s。

引物退火：應(yīng)根據(jù)具體反應(yīng)中引物與模板的堿基配對情況及實(shí)驗(yàn)的目的確定。一般為50-72℃。退火溫度增高會增強(qiáng)對不正確退火引物的識別，還能降低引物酸的錯誤延伸。

延伸：一般為72℃ 60-90s。最后一個循環(huán)后應(yīng)在物合成的完整性。

7．平臺效應(yīng)和PCR循環(huán)的次數(shù)

dNTPsPCR反應(yīng)中（PCR的產(chǎn)量及產(chǎn)物特異性。BSA 72℃保留該類酶的最-模板的非特異延

dNTP濃度。Mg2+的濃度，所以dNTP濃度200umol/L），濃度高則Tween-20(0.05%～0.1%)94℃ 3-5min。變性95℃），3，端不正確核苷5min，以保證PCR產(chǎn)應(yīng)等當(dāng)量。濃度、在PCR基因擴(kuò)增的后期，由于產(chǎn)物的堆積，將使原來產(chǎn)物以指數(shù)增加的速度變?yōu)槠教骨€，即所謂平臺效應(yīng)。它的出現(xiàn)是由于PCR原料的不斷消耗、酶的穩(wěn)定性的降低、終產(chǎn)物的阻滯效應(yīng)及非特異性產(chǎn)物等多種因素造成的，所以選擇合理的循環(huán)次數(shù)，既能得到足夠量的PCR產(chǎn)物，又不要無意義地增加循環(huán)次數(shù)。

8.操作環(huán)境

避免環(huán)境污染和交叉污染，如核酸酶的污染、非目標(biāo)DNA的污染等。

實(shí)驗(yàn)九 瓊脂糖凝電泳分離與純化目的一、實(shí)驗(yàn)原理

不同大小的片段分離位于不同的位置，的片段。有許多型號的低熔點(diǎn)瓊脂糖可在雙鏈DNA的解鏈溫度高于收DNA片段。該法的優(yōu)點(diǎn)是可直接在熔化的凝膠中進(jìn)行各種酶反應(yīng)，如合成同位素探針、進(jìn)行限制酶切割和連接反應(yīng)等。

二、儀器及試劑：

1.儀器

電泳儀、凝膠成像系統(tǒng)、移液器、離心管、吸頭等。

2.試劑：

低熔點(diǎn)瓊脂糖、待純化的

三、操作步驟：

1.配制1％的瓊脂糖凝膠，在適當(dāng)?shù)奈恢们幸粭l與加樣槽平行的槽，換低熔點(diǎn)瓊脂糖凝膠。

2.加樣，100V

DNA DNA酶切片段是基因工程中常用的手段。在電泳過程中切下目的片段并采用低熔點(diǎn)瓊脂糖回收法即可獲得目65℃時熔化成液體，在65℃，所以可以熔化凝膠而 DNA、凝膠回收試劑盒、去離子水或38

30℃時凝固成凝膠。由于DNA并不變性，在凝膠成液態(tài)時回TE（pH7.6）

分離和純化。

電泳，觀察所需片段是否移至低熔點(diǎn)膠內(nèi)。3.在紫外燈下切含有DNA的低熔點(diǎn)膠，置1.5 ml離心管中，于70℃熱水中熔化。

4.按凝膠回收試劑盒說明書操作。

12.取適量純化好的目的DNA在 GeneQuant 中檢測，確定純度和濃度，其余樣品于-20℃保存。

四、注意事項：

1.配凝膠的三角瓶、電泳槽和配膠板要先沖洗干凈

實(shí)驗(yàn)十

DNA重組

一、實(shí)驗(yàn)原理

外源DNA與載體分子的連接就是DNA重組，這種重新組合的DNA在體外的連接重組是基因工程操作的核心技術(shù)之一，其本質(zhì)是一個酶促反應(yīng)過程。即在一定的條件下，DNA連接酶催化兩個雙鏈DNA用，形成磷酸二酯鍵的過程。常用的DNA連接酶有兩種：菌DNA連接酶。其中T4噬菌體DNA連接酶對底物的要求低，能更有效地連接末端，應(yīng)用更廣泛。

T4噬菌體DNA連接酶催化DNA連接反應(yīng)分連接酶通過ATP的磷酸與連接酶的賴氨酸的氨基形成酶―隨后從賴氨酸殘基轉(zhuǎn)移到DNA一條鏈的51端的磷酸基團(tuán)上，形成磷酸―磷酸鍵。③鏈31端的羥基被活化，取代ATP后與DNA51端的磷酸根形成磷酸二酯鍵，完成DNA之間的連接。T4噬菌體DNA連接酶需要鎂離子和溫度和pH條件下進(jìn)行連接反應(yīng)。

二、儀器及試劑：

1.儀器：

臺式離心機(jī)、移液器、吸頭、恒溫水浴鍋等。

2.試劑：

T4 DNA連接酶、10×T4 DNA連接酶緩沖液、載體

三、操作步驟

1.外源DNA片段和載體DNA的連接

DNA51端磷酸和31端羥基之間相互作T4噬菌體DNA連接酶和大腸桿3步：①首先，ATP與T4ATP復(fù)合物。②被激活的并釋放出ATP作為輔助因子，DNA、外源DNA。DNA的平DNAAMPDNAAMP，在一定的 叫做重組子。片段的噬菌體

取1只無菌Ep管、用微量進(jìn)樣器按下列順序加入各成分。

10×T4 DNA Ligase Buffer

2.5 ul

酶切后的DNA片段

*1

約0.3 pmol

酶切后的載體DNA *2

約0.03pmol

T4 DNA Ligase

ddH2O

*1 DNA片段的摩爾數(shù)應(yīng)控制在載體

*2 相同末端的載體與DNA自身環(huán)化。

2.蓋好蓋子，用手指輕彈Ep

3.將反應(yīng)管放入16℃過夜反應(yīng)（4.取出約25ng的DNA連接液進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，片段和酶切DNA片段作電泳。

5.用0.1×TE將連接混合物稀釋至

四、注意事項

1.連接產(chǎn)物經(jīng)鑒定后應(yīng)迅速做轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)。

2.根據(jù)具體情況調(diào)節(jié)酶的用量。平端連接或接頭連接都比黏端連接慢得多，而且酶的用量也增大。

3.單價陽離子或低濃度的聚乙二醇可提高平端連接的效率。

4.防止載體DNA自身環(huán)化，常用堿性磷酸酶處理線性載體，去掉載體的DNA片段的自身環(huán)化。

5.正確調(diào)整載體DNA和外源

五、相關(guān)問題

1.連接反應(yīng)的影響因素

1ul

加至 25ul DNA摩爾數(shù)的3－12～16h）。鑒定連接結(jié)果，50ul，使用10～20ul DNA之間的比例有助于獲得高產(chǎn)量的重組產(chǎn)物。40

10倍。2s 以集中溶液。以未經(jīng)連接的質(zhì)粒 51?CDNA

片段進(jìn)行連接時，應(yīng)首先將載體進(jìn)行去磷酸化處理，以防止其管數(shù)次，并于臺式離心機(jī)離心轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞。磷酸以抑制

除了載體、供體的濃度及其比例等因素外，影響連接反應(yīng)的因素還有很多，如緩沖液組分、連接溫度與時間、酶濃度、DNA濃度及片段末端的堿基序列等。

（1）連接緩沖液的影響

不同的公司提供的連接緩沖液可能有所不同，但大體上都含有以下組分：20-100mmol/L的Tris-HCl，較多用50mmol/L，pH的范圍在7.4-7.8，較多用7.8，目的是提供合適酸堿度的連接體系；10mmol/L的MgCl2，作用是激活酶反應(yīng)；1-20mmol/L的DTT，較多用10mmol/L，作用是維持還原性環(huán)境，穩(wěn)定酶活性，25-50ug/ml的BSA，作用是增加蛋白質(zhì)的濃度，防止因蛋白濃度過稀而造成酶的失活。與限制酶緩沖液不同的是連接酶緩沖液還含有0.5-4mmol/L的ATP，現(xiàn)多用1mmol/L，是酶反應(yīng)所必需的。

（2）pH的影響

一般將緩沖液的pH調(diào)節(jié)到7.4-7.8，較多用7.8。有實(shí)驗(yàn)表明，若把pH為7.5-8.0時的酶活力定為100%，那么體系偏堿（pH為8.3）時僅為全部活力的65%；當(dāng)體系偏酸（PH為6.9）時僅為全部活力的40%。

（3）ATP濃度的影響

連接緩沖液中ATP的濃度在0.5-4mmol/L之間，較多用1mmol/L。研究發(fā)現(xiàn)，ATP的最適濃度為0.5-1mmol/L，過濃會抑制反應(yīng)。例如，5mmol/L的ATP會完全抑制平末端連接，黏端的連接也有10%被抑制；還有報道，當(dāng)ATP的濃度為0.1mmol/L時，去磷酸載體的自環(huán)比例最大。由于ATP極易分解，所以當(dāng)連接反應(yīng)失敗時，除了DNA與酶的問題外，還應(yīng)考慮ATP的因素。含有ATP的緩沖液應(yīng)于-20℃保存，溶化取用后立即放回。連接緩沖液體積較大時最好分小管貯存，防止反復(fù)凍融引起ATP分解。與限制酶緩沖液不同的是，含ATP的連接緩沖液長期放置后往往失效，所以也可自行配制不含ATP的緩沖液（可長期保存），臨用時加入新配制的ATP母液。

（4）連接溫度與時間的影響

因?yàn)轲ば阅┒说腄NA雙鏈間有氫鍵的作用，所以溫度過高會使氫鍵不穩(wěn)定，但連接酶的最適溫度又恰為37℃。為了解決這一矛盾，在經(jīng)過綜合考慮后，傳統(tǒng)上將連接溫度定為16℃，時間為4-16h。現(xiàn)經(jīng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，對于一般的黏性末端來說，20℃ 30min就足以取得相當(dāng)好的連接效果，當(dāng)然如果時間充裕的話，20℃ 60min能使連接反應(yīng)進(jìn)行得更完全一些。對于平末端是不用考慮氫鍵問題的，可使用較高的溫度，使酶活力得到更好的發(fā)揮。

（5）酶濃度的影響

根據(jù)New England Biolabs公司對T4 DNA連接酶的定義，1U的酶可在16℃ 30min內(nèi)連接20ul體系中Hind Ⅲ酶切片段（黏性末端為0.12umol/L 5,末端，此時DNA質(zhì)量濃度約為300ng/ul）的50%。日常使用的DNA濃度比酶單位定義狀態(tài)低10-20倍，連接平末端時酶用量要比連接黏端大10-100倍，廠商為了滿足這一要求，又往往提供高濃度的酶（幾百個 41 單位/ul），所以進(jìn)行黏末端連接時需先行稀釋。除了立即用于反應(yīng)的部分可用酶反應(yīng)緩沖液稀釋外，其余都應(yīng)使用廠商提供的稀釋液。稀釋液的成分與酶保存緩沖液相同或類似，稀釋液中的酶能在長時間保持活力，也便于隨時取用。

（6）DNA濃度的影響

盡管有的實(shí)驗(yàn)手冊上推薦使用0.1-1nmol/L的DNA濃度，但考慮到用質(zhì)粒作為載體克隆時，最后要求得到環(huán)化的有效連接產(chǎn)物，所以DNA濃度不可過高，一般不會超過20nmol/L。相比較而言，以噬菌體、cosmid質(zhì)粒為載體的克隆過程最后要求線性化的連接產(chǎn)物，所以，DNA的濃度可以高些，至少是接近推薦的濃度。此外，在用大質(zhì)粒載體進(jìn)行大片段克隆時，以及在雙酶切片段的連接反應(yīng)中，DNA濃度還應(yīng)降低，甚至是DNA的總濃度低至幾個nmol/L。另據(jù)研究，T4 DNA連接酶對DNA末端的表觀Km值為1.5nmol/L，所以，連接時DNA濃度不應(yīng)低于1nmol/L。即應(yīng)具有2nmol/L的末端濃度。

2.三種連接酶單位定義

（1）Weiss單位

連接酶單位最早是1968年由Weiss提出的Weiss單位，現(xiàn)也稱PPi單位。他的單位定義為：37℃ 20min內(nèi)將1nmol的32P從焦磷酸根上置換到ATP分子上所需的酶量。現(xiàn)在大多數(shù)廠商仍使用這種單位。

（2）d（A-T）環(huán)化單位

由于Weiss單位定義中測試的是T4 DNA連接酶中除連接功能外的另一種磷交換功能，并且測試溫度高達(dá)30℃，與實(shí)際連接反應(yīng)相比無論在哪一方面都有一定的差距，于是，1970年Modrich與Lehman提出了真正度量連接功能的d(A-T)環(huán)化單位，又稱外切酶抗性檢測。d（A-T）環(huán)化單位的定義為：30℃ 30min 內(nèi)將100nmol/L的d（A-T）（約2kb長）轉(zhuǎn)化成抗外切酶的形式。

