第一篇：近代生物學發展史結課論文-基因組測序,干細胞基因工程與未來人類社會

基因組測序，干細胞基因工程與未來人類社會

基因組測序是對某個物種基因組核酸序列的測定，最終要確定該物種全基因組核酸的序列。

基因工程又稱基因拼接技術和DNA重組技術，是以分子遺傳學為理論基礎，以分子生物學和微生物學的現代方法為手段，將不同來源的基因(DNA分子)，按預先設計的藍圖，在體外構建雜種DNA分子，然后導入活細胞，以改變生物原有的遺傳特性、獲得新品種、生產新產品?；蚬こ碳夹g為基因的結構和功能的研究提供了有力的手段。

基因工程是生物工程的一個重要分支，它和細胞工程、酶工程、蛋白質工程和微生物工程共同組成了生物工程。所謂基因工程（genetic engineering)是在分子水平上對基因進行操作的復雜技術，是將外源基因通過體外重組后導入受體細胞內，使這個基因能在受體細胞內復制、轉錄、翻譯表達的操作。它是用人為的方法將所需要的某一供體生物的遺傳物質——DNA大分子提取出來，在離體條件下用適當的工具酶進行切割后，把它與作為載體的DNA分子連接起來，然后與載體一起導入某一更易生長、繁殖的受體細胞中，以讓外源物質在其中“安家落戶”，進行正常的復制和表達，從而獲得新物種的一種嶄新技術。健康一直以來就是全球問題之一，這一問題可以用從基因組學出發的健康和疾病的研究成果來改變。社會和其他的環境因素是產生這些健康狀況差別的主要原因；事實上，一些人會對遺傳因子是否扮演重要角色提出疑問。但是有些與疾病關聯的變異在不同人種間出現的頻率不同應該是導致健康狀況的某些不一致的原因，所以綜合考慮這些信息來預防和/或建立公共衛生戰略將是有益的。我們必須研究基因組學和健康狀況差異的關系，嚴格評價社會經濟學狀態、文化、辨別力、衛生行為、飲食、環境狀況和遺傳對其的不同影響。

在21世紀的過去現在和未來，糧食問題依然是人類社會面臨的一大問題，基因工程引發了一場新的綠色革命，利用基因技術，農業的生產效率獲得了全面提升。利用基因試驗技術，制成與光合作用有關的增強基因，培育收獲率高的農作物，成倍提高糧食產量；除農業外，畜牧業、漁業也發生了革命性變革，利用基因技術促進家畜的生長速度，并通過改變它們機體的成分，進而改變家畜的脂肪與瘦肉的比例，甚至制造攜帶人類基因并產生具有治療潛力的家畜。

一、基因工程在生產實踐中的應用

基因工程的一個重要目的是使外源目的基因在宿主細胞中表達，進行生物合成，以獲得所需要的具有生物活性的蛋白質及多肽產物。

1、發酵工業：用大腸桿菌生物人的生長激素釋放抑制因子是第一個成功的實例。這是把人工合成的基因連接到小型多拷貝質粒pBR322上，并利用乳糖操縱子β-半乳糖苷酶基因的高效率啟動子，構成雜種質粒而實現的。在9升細菌培養液中這種激素的產量等于大約50萬頭羊的腦中提取得到的量。除此之外，胰島素、人的生長激素、人的胸腺激素α-

1、人的干擾素、牛的生長激素，都可以應用于發酵工業的生產。藥物60多種。還有些很重要的基因，如纖維素酶的基因，也已在大腸桿菌中克隆和表達。利用遺傳工程手段還可以提高微生物本身所產生的酶的產量。如可以把大腸桿菌連接酶的產量提高500倍。

2、轉基因動植物 植物基因工程在農業中的應用發展迅速，從1996~2001年，在短短的5年中，全世界轉基因作物的種植面積就增長了30倍。我國轉基因作物的種植面積也迅速增長，目前已位居世界第四。主要用于提高農作物的抗逆能力，（如抗除草劑、除蟲、抗病、抗干旱和抗鹽堿等），以及改良農作物的平治和利用植物生產藥物等方面。

動物基因工程是在20世紀80年代開始發展起來的，主要用于提高動物生長速度、改善畜產品的品質、生產藥物和用轉基因動物作器官移植的供體。以下是幾點實例：

a．豆科植物固氮的功能涉及17個基因，分屬于7個操縱子，現在已能把它們全部引入酵母菌，而且能正常復制，得到基因的產物蛋白質多肽，但不具備生物活性。

b．改造玉米胚乳蛋白質而使人畜營養必須的賴氨酸和色氨酸成分增加的工作也正在著手進行。

c．1983．把豆類的蛋白質基因引入了向日葵，培育出“向日豆”。還將動物蛋白基因轉移給了馬鈴薯，希望培育出“肉薯”。

d．第二代遺傳工程：基因定位致突變。主要是用定位致變或人工合成基因的方法。通過改變編碼蛋白質基因中的DNA堿基次序，以達到定向改造蛋白質的性質，或創造出完全新型的蛋白質。

