第一篇：EM菌生態菌的養蠶使用方法 生態養蠶技術

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EM生態菌液的養蠶使用方法 生態養蠶技術

一、EM生態菌液用在桑樹：

1、用EM生態菌液稀釋成500倍，即EM生態菌液1：紅糖1（用暖水溶解后）加水500斤，淋于桑樹木頭。

2、稀釋500倍，即EM生態菌液1：紅糖1加水500斤混合稀釋后用噴霧器（未用過農藥）噴灑蠶桑葉面，每隔10天噴一次。

3、發酵蠶屎撒在蠶桑地上，方法是：先把蠶屎曬干，然后用100倍稀釋液發酵，即EM生態菌液1：紅糖1加水100斤均勻噴灑在蠶屎上，然后將蠶屎裝入有膠紙的尼龍袋，扎好袋口（夏季6天，冬天10天）蠶屎發出酒曲香氣味，說明成功，可撒在桑地上。如果是酸臭味，說明失敗（水份過多），應重新發酵，直到成功為止。

二、EM生態菌液噴桑葉喂蠶：

用本品和冷開水（清潔水）配成稀釋液，細霧噴濕桑葉，稍干后于當天第二餐添喂。具體用法：⑴、2—4齡蠶：按1：100配成稀釋液，,即1瓶蓋（5ml）+冷開水或清潔水1—1.2斤；⑵、5齡蠶：按1：50配成稀釋液，即10瓶蓋+水4.5—5.5斤。注意：備專用噴壺。水要清潔，不能有農藥殘留或油污。細霧噴灑，邊噴邊翻動桑葉。根據天氣和桑葉的干濕度，可適當增、減水加入量。陰雨天要把桑葉稍晾干再喂。遇炎熱天氣，4—5齡蠶，每天可多喂一次EM原露噴濕的桑葉。五齡蠶時，可將桑葉撒在蠶座上，然后噴霧桑葉，這樣省工省時。一張蠶種用EM原露500—750ml，效果最佳。

三、EM生態菌液對桑葉保鮮：

按1：300配成稀釋液，即1瓶蓋+水3斤，均勻噴濕桑葉，按常規方法裝入無毒塑料袋或缸桶中，24小時內不發黃不變質。

地址：北京市海淀區上地三街

電話：010-62669720

官方網址：www.tmdps.cn

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四、EM生態菌液噴施桑園可增產：

按1：300配成稀釋液，即1瓶蓋+水3斤，噴灑桑樹，10天噴灑一次。葉噴給桑樹提供營養物質，促進光合作用，增加葉綠素含量，使桑葉寬厚油綠，質量好產量高。

五、EM生態菌液噴蠶體可消毒除臭。

夏秋季氣溫較高，可直接將EM混合液噴在蠶體上，然后再將桑葉撤在蠶座上噴蠶。除常規用藥消毒蠶體蠶座外，中午、晚上氣溫高時用此法喂蠶，膿病、僵病得到很好的抑制，蠶病減少。用此法可消除蠶糞的臭味，優化蠶的生長環境和蠶農的工作環境。EM液濃度為1：300倍。

使用效果：

一是蠶兒食桑快而干凈，幾乎一觸及桑葉就食，連葉脈都食完。而對照蠶撒葉數分鐘后才開始食用，并且殘桑多。二是蠶的抗病力強，病蠶少，死亡率低，僅為0.85%。三是增產效果好，與對照區相比，試驗區結繭率提高30.5%，公斤繭粒數減少169粒，減少21.2%，而且蠶繭大，繭質好，等級高，賣價好。

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第二篇：em菌水蛇養殖技術

水蛇除喜食各種淡水雜魚、泥鰍外，還尤喜歡黃鱔和各種蛙類。應根據容易捕獲的季節或水蛇的育肥特按時投喂，盡量使投餌種類多樣化，滿足其身體生長的需要。大多數水蛇食欲旺盛，每隔4-5天便要攝食一次。一般條重約100-200克的水蛇，每次可吞食1-2條小雜魚，多者可達3-4條。水蛇的膽量非常的大，飲食過程中有旁人的打擾也不會影響到它正常飲食。但是在水蛇進食后，就不要在過分的驚擾水蛇了，否則會將吞入腹中的食物吐出來。不僅會延遲下一次的進食時間，還會減少應有的進食量，對水蛇的生長極為不利。飼養水蛇是目前人工養殖蛇類中死亡率最低的品種，只要飼養者采取科學的喂養方法，注重水蛇生長的環境健康，水蛇就能夠健康的成長。

