第一篇：腐敗肝臟中氯氮平的高效液相色譜分析方法研究（精選）

【摘要】 目的建立腐敗肝臟組織中氯氮平的高效液相色譜分析方法。方法采用hypersil ods柱(150mm×

4．6mm id，5(m)，流動相為甲醇：水(80：20)，內含0．025 mo[／l的磷酸二氫鈉和0．01 mo[／l的十二烷基磺酸鈉(sds)

(ph5)。檢測波長為：222 nm，228 nm和259 nm。

結果 用該方法從腐敗肝臟組織中檢出氯氮平。結論 所建立的高效液相色譜分析方法適用于腐敗生物檢材中氯氮平的檢識，能為法醫鑒定工作提供方法。

【關鍵詞】氯氮平；腐敗肝臟；hplc

【中圖分類號】i3919．1；r927．

1【文獻標識碼】a

【文章編號】1007—9297(2004)02—0131—0

2study on detection of clozapine in decay liver using hplc．liao lin—chuan，yan you—yi，yang lin ．sichuan universi—

ty，chengdu 610041

【abstractl 0bjective for the purposes of detecting clozapine in decay liver． methods a hplc method was devel—

oped．samples were extracted by ether，compounds were separated on ods hypersil column(4．6mm i．d．×150mm)eluted

with methanol which contain 0．025mol／l nah2po4 and 0．olmol／lsds(ph5)．a sequential ultraviolet detection was used

(222，228 and 259nm)． results clozapine was successfully detected in decay liver samples． conclusion the method in

this study is useful in the forensic cases involved clozapine po ison．

【key wordsl clozapine；decay liver sample；hplc

氯氮平(clozapine)，化學名為8一氯一11一(4一甲基一1一哌

嗪基)一5h一二苯并[b，e]一[1，4]二氮雜卓，是一種抗精神病

藥，主要用于治療精神分裂癥，由于其具有較高的抗精神分裂癥

療效，又很少產生錐體外系反應，故在臨床上得到廣泛應用。¨

關于氯氮平的檢測方法，國內外有學者已對血漿及血清等機體

組織中該藥的檢測方法進行了研究，_2 但尚未見到肝臟組織

尤其是腐敗組織中該藥物檢測方法的報道。本文對腐敗肝臟組

織中該藥物的檢測作了嘗試，報道如下。

儀器及材料

一、儀器

hp1100 series高效液相色譜儀，配以二極管陣列檢測器，四

元泵及三維hp液相色譜化學工作站；日本島津uv一260紫外

分光光度計；高速臺式離心機(17 000 r／min)。

二、對照溶液及試藥

精密稱取氯氮平對照品，配制成對照品乙醇溶液，濃度0．0

1mg／ml；甲醇，購自fisher公司；水為超純水(電阻(18 mo)；其他

試劑、試藥均為色譜純或分析純。

三、材料

空白對照人肝組織，放至腐敗；精神病患者腐敗肝組織，生

前服用過氯氮平。

方法及結果

一、樣品前處理

方法一，取腐敗肝臟組織檢材5 g，用氨水調節ph為8，先

后用乙醚10 ml，5 ml振搖萃取兩次，分出乙醚層，合并濾液，過

三氧化二鋁凈化柱凈化，乙醚液用酸性水液反提，酸水提取液經

堿化后再用乙醚提取；置乙醚提取液于40℃ 水浴中，揮干溶劑，殘留物用甲醇溶解，16 000 rpm離心5 min后取上清液進樣

hplc儀。

方法二，提取溶劑換用氯仿，余同上法，揮干溶劑時用空氣

流吹干。

二、色譜流動相的篩選

本文選用ods hypersil柱(150mm×4．mm id，5 m)為分析

柱；同樣填料(30t~m)短柱為預柱。先用已知對照品直接進樣，對

下列流動相進行了篩選：(1)不同比例的甲醇與水溶液；(2)甲

醇：水：磷酸二氫鈉：十二烷基磺酸鈉的不同配比溶液，ph分別

為4．

5、5．0、5．

5、6．

2、7．0(濃磷酸調節)。結果表明流動相為甲

醇：水(80：20)，內含0．025 mol／l的磷酸二氫鈉和0．01 mol／l的十二烷基磺酸鈉(ph5)，氯氮平有適合的保留時間，且峰形較

好，拖尾因子最接近1(見圖1 a)。在隨后用生物樣品進樣情況

下仍能獲得較滿意的結果，見圖1(b)(c)。

流速：1．2 ml／min；檢

測波長：222 nm，228 nm，259 nm；柱溫：30℃。

用上述乙醚和氯仿提取的樣品進樣，比較兩種提取溶劑雜

質的干擾情況。

討論

一、樣品前處理方法

由于腐敗肝臟組織中所含成分較復雜，所以本文采用有機

溶劑提取，過凈化柱和酸性水液反提凈化，酸水液經堿化后再用

有機溶劑提取；于40℃水浴中揮干溶劑，殘留物用甲醇溶解．16

000 rpm離心后上清液進樣hplc儀；雖然操作步驟略多，但卻

能明顯降低檢材中的內源性雜質對檢測的干擾。腐敗肝臟組織

經以上預處理后，取20i~l進樣測定，并通過陣列二極管搜集220

～ 350 nm紫外光譜圖，兩種萃取條件下均能檢出氯氮平，從圖

1(b)(c)可見在兩種溶劑提取回收率接近，但用乙醚提取雜質峰更

少。樣品前處理過程中，用氨水調節ph為8而不用氫氧化鈉等

· 132 · 法律與醫學雜志2004年第11卷(第2期)