二、基因組測序、干細胞基因工程在醫學上的應用

1．基因治療和基因診斷

基因治療是把正?；驅氩∪梭w內，使該基因的表達產物發揮功能，從而達到治療繼斌的目的。如對細胞癌變原理的研究，其一個重大突破是發現了原癌基因。人體基因分離，移植以及在整體動物中的表達技術日趨成熟，使得基因治療研究的方法漸臻完善。已有報導，用帶有正常基因的無害病毒在體外導入病人的骨髓細胞;再將這種帶有重組正常的骨髓細胞送回患者體內，從而治療某些酶缺陷造成的遺傳疾病。基因治療方法還在探索之中，而現在切實可行的是限制性片斷長度的多態性（restriction fragment length polymorphism，RFLP）的應用。(1)原理：人類基因組中很多無害的堿基變化，可以產生或失去限制性酶切位點。新的切點可使RFL縮短，而切點的失去可使RFL增大。所以不同個體間，某種酶的RFLP也就可能不同。這種改變沒有表型效應，但以共顯性方式遺傳。(2)mtDNA的RFLP與群體分化起源，遺傳距離

(3)RFLP與偵破

(4)產前診斷。如果根據遺傳方式，能夠證明某種嚴重遺傳疾病是跟某一RFLP連鎖的，那么就可以利用RFLP做產前診斷。

a用cDNA探針，尋找與致病基因連鎖的RFLP。

b地中海貧血的基因診斷。圖11-68． 地中海貧血癥是不能產生β珠蛋白的一種重癥貧血，是由于β珠蛋白基因部分缺失引起的。

c苯丙酮尿證是由于苯丙氨酸羥化酶（PH）基因異常引起的。通過RFLP連鎖分析，做產前診斷。2．基因制藥

基因制藥不僅具有獨特的優勢，發展速度也很快。20世紀80年代初，第一種基因工程藥物——重組人胰島素投放市場后，利用轉基因的工程菌生產的藥物已有60多種，包括細胞因子、抗體、疫苗、激素等。20世紀90年代以來，我國自己生產的白細胞介素-

2、干擾素、乙肝疫苗等近20種基因工程藥物。

三、對環境的改善

解決地球污染的最佳途徑就是生命科學和基因科學。而轉基因技術在成功改良動植物本身的同時，也給環境帶來了潛在的好處。

木材是人們生活的重要建筑原料和造紙原料，全球每年森林砍伐的數量約3700萬公頃。隨著人口的增長，砍伐量還在逐年上升。然而，砍伐森林會對地球生態環境產生破壞作用。盡管許多國家和地區采取了相應的措施，如設置伐木配額，保護天然林，發展速生林等，但是由于林木成材周期相對較長，仍然不能滿足市場需要。森林面積迅速減少，已經是一個全球性的嚴重生態問題。

以色列和美國在研發轉基因白楊的試驗中，發現一種纖維素捆綁基因(CBD)，將這個基因轉入植物細胞后，植物的纖維素合成率、增長率得到大幅度提高，樹木的生長速度也提高了50%。美國還與瑞典合作，將生命周期僅4－6周的擬南芥的葉狀基因(LFY)轉入歐洲山楊中，獲得的轉基因山楊生長更快，一年就能開花成小材，而在一般正常情況下這類樹木成材需要10年或更長時間。

同時將轉基因抗病蟲技術應用到速生樹木的培育中，則可以使林木更健康地生長，進一步保證林木的成活。

土地荒漠化是全球性的環境災害。目前，全球荒漠化的面積占整個地球陸地面積的1/4，它已影響到世界六大洲的100多個國家和地區，全球約有1/6的人口生活在這些地區。全世界受荒漠化影響的國家有100多個，約9億人受到荒漠化的影響和威脅。如沙特和埃及兩國沙漠面積都占國土面積的90%以上，澳大利亞的沙漠和半沙漠面積占全國面積的35%。我國的荒漠化土地也占國土面積的27.46%。

為了能讓沙漠披上綠裝，人們一直在尋找沙漠綠化樹種。白楊樹能在干旱和鹽堿化土壤等惡劣條件下生存，因此一直在沙漠綠化中扮演著沖鋒隊的角色。人們根據白楊樹的這一特性，不斷研究，逐步揭開了植物抗旱的神秘面紗。以色列希伯萊大學的研究者在白楊樹細胞內分離出能保證它在惡劣條件下生存的特殊蛋白質，研究人員通過轉基因技術，進一步提高白楊樹中這種蛋白質的含量，這樣，可因地制宜地培育出抗逆性更強的沙漠綠化樹種。我國研究人員也正在將適合沙漠生存的沙棘、紅柳等植物的抗旱、抗寒基因轉移到常規樹種中，以培育適合西部氣候環境的樹種。轉基因沙漠綠化樹種的培育，無疑將為沙漠地帶生態環境的綜合改造找到一條新的途徑?；蚪M測序、干細胞基因工程主要在健康方面和環境方面造福人類，除此之外，它還能在社會其他領域有貢獻。就像HGP和相關研究在基礎生物學和健康方面開拓的新領域，同時為研究社會問題創造了機會，甚至可以使我們更全面地了解如何定義自己和他人。