益富源水產em菌液|水產em菌種|水產養殖微生態制劑|em原液|em原露|改善水質|增加含氧量|減少病原微生物及不良藻類|預防水產養殖動物皮膚病發生|改善腸道環境預防腸道疾病發生|em原種|em益生菌|益富源em菌正規廠家直營 產品介紹：

本品由放線菌、乳酸菌、芽孢桿菌、光合細菌、酵母菌等單一菌種經特殊工藝研制而成的高效復合微生物菌液。每毫升含有益總菌數≥200億CFU [產品名稱]益富源水產em菌

[主要成分]放線菌、乳酸菌、芽孢桿菌、光合細菌、酵母菌 [用法用量]

1、池塘養殖，放苗或水花前3-4天每畝用2000ml全池潑灑，放苗或水花時，用1公斤兌水100公斤，浸泡15分鐘，每畝潑灑2公斤,以后每隔15-20天噴灑一次，每畝用2公斤潑灑。

2、水庫使用，每畝按2-3公斤稀釋使用一次，每15天使用一次，最好配合使用有機復合肥，這樣效果更佳。

3、特種水產養殖（水蛇，甲魚、蝦、鰻魚、桂魚、各種熱帶魚等），（1）環境處理：放水前一周，用100倍菌液代替石灰均勻噴灑凈化環境。放養前3天，用為20萬分之一的菌液稀釋液潑灑水面，放養后每15天噴灑一次，水質較差的地方應加大濃度，并縮短潑灑間隔時間。（2）調節水質：在每次換水后潑灑菌液稀釋液（濃度為20萬分之一），可潑在增氧機旁或進水口，通過機器和水流作用擴散有益微生物，以利最短時間分解有害物質，盡快穩定水質。蝦類、甲魚等養殖品種每月潑灑稀釋液2-3次，發病季節適當增加用量。

水蛇肉質雪白細嫩，味道鮮美，營養豐富，且有較高的藥用和食療價值，能促進傷口愈合、健膚美容、舒筋活血，被廣東、香港、澳門人視為滋補佳品，在廣州及珠江三角洲等地有的地方還開設有水蛇食街或水蛇粥城。廣東從2003年下半年禁食野生動物開始，其他各種陸上野生蛇類均在禁售、禁食之列，只有人工養殖的水蛇仍在市場出售和在賓館、酒樓供應食客，但因需要量較大而養殖數量不多導致貨源較緊，價格漲高，據預測其售價仍有上升趨勢。

水蛇人工養殖技術簡單，成本低，發展空間大，市場前景十分廣闊。投資8000元建一個小型生態水蛇場，1個勞動力飼養種蛇100組(1公3母為1組)400條，辦場第二、第三、第四年的純收入分別為8144元、1．19萬元、5．2萬元。以建設與投資效益分析。

水蛇場建設

飼養400條種蛇，需10平方米種蛇池4個、3平方米幼蛇養殖過渡池4個、100平方米商品蛇飼養塘3個、活體飼料生產房1間、水生飼料生產塘1個、蚯蚓養殖場1個。

1．種蛇繁殖池：長4米、寬2．5米、深1．1米，磚水泥結構，池底保持淤泥30厘米厚。

2．幼蛇養殖過渡池：長2米、寬1．5米、深0．6米，磚水泥結構，池底保持淤泥20厘米厚。蛇池可并排建，池底向排水端呈5％坡度傾斜，深處池底有排水孔通向池外排水溝進出水口分別設在長方形養殖池的對角線上。兩池之間設有人行道。

