第一篇：葉綠體中色素提取和分離實驗課案例及總結

“葉綠體中色素提取和分離”實驗課的案例及分析

在倡導教學形式和學習方式多樣化，體現以學生發展為本的教學改革形勢下，實驗課的教學改革迫在眉睫。生物學實驗并不是簡單的教學輔助部分，它是學習生物學的主要手段，是培養學生能力，提高科學素養的有效途徑。因此，必須考慮：怎樣才能使學生在實驗課中樂學、會學、學有所得。下面介紹作者在“葉綠體中色素提取和分離”實驗課教學中的嘗試和體會。1 案例介紹

1.1 案例實施的背景

現行高二教材中本實驗屬驗證性實驗，教師在實驗課之前布置了預習，并按傳統教學方法要求學生根據實驗步驟進行操作，但是在學生完成實驗后，結果并不理想，很多學生的色素帶出現顏色不明顯；色素帶不整齊，有重疊等情況，究其原因，主要是學生實驗操作不規范造成的，然而令人擔憂的是當老師追問“可能是哪些操作步驟出問題，會導致實驗結果的不理想？”時，多數學生一問三不知，很顯然，學生在做實驗時，只是按照教材中的實驗步驟，“依葫蘆畫瓢”，機械地完成實驗任務而已，對實驗步驟缺乏深入思考和有效反思，“只知其然，而不知其所以然”。

要改變這種現狀，必須解決以下幾個問題：①要激發學生上實驗課的興趣，提高學習積極性，增強學生的主體意識；②要提高學生的自我監控意識，使學生對實驗的各具體操作步驟能不斷進行反思。③使學生深刻認識到生物學實驗操作的準確性和規范性是得到正確實驗結果的必要前提，提升學生的生物科學素養。

1.2 教學過程及分析

教師在認真學習和領會《高中生物課程標準》的基礎上，結合學校和學生實際，創造性地進行了心得教學設計，并在平行班中加以實施。教學實施情如下：

（1）課前準備

①教師：編制“自我監控”表（附錄）；準備新鮮的菠菜葉，干燥的定性濾紙，燒杯，研缽，小玻璃漏斗，尼龍布，毛細吸管，剪刀，小試管，培養皿蓋，量筒。天平，丙酮，層析液，二氧化硅，碳酸鈣。②學生：進行課前預習；分組。

（2）創設問題情景

①教師：展示實驗結果，一條色素帶顏色清晰、整齊、無明顯重疊（理想）；另一條色素帶顏色不明顯、不整齊、有明顯重疊（不理想）。提問：“為什么會出現不理想的實驗結果，本實驗的哪些操作步驟與之有關？” ②學生：相互討論，但由于一時無法理清實驗內容的內在邏輯性，因此難以確定問題的答案。

（3）明確監控目標及意義

①教師：（發“自我監控”表）問題的答案就在學生的實際操作過程中，就在于這些實驗操作的“準確度”的把握上，那么如何把握實驗操作過程的“準確度”？就要求學生對實驗操作的具體步驟進行自我監控，自我監控能力的培養也是提到學生自學能力和學習效率，掌握好各學科知識的重要前提。②學生：帶著一種新奇感，饒有興趣地去了解“自我監控”表中各項監控項目。

（4）引導學生實施“自我監控”學習

①學生：按照“自我監控”表對各項監控項目進行實驗操作的自我監控，并做好相應的實驗記錄。②教師：不斷巡視，進行適當的指導。

（5）開展“協作式”探索

①學生：以“自我監控”表作為重要的參考依據，以小組為單位，對實驗結果成敗的原因進行對照分析，明確問題癥結的原因，并進一步驗證。如有學生發現用棉線蘸取綠葉畫濾液細線效果更好，馬上向其他同學推廣；也有的學生通過對照分析，認為自己的色素帶顏色太淺的原因是研磨不夠充分及研磨液過濾不徹底，則新的監控學習中調整研磨的程度，并且不用尼龍布過濾而直接用少許脫脂棉等操作加以驗證。②教師：適當指導，并引導學生了解科學研究的一般過程：“實驗觀察—提出假設—驗證假設”。

（6）反饋和評價

①學生：以小組為單位反饋實驗結果，實現小組間的資源共享。②教師：不管學生的協作式探索結果是否正確，教師都要予以適當鼓勵。2

教學反饋及反思

2.1

教學反饋

學生對實驗教學的評價是考查實驗教學效果的重要材料。因此該實驗結束后，教師以座談的形式進行了教學反饋調查，現將部分反饋整理如下：

（1）學生甲：這種實驗方式，不像以前那樣簡單，給我增加了難度，我無法從課本的操作步驟中找到明確的答案，有時甚至感到無從下手，但卻使我產生挑戰的興趣，而且我也有信心去戰勝困難！