作為一門新興的學科和新興的技術，我們再看到它有利的一面的同時，也要注意它不利一面，它所造成的危害我們現階段是看不見得，這就警示著我們，要合理利用這項技術，讓它更好地為我們人類服務。

第二篇：分子生物學與基因工程結課論文

《分子生物學與基因工程》

結課論文

Real-Time PCR在分子生物學中的應用

姓

名：XXX 學

號：AXXXXXXX 院

系：生命科學學院 班

級：生科XXX班 任課教師：XXX

二零一二年十二月 Real-Time PCR在分子生物學中的應用

XXX XXX大學生命科學學院 黑龍江哈爾濱 150xxx

摘 要：聚合酶鏈式反應（polymerase chain reaction，PCR）可對特定基因進行擴增，因此被廣泛應用于分子生物學領域中獲取特定基因或基因片段。定量PCR已經從基于凝膠的低通量分析發展到高通量的熒光分析技術，即實時定量PCR（real-time quantitative PCR）。該技術實現了PCR從定性到定量的飛躍，且與常規PCR相比，它具有特異性強、靈敏度高、重復性好、定量準確、速度快、全封閉反應等特點，目前實時定量PCR作為一個極有效的實驗方法，已被廣泛地應用于分子生物學研究的各個領域，成為了分子生物學研究中的重要工具。關鍵詞：實時定量PCR；基因擴增；分子生物學

1971年Khorana等最早提出PCR理論：―DNA變性解鏈后與相應引物雜交，用DNA聚合酶延伸引物，重復該過程便可克隆tRNA 基因‖。因當時基因序列分析方法尚未成熟、熱穩定DNA聚合酶還未發現及寡聚核苷酸引物合成仍處于手工和半自動階段，核酸體外擴增設想似乎不切實際，且Smith等已發現了DNA限制性內切酶，使體外克隆基因成為可能，Khorana 等的早期設想被忽視。1985年Mullis等用大腸桿菌DNA聚合酶 ⅠKlenow片段體外擴增哺乳動物單拷貝基因成功以及1988年Saiki等將耐熱DNA聚合酶（Taq酶）引入PCR，使擴增反應的特異性和效率大大提高，并簡化了操作程序,最終實現了DNA擴增的自動化，迅速推動了PCR的應用和普及。

自從PCR技術問世便很快成為科研、臨床診斷的熱點技術。但是傳統PCR技術在應用中一是不能準確定量，二是容易交叉污染，產生假陽性。直到1996年由美國Applied Biosystems公司推出的實時熒光定量PCR技術，上述問題才得到較好的解決[1]。實時熒光定量PCR（real-time fluoro-genetic quantitative PCR，FQ-PCR）是通過對PCR擴增反應中每一個循環產物熒光信號的實時檢測從而實現對起始模板定量及定性的分析。在實時熒光定量 PCR反應中，引入了一種熒光化學物質，隨著PCR反應的進行，PCR反應產物不斷累計，熒光信號強度也等比例增加。每經過一個循環，收集一個熒光強度信號，這樣就可以通過熒光強度變化監測產物量的變化，從而得到一條熒光擴增曲線圖。該技術不僅實現了對DNA模板的定量，而且具有靈敏度高、特異性和可靠性強、能實現多重反應、自動化程度高、無污染性、具實時性和準確性等特點，目前已廣泛應用于分子生物學研究和醫學研究等領域[2]。

1.實時熒光定量PCR技術概述

1.1 實時熒光定量PCR原理

1992年Higuchi等首次提出了采用動態PCR方法和封閉式檢測方式對目的核酸數量進行定量分析，熒光探針技術是基于標記基團的FRET原理而實現的，當某個熒光基團的發射譜與另一個熒光基團的吸收光譜重疊，且兩個基團距離足夠近時，能量可以從短波長（高能量）的熒光基團傳遞到長波長（低能量）的熒光基團，相當于短波長熒光基團釋放的熒光被屏蔽，這個過程稱為FRET。在探針5’端標記一個報告基團（R），在3’端標記一個淬滅基團（quencher，Q），兩者距離很近時（7-10nm），報告基團發出的熒光能被淬滅基團所吸收，并依賴其較高的S/N比值（信-噪比, signal-to-noise ratio）和良好的辨別能力進行定量檢測。

熒光擴增曲線擴增曲線可以分成三個階段：熒光背景信號階段，熒光信號指數擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產物量的變化。而在平臺期，擴增產物已不再呈指數級的增加。PCR的終產物量與起始模板量之間沒有線性關系，所以根據最終的PCR產物量不能計算出起始DNA拷貝數。只有在熒光信號指數擴增階段，PCR產物量的對數值與起始模板量之間存在線性關系，可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便，在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念：熒光閾值和CT值。熒光閾值是在熒光擴增曲線上人為設定的一個值，它可以設定在熒光信號指數擴增階段任意位置上，但一般將熒光域值的缺省設置是3-15個循環的熒光信號的標準偏差的10倍。每個反應管內的熒光信號到達設定的域值時所經歷的循環數被稱為CT值（threshold value）。CT值與起始模板的關系研究表明，每個模板的CT值與該模板的起始拷貝數的對數存在線性關系，起始拷貝數越多，CT值越小。利用已知起始拷貝數的標準品可作出標準曲線，其中橫坐標代表起始拷貝數的對數，縱坐標代表Ct值。因此，只要獲得未知樣品的Ct值，即可從標準曲線上計算出該樣品的起始拷貝數。[4][3]1.2 常用實時熒光定量PCR分類