（3）黏性末端單位

與Weiss單位相比，d（A-T）環(huán)化單位更接近實(shí)際，但仍有一定的問題，例如，環(huán)化單位測試中用的是純AT片段，與實(shí)際連接中4種堿基隨機(jī)排列不符；再說，如果連接酶將片段連接成多聚體而末環(huán)化時，仍可能被外切酶組所切；除此之外，與實(shí)際上大多數(shù)連接反應(yīng)使用的溫度16℃相比，30℃仍顯得偏高。為了衡量實(shí)際連接條件下的酶活力，New England Biolabs公司提出了最實(shí)用的黏性末端單位，它的單位定義為：16℃ 30min內(nèi)將5,末端濃度為0.12umol/Lλ-HindⅢ 酶切片段的50%連接上。

實(shí)驗(yàn)十一 動物組織細(xì)胞總RNA的提取

一、實(shí)驗(yàn)原理

RNA是基因表達(dá)的中間產(chǎn)物，存在于細(xì)胞質(zhì)與核中。對中占有重要地位。獲得高純度和完整的RNA 是很多分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)所必需的，如雜交、cDNA合成及體外翻譯等實(shí)驗(yàn)的成敗，在很大程度上取決于內(nèi)的大部分RNA是以核蛋白復(fù)合體的形式存在，所以在提取質(zhì)變性劑，迅速破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，使核蛋白與RNA分離，釋放出機(jī)溶劑處理、離心，使RNA與其他細(xì)胞組分分離，得到純化的總抑制內(nèi)源和外源的RNase活性，保護(hù)RNA分子不被降解。中進(jìn)行。可使用RNase抑制劑，如DEPC是RNase的強(qiáng)抑制劑，常用來抑制外源性。提取緩沖液中一般含SDS、酚、氯仿、胍鹽等蛋白質(zhì)變性劑，也能抑制并有助于除去非核酸成分。

本實(shí)驗(yàn)介紹異硫氰酸胍法和TRIzol法提取動物組織總

二、儀器和試劑

1.儀器：

超凈工作臺、高速冷凍離心機(jī)、電泳儀、紫外分光光度計、吸頭、Ep管、玻璃勻漿器、試管、玻璃器皿洗凈后置180℃烘烤8h；不耐高溫的器皿（如塑料制品）應(yīng)用2h,70～80℃烘烤干燥，120℃高壓20min，再70～80

2.試劑：

(1)細(xì)胞裂解液：

異硫氰酸胍

4mol/L

檸檬酸鈉（pH7.0）

25mmol/L

十二烷基肌氨酸鈉

0.5%

RNA進(jìn)行操作在分子生物學(xué)NorthernRNA的質(zhì)量。由于細(xì)胞RNA時要利用高濃度的蛋白RNA。再通過酚、氯仿等有RNA。在提取的過程中要RNase的環(huán)境RNase活RNase活性。RNA并通過電泳 進(jìn)行鑒定。振蕩器、移液器、0.1% DEPC浸泡 因此提取必須在無凝膠成像系統(tǒng)、℃烘烤干燥方可使用。

β-巰基乙醇

0.1mol/L

稱取檸檬酸鈉0.64g，十二烷基肌氨酸鈉0.415g，吸取β-巰基乙醇0.7ml，用無Rnase的蒸餾水溶解，定容至50ml。然后取以上配制的溶液(CBS液)33ml，異硫氰酸胍 25g,混合，完全溶解后4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

(2)10×凝膠緩沖液：

嗎啉代丙璜酸（MOPS）（pH7.0）

200mmol/L

NaAc

EDTA(pH 8.0)

過濾除菌后避光保存。

（3）5×變性上樣緩沖液：

水飽和的溴酚藍(lán)

500mmol/LEDTA(pH 8.0)

甲醛（37%）

甘油

甲酰胺

10×凝膠緩沖液

加無RNase水至10ml，4℃可保存

（4）TRIzol RNA抽提試劑

（5）2mol醋酸鈉

（6）0.1% DEPC

(7)平衡酚：氯仿：異戊醇（（8）平衡酚、氯仿

（9）無水乙醇、70%乙醇、異丙醇

100mmol/L

10mmol/L

16μl

80μl

720μl

2ml

3084μl

4ml 3個月。25：24：1）

(10)無RNase水

三、操作步驟

（一）異硫氰酸胍法（PLT）

1.取新鮮動物組織0.1～0.2g置于組織勻漿器中，加入預(yù)冷的細(xì)胞裂解液1ml,在冰浴中迅速勻漿15～30s，以充分研碎組織。然后將細(xì)胞懸浮液吸入另一試管中。

2.加入2mol醋酸鈉（pH4.0）120μl，充分混勻。

3.加入1.2ml酚：氯仿：異戊醇，充分混勻搖振10s，冰浴15min。

4.將混合物轉(zhuǎn)移至1.5ml Ep管中，4℃，離心10 000r/min,20min.5.移取上層水相至另一Ep管中，加入等體積的異丙醇，靜置?C20℃，30min沉淀RNA.6.4℃，離心12 000r/min，15min.7.棄上清液，加入70%乙醇400μl,洗滌RNA沉淀物；如果RNA沉淀物被懸浮，則4℃離心10 000r/min，10min。

8.棄上清液，自然干燥，但應(yīng)避免沉淀完全干燥，否則RNA難以溶解。

9.加入100μl無RNase水重懸RNA，或加1ml無水乙醇和1/10體積3mol醋酸鈉（pH4.0），?C70℃保存。

（二）TRIzol試劑提取RNA

1.取新鮮動物組織0.1～0.2g置于組織勻漿器中，加入預(yù)冷的Trizol液 1ml 于玻璃勻漿器中，在冰浴中迅速勻漿15～30s，以充分研碎組織。然后將細(xì)胞懸浮液吸入另一1.5ml Ep管中，于室溫下靜置5min。

2.加入200μl氯仿，劇烈振搖15s混勻后，室溫靜置3min。

3.4℃，10 000r/min離心15min，RNA分布于水相中。

4.將上層無色水相轉(zhuǎn)移到另一Ep管中，加入500μl 異丙醇，室溫靜置10min。

5.4℃，10 000r/min離心10min。

6.棄上清液，用1ml 75%乙醇洗滌RNA沉淀物，4℃，7500r/min離心5min。

7.棄上清液，室溫干燥15min.45

8.向干燥過的沉淀物中加入200μl DEPC處理水（無核水）溶解沉淀物，于-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

（三）RNA檢測

1.在紫外分光光度計上檢測RNA濃度及純度。

方法同實(shí)驗(yàn)四，用DEPC處理水校正零點(diǎn)；用DEPC處理水稀釋RNA樣品；讀取OD260、OD280值及OD260/OD280的比值。

2.瓊脂糖凝膠甲醛變性電泳檢測

（1）制備凝膠（1.2%）。稱1.2g瓊脂糖，加72ml DEPC處理水，加熱熔化。冷卻至60℃，在通風(fēng)櫥內(nèi)加入10×凝膠緩沖液10ml，甲醛（37%）18ml，混勻后，倒膠。

（2）制備樣品。在離心管中，將RNA樣品與5×變性上樣緩沖液以4：1溫育5～10min，迅速在冰上冷卻5min，離心數(shù)秒。

（3）上樣前凝膠須預(yù)電泳5min，隨后將樣品卷入上樣孔。以5V/cm的電壓電泳2h.。

（4）待溴酚藍(lán)遷移至凝膠長度的2/3～4/5處結(jié)束電泳。將凝膠置于溴化乙啶溶液μg/ml，用0.1mol/L乙酸胺配制）中染色約30min。

（5）在凝膠成像系統(tǒng)觀察并分析。

四、注意事項

1.RNA是極易降解的核酸分子。因此提取總RNA必須在無RNase 環(huán)境中，戴口罩、手套、使用無RNase污染的試劑、材料、容器。

2.所有溶液應(yīng)加DEPC至0.05%～0.1%，室溫處理過夜，然后高壓處理或加熱至小時或60℃過夜，以除去石油殘留的DEPC。

3.所用的化學(xué)試劑應(yīng)為新包裝，稱量時使用干烤處理的稱量勺，所有操作均應(yīng)在冰浴中進(jìn)行，低溫條件可減低RNA酶活性。

4.根據(jù)RNA樣品的紫外吸收OD值，可計算出RNAd 濃度。

單鏈RNA [ssRNA]=40×（OD260-OD310）×稀釋倍數(shù)

純RNA OD260 / OD280比值通常在1.7～2.0。若比值低于1.7,說明有蛋白質(zhì)等污染，/氯仿在抽提。若比值低于2.0,表明有鹽、胍、糖可用LiCL選擇沉淀RNA以除去雜質(zhì)。

65℃1.5～（0.570℃ 1 應(yīng)用酚 混勻。

5.RNA樣品電泳后，可見28S、18S及5S小分子RNA條帶，則說明完整性好。若有降解可能是操作不當(dāng)或污染了RNase.。28S和18S RNA比值約為2：1,表明RNA無降解。如比值逆轉(zhuǎn)，則表明RNA降解。電泳中如果在28S 后方還有條帶，表明有DNA污染，應(yīng)用DNase處理后再進(jìn)行純化。

主要參考書：

1..金冬雁等譯.分子克隆實(shí)驗(yàn)指南.第二版.北京：科學(xué)出版社，1995

2.子穎等譯.精編分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指南

3.周俊宜編.分子生物學(xué)基本技能和策略

4.姜泊等編.分子生物學(xué)常用實(shí)驗(yàn)方法

5.劉進(jìn)元等編.分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)

.科學(xué)出版，.科學(xué)出版社.北京：人民軍醫(yī)出版社，.北京：清華大學(xué)出版社，47

1996.2002.

第三篇：生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室常用儀器使用方法與保養(yǎng)

分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室常用儀器使用方法與保養(yǎng) 點(diǎn)擊次數(shù)：786 發(fā)布時間：2009-9-10 分子生物學(xué)操作中會涉及一系列儀器，使用不當(dāng)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗、減少儀器使用壽命或損壞儀器。因此在進(jìn)行操作前細(xì)致地了解各種儀器的使用方法及注意事項，是使后繼實(shí)驗(yàn)事半功倍的一個必要準(zhǔn)備。

一、冷凍離心機(jī)

低溫分離技術(shù)是分子生物學(xué)研究中必不可少的手段。基因片段的分離、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物樣品的分離制備實(shí)驗(yàn)中，都離不開低溫離心技術(shù)，因此低溫冷凍離心機(jī)已成為分子生物學(xué)研究中必需的重要工具。

使用方法：

1.離心機(jī)應(yīng)放置在水平堅固的地板或平臺上，并力求使機(jī)器處于水平位置以免離心時造成機(jī)器震動。

2.打開電源開關(guān)，按要求裝上所需的轉(zhuǎn)頭，將預(yù)先以托盤天平平衡好的樣品放置于轉(zhuǎn)頭樣品架上(離心筒須與樣品同時平衡)，關(guān)閉機(jī)蓋。

3.按功能選擇鍵，設(shè)置各項要求：溫度、速度、時間、加速度及減速度，帶電腦控制的機(jī)器還需按儲存鍵，以便記憶輸入的各項信息。

4.按啟動鍵，離心機(jī)將執(zhí)行上述參數(shù)進(jìn)行運(yùn)作，到預(yù)定時間自動關(guān)機(jī)。

5.待離心機(jī)完全停止轉(zhuǎn)動后打開機(jī)蓋，取出離心樣品，用柔軟干凈的布擦凈轉(zhuǎn)頭和機(jī)腔內(nèi)壁，待離心機(jī)腔內(nèi)溫度與室溫平衡后方可蓋上機(jī)蓋。

注意事項：

1.機(jī)體應(yīng)始終處于水平位置，外接電源系統(tǒng)的電壓要匹配，并要求有良好的接地線。

2.開機(jī)前應(yīng)檢查轉(zhuǎn)頭安裝是否牢固，機(jī)腔有無異物掉入。

3.樣品應(yīng)預(yù)先平衡，使用離心筒離心時離心筒與樣品應(yīng)同時平衡。

4.揮發(fā)性或腐蝕性液體離心時，應(yīng)使用帶蓋的離心管，并確保液體不外漏，以免腐蝕機(jī)腔或造成事故。

5.擦拭離心機(jī)腔時動作要輕，以免損壞機(jī)腔內(nèi)溫度感應(yīng)器。

6.每次操作完畢應(yīng)作好使用情況記錄，并定期對機(jī)器各項性能進(jìn)行檢修。

7.離心過程中若發(fā)現(xiàn)異常現(xiàn)象，應(yīng)立即關(guān)閉電源，報請有關(guān)技術(shù)人員檢修。

附：相對離心力與每分鐘轉(zhuǎn)速的換算

離心機(jī)的轉(zhuǎn)速，在以前實(shí)驗(yàn)資料中一般以每分鐘多少轉(zhuǎn)來表示。由于離心力不僅為轉(zhuǎn)速函數(shù)，亦為離心半徑的函數(shù)，即轉(zhuǎn)速相同時，離心半徑越長，產(chǎn)生的離心力越大。因此僅以轉(zhuǎn)速表達(dá)離心力是不夠科學(xué)的，近年來主張用相對離心力(RCF)來表示比較合理。現(xiàn)在國際資料中，已改用相對離心力來表示。

