第一篇：枸杞中黃酮類化合物提取與分離純化工藝的研究進展?（范文）

龍源期刊網 http://www.tmdps.cn 枸杞中黃酮類化合物提取與分離純化工藝的研究進展

作者：于惠 康磊等

來源：《安徽農業科學》2015年第05期

摘要近幾年，隨著枸杞的化學成分和藥理作用的廣泛研究，枸杞總黃酮因具明顯的抗氧化、清除自由基、提高免疫力等活性而逐漸成為研究熱點，因此人們采用多種方法對枸杞黃酮進行提取分離。在此從枸杞黃酮的提取和分離提純兩方面進行總結，為今后的分離提純提供參考依據。

關鍵詞 枸杞；黃酮；提取；分離純化；研究進展

中圖分類號 S567；TS225.1 文獻標識碼 A 文章編號 0517-6611（2015）05-062-03 Research Progress of Separation and Extraction Flavones in Lycium barbarum YU Hui1，2，KANG Lei1，2，ZHANG Rui1，2 et al（1.State Key Testing Laboratory of Coal Chemical，Yinchuan，Ningxia 750002； 2.Chemical Laboratory Center of Ningxia Baota，Yinchuan，Ningxia 750002）

Abstract In recent years，the chemical composition and pharmacological function of Lycium barbarum has been extensively studied，the total flavones in Lycium barbarum has been gradually become a hot topic because of significant antioxidation，removal of the free radicals，enhancing immunity and other activities.Thus，many researchers used variety methods to separate and extract the total flavones from Lycium barbarum.The separation and extraction of total flavones from Lycium barbarum were summarized，providing a reference for separation and purification in future.Key words Lycium barbarum； Flavones； Extraction； Separation and purification； Research progress 基金項目 寧夏自然科學基金項目（NZ13255）。

作者簡介 于惠（1986-），女，遼寧凌源人，工程師，碩士，從事分離型功能高分子材料研究。

收稿日期 20141226

龍源期刊網 http://www.tmdps.cn 枸杞（Lycium Barbarum）為茄科枸杞屬，多年生落葉小灌木植物，是我國傳統的藥食兩用同源植物之一[1]。枸杞的藥用部位較多，明朝李時珍《本草綱目》記載：“春采枸杞葉，名天精草；夏采花，名長生草；秋采子，名枸杞子；冬采根，名地骨皮”。枸杞子為枸杞的成熟干燥果實，其活性成分主要包括色素類、多糖類、黃酮類化合物、多種氨基酸、維生素及微量元素[2]。枸杞子具有滋補肝腎、益精明目之功效，現代臨床上廣泛用于調節免疫功能[3]、抗氧化[4]、抗輻射[5]、抗腫瘤[6]、清除自由基[7]、促進益生菌細胞生長及抗衰老[8]等。枸杞葉，又名天精草，為茄科植物枸杞或寧夏枸杞的嫩莖葉，功能補肝益腎、生津止渴、虛勞發熱。枸杞葉中的活性成分與枸杞子類似，其蛋白質含量極其豐富，另外據報道枸杞葉中含有豐富的有機鍺，具有增強免疫力、延緩衰老的功效[9]。枸杞根皮，又稱為地骨皮，為茄科、枸杞屬植物枸杞的根皮，可入藥，具有清熱、涼血、降壓、清肺降火等功效。我國枸杞有7個種3個變種，其中以寧夏地區生產的寧夏枸杞（Lycium Barbarum L.）最為著名[10]，青海、甘肅等地的枸杞品質也很高。近幾年，枸杞的化學成分和藥理作用被廣泛的研究，作為枸杞中重要的活性物質之一，枸杞總黃酮因具明顯的抗氧化、清除自由基、降血脂、降血糖、治療心腦血管疾病、抗腫瘤、抗衰老、提高免疫力等活性而逐漸成為研究熱點[11-12]。

枸杞中黃酮類化合物的提純，主要包括以下兩方面：一方面是提取，基于植物不同部位所含黃酮類化合物的結合狀態不同，如在花、果、葉中以甙為主要存在形式，在木質部分以甙元為主要存在形式，需要根據被提取物的類型和理化性質選擇合適的提取溶劑和提取方法；另一方面是分離純化，目的是盡可能充分將黃酮類化合物與其他成分分開，并進一步分離得到黃酮類成分單體。筆者在此對近年來枸杞中黃酮類化合物的提取與分離純化工藝的研究進展進行了系統總結。1 提取方法 1.1 有機溶劑提取法