1.2.1 實時熒光定量PCR熒光染料法

實時熒光定量PCR熒光染料法包括非飽和染料SYBR Green法和飽和染料LC Green法[5]。非飽和染料SYBR Green染料法定量成本低，方法簡便，不需要設計探針，但是特異性低。熒光染料能和任何dsDNA結合，因此它也能與非特異的dsDNA（如引物二聚體）結合，使實驗容易產生假陽性信號。引物二聚體的問題目前可以用帶有熔解曲線（melting curve）分析的軟件加以解決。飽和染料LC Green法與SYBR染料法工作原理是一樣的，但與傳統的熒光染料SYBR Green相比有如下優點：LC Green染料在進行PCR 時可以以飽和的濃度加入，不會抑制PCR反應，而Sybr Green 染料濃度過高會抑制PCR反應。從而，利用LC Green染料可以進行高分辨率熔解曲線分析。在進行HRM分析時，由于飽和染料占據了DNA雙鏈上每一對堿基上的空位，所以在雙鏈解鏈時，染料立即與雙鏈脫離，使得熒光信號發生較大的變化，而非飽和染料常發生位置上的遷移，從而對熒光信號沒有大的影響。除LC Green染料外，常用的染料還有Reso Light、Ever Green等，這些都是綠色熒光染料，最佳激發波長范圍440-470nm，發射熒光波長470-520nm。

1.2.1 實時熒光定量PCR探針法

實時熒光定量PCR寡核苷酸探針法包括TaqMan探針法和TaqMan-MGB探針法。TaqMan 探針法技術原理是利用Taq酶的5’—3’外切酶活性，在傳統PCR技術一對特異性引物的基礎上增加了一條熒光雙標記探針。該探針可與上、下游引物之間的DNA模板序列特異性結合。探針的5’端標以熒光報告基團，3’端標以熒光淬滅基團。在PCR退火復性期，探針與DNA模板特異性結合。在PCR延伸階段，Taq酶在引物的引導下，沿著模板合成新鏈，當移動至探針結合的位置時便發揮其5’—3’外切酶活性將探針降解成單核苷酸，使得熒光報告基團與淬滅基團分離，前者的熒光信號釋放并被檢測。因此，每合成一條新鏈就有一個探針被裂解并釋放出一個熒光信號。熒光信號強度與PCR產物量相對應。

MGB探針與傳統的TaqMan探針比較，有很大的優勢。它可以使探針的長度縮短，尤其對AT含量高的序列的 MGB探針的設計有很大的幫助；同時可以提高配對與非配對模板間的Tm值差異； 由于在探針的3’端的Quencher基團為不發光的熒光基團，并且與Report基團在空間的位置更接近，使雜交的穩定性大大提高，實驗的結果更精確，分辨率更高，可 以進行SNP分析。MGB探針實驗步驟簡單，使雜交的重復性大大提高。

1.3 實時熒光定量PCR定量方法

在實時熒光PCR中，模板的定量有兩種方法：絕對定量和相對定量。絕對定量指用已知的標準曲線來推算未知的樣本量；相對定量指在一定樣品中靶序列相對于另一參照序列的量的變化。由于每個模板的CT值與該模板的起始拷貝數的對數存在線性關系，利用已知起始DNA濃度的標準品可做出標準曲線。

1.3.1 絕對定量法

該方法是利用標準品作一條標準曲線，通過標準曲線對樣本進行定量。絕對定量標準品一般是用質粒DNA或是PCR擴增產物等制備的。標準品的量根據260nm的吸光度值計算得出。由于樣本的濃度完全是通過標準曲線來確定，所以合適的標準品是定量準確的關鍵。一方面標準品與未知樣本應具有一致的擴增效率，另一方面標準品的定量必須準確。這就要求標準品的擴增序列與樣本完全一致，制備的標準品純度要高，不應含有影響定量的因素如Dnase、標準品與未知樣本各自反應體系內的干擾因素要一致等。該方法的優點就是測定范圍很廣（10～1010拷貝），結果可直接通過軟件得出，不需額外計算。1.3.2 相對定量法

相相對定量是指在測定目的基因的同時測定某一內源性管家基因，該管家基因主要是用于核苷酸的拷貝數的比較、反映反應體系內是否存在PCR擴增的影響因素，通常選用的管家基因有GAPDH、β-2微球蛋白和rRNA。使用的β-actin、相對定量較為早期的方法是用一系列已知外參物做標準曲線，根據該標準曲線得到目的基因和管家基因的量，再將目的基因同管家基因的比值作為定量的最后結果。此種方法計算出未知樣品的量是相對于某個參照物的量而言，因此，相對定量的標準曲線比較容易制備，對于所用的標準品只需知道其稀釋度即可。在整個試驗中，待測樣品的量來自于標準曲線，最終必須除以參照基因的量，即參照基因是1×的樣本，其他的樣本為參照基因的n倍。由于管家基因在各種組織中的恒定表達，所以可用管家基因的量來作為標準，以比較來源不同的樣本，目的基因表達量的差異，此即相對定量。這一方法的缺陷是要求外參、目的基因和管家基因的擴增效率一致；此外加入已知起始拷貝數的內標相當于是進行雙重PCR反應，存在兩種模板相互的干擾和競爭[7]。