3．商品蛇飼養塘：面積100平方米，深1．2米，四周建有1米高的防逃墻。

4．活體飼料生產場地：

①活體飼料生產房1問10平方米，用于生產黃粉蟲和EM活菌制劑；

②50平方米小池塘1個，用于生產水生飼料；

③在池塘邊建一個50～70平方米的蚯蚓養殖場。

第三篇：桑田全生態自然耕作養蠶實踐報告

桑田全生態自然耕作養蠶實踐報告

通過對廣東郁南、乳源、翁源等地區桑田養蠶情況的觀察得知，由于長期的化肥使用或短肥種植，造成桑葉營養缺乏，養殖的蠶繭偏小，蠶蟲發病率彼大，且蠶絲質量品質不高，該如何解決這些問題？通過實踐，較理想的方法，也有可能是未來桑蠶業發展之道：桑田全生態自然耕作，就是利用生物酶酵素的新陳代謝功能，將農藥化肥及過量毒素等，從桑樹體，尤其是桑樹頭中排除，促發新的根系，增加葉綠素，光合更豐富的營養成份至桑葉，并徹底解決農藥化肥污染，再用微生物技術配合生物肥料，即采用將蠶屎利用微生物發酵為生物肥施灑桑田。

一、生物肥料桑田的優勢

一般農戶養殖桑蠶種1-3兩批，每月二批，可有蠶屎300百斤至1000斤，傳統方法堆放到年底，做為普通肥料施到桑田，有些桑戶無處堆放就丟掉或直接施入桑田，造成病菌傳染，影響蠶蟲生長。桑農對桑田在降枝后進行施肥，約每畝地一百斤化肥，有效肥力25%的化肥75元100斤，有效肥力48%(氮16-磷16-鉀16)的化肥125元100斤，全年肥料成本需投入500-1000元，許多桑戶能省則省，不愿施肥，更重要的是桑農發現長期施化肥對桑樹頭壽命和發枝葉有嚴重影響，蠶蟲結繭也一年不如一年，現在的繭重量比十幾年前普遍減輕40%，平均重量只有1.6克，能夠達到2克的已是養蠶高手。

利用微生物技術對蠶屎進行發酵，使其成為生物肥料，桑戶可節省養蠶成本，更重要的優點是生物肥沒有化學污染，對蠶蟲健康和正常生理生長有良好的推動。應用生物肥和生物酶酵素新陳代謝技術的桑田三個周期后，蠶繭可達3-4克，同時對桑樹壽命及生長有極大的支持，生物肥料桑田的桑葉可提前十天產葉并達到增產50%的效果。< ~ 課 件 >由于生物肥料是桑農利用自家蠶屎生產，農戶只需購買生物肥專用微生物菌種，每200斤生物肥料成本僅10元以下，較之任何化肥成本都低90%以上，更重要的是肥力更好，不污染土質。生物肥的氮磷鉀添加也可與農戶自有植物材料條件就地解決，比如柴草灰、農作物粕渣等都是良好的氮磷鉀來源。

二、生物酶酵素新陳代謝技術使用與生物肥生產使用流程

1.降桑枝葉后施除草劑，待草萎枯后灑施自產生物肥每畝50市斤，并用生物酶酵素2號噴灑桑樹頭，促根系擴張，待桑枝新芽葉片約拇指大小時噴灑生物酶酵素1號，促新根及葉片生長。之后每7-10天向桑葉噴灑生物酶酵素1號一次，三至四次為一個周期。

2.降枝葉日始計，第二十五天后，可采摘第三四片葉飼養蟻蠶。可采摘第五六片葉飼養三四眠中蠶。

3.第四十天后，可剪枝葉飼養五齡蠶。

4.五齡蠶后降枝桑樹進行新一輪生物肥料和生物酶酵素技術周期，如此周而復始。經過幾輪周期，土地和桑樹進入有機生物狀態，蠶蟲獲得無毒侵害后生理健康，病情減少，繭絲量必然達到增幅。

5.蠶屎生物肥生產流程：桑蠶上樸吐絲后，將蠶屎收集，清除桑枝，將其與四眠前蠶屎一起堆積，根據重量計算混合適當比例的生物菌種，蠶屎濕度水分控制在20%-30%之間，經七天發酵，可以立即使用。

6.蠶屎生物肥的氮磷鉀及微量元素份量，可通過植物農作物進行同時發酵調整。

7.桑田桑樹所需的氮磷鉀在蠶屎生物肥基本上中已經具備，如還需要，可根據土地、氣候、季節及桑樹長勢等調節氮磷鉀比例份量，尤其是鉀元素蠶屎中較少，在發酵時加入5%-10%的柴草灰即可。氮的添加可用適量植物果粕，磷鈣因養蠶各階段使用石灰消毒，基本無需添加。