有機溶劑提取法是國內外使用最為廣泛的一種提取方法，主要以乙醇、甲醇、石油醚等有機溶劑作為提取溶劑，在索氏提取器中進行抽提。通常采用乙醇作為提取溶劑，提取的過程中，乙醇的濃度對黃酮類化合物的提取存在影響。高濃度的醇（90%～95%）適用于提取黃酮甙元類化合物，而低濃度的醇（60%～70%）更適合提取黃酮甙類化合物[13]。該方法操作簡單、成本低，易于大規模生產，但工藝繁瑣，雜質含量也較高，回收率低。李銘芳等采用70%的乙醇為溶劑回流提取寧夏枸杞中的總黃酮，通過正交試驗，研究發現最優提取條件為提取溫度70 ℃、提取時間2.0 h、固液比為1∶20[14]。劉蘭英等以70%乙醇對枸杞葉進行回流提取，并通過正交試驗確定了提取工藝條件為70%乙醇、料液比1∶

8、提取時間3 h、提取3～8 nm碎粒，黃酮得率為3.72%[15]。1.2 超聲輔助提取法

超聲波的作用機理是在被提取樣品和溶劑之間產生聲波空化效應[16]，破壞植物細胞并加速溶劑分子之間的運動，使植物細胞中的有效成分較易溶解于溶劑中，加速了植物有效成分的龍源期刊網 http://www.tmdps.cn 浸出提取。另一方面，超聲提取過程中的空化作用還會增大樣品與提取溶劑之間的接觸面積，從而提高植物中活性成分從固相轉移到液相的傳質速率[17]。因此，對植物有效成分采用超聲提取，可以在很大程度上加快提取速度，縮短了提取時間，進而提高了天然產物中活性成分的提取速率和提取量。該方法節省提取時間、提高提取效率、試驗設備簡單、操作方便，在工業生產中具有較為廣闊的應用前景。王漢卿等通過正交試驗優選出超聲輔助提取枸杞葉總黃酮的最佳工藝條件為乙醇體積分數 65%、乙醇用量 1∶60、超聲提取時間 35 min、超聲溫度 70 ℃；利用優選出的最佳超聲提取工藝測定比較不同采收期枸杞葉中的總黃酮含量，結果為5月中旬含量最高[18]。孫化鵬等通過正交試驗法優選出超聲輔助提取枸杞葉總黃酮的最佳工藝條件為乙醇濃度75%、乙醇用量1∶40、超聲提取時間30 min、超聲提取溫度50 ℃[19]。1.3 微波輔助萃取法

微波萃取又稱微波輔助萃取（Miacrowaveassisted extraction，MAE），是利用微波的熱效應對樣品及其有機溶劑進行加熱，從而將目標組分從樣品基體中分離出來的一種新型高效分離技術。微波萃取過程是高頻電磁波穿透萃取介質到達物料內部，微波能轉化為熱能，物料內部的溫度迅速上升，使物料內部的壓力超過細胞壁膨脹所能承受的壓力，導致細胞膨脹破裂，從而促使有效成分自由流出，并溶解于萃取介質中[20]。微波加熱不同于傳統的加熱模式，即熱量由外向內傳遞，而是直接作用于內部和外部的介質分子，使整個物料同時被加熱，即“體加熱過程”，從而可克服傳統的傳導式加熱方式所存在的升溫較慢的缺陷。同時，微波所產生的電磁場可加速被萃取組分的分子由固體內部向固液界面擴散的速率，從而使萃取速率提高數倍，并能降低萃取溫度，最大限度地保證萃取物的質量[21]。

與其他的提取方法相比較，微波輔助萃取具有如下優點：①選擇性好。由于樣品中各組分對微波的吸收能力存在差異，從而導致其溫度不同，致使各組分從基體中分離的速度也存在差異。因此，微波萃取能對萃取體系中的不同組分進行選擇性加熱，可以使目標組分直接從基體中分離。②熱效率較高。微波加熱是內外同時加熱的模式，由微波能量直接轉化為熱能，沒有熱傳遞造成的溫度梯度和熱量損失，因而加熱均勻，熱效率較高。③質量穩定。可以在較低的溫度下完成萃取，有效地保護了被提取物的有效成分。④操作簡單。微波萃取無需干燥等預處理，簡化了工藝，減少了投資。