1.3.3 相對定量反應循環值（Ct）比較法

[6]即ΔCT值法，該方法是同時擴增待測靶基因片段和一個作為內參照的基因片段，一般是一個內源性管家基因片段。這兩個擴增反應可在2管中分別進行，也可在同一反應管中進行，測得兩者的CT值之差，即ΔCT。該方法不需要標準曲線。它是根據PCR擴增反應的原理，假設每個循環增加倍的產物數量PCR反應的指數期得到擴增產物的值來反映起始模板的量通過數學公式來計算相對量。比較Ct法與標準曲線法的相對定量的不同之處在于其運用了數學公式來計算相對量，前提是假設每個循環增加一倍的產物數量，在PCR反應的指數期得到Ct值來反應起始模板的量，一個循環（Ct=1）的不同相當于起始模板數2倍的差異。比較不同待測標本DNA的ΔCT值與正常標本DNA的ΔCT值的變化，即可對未知標本靶基因的原始拷貝數作出判斷，從而對病理狀態進行判斷或診斷。但是此方法是以靶基因和內源控制物的擴增效率基本一致為前提的，效率的偏移將影響實際拷貝數的估計[8]。最終結果也是靶序列和參考品的相對比值。該方法需確定靶序列和參考品的擴增效率是否一致；如不一致，則會影響結果的準確性。

2.實時熒光定量PCR技術的應用

實時定量PCR的應用非常廣泛。在科研方面，可定量分析各種基因的表達[ 9 ]、分析基因變和多態性[ 10 ]、分析細胞因子的表達

[ 11 ]、單核苷酸多態性（SNP）

[ 12 ]

測定及易位基因的檢測

[ 15 ]

[ 13 ]

等；在醫療方面，可用于免疫組分分析

[ 14 ]、臨床疾病早期診斷、病原體檢測、耐藥性分析

[ 16 ]、腫瘤研究[ 17 ]和微小殘留病變（MRD）[ 18 ]檢測等。

以下就其在基因工程研究、病原體的檢測和腫瘤分子診斷等方面的應用及其新進展作一簡述。2.1 基因工程研究領域

實時熒光定量技術的出現不僅加強了有關對基因的量的研究方法，而且也加強了對基因的質所發生變化的研究。它可以檢測基因突變和基因組的不穩定性，已經被廣泛應用于遺傳分析[19]。

2.1.1

基因表達研究

由不同的熒光報告基團標記的探針分別與野生型和突變基因雜交，探針雜交的效率和其后的切除與雜交有關。如果一種染料的熒光信號明顯強于另一種，說明它是一個純合子，如果熒光信號都增加則表明是一個雜合子。從使用范圍來看，它能用于檢測已知基因序列的任何遺傳病基因的突變和缺失及表達量的異常，從靈敏度方面看，它能從單細胞進行特異基因擴增，實現植入前基因診斷。PCR技術還可用于端粒酶的檢測。使用雙色熒光標記探針，結合不同的引物設計，可以實現對某些先天性疾病的定量檢測。應用實時熒光定量PCR方法對β地中海貧血癥（β地貧）患者β與γ球蛋白mRNA水平進行檢測，其結果特異性強、定量準確，為了解β地貧的分子病理機制及其臨床診斷提供了可靠的檢測數據。迄今對遺傳性物質改變引起的疾病還無法根治，只能通過產前監測和產前基因診斷，減少病嬰出生[20]

。因此，實時熒光定量PCR方法可用于產前監測和產前基因診斷。

2.1.2

單核苷酸多態性（SNP）及突變分析

單核苷酸多態性(single nucleotide polymorphism)主要是指在基因組水平上由單個核苷酸的變異所引起的DNA序列多態性。實時熒光定量PCR一個誘人的應用前景是用于檢測基因突變和基因組的不穩定性[21]。基因突變的檢測基于兩條探針，一條探針橫跨突變位點，另一條為錨定探針，與無突變位點的靶序列雜交。兩條探針用兩種不同的發光基團標記。如靶序列中無突變，探針雜交便完全配對，如有突變，則探針與靶序列不完全配對，會降低雜交體的穩定性，從而降低其熔解溫度（Tm）。這樣便可對突變和多態性進行分析。

2.1.3

轉基因研究

Tesson等確定了實時定量PCR的技術條件，利用兩種發光探針及適當的循環域值，擴增一個轉移后的基因和一個對照基因，以分析轉基因鼠的接合性[22]。同型結合的和異質接合的動物交配后其子代中轉基因的傳遞情況符合孟德爾遺傳規律，通過實時定量PCR檢測，該方法為轉基因動物的同型結合及異質接合提供了明確的鑒定結果。這項技術在轉基因動物繁育及基因劑量功能效應實驗中將有很大用途。