8.蠶屎生物肥也可以增加桑農收益。桑戶養蠶量大，蠶屎生物肥使用有余，可出售給種植果樹的果農使用，或出售給有機肥料廠為原料。

三、生物技術是天然彩色繭絲桑蠶的發展基礎

全生態自然耕作對桑田桑樹的運用，確保了養殖蠶蟲不受化肥農藥的污染，除了繭絲量增加之外，對雜交或基因改造的可吐彩色絲的桑蠶，在雜交性能和基因穩定方面起到巨大的支持。生物酶新陳代謝技術促進桑樹光合，提高桑葉營養和產量，日前在廣東郁南東壩鎮龍塘村多個農戶示范田取得高品質蠶繭增產40%的效益。

廣東省致富委組織桑蠶高產技術示范小組，對廣東云浮、英德、乳源、翁源等地實地調查，發現這些地區的桑農因桑田土壤、蠶種、養殖條件、技術、習慣的差異之外，桑蠶繭質量普遍處于低水平，繭重量平均只有1.6克以下，每兩蠶種產繭量（吐絲三天出售的濕繭統計）在70－110市斤之間，且蠶蟲體弱常造成桑農收不保本。部分地區的桑戶十畝地才月二批養殖二兩蠶種。

五月二十六日開始，省致富委桑蠶高產技術推廣小組在東壩鎮龍塘村及周邊幾個村選擇不同桑田，養殖技術也有高低差異的十戶進行全生態自然耕作的高產技術示范。為使桑農三十天內了解高產技術的魔力，采取噴灑桑樹大葉，分別對蟻蠶到五齡蠶；三眠蠶到五齡蠶進行對比飼養，并對桑農準備放棄養殖的二眠體弱蠶搶救性喂食，均取得30%-44%的繭增產。

同批蠶種，沒有噴施新陳代謝生物酶的桑樹葉飼養的蠶結繭重量平均為1.6克，噴施新陳代謝生物酶的桑樹經促進光合的桑葉飼養蠶結繭重量平均達到2.33克，且色澤較更亮白。

郁南東壩鎮是廣東的桑蠶養殖大鎮，擁有一萬多畝的桑田，僅龍塘村桑戶達八百多戶。一般每戶桑田有七、八畝，每月二批養殖蠶種2-3兩，售繭量（吐絲三天濕繭計）為150-280斤。高產技術實施第一個月的增產幅度就給桑蠶戶帶來180-350斤的變化。

根據示范戶實踐總結，桑樹系更為發達，葉增產，光合作用強勁，葉的營養含量大幅增加，從而使飼養的桑蠶體質健康，成繭重量預計可達4克/個。桑農在相同勞動和成本投入中可獲得三倍收益。

第四篇：em菌在水產中的運用 文檔

控制水環境中氨、硫化氫等有害物質含量，調控養殖池微生物生態結構； * 增強水產動物免疫功能，預防病害，增進健康，降低發病率及死亡率； * 促進生長發育、增重，增加產量；

* 無污染，成本低，收效大，改善肉質；

* 凈化水質，改善環境，延長換水間隔；

* 減少病原菌，平衡微生態，減少藥物的使用，保障環境安全。

1.減少病原微生物和不良藻類；明顯增強養殖對象的免疫力和抗病性，降低發病率，提高成活率。用戶反映，益生菌原液可使蟹苗成活率提高近一倍，中華石斑魚的成活率由原來的30％提高到70％以上。

2.增加有益微生物數量。水面浮游動物、有益藻類增多，特別是紅蟲不斷增多至布滿水面。

3.穩定和改善水質，水體顏色清爽，不臭不腐，無硫化氫、氨氣等異味，能見度在25-50cm的時間長且較穩定，換水時間可延長2倍以上。

4.魚蝦糞、池底雜質和下腳料不會變成淤泥而呈散沙狀。

5.促進生長，增重率明顯提高。實踐證明，在同等環境下，使用益生菌原液后，可提前上市，平均畝產提高20％-35％，產卵量增加，產卵時間延長。且孵化率較好；餌料不臭，改善養殖環境。