巨敏等以枸杞為原料，用乙醇作為提取劑，采用微波提取法對枸杞中總黃酮進行提取，以二次同歸正交試驗設計對結果進行優化分析，得出的最佳條件為乙醇濃度68.3%、微波時間100 s、微波溫度73 ℃、微波功率300 W、液料比14.7∶1.0（ml/g），在最佳條件下，總黃酮的提取率為19.52 mg/g[22]。孫波等以蘆丁為對照品，采用單因素試驗和正交試驗時影響枸杞總黃酮提取率的因素進行了考察，并優選出最佳提取工藝為乙醇濃度70%、料液比1∶30（g/ml）、微波輻射功率400 W、溫度120 ℃、提取時間8 min，在此條件下枸杞總黃酮的含量為18.3 mg/g[23]。1.4 磁場強化萃取法

龍源期刊網 http://www.tmdps.cn 磁場強化萃取是一種借助外加磁場以強化化工分離過程的新技術，被稱為“綠色分離技術”，它可以利用磁場產生的特殊能量來改變抗磁性物質的微觀結構，使其理化性質發生變化[24]，同時通過影響反應速率來起到強化萃取的作用。周蕓等以新鮮枸杞為原料，采用磁場強化萃取法提取枸杞黃酮，通過正交試驗，得出優化磁場處理的最佳條件為：在磁感應強度 640 mT、磁化時間 40 min、磁化溫度 65 ℃、浸提回流時間 60 min 的條件下，枸杞黃酮的提取率可達290.81 mg/100g[25]。李冰等發明一種利用磁性吸附樹脂及外加磁場分離純化葛根黃酮的方法，具體的工藝流程如圖1所示。首先，將葛根粉碎置于微波萃取罐中，加入95%乙醇，微波萃取除去雜質后得葛根黃酮提取液；其次，將磁性吸附樹脂裝入樹脂柱，置于可調磁場中，將葛根黃酮提取液流過樹脂柱，收集解吸液，濃縮干燥后得葛根黃酮產品[26]。1.5 高壓均質提取法

高壓均質提取法是指利用柱塞泵將被分離物保持在一定的壓力條件下，液料高速流過一個狹窄的縫隙時而受到強大的剪切力，同時還有液料與金屬環接觸產生的碰撞力以及由于靜壓驟降和驟升而產生的孔爆發力等綜合力的作用，使原料中不透明、粒徑較大的懸濁液轉化成穩定細小的懸濁液的過程[13]。高壓均質提取法可以將樣品中的組成結構破粹到納米級，利于目標成分的溶出，大大提高了樣品的提取率。同時，操作時溫度較低，因此對樣品的破壞力較小，可以保持樣品原有的性質。因此，該方法將在天然活性成分的提取方面展現越來越重要的作用[27]。

劉增根等考察了高壓均質提取柴達木枸杞葉有效成分的最佳工藝及對有效成分進行了純化，發現高壓均質提取柴達木枸杞葉總黃酮的最佳工藝條件為乙醇體積分數 80%、料液比 1∶

10、均質壓力 60 MPa、提取時間 30 min，在該條件下，提取物中蘆丁質量分數為 10.53%，總黃酮質量分數為32.61%[28]。2 分離純化方法

2.1 大孔吸附樹脂吸附分離法

大孔吸附樹脂（Macroporous Adsorption Resin，MAR）是由功能單體、交聯劑等可聚合成分與致孔劑、分散劑等添加劑經懸浮或反相懸浮聚合制備而成的一類球狀的多孔高分子吸附分離材料，其內部存在大大小小、形狀各異、相互貫通的孔穴，即使在干燥狀態下，其內部均具有較高的孔隙率，且存在大孔結構（一般在100～1 000 nm）。MAR不同于離子交換樹脂，其本身不含可交換性功能基，它的吸附性主要依靠范德華力（包含色散力、定向力和誘導力等）和氫鍵的作用，同時，網狀結構和很高的比表面積又賦予其良好的吸附性能和篩分性能，因此，MAR是一類不同于離子交換樹脂的、集吸附和篩分性能為一體的分離型功能高分子材料。目前，國內外MAR的生產廠家主要有美國RohmHass、日本三菱化成公司、天津南開大學化工廠、華北制藥廠樹脂分廠、西安藍曉科技有限公司、西安藍深特種樹脂有限公司、滄州寶恩化工有限公司、天津海光化工有限公司等，部分廠家產品的性能如表1～3所示[29-30]。