2.2 腫瘤的分子診斷

腫瘤的本質是細胞內基因發生了變化，是一種多基因異常的疾病，這些異常變化用實時熒光定量PCR方法都可以檢測出來。目前用此方法進行過端粒酶hTERT基因、慢性粒細胞性白血病ER基因、腫瘤MDR1基因等，盡管腫瘤發病的分子機制尚未完全闡明，但相關基因的遺傳學改變的積累是致癌性轉變的根本原因之一已得到普遍承認[23]。癌基因的突變和表達增加，在許多腫瘤早期就出現。實時熒光PCR技術不僅能有效地檢測到基因的突變，而且可以準確檢測癌基因的表達量。如定量結直腸癌淋巴結的癌胚抗原(CEA)mRNA的表達量，可作為診斷癌癥微轉移的重要依據[24]。目前，腫瘤患者的生存期已有所延長，但是緩解期的患者仍存在復發的危險，因此，微小殘留病變的檢測對于進一步調整治療方案至關重要。實時熒光PCR技術正成為檢測腫瘤微小殘留分子標志的一種必備工具[25]。Eckert等提出采用實時熒光PCR技術檢測兒童急性淋巴細胞白血病微殘留病灶，對兒童急性白血病的治療有重要指導意義。

2.3 病原體的分子檢測

目前，用此方法還進行了對人類結核桿菌、免疫缺陷病毒、肝炎病毒、流感病毒、巨細胞病毒、EB病毒等病原體的檢測[26]。同樣在國內，2004年針對SARS流行性病的檢測和診斷使得熒光定量PCR技術得以應用和發展。熒光定量PCR問世后的幾年中，積累了大量有關病原體核酸量與感染性疾病發生、發展和預后之間關系的資料，這些研究資料不斷豐富，將形成感染性疾病的臨床分子診斷標準。目前, 實時熒光PCR技術已應用于肝病、性病以及人類免疫缺陷病毒（HIV）等各種病原體的臨床診斷，為實現快速準確診斷提供了有效的檢測方法。

3.小結

時熒光定量PCR與其他一些技術的結合應用，是今后發展的方向，如與高級微型解剖技術結合后，能提高形態學損傷所至低水平擴增的檢測能力[ 27 ]、可定量分析石蠟包埋儲存樣本中的核酸[ 28]及少量細胞中的全部轉錄產物[ 29 ]等。此外，微陣列實驗中所選基因表達水平的測定仍需使用實時PCR技術[ 30 ,31 ]，利用該技術還可使等位基因特異表達分析以及生化武器證據甄別成為可能。

通過設計針對目的基因的特異性引物和探針，并優化反應體系和反應循環參數，已成功地建立了快速、靈敏、特異的Q-PCR檢測方法?？蓪崿F大量樣本同時檢測，并節省大量試驗時間和反應成本，為基因定量檢測和準確定量疾病相關基因的表達提供了有效的技術手段；同時實現對人類和動物疾病的早期診斷與基因分期、分型，以及對人類腫瘤轉移的早期發現及預后判斷[32]。因此Q-PCR技術將成為未來分子生物學實驗室必備的研究工具，在臨床上將有更加廣闊的應用前景。

參考文獻：

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第三篇：《綠色生活與未來結課論文》

《綠色生活與未來結課論文》

姓名：賈紅果學號：091006106 節次：周日3、4節

綠色生活

---倡議低碳生活做綠色公民

[摘要]

能源和氣候已經成為人類共同面對的兩大危機，而這兩方面都與高碳排放有關，高碳排放對地球環境產生嚴重破壞。為造福當代，優化人類生活環境，我們必須倡導低碳經濟。城市居民生活中碳足跡及危害嚴重，如何減少碳排量不容忽視。加大宣傳，提高對低碳生活的認識，為了人類的可持續發展，倡議在日常生活中過低碳生活。

[關鍵詞] 低碳；碳足跡；倡導低碳生活

近年來，全球氣候變幻無常、水土流失嚴重、溫室效應明顯、耕地沙化蔓延、生存環境日益惡化，嚴重威脅著當今世界全人類的健康與生命。就我們中國來說去年入秋以來，我國西南、江南、華南部分地區發生了嚴重干旱。在我國降雨量最為豐富的西南，大部分地區干旱少雨，旱魃肆虐。農田龜裂、塘壩干涸、河溪斷流……3月23日，來自國家防總的統計數據顯示，因干旱造成飲水困難的人數已達2271萬，其中旱情最嚴重的云、貴、川、桂、渝五省份達1805萬人；我國耕地受旱面積1.14億畝，其中，作物受旱面積8796萬畝(重旱2798萬畝，干枯1381萬畝)；待播耕地缺水缺墑2612萬畝。其中西南五省份耕地受旱面積達9654萬畝，占85%。08、09年的自然災害給了我們敲起了警鐘，再加上去年一部美國災難大片《2012》的應運而生更是讓世界各國人民為氣候變暖可能給人類造成的滅頂之災嚇出了一身冷汗。