二、PCR擴(kuò)增儀

目前各公司提供的PCR儀操作方法各有不同，按其操作說明進(jìn)行操作。

值得提出的是，在使用一定時期后，樣品孔的實(shí)際溫度與儀器顯示溫度有時會有較大差異，應(yīng)當(dāng)請廠商的技術(shù)支持人員校對儀器的各項性能。

三、數(shù)字式酸度計

【一】、準(zhǔn)備工作

1.儀器應(yīng)平放在符合使用環(huán)境的工作臺上，依視覺角度支起支架。

2.pH值的定位測量法：

(一)二點(diǎn)定位法(高精度測量方法)(1)連接好電極線路，將參比電極及活化滿24h以上清潔的PH電極移入第一標(biāo)準(zhǔn)緩沖液pH1中(例pH1=4.00)，待儀器響應(yīng)穩(wěn)定后，調(diào)節(jié)定位旋鈕至儀器顯示為“0.00”；

(2)將電級系統(tǒng)從第1種標(biāo)準(zhǔn)液中取出，用去離子水沖洗干凈后以濾紙吸干電級表面水份，移入第2種標(biāo)準(zhǔn)液(例pH2=9.18)中，儀器響應(yīng)穩(wěn)定后，調(diào)節(jié)斜率旋鈕，使儀器顯示為(△pH=pH1-pH2=9.18-4.00=5.18)此后斜率旋鈕不可再動，除非更換電極系統(tǒng)；

(3)斜率調(diào)節(jié)完成后，重新調(diào)節(jié)定位旋鈕，使儀器顯示第2種標(biāo)準(zhǔn)液的實(shí)際pH值(9.18)，至此2點(diǎn)定位結(jié)束；

(4)將電極從第2種標(biāo)準(zhǔn)液中取出沖洗、吸干后移入待測溶液中，儀器響應(yīng)穩(wěn)定后顯示的數(shù)值即為待測溶液的pH值。

(二)一點(diǎn)定位法(粗略測量法)

(1)將溫度補(bǔ)償旋鈕調(diào)至溶液溫度值；

(2)向左將斜率補(bǔ)償旋鈕旋轉(zhuǎn)至頭；

(3)將電級系統(tǒng)移入標(biāo)準(zhǔn)液中(一點(diǎn)法僅用一種標(biāo)準(zhǔn)液，如pH=4.00時)，調(diào)節(jié)定位旋鈕使儀器顯示“4.00”；

(4)取出電級沖洗吸干水分后移至待測溶液中，儀器響應(yīng)穩(wěn)定后顯示的數(shù)值即為待測溶液的pH值。

(三)溫度的測量

1.將功能選擇撥至溫度檔。

2.將溫度探頭插入插孔，并將溫度探頭置于環(huán)境條件或溶液中，儀器響應(yīng)穩(wěn)定后儀器顯示值即為環(huán)境條件或溶液溫度值。

(四)注意事項

1.認(rèn)真做好儀器使用前準(zhǔn)備工作。

2.儀器通電后或測量過程中出現(xiàn)顯示不穩(wěn)或亂跳現(xiàn)象，應(yīng)切斷電源進(jìn)行檢查，如電壓、預(yù)熱時間及電極系統(tǒng)等是否正常。

3.使用不同電極應(yīng)注意排除離子的干擾，選擇好鹽橋，必要時應(yīng)使用離子強(qiáng)度固定劑。

4.電極系統(tǒng)從第1種溶液取出移入第2種溶液之前，須用去離子水或雙蒸水清洗干凈，再用濾紙吸干表面水分，以免影響測定結(jié)果的準(zhǔn)確性。

5.儀器應(yīng)存放于干燥、清潔無腐蝕的場所，每次測量結(jié)束后應(yīng)關(guān)閉電源，退出電極及溫度探頭妥善保存。玻璃電極清洗后可浸于去離子水待用(注意水面不得低于玻璃球泡)，甘汞電極清潔后套上橡皮帽置于配套盒中保存，當(dāng)甘汞電極內(nèi)充液泄漏或不飽和及鹽橋中斷時，應(yīng)及時補(bǔ)充飽和內(nèi)充液。

6.該類儀器均采用大規(guī)模集成電路，輸入阻值較高，在對儀器內(nèi)部進(jìn)行任何零部件修理焊接時，應(yīng)使用45W以下有良好地線的烙鐵，無接地線烙鐵應(yīng)撥下電源插頭焊接。【二】、pH(酸堿度)測量

1.將功能選擇撥至“pH”檔，調(diào)節(jié)定位旋扭，斜率補(bǔ)償旋鈕及溫度補(bǔ)償旋鈕顯示值應(yīng)有相應(yīng)變化。

2.通過儀器溫度檔測定標(biāo)準(zhǔn)液及待測樣品液溫度(要求兩種液體溫度保持一致，以減少測定誤差)，并用溫度補(bǔ)償旋鈕調(diào)節(jié)至溶液實(shí)際溫度值。

四、分光光度計

不同物質(zhì)對不同波長入射光的吸收程度各不相同，從而形成特征性的吸收光譜。分光光度法不僅適應(yīng)于可見光區(qū)，同時還可擴(kuò)展至紫外光區(qū)及紅外光區(qū)，因此給科研實(shí)驗(yàn)帶來了極大方便。下面重點(diǎn)介紹分光光度計的使用及注意事項。

使用規(guī)則：

1.接通穩(wěn)壓器電源，待穩(wěn)壓器輸出電壓穩(wěn)定至200V后打開光度計電源，儀器自動進(jìn)入初始化。

2.初始化約需時10 min，內(nèi)容包括：①尋找零級光；②建立基線；③最后當(dāng)顯示器指示××nm時，表明儀器完成初始化程序，可進(jìn)入檢測狀態(tài)。

3.按要求輸入各項參數(shù)，選擇相應(yīng)比色杯(玻璃或石英)，將空白管、標(biāo)準(zhǔn)管及待測管依次放入比色皿架內(nèi)，關(guān)上比色池蓋。

4.以空白管自動調(diào)零。

5.試樣槽依次移至樣品位置，待數(shù)據(jù)顯示穩(wěn)定后按“START/STOP”鍵，打印機(jī)自動打印所測數(shù)據(jù)，重復(fù)上述步驟，直到所有樣品檢測完畢。

6.檢測結(jié)束后應(yīng)及時取出比色杯，并清洗干凈放回原處，同時關(guān)上儀器電源開關(guān)及穩(wěn)壓器電源開關(guān)，做好使用情況登記。

注意事項：

1.儀器初次使用或使用較長時間(一般為一年)，需檢查波長準(zhǔn)確度，以確保檢測結(jié)果的可靠性。

2.由于長途運(yùn)輸或室內(nèi)搬運(yùn)可能造成光源位置偏移，導(dǎo)致亮電流漂移增大。此時對光源位置進(jìn)行調(diào)整，直至達(dá)到有關(guān)技術(shù)指標(biāo)為止。若經(jīng)調(diào)整校正后波長準(zhǔn)確度、暗電源漂移及亮電流漂移三項關(guān)鍵指標(biāo)仍未符合要求，則應(yīng)停止使用，并及時通知有關(guān)技術(shù)人員檢修。

3.每次檢測結(jié)束后應(yīng)檢查比色池內(nèi)有否溶液溢出，若有溢出應(yīng)隨時用濾紙吸干，以免引起測量誤差或影響儀器使用壽命。

4.儀器每次使用完畢，應(yīng)于燈室內(nèi)放置數(shù)袋硅膠(或其它干燥劑)，以免反射鏡受潮霉變或沾污，影響儀器使用，同時蓋好防塵罩。

5.儀器室應(yīng)通常保持潔凈干燥，室溫以5-35℃為宜，相對溫度不得超過85%。有條件者應(yīng)于室內(nèi)配備空調(diào)機(jī)及除濕機(jī)，以確保儀器性能穩(wěn)定。

6.儀器室不得存放酸、堿、揮發(fā)性或腐蝕性等物質(zhì)，以免損壞儀器。

7.儀器長時間不用時，應(yīng)定時通電預(yù)熱，每周1次，每次30min，以保證儀器處于良好使用狀態(tài)。

五、電泳儀

電泳技術(shù)是分子生物學(xué)研究不可缺少的重要分析手段。電泳一般分為自由界面電泳和區(qū)帶電泳兩大類，自由界面電泳不需支持物，如等電聚焦電泳、等速電泳、密度梯度電泳及顯微電泳等，這類電泳目前已很少使用。而區(qū)帶電泳則需用各種類型的物質(zhì)作為支持物，常用的支持物有濾紙、醋酸纖維薄膜、非凝膠性支持物、凝膠性支持物及硅膠-G薄層等，分子生物學(xué)領(lǐng)域中最常用的是瓊脂糖凝膠電泳。所謂電泳，是指帶電粒子在電場中的運(yùn)動，不同物質(zhì)由于所帶電荷及分子量的不同，因此在電場中運(yùn)動速度不同，根據(jù)這一特征，應(yīng)用電泳法便可以對不同物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析，或?qū)⒁欢ɑ旌衔镞M(jìn)行組份分析或單個組份提取制備，這在臨床檢驗(yàn)或?qū)嶒?yàn)研究中具有極其重要的意義。電泳儀正是基于上述原理設(shè)計制造的。下面簡單介紹其使用方法及注意事項。

使用方法：

1.首先用導(dǎo)線將電泳槽的兩個電極與電泳儀的直流輸出端聯(lián)接，注意極性不要接反。

2.電泳儀電源開關(guān)調(diào)至關(guān)的位置，電壓旋鈕轉(zhuǎn)到最小，根據(jù)工作需要選擇穩(wěn)壓穩(wěn)流方式及電壓電流范圍。

3.接通電源，緩緩旋轉(zhuǎn)電壓調(diào)節(jié)鈕直到達(dá)到的所需電壓為止，設(shè)定電泳終止時間，此時電泳即開始進(jìn)行。

4.工作完畢后，應(yīng)將各旋鈕、開關(guān)旋至零位或關(guān)閉狀態(tài)，并撥出電泳插頭。

注意事項：

1.電泳儀通電進(jìn)入工作狀態(tài)后，禁止人體接觸電極、電泳物及其它可能帶電部分，也不能到電泳槽內(nèi)取放東西，如需要應(yīng)先斷電，以免觸電。同時要求儀器必須有良好接地端，以防漏電。

2.儀器通電后，不要臨時增加或撥除輸出導(dǎo)線插頭，以防短路現(xiàn)象發(fā)生，雖然儀器內(nèi)部附設(shè)有保險絲，但短路現(xiàn)象仍有可能導(dǎo)致儀器損壞。

3.由于不同介質(zhì)支持物的電阻值不同，電泳時所通過的電流量也不同，其泳動速度及泳至終點(diǎn)所需時間也不同，故不同介質(zhì)支持物的電泳不要同時在同一電泳儀上進(jìn)行。

4.在總電流不超過儀器額定電流時(最大電流范圍)，可以多槽關(guān)聯(lián)使用，但要注意不能超載，否則容易影響儀器壽命。

5.某些特殊情況下需檢查儀器電泳輸入情況時，允許在穩(wěn)壓狀態(tài)下空載開機(jī)，但在穩(wěn)流狀態(tài)下必須先接好負(fù)載再開機(jī)，否則電壓表指針將大幅度跳動，容易造成不必要的人為機(jī)器損壞。

6.使用過程中發(fā)現(xiàn)異常現(xiàn)象，如較大噪音、放電或異常氣味，須立即切斷電源，進(jìn)行檢修，以免發(fā)生意外事故。

六、分析天平

分析天平是定量分析工作中不可缺少的重要儀器，充分了解儀器性能及熟練掌握其使用方法，是獲得可靠分析結(jié)果的保證。分析天平的種類很多，有普通分析天平、半自動/全自動加碼電光投影阻尼分析天平及電子分析天平等。下面就電子分析天平的使用方法及注意事項做一介紹。

操作方法：

1.檢查并調(diào)整天平至水平位置。

2.事先檢查電源電壓是否匹配(必要時配置穩(wěn)壓器)，按儀器要求通電預(yù)熱至所需時間。

3.預(yù)熱足夠時間后打開天平開關(guān)，天平則自動進(jìn)行靈敏度及零點(diǎn)調(diào)節(jié)。待穩(wěn)定標(biāo)志顯示后，可進(jìn)行正式稱量。

4.稱量時將潔凈稱量瓶或稱量紙置于稱盤上，關(guān)上側(cè)門，輕按一下去皮鍵，天平將自動校對零點(diǎn)，然后逐漸加入待稱物質(zhì)，直到所需重量為止。

5.被稱物質(zhì)的重量是顯示屏左下角出現(xiàn)“→”標(biāo)志時，顯示屏所顯示的實(shí)際數(shù)值。

6.稱量結(jié)束應(yīng)及時除去稱量瓶(紙)，關(guān)上側(cè)門，切斷電源，并做好使用情況登記。

注意事項：

1.天平應(yīng)放置在牢固平穩(wěn)水泥臺或木臺上，室內(nèi)要求清潔、干燥及較恒定的溫度，同時應(yīng)避免光線直接照射到天平上。

2.稱量時應(yīng)從側(cè)門取放物質(zhì)，讀數(shù)時應(yīng)關(guān)閉箱門以免空氣流動引起天平擺動。前門僅在檢修或清除殘留物質(zhì)時使用。