對“葉綠體色素提取和分離”實驗的一點改進

在人教版高中生物（必修）教材第一冊的“葉綠體色素提取和分離”實驗中，按教材所描述的實驗方法和過程操作，實驗效果并不理想，往往存在以下問題影響實驗效果：（1）實驗過程繁瑣、操作復雜、耗時長；（2）綠葉還未充分研磨，加入的丙酮就以揮發的差不多了；（3）由于毛線吸管較細，學生操作時極易將其折斷，增加了操作的難度和實驗的成本；（4）用毛細吸管劃出的濾液細線，線條粗細不均，影響層析效果。

針對上述問題，筆者對該實驗的方法和步驟進行了一些改進，并做了大量的對照實驗，獲得了良好的實驗效果?，F將改進后的具體方法和步驟介紹如下，一邊和各位同仁交流。1 實驗方法、步驟

提取綠葉中的色素

（1）稱取5g新鮮綠色葉片（如菠菜葉、胡蘿卜葉等），剪碎，放入研缽中。（2）向研缽中加入少許二氧化硅和碳酸鈣，將紙蓋在研缽上，在紙的中心穿一個洞，將杵棒套入洞口中進行迅速充分的研磨。

（3）研磨1-2min后（綠葉接近雨糊狀時），向研缽中加入3ml丙酮，繼續迅速充分的研磨約半分鐘。

1.2

制備濾紙條

取一張干燥的定性濾紙，剪成長6cm，寬1cm的濾紙條，將濾紙條的一段剪去兩角，并在距這一端1cm處用鉛筆畫一條細的橫線。1.3

分離色素

（1）用一干凈的蓋玻片，用其一端蘸取研磨液印在濾紙條的鉛筆線上（操作時注意：蓋玻片要始終與濾紙相垂直），待研磨液干后，再重復上述操作一次。

“葉綠體中色素的提取和分離”實驗改進

一．實驗原理： 色素提取原理：利用相似相溶原理，色素可以溶解于酒精、丙酮等有機溶劑中，形成色素液。色素分離原理：由于四種色素在層析液的溶解度不同，因而四種色素在濾紙上的擴散速度也不同，從而將它們分離開來。

二、目的要求

1.初步掌握提取和分離葉綠體中色素的方法。

2.探索葉綠體中有幾種色素。胡蘿卜素、葉黃素、葉綠素a、葉綠素b隨層析液在濾紙上擴散速度不同，可以分出四條色素帶

三、重點與難點

重點：初步掌握提取和分離葉綠體中色素的方法和探索葉綠體中有幾種色素。難點：該實驗中應注意的問題和培養學生獨立實驗的能力,掌握探究實驗的方法。

四、對實驗的幾個地方進行的改進 1實驗材料的改進：

用菠菜作為實驗材料，易受季節性限制，此外，色素提取液呈黃綠色，色素帶顏色淺，實驗效果差。用韭菜，蘿卜葉，蒿菜，天竺葵代替菠菜，所得到的實驗效果很好，又可以克服菠菜因季節原因，難于取材。2提取液的改進：

除丙酮外，也可用酒精（無水乙醇）替代，用量相同，結果大致相同；和酒精相比，丙酮有一定毒性，因而不妨換一下。3過濾和制濾液的改進：

獲取高濃度的色素提取液是該實驗成功的一個關鍵環節。一般我們要求色素提取液呈墨綠色。為了得到墨綠色的色素提取液，我們可嘗試取消漏斗基部放脫脂棉這一步，而用3～4層紗布包裹充分研磨過的綠葉，用4層紗布過濾，通過漏斗將汁液擠于試管中，將濾液收集到試管或小燒杯中備用。這樣可以降低葉片含水量，從而提高葉綠體中色素的提取效率。實驗證明，改進后較改進前實驗效果明顯。

將過濾用的尼龍布改為用棉花塞住漏斗口過濾，效果更好！

4分離色素的改進：

分離色素時教材中的條形紙層析法，據許多中學老師反映實驗效果不很理想，存在的問題有:①采用毛細吸管吸取濾液，畫線很難達到“細、勻、齊”的要求;②制備濾紙條時剪去兩角，不容易把握;③層析液容易沒及濾液細線。④條形紙很容易下滑⑤層析后容易出現色素帶分離不夠充分，或色素帶分離過度而造成胡蘿卜素在濾紙條上消失的現象。