百豐EM菌液用于水產養殖，可改善水質，提高成活率和相對生長率，降低發病率，提高肉質品質，用百豐水產養殖對飼料、糞肥進行發酵，可提高營養成分和飼料效率，大幅度降低飼料系數和養殖成本。

用百豐EM菌液養殖青蝦，增產35%以上，商品率提高20個百分點；在池塘中養殖河蟹，成活率達91%，平均規格增0.88兩，在湖泊網圍中養蟹使用二個月，平均個體規格達0.277兩，比對照池增大近一倍，死亡率幾乎為零；在溫室養鱉中應用，生長率提高28%，飼料系數下降0.65，換水時間延長4倍；河豚越冬，凈增重增長63.4%，成活率提高36個百分點；用百豐水產菌液潑灑水體養殖鱖魚，成活率達90%；常規魚養殖應用飼料發酵方法，畝產增24.7%，精料系數下降27.2%。此外，在蚯蚓、黃鱔及海珍品上應用效果也十分顯著。試驗還證明：百豐水產菌液可替代或大幅度減少藥物的用量，可防治大多數病害，控制病毒復制蔓延（尤其對河蟹顫抖病病毒、鱖魚病毒、鮑魚病毒的預防效果顯著）；改善養殖環境，使魚蝦蟹恢復和保持自然本色。百豐EM菌液無毒無害，無任何藥物殘留，是實施健康養殖、生產綠色食品，爭創品牌，發展創匯漁業和生產味道鮮美的水產品的高新技術。

北京百豐天下生物科技有限公司

王華龍：***

第五篇：沙門菌檢測技術

沙門菌為常見的腸道病原菌之一，在自然界分布廣泛，種類繁多，所致疾病統稱沙門菌感染，其中由傷寒、副傷寒沙門菌引起的急性全身系統性傳染病是我國《傳染病防治法》中規定報告的乙類傳染病，而由非傷寒沙門菌引起的食物中毒則占我國內陸地區細菌性食物中毒的首位。

及時準確地檢驗沙門菌，為診斷和控制由該菌引起的疾病提供依據。沙門菌檢驗程序主要包括：標本采集、標本的處理與接種、菌株分離與鑒定和PCR檢測幾個步驟。

標本采集

標本采集前，應準備好所需的培養基和器材，主要有：血液需氧培養瓶、血瓊脂平板、XLD（木糖賴氨酸脫氧膽鹽）瓊脂平板、BS（亞硫酸鉍）瓊脂平板、SC（亞硒酸鹽胱氨酸）增菌液、酒精燈、采樣瓶、剪刀、鑷子等。

沙門菌檢驗標本主要分為：食品樣品、可疑食物中毒標本，沙門菌患者標本。可疑食物中毒標本主要有：可疑食品、相關環境標本、疑似病人標本。可疑食品的采集：在采集可疑食物中毒標本時，應重點采集剩余食物以及食品加工有關的炊事用具，操作人員的手、肛試等相關環境標本。采樣時，用棉試子涂抹物品表面后，置于少量增菌培養基內，也可根據情況在接種現場接種分離平板。

沙門菌感染患者標本的采集：沙門菌感染患者應采集新鮮糞便標本或肛試子直接接種分離平板和增菌液。對傷寒、副傷寒患者，在病程的第1~2周，可采集靜脈血液4~8ml，接種血液需氧培養瓶中。

每個標本需做好標識和記錄，采集的食品樣品4℃保存，已接種標本的增菌液和培養基，室溫下保存，2小時內送達實驗室。

標本的處理與接種

沙門菌標本的處理與接種常用培養基有：TTB（四硫磺酸鈉）增菌液、SC(亞硒酸鹽胱氨酸)增菌液、XLD瓊脂平板、BS瓊脂平板和麥康凱（MaC）瓊脂平板。

可疑中毒食品標本的處理：對采集的標本通常按1:10的比例分別接種于100mlTTB和100ml增菌液中，每瓶增菌液加入標本約10g，同時還可將可疑中毒食品標本直接接種于分離平板。將接種后的TTB增菌液置42℃培養箱中培養18~24小時，將SC增菌液和分離平板置37℃培養箱中培養18~24小時，待觀察。取培養后增菌液轉種XLD瓊脂平板和BS瓊脂平板，將接種后的平板置37℃培養箱中培養24~48小時，待觀察。