3.電子分析天平若長時間不使用，則應(yīng)定時通電預(yù)熱，每周一次，每次預(yù)熱2h，以確保儀器始終處于良好使用狀態(tài)。

4.天平箱內(nèi)應(yīng)放置吸潮劑(如硅膠)，當(dāng)吸潮劑吸水變色，應(yīng)立即高溫烘烤更換，以確保吸濕性能。

5.揮發(fā)性、腐蝕性、強(qiáng)酸強(qiáng)堿類物質(zhì)應(yīng)盛于帶蓋稱量瓶內(nèi)稱量，防止腐蝕天平。

6.通電前應(yīng)按工作電源要求檢查電壓是否符合要求，若電源波動太大，應(yīng)經(jīng)交流穩(wěn)壓后再送接儀器。

7.電源應(yīng)用良好接線，以消除外界干擾，使用攪拌器時，務(wù)必使攪拌器外殼與儀器接地端相連。

8.接通儀器電源，經(jīng)10min預(yù)熱后，可進(jìn)行測量工作。

第四篇：實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備管理

實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備管理辦法

第一章 總則

第一條

根據(jù)教育部《高等學(xué)校儀器設(shè)備管理辦法》（教高[2000]9號）文件精神，結(jié)合學(xué)校儀器設(shè)備管理的實(shí)際情況，制定本辦法。

第二條

本辦法所稱儀器設(shè)備是指利用財政資金購置、國家調(diào)撥、自籌、接受捐贈和自制等渠道添置，以及科研課題合同內(nèi)購買且屬于學(xué)校產(chǎn)權(quán)的實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備，其它屬于學(xué)校產(chǎn)權(quán)的儀器設(shè)備。包括：儀器設(shè)備（含軟件）、低值耐用品、易耗品。

第三條

儀器設(shè)備的管理分為技術(shù)和經(jīng)濟(jì)管理。

技術(shù)管理包括：實(shí)驗(yàn)項目方案論證與建設(shè)計劃編制；儀器設(shè)備招標(biāo)采購（包括驗(yàn)收、安裝、調(diào)試）；實(shí)驗(yàn)項目開發(fā)和技術(shù)改造；使用運(yùn)行和日常管理（如維護(hù)、維修和安全管理等）；儀器設(shè)備狀態(tài)的技術(shù)鑒定等。

經(jīng)濟(jì)管理包括：資金的籌措與合理投向；儀器設(shè)備維修和改造資金的控制使用；儀器設(shè)備有償使用和對外社會服務(wù)的管理；儀器設(shè)備的處置（如對外捐贈、出售、報廢和報損）等。

第四條

學(xué)校鼓勵和支持單位和個人利用科研和自籌經(jīng)費(fèi)購置儀器設(shè)備。第五條

儀器設(shè)備的管理，應(yīng)以滿足學(xué)校教學(xué)、科研為主，兼顧對外服務(wù)需要，努力實(shí)現(xiàn)國有資產(chǎn)的保值增值，積極挖掘設(shè)備潛力，發(fā)揮資源效能，為學(xué)校發(fā)展提供保障。

第二章 管理體制

第六條

學(xué)校儀器設(shè)備管理實(shí)行校、系（部、處、中心）、實(shí)驗(yàn)室三級管理體制。由一位校領(lǐng)導(dǎo)分管儀器設(shè)備工作，實(shí)驗(yàn)室與設(shè)備處為學(xué)校儀器設(shè)備的主管部門，負(fù)責(zé)全校儀器設(shè)備的管理。各系部有一名行政領(lǐng)導(dǎo)負(fù)責(zé)本單位實(shí)驗(yàn)室設(shè)備管理工作；各實(shí)驗(yàn)室都要有一名設(shè)備管理員，具體負(fù)責(zé)本實(shí)驗(yàn)室設(shè)備管理工作。

第七條

實(shí)驗(yàn)室與設(shè)備處對儀器設(shè)備的管理職責(zé)

（一）編制全校儀器設(shè)備購置計劃，管理設(shè)備費(fèi)使用，負(fù)責(zé)組織全校儀器設(shè)備的采購；

（二）負(fù)責(zé)全校儀器設(shè)備的帳目管理，保證儀器設(shè)備國有資產(chǎn)完整；

（三）負(fù)責(zé)組織全校儀器設(shè)備維修和技術(shù)改造工作；

（四）負(fù)責(zé)儀器設(shè)備事故統(tǒng)計和處理工作；

（五）負(fù)責(zé)組織全校儀器設(shè)備的處置工作；

（六）負(fù)責(zé)800元（含）以上儀器設(shè)備的出入庫管理；

（七）負(fù)責(zé)起草有關(guān)儀器設(shè)備管理文件，并監(jiān)督各單位的執(zhí)行。第八條

各系（部、處、中心）對儀器設(shè)備的管理職責(zé)

（一）編制本單位實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備購置計劃，參與相關(guān)儀器設(shè)備的采購，重點(diǎn)負(fù)責(zé)技術(shù)條款；

（二）負(fù)責(zé)本單位儀器設(shè)備帳目管理，保證儀器設(shè)備資產(chǎn)完整；

（三）負(fù)責(zé)組織本單位實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備使用管理及維修和技術(shù)改造工作；

（四）負(fù)責(zé)報告并協(xié)助實(shí)驗(yàn)室與設(shè)備處，查明儀器設(shè)備事故原因，并負(fù)責(zé)提出事故處理意見；

（五）協(xié)助實(shí)驗(yàn)室與設(shè)備處處置相關(guān)儀器設(shè)備；

（六）負(fù)責(zé)800元（含）以下（低值耐用品、易耗品）出入庫管理；

（七）負(fù)責(zé)制定本單位實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備現(xiàn)場使用管理文件，并監(jiān)督各實(shí)驗(yàn)室管理員執(zhí)行。

第九條

各實(shí)驗(yàn)室設(shè)備管理員對儀器設(shè)備的管理職責(zé)

（一）參與相關(guān)儀器設(shè)備的采購，重點(diǎn)負(fù)責(zé)技術(shù)條款；

（二）負(fù)責(zé)本實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備帳目管理，保證儀器設(shè)備資產(chǎn)完整；

（三）負(fù)責(zé)本實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備使用管理及維修和技術(shù)改造工作；

（四）負(fù)責(zé)本實(shí)驗(yàn)室800元（含）以下（低值耐用品、易耗品）使用管理；

（五）負(fù)責(zé)培訓(xùn)本實(shí)驗(yàn)室其他儀器設(shè)備操作人員（如教師和學(xué)生等），監(jiān)督有關(guān)儀器設(shè)備現(xiàn)場使用。

第三章

儀器設(shè)備的分類與管理

第十條

儀器設(shè)備分為一般儀器設(shè)備和專用儀器設(shè)備。

一般儀器設(shè)備是指辦公和業(yè)務(wù)用通用設(shè)備、交通工具、通訊工具、家具等。專用儀器設(shè)備是指各種具有專門性能和專門用途的設(shè)備，包括各種儀器和機(jī)械設(shè)備、醫(yī)療器械、文體設(shè)備等。

第十一條

使用期限在一年以上，一般儀器設(shè)備單臺價值在500元（含）以上，專用儀器設(shè)備單臺價值在800元（含）以上，能獨(dú)立使用的教學(xué)、科研、生產(chǎn)及行政辦公儀器設(shè)備（含軟件），由學(xué)校統(tǒng)一建賬管理。其中，單臺價值在人民幣10萬元（含）以上的儀器設(shè)備為省管貴重儀器設(shè)備。單價在人民幣40萬元（含）以上的儀器設(shè)備為教育部管貴重儀器設(shè)備。貴重儀器設(shè)備的管理執(zhí)行學(xué)校《貴重儀器設(shè)備管理細(xì)則》。

第十二條

一般儀器設(shè)備單臺價值在500元以下，專用儀器設(shè)備單臺價值在800元以下的，由使用單位統(tǒng)一建賬管理，并在實(shí)驗(yàn)室與設(shè)備處備案。管理辦法執(zhí)行學(xué)校《低值耐用品和易耗品管理辦法》。

第四章

實(shí)驗(yàn)技術(shù)研究項目立項和管理

第十三條

學(xué)校鼓勵和支持教師和實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員自制教學(xué)科研儀器設(shè)備，具體辦法執(zhí)行學(xué)校《實(shí)驗(yàn)技術(shù)研究項目管理辦法》。

第五章

儀器設(shè)備的采購

第十四條

儀器設(shè)備采購辦法執(zhí)行學(xué)校《儀器設(shè)備采購管理方法》。

第十五條

單價在5000元（含）以上的儀器設(shè)備，入庫前必須交有關(guān)技術(shù)資料（使用說明書、圖紙、裝箱單、檢測合格證等），由實(shí)驗(yàn)室與設(shè)備處統(tǒng)一存檔，使用時借閱。常用的資料可復(fù)印，交使用單位保管。

單價在5000元以下的儀器設(shè)備的有關(guān)技術(shù)資料（使用說明書、圖紙、裝箱單、檢測合格證等），由使用單位存檔。

第六章

儀器設(shè)備的使用管理

第十六條

實(shí)驗(yàn)室與設(shè)備處應(yīng)根據(jù)學(xué)校學(xué)科和專業(yè)發(fā)展需要，統(tǒng)一規(guī)劃實(shí)驗(yàn)室建設(shè)，整合資源，優(yōu)化配置，在充分進(jìn)行分析論證的基礎(chǔ)上，經(jīng)主管校長批準(zhǔn)，可以對學(xué)校儀器設(shè)備資源統(tǒng)籌調(diào)配。

第十七條

使用單位負(fù)責(zé)儀器設(shè)備的具體使用管理。主要工作包括：

（一）制定各項實(shí)驗(yàn)室及儀器設(shè)備現(xiàn)場使用管理制度，包括儀器設(shè)備安全操作規(guī)程等；建立儀器設(shè)備使用、維護(hù)和維修登記制度，并及時填寫使用手冊，存檔管理；

（二）建立和管理在用儀器設(shè)備及備（附）件的臺賬及卡片；

（三）建立儀器設(shè)備管理責(zé)任人制度，做好儀器設(shè)備及備（附）件的領(lǐng)用管理；

（四）對儀器設(shè)備定期檢查，做好維護(hù)和保養(yǎng)工作；發(fā)生故障和事故要及時報告并申請維修；

（五）落實(shí)實(shí)驗(yàn)室及儀器設(shè)備安全和環(huán)保措施；

（六）對操作人員進(jìn)行技術(shù)業(yè)務(wù)和安全培訓(xùn)及考核。第十八條

學(xué)校實(shí)驗(yàn)室實(shí)行準(zhǔn)入制度。實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員、實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)教師以及學(xué)生進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室操作設(shè)備，應(yīng)了解儀器設(shè)備工作原理，掌握儀器設(shè)備安全操作規(guī)程，嚴(yán)格規(guī)范操作。

實(shí)驗(yàn)過程中實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員要親臨現(xiàn)場。

第十九條

學(xué)校各單位之間借用儀器設(shè)備，必須填寫《儀器設(shè)備外借單》，經(jīng)實(shí)驗(yàn)室與設(shè)備處批準(zhǔn)，辦理借用手續(xù)；學(xué)校各實(shí)驗(yàn)室之間借用低值耐用品，由系部主任批準(zhǔn)即可。

第二十條

學(xué)校儀器設(shè)備原則上不借予校外單位，以及校內(nèi)自負(fù)盈虧經(jīng)營單位。學(xué)校鼓勵實(shí)驗(yàn)室在完成教學(xué)、科研任務(wù)的前提下，開展對外服務(wù)工作，為地方經(jīng)濟(jì)建設(shè)和社會發(fā)展服務(wù)。開展對外服務(wù)必須保證國有資產(chǎn)的保值增值，執(zhí)行學(xué)校有關(guān)規(guī)定。

第七章

儀器設(shè)備的故障報告與處理

第二十一條

由于器件的老化、元件失效、零件磨損以及產(chǎn)品自身品質(zhì)缺陷致使設(shè)備在正常條件下工作時出現(xiàn)異常或不能工作視為故障。

第二十二條

故障的報告及處理程序

（一）故障發(fā)生后，操作人員應(yīng)立即停止操作，并采取應(yīng)急措施。若是一般性故障，在確實(shí)有把握的情況下，可以查明原因，排除故障，重新工作。故障及處理情況要向設(shè)備管理員報告。若是較大的故障，無法排除時，設(shè)備管理員應(yīng)立即填寫《儀器設(shè)備維修申請單》，經(jīng)單位主管領(lǐng)導(dǎo)核實(shí)情況后，在48小時內(nèi)報實(shí)驗(yàn)室與設(shè)備處申請維修。

（二）不論設(shè)備故障大小，設(shè)備管理員都要如實(shí)填寫使用手冊。

第八章 儀器設(shè)備的事故報告與處理

第二十三條

由于違章操作、工作環(huán)境不達(dá)標(biāo)（電參數(shù)不符、潮濕、粉塵度高等）、跌落、撞擊、丟失等人為原因造成的設(shè)備損壞或功能消失應(yīng)視為設(shè)備事故。