另一種新的方法叫培養皿法

不用濾紙條，也不劃濾液細線，而取直徑為10cm的干燥圓形定性濾紙，用毛細吸管吸取色素濾液，在濾紙的中央點成圓形的色素斑，重復4～5次。然后取一枚縫衣針，穿一條細棉線，在棉線末端打個結，將針穿過濾紙上的色素斑中心，在距線結約4cm處剪斷棉線。取直徑l0cm的培養皿一套，向培養皿底中加入5ml層析液。把上述圓形濾紙扣在培養皿底上面，無線結的一面朝下，棉線則浸沒在層析液中。再將培養皿蓋蓋在濾紙上。

采用該方法，可以看到色素隨層析液由線結處向周圍均勻擴散。因此得到的4條色素帶呈同心環狀，由內而外分別是黃綠色、藍綠色、黃色和橙黃色，十分清晰。而且層析時，濾紙上的色素不會沒及層析液中，點色素斑比劃濾液細線容易得多，實驗效果非常顯著。結果證明：運用燈芯法分離色素，色素量大，分層清晰，四種色素分離出鮮明的四圈色素環，效果顯著；操作過程較易掌握，失誤較少。此實驗方法關鍵有兩點需注意：一是幾次滴液體要在同一點上，否則不能形成圓環：二是要掌握好滴層析液的量和時間，否則會影響效果，甚至失敗。

綜述： 要求：教師具有較高的組織教學能力和啟發教學的經驗，教師要事先根據教學內容精心設疑，引導學生積極思考，獨立研究，自行設計、完成實驗，從而使學生加深對實驗原理的理解，并在此基礎上掌握和學會獲得知識的科學方法。

優點：學生通過親自參與實驗的設計、操作、分析得出結論，學生經歷了質疑、思考、分析、釋疑等一系列思維加工過程，成為一個“發現者”。獲得了成功感，學習興趣極高。

不足：“探討——實踐”實驗教學法適合于有一定的知識基礎，已有一定的實驗能力的高年級學生，教師既要敢于“放”（讓學生自由討論、動手實驗）又要能夠“收”（及時糾錯、分析、總結），課堂紀律不好控制，很難保證在按時完成實驗的前提下全面提高學生的素質。反思和分析：

(1)這個實驗可以作為驗證實驗處理，也可變為光合色素提取方法的探究實驗

（2）教師的教育觀念一定要轉變與更新（3）教師一定要注意學生的創新需要

（4）教師一定要努力實踐

綜合同學們對各步驟的改進，使實驗的完成效果更好，體現了同學們無限的創造力！

第二篇：《葉綠體色素的提取和分離》 實驗報告

《葉綠體色素的提取和分離》 實驗報告

實驗目的1.學習葉綠體色素的提取、分離方法。

2.通過葉綠體色素提取、分離方法的學習了解葉綠體色素的相關理化性質。

3.為進一步研究各葉綠體色素性質、功能等奠定基礎。

實驗原理

葉綠體色素包括綠色的葉綠素（包括葉綠素a和葉綠素b）和黃色的類胡蘿卜素（包括胡蘿卜素和葉黃素）兩大類，它們均以色素蛋白復合體形式存在于類囊體膜上。兩類色素均不溶于水而溶于有機溶劑，故可用乙醇、丙酮等有機溶劑提取。由于提取液中不同色素在固定相和流動相中的分配系數不同，所以可借助分配層析方法將其分離。

實驗儀器與藥品

1.綠色植物如菠菜等的葉片。

2.研缽、漏斗、三角瓶、剪刀、滴管、康維皿、圓形濾紙（直徑11cm）。

3.95％乙醇、石英砂、碳酸鈣、展層劑。展層劑按石油醚：丙酮：苯10:2:1的比例配制（V／V）。實驗步驟

1.葉綠體色素的提取

（1）取菠菜或其它新鮮植物葉片4～5片（4g左右），將其洗凈、擦干并去掉中脈，剪碎后置入研缽中。

（2）研缽中加入95％乙醇2～3 ml及少許石英砂、碳酸鈣研磨至勻漿，再加95％乙醇5ml，然后以漏斗過濾之，即為色素提取液。

2.葉綠體色素的分離

（1）取圓形定性濾紙一張（直徑應小于康維皿直徑）于其中心扎一圓形小孔（直徑約3mm），另取長方形濾紙條一張（5cm×1.5cm），用滴管吸取乙醇葉綠體色素提取液沿濾紙條的長度方向涂抹，注意涂抹色素擴散寬度應限制在0.5cm以內，風干后再重復操作數次。然后沿長度方向將濾紙條卷成紙捻，使涂抹過葉綠體色素溶液的一側恰在紙捻的一端。