也許，很多人到現在還沒有弄明白“哥本哈根”和“哈根達斯”的區別，或許還有很多人認為《后天》、《2012》只是純粹虛構的美國大片，全球氣候變暖會議只是和自己沒有多少關系的國際新聞……而實際上，當全球的政治精英們在丹麥首都哥本哈根為人類爭取最后一個機會時，地球變暖衍生的惡魔已悄悄地走近了你我，走進了洛陽，走進了河南，它并不遙遠，它就在你我身邊瞪著猙獰的眼睛，制造著一個接一個禍端。全球暖化，冰川消融，海平面抬升、臭氧層破裂？？我們生活的地球，正在遭受浩劫。專家指出，一切根源在于人類生活中燃燒煤炭。石油等排放的二氧化碳。因此，減少二氧化碳排放才是“治本”舉措。

然而減少二氧化碳自然就涉及到低碳，“戒除嗜好！面向低碳經濟”環境日主題提示人們，“低碳經濟”不僅意味著制造業要加快淘汰高能耗、高污染的落后生產能力，推進節能減排的科技創新，而且意味著引導公眾反思哪些習以為常的消費模式和生活方式是浪費能源、增排污染的不良嗜好，從而充分發掘服務業和消費生活領域節能減排的巨大潛力。轉向低碳經濟、低碳生活方式的重要途徑之一，是戒除以高耗能源為代價的“便利消費”嗜好。“便利”是現代商業營銷和消費生活中流行的價值觀。不少便利消費方式在人們不經意中浪費著巨大的能源

低碳生活”雖然是個新概念，提出的卻是世界可持續發展的老問題，它反映了人類因氣候變化而對未來產生的擔憂，世界對此問題的共識日益增多。全球變暖等氣候問題致使人類不得不考量目前的生態環境。人類意識到生產和消費過程中出現的過量碳排放是形成氣候問題的重要因素之一，因而要減少碳排放就要相應優化和約束某些消費和生產活動。在日常生活中。每個人都有自己的碳足跡，尤其是城市居民的一

些習以為常的生活方式和消費模式。每天都在產生巨大的能源消耗和溫室氣體排放量。因此生活中的碳足跡不可忽視。

一、居民日常生活成為碳排放的關鍵。

國家能源專家咨詢委員會主任徐錠明說。在日常生活中，每個人都有自己的碳足跡，尤其是城市居民的一些習以為常的生活方式和消費模式，每天都在產生巨大的能源消耗和溫室氣體排放量。吉林大學環境與資源學院教授王憲恩說：“據測算，1999年到2002年間，26％。二氧化碳排放的城鎮居民生活用能已占到每年全國能源消費量的大約30％是由居民生活行為及滿足這些行為的需求造成的?！痹谏钪刑幪幵凇胺盘肌北热纾喝绻愠孙w機旅行2000公里，那么你就排放了278千克的二氧化碳；如果你用了100度電。那么你就排放了785千克二氧化碳：如果你自駕車消耗了100公升汽油，那么你就排放了270千克二氧化碳

二、很多生活習慣改善有利于減少碳排放。

調查顯示，我國城市家庭平均待機能耗相當于這些家庭每天都在使用著一盞15瓦到30瓦的長明燈，占城市家庭用電量的10％。僅彩色電視機一項。一年下來就浪費電力幾百億千瓦時。相當于幾個大型火電廠白白發電。在城市住房、汽車等高碳排放領域的消費過程中。一些城市居民存有“你追我趕”式的攀比心理。還有追求大戶型。大排量53的“好大心理”。用“碳排敖計算器”，簡單估算一下便知：100平方米的住房，一輛轎車的三口之家，一年的碳排放近百噸。養成節約用能源好習慣意義重大。人們不好的行為不僅帶來了沙塵，還有暴風雪、寒流，暴雨、熱浪等等極端天氣接踵而來。專家預測，全球氣候還會進一步變暖，并且變暖的幅度有可能加大，美國的《科學》雜志，刊登了一項最新研究成果，稱2009年之后，至少有一半的年份，全球平均氣溫將超過歷史上最高的1998年，將有更多的極端天氣頻繁出現，人類不得不面臨南北半球冰火兩重天的考驗。同時聯合國評估報告提醒，人類如果不重視環保，到本世紀末，平均氣溫最多將上升6.3攝氏度，這是一個怎樣可怕的數字？簡單講，如果平均氣溫上升3攝氏度，僅在亞洲，每年就有700多萬人，面臨洪水侵襲。如果氣溫上升4攝氏度，全球就會有30多億人，面臨缺水問題。然而這些生活習慣的改善卻能減少大量碳的排放。

三、倡議過低碳生活，做綠色公民。

低碳生活，對于我們普通人來說，是一種態度，而不是能力，我們應該積極提倡并去實踐低碳生活，過低碳生活，創造綠色家園，政府和企業需要行動。我們廣大公民同樣大有可為！倡議大家，從點滴生活小事做起，從現在開始。購買簡單包裝的商品，選購綠色產品、綠色食物，綠色消費；少用一次性制品如木筷。紙杯、紙巾、塑料袋等：減少垃圾。進行垃圾分類。回收資源；使用節能電器，電器使用后完全關閉電源，節約用電；適度使用空調；徒步或騎自行車上班或乘公交車，為節能減排出力；使用電子文檔，不要紙張。少用紙張：多植樹。愛護森林。