龍源期刊網 http://www.tmdps.cn 目前，MAR主用于皂苷類、黃酮及其苷類、蒽醌及其苷類、酚酸類、色素類及生物堿類等的分離純化。利用MAR分離純化中草藥中的有效成分，有以下幾點優勢：首先，由于MAR獨特的吸附性和篩分性，利用MAR分離純化了多種單味中草藥的有效成分，這為其他中草藥的提取研究奠定了基礎；其次，不斷有新的MAR問世，這為中草藥有效成分的分離富集提供了可供選擇的保障。

胡曉蓮等通過優選MAR，并考察其工藝參數，篩選合適的吸附樹脂DA201，最佳的工藝條件為上樣量10柱床體積（BV）、上樣液濃度15 mg/ml、上樣液流速1 BV/h，上樣液pH=3，解吸洗脫劑乙醇濃度為40%、乙醇用量8 BV，富集純化總黃酮得率75.85%，總黃酮純度35.70%[31]。何彥峰等通過比較11種MAR的靜態吸附解吸性能，篩選出適合純化柴達木枸杞總黃酮的樹脂類型HPD400；并進行動態吸附解吸試驗，利用單因素和響應面法優化MAR純化柴達木枸杞總黃酮，得到的的最佳工藝條為：以16.0 ml pH為4.0的柴達木枸杞總黃酮粗提液上柱，流速1.0 ml/min，充分吸附后用3 BV去離子水洗柱，然后用23.0 ml 80%乙醇溶液以流速1.0 ml/min進行解吸，枸杞黃酮的平均回收率為89.92%，含量為27.62%，約為純化前總黃酮含量的5倍左右[32]。2.2 高效液相色譜法（HPLC）

高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）又稱“高壓液相色譜”，以液體為流動相，采用高壓輸液系統，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內各成分被分離后，進入檢測器進行檢測，從而實現對試樣的分析。HPLC具有高壓、高效、高速、高靈敏度及應用范圍廣的特點。

董靜洲等對寧夏枸杞果實黃酮提取液進行色譜柱分離，檢測波長為259 nm，流動相 A為1.0%乙酸，流動相 B為甲醇，流速為1.0 ml/min；并對我國寧夏枸杞六大產區的枸杞果實總黃酮提取液進行了 HPLC 分離和 HPLC 指紋圖譜比較[33]。張自萍等以10個寧夏不同產地的寧夏枸杞主栽品種“寧杞I號”樣品建立枸杞黃酮類化合物指紋圖譜共有模式，采用“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統”軟件進行數據處理，對15個不同來源的枸杞樣品進行了分析[34]。

安徽農業科學 2015年 3 展望

近幾年，隨著人們對枸杞黃酮的化學成分和藥理作用不斷深入研究，使枸杞黃酮愈來愈受到人們的重視。因此，通過不斷地探索枸杞黃酮提取和分離純化工藝研究的新方法，仍將是提純枸杞黃酮的熱點研究方向。

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第二篇：2011(第三屆)醫藥化工分離純化技術發展與工藝優化研討會盛大開幕

2011（第三屆）醫藥化工分離純化技術發展與工藝優化研討會盛大開幕

2011年10月25日由中國醫藥化工網和北京中企縱橫科技有限公司主辦的2011（第三屆）醫藥化工分離純化技術發展與工藝優化研討會在杭州孔雀大廈大酒店四層藍孔雀廳隆重召開。中國醫藥工業研究總院副院長、研究員，上海交通大學藥學院副院長，本屆大會主席陳代杰研究員擔任大會主持人。會議共有參會用戶100人左右，中國色譜網（www.sepu.net）作為本屆大會支持單位、合作媒體，參加了會議。

大會開幕式

本屆大會主席張玉奎院士

本屆大會主席陳代杰研究員

中國醫藥化工網執行副總經理蘇沛先生

大會開幕式由中國醫藥化工網技術總監張明女士（教授級高級工程師）主持。中國科學院院士，中國分析測試協會副理事長，中國化學會色譜專業委員會主任，大連化學物理研究所研究員，本屆大會主席張玉奎院士；中國醫藥工業研究總院副院長、研究員，上海交通大學藥學院副院長，本屆大會主席陳代杰研究員；中國醫藥化工網執行副總經理蘇沛先生分別在開幕式上致辭。