（2）將紙捻帶有色素的一端插入圓形濾紙的小孔中，使與濾紙剛剛平齊（勿突出）。

（3）在康維皿中央小室中加入適量的展層劑，把帶有紙捻的圓形濾紙平放在康維皿中央小室上，使紙捻下端浸入展層劑中，迅速蓋好培養皿。展層劑將借助毛細管作用順紙捻擴散至圓形濾紙上，使葉綠體色素在固定相（濾紙中吸附有水分的纖維素）和流動相（展層劑）間反復分配，從而使不同色素得到分離，分離結果為濾紙上可見到各種色素的同心圓環。無康維皿時亦可用底、蓋直徑相同的培養皿進行實驗，實驗時可在培養皿底中放入一平底短玻管或塑料藥瓶蓋以替代康維皿中央小室盛裝展層劑，其余相同。

（4）當展層劑前沿接近濾紙邊緣時便可結束實驗，此時可看到不同色素的同心圓環，各色素由內往外的順序為：葉綠素b（黃綠色）、葉綠素a（藍綠色）、葉黃素（鮮黃色）、胡蘿卜素（橙黃色），再用鉛

筆標出各種色素的位置和名稱。

實驗結果與分析

葉綠體色素分為葉綠體素類和類胡蘿卜素類兩類，前者為雙羧酸酯，后者為類萜，所以均為脂溶性，提取時應選用有機溶劑，常用的有機溶劑為酒精等。本試驗采用分配層析方法分離葉綠體色素，此法基本原理為利用混合物中不同成分在固定相和流動相中的分配系數不同意分離各成分。本實驗中葉綠素b、葉綠素a、葉黃素、胡蘿卜素在流動相中分配系數依次增大，所以分離形成的4個同心圓環由內向外依次為葉綠素b、葉綠素a、葉黃素、胡蘿卜素，這可從4種色素的不同顏色直觀看出。

實驗注意事項

1.為保證色素提取效率應注意研磨要充分、殘渣應用提取溶劑多沖洗幾次。

2.濾紙應質地均勻，折疊、揉捏均會影響濾紙均勻度因而影響分離效果。

3.點樣量應足夠大但樣點直徑應盡量小，所以一次點樣不要過多，待風干后再點樣，如此反復多次。

4.由于紙捻上端為點樣部位，所以紙捻上端應與濾紙平齊以保證展層劑推動不同色素的分離。

5.由于展層劑由幾種極易揮發的溶劑組成，所以實驗中應保證康維皿的密封，否則會因展層劑揮發損失影響分離效果，此問題在以培養皿替代康維皿進行實驗時尤應注意。

陜西師范大學遠程教育學院

生物學實驗報告

報告題目《葉綠體色素的提取和分離》

姓名

學號

專業

批次/層次

指導教師

學習中心實驗報告

第三篇：葉綠體中色素的提取與分離實驗教學設計

葉綠體中色素的提取與分離（實驗）教學設計

學生們通過初中的學習，對光合作用已有了一定的基礎，但還很不深入，因此教師要在學生已有的知識基礎上幫助學生構建內涵豐富的光合作用的概念。本實驗探究葉綠體中光合色素的組成，通過實驗，使學生知道葉綠體中參與光合作用的色素，為下一課時學習光合作用奠定基礎。

一、高考考綱對教材中實驗能力的要求

能獨立完成實驗。包括理解實驗目的、原理、方法和操作步驟，掌握相關的操作技能，并能將這些實驗的方法和技能進行綜合的運用。

二、教學目標 1．知識目標

（1）初步掌握提取和分離葉綠體中色素的方法、了解紙層析法的原理。（2）通過實驗結果分析，理解各藥劑在實驗中的作用和對實驗結果的影響，探索葉綠體中有幾種色素，觀察和區別葉綠體中色素的種類及顏色。

2．技能目標

（1）合理組織語言，描述實驗現象，鍛煉學生觀察能力和語言表達能力。（2）對實驗現象相互交流和討論，提高學生思考問題和解決問題的能力。3．情感目標

通過本節實驗課，激發學生對生物科學的興趣，培養學生嚴謹的科學態度，學會根據實驗的現象和結果，進行分析，推出結論。通過本實驗，培養學生的自我動手和探究問題的能力。實驗結束完成整理工作。

三、實驗重點與難點

重點：初步掌握提取和分離葉綠體中色素的方法、探索葉綠體中色素在濾紙上層析的情況。

難點：分離葉綠體色素中綠葉細線的畫法。

四、課前準備 1．教師準備

（1）實驗材料、儀器及試劑準備。新鮮的菠菜，干燥的定性濾紙、燒杯、研缽、漏斗、毛細吸管、試管、棉塞、試管架、剪刀、脫脂棉、藥匙、培養皿、天平、直尺、鉛筆、無水乙醇、層析液、二氧化硅、碳酸鈣等。