血液（骨髓）標本的處理：將已接種標本的血液培養瓶直接放置37℃培養箱中培養7天，在培養期間分別于培養的第1天、第2天和第7天取培養液一環接種血瓊脂平板，將平板置37℃培養箱中培養18~24小時，待觀察。培養至第7天時，如培養物仍無菌生長，則可判為陰性。

肛試子及其他環境標本的處理：將現場采集已接種標本的分離平板和增菌液直接放置37℃培養箱中培養18~24小時，待觀察。取出18~24小時培養的增菌液轉種XLD瓊脂平板和麥康凱瓊脂平板。將接種完畢的平板置37℃培養箱中培養18~24小時，待觀察。

菌株分離與鑒定

主要實驗試劑有：氧化酶（試劑）、三糖鐵（TSI）、動力—靛基質—尿素半固體（MIU）和賴氨酸鐵瓊脂斜面、API20E、沙門菌診斷血清。

沙門菌菌株的鑒定主要試驗有：菌體形態觀察，菌落形態觀察，氧化酶實驗，初步生化鑒定（系統生化鑒定），血清學分型。

菌落形態觀察：在XLD平板上沙門菌菌落呈粉紅色、光滑、濕潤、邊緣整齊、產H2S的菌株，可形成中心黑色或全部黑色的菌落。在BS瓊脂平板上，沙門菌菌落呈黑色有金屬光澤、棕色或灰色，培養基周圍可呈現黑色或棕色，有些菌株可形成灰綠色的菌落，周圍培養基不變。在麥康凱瓊脂平板上，沙門菌菌落為無色、透明或半透明、光滑濕潤、邊緣整齊、圓形。從分離平板上挑取3-5個可以菌落，分別接種XLD平板和營養瓊脂平板，將接種完畢的平板置37℃培養箱中，18~24小時純化培養。

菌體形態觀察：挑取純培養物進行革蘭染色，在顯微鏡下觀察菌體形態。沙門菌為革蘭陰性桿菌，長1-3um，寬0.5~1um，無芽胞，兩端鈍圓。

氧化酶試驗：用一次性接種環（或牙簽）挑取菌落于濾紙上，滴加氧化酶試劑一滴，在10s內菌落不變色為陰性，呈現紫色者為陽性。本試驗菌落不變色，氧化酶試驗為陰性：

初步生化鑒定：將菌落形態和氧化酶試驗符合沙門菌特征的純培養物分別接種于三糖鐵瓊脂斜面（TSI）、MIU培養基、賴氨酸鐵瓊脂斜面，將已接種的生化培養基置37℃培養箱中，培養18~24小時，待觀察。

典型的沙門菌在三糖鐵（TSI）上，斜面呈紅色，下層產酸呈黃色，多數沙門菌產生硫化氫，試管內出現黑色，有氣泡。

賴氨酸脫羧酶試驗陽性，培養基由紫色變成紫黑色。

在MIU培養基上尿素為陰性培養基不變色，有動力，沿穿刺線渾濁生長，加入靛基質試劑0.5ml于試管內，輕搖試管，沙門菌靛基質試驗結果不定。本試驗靛基質試驗為陰性，試劑不變色。

系統生化鑒定：腸桿菌科細菌在生化反應上有類似之處，對初步生化試驗符合沙門菌的可疑菌株需要進一步做系統的生化鑒定。生化試劑可采用自配或市售成品，也可選用生化鑒定試劑盒（API 20E）或全自動微生物鑒定系統（VITEK）。本試驗以API 20E生化鑒定試劑盒進行示范，具體操作步驟如下：

菌懸液制備：挑取24小時培養的營養瓊脂平板上1~2個菌落至5ml滅菌生理鹽水中制成均勻的菌懸液。

接種與培養：將配制好的菌懸液按產品說明書要求填充API 20E條上的小杯，按要求加蓋礦物油，置于36℃培養箱中培養18~24小時，待觀察。

結果觀察與判定：按照說明書要求，在讀取結果前，部分試驗先添加附加試劑。根據API 20E中的讀數表判定和記錄各項反應結果，并得到一個7位數的編碼，通過在數據庫或API編碼表中查詢該編碼即可獲得菌株鑒定結果。