格林蘭生化設備有限公司

環球分析測試儀器有限公司

梅特勒-托利多自動

天津博納艾杰爾科技有限公司

力揚企業有限公司

本屆大會共有參展企業6家，分別是：天津博納艾杰爾科技有限公司、梅特勒托利多、環球分析測試儀器有限公司、格林蘭生化設備有限公司、力揚企業有限公司等。

大會共安排15場報告，其中專家報告7場，企業報告8場。與會代表們聆聽了來自各地的業內最著名的研究院所、大專院校與優秀企業的十數位權威專家的精彩報告，還與專家及業內同仁進行了零距離咨詢與交流。這對于在制藥企業中從事分離純化和分析檢測技術工作的實驗室和車間技術人員也是一次難得的高水平的培訓機會。http://www.sepu.net/Article/66209-1.shtml

第三篇：應用大孔吸附樹脂分離純化工藝生產的保健食品申報與審評規定(試

【發布單位】國家食品藥品監督管理局 【發布文號】國食藥監注[2005]202號 【發布日期】2005-05-20 【生效日期】2005-07-01 【失效日期】 【所屬類別】政策參考

【文件來源】國家食品藥品監督管理局

應用大孔吸附樹脂分離純化工藝生產的保健食品申報與審評規定（試行）

(國食藥監注[2005]202號)

根據《保健食品注冊管理辦法（試行）》，為規范、統一營養素補充劑等申報與審評行為，我局制定了《營養素補充劑申報與審評規定（試行）》、《真菌類保健食品申報與審評規定（試行）》、《益生菌類保健食品申報與審評規定（試行）》、《核酸類保健食品申報與審評規定（試行）》、《野生動植物類保健食品申報與審評規定（試行）》、《氨基酸螯合物等保健食品申報與審評規定（試行）》、《應用大孔吸附樹脂分離純化工藝生產的保健食品申報與審評規定（試行）》、《保健食品申報與審評補充規定（試行）》8個與保健食品申報與審批相關的規定。上述規定于2005年7月1日起正式實施，現予以通告。

國家食品藥品監督管理局

二○○五年五月二十日

應用大孔吸附樹脂分離純化工藝生產的保健食品申報與審評規定（試行）

第一條第一條 為規范應用大孔吸附樹脂分離純化工藝生產的保健食品審評工作，確保保健食品的食用安全，根據《 中華人民共和國食品衛生法》和《 保健食品注冊管理辦法（試行）》，制定本規定。

第二條第二條 應用大孔吸附樹脂分離純化工藝生產的保健食品是指產品生產過程中及原料生產過程中應用了大孔吸附樹脂分離純化工藝的保健食品。

第三條第三條 申請應用大孔吸附樹脂分離純化工藝生產的保健食品除按照保健食品注冊管理的有關規定提交資料外，還應提供以下資料：

（一）大孔吸附樹脂的相關資料

1、大孔吸附樹脂規格標準。標準內容應包括大孔吸附樹脂名稱、牌（型）號、結構、合成原料（主要原料、交聯劑、致孔劑、分散劑等名稱和規格）、外觀、極性和粒徑范圍、含水量、濕密度、干密度、比表面積、孔徑、孔隙率、孔容等，并提供大孔吸附樹脂標準級別等。

2、大孔吸附樹脂使用說明書。使用說明書的內容應包括：

（1）大孔吸附樹脂性能簡介、適用范圍、主要原料和添加劑種類與名稱；

（2）殘留物（包括未聚單體、交聯劑、主要添加劑）及其殘留量檢測方法和限量標準及依據；

（3）使用方法和注意事項，包括新大孔吸附樹脂的預處理方法、再生處理方法和操作注意事項、貯存條件等，以及可能出現異常情況的處理方法。

3、生產批號、生產時間、產品檢驗報告書。

4、相關證明文件。大孔吸附樹脂生產企業的企業名稱、地址、電話、營業執照及相關生產許可證件的復印件等。

（二）應用大孔吸附樹脂進行分離純化的制備工藝研究資料

1、制備工藝中應用大孔吸附樹脂進行分離純化的目的與依據。詳細說明應用大孔吸附樹脂進行分離、純化的目的和必要性，并提供相關研究或文獻資料。

2、大孔吸附樹脂的預處理方法和合格標準。預處理方法包括考察預處理溶劑的種類、用量、浸泡時間、流速、溫度、pH值等工藝參數和操作規程。

3、生產工藝的研究資料。大孔吸附樹脂型號的選擇、比上柱量、比吸附量、比洗脫量、樹脂柱的徑-高比、提取液的適宜上柱溫度、pH及流速、解吸附溶劑及其條件的選擇、解吸附終點判定方法等研究資料，并將上述資料作為該產品的生產工藝的一部分。