（2）推測可能出現的情況進行探究，分析原因，得出結論，做到心中有數。2．學生準備

（1）預習本實驗。包括實驗目的、原理，熟悉實驗步驟等。（2）復習葉綠體中色素的種類和顏色。

五、實驗原理

1．綠葉中的色素能夠溶解在有機溶劑無水乙醇或丙酮中，即可以用無水乙醇或丙酮提取綠葉中的色素。

2．綠葉中的色素不只一種，它們都能溶解在層析液中。然而，它們在層析液中的溶解度不同：溶解度高的隨層析液在濾紙上擴散得快，溶解度低的在濾紙上擴散得慢。可據此將色素分離。

六、教學方法

師生合作（以學生操作為主、教師講解為輔）

七、方法步驟：

1．提取色素：稱取、剪碎、研磨、過濾（1）稱取5g的綠葉，剪碎，放入研缽中。

（2）向研缽中放入少許二氧化硅和碳酸鈣，再加入10ml無水乙醇或丙酮，進行迅速、充分的研磨。

（3）將研磨液迅速倒入小玻璃漏斗（漏斗基部放少許脫脂棉）。將濾液收集到一個小試管中，及時用棉塞將試管口塞緊。

2．制備濾紙條：將干燥的定性濾紙剪成長條形，濾紙條的一端剪去兩角做標記，并在距這一端1cm處用鉛筆畫一條細的橫線。

3．畫濾液細線：用毛細管吸取少量濾液，沿鉛筆線均勻地畫一條細而直的濾液細線。待濾液干后，再畫一兩次。

4．分離色素：將3ml層析液倒入燒杯，將濾紙條（有濾液細線的一端朝下）輕輕插入層析液中，隨后用培養皿蓋上小燒杯。

5．觀察實驗結果：觀察燒杯內濾紙條上出現了幾條色素帶，以及每條色素帶的顏色。將觀察結果記錄下來。

八、實驗注意事項

1．葉片要新鮮、顏色要深綠，去掉葉柄和粗的葉脈，盡量將葉片剪得細碎些。

2．研磨要充分、迅速，研磨時用紙蓋住研缽。

3．濾液收集后要及時用棉塞將試管口塞緊，以免濾液揮發。4．濾液細線要細、直、含較多色素。

5．濾線上的濾液細線不能浸入層析液。（為什么？）

九、實驗結果與結論：

實驗結果如圖，濾紙條上有4條不同顏色的色帶，從上往下依次為：胡蘿卜素(橙黃色)，葉黃素(黃色)，葉綠素a(藍綠色)，葉綠素b(黃綠色)。這說明綠葉中的色素有4種，葉綠素a最寬說明葉綠素a含量最多。四種色素在層析液中的溶解度不同，隨層析液在濾紙上擴散的速度也不一樣。

十、討論：

對本次實驗的結果作出分析：理論上的實驗結果是，在濾紙條上出現4條呈平行線分布的色素帶，自上而下依次為橙黃色的胡蘿卜素、黃色的葉黃素、藍綠色的葉綠素a、黃綠色的葉綠素b。

如果實驗結果看不清楚4條色素帶，可能原因：選擇的葉片不夠新鮮、濃綠；研磨不夠迅速、充分；過慮時沒用脫脂棉，而用了濾紙吸附了一定的色素，使提取液色素含量濃度不夠；色素分離時，層析液沒及了濾液細線，使色素溶解到層析液中。

如果4條色素帶不整齊，可能原因是畫濾液細線時，沒有做到細、直、齊；濾紙條一端的兩角剪的過程中不對稱造成的等等。

十一、板書設計

實驗4．3 葉綠體中色素的提取與分離

一、實驗原理

1、葉綠體的色素能溶解在有機溶劑無水乙醇中，所以可用無水乙醇提取葉綠素中的色素。

2、葉綠體中的色素在層析液中的溶解度不同。溶解度高的隨層析液在濾紙上擴散得快。溶解度低的隨層析液在濾紙上擴散得慢。

二、實驗目的與要求

1、初步掌握提取和分離葉綠體中色素的方法。

2、探索葉綠素中有幾種色素，觀察和區別葉綠素中的色素的種類及顏色。

三、實驗材料用具

四、實驗方法與步驟

1．提取色素 2．制備濾紙條 3．畫濾液細線 4．分離色素 5．觀察實驗結果

五、課后思考題

十二、學生做好整理工作，并完成以下課后思考題

1．在圓濾紙的中央，點上葉綠體色素的提取液進行層析，隨著層析液從濾紙中央向四周擴散，形成四個色素帶，排在最里面的色素是（）

A．葉黃素

B．胡蘿卜素

C．葉綠素a

D．葉綠素b 2．某位同學在做葉綠體色素的提取分離實驗時，操作情況如下所述，結果實驗失敗，請指出其錯誤所在：

（1）將5克菠菜葉完整放入研缽中，加入無水乙醇、石英砂、CaCO3，迅速研磨。

（2）用毛細管吸取少量濾液，沿鉛筆處小心均勻地畫出一條濾液細線，并連續迅速重復2-3次。（3）把畫好細線的濾紙插入層析液中，并不斷搖晃，以求加快色素在濾紙上的擴散。

