第一篇：日本藥物生殖毒性試驗技術指導原則簡介

日本藥物生殖毒性試驗技術指導原則簡介

來源: CDE 作者: 審評四部 王慶利 時間: 2002-11-28 15:23:18審評四部王慶利

摘要：日本是受沙利度胺危害最大的國家，對其具有深遠的影響。直至近日，日本對藥物生殖毒性的要求依然是ICH三方最為嚴格的一方。1963年日本制定了最初的胎兒試驗法，1965年進行了修訂。1975年進行了全面修訂，制定了所謂的三段生殖發育毒性試驗法，并在1984年和1988年進行了部分修正。在1993年接受ICH生殖毒性指導原則。其后日本對生殖毒性試驗方面進行了深入的研究，特別是在雄性生育力試驗方面作出了積極的探索，其研究的相關結果被納入了ICH指導原則中。2002年日本發布了生殖發育毒性試驗的最新版本，本文介紹了該指導原則的主要內容。關鍵詞：日本 藥物生殖毒性試驗 技術指導原則

基本目的利用哺乳動物檢驗藥物可能存在的一些對生殖發育的不良影響，并公開這些不良的影響，以用于對人的生殖發育的安全性/危險性的評估。試驗方案三段試驗方案是最實際的選擇，通過限定給藥時間來識別有可能發生損害的生殖發育階段，該方法在一般情況下幾乎對所有的藥物都有效。但應根據藥物特點、適應癥、適用人群、藥代動力學資料、其他藥理毒理資料等方面進行科學靈活的考慮，如單一試驗方案或兩段試驗方案等。無論選擇何種研究方案，必須能充分暴露和評價藥物的生殖毒性，并應說明選擇的依據。試驗動物不同的動物種屬對藥物的反應有很大差別，為了充分暴露毒性，更準確地外推至人，最好盡可能選用多種動物。但是從經濟或其他的理由來看，選擇多種動物是不現實的。在選擇試驗動物的時候應考慮：①是否宜于做為人類疾病模型。②受試物的代謝方式與人相類似。③由于在生殖毒性試驗開始之前就清楚受試物在人體的代謝方式往往是很困難的，故通常使用那些操作比較容易，而且對其一般的代謝方式和生殖生理非常熟悉的動物。④對動物自發畸形的了解和對已知的能誘發生殖毒性物質的敏感性。大鼠作為試驗動物使用的歷史很長，有關其生殖生理的知識及其一般代謝方式已經相當清楚，具有性成熟期、妊娠期和哺乳期都比較短的優點，是生殖毒性研究中獲得經驗最豐富的動物，背景資料較多。由于致畸敏感期毒性導致的毒性后果相對更嚴重，日本對致畸敏感期試驗特別重視，認為使用多種動物進行試驗，在結果類推于人時，能夠提供更為充實的試驗結果支持。因此，要求嚙齒類動物和非嚙齒類動物要分別使用一種以上。家兔是首選的非嚙齒類動物。家兔體形較大，胎仔觀察比較容易，給予可致胎兒畸形的藥物酞胺哌啶酮，可引起和人類似的畸形。同時，該段試驗使用家兔經驗豐富，背景資料較多。動物數未說明具體動物數的要求。應考慮：①動物對受試物的敏感性，②所采用試驗方法，③所要求的精確性等。但通常每組16～20只動物用于評價，國內外取得了一致。給藥途徑和頻率原則上是使用與人相同的給藥途徑。有多種給藥途徑時，首先應考慮能夠出現最強反應的給藥途徑。選擇與臨床不同的給藥途徑時，應提供依據。①經口給藥，通常使用胃管強制給藥。摻食法由于動物的攝取忌避，往往達不到所期待的劑量，或是給藥的劑量不準確，一般不采用。②注射給藥必須注意受試物的性狀及其局部毒性。靜脈注射要注意注射的速度和防止藥液的泄漏。使用穩定的注射速度是重要的。腹