4、大孔吸附樹脂再生方法的確定。大孔吸附樹脂經使用后，吸附能力下降，應進行再生處理。根據功效成分和大孔吸附樹脂的理化性質，制訂大孔吸附樹脂再生處理方法及其合格標準，申請人應制定相應的標準、操作規程并列入企業標準的附錄。

（三）使用以大孔吸附樹脂分離純化工藝制造的原料生產的保健食品，申請時還應提供原料生產企業的詳細資料，原料的制備工藝和詳細的質量標準，包括原料中大孔吸附樹脂殘留物的標準和檢測報告。申請人應提供由國家食品藥品監督管理局確定的檢驗機構出具的該原料大孔吸附樹脂殘留物的檢驗報告。

（四）大孔吸附樹脂及其純化工藝等安全性評價資料

第四條應用苯乙烯骨架型樹脂分離純化工藝的保健食品應符合以下要求：

（一）大孔吸附樹脂應用前應進行預處理，預處理以后的大孔吸附樹脂中的有機殘留物應控制在安全范圍內，對苯乙烯骨架型樹脂要求苯的殘留量小于2mg/kg、二乙烯苯小于20 mg/kg。對其它類型的大孔吸附樹脂，根據具體情況確定限量標準。

（二）一般情況下,不得使用再生后的比吸附量仍下降達30%以上時的大孔吸附樹脂。

（三）應用以大孔吸附樹脂分離純化工藝生產保健食品原料的生產企業，應當對原料的大孔吸附樹脂殘留物進行檢驗或復核。對用苯乙烯骨架型樹脂制備的原料中二乙烯苯含量要求為小于50μg/kg，并將此列入企業標準。如果原料質量達到上述標準的，可以免測該保健食品終產品的大孔吸附樹脂殘留物的含量。