十三、教學后記

通過實驗可以培養學生實踐操作的能力及合作的精神，掌握探索實驗的方法。初步掌握提取和分離綠葉中色素的方法，探索高等植物綠葉中有幾種色素及其顏色。實驗過程中，學生都能用過濾方法提取綠葉的色素和用紙層析法分離提取到的色素，學會分析實驗結果，但由于學生的探索（好奇）心理，選擇不同操作方法，得到的結果有些差別，甚至得不到正確明顯的結果，但培養了學生敢于探索的精神。

做實驗前，就要給學生講明白研磨過程中加入石英砂、碳酸鈣、無水乙醇或丙酮的作用，讓學生明確儀器的原理，實驗原理，是培養學生使用它們的能力的基礎。在提取葉綠體色素中，要讓學生了解葉綠體色素是有機物，可以溶于有機溶劑。了解葉綠素易被細胞液內某些有機酸破壞，影響對色素的觀察，從而使學生明確為什么在研磨時要加碳酸鈣。

實驗過程需要老師的解讀，讓學生簡易掌握，在學生實驗中，不是單純的出現結果就行了。而要指導學生去分析實驗中每一步驟的作用，每一個處理意義以及各步驟之間的聯系，從中學習解決問題、研究事物的方法。備好濾紙條后，在距去兩角的一端 1厘米處用鉛筆畫一橫線，目的是為劃濾液細線提供參照線并且防止層析時在盛有層析液的燒杯中，濾液細線沒及層析液。劃濾細線時還應讓學生知道干燥后重復劃2～3次，是為了增加色素的分子數，以便在紙條上走出四條明顯的色素帶來。如果在不干燥的情況下連續劃線，色素會隨濾液中的液體（如丙酮）在紙條上的擴散而擴散，劃出的濾液細線較寬，其結果是相鄰的兩條色帶會發生部分重疊，影響實驗效果。

實驗中有的學生的實驗結果不明顯或失敗，老師應幫助學生查找原因。如葉綠體中色素提取和分離的實驗結果四條色素帶部分或全部不明顯，老師可提示操作過程中是否按照老師要求去做的，有沒有對忽視實驗重點而造成實驗的失敗等等，培養學生探索問題的耐心和能力。

第四篇：葉綠體色素的提取分離實驗報告

葉綠體色素的提取分離、理化性質實驗報告

第一部分提取與分離

一實驗目的學習應用薄層色譜法分離葉綠體色素的實驗方法

二實驗原理

葉綠體是進行光合作用的細胞器。葉綠體中的葉綠體a(C55H72O5N4Mg)、葉綠素b(C55H72O6N4Mg)、胡蘿卜素(C40H56)和葉黃素(C40H56O2)與類囊體膜結合成為色素蛋白復合體。這些色素都不溶于水，而溶于有機溶劑，故可用乙醇等有機溶劑提取。提取液可用薄層色譜法加以分離與鑒別。

薄層色譜分析法是將吸附劑均勻的涂在玻璃板上成一薄層，將此吸附劑薄層做固定相，把待分離的樣品溶液點在薄層板的下端，然后用一定量的溶劑做流動相，將薄層板的下端浸入到展開劑中。流動相通過毛細管作用由下而上的逐漸浸潤薄層板，并帶動樣品在板上也向上移動，樣品中各組分在吸附劑和展開劑之間發生連續不斷的吸附、脫附、再吸附、再脫附……的過程。由于吸附劑的吸附能力大小不同，吸附力強的物質相對移動慢一些，而吸附力弱的則相對移動快一些，從而使各組分有不同的移動速度而彼此分開。

三實驗材料與試劑新鮮的菠菜葉片體積分數為95%的乙醇，碳酸鈣粉末，展開劑(石油醚:丙酮:苯=7:5:1，體積比)3 天平，研缽，漏斗，三角瓶，剪刀，點樣毛細管，層析缸，硅膠預制板，濾紙

四實驗步驟

(一)色素提取液的制備取新鮮葉片4至5片(2g左右)，洗凈，擦干葉表面，去中脈剪碎，放入研缽中。研缽中加入少量碳酸鈣粉末，加2至3ml體積分數為95%的乙醇，研磨至糊狀，再加10至15ml體積分數為95%的乙醇，上清液用漏斗過濾，殘渣再用10ml體積分數為95%的乙醇沖洗一次，一同過濾于三角瓶中，即制成葉綠體色素提取液。提取液應避光保存。