血清學分型：對生化鑒定為沙門菌的菌株，需用玻片凝集法進行血清學分型，血清學分型試驗的主要步驟為：先用A-F多價血清作玻片凝集，若血清發生凝集再分別選用O4 O9 O2 O10 O7等因子血清做玻片凝集，以判定其群別。根據判定的O抗原，進行H抗原的第一相和第二相抗原凝集和判定，下面以某品牌血清為例進行試驗。

第一步，O抗原凝集，分別取一環A~F血清和生理鹽水于潔凈的載玻片上，挑取待檢菌株新鮮培養物適量，研成乳狀，傾斜搖動玻片1分鐘，觀察血清凝集情況。若血清產生凝集顆粒鹽水無顆粒者判為陽性；兩者均無凝集顆粒產生，判為陰性；鹽水有顆粒者為粗糙型菌株，不能分型。本菌株結果為陽性。

第二步，取一環O4血清于潔凈的載玻片上，用與上述相同的方法試驗，結果若為陽性，進行H因子血清凝集試驗；若結果為陰性，再分別選用O9 O2 O10 O7等因子血清進行玻片凝集試驗。本菌株O4為陽性。

第三步，H抗原凝集，在沙門菌抗原表中，選擇與O4相對應的H因子的第一相和第二相單因子血清作逐一凝集試驗。本次實驗結果被檢沙門菌的抗原式為1,4,5，12：i：1,2 為鼠傷寒沙門菌。

血清凝集試驗中幾種特殊情況：

1.Vi抗原的判定：傷寒或丙型副傷寒沙門菌的Vi抗原能阻礙O抗原凝集，含豐富Vi抗原的傷寒菌株，經煮沸破壞Vi抗原，再與O血清凝集。實驗方法為，取適量菌苔于1ml生理鹽水中，在酒精燈火焰上煮沸后再與O血清凝集，若仍不凝集，可送上級單位鑒定。2.位相誘導法試驗：如雙相菌只檢出一相H抗原時，可用位相誘導的方法獲得另一相抗原。位相誘導方法較多，主要有，小玻璃管法、小倒管法、簡易平板法。本篇著重介紹簡易平板法。將0.7%~0.8%半固體瓊脂平板烘干表面水分，挑取已知相因子血清一環滴在半固體瓊脂平板表面，放置片刻，待血清吸收到瓊脂內，在血清部位的中央 點接種待檢菌株，36℃培養18~24小時后，在形成蔓延生長的菌苔邊緣取菌做凝集試驗。

3.H抗原不凝集：如果兩相H抗原均不出現，則應通過半固體瓊脂平板、血平板等瓊脂平板傳代法獲得某相或兩相抗原

PCR檢驗

在沙門菌的檢測工作中，常利用PCR技術來做沙門菌檢測的初篩實驗，以提高工作效率，降低成本。PCR初篩試驗采用檢測樣品增菌液中是否有沙門菌屬侵襲性抗原保守基因（invA 基因）的存在，以此來判定是否有沙門菌的存在。PCR反應條件，94℃變性1min，52℃退火1min，72℃延伸1min，35個循環72℃延伸7min。

用凝膠成像系統觀察結果時，如在284bp處出現擴增條帶，則為陽性，凡是PCR檢測呈陽性結果的標本，均應進行沙門菌病原菌的檢測。

注意事項

在沙門菌檢驗過程中，應注意以下問題。

1.試驗應在BSL-2生物安全實驗室的二級生物安全柜中進行操作，并做好個人的安全防護工作。

2.在生化初篩試驗中應特別注意，只有在三糖鐵瓊脂斜面和底層均產酸，同時賴氨酸脫羧酶試驗陰性的菌株或尿素酶陽性的菌株可以排除，其他的反應進行進一步的試驗確證。

3.沙門菌的鑒定和血清學分型試驗必須使用純化菌株。

4.BS瓊脂平板要求的培養觀察時間為48小時，此時才能形成描述的典型菌落。