（四）建立樹脂殘留物的檢測方法和標準，并列入企業標準。

（五）對保健食品生產過程中應用苯乙烯骨架型樹脂分離純化工藝的保健食品，其產品中二乙烯苯含量要求為小于50 μg/kg。

第五條第五條 其它類型的大孔吸附樹脂參照苯乙烯骨架型并結合具體品種制定相應的殘留物及殘留標準等內容。

第六條第六條 原則上不得以多個動植物原料混合后再應用大孔吸附樹脂純化工藝生產保健食品。

第七條第七條 必要時，國家食品藥品監督管理局可對大孔吸附樹脂生產企業和應用大孔吸附樹脂生產保健食品所用原料的企業進行現場核查。

第八條第八條 本規定由國家食品藥品監督管理局負責解釋。

第九條第九條 本規定自二○○五年七月一日起實施。以往發布有關規定與本規定不一致的，以本規定為準。

本內容來源于政府官方網站，如需引用，請以正式文件為準。

第四篇：粗提技術論文：壇紫菜R-藻紅蛋白的分離純化工藝與分析鑒定

粗提技術論文：壇紫菜R-藻紅蛋白的分離純化工藝與分析鑒定

【中文摘要】藻紅蛋白作為壇紫菜中的一種重要生理活性物質,已廣泛應用到食品、輕工業、化妝和醫藥等行業,具有很高的經濟價值。目前藻紅蛋白主要是從紅藻中分離提取獲得,現已報道的分離純化工藝多為破壁粗提,鹽析沉淀粗分離再結合多步色譜層析純化獲得,這種工藝存在多種問題,比如細胞破碎不充分,提取效率較低、鹽析沉淀操作步驟繁瑣、多步柱層析成本較高等等,使得藻紅蛋白生產難以工業化,高純度藻紅蛋白價格十分昂貴,極大限制了藻紅蛋白的廣泛應用。故本文針對壇紫菜R-藻紅蛋白分離純化存在的一系列問題,對比了多種破壁粗提技術并加以條件優化,結合兩步色譜層析,建立了壇紫菜R-藻紅蛋白分離純化新工藝,為藻紅蛋白大規模開發和利用提供了理論基礎和科學依據。(1)壇紫菜R-藻紅蛋白是胞內蛋白,破壁技術作為藻紅蛋白提純的第一步直接關系到原料的利用率和藻紅蛋白的生產成本,具有十分重要的意義。故本研究比較了4種具有大規模提取應用前景的粗提技術——溶脹法、化學處理法、超聲波法和攪切法對壇紫菜R-藻紅蛋白的提取效果,以R-藻紅蛋白提取得率、純度和提取時間為參數,確定攪切法為最佳粗提技術,并對這種方法的物料比、攪切轉速和攪切時間進行了優化,結果表明當物料比為1：...【英文摘要】As an important physiological active substance of Porphyra haitanensis, R-phycoerythrin is widespread applied

in food, cosmetics and pharmaceutical industry with a very high economic value.At present phycoerythrin is mainly separated from the red algae.There are many reports of the separation and purification about it at home and abroad.Conventional protein purification procedures involve three steps:pretreatment of the sample to allow the intracellular material to become liberated, making a crude extract...【關鍵詞】粗提技術 離子交換色譜 凝膠過濾色譜 壇紫菜R-藻紅蛋白 分離純化

【英文關鍵詞】Extraction and Purification Ion Exchange Chromatography Gel Filtration R-phycoerythrin Analysis 【目錄】壇紫菜R-藻紅蛋白的分離純化工藝與分析鑒定4-611-1212-17Abstract6-7

目錄8-11

引言

摘要1 文獻綜述12-241.1 藻紅蛋白的概論

12-13

1.1.2 藻紅1.1.1 藻紅蛋白與藻膽蛋白

13-15蛋白的結構與組成15-16

1.1.3 藻紅蛋白的分類

16-17

1.2 藻紅蛋1.1.4 藻紅蛋白的理化性質白的應用17-1917-1818

1.2.1 在免疫熒光技術方面的應用1.2.2 在食品行業和精細化工方面的應用1.2.3 在醫藥保健藥物開發方面的應用18-19

1.3.1 破壁粗提

1.4 藻紅蛋白的分離純

1.3 藻紅蛋白的提取與粗分離19-2119-201.3.2 粗制方法20-21

化21-22221.4.1 吸附層析21-221.4.2 離子交換層析1.4.3 凝膠柱層析221.5 本文研究內容及技術路線22-2424-362424-252525-2729-3235-3636-553637-382 壇紫菜R-藻紅蛋白的粗提技術的比較2.1 材料與方法24-25

2.1.1 材料與試劑2.1.3 細胞破碎方法2.1.2 儀器及設備242.1.4 壇紫菜R-藻紅蛋白得率和純度的計算2.2 結果與討論25-352.2.2 化學處理法27-292.2.4 攪切法32-35

2.2.1 溶脹法

2.2.3 超聲破碎法2.3 本章小結3 壇紫菜R-藻紅蛋白的分離純化工藝的建立3.1 材料與方法36-383.1.2 儀器與裝置36-373.2 結果與討論38-53

3.1.1 材料與試劑3.1.3 實驗方法3.2.1 離子交換介質種

3.2.3 類的選擇39-40起始緩沖液pH的優化44-47化47-48

3.2.2 緩沖液種類的選擇40-4242-44

3.2.4 洗脫液鹽濃度的優化

3.2.6 洗脫流速的優

3.2.8 不3.2.5 上樣體積的優化473.2.7 離子交換層析的放大48-49

49-50

3.2.9 凝膠過濾層析同孔徑超濾膜的選擇50-533.3 本章小結53-554 壇紫菜R-藻紅蛋白的分

4.1.1 材料與試析鑒定55-65劑5555-58

4.1 材料與方法55-584.1.2 儀器與設備554.2 實驗結果58-63

4.1.3 實驗方法4.2.1 紫外可見吸收光譜

分析58-604.2.2 熒光光譜分析60-62

62-63

4.2.3 Native

結論和SDS-PAGE電泳分析與展望65-67

4.3 本章小結63-65

參考文獻67-71

致謝72-73

攻讀碩士學位期間發表學術論文情況71-72