(二)葉綠體色素的分離取硅膠預制板一個，用點樣毛細管吸取上述提取液，平行于硅膠板的短邊，距下邊緣約1cm處用毛細管劃線，風干后再劃第二次，重復操作3至4次。在干潔的層析缸中加入適量的展開劑，高度約0.5cm，將硅膠預制板帶有色素的一端放下，使其浸入展開劑中(但不要使待測樣品浸入展開劑中)。迅速蓋好層析缸蓋。此時，展開劑借毛細管作用沿硅膠預制板向上擴散，并把葉綠體色素向上推動，不久即可以看到各種色素的色帶。當各種色素的得到較好分離，展開劑前沿接近硅膠預制板上端近邊緣處時，取出硅膠預制板，并迅速用鉛筆標出展開劑前沿和各色素帶的位置。

五實驗結果及數據、分析

經過薄層色譜分離后，葉綠素a為藍綠色，葉綠素b為黃綠色，葉黃素為鮮黃色，胡蘿卜素為橙黃色。各色素帶在薄層中的位置可用相對比移值Rf表示，即

Rf=斑點中心到原點的距離/溶劑前沿至遠點的距離

由于不同組分具有不同的Rf值，所以比較Rf值可以進行定性分析。但是，實驗中的很多因素也可以影響到Rf的值，例如吸附劑的種類、層析缸的形狀大小、溫度、展開劑的濃度等等。

最后測得數據：Rf(胡蘿卜素)=0.972，Rf(葉綠素a)=0.908,Rf(葉綠素b)=0.856，Rf(葉黃素)=0.804。

第二部分理化性質

一 實驗目的驗證葉綠體色素的理化性質

二實驗原理

葉綠素是一種由葉綠酸和葉綠醇形成的復合酯，故可與堿起皂化反應而生成甲醇和葉綠醇及葉綠酸鹽，產生的鹽能溶于水，故可用此法將葉綠素和類胡蘿卜素分開。葉綠素吸收光量子而轉變成為激發態，激發態的葉綠素分子很不穩定，當它變回倒基態時可發射出紅光量子，因而產生熒光。葉綠素的化學性質很不穩定，容易受到強光的破壞，特別是當葉綠素與蛋白質分離以后，破壞更快，而類胡蘿卜素則較穩定。葉綠素中的鎂可以被H+所取代而生成褐色的去鎂葉綠素。去鎂葉綠素遇銅則成為銅代葉綠素，銅代葉綠素很穩定，在光下不易被破壞，故常用此法制作綠色多汁植物的浸漬標本。

三實驗材料及試劑新鮮菠菜葉片刻度試管，小試管，試管架，水浴鍋，10ml移液管體積分數為95%的乙醇，苯，醋酸銅粉末，質量分數為5%的稀鹽酸，醋酸-醋酸銅溶液，氫氧化鉀-甲醇溶液

四實驗步驟

(一)光對葉綠素的破壞作用取2支小試管，各加入2.5ml葉綠體色素乙醇提取液，并用體積分數為95%的乙醇稀釋一倍。其中一支放在直射日光下，另外一支放在暗處或用錫箔紙包嚴，40分鐘后對比觀察顏色有何變化。另取本實驗中用薄層層析分離成的硅膠色譜板一個，按長度方向將一半用黑色紙或塑料薄膜包住，放在直射日光下，半小時后觀察，比較色譜板上各色素的顏色有何變化。

(二)皂化作用取1支10ml刻度的試管加入3ml濃的葉綠體色素乙醇提取液，加入1ml氫氧化鉀-甲醇溶液，充分搖勻。片刻后，加入3ml苯，搖勻，再沿試管壁慢慢加入1ml左右的蒸餾水，輕輕搖勻(勿激烈搖蕩)，然后置于試管架上靜置分層。若溶液不分層，則用滴管吸取蒸餾水，沿管壁滴加，邊滴加邊搖動，直到溶液開始分層時，靜置。

(三)H+和Cu+對葉綠素分子中的Mg+的取代作用取兩支試管，第一支試管中加葉綠體色素提取液5ml，作為對照。第二支試管中加入葉綠體色素提取液5ml后，再加入質量分數為5%的HCl數滴，搖勻，觀察溶液顏色變化。當溶液變褐后，再加入少量醋酸銅粉末，60℃水浴加熱，觀察溶液顏色變化情況，并與對照試管相比較。取新鮮植物葉片兩片，放入試管中，加醋酸-醋酸銅溶液，使之沒過葉片，90℃水浴加熱，隨時觀察葉片顏色的變化，直至顏色不再變化為止。