第二十四條

事故的報告及處理程序

（一）事故發(fā)生后，操作人員應(yīng)立即停止操作，采取應(yīng)急措施，避免事故擴(kuò)大，保護(hù)現(xiàn)場，并立即向單位主管領(lǐng)導(dǎo)和實(shí)驗(yàn)室與設(shè)備處報告。不得緩報和瞞報。設(shè)備管理員要如實(shí)填寫使用手冊。

（二）對事故的處理，要堅持“三不放過”的原則：不查清事故原因不放過，責(zé)任者及群眾未受教育不放過，沒有整改措施不放過。

（三）實(shí)驗(yàn)室與設(shè)備處應(yīng)立即派人去現(xiàn)場了解情況，并組織專業(yè)技術(shù)人員分析事故原因。

（四）根據(jù)對事故的調(diào)查和分析，公正地確定主要責(zé)任者及連帶負(fù)責(zé)人，由責(zé)任單位明確提出處理意見報實(shí)驗(yàn)室與設(shè)備處，實(shí)驗(yàn)室與設(shè)備處簽署意見后報主管校長。

（五）責(zé)任單位和責(zé)任人要吸取教訓(xùn)，寫出書面分析報告，提出整改意見。責(zé)任單位要加強(qiáng)管理，積極開展安全知識培訓(xùn)，教育職工牢固樹立安全生產(chǎn)意識，掌握安全生產(chǎn)知識，養(yǎng)成安全生產(chǎn)習(xí)慣。

第二十五條

設(shè)備事故的處理

（一）對于事故責(zé)任人的處理，應(yīng)根據(jù)損失價值、造成后果和本人態(tài)度等依學(xué)校有關(guān)規(guī)定給予批評教育或行政處分。

（二）對于客觀反映事故情況并主動承擔(dān)責(zé)任的，經(jīng)濟(jì)賠償從輕處理，職工責(zé)任者賠償30%的損失價值（除本條

（四）款規(guī)定外）；學(xué)生責(zé)任者賠償10%的損失價值。

（三）對于有隱瞞不報、弄虛作假、破壞現(xiàn)場、嫁禍于人等行為者，賠償100%損失價值（含使用誤時損失費(fèi)）。

（四）對因工作需要并根據(jù)學(xué)校規(guī)定，職工個人領(lǐng)用的計算器、筆記本電腦、收錄機(jī)、照相機(jī)、萬用表等儀器設(shè)備發(fā)生丟失，賠償100%損失價值。

第九章

儀器設(shè)備的維修與處置

第二十六條

儀器設(shè)備的維修辦法執(zhí)行學(xué)校《儀器設(shè)備維修管理方法》。第二十七條

儀器設(shè)備處置辦法執(zhí)行學(xué)校《儀器設(shè)備處置管理方法》。

第十章

計算機(jī)軟件管理

第二十八條

計算機(jī)軟件的立項申請、審批、采購等參照儀器設(shè)備管理相關(guān)規(guī)定。

第二十九條

購置計算機(jī)軟件應(yīng)要求供應(yīng)商提交下列材料：

（一）軟件產(chǎn)品著作權(quán)歸屬的有效證明材料；

（二）提供包括產(chǎn)品服務(wù)期間和升級費(fèi)用等后續(xù)服務(wù)能力的說明或承諾材料。

第三十條

使用單位要保護(hù)好正版計算機(jī)軟件介質(zhì)。原版計算機(jī)軟件母盤要專門歸檔管理，通常可借用復(fù)制盤。第三十一條

使用單位應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行《計算機(jī)軟件保護(hù)條例》規(guī)定。若利用軟件從事商業(yè)性技術(shù)開發(fā)或向他人提供有償服務(wù)等，要遵守國家相關(guān)知識產(chǎn)權(quán)規(guī)定以及相關(guān)軟件買賣合同約定。否則，若造成學(xué)校喪失軟件合法版權(quán)，或給學(xué)校帶來其他損失，將追究當(dāng)事人和管理者的責(zé)任。

第十一章

附則

第三十二條

學(xué)校各單位行政辦公儀器設(shè)備的管理參照本辦法。第三十三條

學(xué)校以前有關(guān)文件與本辦法不一致的，以本辦法為準(zhǔn)。第三十四條

本辦法由實(shí)驗(yàn)室與設(shè)備處負(fù)責(zé)解釋。

第三十五條

本辦法自公布之日起施行，2003年4月14日印發(fā)《華北航天工業(yè)學(xué)院儀器設(shè)備管理辦法》（華航院字[2003]027號）同時廢止。

第五篇：實(shí)驗(yàn)室儀器操作規(guī)程

101-A型電熱鼓風(fēng)干燥箱儀器操作規(guī)程

1、技術(shù)指標(biāo)：最高工作溫度：250℃

調(diào)溫范圍：室溫~250

2、儀器使用環(huán)境要求：5℃-30℃

3、操作程序：

（1）通電前檢查絕緣電阻須≥0.5MΩ，檢查線路有無短路、斷路現(xiàn)象（2）合上閘刀開關(guān)，接通電源后，將控溫儀選擇盤設(shè)定所需溫度，使其刻度相對，開啟恒溫1和加熱2開關(guān)，控溫儀表綠燈亮，紅燈滅，爐絲通電，此時箱內(nèi)開始升溫。同時可打開鼓風(fēng)開關(guān)，使其工作。隨著爐溫上升，溫度指示針能及時顯示測量溫度值。當(dāng)達(dá)到測定值時，儀表紅燈亮，綠燈滅，切斷加熱電源，溫度逐漸下降，將之設(shè)定值時，控溫儀表又轉(zhuǎn)至綠燈亮，箱內(nèi)升溫，周而復(fù)始，可使箱內(nèi)溫度保持在設(shè)定值附近

（3）初始加熱時，由于熱慣性，盡管爐絲臆斷電，但箱內(nèi)溫度還會上升，故每次開機(jī)前最好把設(shè)定值設(shè)定在所需溫度的80％左右，待幾次開關(guān)動作后再把設(shè)定值定在所需值，既可避免開機(jī)的升溫過沖現(xiàn)象（100℃之內(nèi)沖擊值一般不超過10℃）

（4）紅綠燈交替半小時，觀察插入排氣空中溫度計指示值是否與儀表指針或顯示的溫度是否相符。此時干燥先進(jìn)入正常工作狀態(tài)

（5）恒溫時刻關(guān)閉加熱2開關(guān)，只留恒溫1一組爐絲工作，以免功率過大影響恒溫靈敏度。

（6）試驗(yàn)室不宜開啟箱門，箱內(nèi)達(dá)到高溫時開啟箱門會是玻璃驟冷而破裂（7）干燥箱連續(xù)工作時根據(jù)試品要求關(guān)閉電視，以延長電視壽命（8）試品恒溫完畢，關(guān)閉開關(guān)，同時拉下閘刀開關(guān)

4、維護(hù)與保養(yǎng)：

（1）該箱安放在室內(nèi)干燥及水平處（2）使用完畢，經(jīng)常保持清潔

（3）在供電線路中安裝閘刀開關(guān)，供此箱專用，并使箱體良好接地

5、注意事項：

（1）勿放入揮發(fā)性物品，以免發(fā)生爆炸（2）鼓風(fēng)機(jī)連續(xù)工作不能超過5h（如超過12h，需間隔1-2小時使用）（3）勿損壞漆層，以免儀器設(shè)備腐蝕

標(biāo)準(zhǔn)恒溫恒濕養(yǎng)護(hù)箱

1、儀器型號：YH-40B

2、技術(shù)指標(biāo)：控制濕度＞90％

控制溫度20℃

控制精度±1℃

3、儀器使用環(huán)境要求：5℃-30℃

4、操作程序：（1）將水箱注滿水

（2）將溫度選擇鍵設(shè)置需溫度

（3）接通電源，打開電源開關(guān)，工作正常后裝入試塊等進(jìn)行養(yǎng)護(hù)（4）放水時將箱后膠管摘下即可防水

5、維護(hù)與保養(yǎng)：

6、注意事項：嚴(yán)禁水箱無水，以導(dǎo)致燒壞加濕器

水泥標(biāo)準(zhǔn)稠度及凝結(jié)時間測定儀（維卡儀）操作規(guī)程

1、儀器型號：

2、技術(shù)指標(biāo)：滑動部分總重量：300±1g 滑動部分最大行程：70mm

3、儀器使用環(huán)境要求：10℃-30℃

4、操作程序：

（1）使用前需將滑動部分注入少許潤滑油，并檢查是否能上下自由滑動。（2）標(biāo)準(zhǔn)稠度的測定：將拌制好的水泥凈漿裝入以置于玻璃底板上的試模中，用小刀插搗，輕輕振動數(shù)次，刮去多余的凈漿，抹平后迅速將試模和底板移到維卡儀上，并將其重心定在試桿下，降低試桿直至與水泥凈漿表面接觸，擰緊螺絲后，突然放松，使試桿垂直自由的沉入水泥凈漿中。在試桿停止沉入或釋放試桿30s時記錄試桿距底板之間的距離，升起試桿后，立即擦凈，整個操作應(yīng)在攪拌后 的1.5min內(nèi)完成。以試桿沉入水泥凈漿并距離底板6mm±1mm的水泥凈漿為標(biāo)準(zhǔn)稠度凈漿。其拌和水量為該水泥的標(biāo)準(zhǔn)稠度用水量（P），按水泥質(zhì)量的百分比計。

（3）初凝結(jié)時間的測定：試件在濕氣養(yǎng)護(hù)箱中養(yǎng)護(hù)至加水后30min時進(jìn)行第一次測定。測定時，從濕氣養(yǎng)護(hù)箱中取出圓模放在試針下，降低試針與水泥凈漿表面接觸，擰緊螺絲后。突然放松，試針垂直自由地沉入水泥凈漿。觀察試針停止下沉或釋放試針30s時指針的讀數(shù)當(dāng)試針沉至距離底板4mm±1mm時，為水泥達(dá)到初凝狀態(tài)，由水泥全部加入水中至初凝狀態(tài)的時間為水泥的初凝時間，用min來表示。

（4）終凝時間的測定：為了準(zhǔn)確觀測試針沉入的狀況，在終凝針上安裝了一個環(huán)形附件。在完成初凝時間測定后，立即將試模連同漿體以平移的方法從玻璃板取下翻轉(zhuǎn)180℃，直徑大端向上，小端向下放在玻璃板上，再放入濕氣養(yǎng)護(hù)箱中繼續(xù)養(yǎng)護(hù)，臨近終凝時間每隔15min測定一次，當(dāng)試針沉入試體0.5mm時，即環(huán)形附件開始不能在試體上留下痕跡時，為水泥達(dá)到終凝狀態(tài)，由水泥全部加入水中至終凝狀態(tài)時間為水泥的終凝時間，用min來表示。

（6）測定應(yīng)注意：在最初測定的操作時應(yīng)輕輕扶持金屬柱。使其徐徐下降，以防試針撞彎，但結(jié)果以自由下落為準(zhǔn)，在整個測試過程中試針沉入的位置至少要距

試模內(nèi)壁10mm，臨近初凝時間每隔5min測定一次，臨近終凝時間每隔15min測定一次，到達(dá)初凝或終凝時應(yīng)立即重復(fù)測一次，當(dāng)兩次結(jié)論相同時才能定為到達(dá)初凝或終凝狀態(tài)。每次測定不能讓試針落入原針孔，每次測定完畢須將試針擦凈并將試模放回濕氣養(yǎng)護(hù)箱內(nèi)，整個測試過程要防止試模受振。

5、維護(hù)與保養(yǎng)：定期檢查緊固件，發(fā)現(xiàn)松動，應(yīng)及時擰緊，每次做完試驗(yàn)后所用配件應(yīng)擦洗上油，防腐不得生銹。

6、注意事項：

水泥電動抗折儀操作規(guī)程

1、儀器型號：KZJ5000-1

2、技術(shù)指標(biāo)：最大負(fù)荷：11.7MPA

5000N

示值誤差＜1％

3、儀器使用環(huán)境要求：10-30℃

4、操作程序：（1）接通電源。

（2）調(diào)整零點(diǎn)（調(diào)速配重鉈，使游鉈在“0”位上：主杠桿處于水平）。（3）清除夾具上表面粘著雜物將試體放入抗折夾具內(nèi)，并調(diào)整夾具將試件夾緊使主桿產(chǎn)生一個仰角（此仰角的大小根據(jù)試件存放天數(shù)和操作經(jīng)驗(yàn)決定）。（4）按動啟動按鈕指示燈亮（紅）電機(jī)帶動絲桿轉(zhuǎn)動，游鉈移動加載，當(dāng)加到一定數(shù)值時，試體折斷主杠桿右端定位針壓合微動開關(guān)電機(jī)停轉(zhuǎn)，即可在主尺刻度上讀取抗著強(qiáng)度的數(shù)值。