腔內注射可能會對子宮直接產生作用，或是造成對胎仔胎盤移行，在對妊娠期動物試驗時，一般不用這種方法。③有時也使用皮下或肌肉內注射給藥。④對于臨床上局部應用（皮膚、點眼、點耳、坐劑等）的藥物，可采用其他給藥途徑代替。皮膚給藥時，應避免動物舔皮膚或摩擦籠子。脫毛的皮膚上發生損傷時，會造成吸收差異，應充分注意。作為皮膚給藥的替代途徑，往往采用皮下注射，這與皮膚的吸收途徑相類似。生殖毒性試驗應每日給藥。在分段試驗中，注意各段間要設定至少一天的重復期。給藥劑量試驗目的是研究是否會對動物生殖發育帶來不良的影響，研究劑量反應關系及其無毒性劑量。故盡量采用多個劑量，不能拘泥于三劑量設計。為了明確劑量反應關系，設置較窄的劑量間距是適宜的。適當預試驗會為藥量選擇提供科學依據。非妊娠和妊娠動物間往往是有毒性差異的，故預試驗首先采用非妊娠動物，然后用妊娠動物，這樣能夠更多地得到有用的信息。通常把每日1g/kg作為給藥劑量的上限。對照組陰性對照的試驗結果是分析整個試驗結果的必需資料。根據試驗者的判斷可設計陽性對照或比較對照。不適宜使用對生殖發育有致畸等不良影響的物質作為溶劑，如果不清楚溶媒和乳化劑對生殖發育的影響時，最好設計無處置對照組。給藥時期一般生殖毒性試驗中雄性動物交配前給藥的時間，被認為是涵蓋精子形成全過程和精子成熟所需要的時間。但是，根據以日本為中心的的國際共同研究結果，如果有雄性動物生殖器官的病理組織學檢查，縮短交配前的給藥時間是可能的。目前雄性動物交配前的給藥時間定為2周或4周。對2周以上的重復給藥試驗，對雄性動物生殖器官實施適當的病理組織學檢查，如果未見不良影響，雄性動物交配前的給藥時間可定為2周，但應就時間設定的理由和妥當性進行闡述。藥代動力學資料的運用關于生殖毒性試驗藥代動力學資料的運用，可以大致分為三個方面：①在試驗設計的制定中，有助于確定動物種系、給藥劑量和頻率、給藥途徑等。②可確定受試物的吸收程度，暴露量等。③有助于試驗結果的分析評價。檢查方法對親代動物存活和一般狀態觀察至少1次/日。對出現的毒性癥候，要詳細觀察其程度和過程。對發現死亡的動物應立即剖檢，分析死亡原因。妊娠動物在給藥期間每日測定體重。關于生殖器官的病理組織學檢查。通過2周以上的重復給藥毒性試驗而未見影響，也未見一般生殖毒性試驗中對受孕率的影響，可不進行特殊的檢查。但當發現對受孕率有影響時，必須選用適當的方法進行精確檢查?？筛鶕枰M行精子檢查，可檢出生殖器官病理組織學方法難以檢出的精子變化。結果分析采用適當的統計學方法進行結果分析評價。對胎仔和哺乳期幼仔試驗結果進行統計學分析的時候，一般是以窩單位。應注意與同期陰性對照和歷史對照的比較。結果分析出現困難的時候，實施追加試驗非常重要。當發現動物有畸形發育和其他不良影響時，在確認劑量反應關系和無毒性劑量的同時，還必須對其作用機制進行探究，就其對人的危險性作詳細的考察?？煞謩e推定對親代動物和對子代動物的無毒性劑量。對親代的毒性影響包括一般毒性影響（一般狀態、體重、攝食量、解剖所見等）和對生殖的影響（受孕率、妊娠時間、分娩、哺育等）；對子代動物的影響則為對其發育（胎生期死亡、發育遲滯、畸形、出生后生長發育障礙等）的影響。參考文獻：生殖發生毒性試驗。見：日本臨床前研究指導原則解說。藥事日報社，2002：49-62【致謝】彭雙清教授和王秀文教授分別提供了日本2002版及上一版指導原則的中文譯文。對他們的辛苦工作致以衷心的感謝！