其他強堿，主要是考慮到有些藥物在強堿性條件下易分解，而氨 水易揮發，很容易除去，以免干擾測定。

mau mau

圖1 氯氮平及肝臟提取物的高效液相色譜圖 figl high performance liquid chromatogram of clozapine(a)and chro．

matogram of extracts from decay liver tissue(b and c)．

a

300 波長

圖2 氯氮平甲醇溶液的紫外吸收光譜 fig 2 the

ultraviolet spectrum of clozapine in methanol,solution

二、紫外檢測波長

在建立高效液相色譜方法時，需選擇合適的檢測波長，為

此，將氯氮平用乙醇溶解后，在200～500 nm范圍測得其紫外光

譜(圖2)，在波長228 am、259 am和294 am 處均有紫外吸收峰。

作者認為雖然在228 am處吸收最強，但由于許多內源性雜質在短波均有較強吸收，故在靈敏度足夠的情況下，宜選較長的波長

如259 am 為主要檢測波長。如提取過程樣品凈化較好，選228

am可提高檢測靈敏度。

三、分析流動相

在篩選流動相的過程中，發現氯氮平在柱上有相當強的保

留能力，這可能是其結構中的堿性哌嗪基與ods柱上殘留的硅

醇基作用之故。因而用甲醇：水(95：5)流動相沖洗近40分鐘

(1ml／min)，仍不能將氯氮平從分析柱上沖出。考慮氯氮平為有

機堿類，所以作者通過：(1)選用十二烷基磺酸鈉為離子對試劑；(2)在甲醇一水中加人一定量的銨鹽；(3)通過調節流動相的ph值等

3種手段試圖降低樣品在分析柱上的吸附，并使峰形得到改善，結

果文中選用的流動相達到預期目的。

四、其他

該方法通過在多種色譜條件比對保留值及比較陣列二極管

紫外檢測器所獲得的全光譜紫外圖．可作為定性判別藥物的依

據。但由于氯氮平的代謝物與氯氮平的色譜行為及紫外光譜很

相似，故在有條件的情況下，應結合其他方法確證。有關定量方

面的研究另行探討。

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(收稿：2004一ol一10)

第二篇：高效液相色譜系統中氣泡對檢測的影響及其解決方法

高效液相色譜系統中氣泡對檢測的影響及其解決方法

在我們進行液相色譜分析時，有時會遇到這樣一個問題：系統的流路中存在氣泡。

由于氣泡的存在，會造成色譜圖上出現尖銳的噪聲峰，嚴重時會造成分析靈敏度下降；氣泡變大進入流路或色譜柱時會使流動相的流速變慢或不穩定，使基線起伏。

造成上述現象的主要原因有三條：一是流動相溶液中往往因溶解有氧氣或混入了空氣而形成氣泡；二是系統開始工作時未能將流路中的空氣驅趕干凈；三是在注入樣品時不注意混入了空氣。

為了避免這類問題的出現，液相色譜實際分析過程中必須重視對流動相進行脫氣處理。常用的脫氣方法有以下幾種：

1.吹氦脫氣法 使用在液體中比空氣溶解度低的氦氣，在0.1Mpa壓力下，以約60ml/min流速通入流動相10-15min以驅除溶解的氣體。此法使用于所有的溶劑，脫氣效果較好，但在國內因氦氣價格較貴，本法使用較少；

2.加熱回流法 此法的脫氣效果較好；

3.抽真空脫氣法 此時可使用微型真空泵，降壓至0.05-0.07MPa即可除區溶解的氣體。顯然使用水泵連接抽濾瓶和G4微孔玻璃漏斗可一起完成過濾機械雜質和脫氣的雙重任務。由于抽真空會引起混合溶劑組成的變化，故此法適用于單一溶劑體系脫氣。對多元溶劑體系應預先脫氣后再進行混合，以保證混合后的比例不變。

4.超聲波脫氣法 它是目前實驗室使用最廣泛的脫氣方法，將配制好的流動相連同容器一起放入超聲波水漕中脫氣10-20min即可。該方法操作簡便，基本能滿足日常分析的要求。

5.在線真空脫氣法 把真空脫氣裝置串聯到儲液系統中，并結合膜過濾器，實現了流動相在進入輸液泵前的連續真空脫氣。此法的脫氣效果明顯優于上述幾種方法，并適用于多元溶劑體系。

其二，在液相色譜系統開始工作前，可以用注射器連接恒流泵的排空閥，抽入流動相，將流路中的空氣驅趕干凈。

其三，在注入樣品前注意排出樣品注射器中的空氣。