（5）按壓游鉈上的按鈕推動游鉈回到“0”位上。（6）試驗(yàn)完畢將儀器擦拭干凈。

5、維護(hù)與保養(yǎng)：

（1）每次使用完畢應(yīng)蓋好，防止灰塵侵入（2）儀器不應(yīng)再有腐蝕氣體和強(qiáng)磁場環(huán)境使用

（3）電動抗試驗(yàn)機(jī)的刀子和刀墊應(yīng)定期用無水酒精蘸濕稠布擦拭防止刀刃接觸部位沾染灰塵和油污

6、注意事項：

（1）指示燈不亮檢查熔絲是否燒斷

（2）電動抗折試驗(yàn)機(jī)主杠桿擺動不靈活，應(yīng)查各刀是否落在刀座的V型刀墊中間

（3）游鉈按鈕失靈應(yīng)檢查游鉈按鈕部分是否有螺絲松動，或彈簧失效

電子天平操作規(guī)程

1、儀器型號：JM-BJS5001

2、技術(shù)指標(biāo)：最大稱重：5000g

可讀性：0.01g

重復(fù)性：0.02g

線性：±0.02g

天平尺寸：Φ160

3、儀器使用環(huán)境要求：15℃-30℃

4、操作程序：（1）普通稱重：

①在每次使用前，上電預(yù)熱最少15分鐘 ②清除秤盤上物體

③按TARE鍵，將天平清零

④如需稱其他稱重單位，按【UNIT】知道屏幕所指示的需要稱重單位出現(xiàn) ⑤在秤盤上放置待測物

⑥待OK指示穩(wěn)定后讀取重量度數(shù)（2）使用容器稱量：

①將容器放在秤盤上

②按【TARE】清零

③待OK指示出現(xiàn)后，將待測物體放在容器內(nèi) ④待OK指示出現(xiàn)后，讀取待測物重量（3）計件模式：

①按【TARE】將天平清零，如需要有容器稱重話，將容器放在秤盤上，按【TARE】清零

②按【COUNT】天平顯示QTY10，按【COUNT】鍵選擇計件系數(shù)。計件采樣系數(shù)有10、25、50、100表示計件采樣的件數(shù)。采樣越多，精度越高。按下【COUNT】件可循環(huán)選擇

③按所選的采樣系數(shù)，將同等件數(shù)的樣品放在秤盤上或容器內(nèi)，按【UNIT】鍵、天平顯示試樣件數(shù)。此時天平進(jìn)入計件狀態(tài)，顯示屏單位為PCS ④將需要計件的物品放在秤盤上或容器內(nèi)，當(dāng)OK指示后即可度數(shù)（4）百分比稱重： ①按【TARE】將天平清零

②在秤盤上放置基準(zhǔn)物品，待天平讀數(shù)穩(wěn)定后，按【PER】 ③移去基準(zhǔn)物，天平顯示0.000或0.000 ④將待測物放在秤盤上

⑤等到LED顯示器顯示OK指示后讀取天平讀數(shù)，此時現(xiàn)實(shí)的讀數(shù)為相對于基準(zhǔn)物品的百分比

⑥按【UNIT】后返回到普通稱重模式（5）檢重模式

①設(shè)置合格物品的上下限值并啟動檢重模式 ②按【TARE】將天平清零 ③將待測物放在秤盤上

④觀察天平顯示，天平顯示【LOW】表示所稱物品重量低于下限值，天平顯示【HIGH】表示所稱物品重量高于上限值，天平顯示【OK】表示所稱物品重量在合格范圍

5、維護(hù)與保養(yǎng)：

（1）日常維護(hù)：取下秤盤，完全擦出上面的污點(diǎn)和灰塵，不要使用水，建議使用酒精

（2）校準(zhǔn)砝碼：

①將天平接通電源，最少預(yù)熱30min ②按【TARE】將天平清零

③按【CAL】鍵，天平顯示全量程，按下【TARE】鍵顯示半量程

④在天平秤上放置該型號半量程的標(biāo)準(zhǔn)砝碼，按【CAL】進(jìn)行外部半量程標(biāo)準(zhǔn)砝碼校準(zhǔn)。天平顯示【ACAL】后顯示半量程讀數(shù)

⑤按【CAL】鍵，天平顯示全量程，在天平秤盤上放置全量程的標(biāo)準(zhǔn)砝碼后按下【CAL】鍵，天平顯示【ACAL】后顯示出全量程讀數(shù)

6、注意事項：

（1）天平工作環(huán)境溫度波動不能太大，不能超過5℃/H（2）首次使用或校準(zhǔn)之前，應(yīng)通電預(yù)熱至少25min

雷氏煮沸箱操作規(guī)程

1、儀器型號：FZ-31

2、技術(shù)指標(biāo)：時控精度誤差＜2％

升溫時間：30min

試件容量：36個雷氏夾

3、儀器使用環(huán)境要求：10-30℃

4、操作程序：

（1）先將煮沸箱的四芯插入程序控制器上插座。（2）接上電源，按電源開關(guān)，指示燈亮。

（3）先按著設(shè)定按鈕，調(diào)置3．00然后放開調(diào)時按鈕，即（兩火一零）在調(diào)置3．30將設(shè)定按鈕放開，本機(jī)設(shè)定信號開始程序工作，按“工作”按鈕儀器開始升溫。

（4）儀器停止工作后，應(yīng)關(guān)閉電源開關(guān)，約5分鐘后放掉水，打開箱蓋冷卻到室溫時取出試件，待箱內(nèi)余留水分自然蒸發(fā)后再蓋上箱蓋。

5、維護(hù)與保養(yǎng)：

（1）儀器增加水量180mm時以水溫為20℃確定，如果水溫低于或高于20℃，可通過減少加水量調(diào)節(jié)，也可通過程控上手動開關(guān)拔至ON位置，進(jìn)行預(yù)熱水溫接近20℃加熱完畢后，將開關(guān)拔至OFF（2）箱內(nèi)未加水時，嚴(yán)禁儀器工作

6、注意事項：

（1）儀器工作時，請勿打開箱蓋以免燙傷（2）使用時應(yīng)使主機(jī)控制器均可可靠接地

水泥膠砂攪拌機(jī)操作規(guī)程

1、儀器型號：JJ-5

2、技術(shù)指標(biāo)：攪拌葉寬度135mm 壁厚1.5mm

攪拌鍋容量5L

3、儀器使用環(huán)境要求：10-30℃

4、操作程序：

（1）接通電源，按機(jī)器右后方的控制箱上所標(biāo)“啟動”開關(guān)，攪拌筒的旋動方向必須同標(biāo)記方向一致。

（2）砂罐內(nèi)裝入1350g標(biāo)準(zhǔn)砂，攪拌鍋內(nèi)裝入水225g、水泥450g，將攪拌鍋裝入支座的定位孔中，順時針轉(zhuǎn)動鍋至鎖緊，再搬動手柄使攪拌鍋向上移動處于攪拌工作定位位置。

（3）自動操作：將扭子開關(guān)1K撥至自動位置，按下程控器啟動按鍵即自動完成一次工作。其程序是:低速60秒（其中后30秒同時加砂）→高速30秒→停止90秒（其中后5秒報警）→高速60秒→（其中后5秒報警）→結(jié)束。（4）手動操作：將扭子開關(guān)撥至手動位置，本機(jī)即轉(zhuǎn)動，根據(jù)試驗(yàn)需要，可任意控制低速和高速的轉(zhuǎn)動時間，任意控制加砂時間的早、晚、長、短。扭子開關(guān)2K控制低速和高速。扭子開關(guān)3K控制加砂和停。

（5）達(dá)到攪拌時間后，按“停止”按鈕。

（6）使用完畢，切斷電源，徹底清除攪拌葉片及攪拌筒內(nèi)殘余砂漿，清掃散落及飛濺在機(jī)器上的砂漿及臟物。

5、維護(hù)與保養(yǎng)：

（1）每次使用完畢應(yīng)擦拭儀器

（2）本機(jī)無外部加油孔，傳功箱內(nèi)渦輪付、齒輪付及軸承等運(yùn)動部件每季加黃油一次，加油時、打開傳動箱時即可，支座與立柱導(dǎo)軌之間，升降機(jī)構(gòu)之間應(yīng)經(jīng)常滴入黃油，每年保養(yǎng)一次，將本機(jī)全部清洗加注潤滑油和潤滑脂

6、注意事項：機(jī)器運(yùn)轉(zhuǎn)時如遇到金屬撞擊噪聲，應(yīng)先檢查攪拌葉與攪拌鍋是否正常

雷氏夾測定儀操作規(guī)程

1、儀器型號：LD-50

2、技術(shù)指標(biāo)：儀器測定范圍：±25mm

3、儀器使用環(huán)境要求：

4、操作程序：

（1）雷氏夾彈性要求檢驗(yàn)：將測定儀上的弦線固定于雷氏夾一指針根部，另一指針根部掛上300g砝碼，在左側(cè)標(biāo)尺上讀數(shù)。

（2）膨脹值測定：將沸煮箱中取出的帶試件的雷氏夾放于墊塊上，指針朝上，放平后在上端標(biāo)尺讀數(shù)，然后根據(jù)GB1346—89計算膨脹值。

5、維護(hù)與保養(yǎng)：

（1）墊塊上不得有銹斑污垢等物

（2）用完后除標(biāo)尺圖防銹油并妥善保管，避免生銹和碰傷

6、注意事項：定期檢查左壁架與支架桿的垂直度和各緊固件，是否松動

水泥細(xì)度負(fù)壓篩析儀操作規(guī)程

1、儀器型號：FYS150B

2、技術(shù)指標(biāo)：篩析測試細(xì)讀：80μm

篩析控制時間：2min

工作負(fù)壓可調(diào)范圍：30±2r/min

3、儀器使用環(huán)境要求：溫度10℃-35℃

4、操作程序：

（1）篩析試驗(yàn)前，調(diào)節(jié)數(shù)顯式時間控制器，使其定時120S，再把負(fù)壓篩放在篩座上，蓋上篩蓋打開電源，調(diào)節(jié)負(fù)壓至4000-6000Pa范圍內(nèi)。

（2）稱取試樣25g置于潔凈的負(fù)壓篩中，蓋上篩蓋，再次啟動儀器，連續(xù)篩析，在此期間如有試樣附著在篩蓋上，可輕敲篩蓋，使試樣落下，當(dāng)篩析滿120S后儀

器自動停止。

（3）篩畢用天平稱篩余物重量。

5、維護(hù)與保養(yǎng)

（1）每次使用后，應(yīng)用刷子從試驗(yàn)篩篩網(wǎng)兩面較輕刷凈。并把篩網(wǎng)對著陽光或燈光檢查合格后把試驗(yàn)篩保存在干燥的容器或者塑料袋內(nèi)。

（2）當(dāng)試驗(yàn)篩堵塞時，可將其反置在篩座上，蓋上篩蓋進(jìn)行反吸，然后再用刷子刷清，必要時也要把吸塵器吸管從旋風(fēng)筒上拔下來，直接對著篩網(wǎng)進(jìn)行抽吸，同時再用刷子刷凈。若篩網(wǎng)堵塞嚴(yán)重，可先把試驗(yàn)篩放在水中浸泡了一段時間在刷洗。

（3）儀器使用完畢后關(guān)閉電源開關(guān)，并用抹布將儀器外表面擦抹干凈。（4）若發(fā)現(xiàn)收塵瓶中的水泥細(xì)粉快滿時，應(yīng)將收塵瓶從旋風(fēng)筒上拔下來到掉后再裝上去。

（5）吸塵器應(yīng)注意定期清灰，以保持收塵袋清潔，確保負(fù)壓值達(dá)到國標(biāo)要求，取下吸塵器時先將吸塵器電源插頭從箱體內(nèi)的插座上拔下，如此便能把吸塵器從箱體內(nèi)的插座上拔下，如此便能把吸塵器從箱體內(nèi)拿出來進(jìn)行清灰了。

6、注意事項：儀器連續(xù)使用時間過長時需停機(jī)散熱，以延長吸塵器電機(jī)壽命。

水泥膠砂流動跳桌操作規(guī)程

1、儀器型號：NLD-3

2、技術(shù)指標(biāo)： 圓盤跳動落距：10±0.1mm

自停次數(shù)：30次

跳動時間：每秒一次

3、儀器使用環(huán)境要求：15℃-30℃

4、操作程序：（1）使用前接通電源。

2、將按規(guī)定配制好的水泥膠砂，分兩層裝入模內(nèi)，進(jìn)行搗壓。

3、搗壓完畢，取下模套，用制平刀將之刮平后將截圓錐模垂直向上輕輕提起，打開電機(jī)開關(guān)，電機(jī)開始轉(zhuǎn)動。

4、跳動完畢，用分度值0.02mm的卡尺測量水泥膠砂底部擴(kuò)散的直徑與相對垂直的兩直徑的平均值為該水泥在該水量時的膠砂流動度，用mm表示。

5、儀器用完后，用濕布擦洗干凈，然后將截圓錐模、模套、搞棒滑部分涂油，防止生銹使滑動自由。

5、維護(hù)與保養(yǎng)：

6、注意事項：

水泥凈漿攪拌機(jī)操作規(guī)程

1、儀器型號：NJ-160

2、技術(shù)指標(biāo)：公轉(zhuǎn)：62±5r/min（慢）

140±5 r/min（快）

停：15s

公轉(zhuǎn)：125±10r/min（慢）285±10 r/min（快）

3、儀器使用環(huán)境要求：10-30℃

4、操作程序：

（1）先將三位開關(guān)（1K、2K）都置于停，再將時間程控器插頭插入面板的“程控輸入”插座，然后方可接通電源。

（2）打開電源，檢查攪拌葉片運(yùn)轉(zhuǎn)方向是否正確。（3）將控制面板上的控制開關(guān)扳至所需要位置。

（4）拌合時，先用濕布將攪拌鍋及攪拌葉片擦干凈，將裝有試樣的攪拌鍋放到攪拌機(jī)鍋?zhàn)希翑嚢栉恢茫_動機(jī)器。

（5）自動操作：把1K開關(guān)置于自動位置，即完成慢攪120秒、停10秒后報警5秒共停15秒、快攪120秒的動作，然后自動停止。每次自動程序結(jié)束后，必須將1K置于停，以防停電后程控器誤動作。