(四)熒光現象的觀察

取一支小試管加入3ml濃的葉綠素乙醇提取液，在直射光下照射，比較溶液的透射光與反射光的顏色有何不同。

五實驗結果及分析在光對葉綠素的破壞的實驗中，未觀察到提取液的顏色變化以及個色素的顏色變化，分析其原因，可能是因為當時的陽光已經不夠強烈，不足以對色素達到破壞的程度，而且放置的位置不夠好，不能使樣品被陽光直射，而且放置的時間也可能不夠長，所以導致此試驗失敗。2 靜置一段時間之后，溶液逐漸分為兩層，下層是稀的乙醇溶液，其中溶有皂化的葉綠素a和葉綠素b(以及少量的葉黃素)，呈綠色；上層是苯溶液，其中溶有黃色的胡蘿卜素和葉黃素，呈黃色；最下層有少量黃色乳狀液體，這是由于皂化液沉積引起的?！ぎ敿尤肓松倭康柠}酸后，溶液在短時間內變為了褐色，再加入少量的醋酸銅粉末，水浴加熱一段時間后，溶液又重新變為了藍綠色。

·90℃水浴加熱約半個小時以后，葉片變為黃色，約一個半小時以后，葉片又逐漸恢復為藍綠色。熒光現象:透射光下呈綠色，反射光下呈紅褐色。

第三部分實驗感想實驗過程中，同組人員的配合十分重要，因為本實驗的步驟很多，所以兩個人配合起來的話可以大大的提高實驗效率。在用毛細管劃線時，不可以畫的太粗，否則會影響分離的時間，而且效果也不太好。3 做葉綠素光解的實驗時，要多等一些時間，否則時間太短的話實驗現象不明顯，或者沒有出現應有的實驗現象。

第五篇：綠色植物中色素的提取和分離

綠色植物中色素的提取和分離

一、實驗的目的：

1、學習從植物中提取色素的方法。

2、學習柱色譜(層析)的原理及其操作方法。

二、實驗原理

柱色譜是通過色譜柱來實現分離的。在色譜柱內裝有固體吸附劑(固定相)如氧化鋁或硅膠。液體樣品從柱頂加入，當液體流經吸附劑時，由于吸附劑表面對液體中各組分吸附能力不同而按一定的順序吸附。然后從柱頂加入洗脫劑(流動相)，樣品中的各組分隨洗脫劑按一定的順序從色譜柱下端流出，根據不同顏色分段收集。

三、器材與試劑

氧化鋁,石油醚,乙酸乙酯,色譜柱,乙醇,綠葉 ,旋轉蒸發儀

四、實驗步驟

菠菜色素的提取過程

取3g 新鮮菠菜葉于研缽中拌勻研磨5 分鐘，殘渣用20mL 的石油醚-乙醇（2:1）混合液進行提取，共提取兩次。把浸取液合并過濾，濾液轉移到分液漏斗中，加入等體積的水洗滌后棄去下層的水-乙醇層，石油醚層再用等體積的水洗滌兩次，以除去乙醇和其它水溶性物質。石油醚層用無水Na2SO4進行干燥、濃縮為2 mL。取一半做柱層析分離，其余留作薄層層析分析。

（4）上樣：將要分離的混合物用適當的溶劑溶解后，用滴管沿柱壁慢慢加入吸附劑表面。

（5）淋洗分離：當被分離物的溶液面降至吸附劑表面時，立即加入洗脫劑進行淋洗，此時可以配合薄層層析來確定各組分的分離情況。

取15-20g 中性氧化鋁進行濕法裝柱。填料裝好后，從柱頂加入上述濃縮液，先用9:1的石油醚-丙酮進行洗脫，當第一個橙黃色色帶（胡蘿卜素）即將流出時，換一接收瓶接收，約需要洗脫劑40 mL。換用7:3的石油醚-丙酮進行洗脫，當第二個棕黃色色帶（葉黃素）即將流出時，換一接收瓶接收。此時，繼續更換洗脫劑，用3:1:1的正丁醇-乙醇-水洗脫，分別在層析柱的上端可見藍綠色和黃綠色的兩個色帶，此為葉綠素a和葉綠素b。

(1)用10g中性氧化鋁和石油醚裝層析柱。

(2)將綠色植物色素濃溶液用滴管小心加到層析柱頂部。加完后打開下部活塞，讓液面下降到柱面以下1mm左右關閉活塞。加入數滴石油醚，重新打開活塞使液面下降，重復幾次使有色物質全部進入柱體內。

(3)依次用不同洗脫劑進行洗脫，收集各色帶

五、注意事項

1.石油醚有毒，請在通風良好處使用；

2.柱中不可有空氣，必要時用裝在玻棒上的橡皮塞輕輕敲擊柱身；

3.柱中氧化鋁表面任何時候都不得露出液面，以防有空氣進入；

4.待色素全部進入柱體后，方可進行洗脫，以防有拖尾影響分離效果。