面對全球暖化的大危機，作為大學生的我們也要為祖國、為世界來自己的一份力。我們不能阻止氣溫的上升，不能控制兩極冰川的融化，不能避免云南的干旱。因為它們是已經發生的事實了，我們只能盡量減少災難對我們造成的影響。

總之，只要每個公民盡自己的一份力量為低碳生活做出應有的貢獻，我們的國家、整個世界的環境將會有驚喜的改善，朋友們為了大家更為了我們自己讓我們攜起手來做綠色公民為我們的明天造福吧！

[參考文獻]

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【3】傅德田，《科學發展觀指導下的生態文明建設》[J]，《杭州日報》2009年5月29日6版

第四篇：研究生政治課結課論文——從近代文化發展史反思中國傳統文化發展的今天

從近代文化發展史反思中國傳統文化發展的今天

季羨林說過：“對本民族文化的珍視，是一個國家屹立千年的基石”。從這個角度來說，中國，這個泱泱五千年的文明古國，對文明和文化的傳承，自然是成功的。璀璨的華夏文化也確實值得我們每一個中國人去視若珍寶。但是當下中國出現的文化危機和社會道德的集體缺失卻一再拷問著我們，中國文化的發展到底出了什么問題？

前些日子，我一直在讀將夢麟先生的《西潮》，這本書其實是蔣氏的回憶錄，同時也是一部鮮活的中國近代史。蔣先生幼時深受中國傳統文化教育的影響，青年時留學美國近十年，有著中西文化背景。歸國后，擔任國民政府教育部長，主政北大15年，最早提出中西文化觀，對中國文化的發展很有發言權。從書名《西潮》中不難看出，蔣氏已經意識到近代中國排山倒海般的社會變革，歸根結底是源于疾風驟雨般的文化變革。從書中“西風東漸”的歷史開始反思，我試圖尋找今天中國文化發展的癥結和出路。

中國社會當下產生種種文化道德的問題，我認為最根本原因是傳統文化教育的缺失。蔣夢麟等近代國學大師大多認為，中國文化重道德，而西方文化重科學。照此說來，如果我們對傳統文化教育得到位，那么中國人的道德素養應該至少不亞于西方，可是，現實似乎離這樣的假設越來越遠。

可能有人會說，我們天天講弘揚傳統文化，大力發展民族文化，怎么會缺失？欲解釋此問題，就要先梳理一下中國文化發展的脈絡。

近代以前，以儒家思想為主體，經幾千年的積累和發展，形成了一套文化體系，我們稱之為中國傳統文化。中國傳統文化的核心是傳統道德，那時中國人對傳統文化的信奉類似于西方人對宗教的信奉。隨著近代中外戰爭中中國的頻頻失利，一部分人看到了西方科學的力量，提出了“中體西用”的主張，中學為體，西學為用恰好是這一時期傳統文化優越感的體現。隨著封建王朝的滅亡和革命活動的興盛，尤其是到五四運動之后，學者對中國傳統文化進行了大量的批判，中國走上全面西化的道路。同時，馬克思主義傳到中國，隨著新中國的成立，逐漸成為思想主體。

梳理之后，不難發現，五四運動之后，從崇尚西方科學與制度的全面西化思潮，到建國初期全面否定傳統文化，大力推行馬克思主義，再到文化大革命的十年浩劫，中國傳統文化的傳承已經出現了大的斷層。這種斷層是過去幾千年都不曾發生過的。因此這種斷層的影響也在今天日漸顯現。所以我認為，過去幾十年對傳統文化的過分抨擊，其實是對民族文化根基的嚴重摧殘，靈魂沒有歸宿，道德滑坡在所難免。難免有人哀嘆：中國識字的人多了，懂國學的人卻越來越少了。

發展中國文化，我以為以發展民族文化為最重。中國傳統文化的精華推崇人心道德，這是我們民族寶貴的財富，同時也是民族賴以生存發展的根基，千萬失之不得，否則文化危機就是民族危機。

談到發展，首先要樹立起國民對傳統文化的自信。過去長時間地過分批判，使國民對傳統文化失去自信。中國傳統文化固然有不符合社會發展的部分，但我們也應看到其精華所在，去粗取精而不是全盤否定，對傳統文化應有符合當今時代的新解。從政策面上，應全面開展國學教育，提升國學在教育體系中的地位。國學是民族之學，其地位應與科學相當，只重科學不重國學就會導致種種社會問題。讓國人從小接受優秀傳統文化的熏陶，激發青少年對中國國學的興趣，是一件功在千秋的事業。今天播下民族文化的種子，在下一代的心中必會生根發芽。重塑傳統文化的地位是一項長期的工作，只有從現在開始，真抓實干，才能迎來中國文化事業光輝的明天。