（6）手動攪拌操作：把1K開關(guān)置于手動位置，再將三位開關(guān)2K置于慢、停、快、停，則分別完成各個動作，人工計時。

（7）停機(jī)后，取出攪拌鍋，倒出試樣，關(guān)閉電源，清洗機(jī)器。

5、維護(hù)與保養(yǎng)：

（1）每次使用完畢應(yīng)擦拭儀器，擦干后套上護(hù)罩，防止落入灰塵（2）本機(jī)采用分體式，如有損壞，更換非常方便

6、注意事項：機(jī)器運(yùn)轉(zhuǎn)時如遇到金屬撞擊噪聲，應(yīng)先檢查攪拌葉以及時間繼電器，均應(yīng)調(diào)整間隙和攪拌時間

水泥膠砂振實(shí)臺操作規(guī)程

1、儀器型號：ZS-15

2、技術(shù)指標(biāo)：振動臺振幅：15mm±0.3mm

振動頻率：60次/60s±2s

3、儀器使用環(huán)境要求：10-30℃

4、操作程序：

（1）打開電源，檢查振實(shí)臺運(yùn)轉(zhuǎn)是否正常。

（2）停機(jī)后，在控制面板上設(shè)定本試驗(yàn)所要求的工作時間。（3）將下料漏斗放在試模上方，卡緊在振實(shí)臺的中心。

（4）將攪拌好的膠砂分兩次均勻地裝入下料漏斗中，開動振實(shí)臺。（5）振動完畢后，取下試模漏斗，關(guān)閉電源，清洗振實(shí)臺。

5、維護(hù)與保養(yǎng)：

（1）每次使用完畢應(yīng)擦拭儀器及時清理水泥砂漿，并擦干凈（2）控制器注意防潮

6、注意事項：

（1）計時器的接近開關(guān)與凸輪間的距離應(yīng)保持在1-1.5mm，長期使用時應(yīng)注意防止松動，以免出現(xiàn)故障

（2）工作時，卡具要鎖緊以免出現(xiàn)故障

標(biāo)準(zhǔn)養(yǎng)護(hù)室溫濕度控制系統(tǒng)操作規(guī)程

1、儀器型號：FHBS-60

2、技術(shù)指標(biāo)：霧化量3kg/h

3、儀器使用環(huán)境要求：溫度5℃-50℃

電源電壓波動小于額定電壓±10％

4、操作程序：（1）濕度參數(shù)設(shè)定

按下【濕度設(shè)定鍵】5s以上，上排顯示“SET r”下排顯示“HA 000”表示進(jìn)入濕度參數(shù)設(shè)定程序 ①濕度上限【去濕】設(shè)定

【HA 000】表示進(jìn)入濕度上限（去濕）的設(shè)定，按移位鍵（濕度設(shè)定鍵）和▲▼鍵，設(shè)定為需要的數(shù)值，按確認(rèn)鍵存入此值，同時進(jìn)入下一級參數(shù)的設(shè)定 ②濕度下限【加濕】設(shè)定

【HA 000】表示進(jìn)入濕度下限（加濕）的設(shè)定，按移位鍵和▲▼鍵，設(shè)定為需要的數(shù)值，按確認(rèn)鍵存入此值，同時進(jìn)入下一級參數(shù)的設(shè)定 ③濕度上限回差值的設(shè)定

【HA 000】表示進(jìn)入濕度上限回差值的設(shè)定，按移位鍵和▲▼鍵，設(shè)定為需要的數(shù)值，按確認(rèn)鍵存入此值，同時進(jìn)入下一級參數(shù)的設(shè)定 ④濕度下限回差值的設(shè)定

【HA 000】表示進(jìn)入濕度下限回差值的設(shè)定，按移位鍵和▲▼鍵，設(shè)定為需要的數(shù)值，按確認(rèn)鍵存入此值，同時進(jìn)入下一級參數(shù)的設(shè)定 ⑤濕度測量誤差的修正

【OE 00】表示進(jìn)入濕度測量誤差的修正，這要根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)濕度值和實(shí)際測量值的誤差進(jìn)行修正，修正范圍“-9.9——9.9”按移位鍵和▲▼鍵修正誤差值，按確認(rèn)鍵存入修正結(jié)果，同時進(jìn)入下一級參數(shù)的設(shè)定 ⑥定時加濕關(guān)閉時常的設(shè)定

【OFF 000】表示進(jìn)入定時加濕關(guān)閉時常的設(shè)定，按移位鍵和▲▼鍵設(shè)定為需要的時長，（單位為分鐘，控制范圍0—999分鐘任選），按確認(rèn)鍵存入此值，同時進(jìn)入下一級參數(shù)的設(shè)定 ⑦定時加濕工作時長

【on 000】表示進(jìn)入定時加濕工作時常的設(shè)定，按移位鍵和▲▼鍵設(shè)定為需要的時長，（單位為分鐘，控制范圍0—999分鐘任選），按確認(rèn)鍵存入此值，同時進(jìn)入下一級參數(shù)的設(shè)定（2）溫度參數(shù)的設(shè)定

按下【溫度設(shè)定鍵】5s以上，上排顯示“SET t”下排顯示“HA 000”表示進(jìn)入溫度參數(shù)設(shè)定程序 ①溫度上限【制冷】設(shè)定

【HA 000】表示進(jìn)入溫度上限的設(shè)定，按移位鍵和▲▼鍵，設(shè)定為需要的數(shù)值，按確認(rèn)鍵存入此值，同時進(jìn)入下一級參數(shù)的設(shè)定 ②溫度下限【加溫】設(shè)定

【HA 000】表示進(jìn)入溫度下限的設(shè)定，按移位鍵和▲▼鍵，設(shè)定為需要的數(shù)值，按確認(rèn)鍵存入此值，同時進(jìn)入下一級參數(shù)的設(shè)定 ③溫度上限（制冷）回差值的設(shè)定

【HA 000】表示進(jìn)入溫度上限回差值的設(shè)定，按移位鍵和▲▼鍵，設(shè)定為需要的數(shù)值，按確認(rèn)鍵存入此值，同時進(jìn)入下一級參數(shù)的設(shè)定 ④溫度下限（加溫）回差值的設(shè)定

【HA 000】表示進(jìn)入溫度下限回差值的設(shè)定，按移位鍵和▲▼鍵，設(shè)定為需要的數(shù)值，按確認(rèn)鍵存入此值，同時進(jìn)入下一級參數(shù)的設(shè)定 ⑤溫度測量誤差的修正

【OE 00】表示進(jìn)入溫度測量誤差的修正，這要根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)溫度值和實(shí)際測量值的誤差進(jìn)行修正，修正范圍“-9.9——9.9”按移位鍵和▲▼鍵修正誤差值，按確認(rèn)鍵存入修正結(jié)果，同時進(jìn)入下一級參數(shù)的設(shè)定

5、維護(hù)與保養(yǎng)：

（1）加濕器定期清洗換能片，當(dāng)使用一段時間后水垢會沉積在換能片表面建議20天左右清洗一次

（2）定期清洗凈水器濾芯，及時清洗濾芯污物。如長時間使用濾芯被污物阻塞，需要更換新的濾芯

3、注意事項：

上下限警報回差參數(shù)，溫度濕度上下限警報回差是相同的

（1）上限警報回差HAO：在實(shí)際控制時，當(dāng)實(shí)際測量值大于“HA+HAO”時儀表即進(jìn)入上線報警狀態(tài)，當(dāng)實(shí)際測量值小于“HA-HAO”時儀表才能解除上限警報

（2）下限警報回差LAO：在實(shí)際控制時，當(dāng)實(shí)際測量值小于“LA+LAO”時儀表即進(jìn)入下線報警狀態(tài)，當(dāng)實(shí)際測量值大于“LA-LAO”時儀表才能解除上限警報

混凝土含氣量測定儀操作規(guī)程

1、儀器型號：HC-7L

2、技術(shù)指標(biāo)：容積：7000ml

3、儀器使用環(huán)境要求：

4、操作程序：

（1）裝混凝土拌合物分3層裝入，每層到時候高度約1/3容器高度；每層裝料后由邊緣向中心均勻地插搗25次，搗棒應(yīng)插透本層高度，再用橡皮錘沿量缽?fù)獗趽舸?0-15次，是插搗棒留下的插孔填滿。最后一層裝料應(yīng)避免過滿（2）把儀器水平方式，用刮刀把多余的混凝土拌合物刮去，使其表面光滑無氣泡，用潔布擦干凈缽邊緣，蓋好蓋，均勻擰緊固定上蓋和量缽的卡子

（3）打開注水閥，擰開排氣閥，用注水器從注水口注水，至水從排氣口平穩(wěn)流出，一邊繼續(xù)注水一邊關(guān)閉注水閥，然后關(guān)閉排氣閥和微調(diào)節(jié)氣閥

（4）擰開手泵，用手泵打氣加壓使指針指到稍稍超過初壓點(diǎn)位置，4-5s后用手指輕輕敲打表盤外側(cè)，使指針穩(wěn)定地指到初壓點(diǎn)上，如果加壓使指針真超過太多可以用微調(diào)閥配合手泵使指針穩(wěn)定在初壓點(diǎn)上，擰緊手泵

初壓點(diǎn)：注水測定時讀黑色刻度盤初壓點(diǎn)為：表盤右下方0點(diǎn)一下1的位置

無注水測定時讀紅色刻度盤初壓點(diǎn)為：表盤右下方0點(diǎn)位置

（5）平穩(wěn)地按下平衡手柄，使氣室里的壓縮空氣往缽里流動，4-5s，再按一下平衡閥手柄，用手指輕輕彈擊表盤的邊緣使指針穩(wěn)定下來，此時表針?biāo)甘镜募仁撬獪y定含氣量

（6）打開排氣閥排出量缽內(nèi)壓力，松開卡子倒出量缽內(nèi)的混凝土并清理干凈。（7）使用完后，擰松微調(diào)閥，排出氣室內(nèi)壓力空氣，使表針退回到垂直向下位置，否則會縮短儀器的使用壽命影響測量精度。用水將注水口的量缽內(nèi)外的混凝土沖洗干凈，然后用油棉紗擦干凈放置。

5、維護(hù)與保養(yǎng)：

使用完畢后使表的指針回到垂直向下位置

6、注意事項：先排除缽內(nèi)壓力之后，再排除氣室內(nèi)壓力。避免量缽內(nèi)水泥漿導(dǎo)流近氣室，導(dǎo)致儀器損壞

混凝土貫入阻力儀操作規(guī)程

1、儀器型號：HG-80

2、技術(shù)指標(biāo)：

3、儀器使用環(huán)境要求：20±3℃

4、操作程序：

5mm的篩從拌合物中篩取砂漿、并拌和均勻，將砂漿分別裝入三只砂漿筒中（150mm立方體試模）經(jīng)振搗或插搗35次使其密實(shí)砂漿表面應(yīng)低于筒口約10mm編號后至于溫度20±3℃的環(huán)境中以待試驗(yàn)，在其他較為恒定的溫度中進(jìn)行試驗(yàn)時，應(yīng)在實(shí)驗(yàn)結(jié)果中加以說明，實(shí)驗(yàn)用砂漿允許按混凝土中砂漿的配合比稱料，用人工或機(jī)械充分拌合制取，從混凝土拌合完畢起經(jīng)2h開始灌入度測試。在測試前5mm再將砂漿筒底一側(cè)墊高約500mm，使筒傾斜，吸取表面泌水，測試時砂漿筒至于測試平臺上，按動置零鍵，是表盤顯示為零，然后將測針端部與砂漿表面接觸，按動手柄，緩慢加壓經(jīng)10s使測針灌入砂漿深度25mm是按動鎖定鍵，即為灌入壓力，工作完成后再按置零件。每支砂筒每次測1-2個點(diǎn)，此后每隔1h測一次，或根據(jù)需要規(guī)定測試的時間間隔，測點(diǎn)間距應(yīng)大于20mm再臨近初凝及中凝時應(yīng)適當(dāng)縮短測試時間加密測點(diǎn)、如此反復(fù)進(jìn)行至灌入阻力大于28Mpa為止，測試過程中，根據(jù)砂漿的凝固情況參考表格規(guī)定更換測針 灌入阻力Mpa 測針載面積mm2

5、維護(hù)與保養(yǎng)：

6、注意事項：一次充電連續(xù)用48小時

0.2-3.5 100

3.5-20 50

20-28 20

混凝土滲透儀操作規(guī)程

1、儀器型號：HP-4.0

2、技術(shù)指標(biāo):允許最大壓力4MPA/cm2

試模尺寸：175×185×150

3、儀器使用環(huán)境要求：0℃-80℃

4、操作程序：

（1）試件養(yǎng)護(hù)至試驗(yàn)前1d取出，將表面晾干并擦拭干凈，然后將所用的密封材料（石蠟與火漆的重量比4:1, 石蠟與松香的重量比5:1，也可以用瀝青材料）放在平底小鐵盤內(nèi)進(jìn)行加熱融化。待完全溶化有，將時間側(cè)面放在熔化后鐵盤內(nèi)進(jìn)行均勻滾涂一層

（2）用螺旋加壓器或壓力機(jī)將涂有密封材料的事件壓入預(yù)熱的抗?jié)B透試件套內(nèi)（預(yù)熱溫度50℃），要求試件與套件的底面壓平為止，待試件套稍冷卻后即可除壓力

（3）排除滲透儀管路系統(tǒng)中的空氣，并將密封好的試件安裝在滲透儀上（4）當(dāng)6個試件中有三個試件端面呈滲水現(xiàn)象，即可停止試驗(yàn)，記下當(dāng)時的水壓，如加至規(guī)定壓力，在8h內(nèi)6個試件中表面滲水的試件不超過2個時，或加壓到1.2mpa，并經(jīng)過8h持壓滲水試件任不超過2個時，也應(yīng)停止試驗(yàn)，記下此時的水壓力

（5）試驗(yàn)過程中，如發(fā)現(xiàn)水從試件周邊滲出，則應(yīng)重新查封

5、維護(hù)與保養(yǎng)：

（1）齒輪箱內(nèi)應(yīng)注入一定量的機(jī)油，是齒輪浸入機(jī)油內(nèi)1.5公分為宜（儀器出廠時已注入），正常使用情況下每年更換一次

（2）水泵的活塞及兩個導(dǎo)柱，每天工作前加機(jī)油潤滑一次，以期延長水泵壽命（3）每次實(shí)驗(yàn)完畢后，應(yīng)將壓力容器管道閥內(nèi)的水通過排污閥排盡（4）試模及試模座擦凈，并涂防銹油脂保護(hù)（5）停用期間加蓋防塵罩保護(hù)

6、注意事項：

（1）本機(jī)具有防誤操作記憶功能，試驗(yàn)結(jié)束或?qū)嶒?yàn)中，需變換上下限壓力時，先設(shè)定好上下限壓力，在顯示系統(tǒng)壓力時，切斷電源后再按通，即可改變上下限壓力

水泥混凝土振動臺操作規(guī)程

1、儀器型號：ZHJ-A

2、技術(shù)指標(biāo)：振動頻率：2860c/min 振幅0.3-0.6mm

振動器功率：0.55kw

3、儀器使用環(huán)境要求：溫度10℃-35℃

4、操作程序：

（1）接通電源，首先檢查儀器運(yùn)轉(zhuǎn)是否正常。

（2）將裝滿水泥混凝土的試模，緊固在振動臺表面上。

（3）開動振動臺，直至水泥混凝土表面出現(xiàn)乳狀水泥漿時為止（振動過程中隨時添加混凝土使試模常滿）。

（4）振動結(jié)束后，將試模搬至合適位置，關(guān)閉電源，清洗振動臺。

5、維護(hù)與保養(yǎng)：

（1）振動器軸承應(yīng)經(jīng)常檢查，并定期拆洗，更換潤滑油，是軸承保持良好的潤滑，延長振動器的使用壽命

（2）振動臺應(yīng)有可靠的接地線、確保安全

6、注意事項：振動臺在振實(shí)過程中，混凝土制品應(yīng)牢固的緊靠在震動臺面上、所需振實(shí)的制品放置要與臺面對稱，使負(fù)荷平衡，振實(shí)制品的緊固裝置，可根據(jù)需要自行設(shè)置

砼攪拌機(jī)操作規(guī)程

1、儀器型號：HJW-60

2、技術(shù)指標(biāo)：進(jìn)料容量：96L

出料容量：60L

攪拌均勻時間≤45s

3、儀器使用環(huán)境要求：溫度10℃-35℃

4、操作程序：

（1）啟動前先檢查旋轉(zhuǎn)部分與料筒是否有刮碰現(xiàn)象。（2）清理料筒內(nèi)雜物。

（3）啟動前應(yīng)將筒體限位，方能啟動。（4）清除金屬或其它雜物，裝入砼材料。

（5）根據(jù)攪拌時間調(diào)整定時，必須在斷電情況下調(diào)整。

（6）按起動按鈕，主軸便帶動攪拌鏟運(yùn)轉(zhuǎn)，達(dá)到調(diào)整時間后自動停車。（7）卸料時應(yīng)先停機(jī)，打開鎖定銷，搬動手柄使料筒旋轉(zhuǎn)到一定位置，再使鎖緊銷定位旋轉(zhuǎn)主軸，使拌和料排出筒外。

（8）拌和料排凈后手動使筒體復(fù)位，將攪拌筒用鎖定銷定位。（9）清洗料筒。

5、維護(hù)與保養(yǎng)：

（1）根據(jù)使用情況對軸承部件定期進(jìn)行潤滑，定期檢查機(jī)器的密封情況，圖有松動應(yīng)及時擰緊，經(jīng)常檢查控制系統(tǒng)是否接觸良好和干燥

（2）攪拌機(jī)長使是用后，鏟片與攪拌桶會磨損，根據(jù)磨損情況進(jìn)行調(diào)整或更換

6、注意事項：在攪拌過程中切勿將手和棒狀物插入桶內(nèi)以免發(fā)生危險

萬分之一電子天平操作規(guī)程

1、儀器型號：JF2004

2、技術(shù)指標(biāo)：秤盤尺寸：Φ90mm

最小讀數(shù)：±0.0001g

稱量室尺寸：155×185×225

3、儀器使用環(huán)境要求：溫度5℃-40℃

濕度50-60％

4、操作程序：（1）校準(zhǔn)

校準(zhǔn)前將天平預(yù)熱1小時。稱盤空載：

按【ON/OFF】健開顯示；顯示自檢方式；約1秒左右，顯示“0.0000” 按【CAL】 鍵進(jìn)入校準(zhǔn)方式； 顯示“CAL in”等待下一顯示

顯示“CAL dn”時將天平右下側(cè)手柄輕輕向外拉，拉不動時為止。此時已將砝碼加到稱量機(jī)構(gòu)上

顯示“CAL?”等待下一顯示

顯示“CAL up”將手柄輕輕向里推，推不動為止 顯示“CAL?”等待下一顯示 顯示“CAL end”

1s后，顯示“0.0000” 天平進(jìn)入稱量狀態(tài)，可以進(jìn)行稱量（2）一般稱量

①按【on/off】鍵，顯示自檢方式，1s后顯示“0.0000”

②將物品放到秤盤上，輕輕地關(guān)上防風(fēng)門，顯示穩(wěn)定符后讀取稱量值 ③取下物品后，顯示“0.0000”（3）使用容器稱量

①將容器放到秤盤上，顯示容器質(zhì)量，按【TARE】鍵，除掉容器重量顯示“0.0000” ②將物品放入容器中。顯示穩(wěn)定符后讀取稱量值

③稱量結(jié)束后，將秤盤上的所有物品放下，按【on/off】關(guān)顯示，顯示待機(jī)符（4）增重稱量

稱量兩種以上物品在混合錢各自的重量，使用增重稱量 ①將容器放到秤盤上，先是容器重量

②按【TARE】鍵，顯示“0.0000”，容器內(nèi)加入第一種物品。顯示到標(biāo)定重量時，停止添加

③按【TARE】鍵，除掉顯示的重量，再次顯示“0.0000”。向容器內(nèi)加入第二種物品，顯示這次假如物品的重量。顯示到標(biāo)定重量時，停止添加；按上述步驟繼續(xù)操作，直到完成為止（5）減量稱重

①將裝有物品的容器放到盤上，顯示總重量“86.7300”，按【TARE】鍵，除掉顯示的重量，顯示“0.0000”

②從容器內(nèi)向外提取物品，顯示被提取物的負(fù)重量值。顯示到標(biāo)定重量時，停止提取

（6）底鉤稱重

將天平稱量室（帶有玻璃罩部分）外移出工作臺的邊，已將秤盤中心移出為準(zhǔn)。這是天平底部有一圓形塑料蓋

將塑料取下，內(nèi)有一帶口的底鉤稱量裝置，在底鉤的孔上穿一細(xì)線，將天平放在有孔的工作臺上，將底鉤口對正工作臺上的孔，實(shí)現(xiàn)穿過工作臺上的孔，在線的下端系一盤狀容器

①按【TARE】鍵，顯示“0.0000”，將物品放入容器中 ②記下物品在空氣中的重量 A=10.0000g ③按【TARE】鍵，除掉顯示的重量，顯示“0.0000”

④將物品連同容器一起浸入10℃的水中，顯示被排出水的重量值 B=-0.46619g ⑤計算被排出水的體積：C=0.4662cm3

計算比重：10.0000g÷0.4662cm3=1.45g/cm3 根據(jù)結(jié)果可判定物品是“鉑”

5、維護(hù)與保養(yǎng)：不要將天平長時間曝露在高溫或有粉塵的環(huán)境下

用完天平后最好將其罩上，以免灰塵進(jìn)入

清潔前應(yīng)將電源線拔下，不要用腐蝕性清潔劑

6、注意事項：當(dāng)天平從一較冷環(huán)境移到另一暖環(huán)境時，空氣中的水分會在天平內(nèi)部凝結(jié)，以至影響稱重的精準(zhǔn)性。應(yīng)將天平在室溫下不插電放置2h，然后再插上電源

電動鋼筋標(biāo)距儀操作規(guī)程

1、儀器型號：BJ-10

2、技術(shù)指標(biāo)：打印標(biāo)距：5mm 10mm 尺寸外形：630×230×300mm

3、儀器使用環(huán)境要求：10℃-30℃

4、操作程序：

（1）首先確定標(biāo)距。調(diào)整標(biāo)距的方法是松開打印總成兩側(cè)的固定螺絲，錐桿套移向左端為10毫米，移向右端為5毫米再把螺絲緊固。

（2）提起錐桿提升手柄把鋼筋調(diào)直放入V形槽內(nèi)（羅紋鋼直線邊向上）緊固好。（3）落下手柄旋轉(zhuǎn)左端的小車輪，使錐桿處于最低處，調(diào)整高度調(diào)節(jié)手柄使錐尖接觸鋼筋后再繼續(xù)下調(diào)1—2毫米，以確保錐頭有足夠的打入鋼筋的余量。（4）提起手柄接通電源，把方向開關(guān)撥到左行位置，開啟電源開關(guān)。電源指示燈亮，如果打印總成在中途位置，工作指示燈也亮。同時打印總成行至最左端自動停止，工作指示燈滅。

（5）落下錐桿，把方向開關(guān)撥到右行位置，按一下右行按鈕待電機(jī)正常運(yùn)行后，松開按鈕，打印總成行至最右端，自動停止。

（6）提起錐桿，松開緊固螺絲，取出鋼筋，打印完畢。再把方向開關(guān)撥到左行位置，按一下左行按鈕，電機(jī)運(yùn)行后，松開按鈕，打印總成行至最左端自動停止，以保持下一次工作的準(zhǔn)備狀態(tài)。

5、維護(hù)與保養(yǎng)：用完后涂防銹油并妥善保管，避免生銹和碰傷

6、注意事項：（1）使用前可靠接地

（2）左行時必須提起錐桿，且嚴(yán)格按照操作方法去操作，一旦誤操作，將損壞電機(jī)電器

電子秤操作規(guī)程

1、儀器型號：

2、技術(shù)指標(biāo)：

3、儀器使用環(huán)境要求：

4、操作程序：

1、使用電子秤前，請先溫機(jī)15-20分鐘，打開電源時，稱盤上請勿放置任 何東西。

2、將電子秤置于平坦桌面上，調(diào)整腳螺旋使電子秤水平。

3、開電源開關(guān)，電子秤自動顯示“0”，開機(jī)后，可直接按“單位

轉(zhuǎn)換”健來選擇需要的單位，電子秤會記憶所選用的單位，待下次開機(jī)會直接出現(xiàn)開機(jī)前的單位狀態(tài)。

4、將物品放在稱盤中心，且稱物不超出稱盤范圍，以保證其準(zhǔn)確度，待重 量顯示穩(wěn)定后，所顯示的數(shù)值便是物品重量。

5、需要扣重時，將包裝容器置于稱臺上，待重量顯示穩(wěn)定后，按“扣重健”。將待稱物品放在容器內(nèi)，則電子秤將顯示物品之凈重。

6、所稱物品超出感量后，蜂鳴器發(fā)出叫聲，應(yīng)立即取下物品，盡量避免所稱之物超出量程。